TYÖN NIMI - Theseus

pesut tehdään ohjeiden mukaan. Antigeenipitoisuudet mitataan Tecan Spectrofluor
-spektrofluorometrilla.
Laimennussuhteen tarkistamisen toisessa vaiheessa antigeenilevy päällystetään
määrätyillä laimennoksilla rinnakkaisina. Antigeenilaimennokset tehdään PBS-
puskuriin alkaen 1:100 10 + 10 10 + 10 jne. Laimennokset pipetoidaan levylle,
inkuboidaan, pestään ja kylmäkuivataan. A7-positiivinen kontrolli, 3-9 tunnettua
positiivista ja yksi negatiivien seerumi laimennetaan 1:100 PBS-puskuriin ja
pipetoidaan levylle (LIITE 4). Tämän jälkeen tehdään standardilaimennokset ja
pipetoidaan levylle. Pesut, reagenssien lisäykset, inkuboinnit ja mittaukset tehdään
ohjeiden mukaan.
4.2.4 Antigeenin kiinnitys kuoppalevylle
Kussakin paneelissa on kahdeksan antigeeniä. Jokaiselle paneelille on valmis
paneelintekokaavake, johon on merkitty antigeenien tunnukset, eränumerot,
laimennussuhteet ja laimennusohje. Antigeeniuutteet laimennetaan PBS-puskuriin.
Kuoppalevyihin merkitään paneelin numero ja valmistuspäivä. Antigeeniliuos
pipetoidaan levylle 200 µl/kuoppa. Tämän jälkeen levyt peitetään sealing-teipillä ja
inkuboidaan huoneenlämmössä 22 ± 2 tuntia.
Seuraavaksi 10 % -FBS laimennetaan 1:10 PBS-puskuriin, sekoitetaan ja pipetoidaan
levyille monikanavapipetillä 300 µl/kuoppa. Levyjä inkuboidaan 120 ± 3 minuuttia
huoneenlämmössä, jonka jälkeen tehdään pesu PBS-puskurilla. Levyjä
kylmäkuivataan vähintään kaksi tuntia. Levyt laitetaan pakastepusseihin ja
säilytetään -20 ± 2 ºC:ssa.
4.2.5 Standardilevyn valmistaminen
Standardilevyn pohjalle on kiinnitetty antigeenejä, joihin vasta-aineet kiinnittyvät.
Standardilevy valmistetaan laimentamalla 1:1500 Goat Antiserum to Human IgM.
Levyt inkuboidaan huoneenlämmössä 22h + 2h, pestään, kiinnitetään,
kylmäkuivataan ja pakastetaan kuten antigeenin kiinnitys kuoppalevylle -kohdassa.
33