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100 souches acceptent la transformation génétique par les méthodes classiquement en vigueur. La souche Synechococcus R2 (ou PCC 7942), encore couramment dénommée Anacystis nidulans R2, et nous garderons ce nom pour cet exposé, est la souche de choix pour des essais de transformation génétique étant donné que l'on dispose d'un plasmide à haut pouvoir de recombinaison avec son ADN (KUHLEMEIER et al., 1981). Nous- avons pu disposer de différents échantillons : - souche témoin non transformée : A. nidulans R2 - souches transformées portant le plasmide : pGsp 12 : insert = déterminant génétique de 3,5 tb portant les deux gènes codant pour la toxine de B. sphaericus souche 1593 pGsp 13 : insert = déterminant génétique (différent du précédent) portant en plus des deux gènes codant pour la toxine, un gène codant pour la protéine enveloppe d'une vésicule gazeuse présente dans certaines souches de cyanobactéries. Trois points essentiels ont été étudiés : - activité sur petit mammifère - niveau de toxicité sur larves de moustiques - comportement en mare semi-naturelle 2:.D:STS D'INNOCUITE SUR PETIT MAMMIFERE 2.1 MATERIEL ET METHODE Une étude-type d'innocuité a été pratiquée sur souris de race Swiss. Toutes les voies conventionnelles d'introduction d'une substance étrangère ont été retenues à l'exception de l'injection intraveineuse : • voie orale : par tubage, introduction de 0,5 ml dans l'oesophage de chaque individu
lOI • inhalation : pulvérisations, en aérosol, d'un volume total de 0,5 ml par souris; une cage contenant une souris est placée dans un cylindre étanche pourvu d'un nébulisateur (tour de Potter). • voie sous-cutanée : injection de 0,2 ml au niveau du flanc droit • voie intra-péritonéale : injection de 0,2 ml. La suspension bactérienne utilisée contient 10 mg de protéines par ml, ce qui correspond à 200 CL 50 sur Culex pipiens stade III par ml. Des lots de cinq souris âgées de trois mois ont été constitués. L'observation du poids total de chaque individu s'est poursuivie pendant un mois à l'issue duquel les animaux ont été sacrifiés. L'autopsie a porté sur l'aspect et le poids des organes suivants : foie, poumons, rate, coeur, cerveau et reins. Les animaux témoins ont reçu les mêmes traitements que cidessus avec une suspension d'A. nidulans R2 (souche témoin). 2.2 RESULTATS Les courbes d'augmentation de poids (fig. IV.I) des animaux traités et des témoins sont très semblables. A l'autopsie, tous les organes avaient un aspect normal. Le rapport de leur poids au poids de l'animal est sensiblement identique à celui des témoins (tableau IV.I). Tableau IV.1 Poids moyen des organes autopsiés par rapport au poids moyen de l'animal, pour chacun des traitements de vérification de toxicité. Quane Foie Poumons Rate Coeur Cerveau Reins Traitement : voie orale org./poids total 0.059 0.012 0.005 0.007 0.010 0.016 témoin 0.068 0,016 0,006 0.008 0.011 0,017 Inhalation org./poids total 0.064 0.013 0,005 0.009 0,013 0,016 témoin 0.059 0,013 0,005 0,008 0.013 0.016 Sous-cutanée org./poids total 0.065 0.012 0.004 0.008 0.012 0.020 témoin 0,065 0.011 0,005 0,008 0,012 0.019 Intrapéritonéale org./poids total 0,062 0.013 0.003 0.008 0,010 0.021 témoin 0,063 0,012 0,004 0,009 0,009 0.021
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