Histologia basica de Leslie Gartner

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Ó ELSEVIER. Fotocopiar sin autorización es un delito.
Figura 1.3 Metodos directos e indirectos de inmunocitoquímica. Izquierda. Se marca un anticuerpo frente a un antígeno con un
colorante fluorescente y se visualiza con un microscopio de fluorescencia. La región que emite luz fluorescente indica la localización
del anticuerpo marcado. Derecha. Se preparan anticuerpos marcados frente a un anticuerpo que reacciona frente a un antígeno dado.
En el microscopio de fluorescencia, la señal fluorescente representa el lugar de reacción del antígeno con el anticuerpo. (Tomado de
Gartner LP, Hiatt JL: Color Textbook of Histology, 3rd ed. Philadelphia, Saunders, 2007, p 5.)
metodo indirecto son mas altas, puesto que un
número mayor de moleculas de anticuerpo
marcadas se une al anticuerpo primario que en el
metodo directo. Por otra parte, los anticuerpos
primarios suelen ser mas costosos y encontrarse
disponibles en cantidades limitadas.
. Asimismo, la inmunocitoquímica puede
utilizarse en microscopia electrónica mediante la
unión del metal pesado ferritina en lugar del
marcador fluorescente.
. En la autorradiografía se emplea un isótopo
radioactivo (normalmente, tritio, 3 H) que se
incorpora a la molecula de interes.
. Para estudiar la síntesis de una proteína dada,
se introducen aminoacidos tritiados en el
sistema y se recogen muestras en períodos
definidos.
. Los cortes se procesan del modo habitual, si bien
las preparaciones se recubren de una capa de
emulsión fotografica en lugar de un cubreobjetos
y se mantienen en la oscuridad durante varias
semanas.
. Se revela y se fija la emulsión de manera similar a
una placa fotografica y se dispone un
cubreobjetos sobre el corte.
. Al observar la muestra en el microscopio, se
visualizan granulos de plata sobre las zonas de la
muestra a las que se incorporaron las moleculas
marcadas con el isótopo.
. Se ha adaptado la tecnica de autorradiografía ala
microscopia electrónica.
Microscopia confocal
En la microscopia confocal se dirige un haz de laser
sobre una muestra impregnada en colorantes fluorescentes;
el haz incidente que atraviesa un espejo
dicroico excita dichas moleculas, que emiten fluorescencia
(fig. 1.4).
. El rayo laser atraviesa una pequeña abertura
controlada informaticamente, de modo que la
muestra emite fluorescencia a medida que es barrida
por el haz.
. La luz fluorescente emitida por la muestra es
capturada conforme atraviesa la abertura en sentido
contrario al de la luz laser.
. Un detector fotomultiplicador captura la luz
emitida; el sistema informatico recoge cada uno de
los píxeles así obtenidos para elaborar una imagen
de la muestra.
. En cada toma se observa únicamente un plano
muy delgado de la muestra, por lo que es preciso
efectuar numerosos barridos a distintos niveles
con el fin de crear una imagen tridimensional de
la misma.
Microscopia electrónica
En la microscopia electrónica se utiliza un haz de electrones
en lugar de fotones como fuente de luz, el cual se
amplía y enfoca por medio de electroimanes (fig. 1.5).
. La resolución del microscopio depende de la
longitud de onda de la luz emitida y la longitud de
onda de un haz de electrones es mucho menor que
la de la luz visible; la resolución del haz de
electrones es, aproximadamente, 1.000 veces mayor
que la de la luz visible. El poder de resolucióndeun
microscopio óptico compuesto es de unos 200 nm,
mientras que el de un microscopio electrónico de
transmisión es de 0,2 nm, lo que supone una
amplificación de unas 150.000 veces y permite
visualizar moleculas individuales, como la miosina.
INTRODUCCIÓN A LA HISTOLOGÍA