Le moustique Culex pipiens, vecteur potentiel des virus ... - Toubkal

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2. Elevage des moustiques Figure 19. Exemples de gîte larvaire de Culex pipiens. Une fois les larves de Cx. pipiens identifiées, elles sont réparties dans des bacs en plastique (25cm x 25cm; Figure 20a), à raison de 200 larves/bac, contenant 1 litre d’eau déchlorée et 2-3 croquettes pour chat. Par la suite, les nymphes sont récupérées et placées individuellement dans un tube de 50 mL (Falcon; Figure 20b) contenant de l’eau. On ferme le tube avec un morceau de tulle. Après émergence, l’adulte est libéré dans une cage (Figure 20c) puis récupéré à l’aide d’un aspirateur à bouche (Figure 20d) pour former des couples (Male/femelle). Chaque couple est placé dans une boite en plastique d’un volume de 1 litre (Figure 20e). La paroi interne de la boite est tapissée avec un papier buvard qui servira de support pour la femelle. Le couvercle de la boite est remplacé par une moustiquaire en tulle qui est tenue par un élastique. Deux morceaux de coton sont placés en continu sur la moustiquaire : le premier est imbibé de solution sucrée à 10% pour nourrir le couple et le deuxième est imbibé d’eau pour augmenter l’humidité au sein de la boite d’élevage. On met également à la disposition du couple un petit cristallisoir contenant de l’eau pour recevoir les pontes F1. Pour chaque population, 40 couples sont formés. Un premier lot de 20 couples ne reçoit pas de repas sanguin. Seuls les couples autogènes seront ainsi capables de produire une première ponte sans nécessiter un repas sanguin. Un second lot de 20 couples est destiné à recevoir un repas de sang. Pour ce faire, le sixième jour après 42
émergence, les femelles sont laissées à jeun pendant 24h. Au septième jour, les femelles sont transférées dans une grande cage (30x30x30 cm) et un coquelet est mis à la disposition des femelles. Une fois que les femelles sont gorgées, elles sont placées individuellement dans des boites d’élevage et les pontes anautogènes sont récupérées. Pour chaque population, les adultes F0 ont été congelés à -20°C pour l’analyse moléculaire. Les pontes F1 autogènes et anautogènes ont fait l’objet d’une évaluation de compétence vectorielle vis-à-vis de VWN et VFVR. Ces infections se font dans les conditions de sécurité qui relèvent de la manipulation d’un agent pathogène de classe 3. Pour ce faire, les pontes autogènes et anautogènes ont été envoyées à l’Institut Pasteur à Paris. (a) (b) (c) (d) (e) Figure 20. Matériel utilisé lors de l’élevage de Culex pipiens. Bac en plastique (a), tube pour nymphe (b), cage d’élevage pour adultes (c) aspirateur à bouche (d) et boite d’élevage pour couple (e). 43
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