Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal

3.2. Les souches virales
La souche avirulente Clone 13 du VFVR, a été isolée d’un cas humain bénin en
République Centre Africaine en 1974 (Muller et al., 1995). Cette souche avirulente
est défective pour le facteur de virulence, la protéine NSs. En effet, le gène est
délété de 70% de sa phase ouverte de lecture. La souche du VWN a été isolée d’un
cheval infecté en Camargue en 2000 (Murgue et al., 2001b).
Les stocks viraux utilisés pour les infections orales des moustiques ont été produits
après plusieurs passages (8 passages pour le VFVR et 4 passages pour le VWN) sur
cellules Vero de rein de singe et un seul passage sur des cellules d’insectes C6/36
(Aedes albopictus). Les stocks viraux sont conservés à -80°C.
Le titre viral des stocks viraux utilisé a été estimé en unité formant plage (UFP)/mL,
par comptage des plages de lyse obtenues après infection de cellules Vero (Lignée
cellulaire continue de rein de singe).
3.3. Le repas sanguin infectieux
Les femelles âgées de 7 jours sont mises à jeun 24 h avant l’infection. Le repas
artificiel est constitué de deux tiers de globules rouges (lavés et remis en suspension
dans du tampon PBS) et un tiers de suspension virale. Le titre viral du repas
infectieux est de 10 7,8 UFP/mL pour le VWN et de 10 8,5 UFP/mL pour le VFVR. Un
phagostimulant, l’ATP, est rajouté dans le repas à une concentration de 5.10 -3 M. Les
femelles se gorgent à travers une membrane d’intestin de porc soutenant le sang
infecté pendant 30 min. Ainsi, les femelles pleinement gorgées sont triées, placées
dans des boites en carton et nourries avec un coton imbibé d’eau sucrée à 10 %
(Figure 21).
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