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Vor und nach der Fixierung sind die Proben sowie alle Materialien, die mit ihnen in Kontakt gekommen sind, als potentiell infektiöszu behandeln und daher mit entsprechender Vorsicht zu entsorgen. 1 Reagenzien dürfen niemals mit dem Mund pipettiert werden,und jeglicher Kontakt der Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimhäuten ist zu vermeiden. Falls Reagenzien oder Proben mitempfindlichen Bereichen in Kontakt gekommen sind, müssen diese mit reichlich Wasser gespült werden. Ärztlichen Rat einholen.Die mikrobielle Verunreinigung von Reagenzien ist zu minimieren, da ansonsten eine erhöhte unspezifische Färbung auftreten kann.Falls die spezifizierten Inkubationszeiten oder –temperaturen nicht eingehalten werden, kann es zu fehlerhaften Ergebnissen kommen.Jegliche Abweichungen von den angegebenen Werten müssen vom Benutzer verifiziert werden.QualitätskontrolleUnterschiede bei der Gewebebearbeitung und den technischen Verfahren im Labor des Benutzers können zu signifikantenSchwankungen bei den Ergebnissen führen. Daher ist es wichtig, zusätzlich zu den folgenden Verfahren regelmäßige laborinterneKontrollen durchzuführen.Die Kontrollen sollten mit frischen Autopsie-/Biopsie-/chirurgischen Proben vorgenommen werden, die so bald wie möglich und aufdieselbe Weise wie die Patientenprobe(n) in Formalin fixiert, behandelt und in Paraffin eingebettet worden sind.Positive GewebekontrolleZeigt korrekt vorbereitete Gewebe und korrekte Färbetechniken an.In jedem Färbelauf sollte für jeden Satz Testbedingungen eine positive Gewebekontrolle durchgeführt werden.Gewebe mit schwach positiver Färbung ist für die optimale Qualitätskontrolle und den Nachweis kleiner Minderungen in derReagenzleistung besser geeignet als ein Gewebe mit stark positiver Färbung. 2Für die positive Gewebekontrolle wird Tonsillengewebe empfohlen.Falls das positive Kontrollgewebe keine positive Färbung nachweisen kann, sollten die mit den Testproben erzielten Ergebnisse alsungültig betrachtet werden.Negative GewebekontrolleDie negative Gewebekontrolle sollte nach der positiven Gewebekontrolle erfolgen, um die Spezifität der Zielantigenmarkierung durchden primären Antikörper zu verifizieren.Für die negative Gewebekontrolle wird Muskelgewebe empfohlen.Alternativ bietet die Vielfalt unterschiedlicher Zelltypen, die in den meisten Gewebeschnitten vorliegen, häufig Stellen für eine negativeKontrolle. Jedoch sollte dies vom Benutzer verifiziert werden.Liegt eine unspezifische Färbung vor, hat diese gewöhnlich ein diffuses Erscheinungsbild. Eine sporadische Färbung des Bindegewebeskann ebenfalls in Schnitten von übermäßig formalinfixierten Geweben beobachtet werden. Zur Bewertung der Färbeergebnisse intakteZellen verwenden. Nekrotische oder degenerierte Zellen werden oft unspezifisch gefärbt. 3 Falsch-positive Ergebnisse können aufgrundeiner nichtimmunologischen Bindung von Proteinen oder Substratreaktionsprodukten beobachtet werden. In Abhängigkeit von derArt der verwendeten Immunfärbung können solche Ergebnisse auch durch endogene Enzyme wie Pseudoperoxidase (Erythrozyten),endogene Peroxidase (Zytochrom C) oder endogenes Biotin (beispielsweise Leber, Mamma, Gehirn, Niere) hervorgerufen werden.Um eine endogene Enzymaktivität bzw. eine unspezifische Enzymbindung von einer spezifischen Immunreaktivität zu unterscheiden,können zusätzliche Patientengewebe ausschließlich mit Substratchromogen bzw. mit Enzymkomplexen (Avidin-Biotin, Streptavidin,markiertes Polymer) plus Substratchromogen gefärbt werden. Falls im negativen Kontrollgewebe eine spezifische Färbung auftritt,sollten die Ergebnisse mit den Patientenproben als ungültig betrachtet werden.Negative ReagenzkontrolleZur Beurteilung einer unspezifischen Färbung und zur besseren Bewertung einer spezifischen Färbung an der Antigenstelle ist mit einemSchnitt jedes Patientenpräparates anstelle des primären Antikörpers eine unspezifische negative Reagenzkontrolle zu verwenden.PatientengewebeDie mit NCL-CD31-1A10 gefärbten Patientenproben müssen zuletzt untersucht werden. Eine positive Färbeintensität ist im Kontext einerunspezifischen Hintergrundfärbung der negativen Reagenzkontrolle zu bewerten. Wie bei jedem immunhistochemischen Test bedeutetein negatives Ergebnis, dass das Antigen nicht nachgewiesen wurde. Ein negatives Ergebnis bedeutet jedoch nicht notwendigerweise,dass das Antigen in den getesteten Zellen / im getesteten Gewebe nicht vorlag. Bei Bedarf sollte zur Identifizierung falsch-negativerReaktionen eine Gruppe von Antikörpern verwendet werden.Erwartete ErgebnisseNormale GewebeKlon 1A10 wies das CD31-Antigen (PECAM-1) auf der Oberfläche von Endothelzellen bei einer Reihe von Geweben nach (n=52). Einegewisse Reaktivität wurde außerdem bei Blutplättchen, Monozyten, Granulozyten und B-Zellen beobachtet.TumorgewebeKlon 1A10 färbte Endothelzellen bei einer Reihe benigner und maligner Tumoren (n=96).NCL-CD31-1A10 wird für zur Bewertung einer vaskulären Invasion in neoplastischen Geweben empfohlen.Allgemeine BeschränkungenDie Immunhistochemie ist ein mehrstufiger diagnostischer Prozess, der eine spezialisierte Ausbildung auf den folgenden Gebietenerfordert: Auswahl der entsprechenden Reagenzien; Gewebeauswahl, -fixierung und -verarbeitung; Vorbereitung des IHC-Objektträgerssowie Bewertung der Färbeergebnisse.Die Gewebefärbung hängt von der Handhabung und Verarbeitung des Gewebes vor dem Färben ab. Unsachgemäßes Fixieren,Einfrieren, Auftauen, Waschen, Trocknen, Erwärmen, Schneiden oder eine Kontamination mit anderen Geweben oder Flüssigkeitenkann zu Artefakten, Antikörper-Trapping oder falsch-negativen Ergebnissen führen. Abweichende Ergebnisse können aufgrund vonUnterschieden bei der Fixierung und Einbettung oder intrinsischen Unregelmäßigkeiten im Gewebe selbst entstehen. 4NCL-CD31-1A10Page 17
Eine exzessive oder unvollständige Gegenfärbung kann die korrekte Bewertung von Ergebnissen gefährden.Die klinische Bewertung einer vorliegenden bzw. fehlenden Färbung sollte durch morphologische Studien mit entsprechenden Kontrollenergänzt und im Kontext der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests von einem qualifizierten Pathologenvorgenommen werden.Antikörper von <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong> Newcastle Ltd sind wo angezeigt für die Verwendung entweder auf gefrorenen oder in Paraffineingebetteten Schnitten mit spezifischen Fixierungsanforderungen bestimmt. Es kann insbesondere bei Neoplasmen zu einerunerwarteten Antigenexpression kommen. Die klinische Bewertung eines gefärbten Gewebeschnitts muss eine morphologische Analyseund die Auswertung der entsprechenden Kontrollen einschließen.Literatur - Allgemein1. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmittedby blood and tissue; proposed guideline. Villanova, P.A. 1991;7(9). Order code M29-P.2. Battifora H. Diagnostic uses of antibodies to keratins: a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal andthree polyclonal antibodies. Progress in Surgical Pathology. 6:1–15. eds. Fenoglio-Preiser C, Wolff CM, Rilke F. Field & Wood, Inc.,Philadelphia.3. Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase, part I: the techniques and pitfalls. Laboratory Medicine. 1983; 14:767.4. Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: apossible source of error in immunohistochemistry. American Journal of Clinical Pathology. 1980; 73:626.5. Kostopoulos I, Barbanis S, Kalekou H, et al. Male breast carcinoma of the papillary solid variant with unique CD34 positivity. VirchowsArchiv. 2003; 443(4):591–593.6. Molica S, Vacca A, Crivellato E, et al. Tryptase-positive mast cells predict clinical outcome of patients with early B-cell chroniclymphocytic leukaemia. European Journal of Haematology. 2003; 71(2):137–139.7. Ribatti D, Polimeno G, Vacca A, et al. Correlation of bone marrow angiogenesis and mast cells with tryptase activity inmyelodysplastic syndromes. Leukemia. 2002; 16(9):1680–1684.8. Ameriso SF, Fridman EA, Leiguarda RC, et al. Detection of Helicobacter pylori in human carotid atherosclerotic plaques. Stroke.2001; 32(2):385–391.9. Korkolopoulou P, Konstantinidou AE, Kavantzas N, et al. Morphometric microvascular characteristics predict prognosis in superficialand invasive bladder cancer. Virchows Archiv. 2001; 438(6):603–611.10. Toppila S, Paavonen T, Laitinen A, et al. Endothelial sulphated sialyl Lewis x glycans, putative L-selectin ligands, are preferentiallyexpressed in bronchial asthma but not in other chronic inflammatory lung diseases. American Journal of Respiratory Cell andMolecular Biology. 2000; 23(4):492–498.Änderungen zur vorhergehenden AusgabeKeine.Ausgabedatum17 Januar 2013NCL-CD31-1A10Page 18
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