Reagente Von Willebrand - Medcorp

Von Willebrand Reagentfor the determination of ristocetin cofactor activityIntended Use and ApplicationIn vitro diagnostic reagent for determination of the ristocetin cofactoractivity of von Willebrand factor in human plasma using the plateletagglutination method.Summary and ExplanationDiagnosis of von Willebrand’s disease and of diseases with changes inthe ristocetin cofactor such as lesions and inflammations of the vascularendothelium. Pre-operative screening of haemorrhagic diatheses: inpatients with values below 40% of the norm bleeding complications areto be expected during dental extractions and surgical interventions.Principle of the MethodStabilized platelets are agglutinated in the presence of von Willebrandfactor and the antibiotic ristocetin A.ReagentsMaterials providedVon Willebrand ReagentPack of 5 x 2 mL + 1 glass plate, Code No. OUBDCompositionThe von Willebrand Reagent contains stabilized platelets, ristocetin andEDTA (final concentration 1 g/L) in lyophilized form.Preservative: sodium azide (max. 0.5 g/L).Warnings and Precautions1. For in vitro diagnostic use only.2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodiumazide can form explosive azides when contacting heavy metals suchas copper or lead!3. Each individual blood donation for use in manufacture of platelets istested for HBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 and anti-HIV2 by FDA-requiredtesting. Only donations with negative findings are used formanufacture.Nevertheless, since absence of infectious agents cannot be proven,all materials obtained from human blood should always be handledwith due care, observing the precautions recommended forbiohazardous material 1 .Preparation of the ReagentAgglutination method:Resuspend the reagent in the labelled quantity of distilled water at +15to +25 °C by shaking (e.g. on an automatic shaker).The reagent isimmediately ready for use.Mix carefully once more before using.Storage and StabilityStore the reagent unopened at +2 to +8 °C and use by the expiry dategiven on the label.Stability after reconstitution:at +12 to +28 °C 5 daysat +15 to +25 °C 8 hoursMaterials required but not providedStandard Human Plasma, Code No. ORKLControl Plasma N, Code No. ORKEControl Plasma P, Code No. OUPZSpecimensTo separate the plasma mix 1 part sodium citrate solution 0.11 mol/Lwith 9 parts venous blood, taking care to avoid the formation of foam.Centrifuge immediately at no less than 1,500 x g for at least 10 min,remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until requiredin the assay, or store deep-frozen.Stability of the specimen:6 hours at +15 to +25 °C3 months at -20 °CMethodAgglutination methodDilute the plasma specimen with isotonic saline as shown in the followingscheme:500 µL 500 µL 500 µL 250 µLSpecimen ordilution– 950 µL 500 µL 500 µL 500 µL 250 µLisoton. saline 250 µL 950 µL 500 µL 500 µL 250 µL 250 µLdilution step blank 1:20 1:40 1:80 1:120 1:160titre – 20 40 80 120 160Onto each of the 6 fields of the enclosed glass plate pipette in succession50 µL plasma dilution or blank and50 µL reagent (shake vigorously before use)and mix. Then agitate slowly for 1 minute (shaker device or by manualagitation) and then leave to stand for 1 min. If the plates are shakenmanually ensure that the test preparations are well mixed!Assess the agglutination against a dark background with reference tothe blank.Evaluation:The titre of the specimen is given by the dilution in which there is distinctagglutination compared to the blank. The ristocetin cofactor content in% of the norm is obtained by multiplying the titre of the specimen withthe limit of detection which is stated on the vial label. If the contentneeds to be determined within narrower limits (e.g. in the decision rangeof 50 %) the intervals between the dilutions have to be reduced to acorresponding extent.Internal Quality controlNormal range: Control Plasma NPathological range: Control Plasma PFor each reagent filling, two controls (one in the normal range and onein the pathological range) should be measured. The controls should betreated like the samples. The results obtained must lie within theconfidence interval indicated for the controls in the lot-specific table ofreference values. If the measured control value lies outside the allowableconfidence interval, the reagent should be checked.Reference Interval70 -150% of the norm 2Each laboratory should determine its own reference range.Bibliography1. U.S. Department of Health and Human Services CDC, Biosafety inMicrobiological and Biomedical Laboratories, HHS Publication (CDC)93-8395; 1999; Section II; 8-162. Thomas L., Clinical and Laboratory Diagnostics, 5 th edition/TH Books,Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, 628-630Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comUSA Distributor:Dade Behring Inc.Newark, DE 19714 U.S.A.OUBD G23 C0540 (1072) S 1Edition September 2003

Von Willebrand-Reagenzzur Bestimmung der Ristocetin-Kofaktor-AktivitätAnwendungsbereichIn-vitro-Diagnostikum zur Bestimmung der Ristocetin-Kofaktor-Aktivitätdes von-Willebrand-Faktors in Humanplasma über die Plättchen-Agglutination.Diagnostische BedeutungDiagnose des von-Willebrand-Syndroms und von Erkrankungen mit Veränderungendes Ristocetin-Kofaktors wie Gefäßendothel-Läsionen undEntzündungen. Präoperatives Screening von Blutungsneigungen: beiWerten unter 40% der Norm ist bei Zahnextraktionen und operativenEingriffen mit Blutungskomplikationen zu rechnen.Prinzip der MethodeStabilisierte Plättchen werden in Anwesenheit des von-Willebrand-Faktorsund des Antibiotikums Ristocetin A agglutiniert.ReagenzienInhalt der HandelspackungVon Willebrand-ReagenzPackung mit 5 x für 2 ml + 1 Glasplatte, Bestell-Nr. OUBDZusammensetzungDas von Willebrand-Reagenz enthält stabilisierte Human-Plättchen,Ristocetin und EDTA (Endkonzentration 1 g/l) in lyophilisierter Form.Konservierungsmittel: Natriumazid (max. 0,5 g/l).Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen1. Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung.2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen in-vitro-Diagnostika ist zu beachten:Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden!Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei,explosive Azide bilden!3. Jede individuelle Blutspende, die zur Herstellung der Plättchen vorgesehenwar, wurde auf HBsAg, auf Anti-HCV, auf Anti-HIV1 und aufAnti-HIV2 untersucht. Für die Herstellung wurden nur Spenden mitnegativem Befund verwendet.Unabhängig davon sollten alle aus menschlichem Blut gewonnenenMaterialien wegen nie auszuschließender Gefährdung durch Krankheitserregermit angemessener Sorgfalt unter Einhaltung der beiBiogefährdung empfohlenen Sicherheitsmaßnahmen gehandhabt werden1 .Vorbereitung der ReagenzienAgglutinationsmethode:Das Reagenz wird mit der auf dem Etikett angegebenen Menge dest.Wasser bei +15 bis +25 °C durch Schütteln (z.B. mit einem automatischenSchüttler) resuspendiert und ist sofort gebrauchsfertig.Vor Gebrauch noch einmal vorsichtig mischen.Haltbarkeit und LagerungsbedingungenDas Reagenz ist ungeöffnet bei +2 bis +8 °C zu lagern und bis zu demauf dem Etikett angegebenen Datum verwendbar.Stabilität nach Rekonstitution:bei +12 bis +28 °C 5 Tagebei +15 bis +25 °C 8 StundenStabilität der Probe:6 Stunden bei +15 bis +25 °C3 Monate bei -20 °CMethodikAgglutinationsmethodeDie Plasmaprobe wird mit isoton. Kochsalz-Lösung entsprechend demnachfolgenden Schema verdünnt:500 µl 500 µl 500 µl 250 µlProbe bzw.Verdünnung– 950 µl 500 µl 500 µl 500 µl 250 µlisoton. Kochsalz-Lösung250 µl 950 µl 500 µl 500 µl 250 µl 250 µlVerdünnungsstufeLeerwert 1:20 1:40 1:80 1:120 1:160Titer – 20 40 80 120 160Auf die 6 Felder der beigefügten Glasplatte nacheinander je50 µl Plasmaverdünnung bzw. Leerwert und50 µl Reagenz (vorher kräftig schütteln)pipettieren und mischen. Danach 1 min langsam schütteln (Schütteltischoder durch Handbewegung) und anschließend 1 min stehenlassen.Bei manuellem Schütteln auf eine gute Durchmischung der Testansätzeachten!Agglutination vor einem dunklen Hintergrund gegen den Leerwert ablesen.Auswertung:Der Titer der Probe ist die Verdünnungsstufe, in der eine im Vergleichzum Leerwert deutliche Agglutination zu beobachten ist. Den Gehalt anRistocetin-Kofaktor in % der Norm erhält man durch Multiplikation desTiters der Probe mit der Nachweisgrenze, die auf dem Flaschenetikettangegeben ist. Falls der Gehalt in engeren Grenzen bestimmt werdensoll (z.B. im Entscheidungsbereich von 50%), sind die Verdünnungsschritteentsprechend kleiner zu wählen.Interne QualitätskontrolleNormalbereich:Kontroll-Plasma Npathologischer Bereich: Kontroll-Plasma PFür jede Abfüllung des Reagenzes sollten zwei Kontrollen (eine imNormalbereich und eine im pathologischen Bereich) gemessen werden.Das Kontrollmaterial sollte wie die Probe behandelt werden. Der erhalteneAnalysenwert muß innerhalb des Vertrauensbereiches liegen, derfür die Kontrolle in der chargenspezifischen Sollwertetabelle angegebenist. Liegt der gemessene Kontrollwert außerhalb des zulässigenVertrauensbereiches, sollte das Reagenz überprüft werden.Erwartete Werte70 -150% der Norm 2Jedes Labor sollte seinen eigenen Referenzbereich festlegen.Literatursiehe Seite 1Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comZusätzlich benötigte MaterialienStandard-Human-Plasma, Bestell-Nr. ORKLKontroll-Plasma N, Bestell-Nr. ORKEKontroll-Plasma P, Bestell-Nr. OUPZUntersuchungsmaterialZur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung 0,11 mol/l mit 9 TeilenVenenblut sorgfältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofortmindestens 10 min bei mindestens 1.500 x g zentrifugieren, überstehendesPlasma abheben und bis zum Test bei +15 bis +25 °C lagernoder tiefgefroren aufbewahren.OUBD G23 C0540 (1072) S 2Ausgabe September 2003

Réactif von Willebrandpour la détermination de l’activité du cofacteur de la ristocétineDomaine d’utilisationRéactif in vitro pour le dosage de l’activité cofacteur de la ristocétine dufacteur von Willebrand dans le plasma humain, par agglutination desplaquettes.Intérêt diagnostiqueLe Réactif permet le diagnostic de la maladie de von Willebrand et desmaladies avec modification de l’activité cofacteur de la ristocétine, commeles lésions de l’endothélium vasculaire ou les inflammations. Il permetégalement un dépistage pré-opératoire des tendances au saignement :si la valeur trouvée est inférieure à 40% de la normale, il faut s’attendreà des complications hémorragiques pour une extraction dentaire ou uneintervention chirurgicale.Principe de la méthodeEn présence du facteur von Willebrand et de l’antibiotique ristocétine A,il y a agglutination des plaquettes stabilisées.RéactifsConditionnementRéactif von WillebrandCoffret de 5 x pour 2 ml + 1 plaque en verre, code OUBDCompositionLe Réactif von Willebrand contient des plaquettes humaines stabilisées,de la ristocétine et de l’EDTA (concentration finale 1 g/l), sous formelyophilisée.Agent de conservation : azide de sodium (max. 0,5 g/l)Mises en garde et précautions d’emploi1. Réservé à un usage de diagnostic in vitro.2. Les réactifs in vitro contenant de l’azide de sodium doivent êtremanipulés avec précaution : ne pas avaler et éviter tout contactavec la peau et les muqueuses ! L’azide de sodium peut devenirexplosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb.3. Tout don de sang individuel prévu pour la préparation desplaquettes a été testé vis-à-vis de l’anticorps AgHBs,de l’anticorpsanti-VHC, de l’anticorps anti-VIH1 et de l’anticorps anti-VIH2.Seuls les dons trouvés négatifs ont été utilisés.Néanmoins, toutes les préparations obtenues à partir de sang humaindoivent être manipulées avec les précautions nécessaires en cas derisque biologique, dans la mesure où l’on ne peut exclure totalementun risque d’infection 1 .Préparation des réactifsMéthode d’agglutination :Reconstituer le réactif avec le volume d’eau distillée indiqué sur l’étiquetteà +15/+25 °C et l’agiter (à l’aide d’un agitateur automatique par ex.)pour l’homogénéiser. Il est immédiatement prêt à l’emploi.L’agiter de nouveau avec précaution avant emploi.Stabilité des échantillons :6 heures à +15/+25 °C3 mois à -20 °CMéthodeMéthode d’agglutinationDiluer les échantillons plasmatiques en solution saline isotonique selonle schéma suivant:500 µl 500 µl 500 µl 250 µléchantillon- 950 µl 500 µl 500 µl 500 µl 250 µlsolution salineisotonique 250 µl 950 µl 500 µl 500 µl 250 µl 250 µldilution blanc 1:20 1:40 1:80 1:120 1:160titre - 20 40 80 120 160Sur les 6 champs de la plaque en verre jointe au coffret, distribuersuccessivement :50 µl de dilution plasmatique ou de blanc, puis50 µl de Réactif (préalablement bien agité),et mélanger. Agiter ensuite doucement pendant 1 min (à l’aide d’unagitateur ou manuellement), puis laisser reposer pendant 1 min. En casd’agitation manuelle, veiller à une bonne homogénéisation desmélanges !Lire l’agglutination par rapport au blanc, sur un fond sombre.Exploitation des résultats :Le titre correspond à la dilution où l’on observe une agglutination nettepar rapport au blanc. Pour obtenir l’activité cofacteur de la ristocétine en% de la normale, multiplier le titre obtenu par le seuil de sensibilité indiquésur l’étiquette du flacon. Si l’activité doit être déterminée dans un domaineplus étroit (par ex. dans un domaine de décision de 50%), choisir desdilutions plus petites.Contrôle de qualité interneDomaine normal :Plasma de contrôle NDomaine thérapeutique : Plasma de contrôle PIntroduire deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans ledomaine thérapeutique) à chaque changement de flacon de Réactif. Lestraiter comme des échantillons de patients. Les valeurs doivent êtretrouvées à l’intérieur de leur domaine de confiance respectif, indiquédans le tableau des valeurs théoriques de chaque contrôle. Si les valeurssont trouvées en dehors des domaines de confiance, vérifier le Réactif.Valeurs attendues70 -150% de la normale 2Chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de référence.LittératureVoir page 1Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comStabilités et conditions de conservationLe réactif conservé entre +2 et +8 °C dans son flacon d’origine nonouvert peut être utilisé jusqu’à la date de péremption indiquée surl’étiquette.Stabilité après reconstitution :à +12/+28 °C 5 joursà +15/+25 °C 8 heuresAutres réactifs et matériel nécessairesPlasma standard humain, code ORKLPlasma de contrôle N, code ORKEPlasma de contrôle P, code OUPZEchantillons à testerPour obtenir les plasmas de patients, mélanger soigneusement 1 volumede solution de citrate de sodium à 0,11 mol/l avec 9 volumes de sangveineux en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendantau moins 10 min à au moins 1 500 x g, prélever le plasma surnageant etle conserver à +15/+25 °C ou le congeler jusqu’au test.OUBD G23 C0540 (1072) S 3Edition Septembre 2003

Reagente von Willebrandper la determinazione dell’attività del cofattore RistocetinaSettori di impiego e funzioneReagenti per uso diagnostico in vitro per la determinazione dell’attivitàdel cofattore Ristocetina del fattore von Willebrand nel plasma umanomediante afflutinazione delle piastrine.Significato diagnosticoDiagnosi della sindrome di von Willebrand e delle malattie che comportanomodificazioni del cofattore Ristocetina, come lesioni dell’endoteliovascolare e infiammazioni. Screening preoperatorio della diatesiemorragica: con valori inferiori al 40% della norma sono possibilicomplicazioni nell’ emostasi dopo estrazioni dentarie ed inerventi chirurgici.Principio del metodoLe piastrine stabilizzate agglutinano in presenza del fattore von Willebrande dell’antibiotico Ristocetina A.ReagentiContenuto della confezioneReagente von WillebrandConfezione da 5 x 2 ml + 1 vetrino, codice OUBDComposizioneIl reagente von Willebrand contiene piastrine umane stabilizzate,ristocetina e EDTA (concentrazione finale 1 g/L). Il prodotto è liofilizzato.Conservante: sodio azide (max. 0,5 g/L).Avvertenze e precauzioni1. Solo per uso diagnostico in vitro.2. Quando si impiegano diagnostici in vitro contenenti sodio azideosservare le seguenti precauzioni: non ingerire ed evitare contatticon la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli pesanti,come rame e/o piombo, può formare azidi esplosive!3. Ogni donazione di sangue utilizzata per la produzione delle piastrineè stata esaminata per la ricerca dell’antigene di superficie del virusdell’epatite B e degli anticorpi anti-HCV, anti-HIV1 e anti-HIV2 . Soloi campioni risultati negativi sono stati impiegati per la produzione.Tuttavia, tutti i derivati da sangue umano devono essere trattati conle necessarie precauzioni rispettando le norme di sicurezza sul rischiobiologico, in quanto non è possibile escludere con assoluta certezzail pericolo di agenti patogeni 1 .Preparazione dei reagentiMetodo di agglutinazione:Ricostituire il reagente di von Willebrand con la quantità di acqua distillataindicata in etichetta e agitando (ad es. con un agitatore automatico) allatemperatura di +15/+25 °C. Il reagente è subito pronto per l’uso.Conservazione e validitàIl reagente sigillato, conservato a +2/+8 °C , è utilizzabile fino alla datadi scadenza indicata in etichetta.Stabilità dopo ricostituzione:a +2/+8 °C2 giornia +15/+25 °C 8 oreStabilità del campione:6 ore a +15/+25 °C3 mesi a -20/-30 °CMetodicaMetodo di agglutinazioneDiluire il campione di plasma con soluzione isotonica salina secondo ilseguente schema:Campione ediluizione500 µL 500 µL 500 µL 250 µL– 950 µL 500 µL 500 µL 500 µL 250 µLSol. isotonicasalina 250 µL 950 µL 500 µL 500 µL 250 µL 250 µLDiluizione Bianco 1:20 1:40 1:80 1:120 1:160Titolo – 20 40 80 120 160Su ognuno dei 6 settori del vetrino accluso, pipettare in successione50 µL di plasma diluito o bianco e50 µL di reagente (agitare energicamente prima dell’uso)e mescolare. Quindi agitare lentamente per 1 minuto (con agitatore omanualmente), quindi lasciare riposare 1 minuto. Nel caso in cui il vetrinovenga agitato manualmente, assicurarsi che il preparato sia benmiscelato!Valutare l’agglutinazione contro uno sfondo scuro con riferimento albianco.Valutazione:Il titolo dei campioni in esame è dato dalla diluizione nella quale è evidenteun’agglutinazione, rispetto al bianco. Il contenuto di cofattoreristocetina in % della norma viene ottenuto moltiplicando il titolo deicampioni in esame per il limite di identificazione indicato sull’etichettadel flacone. Se il contenuto deve essere determinato entro limiti piùristretti (ad es. intervallo decisionale del 50%), gli intervalli tra le duediluizioni devono essere ridotti al limite corrispondente.Controllo di qualità internoIntervallo normale: Plasma di controllo NIntervallo patologico: Plasma di controllo PPer ogni flacone di reagente devono essere misurati due controlli (unonell’intervallo normale ed uno in quello patologico). I controlli devonoessere trattati come i campioni. I risultati ottenuti devono ricadere entrol’intervallo di accettabilità indicato nella tabella dei valori di riferimentospecifici del lotto, del relativo controllo. Se il valore misurato si trova aldi fuori dell’intervallo di accettabilità, il reagente deve essere esaminato.Intervallo di riferimento70 -150% della norma 2 .Ogni laboratorio dovrebbe determinare il proprio ambito di riferimento.BibliografiaVedi testo IngleseDade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comAltro materiale necessario ma non fornitoPlasma umano standard, codice ORKLPlasma di controllo N, codice ORKEPlasma di controllo P, codice OUPZCampioni in esamePer separare il plasma, miscelare 1 parte di soluzione di citrato di sodio0,11 mol/L e 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma.Centrifugare subito a non meno di 1.500 x g per almeno 10 minuti;rimuovere il plasma sovranatante e conservarlo a +15/+25 °C fino almomento del test, oppure congelarlo immediatamente.OUBD G23 C0540 (1072) S 4Edizione Settembre 2003

Reactivo von Willebrandpara la determinación de la actividad del cofactor de la ristocetinaCampos de aplicación y objetivosReactivo de diagnóstico in-vitro para determinar la actividad del cofactorristocetina del factor de von Willebrand, en plasma humano mediante laaglutinación de plaquetas .Significado diagnósticoEl diagnóstico del síndrome de von Willebrand y de enfermedades concambios del cofactor ristocetina como en lesiones del endotelio vasculare inflamaciones. Screening pre operatorios con tendencias a lashemorragias: para valores bajo el 40% de la norma se debe contar concomplicaciones en extracciones dentales y en intervenciones operativas.Principio del métodoLas plaquetas estabilizadas se aglutinan en presencia del factor von-Willebrand y del antibiótico ristocetina A.ReactivosContenido del envase comercialReactivo de von WillebrandEnvase con 5 x para 2 ml + 1 placa de vidrio, N° de pedido OUBD.ComposiciónEl reactivo von-Willebrand contiene plaquetas humanas estabilizadas,ristocetina y EDTA (concentración final 1 g/l) en forma liofilizada.Agente de conservación: azida sódica (máx. 0,5 g/l).Advertencias y medidas de seguridad1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.2. En el manejo de diagnósticos in vitro que contengan azida sódica sedebe observar: No ingerir y evitar el contacto con la piel y mucosas!La azida sódica puede formar azidas explosivas con metales pesadoscomo cobre y plomo!3. Cada donación individual de sangre destinada a la preparación delas plaquetas ha sido investigada para detectar la presencia delHBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 y anti-HIV2. En la elaboración sólo seutilizan donaciones con resultados negativos.Independientemente de esto, todos los materiales obtenidos a partirde sangre humana deben ser manipulados con las precaucionesnecesarias, siguiendo las medidas de seguridad recomendadas encaso de riesgo biológico, puesto que nunca se puede excluircompletamente la existencia de agentes patógenos 1 .Preparación de reactivosMétodo de aglutinación:Resuspender el reactivo con la cantidad de agua destilada indicada enla etiqueta, mediante agitación (por ej., con un agitador automático) y auna temperatura entre +15 y +25 °C. El reactivo se puede utilizar deinmediato.Antes de usar mezclar una vez más cuidadosamente.Estabilidad y almacenajeEl reactivo, en su envase original aún cerrado y conservado entre +2 y+8 °C, es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.Estabilidad después de la reconstitución:entre +12 y +28 °C 5 díasentre +15 y +25 °C 8 horasMétodoMétodo de aglutinaciónLas muestras de plasma se van a diluir con solución salina isotónica deacuerdo al siguiente esquema:500 µl 500 µl 500 µl 250 µlMuestra odilución– 950 µl 500 µl 500 µl 500 µl 250 µlSoluciónisotónica decloruro de sodio 250 µl 950 µl 500 µl 500 µl 250 µl 250 µlGrados dedilución testigo 1:20 1:40 1:80 1:120 1:160Titulo – 20 40 80 120 160En los 6 campos de la placa de vidrio incluida pipetear seguidamenteen cada uno50 µl de la dilución de plasma o del blanco y50 µl de reactivo (antes agitar fuertemente)y mezclar. Después agitar lentamente (mesa agitadora o usando la mano)durante 1 min. y finalmente dejar 1 min. en reposo. Al agitar manualmenteobservar que haya una buena mezcla del preparado!Leer la aglutinación usando un trasfondo oscuro comparando con elblanco.Valoración:El título de la muestra es la etapa de dilución en la cual al comparar conel blanco se ve una aglutinación definida. El contenido de factorristocetina en % del valor normal se obtiene por multiplicación del títulode la muestra con el limite de detección, que viene dado en la etiquetadel frasco. En caso de que el contenido se tenga que determinar muycerca del límite (por ej., rango de decisión del 50%) se deben escogerlas etapas de dilución más pequeñas.Control de calidad internoRango normal: Plasma control NRango patológico: Plasma control PCon cada envase del reactivo se deben medir también dos controles(por ej., uno en el rango normal y uno en el rango patológico). El materialde control se debe tratar como las muestras. El valor obtenido en elanálisis debe estar dentro del rango de confianza, que viene dado parael control en la Tabla de valores teóricos dependiente del lotes. Si elvalor medido se encuentra por fuera del rango de confianza permitido,se debe comprobar el reactivo.Valores esperado70 -150% de la norma 2Cada laboratorio debe determinar su propio rango de referencia.BibliografíaVer página 1.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comMateriales adicionales necesariosPlasma humano estándar, N° de pedido ORKLPlasma de control N, N° de pedido ORKEPlasma P de control, N° de pedido OUPZMaterial a investigarPara obtener el plasma mezclar cuidadosamente 1 parte de solución decitrato de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando laformación de espuma. Centrifugar inmediatamente a aprox. 1.500 x gdurante 10 min. Separar el plasma sobrenadante y mantenerlo hastacomenzar el ensayo a una temperatura entre +15 y +25 °C o congelado.Estabilidad de las muestras:6 horas entre +15 y +25 °C3 meses a -20 °COUBD G23 C0540 (1072) S 5Edición Septiembre 2003

Reagente de Von WillebrandPara determinação da actividade do cofactor da RistocetinaCampo de aplicaçãoDiagnóstico in vitro para determinação da actividade do cofactor daRistocetina do factor de von Willebrand no plasma humano, através daaglutinação de plaquetas.Significado diagnósticoDiagnóstico da síndrome de von Willebrand e das doenças comalterações do cofactor da Ristocetina, tais como as lesões e inflamaçõesdos vasos endoteliais. Screening pré-operatório das tendênciashemorrágicas: com valores inferiores a 40% da norma há que contarcom complicações hemorrágicas, em caso de extracção de dentes ouintervenções operatórias.Princípio metodológicoEm presença do factor de von Willebrand e do antibiótico Ristocetina A,as plaquetas estabilizadas aglutinam-se.ReagentesConteúdo da embalagem comercialReagente von WillebrandEmbalagem com 5 x para 2 ml + 1 placa de vidro, ref. OUBDComposiçãoO reagente de von Willebrand contém plaquetas humanas estabilizadas,Ristocetina e EDTA (concentração final 1 g/l) em forma liofilizada.Conservante: Azida de sódio (máx. 0,5 g/l).Advertências e medidas de precaução1. Só para uso diagnóstico in vitro.2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnósticoin vitro com teor de azida de sódio: Evitar ingerir e o contactocom a pele ou mucosas! Com metais pesados, como o cobre ouo chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas!3. Cada dádiva individual de sangue destinada à preparação dasplaquetas foi testada com vista à detecção de HBsAg, anti-HCV,anti-HIV1 e anti-HIV2. Na preparação só foram utilizadas dádivascom resultado negativo.Independentemente disso, todas as amostras e produtos obtidosa partir de sangue humano devem ser manusead os com asprecauções devidas, seguindo as medidas de segurançarecomendadas em caso de risco biológico, uma vez que o risco decontaminação por agentes patogénicos nunca pode serinteiramente excluído 1 .Preparação dos reagentesMétodo de aglutinação:O reagente é resuspenso com a quantidade de água destilada indicadano rótulo, à temperatura entre +15 e +25 °C, agitando-o (p. ex., com umagitador automático) e fica imediatamente pronto para uso.Antes de usar, agitar mais uma vez cuidadosamente.Estabilidade e condições de conservaçãoO reagente deverá ser conservado não aberto entre +2 e +8 °C e podeser utilizado até à data indicada no rótulo.Estabilidade após reconstituição:À temperatura entre +2 e +8 °C 5 diasÀ temperatura entre +15 e +25 °C 8 horasOutros materiais necessáriosPlasma humano standard, ref. ORKLPlasma de controlo N, ref. ORKEPlasma de controlo P, ref. OUPZMaterial de análisePara a obtenção do plasma, misturar cuidadosamente 1 parte da soluçãode citrato de sódio 0,11 mol/l com 9 partes de sangue venoso, evitando aformação de espuma. Centrifugar imediatamente durante 10 minutos,pelo menos, a 1.500 x g, no mínimo, remover o plasma sobrenadante econservar à temperatura entre +15 e +25 ºC ou congelado até àexecução do teste.Estabilidade da amostra:6 horas à temperatura entre +15 e +25 ºC3 meses à temperatura de -20 ºCMetodologiaMétodo de aglutinaçãoA amostra de plasma é diluída com solução salina isotónica de acordocom o seguinte esquema:500 µl 500 µl 500 µl 250 µlAmostra ou– 950 µl 500 µl 500 µl 500 µl 250 µlSolução salinaisotónica 250 µl 950 µl 500 µl 500 µl 250 µl 250 µlGrau de Espaço emdiluição branco1:20 1:40 1:80 1:120 1:160Título – 20 40 80 120 160Pipetar, sucessivamente, sobre cada um dos 6 campos da placa devidro anexa50 ml de diluição de plasma ou espaço em branco50 ml de reagente (agitar, antes, energicamente)e misturar. Depois agitar lentamente durante 1 minuto (mesa vibratóriaou através de movimento manual) e, deixar repousar, seguidamente,durante 1 minuto. Em caso de agitação manual, prestar atenção a queas preparações de teste fiquem bem misturadas!Proceder à leitura da aglutinação em frente de um fundo escuro, contrao espaço vazio.Interpretação:O título da amostra é constituído pelo grau de diluição em que se podeobservar uma aglutinação nítida, por comparação com o espaço vazio.O teor do factor de Ristocetina expresso em % da norma, obtém-semultiplicando o título da amostra pelo limite de detecção indicado norótulo do frasco. Se o teor tiver de ser definido com limites mais restritos(p. ex., no intervalo de decisão de 50%), deverão ser seleccionados,respectivamente, passos de diluição menores.Controlo de qualidade internoIntervalo normal: plasma de controlo NIntervalo patológico: plasma de controlo PPara cada carga de reagente deverão ser medidos dois controlos (umno intervalo normal e o outro no intervalo patológico). O material decontrolo deverá ser tratado como a amostra.O valor de análise obtido deverá situar-se dentro do intervalo deconfiança indicado para o controlo na tabela de valores nominaisespecíficos do lote. Se o valor de controlo medido se situar fora dointervalo de confiança permitido, o reagente deverá ser controlado.Valores expectáveis70 -150% da norma 2Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de referência próprio.BibliografiaVide a página 1.IVDLOTEXPCCYY-MM-DDREFDade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 Marburgwww.dadebehring.comSymbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos SímbolosManufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado porIn Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif MédicalDiagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitariopara Diagnóstico In VitroLot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número deLoteExpiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha devencimiento / termo da validadeStorage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperaturadi conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagemCE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CECatalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número deCatálogoConsult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Noticed'Utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte asInstruções de UtilizaçãoOUBD G23 C0540 (1072) S 6