TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Entsyymi-immunomääritysmenetelmässä (EIA-menetelmä) käytetään entsyymejä<br />
leimana. ELISA-menetelmä eli Enzymelinked immunosorbent assay on<br />
heterogeeninen entsyymi-immunomääritysmenetelmä. ELISA-menetelmä perustuu<br />
joko kilpailevaan sitoutumiseen tai kaksoisvasta-ainetekniikkaan. (Halonen 2004,<br />
94–95.) ELISA-menetelmä perustuu kiinteällä alustalla tapahtuvaan immunologiseen<br />
kiinnittymiseen. Menetelmässä kiinteään faasiin kiinnitetyn antigeenin tai vasta-<br />
aineen avulla voidaan osoittaa siihen sitoutuneen vasta-aineen tai antigeenin<br />
pitoisuus. (Pätäri & Holthöfer 2003.) Kaksoisvasta-ainetekniikkaan perustuvassa<br />
menetelmässä yksi reaktioon osallistuvista komponenteista on kiinnitetty kiinteän<br />
faasin pintaan, esimerkiksi vasta-aine kuoppalevyn kuoppaan. Tutkittava näyte<br />
annostellaan kuoppalevyyn ja mitattava yhdiste sitoutuu kiinteän faasin pinnalla<br />
olevaan vasta-aineeseen. Kiinteä faasi pestään ja entsyymileimattu kaksoisvasta-aine<br />
lisätään (konjugaatti), jolloin syntyy kaksoisvasta-ainekompleksi. Ylimääräinen<br />
sitoutumaton vasta-aine pestään pois ja lisätään entsyymiin sitoutuva aine<br />
(substraatti). Entsyymi katalysoi (nopeuttaa) substraatin reaktiotuotteeksi, joka<br />
mitataan esimerkiksi spektrofluorometrilla. Reaktiotuotteen määrä on suoraan<br />
verrannollinen näytteen vasta-ainepitoisuuteen. (Halonen 2004, 94.)<br />
Työterveyslaitoksen Kuopion aluetoimipisteen käyttämä In-House ELISA-<br />
menetelmä perustuu kaksoisvasta-ainetekniikkaan.<br />
Kuva 2. ELISA-menetelmän periaate. (Decker 2006.)<br />
23
Change language