TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
EMIT (enzyme-multiplied immunoassay technique) -menetelmä on homogeeninen<br />
entsyymi-immunomääritysmenetelmä. Menetelmässä kyvettiin lisätään<br />
samanaikaisesti näytettä, substraattia ja mitattavalle yhdisteelle spesifistä vasta-<br />
ainetta, joka sitoutuu inkuboinnin aikana mitattavaan yhdisteeseen. Tämän jälkeen<br />
lisätään entsyymileimattua mitattavaa yhdistettä sisältävää reagenssia, joka sitoutuu<br />
ylimäärin olevaan vasta-aineeseen muodostaen antigeeni-vasta-ainekompleksin.<br />
Tällöin entsyymi menettää katalyyttisen aktiivisuuden ja entsyymiaktiivisuuden<br />
muutos on verrannollinen mitattavan yhdisteen pitoisuuteen. (Halonen 2004, 96.)<br />
CEDIA (cloned enzyme donor immunoassay) -menetelmässä käytetään<br />
geeniteknologisesti valmistettua beetagalaktosidaasientsyymiä, jonka inaktiiviset osat<br />
luovuttaja ja vastaanottaja liittyvät reaktiossa muodostaen aktiivisen entsyymin.<br />
Antigeeni on liitetty entsyymin luovuttajaosaan. Reaktiossa näytteessä oleva<br />
antigeeni ja luovuttajaosan antigeeni kilpailevat sitoutumisesta antigeenille<br />
spesifiseen vasta-aineeseen. Luovuttajaosan ollessa sitoutuneena vasta-aineeseen se<br />
ei enää voi sitoutua vastaanottajaosaan ja muodostaa entsyymiä. Näytteen pitoisuus<br />
on suoraan verrannollinen entsyymiaktiivisuuteen. (Halonen 2004, 96–97.)<br />
Radioimmuunimääritysmenetelmässä (radio immuno assay) leimana käytetään<br />
radioaktiivista merkkiainetta. Menetelmä on tarkka ja herkkä. Lisäksi isotooppi on<br />
helppo liittää antigeeniin tai vasta-aineeseen. (Halonen 2004, 94.) RIA-määrityksessä<br />
radioaktiivisella merkkiaineella leimattu ja tutkittavassa näytteessä oleva<br />
leimaamaton antigeeni kilpailevat spesifisen vasta-aineen sitoutumiskohdista.<br />
(Turpeenoja 1995, 186.) Perinteinen radioimmuunimääritysmenetelmä on<br />
kilpailevaan sitoutumiseen perustuva heterogeeninen immunokemiallinen menetelmä.<br />
Vakiomäärä vasta-ainetta on sidottu kiinteään faasiin. Vapaa ja vasta-<br />
ainekompleksiin sitoutunut leima erotetaan toisistaan pesuvaiheiden avulla. Mitattu<br />
radioaktiivisuus on kääntäen verrannollinen mitattavan yhdisteen pitoisuuteen.<br />
Immunoradiometrinen menetelmä (IRMA) on kaksoisvasta-ainetekniikkaan<br />
perustuva heterogeeninen menetelmä. Siinä kiinteän faasin pinnassa oleva vasta-aine<br />
sitoo näytteessä olevan määritettävän yhdisteen. Sitoutumaton antigeeni pestään pois<br />
ja lisätään leimattu kaksoisvasta-aine. Sitoutumaton leimattu vasta-aine pestään ja<br />
jäljellejäänyt radioaktiivisuus mitataan. (Halonen 2004, 94.)<br />
24
Change language