O papel modulador do gene AIRE - capes

DISCUSSÃOCom relação à técnica de cDNA microarrays desenvolvida nopróprio laboratório para propósitos de análise de PGE no timo murino éde especial interesse a biblioteca de cDNA denominada “Soares thymus2NbMT cDNA library” disponível no IMAGE Consortium(http://image.llnl.gov). Essa é uma biblioteca de ESTs (expressed sequencetags) normalizada, preparada do timo total de um camundongo machoadulto jovem de quatro semanas da linhagem C57Bl/6J (mesmobackground genético da linhagem de células mTEC 3.10 utilizada nestetrabalho).Essa biblioteca é composta de mais de 25.000 clones de cDNA (resequenciados)representando a maioria, se não todos, os genes expressosdo camundongo. Portanto, ela representa um recurso precioso para apreparação de cDNA microarrays “especializados em timo” muito úteis napesquisa de PGE.Por isso é que utilizamos essa biblioteca no presente estudo, alémde dominarmos todas as etapas da tecnologia dos microarrays em nossopróprio laboratório.Portanto, o sistema modelo estava organizado: de um lado ascélulas mTEC em cultura e de outro o cDNA microarray tímico.Nossa primeira questão foi avaliar se as células mTEC expressamem cultura os genes de TRAs, conferindo a expressão gênica promíscua.Como a análise de dados de microarrays envolve o teste estatísticoSAM (Tusher et al., 2001), o qual recupera somente os valores deexpressão com alta significância, das 4.500 seqüências de cDNA presentesno microarray foram possíveis recuperar 1.611 por meio da funçãomulticlass do programa SAM (figura 23) ou 211 seqüências usando acomparação pareada (figura 25).93