TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
4.3.2 Näytteiden pipetointi antigeenilevylle<br />
Nolla-näyte, näytteet ja kontrollit pipetoidaan antigeenilevylle alla olevan taulukon 2<br />
mukaan 100 μl/kuoppa. Käytössä oli kaksi eri kontrollia (K1 ja K2), jotka oli otettu<br />
Työterveyslaitoksen henkilökunnalta. Käytimme työskentelyssä 10–100 μl, 40–200<br />
μl, 1 ml pipettejä sekä monikanavapipettejä.<br />
Taulukko 2. Näytteiden pipetointi levylle<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12<br />
A BL N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7 N8 N9 Kont. kont.<br />
B<br />
C<br />
D<br />
E<br />
F<br />
G<br />
H<br />
Pipetoinnin jälkeen näytelevyt ja standardilevy peitettiin muovikalvolla ja inkuboitiin<br />
36 ± 1 ºC:ssa 120 ± 3 minuuttia. Inkuboinnin aikana näytteessä olevat vasta-aineet<br />
kiinnittyivät kuoppalevyn pohjalla oleviin antigeeneihin.<br />
4.3.3 Konjugaatin lisäys<br />
Konjugaatti valmistettiin 1:10000 pipetoimalla 10 μl konjugaatti Nordic Biosite -<br />
liuosta 100 ml:aan 10 % FBS-liuosta. Inkuboinnin jälkeen levyt pestiin<br />
mikrotiitterilevyjen Tecan M8/R2 Columbus Plus -kuoppalevypesurilla käyttämällä<br />
PBS + Tween 20 -puskuriliuosta (1l PBS-puskuria + 0,5 ml Tween 20<br />
-puskuriliuosta) ja huuhdeltiin upottamalla levyt tislattuun veteen siten, että kuopat<br />
täyttyivät vedestä. Levyt nostettiin pöydälle kahden minuutin ajaksi, jonka jälkeen ne<br />
tyhjennettiin ja kuivattiin taputtelemalla napakasti selluloosaa vasten. Tämän jälkeen<br />
pipetoitiin konjugaattiliuosta 100 μl/kuoppa. Levyt peitettiin jälleen muovikalvolla ja<br />
inkuboitiin lämpökaapissa 36 ± 1 ºC:ssa 120 ± 3 minuuttia. Konjugaatti eli<br />
35
Change language