MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO ... - BVS Minsa

Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de los parásitos intestinales del hombre- Metanol.- Hidróxido de sodio al 4%.- Alcohol ácido (Anexo C).5.5.1.3 Procedimiento.5.5.1.4 Observación.- Colocar las láminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de vidrio.- Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lámina portaobjeto y dejar secar.- Fijar la lámina con alcohol metílico de 2 a 5 minutos y dejar secar.- Agregar hidróxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y lavar con agua.- Cubrir la lámina con la fucsina fenicada (previa agitación del frasco) por 5 minutos, diluidapreviamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL de agua).- Lavar suavemente la lámina portaobjeto con agua corriente.- Decolorar con alcohol-ácido, cubriendo el portaobjeto por unos segundos hasta quitar el colorante.- Lavar suavemente el portaobjeto con agua.- Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5minutos, diluidas previamente al tercio.- Lavar la lámina suavemente con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.- Realizar el montaje con cytoseal, bálsamo de Canadá o Permount, usar una laminilla cubreobjetoy observar el microscopio.Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora aparecen de un color rojo fucsia sobre unfondo verdoso (con verde de malaquita) o azul (con azul de metileno). En algunos casos, no secolorean bien, pero la refringencia característica permite diferenciarlos (Figura Nº 13).Figura Nº 13. Isospora belli coloreado por Ziehl - Neelsen modificado (400X)MPR-CNSP-01527 Instituto Nacional de Salud