OSAL G11 E0540 Satzdatei - Medcorp

N Antiserum to Human Albumin, Prealbumin and RetinolbindingProteinIntended UseIn vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of albumin, prealbumin (transthyretin)and retinol-binding protein (RbP) in human serum as well as of albumin in human urine and cerebrospinalfluid (CSF) using the BN* Systems.Summary and ExplanationAlbumin is the chief plasma protein in terms of quantity, normally accounting for more than half of the totalserum protein. Albumin is formed exclusively in the liver and serves as a transport and binding protein forcalcium, fatty acids, bilirubin, hormones, vitamins, trace elements and medicaments. It contributes decisivelytowards maintaining the colloidal osmotic pressure. Diminished serum albumin concentrationsoccur in severe impairment of hepatic synthesis capacity (e.g. in hepatic cirrhosis, severe hepatitis orchronic malnutrition) as well as in marked protein loss (nephrotic syndrome, gastroenteropathy, severeburns) (1). It has been demonstrated that the serum albumin concentration may be indicative as a prognosticmarker as regards mortality in elderly hospitalized patients (2). Defects of the glomerular filtrationbarrier are associated with increased urinary albumin levels. Increased urinary secretion of albumin is anindicator of renal and vascular complications, e.g. in diabetes mellitus (3). The CSF albumin concentrationis a measure of the integrity of the blood/CSF barrier. The determination of the CSF/serum albuminquotient permits diagnosis of barrier dysfunction and assessment of the local synthesis of other proteinswithin the central nervous system (4).Prealbumin and RbP are likewise synthesized in the liver. Prealbumin acts as a binding protein for thyroxin andfor RbP. RbP is the transport protein for retinol (vitamin A) (5). The serum concentrations of both proteinslikewise reflects the synthesis capacity of the liver and is markedly diminished in malnutrition and other conditions.Due to their short half lives of approx. two days and twelve hours respectively prealbumin and RbP maybe suitable for monitoring the nutritional status and efficacy of parenteral nutrition (6,7).Principle of the MethodIn an immunochemical reaction, the proteins in the sample of human serum, urine or CSF, form immunecomplexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through the sample.The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant protein in the sample.The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration.ReagentsMaterials providedN Antiserum to Human Albumin, Code No. OSAL1 vial of 5 mL or 2 mL orN Antiserum to Human Prealbumin, Code No. OUIF orN Antiserum to Human RbP, Code No. OUVO1 vial each of 2 mLCompositionN Antisera are liquid animal sera and are produced by immunization of rabbits with highly purified humanalbumin, prealbumin or RbP. Labile components are removed from the antisera by a special procedure.Microbial contamination is essentially excluded by filtration and addition of sodium azide as a preservative(< 1 g/L). After solid phase immunoadsorption, the purified, specific antisera are specially tested andadjusted such that optimal suitability for use on the BN* Systems is guaranteed. The antibody titers (T) aredetermined by radial immunodiffusion and are printed on the vial labels. The titers indicate the quantity ofantigen in mg which will be precipitated in an agarose gel by 1 ml of the corresponding antiserum.Warnings and Precautions1. For in vitro diagnostic use.2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form explosiveazides when contacting heavy metals such as copper or lead.Preparation of ReagentsThe N Antisera are ready-for-use as supplied and require no additional preparation.Storage and StabilityShelf life at +2 to +8 °C:see expiration date given on the label;Stability once opened:four weeks if stored at +2 to +8 °C securely capped immediately after each use and contamination(e.g., by microorganisms) is precluded;During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are not caused by microbialcontamination and which do not affect their activity. In such cases, the antiserum should be filtered priorto use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for this purpose.Do not freeze.On-board stability:five days at 8 hours each (Albumin and RbP) or a comparable period of time (maximum 40 hours);three days at 8 hours each (Prealbumin) or a comparable period of time (maximum 24 hours);BN* II System: on-board stability may be extended by the use of BN* II Evaporation Stoppers (CodeNo. OVLE) as given in the Instruction Manual;BN ProSpec ® System: on-board stability as given in the Instruction Manual.Materials required but not providedBN* SystemN Protein Standard SL (human), Code No. OQIMN/T Protein Controls SL/L, M and H (human), Code Nos. OQIN, OQIO and OQIPN/T Protein Control LC (human), Code No. OQLWN Reaction Buffer, Code No. OUMSN Diluent, Code No. OUMTN Supplementary Reagent/Precipitation, Code No. OUMUBN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLEOther materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual.SpecimensSuitable samples are human serum, as fresh as possible (stored for no more than 8 days at +2 to +8 °C)or stored deep-frozen and fresh human urine or CSF. Serum samples can be stored at below -20 °C for upto 1 year if they are frozen within 24 hours after collection and if repeated freeze-thaw cycles are avoided.The serum samples must be completely coagulated and, after centrifugation, must not contain any particlesor traces of fibrin. Lipemic samples or frozen specimens which became turbid after thawing, must beclarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15 000 x g) prior to testing. Random and timedurine collections are suitable specimens testing albumin in urine. Urine samples must not be frozen. Eachurine and CSF sample must be centrifuged prior to testing.ProcedureNotes1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument.2. The reagents must not be used beyond the expiry date.3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 °C) before use on theBN*A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing on the BN* II or BNProSpec ® System.Assay protocols for the BN* SystemsThe assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All steps areperformed automatically by the system.Establishment of the Reference CurveReference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of the N Protein StandardSL are automatically prepared for this purpose using N Diluent.The reference curves can be used for as long as the accuracy controls, e.g. N/T Protein Controls SL/L,M and H or N/T Protein Control LC, are reproduced within their respective confidence intervals. If adifferent lot of antiserum is used, a new reference curve must be recorded.OSAL G11 E0540 (256) W 1Edition May 2001Assay of SpecimensSerum samples are automatically diluted 1:5 (prealbumin, RbP) or 1:400 (albumin) with N Diluent andmeasured. Albumin in urine or CSF samples is measured from a 1:5 dilution in separate assay protocols. Ifthe readings obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher (prealbumin,RbP, albumin) or lower (albumin in the serum, urine and CSF assay protocol) dilution of the sample.Refer to BN* System’s Instruction Manual for information on repeat measurements using other dilutions.Internal Quality ControlAssay N/T Protein Controls SL/L, M and H after each establishment of a reference curve, the firstopening of an antiserum vial as well as with each run of serum samples. For the determination ofAlbumin in urine or CSF samples the N/T Protein Control LC should be used. The controls are assayedand evaluated as for patient samples. The assigned values and confidence intervals are listed in theTable of Assigned Values of the respective control.ResultsThe results are evaluated automatically by means of a logit-log function.Limitations of the ProcedureTurbidity and particles in the sample may interfere with the determination. Therefore, samples containingparticles must be centrifuged prior to testing. Bovine serum albumin in the sample (e.g. controlsample) may disturb the determination.For control samples and interlaboratory survey samples different results may be obtained for differentassay methods, due to technical production reasons or ageing of the samples. It may therefore be necessaryto base the assessment of these results on target values for the particular assay method.Reference IntervalsThe following reference intervals apply for serum samples from healthy adults:ProteinAlbumin (8)Prealbumin (8)RbP (9)2.5 th - 97.5 th percentile35.0 - 52.0 g/L0.2 - 0.4 g/L0.03 - 0.06 g/LReference intervals for albumin in the urine and CSF:Albumin in urine (10) up to 30 mg/L; depending on the type of urine sample.Albumin in CSF (11) up to 350 mg/L.Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values may varydepending on the population studied.Specific Performance CharacteristicsSensitivity and Measuring RangeThe sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends thereforeupon the concentrations of the proteins in the N Protein Standard SL. Typical measuring rangesare given in the BN* System’s Instruction Manual.SpecificityThe N Antisera are specific for the corresponding protein.PrecisionThe following coefficients of variation (CV) were obtained testing serum with N Antisera to HumanAlbumin, Prealbumin and RbP on the BN* System:Intra-assayInter-assay(n=30)(n=10)Protein Mean value CV Mean value CV[g/L] [%] [g/L] [%]Albumin 46.5 4.3 44.7 4.4Prealbumin 0.35 1.9 0.36 1.4RbP 0.04 3.1 0.05 2.2The N Antiserum to Human Albumin was evaluated for the assay of urine on the BN* System andyielded an intra-assay CV of 2.21% and a total CV of 2.64% with a mean of 78.73 mg/L. The readings(ten runs with four determinations per run) were evaluated by analysis of variance (12).Method ComparisonSerum samples were assayed with N Antisera to Human Albumin, Prealbumin and RbP on the BN* System(y) and radial immunodiffusion (x) (Partigen**). Correlation of the results yielded the following data:Protein No. of sera Linear regression Coefficient ofcorrelationAlbumin 50 y (BN*) = 0.87 x (RID) + 5.52 g/L 0.94Prealbumin 49 y (BN*) = 0.84 x (RID) + 0.017 g/L 0.99RbP 30 y (BN*) = 0.85 x (RID) – 0.006 g/L 0.95A comparison of urinary samples (n=79) assayed using the N Antiserum to Human Albumin on the BN*System (y) versus another commercial method (x) yielded the following correlation result:y (BN*) = 1.12 x - 0.73 mg/L; correlation coefficient r = 0.99.NoteThe values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results and are notto be regarded as specifications for the N Antiserum to Human Albumin, Prealbumin or RbP.Bibliography1.Whicher J, Spence C. When is serum albumin worth measuring? Ann Clin Biochem 1987; 24: 572-80.2.Herrmann FR, Safran C, Levkoff SE, et al. Serum albumin level on admission as a predictor ofdeath, length of stay, and readmission. Arch Intern Med 1992; 152: 125-30.3.Rowe DJ, Dawnay A, Watts GF. Microalbuminuria in diabetes mellitus: review and recommendationsfor the measurement of albumin in urine. Ann Clin Biochem 1990; 27: 297-312.4. Reiber H, Felgenhauer K. Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation ofthe humoral immune response within the central nervous system. Clin Chim Acta 1987; 163: 319-28.5. Rask L, Anundi H, Bohme J, et al. The retinol-binding protein. Scand J Clin Lab Invest Suppl 1980; 154: 45-61.6.Haider M, Haider SQ. Assessment of protein-calorie malnutrition. Clin Chem 1984; 30: 1286-99.7. Bernstein LH, Leukhardt-Fairfield CJ, Pleban W, et al. Usefulness of data on albumin and prealbuminconcentrations in determining effectiveness of nutritional support. Clin Chem 1989; 35: 271-4.8.Dati F, Schumann G, Thomas L, et al. Consensus of a group of professional societies and diagnosticcompanies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on thestandardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). International Federationof Clinical Chemistry. Community Bureau of Reference of the Commission of the EuropeanCommunities. College of American Pathologists. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996; 34: 517-20.9.Gressner AM, Thomas L. Proteinstoffwechsel. In: Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der KlinischenChemie und Pathobiochemie. Stuttgart; New York: Schattauer, 1995: 225.10.Boege F, ed. Urinary Protein Diagnostics. Behringwerke AG Marburg, 1992.11. Reiber, H. Aktuelle Methoden der Liquoranalytik. Lab med 1988; 12: 101-109.12.National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinicalchemistry devices. Approved Guideline. NCCLS document EP5-A. Wayne, PA: 1999.* BN is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.** Partigen is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries.BN ProSpec is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, in Germany andother countries.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgUSA Distributor: Dade Behring Inc.Newark, DE 19714 U.S.A.

N Antisera gegen Human-Albumin, -Präalbumin und-Retinol-bindendes ProteinAnwendungsbereichIn-vitro-Diagnostica zur quantitativen Bestimmung von Albumin, Präalbumin (Transthyretin) und Retinol-bindendemProtein (RbP) in Humanserum sowie von Albumin in humanem Urin und Liquor mit denBN* Systemen.Diagnostische BedeutungAlbumin ist das mengenmäßig vorherrschende Plasmaprotein, das normalerweise mehr als die Hälftedes Gesamtproteins im Serum ausmacht. Albumin wird ausschließlich in der Leber gebildet und dient alsTransport- und Bindungsprotein für Calcium, Fettsäuren, Bilirubin, Hormone, Vitamine, Spurenelementeund Medikamente. Es trägt maßgeblich zur Aufrechterhaltung des kolloidosmotischen Drucks bei. VerminderteSerumkonzentrationen von Albumin treten bei stark eingeschränkter Syntheseleistung der Leber(z. B. bei Leberzirrhose, schwerer Hepatitis oder chronischer Mangelernährung) sowie bei ausgeprägtenProteinverlusten auf (nephrotisches Syndrom, Gastroenteropathie, schwere Verbrennungen)(1). Die Serumalbuminkonzentration hat einen prognostischen Stellenwert für die Mortalität von älteren,hospitalisierten Patienten (2). Bei Defekten der glomerulären Filtrationsbarriere erscheint Albumin in erhöhterKonzentration im Urin. Die erhöhte Albuminausscheidung im Urin ist ein Indikator für renale undvaskuläre Komplikationen, z. B. bei Diabetes mellitus (3). Die Albuminkonzentration im Liquor ist ein Maßfür die Integrität der Blut/Liquor-Schranke. Die Bestimmung des Albumin-Liquor/Serum-Quotienten erlaubtdie Diagnose einer Schrankenstörung und die Abschätzung der lokalen Synthese anderer Proteineinnerhalb des zentralen Nervensystems (4).Präalbumin und RbP werden ebenfalls in der Leber synthetisiert. Präalbumin fungiert als Bindungsproteinfür Thyroxin und für RbP. RbP ist das Transportprotein für Retinol (Vitamin A) (5). Die Serumkonzentrationbeider Proteine reflektiert ebenfalls die Syntheseleistung der Leber, sie ist u. a. bei Mangelernährungstark vermindert. Aufgrund ihrer kurzen Halbwertzeit von ca. 2 Tagen bzw. 12 Stunden eignensich Präalbumin und RbP zur Überwachung des Ernährungszustandes und der Effektivität von parenteralerErnährung (6,7).Prinzip der MethodeDie im menschlichen Serum, Urin oder Liquor enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischenReaktion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreut wird.Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins in der Probe.Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration.ReagenzienInhalt der HandelspackungN Antiserum gegen Human-Albumin, Bestell-Nr. OSAL1 Flasche mit 5 ml oder 2 ml oderN Antiserum gegen Human-Präalbumin, Bestell-Nr. OUIF oderN Antiserum gegen Human-RbP, Bestell-Nr. OUVOje 1 Flasche mit 2 mlZusammensetzungDie N Antisera sind flüssige, tierische Sera und werden durch Immunisierung von Kaninchen mit hochgereinigtemhumanem Albumin, Präalbumin bzw. RbP hergestellt. Durch ein besonderes Stabilisierungsverfahrenwerden labile Bestandteile aus den Antisera entfernt. Mikrobielle Verunreinigungenwerden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (

N Antisérums anti-Albumine,Préalbumine et Rétinolbinding protéine humainesDomaines d'utilisationRéactifs pour la détermination quantitative de l’albumine, de la préalbumine (transthyrétine) et de larétinol binding protéine (RBP) dans le sérum humain, ainsi que de l’albumine dans l’urine et le LCRhumains, à l’aide des systèmes BN*.Intérêt diagnostiqueL’albumine est la protéine plasmatique la plus importante quantitativement, puisqu’elle représente entemps normal plus de la moitié de la totalité des protéines sériques. L’albumine est exclusivementsynthétisée dans le foie, et sert de protéine de fixation et de transport au calcium, aux acides gras, à labilirubine, aux hormones, aux vitamines, aux éléments de trace et aux médicaments. Elle participe defaçon prépondérante au maintien de la pression colloïdosmotique. Une diminution de la concentrationsérique d’albumine apparaît en cas de forte réduction de la fonction de synthèse du foie (par ex. en casde cirrhose du foie, d’hépatite grave ou de déficit alimentaire chronique), ainsi qu’en cas de fortespertes en protéines (syndrome néphrotique, gastroentéropathie, brûlures graves) (1). La concentrationd’albumine sérique a une valeur pronostique pour la mortalité des patients âgés hospitalisés (2). Encas d’insuffisance fonctionnelle de la barrière de filtration glomérulaire, la concentration d’albumine estaugmentée dans l’urine. Une augmentation de la sécrétion d’albumine dans l’urine indique une complicationrénale ou vasculaire, par ex. un diabète sucré (3). La concentration d’albumine dans le LCRpermet de vérifier l’intégrité de la barrière sang/LCR. Le calcul du rapport d’albumine LCR/sérum permetde diagnostiquer un dysfonctionnement de la fonction de barrière, et d’évaluer la synthèse localed’autres protéines à l’intérieur du système nerveux central (4).La préalbumine et la RBP sont également synthétisées dans le foie. La préalbumine sert de protéine defixation pour la thyroxine et la RBP. La RBP est la protéine de transport de la rétinol (vitamine A) (5). Lesconcentrations sériques de ces deux protéines reflètent également la fonction de synthèse du foie ; ellessont en particulier nettement diminuées en cas de déficit alimentaire. Du fait de leur brève demi-vie,respectivement d’env. 2 jours et 12 heures, la préalbumine et la RBP permettent la surveillance de l’étatalimentaire et de l’efficacité d’une alimentation parentérale (6,7).Principe de la méthodeLes protéines contenues dans le sérum, l’urine ou le LCR humain forment, dans le cadre d'une réactionimmunochimique et en présence d'anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent la lumièreprojetée. L'intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration de la protéine recherchéedans l'échantillon. L'exploitation du résultat se fait par comparaison avec un standard deconcentration connue.RéactifsContenu du coffretN Antisérum anti-Albumine humaine, code OSALcontenant1 flacon de 5 ml ou 2 ml ouN Antisérum anti-Préalbumine humaine, code OUIF ouN Antisérum anti-RBP humaine, code OUVOcontenant chacun 1 flacon de 2 mlCompositionLes N Antisérums sont des sérums liquides, d’origine animale, obtenus par immunisation de lapinsavec de l’albumine, de la préalbumine ou de la RBP humaine hautement purifiée. Un procédé spécialde stabilisation permet d’éliminer les éléments labiles des antisérums. Une filtration ainsi que l’additiond’azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur excluent pratiquement toute contamination. Les antisérumsspécifiques sont purifiés par immunoadsorption en phase solide, puis contrôlés et préparés defaçon à garantir une utilisation optimale sur les systèmes BN*. Les titres en anticorps (T) sont déterminéspar immunodiffusion radiale et imprimés sur l’étiquette des flacons. Ils indiquent combien de mgd’antigène sont précipités par 1 ml d’antisérum en gel d’agarose.Mises en garde et précautions d'emploi1. Ces réactifs ne doivent être utilisés que pour un usage in vitro.2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses ! Mis en contact avec desmétaux lourds comme le cuivre ou le plomb, l'azide de sodium peut former un acide explosif.Préparation des réactifsLes N Antisérums sont prêts à l'emploi et peuvent être utilisés sans prétraitement.Stabilités et conditions de conservationConservation à +2/+8°C :La date de péremption est indiquée sur l’étiquette.Stabilité après ouverture :4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les replacer à+2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérums peuvent devenirtroubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquent pas une contamination microbienneet qui n’influencent en aucune façon leur activité. Dans ces cas-là, les filtrer avant emploi, à l’aide d’unfiltre à usage unique à pores de 0,45 µm de diamètre.Ne pas congeler les réactifs.Stabilité sur les systèmes BN* :5 jours à raison de 8 heures par jour (albumine, RBP), ou durée équivalente (maximum 40 heures) ;3 jours à raison de 8 heures par jour (préalbumine), ou durée équivalente (maximum 24 heures).Système BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabilitédu réactif ; se reporter au manuel d’utilisation.Système BN ProSpec ® : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation.Matériel et autres réactifs nécessairesBN* SystèmeN Standard Protéines SL (humain), code OQIMN/T Contrôle Protéines SL/L,M,H (humain), codes OQIN, OQIO et OQIPN/T Contrôle Protéines LC (humain), code OQLWN Tampon de réaction, code OUMSN Diluant, code OUMTN Réactif complémentaire/précipitation, code OUMUBouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)Équipement et consommables selon les manuels d’utilisation des BN* Systèmes.Echantillons à testerUtiliser des échantillons sériques humains, de préférence frais (conservés 8 jours maximum à +2/+8°C), sinon congelés, ou des échantillons urinaires ou de LCR frais. Les échantillons sériques peuventégalement être conservés à une température inférieure à –20°C à condition de les congeler dansles 24 heures qui suivent leur prélèvement, et se conservent alors jusqu’à 1 an. Ne les congeler qu’uneseule fois. Les échantillons sériques doivent être totalement coagulés et ne plus contenir aucune particuleni trace de fibrine après centrifugation. Les échantillons lipémiques ou devenus troubles aprèsdécongélation, doivent être clarifiés par centrifugation (10 mn à env. 15 000 g) avant le test. Pour ledosage de l’albumine dans l’urine, utiliser des urines spontanées ou de 24 heures. Ne pas congeler leséchantillons urinaires. Chaque échantillon urinaire ou de LCR doit être centrifugé avant d’être testé.Réalisation du testRemarques1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel d’utilisationdu système utilisé.2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25 °C) avant le test sur le systèmeBN*A ou BN* 100. Sur les systèmes BN* II et BN ProSpec ® , les réactifs et les échantillons peuventêtre testés directement à +2/+8°C.Protocoles de dosage sur les Systèmes BN*Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et dans le logiciel de chaque système. Toutesles étapes sont effectuées automatiquement par le système.Etablissement des courbes d'étalonnageLes courbes d’étalonnage sont effectuées selon un étalonnage en plusieurs points. Les séries de dilutionsdu N Standard Protéines SL sont établies automatiquement avec le N Diluant.Les courbes d’étalonnage sont valables aussi longtemps que les contrôles d’exactitude, par ex. N/TContrôle Protéines SL/L, M et H ou N/T Contrôle Protéines LC, sont retrouvés à l’intérieur de leurdomaine de confiance respectif. Une nouvelle courbe d’étalonnage doit être établie à chaque changementde lot d’antisérum.Mesure des échantillons de patientsLes échantillons sériques sont dilués automatiquement au 1/5 (préalbumine, RBP) ou au 1/400 (albumine)avec le N Diluant, puis mesurés. Pour le dosage de l’albumine dans l’urine ou le LCR, les échantillonssont testés à une dilution au 1/5 selon un protocole séparé. Si des valeurs sortent du domaine demesure, les échantillons peuvent être retestés à une dilution plus élevée (préalbumine, RBP, albumine)ou plus basse (albumine dans le sérum, l’urine ou le LCR). Les protocoles pour retester les échantillonsà une dilution différente sont décrits dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.Contrôle de qualité interneTester les N/T Contrôles Protéines SL/M, M et H à chaque changement de courbe d’étalonnage ou deflacon d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons sériques. Pour le dosage del’albumine dans l’urine ou le LCR, tester le N/T Contrôle Protéines LC. Traiter les contrôles comme deséchantillons de patients, aussi bien dans le test que pour l’exploitation des résultats. Les valeurs théoriquesainsi que les domaines de confiance sont indiqués dans le tableau des valeurs théoriques dechaque contrôle.Calcul des résultats d'analyseL'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.Limites du réalisation du testLes échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce cas, les centrifugeravant le test. L’albumine sérique bovine (par ex. comme contrôle) peut perturber le test.Les échantillons utilisés dans le cadre de contrôles nationaux peuvent, du fait de leur technique defabrication ou de leur vieillissement, donner des résultats différents selon la technique de dosage utilisée.Il peut dans ces cas-là être nécessaire d’évaluer les résultats selon des valeurs-cibles spécifiquesà chaque méthode.Domaines de référenceLes domaines de référence suivants ont été obtenus pour des échantillons sériques de sujets adultessains :Protéinealbumine (8)préalbumine (8)RBP (9)2,5ème-97,5èmepercentiles35,0 - 52,0 g/l0,2 - 0,4 g/l0,03 - 0,06 g/lDomaines de référence pour l’albumine dans l’urine et le LCR :Albumine dans l’urine (10) : jusqu’à 30 mg/l ; varie selon le type d’échantillon urinaire.Albumine dans le LCR (11) : jusqu’à 350 mg/l.Il est toutefois recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs de référence, dans lamesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreux facteurs d’influence qui peuventvarier selon le collectif étudié.Caractéristiques des testsSensibilité et domaine de mesureLa sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage, et dépenddonc de la concentration en protéine du N Standard Protéines SL. Les domaines de mesure types sontindiqués dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.SpécificitéLes N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée.PrécisionLes coefficients de variation (CV) suivants ont été obtenus avec les N Antisérums anti-Albumine, Préalbumineet Rétinol binding protéine humaines sur le système BN* :intra-essaiinter-essai(n = 30) (n = 10)protéine valeur moyenne CV valeur moyenne CV[g/l] [%] [g/l] [%]albumine 46,5 4,3 44,7 4,4préalbumine 0,35 1,9 0,36 1,4RBP 0,04 3,1 0,05 2,2Dans le cadre d’un dosage urinaire sur le système BN*, le N Antisérum anti-Albumine humaine a donné uncoefficient de répétabilité de 2.21% et un CV total de 2.64%, pour une valeur moyenne de 78.73 mg/l. Lesvaleurs obtenues sur 10 séries de 4 dosages ont été exploitées par analyse de variance (12).Comparaison avec une autre méthodeDes échantillons sériques ont été testés en parallèle, d’une part avec les N Antisérums anti-Albumine,Préalbumine et Rétinol binding protéine humaines sur le système BN* (y), et d’autre part par immunodiffusionradiale (Partigen**) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes :protéine nombre de régression coefficientsérums linéaire de corrélationalbumine 50 y (BN*) = 0,87 x (IDR) + 5,52 g/l 0,94préalbumine 49 y (BN*) = 0,84 x (IDR) + 0,017 g/l 0,99RBP 30 y (BN*) = 0,85 x (IDR) – 0,006 g/l 0,95Des échantillons urinaires (n = 79) ont été testés en parallèle, d’une part sur le système BN* à l’aide duN Antisérum anti-Albumine humaine (y), et d’autre part selon une méthode du commerce (x).L’exploitation des données a donné les résultats suivants :y (BN*) = 1,12 x - 0,73 mg/l ; coefficient de corrélation : r = 0,99.RemarqueLes valeurs indiquées comme caractéristiques des tests représentent des résultats types, et ne doiventpas être considérées comme des spécifications des N Antisérums anti-Albumine, Préalbumine et Rétinolbinding protéine humaines.LittératureVoir page 1.* BN est une marque de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis.** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans d'autrespays.BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis, en Allemagneet dans d'autres pays.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOSAL G11 E0540 (256) W 3Edition Mai 2001

N Antisieri anti albumina,prealbumina e proteinalegante il retinolo, umaneSettori d'impiegoDiagnostici in vitro per la determinazione quantitativa dell’albumina, prealbumina (transtiretina) e proteinalegante il retinolo (RbP) nel siero umano nonché dell’albumina nelle urine umane e nel liquor, consistemi BN*.Significato diagnosticoL'albumina è la plasmaproteina quantitativamente predominante, normalmente rappresenta più dellametà delle proteine totali presenti nel siero. L'albumina viene sintetizzata esclusivamente nel fegato efunge da proteina legante e vettrice di calcio, acidi grassi, bilirubina, ormoni, vitamine, microelementi efarmaci. Essa contribuisce in modo essenziale al mantenimento della pressione colloidosmotica. Ridotteconcentrazioni sieriche si riscontrano in presenza di una compromissione epatica con conseguenteriduzione della sintesi (per es. cirrosi epatica, epatite acuta, o ipotressia cronica) nonché acausa di apprezzabili perdite proteiche (sindrome nefrotica, gastroenteropatie, gravi ustioni) (1). Laconcentrazione sierica dell'albumina ha una valenza prognostica per la mortalità di pazienti anzianiospedalizzati (2). In presenza di carenze nella capacità di filtrazione glomerulare si hanno concentrazionielevate di albumina nelle urine. Un'aumentata eliminazione di albumina nelle urine è indice dicomplicazioni renali e vascolari, ad es. nel diabete mellito (3). La concentrazione di albumina nel liquorcostituisce un parametro per l'integrità della barriera emato-liquorale. La determinazione del quozientedi albumina liquor/siero consente la diagnosi di un disturbo della barriera e la valutazione della sintesilocale di altre proteine nel sistema nervoso centrale (4).La prealbumina e l'RbP vengono ugualmente sintetizzate nel fegato. La prealbumina funge da proteinalegante per la tiroxina e per l'RbP. L'RbP è la proteine vettrice per il retinolo (vitamina A) (5). La concentrazionesierica di entrambe le proteine riflette pure la funzione della sintesi epatica ed è fra l'altrofortemente ridotta nell'ipotressia. Grazie alla loro breve emivita, rispettivamente 2 giorni e di 12 ore ca.,la prealbumina e l'RbP sono idonee per il monitoraggio dello stato nutrizionale e dell'efficacia dellanutrizione parenterale (6,7).Principio del metodoLe proteine presenti nel siero umano, urina o liquor reagiscono con gli anticorpi specifici formandoimmunocomplessi, i quali provocano la diffrazione della luce. L'intensità della luce diffratta dipendedalla concentrazione della proteina nel campione. La valutazione avviene per confronto con uno standarda concentrazione nota.ReagentiContenuto della confezioneN antisiero anti-albumina umana, codice SAL1 Flacone da 5 mL o da 2 mLoppureN antisiero anti-prealbumina umana, codice UIF oppureN antisiero anti-RbP umana, codice UVO1 Flacone da 2 mLComposizioneGli N Antisieri sono sieri liquidi di origine animale, prodotti per immunizzazione di conigli con albumina,prealbumina o RbP umane, altamente purificate. Le componenti labili vengono rimosse dagli antisiericon un particolare processo. Le contaminazioni microbiche vengono escluse essenzialmente mediantefiltrazione e aggiunta di sodio azide (< 1g/L) come conservante. Gli antisieri specifici, purificati tramiteimmunoadsorbimento su fase solida, dopo particolari verifiche, vengono trattati in modo tale che siaassicurato un ottimale impiego con i sistemi BN*. Il titolo anticorpale (T), determinato con il metododell’immunodiffusione radiale, è riportato sull’etichetta del flacone ed indica quanti mg vengono precipitati,in gel di agarosio, da 1 mL di antisiero.Avvertenze e precauzioni1. Solo per uso diagnostico in-vitro.2. Quando si impiegano diagnostici in-vitro contenenti sodio azide osservare le seguenti precauzioni:non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli comerame o piombo può formare azidi esplosive.Preparazione dei reagentiGli N Antisieri sono pronti per l'uso e possono essere utilizzati senza alcun pretrattamento.Conservazione e validitàStabilità a +2/+8 °C:vedere la data di scadenza sull’etichettaStabilità dopo apertura:4 settimane, se conservati ben chiusi a +2/+8°C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi).Durante la conservazione, gli N Antisieri possono presentare intorbidamenti o flocculazioni che nondipendono da contaminazioni microbiche e che non influenzano in alcun modo l’attività. In questi casi ènecessario filtrare l’antisiero prima dell’uso, utilizzando filtri monouso con pori di 0,45 µm di diametro.Non congelare.Stabilità sui sistemi BN*:5 giorni per 8 ore al giorno (albumina e RbP) o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore);3 giorni per 8 ore al giorno (prealbumina) o periodo di tempo equivalente (massimo 24 ore);Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per BN*II (cod. VLE), come indicato nel manuale d’uso.Sistema BN ProSpec ® : la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d’uso.Altro materiale necessarioSistemi BN*N Standard Proteine SL (umano), codice QIMN/T Controllos Proteine SL/L, M e H (umano), codice QIN, QIO e QIPN/T Controllo Proteine LC (umano), codice QLWN Tampone di reazione, codice UMSN Diluente, codice UMTN Reagente supplementare precipitante, codice UMUEvaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLEMateriali di consumo e accessori come descritto nel manuale di istruzione dei sistemi BN*.Campioni in esameUtilizzare preferibilmente campioni di siero freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a +2/+8°C) oconservati congelati e campioni di urina umana e liquor freschi. I campioni freschi, se congelati entro 24ore dal prelievo, possono essere conservati per 1 anno a -20°C, evitando ripetuti scongelamenti. Icampioni di siero devono essere completamente coagulati e, dopo centrifugazione, non devono presentareparticelle o tracce di fibrina. I campioni lipemici o i campioni congelati, che dopo lo scongelamentosi presentano torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione prima del test (10minuti a ca. 15000 x g). Per la determinazione dell’albumina nelle urine, è possibile utilizzare sia urinespontanee che di raccolta. I campioni di urina non devono essere congelati. Ogni campione di urinadeve essere centrifugato prima del test.Esecuzione del testNota1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d’uso dei sistemi BN*.2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.3. Prima della determinazione sul sistema BN*A/BN* 100, portare i reagenti a temperatura ambiente(+15/25°C). I reagenti ed i campioni conservati a +2/+8°C possono essere utilizzati direttamente sulsistema BN* II o BN ProSpec ® .Protocolli d’analisi per i sistemi BN*I protocolli d’analisi sono riportati nei manuali d’uso e nel software dello strumento. Tutte le fasi sonoeseguite automaticamente dallo strumento.Allestimento della curva di riferimentoLe curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. A tale scopo, vengonopreparate automaticamente diluizioni seriali dell’N Standard Proteine SL con l’N Diluente.Le curve di riferimento possono essere utilizzate sino a che i controlli di accuratezza, per es. l’N/TControllos Proteine SL/L, M e H o l’N/T Controllo Proteine LC, rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali.Quando viene utilizzato un nuovo lotto di antisiero, è necessario allestire una nuova curva di riferimento.Valutazione dei campioni in esameI campioni di siero vengono diluiti automaticamente 1:5 (prealbumina, RbP) o 1:400 (albumina) conN Diluente e quindi analizzati. L’albumina nei campioni di urina o di liquor viene determinata, medianteuno schema di esecuzione separato, ad una diluizione 1:5. Se le letture ottenute si trovano al di fuoridell’ambito di misura, la misura può essere ripetuta usando una diluizione superiore (prealbumina,RbP, albumina) o inferiore (albumina nel protocollo d’analisi del siero, urina e liquor) del campione. Perinformazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni consultare il manuale d’uso dei sistemiBN*.Controllo di qualità internoI controlli N/T Siero Proteine SL/L, M e H devono essere analizzati dopo ogni preparazione delle curvedi riferimento, dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campioni. Per ladeterminazione dell’albumina nelle urine, impiegare N/T Siero controllo proteine LC. I controlli sonoanalizzati e valutati allo stesso modo dei campioni. I valori nominali e gli ambiti fiduciali sono indicatinella tabella dei valori nominali dei rispettivi controlli.Calcolo dei risultatiLa valutazione viene eseguita automaticamente mediante una funzione logit-log.Limitazioni della esecuzione del testI campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Pertanto i campionicontenenti particelle devono essere centrifugati prima di essere analizzati. La sieroalbumina bovinapresente nel campione (ad es. campione di controllo) può interferire con la determinazione.Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all’invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con icampioni di controllo e con i campioni per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire infunzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo riferimentoa valori specifici per i diversi metodi utilizzati.Ambito di riferimentoI seguenti intervalli di riferimento si applicano ai campioni di siero di adulti sani:ProteinAlbumina (8)Prealbumina (8)RbP (9)2,5 - 97,5 Percentile35,0 - 52,0 g/L0,2 - 0,4 g/L0,03 - 0,06 g/LIntervallo di riferimento per albumina nell’urina e nel liquor:Albumina nelle urine (10) fino a 30 mg/L; a seconda del tipo di campione di urina.Albumina nel liquor (11) fino a 350 mg/L.Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori possonorisultare diversi a seconda della popolazione esaminata.Caratteristiche del testSensibilità e ambito di misuraLa sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende quindidalla concentrazione delle proteine nell’ N Proteine Standard SL. Gli ambiti di misura tipici sono riportatinel manuale d’uso dei sistemi BN*.SpecificitàGli N antisieri sono specifici per la relativa proteina.PrecisioneCon gli N Antisieri anti albumina, prealbumina e RbP umane sono stati determinati, sul sistema BN*,seguenti coefficienti di variazione (CV):Intra-serieInter-serie(n = 30) (n = 10)Proteina Valore medio CV Valore medio CV[g/L] [%] [g/L] [%]Albumina 46,5 4,3 44,7 4,4Prealbumina 0,35 1,9 0,36 1,4RbP 0,04 3,1 0,05 2,2L’ N Antisiero anti albumina umana è stato valutato, su campioni di urina con un valore medio di albuminaumana di 78,73 mg/L, ottenendo un CV intra-serie di 2,21% ed un CV totale di 2,64%. I valori (10serie con 4 determinazioni per serie) sono stati elaborati con l’analisi della varianza (12).Confronto tra i metodiSono stati esaminati campioni di siero con N Antisieri anti albumina, prealbumina e RbP umane sulsistema BN* (y) e con un metodo di immunodiffusione radiale (x) (Partigen**). La correlazione deirisultati è la seguente:Proteina Nr. dei sieri Regressione lineare Coefficientedi correlazioneAlbumina 50 y (BN*) = 0,87 x (RID) + 5,52 g/L 0,94Prealbumina 49 y (BN*) = 0,84 x (RID) + 0,017 g/L 0,99RbP 30 y (BN*) = 0,85 x (RID) – 0,006 g/L 0,95In un confronto dei campioni di urina (=79) esaminati utilizzando l’N Antisiero anti albumina umana sulsistema BN* (y) contro un altro metodo in commercio (x) è stata ottenuta la seguente correlazione:y (BN*) = 1,12 x -0,73 mg/L; coefficiente di correlazione r = 0,99.NotaI valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono essere consideraticome specifiche per gli N Antisieri anti albumina, prealbumina e RbP umane.BibliografiaVedi pagina 1.* BN è un marchio della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti.** Partigen é un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri Paesi.BN ProSpec é un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti, in Germaniae negli altri Paesi.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOSAL G11 E0540 (256) W 4Edizione Maggio 2001

N Antisueros contra la albúmina,la prealbúmina y la proteínafijadora de retinol humanasCampos de aplicaciónReactivos de diagnóstico in vitro para la determinación cuantitativa de albúmina, prealbúmina (transtirretina)y de la proteína fijadora de retinol (PFR) en sueros humanos, así como, de albúmina en orina yen líquido cefalorraquídeo, humanos, usando los sistemas BN*.Significado diagnósticoLa albúmina es la proteína plasmática que se presenta en mayor cantidad y corresponde normalmente amás de la mitad del contenido total de proteínas del suero. La albúmina se forma primordialmente en elhígado y sirve como proteína de transporte y de fijación de calcio, ácidos grasos, bilirrubina, hormonas,vitaminas, elementos trazas y medicamentos. La albúmina es el principal factor determinante de la presiónosmótica del plasma. Concentraciones bajas de albúmina en suero se presentan como consecuenciade una defectuosa capacidad de síntesis del hígado (por ej., en cirrosis hepática, hepatitis agúda o endesnutrición crónica), como también por pérdidas cuantiosas de proteínas (síndrome nefrótico, gastroenteropatíay quemaduras graves)(1). La concentración de albúmina en el suero tiene un significado pronósticopara la mortalidad de pacientes de avanzada edad que se encuentran hospitalizados (2). La albúminase presenta en la orina cuando existen defectos en la barrera de filtración glomerular. Una elevadaeliminación de albúmina en orina es un indicador de complicaciones renales y vasculares, por ej., endiabetes mellitus (3). La concentración de albúmina en líquido cefalorraquídeo (LCR) es una medida de laintegridad de la barrera sangre/LCR. La determinación de la relación albúmina en LCR/albúmina en sangrepermite diagnósticar alteraciones en esta barrera y la evaluación de la síntesis local de otras proteínasdentro del sistema nervioso (4).La prealbúmina y la PFR son también proteínas sintetizadas en el hígado. La prealbúmina actúa comoproteína de fijación para tiroxina y para PFR. La PFR es una proteína de transporte de retinol (vitamina A)(5). La concentración en el suero de estas dos proteínas refleja igualmente la capacidad de síntesis delhígado, la cual se encuentra muy disminuida, entre otras, en la desnutrición. Debido a su corto tiempo devida media, aprox.de 2 días o de 12 horas respectivamente, son la prealbúmina y la PFR apropiadas paracontrolar el estado de nutrición y la efectividad de una nutrición parenteral (6,7).Principio del métodoLas proteínas contenidas en el suero, orina y LCR humanos forma con anticuerpos específicos, pormedio de una reacción inmunoquímica, inmunocomplejos los cuales pueden dispersar un rayo de luzincidente. La intensidad de la luz dispersada es proporcional a la concentración de la correspondienteproteína en la muestra. La valoración se hace comparando con un estándar de concentración conocida.ReactivosContenido del envase comercialN Antisuero contra albúmina humana, N° de pedido OSAL1 frasco con 5 ml o con 2 mloN Antisuero contra prealbúmina humana, N° de pedido OUIF oN Antisuero contra PFR humana, N° de pedido OUVOcada frasco con 2 mlComposiciónLos N antisueros son sueros animales, líquidos, producidos mediante inmunización de conejos conalbúmina, prealbúmina y PFR, humanas, de alta pureza. Los componentes lábiles de los antisueros sevan a retirar mediante un proceso especial de estabilización. Las impurezas microbiológicas se excluyen,en general, por filtración y adición de azida de sodio (< 1 g/l) como medio de conservación. Losantisueros específicos, purificados por medio de inmunoabsorción de fase sólida, después de sersometidos a pruebas especiales, se ajustan de tal forma que se garantice una capacidad óptima al serusados en los sistemas BN*. Los títulos de los anticuerpos (T) se determinan por inmunodifusión radialy vienen impresos en las etiquetas de los frascos. Este valor indica, cuantos mg de antígeno van a serprecipitados en un gel de agarosa, por 1 ml de antisuero correspondiente.Advertencias y medidas de seguridad1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguienteregla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidasexplosivas con metales como cobre y plomo.Preparación de reactivosLos N antisueros vienen listos para ser utilizados y puede aplicarse sin ningún otro tratamiento preliminar.Estabilidad y almacenajeTiempo de conservación entre +2 y +8°C:La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta;Estabilidad después de abierto:4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y +8°C, perfectamentecerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos);Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que no son ocasionadaspor contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna en su actividad. Enestos casos, se deben filtrar los antisueros antes de ser usados. Para esto, es apropiado usar un filtrodesechable con un diámetro de poro de 0,45 µm.Los reactivos no se deben congelar.Estabilidad en los sistemas BN*:5 días 8 horas cada día (albúmina y PFR), o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas);3 días 8 horas cada día (prealbúmina), o un período de tiempo comparable (máximo 24 horas);En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de laevaporación BN* II (N° de pedido, OVLE), se debe tomar del manual de operaciones;En el sistema BN ProSpec ® , la estabilidad de los reactivos se debe tomar del manual de operaciones.Materiales adicionales necesariosSistemas BN*N Proteína-estándar SL (humano), N° de pedido OQIMN/T Proteína-controles SL/L, M y H (humano), N° de pedido OQIN, OQIO y OQIPN/T Proteína-control LC (humano), N° de pedido OQLWN tampón para reacción, N° de pedido OUMSN diluyente, N° de pedido OUMTN Reactivo complementario/Precipitación, N° de pedido OUMUTapón protector de la evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLEMateriales y equipos necesarios como está descrito en el manual de operaciones de los sistemas BN*.Material a investigarPara la medida se deben usar, en lo posible, muestras frescas (almacenadas máximo 8 días entre +2y +8°C) o muestras de sueros humanos almacenadas congeladas a bajas temperaturas, así como,muestras frescas de orina y de líquido cefalorraquídeo. Si las muestras de suero se congelan a bajatemperatura, dentro de las 24 horas subsiguientes a la toma, se pueden almacenar por 1 año a -20°C,siempre que se eviten la descongelación y la congelación repetidas. Las muestras de suero debenestar completamente coaguladas y no deben contener partículas o rastros de fibrina, después de lacentrifugación. Muestras lipémicas o muestras congeladas que estén turbias después de la descongelación,deben ser aclaradas por centrifugación (10 min. a aprox. 15 000 x g) antes de la determinación.Para la determinación de albúmina en orina, se puede usar orina espontánea y retenida. Las muestrasde orina no se deben congelar. Cada muestra de orina se debe centrifugar antes del análisis.ProcedimientoAdvertencias1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientes manualesde operación.2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento.3. Los reactivos y las muestras a medir en los sistemas BN* A / BN* 100 deben alcanzar la temperaturaambiente (entre +15 y +25°C) antes de la determinación. En los sistemas BN* II/ BN ProSpec ® sepueden medir directamente los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8°C.Protocolos del test en los sistemas BN*Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones, así como,en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadas automáticamente por elsistema.Preparación de la curva de referenciaLas curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración sepreparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estándar SL con el N diluyente.Las curvas de referencia se pueden emplear por largo tiempo siempre que al medir los controles deexactitud, por ej. los N/T Proteína-controles SL/L, M y H o los N/T Proteína-controles LC, sus valoresse encuentren de nuevo dentro de los correspondientes rangos de confianza. Al utilizar un nuevo lotede antisueros se debe preparar una nueva curva de referencia.Medida de las muestras de pacientesLas muestras de sueros van a ser automáticamente diluidas 1:5 (prealbúmina, PFR)) o 1:400 (albúmina)con N diluyente y medidas. La determinación de albúmina en muestras de orina y de líquido cefalorraquídeose hace en las muestras diluida 1:5, siguiendo respectivamente un protocolo de ensayo separado.Para valores que se encuentren por fuera del rango de medida, se puede repetir la medida a una diluciónmayor de la muestra (prealbúmina, PFR, albúmina) o a una dilución menor (protocolos de ensayos dealbúmina en suero, orina y líquido cefalorraquídeo). La repetición de las medidas a otras diluciones de lasmuestras viene descrita en el manual de operaciones del sistema BN*.Control de calidad internoLos N/T proteína-controles SL/L, M y H se deben utilizar después de cada elaboración de una curva dereferencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también, con cada seriede muestras de sueros. Para la determinación de albúmina en orina o en líquido cefalorraquídeo sedeben utilizar de manera análoga los N/T proteína-controles LC. Los controles deben manejarse en eltest y en la evaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianzase deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control.Cálculo de los resultados del análisisLa valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit.Limitaciones del procedimientoLa presencia en la muestras de turbidez o de partículas puede alterar la determinación. Por esta razón,las muestras que contengan partículas, deben ser centrifugadas antes de la determinación. La albúminabovina en la muestras (por ej., muestra control) puede alterar la determinación.Para muestras de control y para muestras investigadas por diferentes centros, debido a su preparacióncomo también al envejecimiento de las mismas, pueden encontrarse resultados diferentes dependiendodel método de determinación empleado. Por esta razón, es necesario para la valoración de estosresultados tener en cuenta la corrección específica del método.Valores de referenciaPara muestras de personas adultas sanas son válidas los siguientes rangos de referencia:ProteínaAlbúmina (8)Prealbúmina (8)PFR (9)2,5 - 97,5 percentile35,0 - 52,0 g/l0,2 - 0,4 g/l0,03 - 0,06 g/lRango de referencia para la albúmina en orina y en líquido cefalorraquídeo:Para albúmina en orina (10) hasta 30 mg/l; dependiendo del tipo de muestra.Para albúmina el LCR (11) hasta 350 mg/l.Por esta razón cada laboratorio debe determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos seencuentran influenciados por muchos factores, que pueden ser diferentes para cada colectividad estudiada.Características del testSensibilidad y rango de medidaLa sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia ydepende por eso, de la concentración de proteína en el N Proteína- estándar SL.Los rangos típicos de medida vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*.EspecificidadLos N antisueros son específicos para la correspondiente proteína.PrecisiónCon los N antisueros contra albúmina, prealbúmina y PFR, humanas, se encontraron, para la determinaciónen sueros los siguientes coeficientes de variación (CV):Intra-assayInter-assay(n=30)(n=10)Proteína promedio CV promedio CV[g/l] [%] [g/l] [%]Albúmina 46,5 4,3 44,7 4,4Prealbúmina 0,35 1,9 0,36 1,4PFR 0,04 3,1 0,05 2,2En la determinación en orina con el N antisuero contra albúmina humana en el sistema BN* se encontróun CV, en intra assay, de 2,21% y un CV total de 2,64%, a un valor promedio de 78,73 mg/l. Losdatos medidos (10 carreras c/u con 4 determinaciones) fueron valorados por medio del análisis devarianza (12).Comparación de métodosSe midieron muestras de suero con los N Antisueros contra albúmina, prealbúmina y PFR, humanas,en el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (Partigen**).La correlación de los resultados dio los siguientes datos:Proteína Número Regreción lineal Coeficiente dede sueroscorrelaciónAlbúmina 50 y (BN*)=0,87 x (RID) + 5,52 g/l 0,94Prealbúmina 49 y (BN*)=0,84 x (RID) + 0,017 g/l 0,99PFR 30 y (BN*)=0,85 x (RID) – 0,006 g/l 0,95La comparación de las muestras de orina (n = 79) determinadas con el N antisuero contra albúminahumana en el sistema BN* (y) y de forma paralela, por otro método existente en el comercio (x) dio lossiguientes resultados: y (BN*) = 1,12x - 0,73 mg/l ; coeficiente de correlación r = 0,99NotaLos valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomarcomo especificaciones para los N antisueros contra albúmina, prealbúmina o PFR, humanas.LiteraturaVéase la página 1.* BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en otros países.BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, en Alemania y enotros países.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOSAL G11 E0540 (256) W 5Edición Mayo 2001

N Anti-soro contraalbumina, pré-albumina eproteína ligante de retinol,humanasCampos de aplicaçãoDiagnósticos para a determinação quantitativa in-vitro da albumina, da pré-albumina, (Transtiretina) eda proteína ligante de retinol (RbP) no soro humano, bem como da albumina na urina e fluído humanos,com os sistemas BN*.Significado diagnósticoA albumina é a proteína plasmática com maior dominância quantitativa, pois perfaz normalmente maisde metade da totalidade das proteínas séricas. A albumina é sintetizada exclusivamente no fígado efunciona como proteína de ligação e veículo de transporte de cálcio, ácidos gordos, bilirrubina, hormonas,vitaminas, microelementos, e medicamentos. Desempenha um papel essencial na manutençãoda pressão coloidosmótica. Concentrações séricas reduzidas de albumina manifestam-se quando afunção de síntese do fígado se mostra fortemente reduzida (por ex. cirrose hepática, hepatite aguda oumalnutrição crónica), assim como em caso de fortes perdas de proteínas (síndrome nefrótica, gastroenteropatia,queimaduras graves) (1). A concentração de albumina sérica é importante no prognósticode mortalidade de pacientes idosos hospitalizados (2). Em caso de insuficiência funcional da barreirade filtragem glomerular, a concentração de albumina aparece aumentada na urina. Um aumento dasecreção de albumina na urina é um indicador de uma complicação renal ou vascular, por ex. nadiabetes mellitus (3). A concentração de albumina no líquido cefalorraquidiano (LCR) permite verificara integridade da barreira sangue/LCR. A determinação do quociente albumínico LCR/soro permitediagnosticar uma eventual disfunção da barreira e avaliar a s’ntese local de outras proteínas adentrodo sistema nervoso central (4).A pré-albumina e a RbP (retinol-binding protein) são igualmente sintetizadas no fígado. A pré-albuminafunciona como proteína ligante para a tiroxina e a RbP. A RbP é a proteína de transporte do retinol(vitamina A) (5). As concentrações séricas das duas proteínas reflectem igualmente a capacidade desíntese hepática e mostram-se fortemente diminuídas, entre outros casos, no estado de malnutrição.Em virtude das suas breves semi-vidas, aprox. 2 dias e 12 horas, respectivamente, a pré-albumina e aRbP permitem o controlo do estado nutricional e da eficácia de uma nutrição parentérica (6, 7).Princípio metodológicoNuma reacção imunoquímica com anticorpos específicos, as proteínas contidas no soro, na urina ouno LCR humanos formam imunocomplexos que dispersam a luz incidente. A intensidade da luz dispersaé função da concentração da respectiva proteína na amostra. O resultado é determinado por confrontocom um padrão de concentração conhecida.ReagentesConteúdo da embalagemN Anti-soro contra albumina humana, código OSAL1 frasco de 5 ml ou 2ml de cada ouN Anti-soro contra pré-albumina humana, código OUIF ouN Anti-soro contra RbP humana, código OUVO1 frasco de 2ml de cadaComposiçãoOs N Antisoros são soros fluídos de origem animal e são produzidos mediante a imunização de coelhoscom albumina, pré-albumina ou RbP humanas, altamente purificadas. Os componentes lábeis são retiradosdos antisoros utilizando um processo especial de estabilização. As impurezas microbianas são praticamenteexcluídas por meio de filtração e adição de azida de sódio (< 1 g/l) na qualidade de conservante.Os antisoros específicos, purificados por intermédio de imunoadsorção na fase sólida, após um controloespecial, são calibrados de forma a garantir uma utilização óptima nos sistemas BN*. Os título deanticorpos (T) são determinado por imunodifusão radial e estão impressos no rótulo do frasco. Elesindicam quantos mg de antígeno são precipitados em gel de agarose por 1 ml do antisoro respectivo.Advertências e medidas de precaução1. Só para uso diagnóstico in vitro.2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor de azida sódica:Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas!Com metais pesados, como cobre ou chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas!Preparação dos reagentesOs N Anti-soros estão prontos para o uso e podem ser utilizados sem qualquer tratamento prévio.Estabilidade e conservaçãoDuração de conservação entre +2 e +8 °C:A estabilidade está indicada no rótulo;Estabilidade depois de aberto:4 semanas, desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechados e conservadosentre +2 e +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos); Em caso dearmazenagem, os N Antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não são provocadaspor contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade. Em tais casos, énecessário filtrar os antisoros antes do uso. Para o efeito, são adequados filtros descartáveis comporos com o diâmetro de 0,45 µm. Os reagentes não podem ser congelados.Estabilidade nos sistemas BN*:5 dias com 8 horas (albumina, RbP) ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas);3 dias com 8 horas (pré-albumina)ou um período de tempo equivalente (máximo de 24 horas);Sistemas BN* II : o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II EvaporationStoppers (código OVLE) deverá ser retirado da instruções de serviço;Sistema BN ProSpec ® : a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de serviço.Outro material necessárioSistema BN*N Proteína Standard SL (humano), código OQIMN/T Controlos de Proteína SL/L, M e H (humanos), códigos OQIN, OQIO e OQIPN/T Controlo de Proteína LC (humano), código OQLWN Tampão de reacção, código OUMSN Diluente, código OUMTN Reagente complementar/ Precipitação, código OUMUBN* II Evaporation Stoppers (opcional), código OVLEMaterial de consumo e equipamento descritos nas instruções de serviço dos sistemas BN*.AmostrasPara a medição, usar de preferência amostras de soro humano frescas (guardadas 8 dias, no máximoentre +2 e +8º C) ou conservadas congeladas, bem como amostras frescas de urina e de fluído cefalorraquidiano.Se as amostras forem congeladas nas 24 horas subsequentes à colheita, a conservaçãoé possível até 1 ano, a uma temperatura inferior a -20 °C, se se evitar a repetição da descongelaçãoe da congelação. As amostras séricas têm de ser totalmente coaguladas e não podem conterpartículas ou vestígios de fibrina após a centrifugação. As amostras lipémicas ou as amostras congeladasque apresentem turbidez após descongelação, têm de ser clarificadas por centrifugação (10min. a aprox. 15 000 x g) antes da determinação. Para a determinação da albumina na urina, sãoadequadas as amostras de urina espontânea ou as amostras de urina recolhida. As amostras de urinanão podem ser congeladas. É necessário centrifugar cada amostra de urina e de fluído cefalorraquidianoantes da análise.ProcedimentoNotas1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruções deserviço respectivas.2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada.3. Antes da medição no sistema BN*A/BN* 100 , os reagentes e as amostras deverão ter atingido atemperatura ambiente (+15 a +25 °C). Os reagentes e amostras armazenadas entre +2 e +8°Cpodem ser utilizados directamente no sistema BN* II/BN ProSpec ® para a determinação.Protocolos de ensaio nos sistemas BN*Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo.Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.OSAL G11 E0540 (256) W 6Edição Maia 2001Definição da curva de referênciaAs curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. As séries de diluição doN Proteína Standard SL com o N Diluente são efectuadas automaticamente.As curvas de referências permanecem válidas enquanto os controlos de exactidão, p. ex. N/T Controlosde Proteína SL/L, M e H ou N/T Controlo de Proteína LC, se encontrarem compreendidos nos respectivosescalões de confiança. Utilizando-se outro lote de anti-soro, é necessário definir uma nova curva.Medição das amostras de pacienteAs amostras séricas são diluídas e medidas automaticamente a 1:5 (pré-albumina. RbP) ou 1:400 (albumina)com N Diluente. A albumina nas amostras de urina ou nas as amostras de fluído cefalorraquidianoé determinada sempre num protocolo de ensaio separado, a partir de uma diluição a 1:5. Para os valoresmedidos que se encontrem fora do escalão de referência, a medição pode ser repetida a partir de umadiluição de amostra superior (pré-albumina, RbP, albumina) ou inferior (protocolo de ensaio da albuminano soro, protocolo de ensaio da urina e do fluído cefalorraquidiano). As repetições de medição a partir deoutras diluições de amostras estão descritas no manual de utilização dos sistemas BN*.Controlo interno de qualidadeOs N/T Controlos de Proteína SL/L, M e H deverão ser utilizados após a preparação de uma curva dereferência, após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras séricas.Na determinação da albumina ou fluído cefalorraquidiano na urina, deverá ser utilizado analogamenteo N/T Controlo de Proteína LC. Na preparação e na avaliação do teste, os controlos são tratados comoamostras de paciente. Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão ser retirados da tabelade valores teóricos do controlo respectivo.Cálculo dos resultadosO resultado é calculado automaticamente mediante uma função logit-log.Limitações de realização do testeAs turvações e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, as amostras quecontêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação. A albumina bovina na amostra (p.ex., amostra de controlo) pode perturbar a determinação.Em amostras de controlo ou de ensaios interlaboratoriais pode acontecer obterem-se resultados divergentes,conforme o método de análise utilizado, em virtude da elaboração técnica ou da idade dasamostras. Pode ser, por isso, necessário proceder a uma avaliação destes resultados em função dosvalores específicos do método utilizado.Escalões de referênciaPara as amostras séricas dos indivíduos adultos sujeitos ao teste aplicam-se os seguintes escalões dereferência:ProteínaAlbumina (8)Pré-albumina (8)RbP (9)2,5.° - 97,5.° percentil35,0 - 52,0 g/l0,2 - 0,4 g/l0,03 - 0,06 g/lEscalões de referência para a albumina na urina e no fluído cefalorraquidiano:Albumina na urina (10): até 30 mg/l; variável segundo o tipo de amostra de urinaAlbumina no LCR (11): até 350 mg/l.Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que estesestão sujeitos a influências múltiplas, que podem ser diferentes para cada população analisada.Características do testeSensibilidade e ambito de mediçãoA sensibilidade da determinação é definida pela curva inferior da curva de referência e depende, assim,da concentração das proteínas no N Proteína Standard SL. Os escalões de medição típicos estãoindicados nas instruções de serviço dos sistemas BN*.EspecificidadeOs N Anti-soros são específicos da respectiva proteína.PrecisãoCom os N Antisoros contra a albumina, a pré-albumina ou RbP humanas foram determinados osseguintes coeficientes de variação (CV) nos sistemas BN*:Intra-AssayInter-Assay(n = 30) (n = 10)Proteína valor médio CV valor médio CV[g/l] [%] [g/l] [%]Albumina 46,5 4,3 44,7 4,4Pré-albumina 0,35 1,9 0,36 1,4RbP 0,04 3,1 0,05 2,2Com o N antisoro contra a albumina humana, para a determinação na urina foi determinado no sistema BN*um CV de Intra-Assay de 2,21 % e um CV total de 2,64 %, com um valor médio de 78,73 mg/l. Os dadosmedidos foram (dez operações cada com quatro determinações) avaliadas com análise de variância (12).Comparação de métodosForam medidas amostras séricas com os N Antisoros contra a albumina, a pré-albumina ou a RbPhumanas no sistema (y) BN* e determinadas, comparativamente, com a imunodifusão radial (x) (Partigen**)A correlação dos resultados apresenta os seguintes dados:Proteína Número de soros Regressão linear Coeficiente decorrelaçãoAlbumina 50 y (BN*) = 0,87 x (RID) + 5,52 g/l 0,94Pré-albumina 49 y (BN*) = 0,84 x (RID) + 0,017 g/l 0,99RbP 30 y (BN*) = 0,85 x (RID) – 0,006 g/l 0,95A comparação das amostras de urina (n=79), com o N Antisoro contra a albumina humana no sistemaBN* (y) e a comparação com a determinação por um método existente no mercado (x) apresentou osseguintes resultados: y (BN*) = 1,12 x - 0,73 mg/l; Coeficiente de correlação r = 0,99.NotaOs valores indicados para as características dos testes representam resultados típicos e não devem serconsiderados como especificação para o N Antisoro contra a albumina, a pré-albumina ou a RbP humanas.BibliografiaVide a página 1.* BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.** Partigen é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros países.BN ProSpec é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, na Alemanha enoutros países.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgSymbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos SímbolosManufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado porIn Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif MédicalIVD Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitariopara Diagnóstico In VitroLOT Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de LoteEXP Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha deCCYY-MM-DDvencimiento / termo da validade8 CStorage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura2 C di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagemCE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CEREF Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número deCatálogoConsult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Noticed'Utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte asInstruções de Utilização