TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
kestää 15 minuuttia. Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti otetaan talteen ja putken<br />
pohjalle jäänyt mikrobimassa heitetään pois. Tämän jälkeen supernatantti suodatetaan<br />
ja 1 ml liuosta otetaan erilliseen, korkilliseen koeputkeen titrausta varten. Jäljelle<br />
jäävää liuosta säilytetään -70 ºC pakastimessa.<br />
4.2.3 Antigeenin titraus<br />
Uudelle antigeenierälle määritetään laimennussuhde titraamalla rinnakkain uusi ja<br />
vanha antigeenierä. Titraus tarkoittaa menetelmää, jossa liuoksessa olevan aineen<br />
pitoisuus määritetään tunnetun titrausliuoksen avulla. Ensin tehdään levyn<br />
päällystäminen. Uutta antigeenierää otetaan 1–2 ml ja saman antigeenin edellistä erää<br />
otetaan yksi putki. Laimennokset tehdään PBS-puskuriin. Laimennokset tehdään<br />
siten, että uusi antigeenierä laimennetaan 1:100, josta edelleen 1:200 ja edelleen<br />
1:400 jne. Vanhasta erästä tehdään laimennos siten, että käyttölaimennoksen<br />
molemmin puolin tulee yksi laimennos. Kuoppalevy päällystetään<br />
antigeenilaimennoksilla (LIITE 2). Levy inkuboidaan huoneenlämmössä 22 ± 2<br />
tuntia, jonka jälkeen levy pestään PBS-puskurilla ja kylmäkuivataan.<br />
Titrauksessa A7–kontrolli ja kyseiselle antigeenille positiivinen tunnettu seerumi<br />
laimennetaan 1:100 PBS-puskuriin ja pipetoidaan kuoppalevylle rinnakkaisina<br />
(LIITE 2). Kuoppalevy inkuboidaan lämpökaapissa ja pestään kuoppalevypesurilla,<br />
huuhdellaan milli-Q-vedellä ja kuivataan hakkaamalla selluloosaan.<br />
Konjugaattiliuoksen ja substraattiliuoksen lisäys sekä inkuboinnit ja pesut tehdään<br />
ohjeiden mukaan. Lopuksi antigeenipitoisuudet mitataan Tecan Spectrofluor<br />
-spektrofluorometrilla.<br />
Laimennussuhde tarkistetaan titraamalla A7-kontrollilla ja antigeenille positiivisella<br />
ja negatiivisella seerumilla. Uusi antigeenilevy päällystetään edellisen titrauksen<br />
perusteella määrätyillä uuden erän laimennoksilla (LIITE 3). Levylle tehdään<br />
inkubointi, pesu ja kylmäkuivaus. A7-kontrolli ja seerumit laimennetaan 1:100 PBS-<br />
puskuriin ja pipetoidaan rinnakkaisena levyille. Levy inkuboidaan lämpökaapissa,<br />
pestään kuoppalevypesurilla, huuhdellaan milli-Q-vedellä ja kuivataan hakkaamalla<br />
selluloosaan. Konjugaattiliuoksen ja substraattiliuoksen lisäys sekä inkuboinnit ja<br />
32
Change language