O papel modulador do gene AIRE - capes
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RESULTADOSPCR semiquantitativa gene AiremTEC1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 B*RNAi 1 2,5nMRNAi 1 5,0nMRNAi 1 10nMRNAi 2 2,5nMRNAi 2 5,0nMRNAi 2 10nMRNAi 3 2,5nMRNAi 3 5,0nMRNAi 3 10nMFigura 15. Eletroforese em gel de agarose de produtos de rt-PCR semiquantitativa paraa detecção do transcrito do gene Aire. PCRs realizadas com as seguintes amostras:mTEC na ausência de RNA interferente e mTEC em presença das três diferentesseqüências de RNAi anti-Aire, cada uma em três concentrações (2.5, 5.0 e 10.0 nM). *RNAi e concentração escolhidos para a continuação dos experimentos.6.2. Avaliação da integridade do RNA total6.2.1. Amostras utilizadas como “pool” de referência.A qualidade das amostras de RNA total proveniente de diferentestimos de camundongos C57Bl/6 adultos foi avaliada por eletroforese emgel de agarose 1% em condições denaturantes. As amostras que seapresentaram íntegras com relação às subunidades de RNAr 28S, 18S e 5Se RNAt, além das avaliações espectrofotométricas, foram selecionadaspara compor o pool de referência (figura 16).73
RESULTADOSFigura 16. Eletroforese em gel de agarose de seis amostras de RNA total provenientesde timos de camundongos C57Bl/6 adultos.6.2.2. RNA total de Amostras de células mTEC.Assim como para as amostras de RNA total proveniente de timosas amostras de RNA total de células mTEC também foram submetidas àavaliação em gel de agarose 1% em condições denaturantes. As amostrasque se apresentaram íntegras com relação às subunidades 28S, 18S e 5S eRNAt além das avaliações espectrofotométricas, foram selecionadas paramarcação fluorescente (figura 17).Figura 17. Eletroforese em gel de agarose de amostras de RNA total provenientes decélulas mTEC nas diferentes situações: 1) mTEC; 2) mTEC + lipofectamina; 3) mTEC +RNAi irrelevante; 4) mTEC + RNAi anti-HPRT; 5) mTEC + RNAi anti-Aire).74
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RESULTADOSPCR semiquantitativa <strong>gene</strong> AiremTEC1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 B*RNAi 1 2,5nMRNAi 1 5,0nMRNAi 1 10nMRNAi 2 2,5nMRNAi 2 5,0nMRNAi 2 10nMRNAi 3 2,5nMRNAi 3 5,0nMRNAi 3 10nMFigura 15. Eletroforese em gel de agarose de produtos de rt-PCR semiquantitativa paraa detecção <strong>do</strong> transcrito <strong>do</strong> <strong>gene</strong> Aire. PCRs realizadas com as seguintes amostras:mTEC na ausência de RNA interferente e mTEC em presença das três diferentesseqüências de RNAi anti-Aire, cada uma em três concentrações (2.5, 5.0 e 10.0 nM). *RNAi e concentração escolhi<strong>do</strong>s para a continuação <strong>do</strong>s experimentos.6.2. Avaliação da integridade <strong>do</strong> RNA total6.2.1. Amostras utilizadas como “pool” de referência.A qualidade das amostras de RNA total proveniente de diferentestimos de camun<strong>do</strong>ngos C57Bl/6 adultos foi avaliada por eletroforese emgel de agarose 1% em condições denaturantes. As amostras que seapresentaram íntegras com relação às subunidades de RNAr 28S, 18S e 5Se RNAt, além das avaliações espectrofotométricas, foram selecionadaspara compor o pool de referência (figura 16).73