TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
pesut tehdään ohjeiden mukaan. Antigeenipitoisuudet mitataan Tecan Spectrofluor<br />
-spektrofluorometrilla.<br />
Laimennussuhteen tarkistamisen toisessa vaiheessa antigeenilevy päällystetään<br />
määrätyillä laimennoksilla rinnakkaisina. Antigeenilaimennokset tehdään PBS-<br />
puskuriin alkaen 1:100 10 + 10 10 + 10 jne. Laimennokset pipetoidaan levylle,<br />
inkuboidaan, pestään ja kylmäkuivataan. A7-positiivinen kontrolli, 3-9 tunnettua<br />
positiivista ja yksi negatiivien seerumi laimennetaan 1:100 PBS-puskuriin ja<br />
pipetoidaan levylle (LIITE 4). Tämän jälkeen tehdään standardilaimennokset ja<br />
pipetoidaan levylle. Pesut, reagenssien lisäykset, inkuboinnit ja mittaukset tehdään<br />
ohjeiden mukaan.<br />
4.2.4 Antigeenin kiinnitys kuoppalevylle<br />
Kussakin paneelissa on kahdeksan antigeeniä. Jokaiselle paneelille on valmis<br />
paneelintekokaavake, johon on merkitty antigeenien tunnukset, eränumerot,<br />
laimennussuhteet ja laimennusohje. Antigeeniuutteet laimennetaan PBS-puskuriin.<br />
Kuoppalevyihin merkitään paneelin numero ja valmistuspäivä. Antigeeniliuos<br />
pipetoidaan levylle 200 µl/kuoppa. Tämän jälkeen levyt peitetään sealing-teipillä ja<br />
inkuboidaan huoneenlämmössä 22 ± 2 tuntia.<br />
Seuraavaksi 10 % -FBS laimennetaan 1:10 PBS-puskuriin, sekoitetaan ja pipetoidaan<br />
levyille monikanavapipetillä 300 µl/kuoppa. Levyjä inkuboidaan 120 ± 3 minuuttia<br />
huoneenlämmössä, jonka jälkeen tehdään pesu PBS-puskurilla. Levyjä<br />
kylmäkuivataan vähintään kaksi tuntia. Levyt laitetaan pakastepusseihin ja<br />
säilytetään -20 ± 2 ºC:ssa.<br />
4.2.5 Standardilevyn valmistaminen<br />
Standardilevyn pohjalle on kiinnitetty antigeenejä, joihin vasta-aineet kiinnittyvät.<br />
Standardilevy valmistetaan laimentamalla 1:1500 Goat Antiserum to Human IgM.<br />
Levyt inkuboidaan huoneenlämmössä 22h + 2h, pestään, kiinnitetään,<br />
kylmäkuivataan ja pakastetaan kuten antigeenin kiinnitys kuoppalevylle -kohdassa.<br />
33