Presentación en cartel - VIII Reunión de SOMA - Universidad ...

VIII Reunión de la Sociedad Mexicana de Astrobiología
Cuernavaca, Morelos. 24 de agosto de 2012 106
un mayor volumen de agua, también se tomaron 10 muestras de agua y sedimento húmedo en frascos
(FALCON) de plástico de 50 ml. Las muestras se transportaron selladas herméticamente en una hielera
hasta el Laboratorio de Genética Molecular y Ecología Evolutiva de la Facultad de Ciencias Naturales
en la Universidad Autónoma de Querétaro. En el laboratorio se almacenaron a 4°C hasta que fueron
procesadas las muestras. Se midieron datos fisicoquímicos del agua en el lugar de muestreo como pH,
salinidad, temperatura, entre otros, solo se midieron los datos fisicoquímicos de dos charcas, una que
presentaba el mayor volumen de agua y la otra donde las charcas estaban en un severo proceso de
desecación (ver Tabla 1).
De cada una de las 13 muestras se extrajo el ADN total. El protocolo de extracción de ADN se
modifico con base al utilizado por Mwirichia et al. [7], en el cual se usó una solución de lisis (10 mM
Tris pH 8.5 + 5 mM EDTA pH 8.0 + 1% SDS (10%) + 10 µl Proteinasa K 20 mg/ml) y una solución
concentrada de sales (6 M NaCl). El protocolo consiste en tomar 250 µl de cada muestra en tubos para
microcentrífuga de 1.5 µl y agregarle 750 µl de la solución de lisis, se incuban las muestras durante 1
hora a 58 °C y después se agregan 300 µl de la solución concentrada de sales y se centrifugan a 13,000
rpm durante 30 minutos, el sobrenadante se transfiere a tubos nuevos y se le agregan 750 µl de
isopropanol, después se incuba a -20 °C por 1 hora y enseguida se centrifuga a 13,000 rpm por 20
minutos, el sobrenadante se retira cuidadosamente para no extraer el pellet de ADN, posteriormente al
tubo con el pellet de ADN se le agregan 200 µl de etanol al 70% y se centrifuga a 13,000 rpm durante 2
minutos, por último se retira el sobrenadante y se resuspende el pellet en 50-100 µl de agua destilada
estéril y se refrigera a 4°C.
El material genético obtenido se amplificó mediante una PCR (Reacción en Cadena de la
Polimerasa) utilizando genes universales ribosomales (ver Tabla 2). Se siguió el protocolo para PCR de
HotStarTaq Plus Master Mix (Qiagen). Por último los productos de PCR se visualizarán en
electroforesis en gel de agarosa al 1% utilizando como marcador fluorescente bromuro de etidio.
Resultados
Se obtuvieron resultados positivos en la prueba de electroforesis en gel de agarosa al 1% de las
trece muestras para Bacteria, Arquea y Eucaria (ver Fig. 2).
Perspectivas
1. Caracterizar molecularmente la diversidad microbiana del lago y de los estromatolitos.
2. Establecer relaciones evolutivas entre los principales grupos taxonómicos de
microorganismos.
3. Establecer las bases sobre la importancia del estudio de ambientes similares a los de Rincón
de Parangueo para entender la evolución temprana de la vida en la Tierra y la posible
existencia de vida en otros planetas con condiciones parecidas a las de Rincón de Parangueo.
Referencias
[1] Jiménez B., Marín L., Morán D., Escolero Ó., Alcocer J., Martínez V. El Agua en México vista
desde la Academia. (Edición Digital, Academia Mexicana de Ciencias, 2005), 405 pp.
[2] Aranda-Gómez J., Levresse G., Pacheco J., Ramos-Leal J., Carrasco-Núñez G., Chacón-Baca
E., González-Naranjo G., Chávez-Cabello G., Vega-González M., Origel G. y Noyola-Medrano
C. Eighth International Symposium on Land Subsidence. Querétaro, México, 2010.
[3] Aguilera, L. I. Colegio de Postgraduados (1991).
[4] Chacón-Baca E., Berrendero E., Montejo G., Malda J., Sánchez-Ramos M. Are cyanobacterial
mats precursors of stromatolites? 2009. 26 pp.