O papel modulador do gene AIRE - capes

MATERIAL E MÉTODOSRNA TotalANELAMENTOOligo (dT) primerrandom nonamersAnelamento dos RNAs mensageirosSÍNTESE DE cDNANucleotídeos, AA-dUTP,tampão da reação, enzima(transcriptase reversa)Anelamento das fitas simples de cDNAs incorporadascom amino alil (AA-dUTP) com RNADEGRADAÇÃO DOS RNAMENSAGEIROSTratamento alcalino (2,5 M NaOH)Neutralização (2 M HEPES)Fita simples de cDNA incorporada com aminoalil livre de nucleotídeos e oligômerosPURIFICAÇÃO DOS cDNAsPurificação com colunasCyScribe GFXFita Simples de cDNA marcada e incorporadacom amino alilFigura 8. Preparação da fita simples de cDNA incorporada com amino alil usando osreagentes do kit “CyScribe Post Labelling”(GE Healthcare).53