TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
TYÖN NIMI - Theseus
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
2.6 Immunokemialliset menetelmät<br />
Immunokemiallisessa menetelmässä mitataan joko antigeenin tai vasta-aineen<br />
pitoisuutta. Antigeeni on yhdiste, joka sitoutuu vasta-aineeseen. Vasta-aine on<br />
immunoglobuliini, joka kykenee sitomaan luonnossa olevia synteettisiä yhdisteitä.<br />
Polyklonaaliseksi vasta-aineeksi kutsutaan vasta-aineseosta, jossa on monia spesifisiä<br />
antigeenin sitomispaikaltaan erilaisia vasta-aineita. Monoklonaalisessa vasta-aineessa<br />
on ainoastaan yksi spesifinen antigeenin sitomispaikka. (Halonen 2004, 90.)<br />
Immunokemialliset menetelmät on koottu liitteeseen 1.<br />
Kilpailevaan sitoutumiseen perustuvassa määrityksessä näyte ja reagenssit<br />
sekoitetaan keskenään joko samanaikaisesti tai portaittain. Kun määritettävä yhdiste<br />
ja leimattu vakiomääräinen yhdiste kilpailevat sitoutumisesta tiettyyn määrään vasta-<br />
ainetta samanaikaisesti, on olennaista, että vasta-aine sitoutuu sekä määritettävään<br />
että leimattuun yhdisteeseen yhtä herkästi. Toisessa kilpailevaan sitoutumiseen<br />
perustuvassa menetelmässä määritettävä yhdiste sekoitetaan ensin vasta-aineen<br />
kanssa. Leimattu vakiomääräinen yhdiste lisätään kun määritettävän yhdisteen ja<br />
vasta-aineen välinen reaktiotasapaino on saavutettu. Vapaa ja vasta-aineeseen<br />
sitoutunut antigeeni erotetaan toisistaan ja vasta-aineeseen sitoutunut leimattu<br />
antigeeni määritetään. (Halonen 2004, 90–91.)<br />
Kaksoisvasta-ainetekniikassa määritettävä yhdiste (antigeeni) sitoutuu kiinteän faasin<br />
pintaan olevaan vasta-aineeseen, jonka jälkeen sitoutumattomat yhdisteet pestään<br />
pois ja leimattu vasta-aine lisätään. Leimattu vasta-aine sitoutuu määritettävään<br />
yhdisteeseen, jolloin muodostuu vasta-ainekompleksi. Sitoutumaton ylimääräinen<br />
leimattu vasta-aine pestään pois ja sitoutunut leimattu vasta-aine määritetään. Tämä<br />
on suoraan verrannollinen mitattavan yhdisteen pitoisuuteen. (Halonen 2004, 90–92.)<br />
Heterogeenisessä immunokemiallisessa menetelmässä erotetaan ennen mittausta<br />
vapaana oleva ja sitoutunut leimattu antigeeni tai vasta-aine toisistaan (Halonen<br />
2004, 93). Homogeenisessä immunokemiallisessa menetelmässä näitä ei eroteta, vaan<br />
koko tarvittava reaktio tapahtuu yhdellä reagenssien sekoituksella (Seppälä 1996a,<br />
126). Homogeenisessä menetelmässä antigeeniin liitetyn leiman aktiivisuus muuttuu<br />
vasta-aineeseen sitoutuessa ja määritettävä yhdiste voidaan mitata suoraan<br />
reaktioseoksesta (Halonen 2004, 93).<br />
22
Change language