Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal

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dizaine de têtes sont ainsi placées sur la lame et écrasées à l’aide d’une seconde lame. Les lames sont séchées à l’air libre pendant 10 min puis fixées dans un bain d’acétone pur à -20°C pendant 20 min. Par la suite, les lames sont séchées et conservées à -80°C jusqu’à réalisation de la réaction d’immunofluorescence. L’anticorps primaire est une ascite de souris anti-virus diluée au PBS 1X (l’ascite anti-VFVR est diluée au 1/200 et l’ascite anti-VWN, au 1/100) qu’on dépose sur les squashs de tête. Les lames sont incubées 30 min à 37°C en chambre humide puis rincées 3 fois avec du PBS 1X et séchées. L’anticorps secondaire est une immunoglobuline anti-souris couplée à la fluorescéine (FITC) dilué au 1/100 et additionnée de bleu d’Evans. Le mélange est déposé sur les lames qui sont traitées de la même façon qu’auparavant. A la fin des rinçages, les préparations sont montées entre lame et lamelle avec du tampon phosphate glycériné à 10 % et à pH 8. La lecture des lames se fait sous microscope à épifluorescence. Les tissus infectés apparaissent en vert fluorescent et les tissus non infectés en rouge (Figure 23). Le taux d’infection disséminée (TID) représente le nombre de femelles ayant des squashs de tête positifs rapportés au nombre total de femelles testées. Les femelles présentant un squash de tête positif sont capables d’assurer la dissémination virale au-delà du tube digestif. (a) (b) Figure 23. Tissus de tête de moustique analysé par immunofluorescence.Tissu infecté (a) et tissu non infecté (b) 48
4. Les analyses statistiques Les taux d’infection disséminée et de transmission ont été comparés par le test exact de Fisher et les titres moyens des particules virales dans les salives ont été comparés en utilisant le test de Kruskall-Wallis et celui de Wilcoxon Rank-sum. 5. Taxonomie moléculaire de Culex pipiens au Maroc 5.1. Populations de Cx. pipiens L’échantillonnage des larves (F0) a été conduit à Tanger, Casablanca, Mohammedia et Marrakech. Les gîtes larvaires sont hypogés ou épigés et classés en fonction de l’habitat: urbain (centre-ville), périurbain (à la périphérie de la ville) et rural (en retrait de toute agglomération humaine; Tableau VII). Les méthodes d’échantillonnage et d’élevage sont détaillées dans la partie 1. 49
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Mes remerciements vont aussi à Mr
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