Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal
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3.2. <strong>Le</strong>s souches virales<br />
La souche avirulente Clone 13 du VFVR, a été isolée d’un cas humain bénin en<br />
République Centre Africaine en 1974 (Muller et al., 1995). Cette souche avirulente<br />
est défective pour le facteur de virulence, la protéine NSs. En effet, le gène est<br />
délété de 70% de sa phase ouverte de lecture. La souche du VWN a été isolée d’un<br />
cheval infecté en Camargue en 2000 (Murgue et al., 2001b).<br />
<strong>Le</strong>s stocks viraux utilisés pour les infections orales <strong>des</strong> <strong>moustique</strong>s ont été produits<br />
après plusieurs passages (8 passages pour le VFVR et 4 passages pour le VWN) sur<br />
cellules Vero de rein de singe et un seul passage sur <strong>des</strong> cellules d’insectes C6/36<br />
(Ae<strong>des</strong> albopictus). <strong>Le</strong>s stocks viraux sont conservés à -80°C.<br />
<strong>Le</strong> titre viral <strong>des</strong> stocks viraux utilisé a été estimé en unité formant plage (UFP)/mL,<br />
par comptage <strong>des</strong> plages de lyse obtenues après infection de cellules Vero (Lignée<br />
cellulaire continue de rein de singe).<br />
3.3. <strong>Le</strong> repas sanguin infectieux<br />
<strong>Le</strong>s femelles âgées de 7 jours sont mises à jeun 24 h avant l’infection. <strong>Le</strong> repas<br />
artificiel est constitué de deux tiers de globules rouges (lavés et remis en suspension<br />
dans du tampon PBS) et un tiers de suspension virale. <strong>Le</strong> titre viral du repas<br />
infectieux est de 10 7,8 UFP/mL pour le VWN et de 10 8,5 UFP/mL pour le VFVR. Un<br />
phagostimulant, l’ATP, est rajouté dans le repas à une concentration de 5.10 -3 M. <strong>Le</strong>s<br />
femelles se gorgent à travers une membrane d’intestin de porc soutenant le sang<br />
infecté pendant 30 min. Ainsi, les femelles pleinement gorgées sont triées, placées<br />
dans <strong>des</strong> boites en carton et nourries avec un coton imbibé d’eau sucrée à 10 %<br />
(Figure 21).<br />
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