SEFV

mucho menos sobre la maduración no climatérica.
La existencia de variedades de melón con ambos
tipos de maduración y el av anzado desarrollo de
herramientas genéticas y genómicas convierten a
esta especie en un buen modelo para el estudio de
la maduración del fruto.
El QTL eth6.3, objeto de estudio de esta tesis
doctoral, fue detectado junto con eth3.5 durante la
caracterización de la línea casi isogénica SC3-5-1
(portadora de los dos QTLs), obtenida a partir del
cruzamiento entre “Piel de Sapo” (PS) y “Songwhan
Charmi” (SC). Ambos QTLs son capaces de inducir
una maduración climatérica por separado, pero
cuando están juntos interaccionan produciendo un
f enotipo climatérico más f uerte. En este trabajo se
ha realizado el clonaje posicional de eth6.3 a través
del desarrollo de una población de mapeo obtenida
a partir de un individuo con alelos de PS en
homocigosis para eth3.5 y segregante para eth6.3.
El análisis f enotípico de 15 recombinantes en el
interv alo del QTL permitió identif icar el gen
MELO3C016540, miembro de la f amilia de factores
de transcripción tipo NAC en melón, como
responsable de eth6.3. Para su v alidación se
buscaron mutantes en una colección de TILLING
con f ondo climatérico, encontrándose dos f amilias
con mutaciones dentro del dominio NAC que
mostraron un retraso en el proceso de maduración
respecto a f rutos no mutados. El análisis de
MELO3C016540 en un panel con 54 v ariedades de
melón, representativ as de la v ariabilidad existente
dentro de la especie, rev eló una alta conservación
en los haplotipos de este gen entre variedades con
el mismo tipo de maduración que sugiere un papel
central en la regulación de este proceso. Finalmente,
también se inició una nuev a aproximación para la
caracterización de MELO3C016540 mediante el
desarrollo de construcciones genéticas para su
silenciamiento mediante RNAi en líneas portadoras
de eth6.3. De forma complementaria, en la última
parte de este trabajo de tesis se ha realizado un
estudio transcriptómico del f ruto de la línea SC3-5-1
y PS a lo largo de la maduración, observ ándose una
reprogramación genética global entre frutos maduros
de las dos líneas. Se encontró expresión diferencial
de algunos genes implicados en procesos de
maduración climatérica como la biosíntesis y
señalización de etileno, el reblandecimiento de la
pared celular y la biosíntesis de compuestos
aromáticos, así como genes pertenecientes a las
f amilias de factores de transcripción NAC, MADSbox,
F-box y HD-zip. En conjunto, este trabajo ha
permitido profundizar en el estudio de la regulación
de la maduración en melón y comenzar a entender
las dif erencias entre f rutos climatéricos y no
climatéricos de esta especie.
Identification and functional characterization of
P1N-PISPO, a new gene product present in sweet
potato potyviruses
Ares Mingot
Director: Juan José López-Moy a
Programa de Doctorado: Biotecnología.
Univ ersidad: Facultat de Farmàcia, Univ ersitat de
Barcelona. Centre de Recerca en Agrigenòmica
(CRAG), Barcelona
SUMMARY
Sweet potato feathery mottle virus (SPFMV)
(Potyv irus genus, Potyviridae f amily ) causes
important yield losses in sweet potato crops, in
particular in co-inf ections with the unrelated crinivirus
Sweet potato chlorotic stunt v irus (SPCSV). This
thesis addresses the characterization of some nov el
aspects in the inf ectious cycle of SPFMV, such as
the expression, production and f unction of a new
gene product named P1N-PISPO. A better
understanding of SPFMV genome organization and
the f unctions of their gene products might be relevant
to improve the control strategies against this virus
and the associated diseases in sweet potato crops.
The positiv e-sense RNA genome of SPFMV contains
a large ORF, translatable as a poly protein yielding a
set of functional mature gene products (P1, HCPro,
P3, 6K1, CI, 6K2, VPg-NIa, NIb and CP), and a short
ORF named PIPO in the -1 f rame, embedded within
the P3 region. In addition to this organization,
common to all the members of the Potyvirus genus,
another ORF named PISPO was predicted in the
genome. PISPO is in the -1 f rame within the P1
region of SPFMV and other related potyviruses,
starting at a conserv ed G1-2A6-7 motif, similar to the
motif found upstream of PIPO. The expression of
PISPO during SPFMV v iral inf ection could result in
the production of a putative new gene product P1N-
PISPO.
In the present work, the presence of the PISPO
frame has been inv estigated in a Spanish isolate of
SPFMV inf ecting Ipomoea batata plants. The
genome sequence of this isolate has been
assembled f rom NGS data, showing that the
expected trans-framed PISPO sequences is present,
preceded by a G2A6 motif. A specif ic analysis of the
NGS data has revealed a significant proportion of
transcripts with an extra A in the motif at the
beginning of PISPO, as well as a lower proportion of
transcripts with an extra in the corresponding
conserv ed motif preceding the PIPO region. These
results have demonstrated that a polymerase
slippage mechanism could generate transcripts
containing extra A residues (G2A7) to allow the
translation of P1N-PISPO and P3N-PIPO gene
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