Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal
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Tableau VII. Gîtes larvaires échantillonnés dans différentes régions du Maroc durant l’été 2010<br />
Ville Site Gîte<br />
Tanger Urbain Epigé<br />
Périurbain Epigé<br />
Rural Epigé<br />
Casablanca/ Mohammedia Urbain Epigé<br />
Urbain Hypogé<br />
Périurbain Epigé<br />
Marrakech Périurbain Epigé<br />
5.2. Extraction de l’ADN génomique<br />
Rural Epigé<br />
Rural Hypogé<br />
L’ADN <strong>des</strong> individus adultes de génération F0 est extrait par la technique<br />
DNAzol. Pour ce faire, chaque <strong>moustique</strong> est broyé au piston dans 250 µL de<br />
DNAzol puis le broyat est centrifugé 15 min à 15 000 rpm à +4°C. Après cette<br />
première étape où les protéines ont été précipitées, on transvase le surnageant dans<br />
un nouveau tube et on ajoute 125 µL d’éthanol 100 %. On agite doucement 1 à 2 min<br />
à température ambiante avant de centrifuger 15 min à 15 000 rpm à +4°C. On<br />
élimine délicatement le surnagent sans perdre le culot d’ADN qu’on lave avec 200 µL<br />
d’éthanol 70 %, puis on met les tubes à centrifuger pendant 15 min à 15 000 rpm à<br />
+4°C. Pour bien nettoyer le culot d’ADN, on réalise cette opération de lavage une<br />
deuxième fois. Pour finir, on sèche le culot jusqu’à évaporation complète de l’éthanol<br />
et on le reprend dans 30 µL d’eau pour préparation injectable (EPPI).<br />
5.3. Réaction PCR<br />
L’identification génétique <strong>des</strong> adultes appartenant au complexe Cx. <strong>pipiens</strong><br />
repose sur l’amplification de la région flanquante du microsatellite CQ11 (Bahnck &<br />
Fonseca, 2006). <strong>Le</strong>s amorces utilisées sont les suivantes: pipCQ11R 5‘-<br />
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