O papel modulador do gene AIRE - capes

RESULTADOS6. RESULTADOS6.1. Inibição seletiva do transcrito do gene Aire com RNA interferente(RNAi).O ensaio de silenciamento do transcrito do gene Aire foi realizadousando a seqüência que apresentou melhor eficiência do Kit TriFECTa(IDT - Integrated DNA Tecnologies, USA).Como já explicado em Material e Métodos, além das seqüênciasanti-Aire, outras três seqüências que estavam incluídas no kit foramutilizadas: 1) RNAi irrelevante marcado com Cy3 usado para medir aeficiência de transfecção (microscopia de fluorescência), 2) uma seqüênciaduplex de RNAi irrelevante, o qual não é capaz de alterar a expressãogênica nas células em estudo e 3) um controle positivo, constituída deuma seqüência RNAi anti-HPRT (hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase), um gene constitutivo, utilizada para avaliar se o processo detransfecção e o sistema modelo são adequados para inibição com RNAi.6.1.1. Monitoramento da transfecção e determinação da seqüência de RNAianti-Aire.Para o monitoramento do método de transfecção foi realizada umacultura em presença de RNAi irrelevante marcado com Cy3. Como épossível observar na figura 13, o método de transfecção por lipofectamina(Hiperfect Transfection Reagent® da Qiagen) é adequado à transfecçãode células mTEC 3.10 em cultura como observado por microscopia de71