Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal

Tableau VII. Gîtes larvaires échantillonnés dans différentes régions du Maroc durant l’été 2010
Ville Site Gîte
Tanger Urbain Epigé
Périurbain Epigé
Rural Epigé
Casablanca/ Mohammedia Urbain Epigé
Urbain Hypogé
Périurbain Epigé
Marrakech Périurbain Epigé
5.2. Extraction de l’ADN génomique
Rural Epigé
Rural Hypogé
L’ADN des individus adultes de génération F0 est extrait par la technique
DNAzol. Pour ce faire, chaque moustique est broyé au piston dans 250 µL de
DNAzol puis le broyat est centrifugé 15 min à 15 000 rpm à +4°C. Après cette
première étape où les protéines ont été précipitées, on transvase le surnageant dans
un nouveau tube et on ajoute 125 µL d’éthanol 100 %. On agite doucement 1 à 2 min
à température ambiante avant de centrifuger 15 min à 15 000 rpm à +4°C. On
élimine délicatement le surnagent sans perdre le culot d’ADN qu’on lave avec 200 µL
d’éthanol 70 %, puis on met les tubes à centrifuger pendant 15 min à 15 000 rpm à
+4°C. Pour bien nettoyer le culot d’ADN, on réalise cette opération de lavage une
deuxième fois. Pour finir, on sèche le culot jusqu’à évaporation complète de l’éthanol
et on le reprend dans 30 µL d’eau pour préparation injectable (EPPI).
5.3. Réaction PCR
L’identification génétique des adultes appartenant au complexe Cx. pipiens
repose sur l’amplification de la région flanquante du microsatellite CQ11 (Bahnck &
Fonseca, 2006). Les amorces utilisées sont les suivantes: pipCQ11R 5‘-
50