Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal

dizaine de têtes sont ainsi placées sur la lame et écrasées à l’aide d’une seconde
lame. Les lames sont séchées à l’air libre pendant 10 min puis fixées dans un bain
d’acétone pur à -20°C pendant 20 min. Par la suite, les lames sont séchées et
conservées à -80°C jusqu’à réalisation de la réaction d’immunofluorescence.
L’anticorps primaire est une ascite de souris anti-virus diluée au PBS 1X (l’ascite
anti-VFVR est diluée au 1/200 et l’ascite anti-VWN, au 1/100) qu’on dépose sur les
squashs de tête. Les lames sont incubées 30 min à 37°C en chambre humide puis
rincées 3 fois avec du PBS 1X et séchées.
L’anticorps secondaire est une immunoglobuline anti-souris couplée à la fluorescéine
(FITC) dilué au 1/100 et additionnée de bleu d’Evans. Le mélange est déposé sur les
lames qui sont traitées de la même façon qu’auparavant. A la fin des rinçages, les
préparations sont montées entre lame et lamelle avec du tampon phosphate
glycériné à 10 % et à pH 8. La lecture des lames se fait sous microscope à
épifluorescence. Les tissus infectés apparaissent en vert fluorescent et les tissus non
infectés en rouge (Figure 23).
Le taux d’infection disséminée (TID) représente le nombre de femelles ayant des
squashs de tête positifs rapportés au nombre total de femelles testées. Les femelles
présentant un squash de tête positif sont capables d’assurer la dissémination virale
au-delà du tube digestif.
(a) (b)
Figure 23. Tissus de tête de moustique analysé par immunofluorescence.Tissu infecté (a) et
tissu non infecté (b)
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