O papel modulador do gene AIRE - capes

4.9. Hibridação das lâminas de microarrays........................................................ 584.10. Aquisição de imagens de microarrays......................................................... 584.11. Quantificação e normalização dos dados de microarrays ........................ 594.11.1. Nomenclatura dos genes ............................................................................. 654.12. Análise da expressão gênica promíscua ...................................................... 654.13. GeneNetwork .................................................................................................. 665. DELINEAMENTO EXPERIMENTAL................................................................... 696. RESULTADOS.......................................................................................................... 716.1. Inibição seletiva do transcrito do gene Aire com RNA interferente(RNAi). ...................................................................................................................... 716.1.1. Monitoramento da transfecção e determinação da seqüência de RNAi anti-Aire. ........................................................................................................................ 716.2. Avaliação da integridade do RNA total ........................................................ 736.2.1. Amostras utilizadas como “pool” de referência............................................ 736.2.2. RNA total de Amostras de células mTEC. ................................................... 746.3. RT-PCRs semi-quantitativas para os transcritos dos genes Aire e HPRT.756.4. Amplificação de cDNA para a confecção de microarrays .......................... 766.5. Aquisição de imagens de microarrays........................................................... 776.6. Quantificação e normalização dos dados de microarrays .......................... 796.7. Análise da expressão gênica promíscua........................................................ 846.8. Influência do silenciamento do transcrito do gene Aire sobre as redes deinterações gênicas das células mTEC.................................................................... 877. DISCUSSÃO ............................................................................................................. 908. CONCLUSÕES....................................................................................................... 1066. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................... 108ANEXO I ...................................................................................................................... 123ANEXO II..................................................................................................................... 185ANEXO III ................................................................................................................... 195MANUSCRITO............................................................................................................ 201SÚMULA...................................................................................................................... 224PUBLICAÇÕES ........................................................................................................... 234