les ennemis naturels des criquets du sahel - Les criquets ravageurs ...

2.2.2. 2.2.2. 2.2.2. Isolement, Isolement, culture culture et et et conservation conservation des des des bactéries
bactéries
Quand on recherche des bactéries, il est essentiel de les isoler avant ou sitôt après la mort du
criquet afin d’éviter la contamination par d’autres bactéries non pathogènes. S’il y a dans l’échantillon des
bactéries de taille et de forme différentes, il est préférable d’en prendre un autre.
Avant de procéder à l’isolement des bactéries, le criquet doit être stérilisé par trempage pendant
quelques secondes dans de l’éthanol à 70-95 %, puis pendant 3 à 4 minutes dans une solution
d’hypochlorite de sodium à 5 %. Ensuite, il faut effectuer 3 rinçages successifs dans de l’eau distillée. Le
criquet est prêt à être disséqué. Une boucle métallique stérile permettra d’étaler un peu du contenu du
corps (excepté le tube digestif) sur de l’agar nutritif. La préparation est ensuite mise à incuber à 30 o C
pendant 24 heures.
La plupart des bactéries entomopathogènes peuvent être cultivées sur agar nutritif mais certaines,
comme Bacillus popilliae, se multiplient mieux sur des milieux plus complexes. La pathogénicité de la
souche doit être vérifiée de temps en temps en l’inoculant à des insectes-hôtes sains puis en isolant à
nouveau la bactérie. Les espèces du genre Xenorhabdus ne restent pas stables sur agar. Elles doivent donc
être cultivées avec les nématodes symbiontes.
Les spores des espèces du genre Bacillus sont extrêmement résistantes. Elles peuvent être
conservées longtemps dans un endroit frais et sec. Les autres espèces, plus difficiles à conserver, peuvent
être gardées au réfrigérateur pendant des mois (la durée dépend de la souche), de préférence dans des
milieux peu nourrissants. Cependant, il faut transférer de temps en temps les bactéries sur des milieux
nutritifs frais pour les garder dans de bonnes conditions.
2.3. 2.3. 2.3. Les Les champignons
champignons
Les champignons sont des eucaryotes avec des noyaux, des organites bien définis et une paroi
cellulaire chitineuse. Ils se présentent parfois sous forme de cellules individuelles, comme les levures mais
le plus souvent sous forme de filaments (hyphes) constituant le mycélium et dans lesquels sont rangées les
cellules. Leur reproduction se fait par formation de spores sexuées ou asexuées.
Presque tous les champignons infectent leurs hôtes en pénétrant par la cuticule grâce à divers
enzymes libérées pendant la germination des spores. Dans l’hémocoele, le champignon se multiplie
rapidement par bourgeonnement ou scission des hyphes ce qui produit des cellules de type levure,
disséminées dans tout le corps de l’insecte. L’hôte est tué par asphyxie ou par inanition, lorsque le
mycélium a colonisé la plupart des organes. Parfois, l’hôte est tué par des toxines et, dans ce cas, le
mycélium se développe dans le cadavre (saprophyte). Les hyphes, qui poussent très rapidement, absorbent
des substances nutritives et de l’eau, ce qui déshydrate complètement l’insecte et le momifie.
Chez la plupart des espèces de champignons, les hyphes ne pénètrent la cuticule qu’après la
mort de l’hôte, si l’humidité de l’air ambiant est assez élevée. Des structures sporogènes, dont la
complexité varie avec le taxon, sont formées. Des spores sont libérées passivement ou par éjection active.
Si l’humidité ambiante est faible, la sporulation peut avoir lieu à l’intérieur de l’insecte et les spores ne
sont disséminées qu’après la désintégration du cadavre.
On examine les champignons en montant un peu de mycélium avec des spores sur une lame que
l’on observe sous microscope optique avec une illumination directe ou sous contraste de phases. Le bleu
coton ou bleu de méthyle améliore le contraste sous illumination directe et facilite l’observation du
champignon.
51