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ContenidoDiagnóstico fitosanitarioInformación actualizada sobre los principales aspectos del virus de la leprosis de los cítricos (Citrus leprosis virus)(CiLV-C)Gloria González Arias, Mercedes Sáenz Díaz y Santiago Jiménez JiménezControl biológicoEvaluación de cepas de Bacillus thuringiensis para el control de Drosophila melanogaster MaengiBertha Carreras Solís y Dayamí Rodríguez BatistaPatogenicidad de Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin sobre estados inmaduros de mosquita blanca (Bemisiatabaci Genn.)Esaú Ruiz Sánchez, Agatha T. Rosado Calderón, Wilberth Chan Cupul, Jairo Cristóbal Alejo y Ricardo Munguía RosalesPotencialidades de bacterias aerobias formadoras de endosporas para el biocontrol en plantas ornamentalesTeresa de los Milagros Orberá Ratón, Manuel de Jesús Serrat Díaz y Zenia González GiroActividad antifúngica in vitro de la quitosana Sigma frente a hongos fitopatógenos causantes del manchado del granoen el cultivo de arroz (Oryza sativa L.)Deyanira Rivero González, Ariel Cruz Triana, Benedicto Martínez Coca, Miguel Á. Ramírez Arrebato y Aida T.Rodríguez PedrosoEcologíaObtención de aislados de Bacillus thuringiensis Berliner autóctonos de CubaBertha Carreras SolísManejo de plagasComparación de la efectividad de un insecticida botánico y dos químicos convencionales en el control del picudo(Anthonomus eugenii Cano) (Coleoptera: Curculionidae) en chile habanero (Capsicum chinense Jacq.)Esaú Ruiz Sánchez, Omar Aguilar Ochoa, Jairo Cristóbal Alejo, José M. Tún Suaréz, Luis Latournerie Moreno yAlfonzo Pérez GutiérrezComunicación cortaPrimer informe en Cuba de Largus sellatus Guérin (Hemiptera: Pyrrhocoridae) en soya (Glycine max (L.) Merrill.)Leonel Marrero Artabe, Nadir Vanessa Meneses y María A. Martínez RiveroEfectos in vitro de metabolitos de Lecanicillium lecanii (Zim.) Zare & W. Gams sobre las ootecas y juveniles delsegundo estadio del nematodo de las agallas Meloidogyne incognita (Kofoid & White) ChitwoodRaúl Hernández Hernández, Mercedes Escobar Hernández y Eulalia Gómez SantiestebanAlteraciones del contenido de clorofila inducidas por el potyvirus de la mancha anillada en hojas de papaya (Carica papaya L.)Dariel Cabrera Mederos, Rafael Sosa Martínez, Orelvis Portal Villafaña, Yasiel Alburquerque Alfonso, José E.González Ramírez y Ricardo Hernández PérezResúmenesII Conferencia Internacional sobre Alternativas al Bromuro de MetiloSesión: Estrategias generales de manejo como alternativas al bromuro de metilo en América Latina y el CaribeSesión: La técnica de injerto como una alternativa al bromuro de metilo en diferentes cultivosSesión: Desarrollo de alternativas para la eliminación del bromuro de metilo en cuarentena y prembarque, procesosde poscosecha, almacenes, instalaciones y estructurasSesión: Uso de antagonistas para la disminución del empleo de bromuro de metilo. Sesión conjunta con el II TallerLatinoamericano de Biocontrol de FitopatógenosSesión de Carteles79838995101109117121123125129134137140142

Phytosanitary diagnosisA Current Information of Main Aspects Related with Citrus leprosis virus (CiLV-C)Gloria González Arias, Mercedes Sáenz Díaz and Santiago Jiménez JiménezBiological controlEvaluation of Bacillus thuringiensis Strains for the Control of Drosophila melanogaster MaengiBertha Carreras Solís and Dayamí Rodríguez BatistaBeauveria bassiana (Bals.) Vuillemin Pathogenicity on Immature States of Bemisia tabaci Genn.Esaú Ruiz Sánchez, Agatha T. Rosado Calderón, Wilberth Chan Cupul, Jairo Cristóbal Alejo and Ricardo Munguía RosalesPotentials of Aerobic Endospore Forming Bacteria (AEFB) for Biocontrol in Ornamental PlantsTeresa de los Milagros Orberá Ratón, Manuel de Jesús Serrat Díaz and Zenia González GiroAntifungal Activity in vitro of Chitosan Sigma on Pathogen Fungi that Cause Spotted Grain in Rice (Oryza sativa L.)Deyanira Rivero González, Ariel Cruz Triana, Benedicto Martínez Coca, Miguel Á. Ramírez Arrebato and Aida T.Rodríguez PedrosoEcologyDetermination of Bacillus thuringiensis Berliner Isolates Autochthonous in CubaBertha Carreras SolísPests managementComparison of the Effectiveness of one Botanical Insecticide and two Chemical Insecticides for the Control ofPepper Weevil (Anthonomus eugenii Cano) (Coleoptera: Curculionidae) on Habanero Pepper (Capsicumchinense Jacq.)Esaú Ruiz Sánchez, Omar Aguilar Ochoa, Jairo Cristóbal Alejo, José M. Tún Suaréz, Luis Latournerie Moreno andAlfonzo Pérez GutiérrezShort communicationsFirst Report of Largus sellatus Guérin (Hemiptera: Pyrrhocoridae) on Soy Bean (Glycine max (L.) Merrill.) in CubaLeonel Marrero Artabe, Nadir Vanessa Meneses and María A. Martínez RiveroEffects of Lecanicillium lecanii (Zim.) Zare & W. Gams Metabolites on the Oothecas and Second State Juvenile ofRoot-Knot Nematode Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood in vitro conditionsRaúl Hernández Hernández, Mercedes Escobar Hernández and Eulalia Gómez SantiestebanAlterations Induced by Papaya Ringspot Potyvirus on Chlorophyll Content in Papaya (Carica papaya L.) LeavesDariel Cabrera Mederos, Rafael Sosa Martínez, Orelvis Portal Villafaña, Yasiel Alburquerque Alfonso, José E.González Ramírez and Ricardo Hernández PérezAbstractsII Internacional Conference on Alternatives to Methyl BromideSession: General strategies of management as alternatives to methyl bromide in Latin America and the CaribbeanSession: Grafting techniques as an alternative to methyl bromide in different cropsSession: Development of alternatives for eliminating methyl bromide in quarantine and pre-shipment, post-harvestprocesses, store houses, facilities and structuresSession: Use of antagonists for reducing methyl bromide use. Joint session to the II Latin- American Workshopof Phytopathogen controlPosters Session7983899510110911712112312512913413714014278/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009Diagnóstico fitosanitarioINFORMACIÓN ACTUALIZADA SOBRE LOS PRINCIPALESASPECTOS DEL VIRUS DE LA LEPROSIS DE LOS CÍTRICOS(CITRUS LEPROSIS VIRUS) (CILV-C)Gloria González Arias, Mercedes Sáenz Díaz y Santiago Jiménez JiménezInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa,Ciudad de La Habana, CP 11600, ggonzalez@inisav.cuRESUMENLa leprosis de los cítricos (Citrus leprosis virus) (CiLV-C) es unaenfermedad no presente en Cuba, que está incluida en la Lista Oficialde Organismos Cuarentenados, y se transmite preferentementepor el ácaro Brevipalpus phoenicis Geijskes, que está distribuido entodo el país. El CiLV-C se encuentra en países cercanos a Cuba, y elhecho de existir el vector puede contribuir a su diseminación una vezintroducido. Debido a esto se llevó a cabo un trabajo de actualizaciónde los principales aspectos relacionados con la virosis, y sevaloran elementos de importancia relacionados con su posible introduccióny diseminación.Palabras claves: leprosis, Brevipalpus phoenicis, cítricosABSTRACTCitrus leprosis virus (CiLV-C) is a serious viral disease not present inCuba so then it is included in Cuban Official List of QuarantinedOrganisms; it is vectored by Brevipalpus mites, and the most importantof them is Brevipalpus phoenicis Geijskes which is commonly foundin Cuban citrus. El CiLV-C is found in nearby countries and the factthat the vector is in the country may contribute to its spread if it isintroduced. In this way, a current work of main aspects related with thedisease was conducted, where important topics about its feasibleintroduction and spread are valued.Key words: leprosis, Brevipalpus phoenicis, citrusINTRODUCCIÓNDurante algunos años un limitado número de especiesde ácaros, pertenecientes a la superfamilia Eriophyoidea,se reconocieron como vectores de enfermedades virales[Oldfield y Proeseler, 1996]. Posteriormente otras especiescomo Brevivalpus californicus (Banks), Brevipalpusobovatus Donnadieu y Brevipalpus phoenicis (Geijskes),de la familia Tenuipalpidae, emergieron con esta característica,y preferentemente B. phoenicis, responsablede la presencia del virus de la leprosis de los cítricos,enfermedad no presente en Cuba.Debido a la existencia de un elemento fundamental queradica en la presencia del vector de esta virosis en Cuba,se presenta una actualización de la enfermedad basadaen revisiones de publicaciones sobre la temática y directamentede investigadores de prestigio internacional,de manera que pueda ser de utilidad para el conocimientode especialistas, investigadores y técnicosinteresados.GeneralidadesLas enfermedades transmitidas por los ácaros del géneroBrevipalpus se han agrupado en dos tipos: los viruscitoplasmáticos y los nucleares. El virus que causala leprosis pertenece a los citoplasmáticos. Se conocecomo Citrus leprosis virus (CiLV-C), e induce una inclusióndensa y vacuolada en el citoplasma de los tejidosinfectados, y presenta viriones baciliformes cortos,dentro del retículo endoplasmático. Su genoma fuecompletamente secuenciado y se demostró la presenciade dos secciones de 6 y 9 kb respectivamente, con unadoble cadena de RNA, que difiere de otros virus, por loque se propuso su inclusión en un nuevo género denominadoCilevirus [Kitajima et al., 2008].Síntomas y daños económicosEn general los síntomas causados por el CiLV-C se caracterizanpor manchas localizadas en las hojas, ramasfitosanidad/79

González y otrosy frutos. En las hojas se producen manchas circulareso elípticas y cloróticas, las que frecuentemente formananillos en número variado en las nervaduras, y algunasse tornan tan grandes que ocupan casi todo el limbofoliar. También se mantienen de pequeño tamaño y encasos de ataques severos ocurre una intensa defoliación.En los frutos el virus causa manchas pequeñas cloróticaso pardas, las que no alteran la calidad del jugo, peroreducen su valor comercial en el mercado para utilizarlosde forma natural. Entre los cultivares mayormenteafectados se encuentran los naranjos dulces, el naranjoagrio, el citrange Troyer, el mandarino Cleopatra ehíbridos de limón, y ocasionalmente afecta a losmandarinos Ponkan y Cravo. Por otra parte, el TangorMurcott, los toronjos y Shaddocks, así como los cidros,son tolerantes [Kitajima et al., 2003].El CiLV-C es una de las principales enfermedades viralesde cítricos en el estado de Río de de Janeiro [Brioso etal., 1998], donde ha causado pérdidas anuales estimadasen 40-50 millones de reales. El control de esta virosises además costosa y está basado en la aplicación demedios químicos y biológicos contra los ácaros[Rodrigues et al., 2008].TransmisiónSe ha informado que en Argentina y Venezuela la transmisiónocurre mediante B. obovatus [Vergani, 1945] yen la Florida, por B. californicus [Knorr, 1968]; pero elprincipal vector es B. phoenicis, la transmisión es deforma circulativa y el virus permanece en los ácarosdurante todo su ciclo de vida [Chiavegato, 1995]. Estudiosrecientes permitieron detectar el virus por las técnicasde RT-PCR y RT-qPCR en los ácaros, lo que corroboróque el CiLV-C no se replica en el vector, y sereveló además que las larvas y las ninfas son tambiéncapaces de transmitirlo [Kitajima et al., 2008].Un aspecto interesante es la detección de la bacteriasimbiótica Cardinium en las especies de Brevipalpusque transmiten virus y es responsable de la feminizaciónde las especies. Hasta el momento esta bacteria no intervieneen la transmisión del CiLV-C [Kitajima yRodrigues, 2008].En condiciones experimentales este virus se transmitede forma mecánica a partir de hojas de naranjos dulcesa las plantas indicadoras Chenopodium amaranticolor,C. quinoa y Gomphrena globosa, y recientemente se comprobóla posibilidad de detectar la presencia de ácarosinfectados por CiLC-V mediante la aparición de lesioneslocales en las hojas de plantas de frijol que les servíande alimento [Groot et al., 2006; Kitajima et al., 2008].HospedantesEl CiLV-C infecta, además de los cítricos, a Hibiscusrosa sinensis L., Malvaviscos arboreus Cav, Commelina spp.,Grevillea robusta A. Cunn. y Solanum violaefolium[Rodrigues et al., 2006]. En cuanto a los cítricos, enCuba la naranja dulce variedad Valencia es la que másárea ocupa, y los otros hospedantes se cultivan con diferentesfines, mientras que Solanum violaefolium noestá registrada en el país. En Cuba hasta el momentono se ha detectado la presencia del virus en estoshospedantes.Distribución geográficaEl CiLV-C fue detectado en varios países de Américadel Sur como Argentina, Paraguay, Uruguay y Brasilen 1920 y 1940 [Spegazzini, 1920; Bitancourt, 1933;Frezzi, 1940], en Venezuela [Rangel et al., 2000], CostaRica [Araya, 2000], Panamá [Domínguez et al., 2001],Guatemala [Mejía et al., 2002], Bolivia [Gómez et al.,2005], Honduras [Rodrigues et al., 2006] y recientementeen el sur de México [Kitajima, 2008, comunicaciónpersonal].Métodos de diagnósticoPara el diagnóstico del CiLV-C se han obtenido excelentesresultados mediante cortes ultrafinos y observaciónal microscopio electrónico de las partículasbaciliformes y cortas (60-70 nm x 110-120 nm), las quese alojan en las cavidades del retículo endoplasmático[Kitajima et al., 2003]. Posteriormente se demostró laposibilidad de obtener dsRNA de los tejidos de las lesiones,y a partir de este momento se conoció una secuenciaparcial del genoma del virus y se logró construiroligonucleótidos que permitieron, por primera vez,desarrollar técnicas moleculares [Locali et al., 2006].En la actualidad el genoma del CiLV-C se ha secuenciadocompletamente [Pascon et al., 2006], lo que posibilitaaún más la efectividad de estas técnicas.Elementos de importancia relacionados con la posibleintroducción y diseminación en el paísEs posible valorar que la introducción del CiLV-C puedeestar favorecida por la ocurrencia de eventos climatológicosque han ganado en severidad año tras año, alpoder trasladar los ácaros infectados de países cercanosa Cuba, o de un territorio a otro dentro del mismopaís. Después de estar presente, la posibilidad de diseminaciónde este virus es muy alta por la ocurrencia dela especie vectora preferencial B. phoenicis, por ser lanaranja dulce variedad Valencia la que mayor área ocu-80/fitosanidad

Información actualizada sobre los principales...pa entre los cítricos en Cuba, y ser muy comunes losotros hospedantes reconocidos.Se debe destacar como aspectos positivos que Cuba noimporta materiales de agrios y que están implantadaslas regulaciones cuarentenarias; pero a la vez se pudieranconsiderar algunas incertidumbres como es la posibleexistencia de otros hospedantes alternativos, latransmisión por otras especies de Brevipalpus y el limitadopersonal adiestrado en la ejecución de un sistemade diagnóstico confiable, las que pueden tener respuestasmediante resultados de investigacionesrealizadas en países donde esté presente el CiLV-C ycon una alta capacitación de los especialistas.CONCLUSIONES• Los aspectos revisados y actualizados indican la importanciade mantener una estrecha vigilancia antela posible introducción y diseminación del CiLV-C,ya que posee características propias, es capaz de sertransmitido por los adultos, larvas y ninfas de laespecie vectora, pueden existir otros hospedantesalternativos, se encuentra en países muy cercanos aCuba y los métodos de diagnóstico están basados entécnicas de avanzada.REFERENCIASAraya, J.: «Informe sobre la prospección de la «leprosis de los cítricos»en la zona fronteriza sur (Costa Rica-Panamá)», Ministerio dela Agricultura y Ganadería, Costa Rica, 2000.Bitancourt, A. 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Greggio;A. S. Zonca; V. K. Okura; M. C. Alegria; M. E. Camargo; G. G. Silva; J.C. Cardozo; M. A. Vallin; S. F. Franco; V. H. Silva; H. Jordão; F.Oliveira; P. F. Giachetto; F. Ferrari; C. L. Agiocar-Vildoso; F. J.Franchiscini; J. M. Silva, P. Arruda; J. A. Ferro; F. Reinach; A. C.Rasera da Silva: «The Complete Nucleotide Sequence and GenomicOrganization of Citrus Leprosis Associated Virus, CytoplasmicType(CiLV-C)», Virus Genes 32:289-298, EE.UU., 2006.Rangel, E.; E. W. Kitajima; M. Cerneli; F. Centeno: «Recientes avancesen el estudio de la leprosis de los cítricos en Venezuela», Memoriasdel VII Cong. Nac. Fruticult. S. Cristobal, Univ. Nac. Expt., Tachira,2000, p.154.Rodrigues, J. C.; E. C. Locali; J. Freitas; E. W. Kitajima: «Transmissibilityof Citrus Leprosis Virus by Brevipalpus phoenicis to Solanumviolaefolium», Plant Disease 89:911, EE.UU., 2005.Rodrigues, J. C.; J. A. Zuniga; D. S. Achor; C. C. Childers; E. W. 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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009Control biológicoEVALUACIÓN DE CEPAS DE BACILLUS THURINGIENSISPARA EL CONTROL DE DROSOPHILA MELANOGASTER MAENGIBertha Carreras Solís y Dayamí Rodríguez BatistaInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, bcarreras@inisav.cuRESUMENEl uso de Bacillus thuringiensis como biolarvicida es una alternativaviable para el control de insectos, por lo que el número de cepasactivas contra diptera está en ascenso. En el presente trabajo serealizó la caracterización de cepas de esta bacteria aisladas de lasdiferentes regiones de Cuba, la cual se basó en la actividad insecticidacontra Drosophila melanogaster, observación al microscopio electrónicode la mezcla de esporas y cristales, y electroforesis en gel depoliacrilamida con duodecil sulfato de sodio de la suspensión deesporas-cristales. Las cepas LBT-63 y LBT-87 mostraron similitudescon el B. thuringiensis subsp. israelensis usado en este estudio, enrelación con el perfil proteico y la morfología de las inclusiones cristalinas.Estas cepas mostraron proteínas de 130, 70 y 27 kDa y cristalesamorfos; sin embargo, solamente la cepa LBT-87 mostró actividadcontra D. melanogaster, aunque más baja que el B. thuringiensissubs. israelensis control.Palabras claves: Bacillus thuringiensis, Drosophila melanogaster, perfilproteico, cristal, toxicidadABSTRACTThe use of Bacillus thuringiensis as biolarvicide is a viable alternativefor insect control so the number of known Bacillus thuringiensis strainsactive on diptera is growing. The characterization of strains of thisbacterium isolated from different regions of Cuba is presented.Characterization was based on their insecticidal activity againstDrosophila melanogaster, electron microscopy observation of thespores and crystal mixtures and sodium dodecyl sulfatepolyacrylamidegel electrophoresis (SDS-PAGE) of spore-crystalsuspensions. Strains LBT-63 and LBT-87 displayed similarities withthe B. thuringiensis subs. israelensis used in this study with regardprofile protein and morphology of crystal inclusions. These strainshad major proteins of 130, 70 and 27 kDa and amorphous crystal;however, the strain LBT-87 only showed insecticidal activity against D.melanogaster but lower than B. thuringiensis subs. israelensis control.Key words: Bacillus thuringiensis, Drosophila melanogaster, profileprotein, crystal, toxicityINTRODUCCIÓNEl uso constante y creciente de los productos que seobtienen a partir de Bacillus thuringiensis se debe fundamentalmentea su alta especificidad, así como a suinocuidad para insectos benéficos, plantas y mamíferos,incluidos los humanos [Támez et al., 2007]. Dadassus propiedades, esta bacteria representa una alternativaútil y complementaria a los insecticidas químicosactuales para el control de algunos insectos fitófagos[Kwang-Bo y Cóte, 2002].El uso de B. thuringiensis como biolarvicida es una alternativaviable para el control de insectos. La toxicidadhacia dípteros está reportada principalmente hacialarvas de mosquitos (72 especies) y moscas negras(22 especies) [Regis et al., 2001]. La toxicidad,específicamente hacia larvas de Drosophila melanogasterMaengi se reportó por Saadoun et al. (2001) y por Al-Momani et al. (2004). Este pequeño organismo es enextremo prolífico y fácil de mantener, se alimenta decualquier materia vegetal fermentada y no necesitacuidados especiales.Drosophila transmite diversos microorganismos, enparticular levaduras de los géneros Kloeckera ySaccharomyces, y bacterias del género Acetobacter,capaces de provocar una podredumbre ácida de las frutas,caracterizada por su fuerte olor ácido parecido aldel vinagre. Los piretroides resultan muy eficaces, aunqueprecisarían tratamientos repetidos a pequeños intervalosy debe tenerse en cuenta el posible efecto favorecedorde la proliferación de ácaros.Las gran mayoría de las cepas de B. thuringiensis queconforman la colección del Laboratorio de BacteriasEntomopatógenas del Instituto de Investigaciones deSanidad Vegetal (Inisav) presentan patogenicidad, generalmentehacia lepidópteros (Plutella xyllostela, Mocisfitosanidad/83

Carreras y Rodríguezlatipes y Spodoptera frugiperda), coleópteros (Cylasformicarius), ácaros (Polyphagotarsonemus latus,Tetranichus tumidus y Phylocoptruta oleivora) ynematodos (Meloidogyne incognita) [Fernández-Larrea,1998, 1999; Márquez, 2005]. Hasta el momento no seha reportado la acción de ninguna cepa hacia dípteros,por lo que el objetivo del presente trabajo fue la evaluaciónpatogénica de cuatro cepas nativas de B. thuringiensishacia el díptero D. melanogaster.MATERIALES Y MÉTODOSLas cepas de Bacillus thuringiensis utilizadas fueronB. thuringiensis subsp. israelensis HD567 (Bti) yBacillus thuringiensis var. kurstaki (HD-1), del BacillusGenetic Stock Center (Columbus, Ohio); cepas LBT-62y LBT-63 aisladas en Ciudad de La Habana del Institutodel Arroz de Cuba, semillas de línea 8013 y variedadIA-Cuba 30, respectivamente; cepa LBT-87 aisladaen Palma Soriano, provincia de Santiago de Cuba,en suelo de cultivo de tabaco, y cepa LBT-99 aislada enSancti Spíritus, en raíz de tabaco de la variedad H1392.Las cepas se pusieron a crecer en caldo Luria Bertani(LB) [Sambrook et al., 1989] a 28-30°C con agitación a240 rpm hasta esporulación. La presencia del cristal sedeterminó mediante tinción simple con violeta cristal0,5% y observación al microscopio óptico 1000 X.Los precipitados de cultivos celulares de B. thuringiensisse fijaron en glutaraldehído al 5% en soluciónamortiguadora de fosfato de sodio 0,1 M y pH 7,4; seposfijaron en tetróxido de osmio al 2% en la mismasolución amortiguadora, se deshidrataron en una seriede disoluciones de etanol de gradación creciente desde20 hasta 100% y se infiltraron en mezclas de óxido depropileno y resina Supr. Con aumento gradual de laconcentración de Supr se incluyeron finalmente en esta.Se obtuvieron cortes ultrafinos que se contrastaron conacetato de uranilo y citrato de plomo. Las muestras seobservaron en un microscopio electrónico de transmisión,y para la observación se utilizaron dos réplicas decada muestra.La electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS (SDS-PAGE) se realizó como describieron previamenteSchagger y von Jagow (1987). Suspensiones concentradasde esporas y cristales disueltos en buffer de lisis4X se hirvieron durante 5 min. Se empleó como referenciauna suspensión del marcador de peso molecularcomercial Novagen 10-225 kDa.El primer paso para el ensayo biológico se basó en obtenerindividuos adultos de D. melanogaster Meingende la propia zona de trabajo. El método descrito porGuerrero (2003) consistió en ofrecer un medio de puestade huevos a las moscas salvajes, y con esto se dispusode individuos adultos listos para elaborar los cultivoscaseros. El medio de puesta consistió en tomar unostrozos de tomates bien maduros macerados. El oloravinagrado que produjo la fermentación resultó unpoderoso atrayente para estos insectos. Se cubrió elfondo de unos recipientes plásticos con el alimento y secolocaron en un lugar cercano soleado durante dos otres días, hasta que la multitud de estos insectos poblaronlos alrededores del recipiente y comenzaron adepositar los huevos sobre la pasta de tomates madurosfermentados. Una vez que la pasta se pobló de larvasse retiraron para establecer la cría.Los ensayos se hicieron con 20 larvas por cepa a probar.Se realizaron tres repeticiones con tres réplicas cadauna. En una placa de Petri con medio nutriente quecontenía un cultivo totalmente esporulado y cristalíferode la bacteria se colocaron 20 larvas, se sellaron conparafilm y se incubaron a 25°C.Se realizó el mismo procedimiento con una placa de Petricon medio nutriente sin cultivo de B. thuringiensis, elque se consideró como control negativo. Las placas seobservaron durante 10 días cada 24 h, y se determinaronlos parámetros de mortalidad de las larvas, formaciónde pupas y emergencia de adultos.RESULTADOS Y DISCUSIÓNLas cepas LBT-63 y LBT-87 mostraron cristalesamorfos muy similares a los encontrados en B. thuringiensissubs. israelensis; sin embargo, las cepasLBT-62 y LBT-99 manifestaron inclusiones muy pequeñasadheridas a las esporas.La SDS-PAGE de las suspensiones de esporas y cristalesmuestra que las cepas LBT-63 y LBT-87 tuvieronun patrón proteico similar al informado para B. thuringiensissubs. israelensis, con proteínas de 130, 70 y27 kDa. Las cepas LBT-62 y LBT-99 presentaron unaproteína de 27 kDa.Las Figs. 1 y 2 muestran la observación de los cristalesal microscopio electrónico de transmisión, y el patrónproteico obtenido por SDS-PGE de las cepas LBT-87y LBT-99.84/fitosanidad

Evaluación de cepas de Bacillus...Figura1. Microfotografía al microscopio electrónico de transmisión [30000 X] de las cepas de B. thuringiensis: A) Bti, se observancristales amorfos [a] con inclusiones en forma de barra [ib]; B) LBT-87, se observan cristales amorfos e unas inclusiones en formade barra, más pequeñas [ib]. Análisis SDS-PAGE 10% de proteínas Cry; C) Carril 1. Bti, 2. carril 2. LBT-87.Figura 2. Microfotografía al microscopio electrónico de transmisión [30000 X] de la cepa LBT-99 de B. thuringiensis. Cuerpoparaesporal de la cepa LBT-99 de B. thuringiensis localizado dentro del exosporio (señalizado por flecha). Análisis SDS-PAGE 10%de proteínas Cry: carril 1. HD1, 2. carril 2. LBT-99.La evaluación de la actividad biológica frente a D. melanogastermuestra cómo la cepa LBT-87 provocó unamortalidad del 70% en las larvas. De las que lograronsobrevivir y formar pupas nunca llegaron a la fase deadulto. Las cepas restantes solamente retrasaron unpoco la formación de las pupas, pero finalmente seprodujo la emergencia de los adultos. Aunque la cepaLBT-87 mostró efecto contra D. melanogaster, la virulenciaresultó menor que la obtenida con la cepa patrónBti, específica para dípteros (mosquitos y jejenes)[Golberg y Margalit, 1977] (Tabla).La toxicidad de B. thuringiensis hacia dípteros se atribuyea cepas del serotipo israelensis [Goldberg yMargalit, 1977]. Además de esta subespecie existenotros serotipos que presentan actividad tóxica hacialarvas de dípteros como lo son morrisoni, fukuokaensis,darmstadiensis, kyushuensis y jegathesan; sin embargo,israelensis es considerada la más tóxica e importante.De acuerdo con numerosos estudios e informesha resultado muy activa contra larvas de mosquitos(72 especies) y moscas negras (22 especies).La toxicidad de B. thuringiensis, específicamente cepasde patrón 134, 72 y 27 kDa hacia larvas de D. melanogaster,se informó por Saadoun et al. (2001) y porAl-Momani et al. (2004). Estos autores destacan a lascepas con cristales de morfología amorfa como las prin-fitosanidad/85

Carreras y Rodríguezcipales responsables de la patogenicidad. Los resultadosde este trabajo no coinciden totalmente, pues aunqueen el ensayo solo se probaron dos de las cepas quepresentaron este tipo de morfología, la cepa LBT-63 nomostró efecto sobre las larvas de D. melanogaster; esdecir, aunque esta cepa presentó una morfología y patrónCry informado como el más efectivo para díptero,la respuesta frente a D. melanogaster fue negativa. Esteresultado pudiera atribuirse a que la expresión de losgenes que codifican para las proteínas Cry en la cepaLBT-63 sean más bajos, como informaron Ibarra et al.(2003) en un ensayo con cepas mosquitocidas de B. thuringiensis.Estos autores plantean que los genes crypueden ser idénticos, pero los niveles de expresión de almenos alguno de ellos pueden ser diferentes, aunque lacepa tenga la combinación de proteínas más efectiva.Actividad de las cepas LBT-62, LBT-63, LBT-87 y LBT-99 frente a Drosophila melanogaster"Cepa Mortalidad de larvas Formación de pupas Emergencia de adultosTestigo No 90% (tercer día) 100% (sexto día)LBT-62 No 70% (cuarto día) 90% (séptimo día)LBT-63 No 70% (quinto día) 90% (octavo día)LBT-87 70% (quinto día) 30% (décimo día) NoLBT-99 No 70% (tercer día) 90% (sexto día)Bti patrón 100% (tercer día) – –Otra posible explicación al no efecto de la cepa LBT-63hacia larvas de D. melanogaster es la no especificidad aese díptero, como informaron Saadoun et al. (2001), alencontrar cepas de B. thuringiensis de cristales amorfoscon muy baja toxicidad hacia D. melanogaster, pero altahacia Culex sp.Las cepas LBT-62 y LBT-99 presentaron un perfil Crycaracterizado por una sola proteína de muy bajo pesomolecular, que pudiera considerarse como proteínas Cytsegún Guerchicoff et al. (2001), o como una proteína Cryde pequeño tamaño de acuerdo con lo informado porRampersad y Ammons (2005). Al no presentar estascepas actividad contra D. melanogaster, se pudiera pensarque se trata de una proteína Cry de pequeño tamaño,cuya actividad biológica no se conoce para dípteros;o de una proteína Cyt que al no estar acompañadas delas Cry de 134 y 72 kDa que conforman el patrón paradíptero, no mostraron el efecto esperado. Una de las característicasde las cepas que muestran actividad contradípteros es la presencia de toxinas Cyt, pero estas noson tóxicas por sí solas, sino que manifiestan su acciónal potenciar a las Cry y establecer una clara acciónsinérgica [Bravo et al., 2006; Soberón, 2007]. Esto explicalos resultados con las cepas LBT-62 y LBT-99.Se puede considerar que la cepa LBT-87 es promisoriano solo para el control de plagas de importancia agrícola,sino también médica, al ser D. melanogaster un vectorde enfermedades.CONCLUSIONES• Las cepas LBT-63 y LBT-87 mostraron similitudescon el B. thuringiensis subsp. israelensis en relacióncon el perfil proteico y la morfología de las inclusionescristalinas.• La cepa LBT-87 solamente mostró actividad contraDrosophila melanogaster, aunque más baja que el B. thuringiensissubs. israelensis control.REFERENCIASAl-Momani, F.; M. Obeidat; I. Saadoun; M. Meqdam: «Serotyping ofBacillus thuringiensis Isolates, Their Distribution in DifferentJordanian Habitats and Pathogenicity in Drosophila melanogaster»,World Journal of Microbiology and Biotechnology 20(7):749-753,EE.UU., 2004.Bravo, A.; M. Soberón; I. Gómez; C. Muñoz; L. Pardo; L. Galán; H. Luna;A. Alcázar; B. Pereira; J. A. Carrillo; R. García; L. Serrano; M. Patino;E. Galindo; M. C. del Rincón; J. E. Ibarra: «Los microorganismos en elcontrol biológico de insectos y fitopatógenos», Rev. Latinoam.Microbiol. 48(2):113-120, México, 2006.Fernández-Larrea, O.: «Proyecto 300104. Desarrollo de productos deBacillus thuringiensis para el control de ácaros, nematodos ycoleópteros. Etapa 01. Estudio del espectro de acción de las cepas»,Inisav, Cuba, 1998.––––: «Review of Bacillus thuringiensis Production in Cuba»,Biocontrol News and Information 20(1):47-48, EE.UU.,1999.Goldberg L. J.; J. Margalit: «A Bacterial Spore Demonstrating RapidLarvicidal Activity Against Anopheles sergentii, Uranotaeniaunguiculata, Culex univittatus, Aedes aegypti and Culex pipiens»,Mosq. News 37:355-358, EE.UU., 1977.Guerchicoff, A.; A. Delecluse; C. P. Rubinstein: «The Bacillusthuringiensis cyt Genes for Hemolytic Endotoxins Constitute a GeneFamily», Appl. Environ. Microbiol. 67:1090-1096, EE.UU., 2001.Guerrero, M.: «Las moscas de la fruta», Seca 1:71-23, 2003.86/fitosanidad

Evaluación de cepas de Bacillus...Ibarra, J. E.; M. C. del Rincón; O. Orduz; D. Noriega; G. Benintende; R.Monnerat; L. Regis; C. M. F. de Oliveira; H. Lanz; M. H. Rodríguez; J.Sánchez; G. Peña; A. Bravo: «Diversity of Bacillus thuringiensis Strainsfrom Latin America with Insecticidal Activity Against Different MosquitoSpecies», Appl. Environ. Microbiol. 69:5269-5274, EE.UU., 2003.Kwang-Bo, J.; J.Cóte: «A Review of the Environmental Impacts of theMicrobial Insecticide Bacillus thuringiensis», Agriculture and Agri-Food, Canadá. 2002. Accesible en http://www.res2.agrca7stjean/(consultado el 8 de octubre del 2003).Márquez, M. E.: «Selección y evaluación tóxico-patogénica de cepascubanas de Bacillus thuringiensis con actividad nematicida», tesisen opción al grado científico de Doctora en Ciencias Agrícolas, UniversidadCentral de Las Villas, Cuba, 2005.Rampersad, J.; A. Ammons: «A Bacillus thuringiensis Isolation MethodUtilizing a Novel Stain, Low Selection and High Throughput ProducedAtypical Results», BMC Microbiol. 5:52, 2005.Regis, L.; S. B. da Silva; M. A. V. Melo-Santos: «The Use of BacterialLarvicides in Mosquito and Black Fly Control Programs in Brazil»,Memórias do Instituto Oswaldo Cruz 95:207-210, Brasil, 2001.Saadoun, I.; F. Al-Momani; M. Obeidat; M. Meqdam; A. Elbetieha:«Assessment of Toxic Potential of Local Jordanian Bacillus thuringiensisStrains on Drosophila melanogaster and Culex sp. (Diptera)», Journalof Applied Microbiology 90(6):866-872, EE.UU., 2001.Sambrook, J.; E. F. Fritsch; T. Maniatis: Molecular Cloning. A laboratoryManual, 2 nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold SpringHarbor, NuevaYork, 1989.Schagger, H.; G. von Jagow: «Tricine-Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis for the Separation of Proteins inthe Range from 1 to 100 kDa», Analytical Biochemistry 166:368-379, EE.UU., 1987.Soberón, M.; L. E. Fernández; C. Pérez; S. S. Gill; A. Bravo: «Mode ofAction of Mosquitocidal Bacillus thuringiensis Toxins», Toxicon.49(5):597-600, México, 2007.Támez, P.; M. M. Iracheta; B. Pereira; L. J. Galán; R. Gómez; R. Támez;C. Rodríguez: «Caracterización de cepas mexicanas de Bacillusthuringiensis tóxicas para larvas de lepidópteros y coleópteros»,Ciencia UANL 8(4):477-482, México, 2007.fitosanidad/87

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009PATOGENICIDAD DE BEAUVERIA BASSIANA (BALS.)VUILLEMIN SOBRE ESTADOS INMADUROS DE MOSQUITABLANCA (BEMISIA TABACI GENN.)Esaú Ruiz Sánchez, 1 Agatha T. Rosado Calderón, 1 Wilberth Chan Cupul, 1 Jairo Cristóbal Alejo 1 y RicardoMunguía Rosales 21Instituto Tecnológico de Conkal. Km 16,3 Antigua Carretera Mérida-Motul, Conkal, Yucatán, México,CP 97345, fax (999) 9124135, esauruizmx@yahoo.com.mx2Comité Estatal de Sanidad Vegetal del Estado de Yucatán. Calle 19 no. 443, Colonia, CiudadIndustrial, CP 97288, Mérida, Yucatán, MéxicoRESUMENSe evaluó la patogenicidad de tres aislamientos nativos (Bb-Cam,Bb-C y Bb-M) y uno comercial (Bea-sin) de Beauveria bassiana (Bals.)Vuillemin en inmaduros de Bemisia tabaci Genn. La evaluación sellevó a cabo en laboratorio a temperatura de 27 ± 3ºC y humedadrelativa del 75 ± 8% con una solución conidial de 1 x 10 7 esporas • mL –1sobre huevos y ninfas de primer instar. El efecto de los hongos fuemayor en ninfas que en huevos. No se observó diferencia significativa(p > 0,05) en la mortalidad de huevos por efecto de los aislamientosde B. bassiana. En la aplicación a ninfas, los aislamientos mostrarondiferente grado de patogenicidad y sobresalió el aislamientoBea-sin como el más patogénico (p < 0,05), que causó el 67,9% demortalidad. El resto de los aislamientos causó del 42 al 50% demortalidad. Con los datos de mortalidad en ninfas se calculó el tiempomedio letal de cada aislamiento (TL 50) y el área bajo la curva de lamortalidad acumulada (ABCMA). El aislamiento que presentó menorTL 50y mayor ABCMA fue Bea-sin con 3,6 días y 381,22 unidades,respectivamente. Estos resultados indican que Bea-sin fue más virulentoque los aislamientos nativos.Palabras claves: patogenicidad, Bemisia tabaci, Beauveria bassiana,hongos entomopatógenosABSTRACTThe pathogenicity of three indigenous (Bb-Cam, Bb-C y Bb-M) andone commercial (Bea-sin) isolates of Beauveria bassiana wereevaluated on immature states of Bemisia tabaci. The evaluation wascarried out under laboratory conditions with temperature of 27 ± 3ºCand relative humidity of 75 ± 8%, by the application of a conidialsuspension containing 1 x 10 7 spores • mL –1 to eggs and first instarnymphs. The effect of B. bassiana was higher on nymphs than oneggs. No significant difference (p > 0.05) was observed on egg mortalitycaused by B. bassiana isolates. These isolates showed differentdegree of pathogenicity on nymph bioassay. The isolate Bea-sinshowed the highest (p < 0.05) effect (67.9% mortality). The rest of theisolates caused mortality from 42 to 50%. The medium lethal time(TL 50) and the area under the curve of cumulative mortality (AUCCM)were calculated for the nymph bioassay. Bea-sin showed the lowestTL 50and the highest AUCCM, with values of 3.6 days and 381.22 units,respectively. These results indicate that Bea-sin showed morevirulence than the indigenous isolates.Key words: pathogenicity, Bemisia tabaci, Beauveria bassiana,entomopatogen fungiINTRODUCCIÓNLa mosquita blanca (Bemisia tabaci (Gennadius)(Homoptera: Aleyrodidae)) es una de las plagas quelimitan el desarrollo de una amplia gama de cultivoshortícolas [Gutiérrez et al., 2007; Sotero et al., 2007].Los daños que produce pueden ser directos, como lasucción de savia, e indirectos, como la transmisión devirus fitopatógenos [Cárdenas, 1999]. Los últimos gruposde insecticidas organosintéticos que se registraronen el mercado, como los neonicotinoides y reguladoresde crecimiento, hasta hace poco habían sido un medioeficiente de manejo de B. tabaci. No obstante, en laactualidad existen numerosos reportes de resistenciade poblaciones de B. tabaci a esos grupos insecticidas[Horowitza et al., 1999; Palumbo et al., 2001; Nauen etal., 2002].El uso de hongos entompatógenos para el control biológicode B. tabaci ha cobrado importancia en los últimosaños. En este contexto, los géneros Paecilomyces,Lecanicillium, Aschersonia, Beauveria y Metarhiziumse han empleado con bastante éxito de manera experimentalo en aplicaciones de campo [Monzón, 2001; DosSantos y Pozo, 2003; Pucheta et al., 2006]. En general,los hongos representan una excelente alternativa porquepueden infectar diferentes estados de desarrollo desu hospedero y son de baja o nula patogenicidad paraorganismos benéficos y para el humano [Ferron, 1977].fitosanidad/89

Ruiz y otrosBeauveria bassiana (Deuteromycetes: Moniliales) comúnmenteparasita insectos de los órdenes Lepidoptera,Coleoptera y Hemiptera [Falcon, 1985; Tanada y Kaya,1993; Humber, 1996]. Inclusive, a nivel de campo estehongo se ha desarrollado exitosamente como agente decontrol biológico de diversos insectos plaga como el picudonegro (Cosmopolites sordidus) [Goettel, 1992;Godonou et al., 2000], la broca del café Hypothenemushampei [Gaitán et al., 2002] y la langosta (Schistocercapiceifrons) [Pariona et al., 2007]. B. bassiana también seha evaluado contra huevos y ninfas de B. tabaci, dondeeste hongo ha mostrado diferentes grados de patogenicidad.Por ejemplo, Al-Deghairi (2008) reporta queocasiona bajos porcentajes de mortalidad en huevos.Por el contrario, en algunos estudios en ninfas se hanencontrado porcentajes de mortalidad de hasta el 96,5%[Espinel et al., 2008]. La patogenicidad se ha comprobadoque depende de las características propias de losaislamientos, como lo demuestran Vicentini et al.(2001), quienes encontraron que la mortalidad de ninfasde B. tabaci varió del 6,1 a 92,3% al evaluar 50 aislamientosde B. bassiana.En el presente trabajo se evaluó la patogenicidad y virulenciade tres aislamientos nativos y uno comercialde B. bassiana en estados inmaduros de B. tabaci, conla finalidad de encontrar agentes de control biológicoefectivos y adaptados a condiciones ambientales regionales.MATERIALES Y MÉTODOSLos adultos de B. tabaci se colectaron en cultivos dechile habanero (Capsicum chinennse) del Instituto Tecnológicode Conkal (ITC), en Conkal, Yucatán, México.Los adultos se transfirieron al invernadero de adaptacióndel ITC y se colocaron en jaulas entomológicasde 1 x 0,6 x 0,6 m, hechas de malla antiáfidos y marcometálico, las que contenían plántulas de C. chinennseen macetas de plástico. Los aislamientos nativos experimentalesde Beauveria bassiana (Bb-Cam, Bb-C yBb-M) fueron aislados de mosquitas blancas por personaldel Laboratorio de Reproducción de HongosEntomopatógenos del Comité Estatal de Sanidad Vegetaldel Estado de Yucatán, México. Los aislamientosse reactivaron en el Laboratorio de Fitopatologíadel ITC en medio artificial sabouraud-dextrosa-agara temperatura de 27 ± 3ºC y fotoperíodo de 12:12luz:oscuridad. La cepa comercial Bea-sin se utilizó ensu presentación comercial.Para los bioensayos se emplearon plántulas de C. chinennsecon 30 días de edad como hospederas de B. tabaci.Los estados inmaduros del insecto se obtuvieronsegún la metodología de Muñiz y Nombela (2001). Setomaron cinco adultos de B. tabaci con un aspiradorbucal y se depositaron en una jaula pinza, sujeta a unahoja completamente extendida de la parte superior dela plántula. A las 24 h los adultos y las microjaulasfueron retirados, de tal manera que los huevosovipositados pudieran usarse inmediatamente para losbioensayos respectivos o se esperase de cinco a siete díaspara los bioensayos con ninfas de primer instar. Únicamentese dejaron de 25 a 30 huevos o ninfas por hojacomo unidad experimental.Las suspensiones de conidios para los bioensayos seobtuvieron de los aislamientos cultivados en medioSDA, a los que se agregó 10 mL de agua destilada mástween 80 al 0,05% (v/v) en las placas de Petri pararemover el micelio y esporas mediante raspado con unbisturí. El producto del raspado se filtró por medio degasas estériles para obtener suspensiones de conidiospuras; las que se ajustaron a 1 x 10 7 esporas • mL –1 conayuda de una cámara de Neubauer y un microscopiocompuesto [Alean, 2003]. Los tratamientos se aplicaronpor inmersión de las hojas de C. chinennse quecontenían los huevos o ninfas durante 15 s en las suspensionesde conidios ya mencionadas [Gindin et al.,2000]. El testigo se trató con agua destilada estéril mástween 80. Las plantas que contenían las hojas tratadasse mantuvieron en el Laboratorio de Fitopatologíadel ITC a temperatura de 27 ± 3ºC, humedad relativadel 75 ± 8% y fotoperíodo de 12:12 luz:oscuridad.Las evaluaciones de mortalidad se realizaron diariamentedurante siete días en los bioensayos con huevos ydurante 10 días en los bioensayos con ninfas. Las evaluacionesse llevaron a cabo con un microscopioestereoscópico, se registró como muertos los huevosmicosados, necrosados, deformes y no eclosionados[Gindin et al., 2000; Skrobek, 2001]; y en ninfas los criteriospara considerar ninfas muertas fueron los cambiosde coloración, brillo, forma y aspecto del cuerpo, asícomo el crecimiento de micelio sobre este [Dos Santoset al., 2003]. En todos los experimentos se utilizó undiseño completamente al azar con cuatro repeticionespor tratamiento. Los resultados de las pruebas depatogenicidad en huevos y ninfas se analizaron en elprograma estadístico SAS ver. 8 e para Windows (SASInstitute Inc., USA), con el cual también se calculó elTL 50mediante análisis probit. El área bajo la curva de90/fitosanidad

Patogenicidad de Beauveria bassiana...la mortalidad acumulada (ABCMA) se calculó por mediode la siguiente ecuación [Campbell y Madden, 1990]:ABCMAn−3= ∑ * yi+ yi+3+14 × * ti+3− ti3donde:N: Número de evaluacionesY: Porcentaje acumulado de mortalidadt: Número de días entre cada evaluaciónLa primera evaluación se llevó a cabo con t = 1 y y = 0.RESULTADOS Y DISCUSIÓN+El porcentaje de mortalidad de huevos de B. tabaci porefecto de B. bassiana varió del 21,5 a 27,5% a los sietedías después de la aplicación (dda). No se observó diferenciasignificativa (p > 0,05) entre la mortalidad producidapor los aislamientos y la registrada en el testigo(Tabla 1), en el que se observó el 16,5% de mortalidadde huevos. Otros estudios han reportado muy bajosefectos ovicidas de B. basiana en B. tabaci. Al-Deghairi(2008), por ejemplo, reportó mortalidades menores al5% al usar suspensiones de conidios similares a las evaluadasen el presente trabajo. Para efectos de comparaciónes preciso mencionar el trabajo de Gindin et al.(2000), quienes utilizaron Lecanicillium lecanii en concentracionesde 1 x 10 7 esporas • mL –1 , donde se observódel 14 al 26% de mortalidad de huevos. Ese resultadofue considerado como excelente efecto ovicida.Los porcentajes de mortalidad de ninfas de B. tabacifueron mayores que los observados en huevos. La mortalidadde ninfas por efecto de B. bassiana varió del 42al 67,8% (Tabla 1). El aislamiento Bea-sin, que ocasionóel 67,8% de mortalidad, presentó significativamentemayor virulencia que los aislamientos Bb-M y Bb-Cam,que ocasionaron el 42,5 y el 42% de mortalidad, respectivamente.Se considera entonces que los aislamientosnativos evaluados en este estudio presentan menorcapacidad patogénica que el aislamiento comercial Beasin.Aun así el efecto de los aislamientos nativos sonparecidos a los encontrados en otros estudios depatogenicidad de aislamientos nativos de B. bassianaen inmaduros de B. tabaci, como el que reporta Catie(2006), donde se encontró que los aislamientos máspatogénicos causaron el 58% de mortalidad en ninfasde primer instar.Tabla 1. Porcentaje de mortalidad acumulada en estados inmaduros de B. tabacipor efecto de B. bassiana (1 x 10 7 esporas • mL –1 ) aplicado por inmersión dehojas que contenían huevos o ninfas de B. tabaciMortalidad en huevos Mortalidad en ninfasCepa(7 dda)(10 dda)Bea-sin 21,5 ± 1,0 a 67,8 ± 4,7 aBb-C 23,3 ± 7,0 a 50,1 ± 4,6 abBb-M 27,5 ± 5,5 a 42,5 ± 3,2 bcBb-Cam 23,1 ± 8,9 a 42,0 ± 5,1 bcTestigo 16,4 ± 5,4 a 23,9 ± 3,7 cdda: Días después de la aplicación.Valores dentro de la misma columna que no comparten literales indican diferencias estadísticassignificativas (Tukey, p < 0,05)."Se obtuvieron otros parámetros indicativos de la capacidadpatogénica de los aislamientos evaluados como elárea bajo la curva de la mortalidad acumulada(ABCMA) y el tiempo medio letal (TL 50) de cada aislamiento.Al respecto se observó que Bea-sin con 381,2presentó significativamente mayor valor de ABCMAcomparado con el resto de los aislamientos que presentaronde 160 a 235,9 unidades. Por otro lado, el tiempomedio letal varió de tres a nueve días (Tabla 2). Conbase en el traslape del intervalo de confianza (IC), elaislamiento Bea-sin presentó significativamente menorTL 50con 3,6 días. Valores bajos de TL 50son indicativosdirectos de alta capacidad patogénica de los hongos.En este contexto cabe mencionar que los efectos observadosen Bea-sin están por encima de los que reportanotros autores como Vicentini et al. (2001), quienes encontraronque el tiempo medio letal era de más de sietedías en un estudio de 50 aislamientos de B. bassianabajo condiciones similares de temperatura y humedad alas prevalecientes en el presente estudio. Algunos estu-fitosanidad/91

Ruiz y otrosdios que muestran efectos mayores de B. bassiana debentomar en cuenta las condiciones de temperatura y humedadrelativa durante tales experimentos. Espinel etal. (2008), por ejemplo, encontraron hasta el 96,5% demortalidad en ninfas, pero a temperaturas más bajas yhumedad relativa más alta que las del presente estudio.Tabla 2. Área bajo la curva de la mortalidad acumulada (ABCMA) y tiempo medio letal (TL50) de B. bassiana(1 x 107 esporas • mL –1 ) en ninfas de B. tabaciCepa N ABCMA ± EEM TL 50 ± (IC; días) Pendiente Pr > FBea-sin 4 381,2 ± 42,2 a 3,6 ± (3,3-4,0) a 2,2 < 0,0001Bb-C 4 235,9 ± 23,9 b 6,3 ± (5,7-7,0) b 2,6 < 0,0001Bb-M 4 215,8 ± 19,7 b 8,8 ± (7,2-11,7) c 1,5 < 0,0001Bb-Cam 4 160,0 ± 24,9 b 9,1 ± (7,9-11,2) c 2,3 < 0,0001N: Número de repeticionesTL50 ± (IC): Tiempo medio letal ± intervalo de confianzaPr > F: Indica el ajuste del modelo de análisis probit para el cálculo de TL50Valores dentro de la misma columna que no comparten literales indican diferencias estadísticas significativas (Tukey, p < 0,05).CONCLUSIONES• Los aislamientos de B. bassiana (Bb-Cam, Bb-C yBb-M) evaluados tienen mayor capacidad patogénicaen ninfas que en huevos de B. tabaci.• Ninguno de los aislamientos nativos mostró mayorpatogenicidad que el aislamiento comercial Bea-sin,el cual causó mayor área bajo la curva de la mortalidadacumulada y menor tiempo medio letal.• Este aislamiento podría considerarse un agente potencialde control biológico de B. tabaci, alternativaque tendría aplicación tanto en sistemas de manejointegrado de plagas como en sistemas de manejoecológico y orgánico.REFERENCIASAl-Deghairi, M. 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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009POTENCIALIDADES DE BACTERIAS AEROBIAS FORMADORASDE ENDOSPORAS PARA EL BIOCONTROL EN PLANTASORNAMENTALESTeresa de los Milagros Orberá Ratón, Manuel de Jesús Serrat Díaz y Zenia González GiroUniversidad de Oriente. Ave. Patricio Lumumba s/n, reparto Quintero, Santiago de Cuba, CP 90500,Apdo. 5015RESUMENSe realizó la evaluación in vitro de la actividad inhibitoria del crecimientoque ejercen bacterias aerobias formadoras de endosporas(BAFE) sobre hongos fitopatógenos aislados de plantas ornamentales.La actividad biocida se determinó mediante la coinoculación delos hongos y los aislados bacterianos en placas Petri con agar papadextrosa Biocen. Se presentan las curvas de inhibición del crecimientopara cada hongo y el control, y se calculó el porcentaje deinhibición del crecimiento radial (PICR). El 62% de los aisladosbacterianos mostró la formación de una zona de inhibición del crecimientode los hongos, y se seleccionaron cinco con actividadinhibitoria simultánea, la cual se evidencia a partir del tercer día deincubación. En las colonias de C. lunata se observó una zona de lisisinterna y un engrosamiento del borde en la zona de inhibición. ElPICR osciló entre el 51,6 y el 72,2%. La descripción de los aisladosbacterianos basada en caracteres fenotípicos confirmó su ubicacióntaxonómica en el grupo de las bacterias aerobias formadorasde endosporas, Clase Bacilli.Palabras claves: bacilli, antibiosis, plantas ornamentalesABSTRACTThe in vitro evaluation of the growth inhibitory activity, carried out byaerobic endospore forming bacteria (AEFB) on phythopatogenic fungi,isolated from ornamental plants, was done. The biocide activity wasdetermined by the co-inoculation of fungi and bacterial isolates onPetri dishes containing Potato Dextrose Agar, BIOCEN. There werepresented the growth inhibition curves for each fungi and a control,and it was calculated the radial growth inhibition percentage (RGIP).The 62% of the bacterial isolates generate a fungal growth inhibitionarea, being selected five strains with simultaneous inhibitory activity,evident after the third day of incubation. In the colonies of Curvularialunata it was observed an internal lyses area and a dimness of thecolony border next of the inhibition zone. The RGIP oscillated between51.6 and 72.2%. The bacteria isolates description based on phenotypiccharacteristics, confirmed their taxonomic location in the aerobicendospore forming bacteria group, Bacilli Class.Key words: bacilli, antibiosis, ornamental plantsINTRODUCCIÓNLas plantas ornamentales son afectadas por hongosfitopatógenos, entre los que se encuentran incluso especiesoportunistas saprófitas del suelo. La susceptibilidadde estos cultivos a las enfermedades se debe a losmanejos a que se someten para el mejoramiento de suscualidades estéticas, como extirpación de tejidos y órganosde protección, además del cultivo ex situ[Dickinson, 1987].La producción de plantas ornamentales en Santiago deCuba está relativamente deprimida en relación con otrasprovincias del país. Las enfermedades causadas por hongosse tratan mayormente con productos químicos y solose aplica Trichoderma sp. como controlador biológico.Los géneros Bacillus y Paenibacillus se encuentran entrelas bacterias aerobias formadoras de endosporas(BAFE), miembros de la Clase Bacilli que expresan actividadpromotora de crecimiento en plantas. Variosproductos comerciales usados como fungicidas, insecticidas,nematicidas o promotores de crecimiento vegetalgenéricos se elaboran con aislados pertenecientes aambos [McSpadden, 2004]. Se destaca la especie Bacillussubtilis, considerada entre las de mayor actividad en elcontrol biológico de enfermedades de origen fúngico ybacteriano [Fernández-Larrea, 2001]. Entre los mecanismosque utilizan para el biocontrol se encuentran laantibiosis directa a través de la excreción de sustanciascon actividad biocida, tales como subtilisina, iturinasy polimixinas [Rahman et al., 2006].A pesar de las ventajas reconocidas para Bacillus ygéneros similares, por la contribución que realizan alfitosanidad/95

Orberá y otroscrecimiento y la bioprotección de especies vegetales, enel país solo la especie B. thuringiensis está incorporadaal programa nacional de producción de medios biológicos,y destinada al control de insectos plaga. Un estudiopreviamente realizado en el jardín Las Américas,centro de referencia para el cultivo de plantas ornamentalesen la provincia de Santiago de Cuba, reveló laabundancia de especies rizosféricas de Bacillus, principalmenteen canteros cultivados con Dahlia sp., Rosa sp.y Polianthes tuberosa [Orberá et al., 2005]. La capacidadde este género para solubilizar fuentes de fósforoinorgánico, la actividad ureasa y nitrato reductasa,entre otras, ofrecen posibilidades de encontrar aisladoscon actividad antifúngica, que además contribuyana mejorar la nutrición nitrógeno-fosforada de lasplantas.El objetivo de este trabajo es la evaluación de la actividadinhibitoria que ejercen aislados de bacteriasaerobias formadoras de endosporas sobre el crecimientode hongos causantes de enfermedades en plantasornamentales.MATERIALES Y MÉTODOSLa investigación se realizó en el Centro de Estudiosde Biotecnología Industrial de la Facultad de CienciasNaturales, Universidad de Oriente, Santiago deCuba.Se utilizaron 58 cepas de bacterias aerobias formadorasde endosporas, aisladas a partir de suelo rizosférico enel jardín de plantas ornamentales Las Américas, en laciudad de Santiago de Cuba, en canteros cultivados convariedades comerciales de Dahlia sp. (dalia), Rosa sp.(rosa) y Polianthes tuberosa (azucena). El aislamientofue realizado mediante una modificación al método deresistencia térmica de las endosporas, descrita porOrberá et al. (2005), la cual consiste en preincubar a45ºC durante 24 h las muestras de suelo para inducir laesporulación de las células vegetativas presentes en elmomento del muestreo. Posteriormente este se hiervedurante 15 min, y se recupera un número de aisladosde bacilos gram positivos endosporógenos en el ordende 10 3 ufc/mL [Orberá et al., 2005].Los hongos fitopatógenos fueron aislados de plantasenfermas en el área de trabajo y donados por el LaboratorioProvincial de Sanidad Vegetal para esta investigación.Las cepas utilizadas fueron Curvularia lunataCL-20, Fusarium oxysporum FO-30, Colletotrichum sp.CH-7 y Colletotrichum sp. CH-6. Los microorganismosse conservaron por subcultivo activo a 4°C, en agarnutriente las bacterias, y en agar papa y dextrosa loshongos.La evaluación in vitro del efecto inhibidor de las cepasde BAFE sobre los hongos fitopatógenos se desarrollóa través de la prueba de antibiosis en placas, reportadapor Muhammad y Amusa (2003), que consisteen la preparación de placas Petri de 90 mm dediámetro con 10 mL de agar papa dextrosa (Biocen).Las placas se dividen en cuatro cuadrantes por mediodel trazado de dos líneas perpendiculares a lo largodel diámetro, las cuales se interceptan en el centro delrecipiente. En la intersección de las líneas se siembrapor punción la cepa de hongo filamentoso. Las bacteriasse inoculan a razón de 1 mL a una concentraciónde 10 6 ufc/mL sobre las líneas, en cuatro puntosperiféricos equidistantes a 20 mm del centro de la placa.La incubación se realiza a 30 o C, en posición invertiday en la oscuridad. Se prepara además un controlconsistente en la siembra del hongo en ausencia debacterias. La observación y medición del crecimientoradial de las colonias se realizó cada 24 h durante 15días. Se confecciona la curva de crecimiento de loshongos fitopatógenos correspondiente al enfrentamientocon cada bacteria y el control. Se prepararontres réplicas para cada placa inoculada.La determinación de la inhibición del crecimientofúngico se realizó a los seis días de incubación por elmétodo reportado por Ezziyyani et al. (2004a), medianteel cálculo del porcentaje de inhibición del crecimientoradial de los hongos fitopatógenos (PICR), según la siguientefórmula:' PICR =R1 − R2322R1donde:PICR: Porcentaje de inhibición del crecimiento radial (%)R1: Valor promedio del radio de la colonia control (mm)R2: Valor promedio del radio de la colonia inhibida porlas bacterias (mm)La descripción morfológica y fisiológica de los cinco aisladosbacterianos seleccionados, para confirmar suclasificación dentro de las bacterias aerobias formadorasde endosporas, se realizó a través de las técnicas de pruebasde tinción diferencial de gram y de endosporas,96/fitosanidad

Potencialidades de bacterias aerobias formadoras...motilidad, producción de enzimas catalasa, citocromooxidasa, nitrato reductasa y ureasa, producción de indoly la fermentación y producción de gases a partir de losazúcares glucosa, sacarosa y lactosa, con la consecuenteproducción de sulfuro de hidrógeno. Por último, seevaluó el crecimiento en presencia de NaCl 10% v/v, aT > 55°C y a pH 3 [Norris y Ribbons, 1971].Los datos correspondientes a la inhibición del crecimientode los hongos fitopatógenos se procesaron mediante un análisisde varianza (Anova) de clasificación simple, con el 95%de significación estadística. La comparación de las mediasse realizó por el test de comparación de rangos múltiples deDuncan, para lo que se utilizó el paquete estadísticoStatgraphics Plus para Windows (Microsoft Corp 5.1).RESULTADOS Y DISCUSIÓNInicialmente se evaluaron 58 aislados de bacilos grampositivos formadores de endosporas, de los cuales 36(62%) mostraron formación de una zona de inhibicióndel crecimiento de al menos una de las colonias fúngicas.De estos se seleccionaron cinco ejemplares que evidenciaronactividad inhibitoria simultánea contra todoslos hongos. En la Fig. 1 se muestran las alteracionesmorfológicas que aparecen en las colonias fúngicas encocultivo con las bacterias con actividad inhibitoria,tales como el engrosamiento de los bordes en contactocon la zona de inhibición del crecimiento y la formaciónde regiones de lisis interna, similares a la autólisis queaparece en colonias en fase de decadencia.Figura 1. Cocultivo en placas de hongos fitopatógenos y bacilli (seis días de incubación). a) Colletotrichum sp. CH6; b) Curvularialunata CL-20 (B: colonias bacterianas, ZI: zona de inhibición del crecimiento fúngico, ZA: zonas de autólisis en la colonia fúngica).La flecha blanca indica la zona de engrosamiento del borde de la colonia del hongo en la zona de inhibición del crecimiento.Las curvas de inhibición del crecimiento de los hongosfitopatógenos frente a los cinco aislados bacterianosmuestran en todos los casos durante los tres primerosdías un crecimiento fúngico similar al control, el cuales inhibido posteriormente hasta el final del experimento(Fig. 2). Un efecto similar fue observado en un estudiode antibiosis en placas de las bacterias Burkholderiacepacia y Streptomyces rochei Ziyani y el hongofitopatógeno Phytophthora capsici [Ezziyyani et al.,2004b], y en estudios involucrados con Bacillus sp.,donde la aparición de la inhibición comienza a partirdel segundo día [Gong et al., 2006].abfitosanidad/97

Orberá y otroscda: C. lunata CL-20, b: F. oxysporum FO-30, c: Colletotrichum sp. CH-7, d: Colletotrichum sp. CH-6.Figura 2. Curvas de inhibición del crecimiento lineal de hongos fitopatógenos frente a bacteriasaerobias formadoras de endosporas.El porcentaje de inhibición de crecimiento de los hongososciló entre el 51,69 y el 72,22%, valores alcanzados conlos aislados SR/B-8 sobre Colletotrichum sp. CH-6 ySR/A-17 sobre F. oxysporum CL-20, respectivamente (Tabla1). El PICR de todas las cepas de hongos fitopatógenosy el análisis estadístico realizado reveló que los aisladosSR/A-1 y SR/B-16 poseen actividad inhibitoriaestadísticamente similar y superior al resto; el segundogrupo homogéneo se conforma con las bacterias SR/B-17y SR/A-17. El aislado SR/B-8, el cual mostró los menoresvalores de porcentaje de inhibición del crecimiento in vitrode los hongos, se comportó de manera independiente.Tabla 1. Efecto inhibidor del crecimiento radial (PICR) de las cepas de seleccionadassobre los hongos fitopatógenosBacteriasPorcentaje de inhibición del crecimiento radial (± Sx)CL-20 FO-30 CH-7 CH-6SR/A-1 61,05 (1,1)a 68,32 (2,6)a 58,02 (0,5)a 58,05 (1,1)bSR/B-8 52,39 (1,1)a 67,90 (1,0)b 56,1 (1,1)a 51,69 (0,6)cSR/B-16 58,65 (0,5)a 69,55 (0,5)a 58,9 (0,5)a 58,05 (0,6)bSR/B-17 56,72 (1,0)a 70,37 (1,0)a 58,5 (1,0)a 56,08 (0,5)aSR/A-17 53,8 (1,0)a 72,22 (0,5)a 60,8 (1,0)a 53,16 (1,1)aSx: Desviación estándarLetras diferentes en la columna significan diferencias estadísticas para p ? 0,05. ≤Curvularia lunata es un patógeno facultativo en plantasornamentales, cuya incidencia se favorece por la elevadahumedad y la sensibilidad de estos cultivos a lasenfermedades, en los cuales produce manchas foliaresnegras [Dickinson, 1987]. F. oxysporum y Colletotrichum sp.atacan estos cultivos y dan lugar a la podredumbreradicular y actracnosis respectivamente [Mafia et al.,2005]. El control de C. lunata se realiza con agentessecantes, aunque se han reportado cepas de Bacillus sp.con potencialidades para el control biológico de estaespecie, entre ellas Bacillus sp. BC121, aislada en larizosfera de sorgo, la cual posee además actividadquitinolítica que le permite crecer sobre las hifas [Bashay Ulaganathan, 2002]. Numerosos aislados de Bacillus sp.muestran efecto inhibidor in vitro y controlador deenfermedades causadas por F. oxysporum en tomate,F. graminearum en maíz y F. solani f. sp. phaseoli enfrijol [Rahman et al., 2006; Ding et al., 2006]. B. subtilis,B. cereus y Paenibacillus polymyxa (B. polymyxa) alcanzanmás del 52% de inhibición in vitro de Fusarium sp.debido a la excreción de subtilisina, iturina y polimixinaM [Gong et al., 2006; Ding et al., 2006]. El efecto98/fitosanidad

Potencialidades de bacterias aerobias formadoras...biocida por la producción extracelular de polipéptidosantagonistas se ha demostrado en el cocultivo de B. lentimorbusy C. gloesporoides [Young-Keun et al., 2005],en el tratamiento de la antracnosis en mora con B. amyloliquefaciensy en el enfrentamiento en placas de C. acutatumy B. subtilis.En la Tabla 2 se representan las principales característicasde los cinco aislados de bacterias aerobiasformadoras de endosporas, que mostraron actividadinhibitoria del crecimiento in vitro de los hongos causantesde enfermedades en las plantas ornamentalesobjeto de estudio. Se confirman propiedades característicasde este grupo, como la presencia de endosporas,la forma bacilar, la producción de enzimas catalasa,ureasa y nitrato reductasa, así como la motilidad[Garrity et al., 2004].Tabla 2. Principales características morfológicas y fisiológicas de los aislados de BAFE con actividad inhibitoriain vitro de hongos fitopatógenosCaracterísticas SR/A-1 SR/B-8 SR/B-16 SR/B-17 SR/A-17Morfología B B B B BMorfología de las célulasGram + + v + +Forma O O O O OEndosporasPosición C C C T TTipo de esporangio D ND ND D DMotilidad + + + + +Crecimiento en anaerobiosisAE AE MA AE MABioquímica Indol – – – – –Crecimiento en 10% NaCl – – – – –Crecimiento a T > 55ºC – – – – –G + + + + +S – – – – –Fermentación de azúcaresL – – – – –Gas – – – – –H 2S – – – – –Producción de enzimasOxidasa – – – – –Catalasa + + + + +Nitrato reductasa + + + + +Nitrogenasa – – – – –Ureasa + + + + +B: Bacilos, O: Ovovide, C: Central, D: Deformado, ND: No deformado, AE: Aerobio estricto, MA: Microaerófilo, v: Variable, T: Terminal, G: Glucosa,S: Sacarosa, L: LactosaCONCLUSIONES• La evaluación de la actividad inhibitoria in vitro debacterias aerobias formadoras de endosporas, aisladasa partir de rizosfera de plantas ornamentalesafectadas por hongos fitopatógenos, permitieronobtener aislados con potencialidades para el controlbiológico de las enfermedades de origen fúngico. Ladescripción morfofisiológica de las bacterias confirmalas características de la Clase Bacilli.REFERENCIASBasha, S.; S. Ulaganathan: «Antagonisms of Bacillus Species (strainBC121) Towards Curvularia lunata», Current Science 82(12):1458-1463, EE.UU., 2002.Dickinson, C. H.: Patología vegetal y patógenos de plantas, Ed. Limusa,México, 1987.Ding, N. G.; Y. J. Wang; Y. Liu; S. Chen: «Isolation and identification ofnitrogen–fixing bacilli from plant rhizospheres in Beijing region»,Journal of Applied Microbiology 99(5):1271-1275, Oxford, 2006.Ezziyani, M.; C. Pérez; M. E. Requena; L. Rubio; M. E. Candela:«Biocontrol por Streptomyces rochei Ziyani, de la podredumbre delfitosanidad/99

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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA IN VITRO DE LA QUITOSANASIGMA FRENTE A HONGOS FITOPATÓGENOS CAUSANTESDEL MANCHADO DEL GRANO EN EL CULTIVO DE ARROZ(ORYZA SATIVA L.)Deyanira Rivero González, 1 Ariel Cruz Triana, 1 Benedicto Martínez Coca, 2 Miguel Á. Ramírez Arrebato 1 yAida T. Rodríguez Pedroso 11Estación Experimental de Arroz Los Palacios, Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas. CarreteraLa Francia, Km 1½, Los Palacios, Pinar del Río, Cuba, CP 22900, deyanira@inca.edu.cu2Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Autopista Nacional y Carretera de Jamaica, Apdo. 10,San José de las Lajas, La Habana, CP 32700RESUMENMediante el método de envenenamiento del medio de cultivo papadextrosa agar se determinó la actividad antifúngica in vitro de diferentesconcentraciones (300, 500, 700 y 1000 mg/L) de la quitosanacomercial Sigma, sobre el crecimiento micelial y la esporulación delos hongos fitopatógenos causantes del manchado del grano en arrozAlternaria padwickii (Ganguly) Ellis, Bipolaris oryzae (Breda de Haan)Shoemaker, Curvularia lunata (Wakker) Boedijn, Fusarium verticillioides(Saccardo) Nirenberg, Phoma sp. Saccardo y Sarocladium oryzae(Sawada) Gams & Hawksworth. La quitosana mostró especificidaden su actividad inhibitoria sobre el crecimiento micelial de los hongos,que fue máxima a la concentración de 1000 mg/L, excepto paraPhoma sp. Se observó además acción fungicida del polímero sobreA. padwickii y B. oryzae, y fungistática sobre el resto de los hongos,con retraso del crecimiento sobre F. verticillioides. También se obtuvoreducción en la esporulación a medida que se incrementó la concentraciónde producto. Esto hace de la quitosana Sigma una alternativapromisoria para el manejo de la enfermedad.Palabras claves: quitosana, hongos patógenos, manchado del grano,arrozABSTRACTThe antifungal activity of commercial chitosan Sigma at concentrationsof 300, 500, 700 and 1000 mg/L on mycelial growth and sporulation ofthe rice spotted grain pathogen fungi Alternaria padwickii (Ganguly)Ellis, Bipolaris oryzae (Breda de Haan) Shoemaker, Curvularia lunata(Wakker) Boedijn, Fusarium verticillioides (Saccardo) Nirenberg, Phomasp. Saccardo and Sarocladium oryzae (Sawada) Gams & Hawksworthwas determined in vitro through the poisoning Potato-Dextrose-Agarmedia. Chitosan showed specificity in its inhibitory activity on fungimycelial growth, and it was highest at concentration of 1000 mg/L,except for Phoma sp. Fungicidal action of the polymer on A. padwickiiand B. oryzae was observed also and fungistatic action on the rest offungi, with delayed growth on F. verticillioides. Fungal sporulationreduction while the concentration product increased was obtained.That is why chitosan Sigma is considered a promising alternative forthe disease management.Key words: chitosan, pathogen fungi, spotted grain, rice.INTRODUCCIÓNEl arroz constituye la base de la dieta de la poblacióncubana, con un consumo per cápita anual muy superioral de los restantes países de la región; sin embargo,la producción nacional satisface solamente una terceraparte de la demanda. Dada la situación de emergenciaalimentaria mundial se hace necesario enfrentar lascausas fundamentales que afectan el rendimiento delcereal.Una de estas causas es la incidencia de numerosas enfermedades,que son favorecidas por las condicionesclimáticas y las tecnologías de siembra del cultivo [IIA,2006]. Dentro de estas, el manchado del grano incidede forma negativa sobre componentes del rendimientoal producir alto porcentaje de vaneo, afectar lagerminación entre el 26 y el 41%, así como el vigor ytamaño de las plántulas; disminuye el número de granospor panícula y el peso de los granos hasta el 40%, yel llenado en el 30% [Cordero y Rivero, 2001; Pinciroliet al., 2003]. Por otra parte, demerita la calidad de lasemilla, pues reduce el número de granos enteros,incrementa tanto los granos quebradizos en el procesode molino como los yesosos y de coloración anormal[Cisterna et al., 1994]. Los agentes fungosos causalesdel manchado se transmiten a través de la semilla, loque trae aparejada la incidencia de estos patógenos enfitosanidad/101

Rivero y otrosotras etapas fenológicas del cultivo y conducen, en últimainstancia, a las mermas en los rendimientos delcereal [Gutiérrez et al., 2001].Las medidas técnicas del cultivo incluyen aplicacionesfoliares preventivas de fungicidas sintéticos, en distintasfases del ciclo del cultivo, y tratamiento químico a lasemilla. No obstante, la enfermedad persiste en las áreasde siembra. Es por eso que se trabaja en la búsqueda denuevas alternativas que permitan un mejor manejo. Eneste sentido, diferentes estudios indican que la quitosanatiene la potencialidad de inhibir el crecimiento micelialde numerosos hongos fitopatógenos y de estimular losmecanismos de defensa de las plantas [Synowiecky yAl-Khateeb, 2003; Hernández, 2004; Chien y Chou, 2006;Eweis et al., 2006]. El objetivo del trabajo consistió endeterminar el efecto in vitro de la quitosana Sigma sobreel crecimiento y desarrollo de hongos fitopatógenos causantesde manchado del grano en arroz.MATERIALES Y MÉTODOSEn los diferentes ensayos para determinar el crecimientomicelial de los hongos causantes del manchado del granose utilizó la quitosana comercial (Sigma), con grado dedesacetilación de 90,5 y masa molecular de 8,0 x 10 5[Ramírez et al., 2006]. Se emplearon los aislamientosde los hongos patógenos de granos de arroz Alternariapadwickii, Bipolaris oryzae, Curvularia lunata,Fusarium verticillioides, Phoma sp. y Sarocladiumoryzae, pertenecientes al Laboratorio de Micología Vegetaldel Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Eltrabajo experimental se realizó en el propio centro enel período 2004-2006.El efecto de la quitosana se determinó mediante el métodode envenenamiento del medio de cultivo PDA, a lasconcentraciones efectivas del compuesto de 0 (tratamientocontrol), 300, 500, 700 y 1000 mg/L. Se sembrarondiscos de micelio de 0,5 cm de diámetro de cada aislamientoen el centro de placas Petri con medio envenenado,ajustado a pH 5,2; a razón de un disco por placa concuatro repeticiones. Los discos miceliales se obtuvieronde la periferia de las colonias a partir de cultivos fungosospuros de cinco días de edad, en medio PDA, incubado enoscuridad a una temperatura de 26 ± 2ºC. Se midió eldiámetro de las colonias (en centímetros) desde los tresy hasta los siete días, se le restó el diámetro del discosembrado y se calculó el porcentaje de inhibición del crecimientomicelial mediante la fórmula:% Inhibición = [(1 – (diámetro de la colonia tratada / diámetro de la colonia control)] x 100Se determinó además la velocidad de crecimiento de lospatógenos (en centímetros por hora) a los tres, cuatro,cinco, seis y siete días, mediante la razón del crecimientofúngico relativo (incremento del diámetro de la coloniaen un intervalo de tiempo) sobre el intervalo de tiempotranscurrido.La actividad fungicida se verificó en las variantes, dondese obtuvo el 100% de inhibición del crecimientofúngico. Para ello se sembraron los discos (de manerainvertida) de estas variantes en medio PDA sinquitosana, y se incubaron en las condiciones descritasanteriormente.Se midió el diámetro de cada colonia (en centímetros)desde los tres hasta los siete días y se utilizó como controlun cultivo del hongo crecido a partir de un disco demicelio no tratado con quitosana, sembrado e incubadoen las mismas condiciones que los tratados.Transcurridos siete días del ensayo de inhibición delcrecimiento micelial, se añadieron 10 mL de agua destiladaestéril a cada placa de cultivo, se removieron conuna espátula de vidrio flameada y se realizaron diluciones1:10 en todos los tratamientos, a fin de determinarel efecto de la quitosana sobre la esporulación de loshongos patógenos.La concentración de conidios se determinó mediante elempleo de la cámara de Thoma. También se determinóla producción de conidios por unidad de área de crecimientofúngico (conidios por centímetro cuadrado) segúnla fórmula:donde:c: conidios/unidad de árear: radio de crecimiento del hongoPara la realización de estos ensayos se utilizó un diseñocompletamente aleatorizado. Con los datos corresponno.de conidiosc = πr 2102/fitosanidad

Actividad antifúngica in vitro de la...dientes a los porcentajes de inhibición y velocidad decrecimiento se realizó un análisis de varianza simplepara cada patógeno en cada momento de evaluación. Elanálisis de la actividad fungicida se realizó mediante laprueba de comparación de medias con muestras independientesa través del estadígrafo t de student. Losdatos correspondientes a la concentración de conidiosy la producción de conidios/unidad de área se transformaronmediante la expresión √(x + 3/8) y se procesarona través de un Anova simple. Las medias sedocimaron mediante la prueba de rangos múltiples deDuncan (p < 0,05).RESULTADOS Y DISCUSIÓNEn todos los tratamientos con quitosana y en todos losmomentos evaluados se observó una reducción delcrecimiento micelial del patógeno respecto al control (Tabla1). De forma general el porcentaje de inhibición deese crecimiento se acentuó a medida que se incrementóla concentración de quitosana; sin embargo, no presentarondiferencias significativas los tratamientos 500,700 y 1000 mg/L de quitosana Sigma para C. lunata.Se alcanzó una alta inhibición a la concentración de 700 mg/Ly el valor máximo (100%) para la concentración de 1000 mg/L,para todos los patógenos evaluados, excepto Phoma sp.;a 700 mg/L se observó además la inhibición total paraS. oryzae; sin embargo, Cruz et al. (2005) obtuvieronel 30% de inhibición del hongo S. oryzae a la concentraciónde 1000 mg/L de la quitosana Q-63, con el 63%de desacetilación mediante un método en el cual se exponeel patógeno al producto durante un tiempo menor.Una de estas dos causas pudo haber influido en losresultados.Tabla 1. Efecto de la quitosana Sigma sobre el crecimiento micelial de hongos fitopatógenos causantes del manchadodel grano de arrozTratamientos(mg/L)Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial por día para cada patógeno3 4 5 6 7 3 4 5 6 7A. padwickii B. oryzaeControl 0 c 0 e 0 e 0 e 0 e 0 d 0 e 0 e 0 e 0 eSigma-300 66 b 42 d 50 d 43 d 41 d 58 c 46 d 51 d 46 d 44 dSigma-500 98 a 86 c 80 c 72 c 63 c 89 b 78 c 76 c 71 c 64 cSigma-700 100 a 95 b 94 b 93 b 90 b 98 a 91 b 89 b 85 b 80 bSigma-1000 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 aESx 0,077 0,044 0,033 0,023 0,019 1,179 0,054 0,268 0,487 0,791TratamientosC. lunata F. verticillioides(mg/L)Control 0 c 0 c 0 c 0 c 0 c 0 e 0 e 0 e 0 d 0 eSigma-300 37 b 33 b 39 b 39 b 42 b 59 d 52 d 48 d 45 c 46 dSigma-500 88 a 89 a 85 a 85 a 84 a 68 c 66 c 59 c 57 b 57 bSigma-700 98 a 94 a 87 a 78 a 71ab 82 b 70 b 63 b 55 b 49 cSigma-1000 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 aESx 0,204 0,206 0,262 0,286 0,314 0,967 0,604 0,664 0,823 0,432Tratamientos(mg/L)Phoma sp.S. oryzaeControl 0 d 0 d 0 d 0 c 0 c 0 d 0 d 0 d 0 d 0 dSigma-300 8 c 8 c 11 c 13 b 12 b 40 c 37 c 40 c 47 c 44 cSigma-500 13 c 12 c 17 c 14 b 17 b 60 b 60 b 62 b 62 b 61 bSigma-700 51 b 41 b 31 b 31 a 31 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 aSigma-1000 81 a 68 a 56 a 38 a 33 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 aESx 0,074 0,056 0,056 0,081 0,100 0,050 0,060 0,061 0,058 0,063Medias con letras iguales en la columna no difieren significativamente (p ‹ 0,05).El hongo fitopatógeno Phoma sp. fue el que menos se afectó.La mayor inhibición se obtuvo con 700 y 1000 mg/Lde quitosana Sigma (51 y 81%, respectivamente a lostres días), sin diferencia entre ellos a partir de los seisdías y con valores inferiores al 40%. Tanto en este comoen otros tratamientos hubo una reducción del porcentajede inhibición final; pero generalmente siguieron lamisma tendencia de incremento respecto a la concentra-fitosanidad/103

Rivero y otrosción, y mostraron la potencialidad del compuesto de inhibirel crecimiento micelial de este patógeno.El efecto de las quitosanas sobre otros hongos fitopatógenostambién ha sido alentador. Tales son los casosde los patógenos del arroz Rhizoctonia solani y Pyriculariagrisea, que al ser tratados con quitosana Q-63 y suhidrolizado a la concentración de 1000 mg/L mostraronel 100% de inhibición del crecimiento [Parra y Ramírez,2002; Rodríguez et al., 2003]. En ensayos in vitro conPhytophthora parasitica se alcanzaron niveles cercanosal 90% de inhibición mediante el empleo de quitosana ysus hidrolizados enzimáticos [Falcón et al., 2004]. ElHassni et al. (2004) obtuvieron el 75% de inhibición delcrecimiento de F. oxysporum Schlechtendahl f. sp.albedinis (Killian & Maire) Gordon a la concentraciónde 1000 mg/L de quitosana en medio sólido, y total inhibiciónen medio líquido; esto pudiera explicar que algunasdiferencias en los resultados dependen del tiempo decontacto del producto con los patógenos, aspecto que hade tenerse en cuenta para su aplicación práctica.No obstante los excelentes resultados a la concentraciónde 1000 mg/L de quitosana Sigma, hay especiescomo Rhizopus stolonifer, Phytophthora infestans(Montagne) de Bary y Fusarium oxysporum que requirieronelevadas concentraciones (4000 mg/L) para lograruna alta inhibición [Pombo, 1996]. En un estudiode actividad antimicrobiana de derivados de quitosanafueron necesarias concentraciones de hasta 10 000 mg/Lcontra F. oxysporum, y sin embargo no lograron inhibirlos hongos Rhizopus nigricans Ehrenberg y Gloeosporiumfructigenum Berk. [Peng et al., 2005].De forma general se demuestra, al igual que con losresultados de los autores anteriores, que existe diferenciaen la inhibición del crecimiento en dependenciadel género al que pertenecen los hongos, es decir,que hay especificidad en la actividad inhibitoria.Al analizar las velocidades de crecimiento de los principalespatógenos de la semilla de arroz (Tabla 2) se apreciaque fueron generalmente similares o inferiores a lasdel tratamiento control, con excepción de algunos tratamientospara Phoma sp. a los seis y siete días.Tabla 2. Efecto de la quitosana Sigma sobre la velocidad de crecimiento de patógenos fungosos del manchado del grano de arrozTratamientos(mg/L)Velocidad de crecimiento (mm/h) por día para cada patógeno3 4 5 6 7 3 4 5 6 7A. padwickii B. oryzaeControl 0,19 a 0,22 a 0,43 a 0,19 a 0,25 a 0,56 a 0,47 a 0,5 a 0,47 a 0,47 aSigma-300 0,06 b 0,26 a 0,15 b 0,21 a 0,17 c 0,24 b 0,44a 0,15 b 0,36 b 0,35 bSigma-500 mg/L 0,00 c 0,10 b 0,14 b 0,15 a 0,22 b 0,06 c 0,29 b 0,15 b 0,28 c 0,39 bSigma-700 0,00 c 0,04 c 0,03 c 0,03 b 0,07 d 0,01 d 0,15 b 0,10 b 0,18 d 0,26 cSigma-1000 0,00 c 0,00 c 0,00 c 0,00 b 0,00 e 0,0 d 0,00 c 0,00 b 0,00 e 0,00 dESx 0,01 0,02 0,01 0,02 0,01 0,01 0,05 0,05 0,02 0,02Tratamientos(mg/L)C. lunata F. verticillioidesControl 0,55a 0,47 a 0,50 a 0,47 a 0,47 a 0,50 a 0,69 a 0,45 a 0,53 a 0,44 aSigma-300 0,24 b 0,44a 0,15 b 0,36 b 0,35 b 0,21 b 0,44 b 0,32 b 0,36 c 0,22 bSigma-500 0,06 c 0,29 b 0,15 b 0,28 c 0,39 b 0,16 c 0,26 d 0,35 b 0,28 d 0,18 bSigma-700 0,01 d 0,15 b 0,10 b 0,18 d 0,26 c 0,09 d 0,38 c 0,33 b 0,44 b 0,42 aSigma-1000 0,00 d 0,00 c 0,00 b 0,00 e 0,00 d 0,00 e 0,00 e 0,00 c 0,00 e 0,00 cESx 0,01 0,05 0,05 0,02 0,02 0,01 0,02 0,01 0,02 0,03Tratamientos(mg/L)Phoma sp.S. oryzaeControl 0,55 a 0,51 a 0,58 ab 0,19 b 0,28 b 0,12 a 0,14 a 0,18 a 0,31 a 0,31aSigma-300 0,50 a 0,49 a 0,45 cd 0,11 b 0,27 b 0,07 b 0,10 ab 0,10 ab 0,10 b 0,10 bSigma-500 0,48 a 0,46 a 0,39 d 0,24 b 0,14 b 0,05 c 0,06 bc 0,06 b 0,11 b 0,06 bSigma-700 0,27 b 0,46 a 0,61 a 0,15 b 0,14 b 0,00 d 0,00 d 0,00 b 0,00 c 0,00 cSigma-1000 0,11 c 0,38 b 0,51 bc 0,41 a 0,48 a 0,00 d 0,00 d 0,00 b 0,00 c 0,00 cESx 0,02 0,02 0,02 0,05 0,05 0,00 0,02 0,04 0,08 0,07Medias con letras iguales en la columna no difieren significativamente (p < 0,05).104/fitosanidad

Actividad antifúngica in vitro de la...Se alcanzaron reducciones mayores de la mitad de lavelocidad de crecimiento respecto al control no tratado,y un valor nulo de velocidad para todos lospatógenos a la mayor concentración, excepto paraPhoma sp. En este patógeno se logró una reducción dela velocidad de crecimiento en algunas variantes durantelas primeras evaluaciones.Para los hongos A. padwickii, B. oryzae, C. lunata, F.verticillioidesy S. oryzae, la acción de la quitosana sobre lavelocidad de crecimiento fue al parecer la causa de lareducción final del crecimiento micelial de losfitopatógenos, lo que evidencia el efecto fungistáticode este producto.La quitosana Sigma mostró una acción fungistáticasobre el hongo Phoma sp. al inhibir su crecimientomicelial respecto al tratamiento sin quitosana (Tabla 1);no obstante, no se llegó a una total inhibición del crecimiento,y por lo tanto no tuvo efecto fungicida sobreél.Independientemente de estos resultados, a la concentraciónde 1000 mg/L este compuesto mostró actividadfungicida sobre los hongos A. padwickii y B. oryzae,pues no presentaron viabilidad al colocarse en condicionesfavorables de cultivo. Con esto se infiere que porla acción del compuesto tuvieran lugar cambios irreversiblesen las estructuras vegetativas o reproductivasde estos hongos; sin embargo, en los tratamientos conquitosana Sigma a la concentración de 1000 mg/L frentea C. lunata y F. verticillioides (Figs. 1 A y B), y alhongo S. oryzae (Fig. 1 C) a las concentraciones 700 y1000 mg/L, al parecer solo se manifiesta una excelenteactividad fungistática, ya que los hongos C. lunata yS. oryzae recuperaron rápidamente su normal desarrolloen el medio de cultivo no envenenado, sin afectaciónaparente en sus hifas o propágulos.En el caso de F. verticillioides, aunque no se observóefecto fungicida, se apreció un retraso del crecimientocon respecto al control, con diferencia significativa entodas las evaluaciones, lo que pudiera deberse a un efectofungitóxico residual de la quitosana Sigma a 1000 mg/Lo a alguna afectación genética.La actividad fungicida de la quitosana y de sus diferentesderivados sobre algunos hongos fitopatógenosfue notificada por Rodríguez et al. (2003), quienes laobservaron a las concentraciones de 1000 mg/L, y 500y 1000 mg/L, de una quitosana con el 63% de desacetilacióny su hidrolizado, respectivamente, frente aP. grisea. Otros compuestos hidroxipropilados derivadosde quitosana han mostrado también actividadbiocida contra Coniella diplodiella (Speg.) Petrak &Sydow y F. oxysporum a concentraciones entre 1100 y10 000 mg/L [Peng et al., 2005].Los efectos de estos compuestos sobre algunos hongosfitopatógenos no se limitan a cambios fisiológicos o metabólicos,sino que provocan alteraciones morfológicas considerablesen el micelio, como es el caso de F. oxysporum f. sp.albedinis, a la concentración de 1000 mg/L de quitosana,que presentó vesículas en el interior de las paredes celulares,vacuolización y posterior pérdida del contenidocitoplasmático, además de provocar constricción delplasmalema y deposición de quitina entre este y la paredcelular [El Hassni et al., 2004].fitosanidad/105

Rivero y otrosEfecto del postratamiento con la quitosana Sigma sobre hongos patógenos del grano de arroz.A) C. lunata, B) F. verticillioides, C) S. oryzae.En la Tabla 3 se refleja el efecto de la quitosana sobre laesporulación total y la producción de conidios por unidadde área de los hongos patógenos del grano de arrozC. lunata, F. verticillioides y S. oryzae.Al analizar la esporulación total se observa que todoslos tratamientos difieren significativamente del control.La producción de conidios decrece a medida que seincrementa la concentración del compuesto. A la concentraciónde 1000 mg/L no hubo crecimiento de ningunode los hongos, y por tanto no se obtuvo esporulación.Esto se observa también para la concentraciónde 700 mg/L frente a S. oryzae.Resultados de otros autores [Cruz et al., 2005] muestranreducciones de hasta la mitad de la concentraciónde esporas de S. oryzae a la concentración de 1000 mg/Lde la quitosana Q-63; de macroconidios de F. solani a700 mg/L, e inhibición total a 1000 mg/L [Eweis et al.,2006]; sin embargo, estos compuestos no solo reducenla esporulación, sino que pueden disminuir la viabilidadde las esporas en más del 90% [Król, 2005].106/fitosanidadTabla 3. Efecto de la quitosana Sigma sobre la esporulación de Curvularia lunata,Fusarium verticillioides y Sarocladium oryzaeHongosCurvularia lunataFusariumverticillioidesSarocladiumoryzaeTratamientos(mg/L)Concentraciónde conidios(x 10 7 conidios/mL)Producción de conidiospor área(x 10 6 conidios/cm 2 )Control 6,63 a 1,23 bSigma-300 3,12 d 1,71 bSigma-500 1,50 e 0,38 deSigma-700 0,98 f 0,59 cdSigma-1000 0,00 g 0,00 eESx 0,107 0,185Control 7,10 a 1,06 dSigma-300 3,58 b 1,68 bSigma-500 1,15 e 0,82 dSigma-700 1,77 d 0,94 dSigma-1000 0,00 f 0,00 eESx 0,138 0,088Control 2,10 a 4,32 bSigma-300 1,02 b 6,31 aSigma-500 1,05 b 3,48 bSigma-700 0,00 c 0,00 cSigma-1000 0,00 c 0,00 cESx 0,216 0,205Medias con letras iguales en la columna no difieren significativamente (p < 0,05).

Actividad antifúngica in vitro de la...La producción de conidios por unidad de área (Tabla 3)mostró reducción de manera significativa para las variantes500 y 700 mg/L frente a C. lunata. En la mayoríade los casos en que hubo inhibición del crecimientode estos tres patógenos a los siete días (Tabla 1) a lasdiferentes concentraciones de quitosana, no se detectarondiferencias significativas en cuanto a la esporulaciónpor área, lo que evidencia que no se afectó ese proceso.Aún más, en los tratamientos de 300 mg/L para F. verticillioidesy S. oryzae se observó una estimulación dela producción de esporas por área, aspecto importantísimoque ha de tenerse en cuenta para la aplicaciónpráctica del producto.CONCLUSIONES• La quitosana Sigma tuvo especificidad en la actividadinhibitoria sobre el crecimiento y esporulaciónde los hongos patógenos del grano de arroz.• Se alcanzó la máxima inhibición (100%) del crecimientoy la esporulación de los hongos a la concentraciónde 1000 mg/L.• Quitosana Sigma a 1000 mg/L tuvo efecto fungicidasobre Alternaria padwickii y Bipolaris oryzae.• Phoma sp. fue el hongo que mostró mayor resistenciaal tratamiento con quitosana.REFERENCIASChien, P.; C. 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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009EcologíaOBTENCIÓN DE AISLADOS DE BACILLUS THURINGIENSISBERLINER AUTÓCTONOS DE CUBABertha Carreras SolísInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, bcarreras@inisav.cuRESUMENLa presencia de aislados nativos de Bacillus thuringiensis se determinómediante el análisis de 87 muestras colectadas de las diferentesregiones de Cuba. El proceso de pasteurización se utilizó para laselección de colonias esporuladas crecidas en medio nutriente. Lascolonias se seleccionaron por su aspecto y morfología medianteobservación al microscopio estereoscópico. Se observó la típicaforma bacilar, posición y morfología de la endospora por microscopíaóptica, características del grupo cereus del género Bacillus. La especieB. thuringiensis se reconoció básicamente debido a la presenciadel cristal paraesporal. El índice B. thuringiensis obtenido se determinópor la relación entre el número de colonias de B. thuringiensisseleccionadas y el número total de colonias examinadas en la muestra.Colonias de 1-1,5 cm de diámetro, planas, opacas, de color blanco-grisáceo,de consistencia ligeramente costrosa, bordes irregulares,células vegetativas en forma de bacilos y esporas elipsoidalesen posición terminal dentro de la célula vegetativa permitieron laselección de 609 colonias esporuladas. De estas, 341 colonias seclasificaron como B. thuringiensis sobre la base de la producción delcristal paraesporal. Los aislados de B. thuringiensis mostraron tresmorfologías del cristal: bipiramidales predominantemente amorfos ydos aislados produjeron cuerpos paraesporales pequeños con aparienciade gorro sobre la espora. Los índices de B. thuringiensisvariaron de 0,37 a 0,74, y el índice medio en el total de coloniasobservadas fue de 0,56.Palabras claves: Bacillus thuringiensis, aislamiento, cristalparaesporalABSTRACTThe presence of native isolates of Bacillus thuringiensis was determinedby the analysis of 87 samples collected from different regions ofCuba. The pasteurization was utilized for the selection of sporulatingcolonies growed in nutrient medium. The colonies were selectedbecause of their aspect and morphology by stereoscopic observation.It was observed the typical bacilar shape, position and morphology ofthe endospore by light microscopy, characteristics of cereus group,Bacillus genus. The bacterium was recognized basically due to thepresence of a paraesporal crystal. The B. thuringiensis index obtainedwas determined by the relation between the numbers of B. thuringiensiscolonies found with respect to the total number of colonies examinedin the sample. 1-1,5 cm diameter colonies, plane, opaque, white-gray,lightly scabby consistence, irregular border, vegetative cells the typicalbacilar shape and elipsoidal terminal endospores inside the vegetativecell allowed the selection of 609 sporulating colonies. From these,341 colonies were classified as B. thuringiensis based on theproduction of parasporal crystal. B. thuringiensis isolates showed threecrystal morphologies: bipyramidal mainly, amorphous, two isolatesproduced small parasporal bodies which appeared as a «cap» on thespore. The B. thuringiensis index varied from 0.37 to 0.74 and the B.thuringiensis index total was 0.56.Key words: Bacillus thuringiensis, isolates, parasporal crystalINTRODUCCIÓNLos productos que se obtienen a partir de la bacteriaBacillus thuringiensis Berliner dominan el mercado delos bioplaguicidas, y el uso constante y creciente de susproductos por cuatro décadas se debe fundamentalmentea su alta especificidad, así como a su inocuidad parainsectos benéficos, plantas y mamíferos, incluidos loshumanos [Ghelardi et al., 2002; Támez et al., 2007]. Elcomponente tóxico principal de B. thuringiensis es laproteína cristal (Cry) o δ-endotoxina, la cual tiene unespectro de actividad biológica definido, usualmenterestringido a pocas especies dentro de un grupo particularde organismos.La búsqueda de nuevas cepas de esta bacteria en loshábitats naturales, donde se encuentra con relativa frecuencia,se ha convertido en una práctica internacionalque ha permitido aumentar las posibilidades de uso apartir de nuevas potencialidades de control sobre organismosque constituyen plagas. Mediante la prospeccióny aislamiento en diferentes regiones geográficas seha logrado el enriquecimiento de los ceparios que conservanesta especie con un elevado potencial para el controlde insectos y otros organismos plaga [Martin yTravers, 1989; Ruiz de Escudero et al., 2004; Armengolet al., 2007; Rosas et al., 2008].fitosanidad/109

Carreras SolísEl Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal(Inisav) ha tenido la responsabilidad de conservar ysuministrar las cepas para la producción de bioplaguicidasen Cuba, y cuenta con un grupo de cepasde B. thuringiensis cuyo origen no está totalmente definidodebido a que no se ha realizado un estudio orientadoa determinar la presencia de B. thuringiensis endiferentes hábitats de las regiones del país y que permitaconocer el verdadero potencial de esta especie. Demanera que el objetivo principal de la investigación fuela obtención de aislados de Bacillus thuringiensis,Berliner, autóctonos de Cuba.MATERIALES Y MÉTODOSSe analizaron 87 muestras colectadas de las diferentesregiones de Cuba (Tabla 1). Las muestras de suelo serecogieron en prospecciones de campo realizadas en lasdiferentes provincias del país de abril a junio y de septiembrea noviembre del 2004 y del 2005. Se tomaronmuestras tanto de suelos de hábitats naturales (zonasboscosas) como de suelos cultivados, donde losbiopreparados de B. thuringiensis nunca se han aplicado.También se hicieron aislamientos de rizosfera, semillas,raíces y hojas de plantas. En cada punto demuestreo, con un área estimada de 9 m 2 , se tomaron variassubmuestras, en una superficie de 0,10 m 2 cada una.Tabla 1. Procedencia de las muestras colectadas para el aislamiento de Bacillus thuringiensisProcedenciaCiudadde La HabanaLa HabanaPinar del RíoMatanzasCienfuegosVilla Clara110/fitosanidadSancti SpíritusLas TunasGranmaSantiagode CubaTipo de muestraSemilla de arroz variedades Perla, 8013, IA-Cuba 30Rizosfera de arroz variedad J-104Hojas de café, cacao y melocotónSuelos cultivados de albahaca, lechuga y suelos sin cultivarRaíces de hierba de la niña, anís, verbena azul, apasote, tiloSuelos cultivados de lechuga, tomate, ají y suelos sin cultivarSuelo cultivados de tabaco, arroz y calabaza, infestados o no con nematodo. Suelossin cultivarRizosfera de arrozSuelos cultivados de ajo, cebolla y caña de azúcarSuelos sin cultivar y suelos cultivados de plátanoHojas de eucaliptoSuelos cultivados de caña de azúcar, hortalizas, plátano, boniato, tomate, pepino,habichuela, yuca, rosas y margaritas japonesasSuelo, rizosfera y raíz de cultivo de tabacoHojas de caféHojas de café, suelos sin cultivarSuelos y rizosfera de cultivo de tomateSuelos cultivados de tabaco, arroz, café, plátano, rosas y suelos sin cultivarRizosfera y raíz de arrozSuelos cultivados de boniato, café, tabaco, plátano, maíz, cítricos, tomate, pimiento,floresHojas de café"De cada una de las muestras procesadas se tomó 1 gque se mezcló con 10 mL de agua destilada estéril entubos de ensayo, y se sometió a agitación vigorosa.Los tubos se incubaron en un baño de María a 65°Cdurante 30 min con el objetivo de seleccionar las esporaspresentes en la mezcla. Luego se dejó en hielopor igual tiempo y se procedió a realizar dilucionesdecimales. Cien microlitros de las diluciones se depositaronen placas con medio nutriente, se esparcieroncon espátula de Drygalski y se incubaron a 28-30°Cdurante 48-72 h hasta visualizar colonias individuales.Se examinaron las colonias crecidas y se seleccionaronpor su aspecto y morfología mediante observaciónal microscopio estereoscópico. Se determinó laforma bacilar, distensión del esporangio, localizacióny morfología de la espora mediante observación de latinción de Wirtz al microscopio óptico 1000 X[Valenzuela, 2003], características descritas para elgrupo cereus del género Bacillus [Boone et al., 2001;Porcar y Juárez, 2004].Se utilizó como criterio de selección de B. thuringiensisrespecto a B. cereus la presencia de un cuerpo paraesporal(cristal) [Boone et al., 2001] mediante observaciónde la tinción simple con violeta cristal al microscopioóptico 1000 X.

Obtención de aislados de Bacillus thuringiensis...Se determinó el índice de B. thuringiensis obtenido porla relación del número de colonias a las que estuvo asociadoel cuerpo paraesporal y el número de colonias examinadascon las características culturales de Bacillus:Para la conservación de los aislados se preparó una suspensiónde células muy densa de estos y se añadieron 100 µLa una placa de Petri estéril. El inóculo se distribuyó en lasuperficie de la placa y se le colocaron unos discos de papelde filtro estériles. Se dejó secar en flujo laminar. Los discosde papel de filtro secos se guardaron en tubos eppendorfestériles y se conservaron a 4°C hasta su uso.RESULTADOS Y DISCUSIÓNLas colonias de 1-1,5 cm de diámetro, de color blancogrisáceo,planas, opacas, de consistencia ligeramentecostrosa y que mostraron indistintamente dos tipos debordes irregulares, lobulados o ramificados, ambos incluidosen las características descritas para el grupocereus del género Bacillus (Fig. 1), se consideraron paraseleccionar 609 colonias como posibles B. thuringiensis,criterio utilizado por Porcar y Juárez (2004).Figura 1. Fotografía al microscopio estereoscopio (20 X).Morfología de los tipos de colonias crecidas en agar nutriente (72 h).A) Bordes lobulados. B) Bordes Ramificados.La posición y la morfología de la endospora en el interior dela bacteria constituyen un carácter taxonómico útil paradiferenciar especies dentro de un mismo género. Bacillusthuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en posiciónterminal dentro de la célula vegetativa. La Fig. 2muestra esta posición y morfología en una de las coloniasseleccionadas. Se observa la endospora teñida de color verdey las células vegetativas de color rojo.Figura 2. Microfotografía al microscopioóptico (1000 X) de la tinción de Wirtz.fitosanidad/111

Carreras SolísLa presencia de las células vegetativas en forma de bacilosde 1,0-1,2 µm de ancho por 3-5 µm de largo (Fig. 2),así como la formación de esporas ovales a las cuales seencontró asociado un cristal paraesporal de formabipiramidal, esférico o amorfo teñido de color azul (Fig. 3),permitió confirmar la presencia de B. thuringiensis. Laaparición del cristal es una característica distintiva deB. thuringiensis, la cual permite separarla de otras especiescercanas filogenéticamente como Bacillus cereus[Boone et al., 2001; Porcar y Juárez, 2004].En los aislados seleccionados predominó la morfologíabipiramidal de las inclusiones cristalinas, aunque tambiénse observó la morfología esférica/amorfa y en muypocos aislados un cristal muy pequeño adherido a la espora(Fig. 3). De manera que, sobre el criterio de la capacidadde producción del cristal paraesporal, de 609 coloniasanalizadas 341 se identificaron como B. thuringiensis.Figura 3. Microfotografía al microscopio óptico (1000 X) de la tinción simple con violeta cristal al0,5%. Se observa morfología bipiramidal de los cuerpos paraesporales (A), morfología amorfa/esférica(B) y esporas de B. thuringiensis con cristales pequeños adheridos a la espora (señalizados con unaflecha) (C).Mediante la utilización de esta técnica de identificaciónmuchos autores han realizado trabajos de aislamientode B. thuringiensis y se han establecido grandescolecciones de esta especie, como los de Ruiz deEscudero et al. (2004), quienes seleccionaron 1230 coloniascon las características morfológicas de B. thuringiensis,y de estas 684 presentaron cristal paraesporal.De manera similar Arrieta et al. (2004), de 641 muestrasprocesadas lograron aislar 300 colonias con morfologíasimilar a B. thuringiensis, y de ellas un totalde 202 mostraron cristales. Se presentó una gran diversidadde cristales por cepa, y entre las cepas dondelas morfologías más frecuentes fueron la redondeada eirregular. Los resultados del presente trabajo coincidieronmás con los de Ruiz de Escudero et al. (2004) yRosas et al. (2008), en que hubo un predominio de lamorfología bipiramidal. Los cristales bipiramidales sehan asociado a B. thuringiensis desde su descubrimientoen 1901 por Shigetane Ishiwata [Aizawa, 2001].La eficiencia del aislamiento de cepas de B. thuringiensiscon cristales del 56% con respecto a los bacilosesporulados acristalíferos resultó similar a lo reportadopor otros autores en España y Costa Rica [Belet al., 1997; Arrieta et al., 2004], lo cual confirma la validezdel método empleado.Con relación al total de muestras analizadas, B. thuringiensisse encontró en el 74,7%, y con las muestrasde suelo estuvo en el 82,5%. Se dispone de informaciónen los que el porcentaje de muestras con presencia de B.thuringiensis oscila entre el 20 y el 30% [Iriarte et al.,1998], o hasta el 92% [Bel et al., 1997]. La mayor o menorriqueza de muestras con B. thuringiensis puede dependerdel número de colonias identificadas en cadamuestra. Para tener en cuenta esto se utilizó el índiceB. thuringiensis que se considera como una medida deléxito en el aislamiento de esta especie.El índice B. thuringiensis obtenido para suelo resultóde 0,6 (Tabla 2). En muestras de suelo este índice puedetomar valores muy bajos de 0,0060-0,0092 [Quesada etal., 2004; Rosas et al., 2008], valores medios de 0,5 [Ruizde Escudero et al., 2004], o valores altos de 0,85 cuandose usan medios selectivos (medio con acetato) [Martin yTravers, 1989].112/fitosanidad

Obtención de aislados de Bacillus thuringiensis...Tabla 2. Índice de colonias de Bacillus thuringiensis obtenidas según tipo de muestraMuestrasNúmerode muestrasexaminadasNúmero de coloniasseleccionadaspor su morfologíaNúmerode coloniascristalíferasÍndice deB. thuringiensis *Suelo 60 490 294 0,60Rizosfera 8 42 18 0,43Hojas de plantas 7 61 24 0,39Semilla 3 10 3 0,30Raíz 9 6 2 0,33Total 87 609 341 0,56* Colonias de B. thuringiensis como una fracción del total de colonias analizadas."El valor de 0,6 para las muestras de suelo analizadasindica una buena incidencia de la especie en este hábitat.Esta eficiencia puede atribuirse a que cuando las muestrasse colectaron, se rechazó la superficie, y el materialde la muestra pertenece a la capa del suelo que estápor debajo de 5-10 cm de la superficie, a niveles en quelos daños causados por la luz UV no son posibles y latemperatura es más estable [Bel et al., 1997]. De manerageneral los resultados sugieren que los suelos de Cubason una importante fuente de B. thuringiensis, ya queel índice obtenido fue comparable con los valores informadospreviamente por otros autores en muestreos desuelos hechos en distintas regiones de los cinco continentes[Martin y Travers, 1989; Ruiz de Escudero etal., 2004; Chatterjee et al., 2007].En el caso de rizosfera, hoja, semilla y raíz, mostraroníndices de incidencia de B. thuringiensis más bajos (Tabla2), aunque se debe considerar que el número demuestras analizadas fue mucho menor.Los más bajos índices B. thuringiensis en rizosfera respectoa suelo puede atribuirse a que, como planteanMedrano et al. (2000), B. thuringiensis no se consideracomo parte de su flora nativa, pues está sujeto a lacompetencia y depredación de los microorganismosautóctonos de este ambiente, y a su incapacidad paracompetir por los exudados de las raíces.En las hojas de pinos se señala que las esporas persistenmás de siete meses, pero la experiencia con la aspersiónde las esporas y cristales en las hojas de plantasno forestales muestra una limitada viabilidad deesas esporas, principalmente por la acción germicidade la luz visible y UV. De manera general, B. thuringiensisse considera un pobre colonizador de la superficiede las hojas [Maduell et al., 2008]. Esto pudieradar explicación al índice de 0,39 encontrado enlas muestras de hojas analizadas, lo que está en correspondenciacon Maduell et al. (2002), quienes informaroníndices de 0,2 en especies del género Piper(Piperaceae).Al analizar la presencia de B. thuringiensis en las diferentesregiones de Cuba se encontraron índices más elevadosen las regiones occidental y oriental (Tabla 3).Aunque en el trabajo no se realiza un análisis de la presenciade B. thuringiensis en los suelos, pues no se recogensus características y se analizan otras fuentesademás de suelo, se observa una correspondencia conlos resultados de Ruiz de Escudero et al. (2004). Deacuerdo con lo planteado por estos autores, el lugar deprocedencia de las muestras, el tipo de suelo, el cultivoimplantado y el resto de las propiedades físico-químicasdel suelo no mostraron diferencias notables en lariqueza en B. thuringiensis. Los índices variaron desde0,7 a 0,9, y el índice medio de B. thuringiensis en eltotal de colonias observadas fue 0,55; sin embargo,Maduell et al. (2005) observaron que el pH del suelo fueuna de las variables más importantes en la presenciade B. thuringiensis. Él no mostró un efecto por sí solo.La combinación del pH con otras variables, como ladisponibilidad de nutrientes (Ca, Mg, K), el contenidode arcillas y la textura del suelo, tuvieron un efectosobre la biología de B. thuringiensis.De manera general, y de acuerdo con la clasificacióngenética de los suelos de Cuba [Hernández y Ascanio,2005], estos son mayormente pardo sialíticos en las regionescentral y oriental, y ferralíticos en la occidental.En estos suelos existe un predominio de minerales, y elcontenido de hierro libre no sobrepasa el 3%; no presentanademás pH mayor que 7, condiciones que favorecenla presencia de las esporas de B. thuringiensis[Maduell et al., 2005]. Se considera que la temperaturasí pudiera ejercer una influencia sobre la presencia deesta especie bacteriana por la acción germicida de la luzfitosanidad/113

Carreras Solísvisible y UV sobre B. thuringiensis. En Cuba las diferenciasno son tan marcadas entre las diferentes regiones,por lo que los índices de B. thuringiensis se consideranaceptables.Tabla 3. Índice de colonias de B. thuringiensis obtenidas en las diferentes regiones del país114/fitosanidadProvinciasNúmero demuestrasanalizadasNúmero decolonias por sumorfologíaNúmero decoloniascristalíferasÍndice deB. thuringiensis *Pinar del Río 8 69 60 0,87Ciudad de La Habana 16 81 56 0,69La Habana 7 32 6 0,18Matanzas 2 9 0 0,00Subtotal 33 191 122 0,64Cienfuegos 9 118 26 0,22Villa Clara 8 44 31 0,70Sancti Spíritus 10 78 32 0,41Subtotal 27 240 89 0,37Las Tunas 5 38 30 0,79Granma 10 67 51 0,76Santiago de Cuba 12 73 49 0,67Subtotal 27 178 130 0,74Total 87 609 341 0,56* Colonias de B. thuringiensis como una fracción del total de colonias analizadas."La diferencia en la frecuencia de aislamiento entre loshábitats se asume que se debe a la sensibilidad de lasesporas a la radiación solar y la desecación, hecho asociadocon los plásmidos que codifican para la síntesisde la δ-endotoxina, los que causan cambios en la composiciónquímica de la cubierta de las esporas y quereducen su tolerancia a estos factores físicos del ambiente[Sánchez y Peña, 2000].Independientemente de la mayor o menor riqueza encontrada,actualmente se admite que B. thuringiensises una bacteria distribuida por todo el mundo y se hallaprácticamente en todos los hábitats muestreados.Estos resultados claramente revelan la presencia deB. thuringiensis en todo el territorio, y por tanto permitenconfirmar que Cuba no es una excepción en estesentido.CONCLUSIONES• Se obtuvieron 341 aislados de Bacillus thuringiensisde las diferentes regiones y hábitats de Cuba.REFERENCIASAizawa, K.: «Shigetane Ishiwata: His Discovery of Sottokin (Bacillusthuringiensis) in 1901 and Subsequent Investigations in Japan»,Proceedings of a Centennial Symposium Commemorating Ishiwata’sDiscovery of Bacillus thuringiensis, Kurume, Japón, 2001, pp. 1-14.Armengol, G.; M. C. Escobar; M. E. Maldonado; S. Orduz: «Diversity ofColombian Strains of Bacillus thuringiensis with Insecticidal ActivityAgainst Dipteran and Lepidopteran Insects», J. Appl. Microbiol.102(1):77-88, EE.UU., 2007.Arrieta, G.; A. Hernández; A. M. Espinoza: «Diversity of Bacillusthuringiensis Strains Isolated from Coffee Plantations Infested withthe Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei», Rev. Biol. Trop.52(3):757-764, Costa Rica, 2004.Bel, Y.; F. Granero; T. Alberola; M. J. Martínez; J. Ferré: «Distribution,Frequency and Diversity of Bacillus thuringiensis in Olive TreeEnvironments in Spain», System Appl. Microbiol. 20:652-658, EE.UU.,1997.Boone, D. R.; G. M. Garrity; R. W. Castenholz: Bergy’s Manual ofSystematic Bacteriology, vol. 1, 2 nd ed., Spring, Spring-Verlag, NuevaYork, 2001.Chatterjee, S. N.; T. Bhattacharya; T. K. Dangar; G. Chandra: «Ecologyand Diversity of Bacillus thuringiensis in Soil Environment», AfricanJournal of Biotechnology 6(13):1587-1591, 2007.Ghelardi, E.; F. Celandroni; S. Salvetti; D. J. Beecher; M. Gominet; D.Lereclus; A. C. L. Wong; S. Senesi: «Requirement of flhA for SwarmingDifferentiation, Flagellin Export, and Secretion of Virulence AssociatedProteins in Bacillus thuringiensis», J. Bacteriol. 184:6424-6433,EE.UU., 2002.Hernández, J. A.; G. M. O. Ascanio: «The Development of SoilClassification in Cuba», Eurasian Soil Science 38 (12):1342-1346,2005.Iriarte, J.; Y. Bel; M. D. Ferrandis; R. Andrew; J. Murillo; J. Ferré; P. Caballero:«Environmental Distribution and Diversity of Bacillus thuringiensis inSpain», System. Appl. Microbiol. 21:97-106, EE.UU., 1998.

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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009Manejo de plagasCOMPARACIÓN DE LA EFECTIVIDAD DE UN INSECTICIDABOTÁNICO Y DOS QUÍMICOS CONVENCIONALESEN EL CONTROL DEL PICUDO (ANTHONOMUS EUGENIICANO) (COLEOPTERA: CURCULIONIDAE) EN CHILEHABANERO (CAPSICUM CHINENSE JACQ.)Esaú Ruiz Sánchez, Omar Aguilar Ochoa, Jairo Cristóbal Alejo, José M. Tún Suaréz, Luis LatournerieMoreno y Alfonzo Pérez GutiérrezInstituto Tecnológico de Condal. Km 16,3, Antigua Carretera Mérida-Motul, Conkal, Yucatán, México,CP 97345, esauruizmx@yahoo.com.mxRESUMENSe comparó la efectividad del insecticida botánico azadiractina y losinsecticidas químicos convencionales imidacloprid y oxamil en el controlde Anthonomus eugenii para determinar si la azadiractina representauna alternativa para el manejo de esta plaga. En campo se evaluarondos dosis comerciales de imidacloprid y azadiractina, y unadosis de oxamil como testigo regional. El imidacloprid 700 mg • L –1 mantuvola densidad más baja de adultos en el cultivo, y consecuentementepermitió el menor porcentaje de frutos dañados con respecto al testigosin aplicación. La azadiractina 104 y 208 mg • L –1 presentó efectividadintermedia en la supresión del número de adultos y daño al fruto. Elrendimiento de frutos sanos no fue significativamente diferente entrelos tratamientos insecticidas y el testigo sin aplicación. Se concluyeque la azadiractina es una buena alternativa en el control de A.eugenii, y podría sustituir el uso de oxamil e imidacloprid cuando laspoblaciones de la plaga no son altas.Palabras claves: insecticidas, azadiractina, Capsicum chinense,Anthonomus eugeniiABSTRACTThe effectiveness of a botanical insecticide azadirachtine and twochemical insecticides imidacloprid and oxamil, were compared todetermine if azadirachtine represents an alternative to manage thispest. On field evaluation, two commercial rates of imidacloprid andazadirachtine were evaluated; in addition oxamyl was also evaluatedas regional control. There was lower population density of A. eugeniiand lower percentage of damaged fruits on plots treated withimidacloprid 700 mg • L –1 compared to the control plots. Azadirachtine104 and 208 mg • L –1 had intermediate effects on suppression of A.eugenii adults and damaged fruits. Fruit yield was not significantlydifferent among insecticides treatments and the control. It is concludedthat azadirachtine is a good alternative to control A. eugenii and thisbotanical insecticide might replace the use of oxamyl and imidaclopridto manage this pest.Key words: insecticides, azadirachtine, Capsicum chinense,Anthonomus eugeniiINTRODUCCIÓNEl cultivo de chile habanero (Capsicum chinense Jacq.)representa una fuente considerable de ingresos económicospara los productores hortícolas de la penínsulade Yucatán, México, debido a la gran demanda regionalque tiene este fruto, y también por las divisas quegenera su exportación [Soria et al., 1996]. El picudo(Anthonomus eugenii Cano) es una de las plagas másdañinas en C. chinense y C. annuum. La larva se alimentadentro del fruto en desarrollo y ocasiona maduraciónprematura, deformación, aparición de manchasnecróticas y caída de frutos [Coudriet y Kishaba, 1988;Guzmán et al., 2001]. Trabajos previos sobre el manejode esta plaga se han enfocado al uso de variedades tolerantes[Quiñones y Luján, 2002], asociación del cultivodel chile con otro cultivo que no sea hospedero de A. eugenii[Gutiérrez, 1999], recolección de frutos caídos[Capinera, 2002], trampeo masivo de adultos [Coudriety Kishaba, 1988] y uso de hongos entomopatógenos[Aguilar, 2001; Guzmán et al., 2001; Rodríguez yCarballo, 1999]. En la práctica, sin embargo, el manejode esta plaga recae en las aplicaciones de insecticidasquímicos del grupo de los piretroides y carbamatos[Soria et al., 1996]. Inclusive, recientemente se haintroducido en el mercado la combinación delneonicotinoide imidacloprid y el piretroide ciflutrinapara el manejo de A. eugenii [Bayer, s/f]. Este produc-fitosanidad/117

Ruiz y otrosto se ha aceptado ampliamente por los productores regionales.La azadiractina es un insecticida de origen botánicoque puede usarse en combinación con organismos decontrol biológico en los agroecosistemas, pues se hadeterminado que su efecto no es significativo sobrecoccinélidos depredadores como Hippodamia convergensGuérin, Coleomegilla maculata DeGeer, Harmoniaaxyridis Pallas y Cryptolaemus montrouzieri Mulsant[Smith y Krischik, 2000].En este estudio se comparó la efectividad del insecticidanatural azadiractina con los químicos convencionalesimidaclprid y oxamil, con el fin de determinar si laazadiractina representa una alternativa en el controlde A. eugenii, como lo ha sido en otras especies deAnthonomus [Showler et al., 2004].MATERIALES Y MÉTODOSEl experimento se realizó en el área de producciónhortícola del Instituto Tecnológico de Conkal, Yucatán,México. Se utilizó semilla criolla de chile habanero. Elmanejo de nutrición, fitosanidad y riego por manguerastipo espagueti se llevó a cabo de acuerdo con lo recomendadopor Soria et al. (1996). Las plantas se establecieronen pocetas de 25 cm de ancho y 25 cm deprofundidad, que contenían 300 g de pollinaza comofuente de sustrato y materia orgánica. Cada parcelaexperimental consistió de un surco (doble hilera) de9 m de largo y 1,5 m de ancho, que contenía 42 plantas.El experimento se estableció en bloques completamenteal azar con tres repeticiones. Se evaluaron dos dosiscomerciales de imidacloprid, dos de azadiractina, y seincluyó además al insecticida carbámico oxamyl comotestigo regional. Este último producto es comúnmenteusado por los agricultores de la región. Los tratamientosevaluados fueron: imidacloprid 350 y 700 mg • L –1 ;azadiractina 104 y 208 mg • L –1 ; oxamil 390 mg • L –1 ; ytestigo absoluto (sin aplicación). La aplicación de lostratamientos se inició a los 60 días después del trasplante(ddt). Se realizaron cuatro aplicaciones deimidacloprid a razón de una cada 25 días. Los tratamientosa base de azadiractina y oxamil se aplicarondiez veces, una cada 10 días.Las variables de respuesta fueron: 1) número de adultospor parcela (se realizaron cuatro muestreos de adultos(121, 128, 135 y 142 ddt) visualmente en botonesflorales, flores y yemas terminales de las plantas);2) porcentaje de frutos dañados (se recolectaron y cuantificaronlos frutos caídos o los que aún estaban en laplanta con señales típicas de daño (pedúnculo amarillento)y que fueron confirmados con la presencia de lalarva de A. eugenii o la pudrición típica en el interiordel fruto); 3) rendimiento de frutos (se determinó porla suma de los pesos de los frutos cosechados en lasocho cosechas que se realizaron).El análisis de varianza y la prueba de comparación de medias(Tukey, p < 0,05) de las variables evaluadas se efectuaronmediante el paquete estadístico GraphPad Instat.RESULTADOS Y DISCUSIÓNEn el primer y segundo muestreos a los 121 y 128 ddt,respectivamente, no existió diferencias significativas enel número de adultos por parcela experimental. En eltercer y cuarto muestreos (135 y 142 ddt) las poblacionesde adultos fueron significativamente menores enlas parcelas tratadas con imidacloprid 700 mg • L –1 conrespecto al testigo sin aplicación. En ambos muestreoslas poblaciones de A. eugenii en los tratamientos a basede azadiractina no fueron significativamente diferentesal resto de los tratamientos insecticidas (Tabla 1).118/fitosanidadTabla 1. Número de adultos de A. eugenii observados en muestreos visuales por parcela experimentalTratamientosMuestreos (ddt)(mg • L –1 ) I (121 ddt) II (128 ddt) III (135 ddt) IV (142 ddt)Imidacloprid 350 0,7 ± 0,33 a 14,0 ± 4,16 a 27,3 ± 7,17 ab 17,0 ± 4,16 abImidacloprid 700 1,0 ± 0,58 a 1,7 ± 0,67 a 5,7 ± 1,20 b 1,3 ± 0,67 bAzadirachtina 104 2,0 ± 0,58 a 8,0 ± 2,0 a 10,0 ± 4,93 ab 19,7 ± 5,24 abAzadirachtina 208 0,7 ± 0,33 a 5,7 ± 0,88 a 10,3 ± 3,18 ab 10,7 ± 1,33 abOxamil 390 0,7 ± 0,33 a 11,7 ± 4,26 a 7,0 ± 2,31 b 23,3 ± 6,44 abTestigo sin aplicación 1,3 ± 0,67 a 16,3 ± 4,37 a 34,7 ± 10,17 a 30,7 ± 9,68 aMedias en cada columna con al menos una literal repetida no son estadísticamente diferentes (Tukey, p ? ≤ 0,05)."

Comparación de la efectividad de un insecticida...En general el porcentaje de frutos dañados por A. eugeniino fue mayor al 15%. El imidaclorpid700 mg • L –1 permitió significativamente menor porcentajede frutos dañados (p < 0,05) comparado conel oxamil y al testigo sin aplicación (Tabla 2). El efectode los tratamientos a base de azadiractina no difiriósignificativamente del producido por el imidacloprid700 mg • L –1 .Tabla 2. Comparación de medias del porcentaje de frutos dañados y el rendimientode frutos por parcelaTratamientos(mg·• L –1 )Porcentaje de frutosdañadosRendimiento de frutos(kg)Imidacloprid 350 10,0 ± 0,97 abc 57,8 ± 5,8 aImidacloprid 700 6,7 ± 0,09 c 53,4 ± 1,2 aAzadirachtina 104 9,4 ± 0,17 bc 54,9 ± 1,7 aAzadirachtina 208 9,8 ± 0,78 abc 52,3 ± 8,8 aOxamil 390 13,9 ± 1,27 a 46,1 ± 9,6 aTestigo sin aplicación 12,7 ± 1,13 ab 38,8 ± 0,9 aMedias en cada columna con al menos una literal repetida no son estadísticamente diferentes (Tukey, p ? ≤0,05)."El rendimiento de frutos sanos no presentó diferencia estadísticasignificativa por efecto de los diferentes tratamientosinsecticidas; sin embargo, hubo tendencia de reduccióndel rendimiento de frutos sanos en las parcelas del testigosin aplicación y las tratadas con oxamil (Tabla 2).Aunque en dos de los cuatro muestreos el imidacloprid700 mg • L –1 permitió significativamente menor densidadde adultos comparado con el testigo sin aplicación,debe tomarse en cuenta su impacto negativo para algunosinsectos benéficos, especialmente depredadores[Kilpatric et al., 2005; Marquini et al., 2003]. Tambiéndebe considerarse el poder residual del imidacloprid enlos frutos de chile habanero debido al intervalo cortoentre cosechas (ocho días); así cualquier producto insecticidaque se aplique en ese período debe poseer bajopoder residual. Para tener una referencia, en otros experimentosse ha documentado que los residuos deimidacloprid en algunos cultivos hortícolas que se consumenen fresco, como la col y la coliflor, pueden serdisipados completamente a los cinco días después de suaplicación [Gajbhiye et al., 2004]; sin embargo, en otroscultivos como la papa y el algodón se recomienda unintervalo de 15 días entre la última aplicación y la cosecha[Bayer, s/f]. Vale la pena mencionar que los tratamientosa base de azadiractina, aunque presentaronefectividad intermedia en la supresión de adultos y enel porcentaje de fruto dañado, podrían considerarse unabuena opción, ya que es un producto orgánico no tóxicoa mamíferos y polinizadores, y es rápidamente degradadopor los rayos solares [Di Illo et al., 1999; Isman,2006].Referente al rendimiento de frutos, no se observó diferenciaestadística significativa entre tratamientos. Loanterior demuestra que el porcentaje de frutos afectadospor A. eugenii estuvo en un rango que no se reflejóen la producción de frutos sanos; por consiguiente, si lainfestación de frutos por A. eugenii en el cultivo chilehabanero es menor al 15%, no habría reducción significativaen el rendimiento de fruto si la plaga no se controla,o en tal caso una opción de manejo sería la aplicaciónde azadiractina. Y si las poblaciones de A. eugeniise elevaran, existe la posibilidad de aplicar productosconvencionales tal como lo recomiendan Gómez et al.(2000), quienes hacen referencia a la azadiractina comoel insecticida de bajo riesgo que se puede usar en elmanejo de las poblaciones de A. eugenii en aplicacionesalternadas con otros insecticidas químicos.CONCLUSIONES• En evaluaciones de campo, la mayor supresión de A. eugeniiadultos en el cultivo de chile habanero y menorporcentaje de frutos dañados se observó en las parcelastratadas con imidacloprid 700 mg • L –1 con respectoal testigo sin aplicación.• La azadiractina 104 y 208 mg • L –1 presentó efectos intermediosen las variables evaluadas. El rendimiento defrutos de chile habanero no se vio afectado significativamentepor la presencia de la plaga en el cultivo.• En densidades poblacionales bajas de A. eugenii eluso de azadiractina representa una buena alternativaen el manejo de esta plaga.fitosanidad/119

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FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009Comunicación cortaPRIMER INFORME EN CUBA DE LARGUS SELLATUS GUÉRIN(HEMIPTERA: PYRRHOCORIDAE) EN SOYA (GLYCINE MAX (L.)MERRILL.)Leonel Marrero Artabe, 1 Nadir Vanessa Meneses 1 y María A. Martínez Rivero 21Facultad de Agronomía, Universidad de Matanzas Camilo Cienfuegos. Autopista Varadero Km 3½,Matanzas, Cuba, leonel.marrero@umcc.cu2Grupo de Plagas Agrícolas. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Autopista Nacional y Carreterade Jamaica, Apdo. 10, San José de las Lajas, La Habana, CP 32700La soya (Glycine max (L.) Merrill.) representa un cultivode gran importancia económica; posee un alto valoralimentario (39-42% de proteína y 18-22% de aceite)y elevadas concentraciones de isoflavonoides que leconfieren un amplio uso farmacológico [Mendoza et al.,2005]. Esta leguminosa constituye el hospedero específicode Bradyrhizobium, microsimbiosis que enriqueceel contenido de N en los suelos agrícolas cubanos; senotifica además la inclusión de la soya como componentequímico en medios de cultivos para la reproducciónde B. japonicum [Rodríguez et al., 2004].En la actualidad el Minaz incrementa considerablementela superficie agrícola de la soya para sustituir importacionesdel grano; sin embargo, el ataque de chinchesheterópteras representa un factor biótico que lastraseriamente el rendimiento y la obtención de semillasagrícolas, ocasiona simientes de baja calidad o totalmenteinviables [Gallo, 2006], así como detrimento delcontenido proteico y de aceite del grano [Fernández etal., 2005; Marrero, 2007]. Las chinches Pyrrhocoridasson mayormente gregarias y aparecen en grandes cantidades,y son importantes debido a los daños que ocasionansus picaduras. Al taladrar las legumbres provocanel aborto del fruto y pueden transmitir patógenosa la semilla [Zayas, 1988].El 11 de marzo del 2009, mediante el sistema del pañohorizontal propuesto por la Embrapa (2003), se detectóel ataque de una chinche teñidora sobre la variedadde soya Conquista (genotipo brasileño). El ejemplar seencontró durante la fenofase R5 del cultivo (inicio deformación de las semillas) en la finca Madam de la empresaproductora de semillas ubicada en el municipiode Jovellanos, Matanzas. Se observaron picaduras enlas legumbres y abundantes puntos necróticos en elpericarpio, lesiones similares a las informadas para elcomplejo de chinches [Boyd y Bailey, 2000; Marrero,2007].El insecto encontrado presentó una envergadura de 14 mm;cuerpo de coloración negra, anaranjada y blanca; cabezapequeña, con la base de las antenas, fémures y unfino borde del cuerpo de color naranja; pronotum sinmárgenes, con bordes deflexos y con el lóbulo posteriorde color blanco; similar coloración en dos manchas ovalesy en la membrana, esta última con la nerviacióntípica de la familia Pyrrhocoridae (Fig. A). Ventralmentela especie mostró los anillos abdominales de colorblanco, a excepción de sus bordes y el rostro de cuatrosegmentos (Fig. B). Estas características deldiagnóstico permitieron identificar la especie comoLargus sellatus Guérin en correspondencia con las descripcionesde Zayas (1988).En Cuba, Bruner et al. (1975) notifican a estephyrrochorido como chinche de monte, encontrada comúnmenteentre las vainas de los tallos de caña. Porotra parte, Zayas (1988) refiere que esta chinche se encuentrafrecuente en los pinares. Al respecto, Rivero(2006) informa el hallazgo de esta chinche enecosistemas naturales del macizo Guamuhaya, y notificasu aparición en las localidades de Jibacoa y en áreasprotegidas de Hanabanilla, en la región central del país.Hasta el momento los inventarios entomológicos disponiblessobre la soya en Cuba [Bruner et al., 1975;fitosanidad/121

Marrero y otrosMendoza y Gómez, 1982; Pérez y Rábago, 1989;Minagri, 1995; Socorro y Martín, 1998; Martínez, 2001;Marrero y Martínez, 2003; Marrero, 2007] no informanla aparición de L. sellatus sobre este hospedante, por loque este trabajo constituye el primer informe para elcultivo de la soya, y deviene información de interéspara la regionalización y el monitoreo del cultivo en elpaís.Vista dorsal (A) y ventral (B) de Largus sellatus Guérin(Hemiptera: Pyrrhocoridae), nuevo registro en soya (40 X).REFERENCIASBoyd, L. M.; C. W. Bailey: «Soybean Pest Management: Stink Bugs»,Agricultural Publications, Bulletin G7151, State Extension EntomologySpecialist, Missouri, EE.UU., 2000.Bruner, S. C.; L. C. Scaramuza; A. R. Otero: Catálogo de los insectosque atacan a las plantas económicas de Cuba, 2. a ed., Instituto deZoología, Academia de Ciencias, La Habana, 1975.Embrapa: Recomendaciones técnicas para el cultivo de la soya en laregión central de Brasil: manejo de plagas, Mato Grosso, Brasil,2003, pp. 158-221.Fernández, Arais; Belkis Peteira; L. Marrero; M. A. Martínez: «Inducciónde sistemas enzimáticos en granos de soya inoculados con chinchespentatómidas», Rev. Protección Veg. 20 (1):44-49, Cuba, 2005.Gallo, Carina: «Calidad de semillas de soja versus ambiente y chinches»,Agromensajes no. 08, Facultad de Ciencias Agrarias UNR,Argentina, 2006.Marrero, L.; María A. Martínez: «Ocurrencia de Heteropteros enagroecosistemas cubanos de soya», Rev. Protección Veg. 7 (3):17-24, 2003, Cuba.Marrero, L.: «Entomofauna Associated to Soybean Varieties, Glycinemax L: Harmfulness, Population Fluctuation and Natural Enemies ofthe Phytophage Complexes of Greater Agricultural Interest», Summaryof a PhD Tesis presented to obtain the scientific degree in AgriculturalSciences, Rev. Protección Veg. 22 (2):134, Cuba, 2007.Martínez, I.: Validación de un programa de manejo integrado para elcontrol de plagas en el cultivo de la soya, Tesis de Maestría, ETPPJaruco, La Habana, 2001.Mendoza, F.; J. Gómez: Principales insectos que atacan las plantaseconómicas de Cuba, Ed. Pueblo y Educación, 1982, Cuba, pp. 34-36.Mendoza, Sandra O.; L. A. Godínez: «Caracterización de la actividadantioxidante de partículas biodegradables», Rev. Conciencia Tecnológicano. 027, México, 2005.Minagri: «Manual técnico: el cultivo y utilización de la soya en Cuba»,Comisión Nacional del Cultivo de la Soya, 1995, Cuba, pp. 25-29.Pérez, Rena; R. Rábago: «Manual de la soya», Minaz, La Habana,1989, pp. 1-10.Rivero, A.: «Estudios de diversidad de insectos en la región Jibacoa-Hanabanilla. Macizo Guamuhaya», Centro Agrícola 2 (2):49-55, Cuba,2006.Rodríguez, Aida; María C. Nápoles; M. A. Ramírez: «Caracterizaciónquímica del grano molido y torta de soya desgrasada (Glycine max.L. Merrill.) que se emplean en el medio de cultivo para B. elkanii»,Cultivos Tropicales 25(2):87-90, Cuba, 2004.Socorro, M. A.; D. S. Martín: Granos. Plagas y enfermedades de lasoya, t. 1., Ed. Pueblo y Educación, La Habana, 1998, pp. 82-85.Zayas, F.: Entomofauna cubana, t. VII, Ed. Científico-Técnica, La Habana,1988, pp. 194 y195.122/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009EFECTOS IN VITRO DE METABOLITOS DE LECANICILLIUMLECANII (ZIM.) ZARE & W. GAMS SOBRE LAS OOTECASY JUVENILES DEL SEGUNDO ESTADIO DEL NEMATODODE LAS AGALLAS MELOIDOGYNE INCOGNITA(KOFOID & WHITE) CHITWOODRaúl Hernández Hernández, 1 Mercedes Escobar Hernández 1 y Eulalia Gómez Santiesteban 21Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, rhernandez@inisav.cu2Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar. Vía Blanca 804y Carretera Central, San Miguel del Padrón, Ciudad de La HabanaRecientemente se ha informado que los efluentes de lafermentación líquida del hongo entomopatógenoLecanicillium lecanii, obtenidos por el Instituto Cubanode Investigaciones de los Derivados de la Caña deAzúcar (Icidca), pueden ejercer control sobre el nematodode las agallas Meloidogyne incognita [Gómez, 2008]. Losmetabolitos presentes en estos efluentes poseen actividadproteolítica, lipolítica y antimicrobiana; son compuestospolipeptídicos con propiedades antibióticas yácidos fenólicos [Gómez et al., 2004].El objetivo de este trabajo fue comprobar los efectosin vitro que causan los efluentes de la fermentación deL. lecanii sobre las masas de huevos y los juveniles desegundo estadio (J2) de M. incognita Raza 2.Se utilizaron ootecas de M. incognita Raza 2 procedentesde las raíces de pepino var. Poinsett, las cuales se desinfectaroncon hipoclorito de sodio 0,525% por 2-3 min. Losefluentes de la fermentación de L. lecanii los suministróel Icidca en la formulación de polvo humedecible,denominada Nemacid. Las ootecas y los J2 se trataronen vidrios reloj, con 2 mL de las soluciones del productopreparadas al 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 33 y 50% p/v(N 1-50 %), durante 24, 48 y 72 h; se dejó un testigosin tratamiento como blanco.Los efectos causados por los tratamientos en las masasde huevos y los J2 se detectaron a través de las observacionesmicroscópicas 12x, 25x y 40x. La eclosión delas ootecas se evaluó mediante la cuantificación de losJ2, mientras la inhibición de la eclosión se valoró pormedio de la fórmula de Abbott. Los ensayos se replicaroncuatro veces a una temperatura de 26 ± 2°C y humedadrelativa de 98-100%.Se pudo constatar en las observaciones microscópicas queel producto en todos los intervalos de tiempo y concentracionescausó necrosis en las ootecas, e impidió laocurrencia de la eclosión en el 100% de los huevos (Fig.).Efectos causados por los efluentes de L. lecanii sobre la eclosión de las ootecas de M. incognita.fitosanidad/123

Hernández y otrosLa acción letal también se observó en las larvas L2 queperdieron irreversiblemente su movilidad al ponerse en contactocon el nematicida, comportamiento que se verificódespués de cada tratamiento en agua destilada estéril.Los efectos nematicidas y nematostáticos comprobadosen este trabajo son similares a los señalados porMeyer (1998), Mañuzca y Varón (2001), y Olivares yLópez (2002), quienes revelaron en sus ensayos que losmetabolitos secretados por L. lecanii probablementeocasionan la degradación de la cubierta protectora delnematodo. Los ensayos realizados en este trabajo sonimportantes para establecer los controles de calidad delos efluentes de L. lecanii.REFERENCIASGómez, E.; R. Álvarez; R. Fraga; I. Reyes; J. Hernández; T. Lemes; A.San Juan: «Metabolitos producidos por el hongo entomopatógenoVerticillium lecanii», Biotecnología Aplicada 21(2):92-95, Cuba, 2004.Gómez, E.: «Efecto del Nemacid sobre Meloidogyne incognita y loscomponentes del suelo», VI Seminario Científico Internacional deSanidad Vegetal, Palacio de Convenciones, La Habana, 22-26 deseptiembre (CB-C17), 2008.Mañuzca, A.; Varón, F.: «Identificación y evaluación de algunos organismosfungosos como posibles agentes biocontroladores deMeloidogyne spp.», Fitopatología Colombiana 1:33, Colombia, 2001.Meyer, S.: «Evaluation of Verticillium lecanii Strains Applied in Root Drenchesfor Suppression of Meloidogyne incognita on Tomato», Journal of theHelminthological Society of Washington, 65:82-86, EE.UU., 1998.Olivares, C.; López, L. V.: «Hongos oviparásitos de nematodosfitopatógenos en suelos españoles», Revista Iberoamericana deMicología 19:104-110, España, 2002.124/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009ALTERATIONS INDUCED BY PAPAYA RINGSPOT POTYVIRUSON CHLOROPHYLL CONTENT IN PAPYA (CARICA PAPAYA L.)LEAVESDariel Cabrera Mederos, 1 Rafael Sosa Martínez, 1 Orelvis Portal Villafaña, 1 Yasiel Alburquerque Alfonso, 1José E. González Ramírez 2 and Ricardo Hernández Pérez 31Universidad Central Marta Abreu. Carretera a Camajuaní Km 5½, Santa Clara, Villa Clara, Cuba,dcabreram@uclv.edu.cu2Instituto de Investigaciones en Viandas Tropicales. Apdo. 6, Santo Domingo, Villa Clara, Cuba3Centro de Estudio para la Transformación Agraria Sostenible. Universidad de Cienfuegos, Carreteraa Rodas Km 3, Cienfuegos, CubaPapaya ringspot virus (PRSV-p) genus Potyvirus, familyPotyviridae is an aphid-transmitted plant virus [Tripathiet al., 2008]. This virus infects papaya (Carica papaya L.)naturally and it is a major limiting factor in itsproduction worldwide [Purcifull et al., 1984]. Its presencein Cuba was first recorded in 1946 [Acuña and Zayas,1946] which represents the main problem concerningplanting nowadays [Pérez and González, 2007; Cabreraet al., 2008]. The first symptoms developed by this virusare the chlorosis in the youngest papaya leaves, followedby a mosaic that varies in intensity and progress untilthe leaves become mottled and distorted. Either the viruscourse and its effects and severity depend on theviral isolate. According to Hull (2004), direct effects onthe photosynthetic apparatus is the most obvious andperhaps the most common way by which viral infectionreduces plant size.The objective of this work was to determine the directeffect of one severe isolate (PRSV-VC) on the chlorophyll(Chl) content in papaya leaves var. Maradol roja.The presence of the PRSV was checked by enzymelinkedimmunosorbent assay (ELISA) [Clark andAdams, 1977]. Absorbance readings (405 nm) were takenby a Bio-tec ELx-800 automated microplate reader.Fully developed leaves disks (1 cm diameter) displayingintense mosaics were taken in order to compare themwith healthy plant leaves. In both cases, the extractionof the pigment was done by using the dimethylsulphoxide(DMSO) method [Hiscox and Israelstam, 1979].According to Djurdjevic et al. (2007), a millilitre ofsolvent was applied to each papaya leaf disk and thenincubated during 30 minutes at 60°C. The samplesreading was carried out with two wavelengths (645 and663 nm), in an ultraviolet-visible spectrophotometer.Statistical analysis of the results was obtained by usingthe statistical package Statgraphic plus 5.0 for Windows.The chlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyllcontents were determined spectrophotometrically byusing Arnon’s equation [Porra, 2002; Djurdjevic et al.,2007] and expressed in mg/g of fresh leaf weight.Chl a = (0.01270×D663Chls a + b = (0.02021×D− 202248; × D645645+ 2022:24×D3+ ×= Chl b = (0.02290×Dfresh weight6633+ ×fresh weight645− 202268: × D663+ ×3fresh weightfitosanidad/125

Hernández y otrosChlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyllcontents showed significant differences when comparingthe obtained indexes from healthy and infected plantleaves (Fig.).Columns with different letter are significantly different according to studenttest for independent samples at p < 0.05.Chlorophyll contents in papaya var. Maradol roja healthy and PRSV affected leaves.It was observed that all analyzed samples showed ahigher content of chl a than chl b in an approximately5:1 ratio. These results are in agreement with those ofNobel (2005) who found that the ratio of chl a to chl bis usually about 3:1. Hopkins and Hüner (2004),mention that the chlorophyll a is the primaryphotosynthetic pigment in all higher plant.Infection by PRSV in papaya plants provoked asignificant reduction on pigment contents in thoseleaves showing an intense mosaic (Fig.). This could beclosely related to a considerable loss on photosyntheticefficiency in the affected plants. The correlationobtained between the appearance of mosaic symptomsand the reduction of chlorophyll contents were pointedby Hull (2004) when referring to diseases caused byviruses in general.REFERENCESAcuña, J.; F. Zayas: «El mosaico y otras enfermedades de la frutabomba(Carica papaya L.)», Circular 85, Estación Experimental Agronómicade Santiago de las Vegas, La Habana, 1946.Cabrera, D.; O. Portal; M. Cruz; R. Hernández: «Papaya ringspot virus(PRSV-P): Aspectos biológicos y epidemiológicos», (Resúmenes)VIII Simposio Internacional de Biotecnología Vegetal, 23-25 de abril,Villa Clara, Cuba, 2008.Clark, M. F.; A. N. Adams: «Characteristics of the Microplate Method ofEnzyme-linked Immunosorbent Assay for the Detection of PlantViruses», Journal of General Virology 34:475-483, Inglaterra, 1977.Djurdjevic, L.; M. Mitrovic; P. Pavlovic: «Methodology of AllelopathyResearch: Forest Ecosystems», Allelopathy Journal 20:79-102, India,2007.Hiscox J. D.; G. F. Israelstam: «A Method for the Extraction of Chlorophyllfrom Leaf Tissue Without Maceration», Canadian Journal of Botany57:1332-1334, Canadá, 1979.Hopkins W. G.; N. P. A. Hüner: Introduction to Plant Physiology, 3 rd ed.,Wiley, EE.UU., 2004, p. 53.Hull, R.: Matthew’s Plant Virology, 4 th ed. Elsevier, EE.UU., 2004, p.1001.Nobel, P. S.: Physicochemical and Environmental Plant Physiology, 3 rded., Elsevier, EE.UU., 2005, p. 222.Pérez, L. F.; G. González: Enfermedades del papayo: Descripción,epidemiología y manejo, Ed. Científico-Técnica, La Habana, 2007, p.52.Porra, R. J.: «The Chequered History of the Development and Use ofSimultaneous Equations for the Accurate Determination ofChlorophylls a and b», Photosynthesis Research 73:149-156, Holanda,2002.Purcifull, D. E.; J. R. Edwardson; E. Hiebert; D. Gonsálves: «PapayaRingspot Virus», CMI/AAB Descriptions of Plant Viruses no. 292,Inglaterra, 1984.Tripathi, S.; J. Y. Suzuki; S. A. Ferreira; D. Gonsálves: «Papaya RingspotVirus-P: Characteristics, Pathogenicity, Sequence Variability andControl», Molecular Plant Pathology 9:269-280, EE.UU., 2008.126/fitosanidad

II Conferencia Internacionalsobre Alternativas al Bromuro de MetiloDel 22 al 29 de septiembre del 2008 sesionó en el Palacio de Convenciones de La Habana elVI Seminario Científico Internacional de Sanidad Vegetal, organizado por el Instituto de Investigacionesde Sanidad Vegetal (Inisav), el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (Censa)y el Centro Nacional de Sanidad Vegetal (CNSV).Paralelamente tuvieron lugar importantes eventos como la XLVIII Reunión Anual de la SociedadAmericana de Fitopatología-División Caribe, la II Conferencia Internacional sobre Alternativasal Bromuro de Metilo, el II Taller Latinoamericano de Biocontrol de Fitopatógenos,el II Taller Internacional de Manejo de Plagas, el II Taller Internacional de Fitoplasmas y elII Simposio Latinoamericano y del Caribe «La biodiversidad acarina: utilización, protección yconservación».En los tres números anteriores de la revista Fitosanidad se publicaron los resúmenes de lostrabajos presentados en el VI Seminario de Sanidad Vegetal, los del II Taller Internacional deManejos de Plagas y los la XLVIII Reunión Anual de la Sociedad Americana de Fitopatología-División Caribe. En el presente número se incluyen los de la II Conferencia Internacional sobreAlternativas al Bromuro de Metilo.El bromuro de metilo está considerado como una sustancia agotadora de la capa de ozono queafecta grandemente al ambiente y la salud humana, aunque se utiliza desde 1940 como fumigantetotal en la desinfección de suelos, principalmente en el cultivo del tabaco, aunque también encultivos protegidos de hortalizas, almacenes, silos, estructuras y transportación de alimentos,viveros de café, flores y plantas ornamentales. Durante los últimos diez años se ha desarrolladocon éxito un gran trabajo encaminado a la eliminación total del consumo de este producto enCuba.Los seminarios internacionales de sanidad vegetal han tenido como objetivo fundamental ladivulgación de las actividades científico-técnicas y productivas relacionadas con el desarrollode la sanidad vegetal en Cuba, así como fortalecer las relaciones de cooperación con prestigiosaspersonalidades e instituciones que nos han honrado con su presencia.

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009ResúmenesSESIÓN/SESSION: ESTRATEGIAS GENERALES DE MANEJOCOMO ALTERNATIVAS AL BROMURO DE METILO EN AMÉRICALATINA Y EL CARIBE / GENERAL STRATEGIESOF MANAGEMENT AS ALTERNATIVES TO METHYL BROMIDEIN LATIN AMERICA AND THE CARIBBEAN(BM-C3) CONTRIBUCIÓN DE CUBA A LA ELIMINACIÓN DE BROMURO DE METILOEduardo Pérez MontesbravoInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, eperez@inisav.cuDurante los últimos diez años se ha desarrollado untrabajo encaminado a la eliminación total del consumode bromuro de metilo (BrM) en Cuba, contando con laparticipación de la Onudi y OTOZ como agencia internacionaly nacional implementadoras, respectivamente,e Inisav en la dirección técnica de dos proyectos delprotocolo de Montreal. El principal sector involucradoen el consumo de BrM en Cuba en 1998 era el tabaco,con un consumo de 80 t en semilleros tradicionales; elresto de los valores de consumo estaba distribuido encultivos protegidos de hortalizas, seguido de almacenes,silos, estructuras y transportación de alimentos,viveros de café y flores y ornamentales, para un totalde 40 t. Los trabajos encaminados en tabaco desde 1986hasta el 2004, que condujeron a la eliminación total deluso de BrM, incluyeron tres etapas, de 1986 a 1988 conel primer manejo integrado de plagas (MIP) en Cuba,una segunda etapa de 1989 a 1995 caracterizada porestudios básicos, investigaciones de campo y generalizaciónde nuevos elementos de MIP, y la tercera etapade 1996 al 2004 sobre transferencia y adaptación tecnológicade producción de posturas en bandeja flotantee investigación participativa. La utilización de los esquemasde MIP redujo significativamente los tratamientosfitosanitarios y costos totales en el 36%. En latecnología de bandeja flotante reduce los insumos deagroquímicos y otros en el 90%, y los rendimientos deposturas por unidad de área están en valores de cinco aseis veces superiores al semillero tradicional. La capacitacióny el extensionismo desarrollado en tabaco estuvieronintegrados por una primera tarea encaminadaa reforzar esta actividad en las provincias involucradas;una segunda de sensibilización dirigida alos directivos, técnicos, especialistas y agricultores delsector tabacalero a todos los niveles; la tercera etapa loconstituyeron los entrenamientos para la capacitaciónde los entrenadores seleccionados y para el personalencargado de actividades más específicas, así como eluso de materiales didácticos para facilitar el aprendizajede la nueva tecnología de producción que incluyeronvideos, libros, plegables, pancartas y divulgaciónmasiva. El segundo proyecto comenzó en el 2005. Lasprimeras tareas incluyeron crear las bases organizativas,de validación y de ejecución del programa de eliminaciónde BrM en cultivos protegidos, flores, ornamentales,café, almacenes e instalaciones de la industria,preparar programas de MIP en esos sectores e implementarlos,así como la introducción de alternativas yprácticas que requerían de inversión para su introducción.En este proyecto están involucrados distintosorganismos pertenecientes a los ministerios de Citma,Minag, Mincin, Minal, Minint, Minfar, Minaz, INRE yMitrans. Varias acciones han tenido un impacto importanteen el éxito, tales como reuniones técnicas nacionalesy por sectores, encuestas nacionales, cursosnacionales, talleres nacionales y territoriales, asistenciatécnica a todas las provincias, adiestramientos nacionalese internacionales. Se han realizado 132 actividadescon 2630 participantes de todo el país. Lacapacitación participativa a productores, especialistas,fitosanidad/129

Sesión/Sessiondirectivos y técnicos para hacer efectivas las tecnologíasy alternativas, su divulgación y concientización atodos los involucrados ha sido la clave del éxito. Igualmenterealizaron y divulgaron documentos rectoresde MIP en cultivos protegidos, flores, ornamentales yen almacenes, estructuras y transportación de alimentos.Con presupuesto del proyecto se realizaron inversionespara la optimización del uso de fosfina en cultivosprotegidos y café a siete y dos centros deproducción de plantas injertadas, respectivamente. Lasprincipales alternativas puestas en práctica son, entodos los casos, el sistema diagnóstico, el MIP y eluso de medios biológicos, particularmente en cultivosprotegidos el uso de 1,3-dicloropropeno + cloropricrinae injerto, en flores el colector solar, en café el injerto yen almacenes, la optimización de uso de fosfina. Losprincipales impactos están relacionados con la generalizaciónen todo el país de los programas de MIP enlos diferentes sectores, y consecuentemente una mayorprotección del medioambiente y al hombre, reduccióndel consumo de plaguicidas y de pérdidas porplagamientos. Los resultados directamente vinculadosa los objetivos de los proyectos se fueron cumpliendoaceleradamente al haber eliminado el consumode BrM en el 2002 en el sector del tabaco, en el2006 en los sectores de café del Grupo Empresarial deAgricultura de Montaña, flores, ornamentales y cultivosprotegidos del Grupo Empresarial Frutícola(GEF), todos del Minag, además de los almacenes dela economía interna del Mincin, y en el 2008 los silosde economía interna del Minal y cultivos protegidosdel Minfar y el Minint.(BM-C4) PROYECTO PILOTO SEMARNAT/ONUDI SOBRE DEMOSTRACIONES ALTERNATIVASAL BROMURO DE METILO EN EL CULTIVO DE FRESA EN BAJA CALIFORNIA, MÉXICOMarco A. Cotero, 1 José F. Estrada, 1 Sofía Urbina, 1 Marcela G. Nolazco, 2 Guillermo Castellá, 2 ConradoGonzález Sandoval, 3 William Hedrick, 4 Julio Meza 5 y José M. López Aranda 2, 61Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales (Semarnat), México2Organización de las Naciones Unidas para el Desarrollo Industrial (Onudi)3Rancho Don Juanito, Col. Vicente Guerrero, Baja California, México4Berrymex, Col. Vicente Guerrero, Baja California, México5Rancho Santa Mónica, San Quintín, Baja California, México6Ifapa, Junta de Andalucía, EspañaMéxico (200 000 t/año) es un país importante en cultivode fresa. En Baja California, valle de San Quintín(33º30’ N) (Ensenada) existen unas 1000 ha de cultivoal aire libre concentradas en 15-18 explotaciones altamentetecnificadas. Es muy habitual la inyección anualde bromuro de metilo (BrM) en mezcla con cloropicrina(75,25 peso/peso) a dosis de 400 kg/ha. El gobierno deMéxico (Semarnat), en cooperación con Onudi, llevaaños desarrollando programas para efectuar una reducciónprogresiva, ordenada y poco traumática de esefumigante en los sectores agrarios afectados. Este proyectopiloto se inició para el caso de la fresa en el veranodel 2007. Ahora se presentan resultados de una primeracampaña de cultivo (2007-2008) con diferentesdemostraciones llevadas a cabo en tres importantesexplotaciones freseras colaboradoras en el valle de SanQuintín: campo Olmos (Berrymex), rancho Don Juanitoy rancho Santa Mónica. Las alternativas de sustituciónevaluadas son: T1- inyección a toda superficie conla mezcla BrM: cloropicrina 50:50 peso/peso; T2- inyeccióncon riego por goteo de preplantación de cloropicrinasola (Tri-Clor EC); T3- la misma técnica que T2 con lamezcla 1,3-dicloropropeno:cloropicrina (PiClor 35 EC);T4- la misma técnica que T2 con metam potasio; T5- lamisma técnica que T2 con metam sodio (Lucafum 516),en una superficie de 2000 m 2 por demostración. Losporcentajes de replante observados fueron muy pequeños,y oscilaban entre el 0,84% y el 1,96% del materialvegetal plantado, sin diferencias entre demostracionesdentro de cada finca. Los resultados vienen a señalarque la presencia de malezas, incluso en el caso de camasde cultivo con polietileno transparente, no es un factorclave para el uso de alternativas al BrM en el cultivo dela fresa en esta zona. La cosecha se iniciaba a primerosde enero y ha continuado hasta finales de mayo del 2008.Los datos de producción observados han sido muy similaresen todas las demostraciones y explotaciones.En definitiva, los resultados preliminares obtenidos en130/fitosanidad

Estrategias generales de.../General strategies of...este proyecto piloto Semarnat/Onudi han evidenciadoclaramente la existencia de alternativas al BrM para elcultivo de la fresa en el valle de San Quintín (BajaCalifornia, México).(BM-C5) ELIMINACIÓN DEL BROMURO DE METILO EN LA PRODUCCIÓN DE CULTIVOSPROTEGIDOS A TRAVÉS DE LA IMPLEMENTACIÓN DE SISTEMAS DE MANEJO INTEGRADODE PLAGAS EN CUBABerta Lina Muiño García, 1 Eleazar Botta Ferret, 1 Eduardo Pérez Montesbravo, 1 Adriana BallesterHernández, 1 Davis Moreno Rodríguez, 1 Emilio Fernández Gonzálvez 1 y Ricardo Cuadra 21Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, bertam@inisav.cu2Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura Tropical Alejandro de Humboldt. Calle 1. aesq. a 2, Santiago de las Vegas, Ciudad de La HabanaEl bromuro de metilo (BrM) es un fumigante total quese utiliza desde 1940 como desinfectante de suelos; sinembargo, está considerado como una sustanciaagotadora de la capa de ozono que provoca serias afectacionesal ambiente y a la salud humana, por lo que sehan estudiado y puesto en marcha en varios países numerosasalternativas para su eliminación. El enfoquedesarrollado en la agricultura cubana está dado por lainclusión de diferentes alternativas en sistemas de manejointegrado de plagas (MIP). El proceso ocurrió através de un análisis participativo mediante talleres,donde se integraron científicos, especialistas, técnicos,directivos y productores. Se identificaron y caracterizaronlas alternativas más promisorias para ser adoptadaspor los productores en modelos de MIP. La adopciónse desarrolló bajo el principio de la participación,y comprende una etapa de diagnóstico fitosanitario sistemático,una fase de demostración-investigación complementariain situ y la capacitación como elementoclave para el éxito. Como resultado, hasta el 2006 seeliminó más del 90% del uso del BrM, y en el 2007 serealizó su sustitución total, con un alto impacto ambiental,económico y social. Se validó la metodologíapara el diseño y adopción de modelos de MIP flexiblesy contextualizados de acuerdo con las característicasde las entidades productivas, con énfasis en el uso dealternativas no químicas. Se logró la capacitación demás del 90% de los especialistas, técnicos, ejecutivos yproductores, a través de talleres y tres cursos nacionalessobre MIP; se crearon capacidades referentes a laproyección de la estrategia fitosanitaria y la toma dedecisiones correctas.(BM-C6) ALTERNATIVAS QUÍMICAS AL BROMURO DE METILO EN LA FRESA DE HUELVA(ESPAÑA): BREVE REFERENCIA DE RESULTADOS 2002-2008José M. López Aranda, Luis Miranda, Carmen Soria, Pedro Domínguez, Rosa M. Pérez Jiménez, TeresaZea, Miguel Talavera, Fernando Romero, Berta de Los Santos y Juan J. MedinaIrapa. Consejería de Agricultura y Pesca-Junta de Andalucía, EspañaEl proyecto INIA sobre alternativas al bromuro demetilo (BrM) en España ha llevado a cabo actividadesexperimentales durante más de diez años en Huelvapara el cultivo de fresa. Desde el 2002 y el 2003 los ensayoscon alternativas químicas se llevan a cabo en dosexplotaciones de la costa oriental de Huelva localizadasen Moguer y Palos de la Frontera. Se han utilizadobloques al azar con tres grandes repeticiones de 80 m 2para cada tratamiento fumigante. Estos fueron BrM+ cloropicrina, 1,3-dicloropropeno+cloropicrina,cloropicrina sola, DMDS, EDN, óxido de propileno,yoduro de metilo + cloropicrina, aceites esenciales deajo y mostaza, tetratiocarbamato sódico, solos o mezcladoscon cloropicrina (inyectados bajo lomos de cultivopreviamente acolchados), azida sódica, furfural,acroleina, mezclas de dazomet + DD (en riego por goteoen preplantación), dazomet y cianamida cálcica(incorporados al suelo). Los acolchados fueron confitosanidad/131

Sesión/Sessionplástico VIF negro. El ciclo de cultivo con la variedadCamarosa ha sido entre octubre y finales de mayo decada año. Un resumen de resultados de los seis añosde trabajo (2002-2003 a 2007-2008) será presentado ydiscutido. La podredumbre negra de raíz formada porel complejo black root rot y la presencia de losnematodos Meloidogyne hapla y Pratylenchuspenetrans han sido cada año los principales problemasfitosanitarios ligados al suelo. Estos resultadosevidencian que existen alternativas viables al BrMcomo 1,3-dicloropropeno + cloropicrina, cloropicrinasola y DMDS + cloropicrina. En Huelva, principal zonaproductora de fresa de Europa, se han utilizado cantidadessignificativas de fumigantes alternativos alBrM desde el 2004-2005, principalmente 1,3-dicloropropeno+ cloropicrina, cloropicrina sola y metamsodio. De hecho, la definitiva retirada de BrM se produjosin novedad en el verano del 2007. De esa forma,sin usos críticos, el cultivo de la fresa se realiza ya sinBrM en todo el territorio de la Unión Europea. Algunasincertidumbres sobre este importante hechomedioambiental serán discutidas en esta comunicación.La diseminación de estos resultados se realiza através del proyecto UE Alterbromide.(BM-C7) SISTEMAS DE MANEJO INTEGRADO DE PLAGAS COMO ALTERNATIVAPARA SUSTITUIR EL BROMURO DE METILO EN LA PRODUCCIÓN DE CULTIVOSPROTEGIDOS EN CIENFUEGOSLeónides Castellanos, 1 Alina Pérez, 2 Maricela Almarales, 3 Berta L. Muiño, 3 Mercedes González, 3 GriselPérez, 4 Jorge Luis Pardo, 2 Medardo Gómez, 2 Domingo Armas, 2 Irais Irimia, 2 Reynaldo Delgado 5 y DelvisSumit 51Centro para la Transformación Agraria Sostenible. Universidad de Cienfuegos. Carretera a Rodas Km 3,Cuatro Caminos, Cienfuegos, Cuba, lcastellanos@ucf.edu.cu2Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera a Palmira Km 4, Cienfuegos, Cuba3Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 116004Escuela de Capacitación La Colmena5Dirección Fitosanitaria Provincial, Universidad de Cienfuegos. Carretera a Rodas Km 3, CuatroCaminos, Cienfuegos, CubaEn el presente trabajo se exponen los resultados de laevaluación de diferentes alternativas biológicas para elmanejo de los nematodos del género Meloidogyne spp.en los cultivos protegidos de la provincia de Cienfuegos,con vistas a la sustitución total del fumigante bromurode metilo (BrM), así como de una encuesta en que sedeterminaron los agentes nocivos más importantes delos cultivos bajo esta tecnología y las alternativas demanejo que se empleaban para sustituir el BrM. A partirde estos dos elementos y la información de otras investigacionesrealizadas en Cuba y otros países, se elaboróun sistema de manejo de plagas como alternativa parael BrM. Tanto Trichoderma viride cepa C-66, Trichodermaharzianum cepa A-34 y Bacillus thuringiensis LBT-3ejercieron su control con el 65% de efectividad sobreMeloidogyne sp. hasta 15 cm de profundidad. Los principalesagentes nocivos de las casas de cultivo fueron losnematodos del género Meloidogyne, Thryps palmi Karny,la marchitez por Fusarium y el minador gigante Keiferialycopersicella Walsingham. El manejo integrado de plagaspropuesto consta de medidas legales y fitotécnicas,físicas, biológicas y químicas, que incluyen, entre otras,el injerto, las plantas trampa, la biofumigación, lasolarización, los sustratos sin suelo, Trichoderma,Hebernem, Bacillus thuringiensis Berl. LBt-3 y en últimainstancia Agrocelone, Vapam o Basamid.(BM-C8) LA SOLARIZACIÓN COMO ALTERNATIVA AL BROMURO DE METILOPARA DESINFECCIÓN DE SUELOS HORTÍCOLAS EN EL NORESTE DE ARGENTINA132/fitosanidadMaría del Huerto ColomboEEA INTA. CC no. 5. 3432-Bella Vista, Corrientes, Argentina, mcolombo@correo.inta.gov.ar

Estrategias generales de.../General strategies of...En Corrientes, Argentina, se cultiva tomate y pimientopara primicia bajo plástico. Estos cultivos intensivosagotan el suelo, incrementan los patógenos y el productortermina por abandonar. La estrategia es reduciro eliminar los patógenos física, química o biológicamente.El bromuro de metilo destruye la capa deozono, y el protocolo de Montreal en 1987 reguló suproducción y uso, y su eliminación en 1992. El interéssurgido por el ambiente y los cultivos orgánicos requierencontroles que superen la resistencia genética y rotacióncon poca difusión. En Bella Vista, Corrientes,Argentina, se evaluaron alternativas de solarización(SOL) desde 1989. Se experimentó en invernadero cerradocon manta cristal de 50 µ y sin manta. Se evaluósanidad, producción, temperaturas de suelo y malezas.El suelo solarizado incrementó en el 70% la producciónde tomate; registró 12ºC más que el testigo y el 98,7%menos malezas típicas como Cyperus rotundus,Portulaca oleracea, Digitaria sanguinalis, Cenchrusechinatus, Cynodon dactylon, Amaranthus hybridus,Sphaeralcia bonariensis, Sida rombifolia, Plantagolanceolada, Coniza bonariensis, Dichondria repens. Lasolarización sobre Phytophthora capcisi inoculada ensuelo produjo el 85% de temperaturas mayores de35ºC, máximas de 53ºC a 10 cm y 41ºC a 40 cm, controlde malezas del 99,9%, 24,8% mayor rendimiento,20 días de adelanto de cosecha y no hubo plantas conP. capcisi (X 2 = 3,01). Se evaluó la solarización en lomoscon mantas plásticas naranja, cristal y negroque registraron 50ºC y el negro 45ºC. Los tres controlaronmejor malezas; cristal y naranja produjeron5000 kg/ha en primicia, mayor cantidad de frutos grandesy control de nematodos. El negro y testigo tuvieronmayor número de plantas muertas.(BM-C9) LA ELIMINACIÓN DEL USO DEL BROMURO DE METILO EN EL SECTOR DE LAS FLORESY ORNAMENTALES EN CUBAEleazar Botta Ferret, 1 Berta Lina Muiño García 1 , Eduardo Pérez Montesbravo, 1 Davis Moreno Rodríguez 1y Alexander Motolongo 21Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 116002Empresa FrutifloraEl enfoque desarrollado en Cuba para la eliminacióntotal del bromuro de metilo, sustancia agotadora de lacapa de ozono, se basó en la inclusión de diferentes alternativasen programas de manejo integrado de plagas(MIP), teniendo en cuenta que son sistemas flexiblesy adaptables a diferentes contextos. En el sectorde la floricultura el proceso se inició con un diagnósticocontextual participativo de la producción nacional deflores y ornamentales. Se identificaron y evaluaron lasposibles alternativas por implementar en sustitucióndel esterilizante de suelos y sustratos, y una vez definidasse articularon en un modelo de manejo integradoque se implementó en todas las áreas productivas delpaís. A partir de este trabajo se dejó de usar el bromurodesde finales del 2006, y se ha potenciado la realizaciónde otras medidas fitosanitarias y agrotécnicas que incidendirectamente en la disminución de los daños porplagas. Debido a situaciones que dificultaron la sustitución,no se cumplió con la eliminación anticipada para el2007. Los inconvenientes se produjeron en la implementaciónde las alternativas originalmente propuestas.Tanto el metam sodio –única alternativa química disponible–como el vapor han presentado problemas de eficienciay operativos. A este panorama debe sumarse elaumento de la superficie productiva. Ante esta situaciónse ha trabajado activamente en la evaluación denuevos productos químicos alternativos. Se continúanlas actividades de extensión, como visitas a productores,charlas, demostraciones, reuniones, realización dematerial impreso, intervención en medios masales, etc.fitosanidad/133

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009SESIÓN/SESSION: LA TÉCNICA DE INJERTOCOMO UNA ALTERNATIVA AL BROMURO DE METILOEN DIFERENTES CULTIVOS/ GRAFTING TECHNIQUESAS AN ALTERNATIVE TO METHYL BROMIDE IN DIFFERENT CROPS(BM-C10) EVALUACIÓN DE LA RESISTENCIA A MELOIDOGYNE SPP. DE NUEVOSPORTINJERTOS PARA TOMATEFarah M. González, 1 Olimpia Gómez, 1 Yaritza Rodríguez, 1 A. Casanova, 1 Maite Piñón, 1 Lucila Gómez, 2María R. Vázquez, 1 R. Enrique 2 y Mayra G. Rodríguez 21Instituto de Investigaciones Hortícolas Liliana Dimitrova. Carretera Bejucal-Quivicán Km 33½, Quivicán,La Habana, farah@liliana.co.cu2Laboratorio de Nematología Agrícola, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Autopista Nacionaly Carretera de Jamaica, Apdo. 10, San José de las Lajas, La Habana, CP 32700Los nematodos formadores de agallas (Meloidogyne spp.)constituyen una importante plaga de las hortalizas en laproducción protegida en Cuba. Para su control, durantealgunos años se empleó el bromuro de metilo, compuestoquímico que no será empleado más con estos fines enesas instalaciones, de ahí que resulta imprescindible utilizarotras alternativas que permitan el manejo de laspoblaciones de nematodos. El uso del injerto herbáceoha constituido una táctica de manejo muy empleada enpaíses de Europa y en Japón. En Cuba su adopción exitosadepende, en primera instancia, del grado de resistenciaque muestren los patrones o portainjertos a poblacionescubanas de Meloidogyne. El presente estudio tuvo como objetivola evaluación de genotipos frente a Meloidogyne spp.para determinar su resistencia e inclusión en el programade desarrollo de injerto herbáceo del InstitutoHortícola Liliana Dimitrova. Los experimentos sedesarrollaron en el Centro Nacional de Sanidad Agropecuariade marzo del 2007 a mayo del 2008, en el que seevaluaron 13 genotipos ante Meloidogyne incognita yMeloidogyne arenaria, se utilizaron niveles de inóculo decada especie de 0,5; 1,5 y 2,5 juveniles de segundo estado(J2) por gramo de suelo, y se empleó como testigo susceptiblea la variedad de tomate Campbell-28. Los experimentosse mantuvieron 60 días en aisladores biológicos,y los parámetros evaluados fueron índice deagallamiento y factor de reproducción. A cada genotipose le asignó una categoría según la metodología establecida.Se comportaron como resistentes Solanum torvum,Datura stramonuim, Solanum mammosum, Physalisixocarpa, Solanum erianthum, Solanum lycopersicum variedadesMotelle y Rossol, y como susceptibles Solanumpimpinelifollium y S. lycopersicum var. ceraciformis. Porsu parte, S. lycopersicum híbrido HPG (ESASEM) secomportó como resistente a M. arenaria.(BM-C11) ADOPCIÓN DE LA TECNOLOGÍA DE INJERTOS EN LOS CULTIVOS PROTEGIDOSDE HORTALIZAS EN CUBA134/fitosanidadEduardo Pérez Montesbravo, 1 Johandri Ruizsanchez Ortega 2 y Adrián Céspedes Perera 31Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, eperez@inisav.cu2Instituto de Investigaciones Hortícolas Liliana Dimitrova. Carretera a Bejucal-Quivicán Km 33½,Quivicán, La Habana, yohandri@liliana.co.cu3Empresa de Cítricos Ceiba, Minag. Ceiba del Agua, La Habana

La técnica de injerto.../Grafting techniques...Desde el 2007 se trabaja en la implementación de latecnología de injerto para el control de nematodosformadores de agallas, y en algunas localidades de hongosfitopatógenos en los cultivos protegidos de tomate,pimiento, melón, sandía y pepino, como alternativa albromuro de metilo, dentro del manejo integrado de plagas.El injerto en plantas leñosas tiene una larga historiaen Cuba, con su utilización masiva en cítricos y frutales;sin embargo, en el injerto herbáceo antes de iniciareste proyecto solamente se habían realizado algunas investigacionesbásicas. Las tareas desarrolladas paracumplimentar la puesta en marcha de la tecnología injertoen las empresas donde se instalan los centros deproducción incluyen la microlocalización, aprobación delas autoridades competentes, ubicación en una posiciónalta, nivelación de la plataforma donde será instaladala casa de cultivo, garantizar tendido eléctrico, materialesde construcción necesarios para la obra civil, abastode agua a través de sistema de riego hasta la instalacióny ensamblaje de la casa de cultivo, establecer todaslas medidas legales y una cerca perimetral con plantasreservorios de enemigos naturales y trampas, así comola compra de los insumos anuales de la tecnología. Porotro lado, para la puesta en marcha de los centros deproducción, el proyecto del protocolo de Montreal asumesu compra y los clips, la asistencia técnica en ensamblajey puesta en marcha, así como el adiestramientoen la tecnología y procedimiento de trabajo. Para lainversión en casas de cultivos se ha tenido en consideraciónlos precios de las ofertas, la necesidad de adquiriruna cantidad aceptable de unidades, además de reunirlas condiciones técnicas adecuadas. Se recibieronvarias ofertas con costos que oscilan de 33 000 a 113 000dólares cada una. Se han adquirido siete casas de cultivosde 35 m de largo y 12 m de ancho, dividida internamenteen dos sesiones, una de 12,5 m de largo (150 m 2 )para los microtúneles o cámara húmeda y taller, y otrade 22,5 m de largo (270 m 2 ) para el desarrollo de plantasinjertadas. El área de cámara húmeda y taller disponede un sistema de refrescamiento con una pared húmeda,dos extractores y malla aluminizada, con el objetivo debajar las temperaturas en el interior de la instalación ycrear una atmósfera con alto porcentaje de humedad parael adecuado proceso de cicatrización de las plantas injertadasy control de la luminosidad. Referente a los patrones,los esfuerzos han estado dirigidos a promover el usode híbridos y especies silvestres del país, ya que loshíbridos internacionales tienen muy elevados costos queoscilan entre 128 y 192 dólares por millar. En las condicionesde producción de hortalizas en Ciego de Ávila, sehan evaluado con éxito patrones de tomate Robusta, demelón Energía y Shintosa Camelforce y de sandía RS-841y Macis. El IIHLD ha obtenido un patrón de pimientoresistente a nematodos y han evaluado con éxito el usode Solanun torvum Swartz en tomate; sin embargo, otrosensayos se requerirán sobre la potencialidad de loshíbridos Maxifor, Beaufort y Multifor en tomate, ya queno han mostrado la resistencia deseada a nematodos. Sehan realizado varias siembras exitosas de injertos deempalme en tomate y algunas han fallado por no disponerde las condiciones adecuadas de trabajo, tales comoambiente desfavorable, presencia de enfermedades, malastécnicas de injerto, alto porcentaje de fallos en el injerto,amarilleo del follaje, defoliación y muerte de laplanta, por lo que se perfecciona el procedimiento de trabajo.Actualmente se dispone de una casa de cultivo yaterminada en proceso de puesta en marcha, otra en construccióny las cinco restantes por ensamblar. Se prevébeneficiar con esta tecnología no menos de 70 ha de hortalizas.(BM-C12) TECNOLOGÍA PARA LA PRODUCCIÓN DE POSTURAS DE CAFÉ INJERTADOY SU ESTABLECIMIENTO EN SUELOS CON PRESENCIA DE NEMATODOS PARA ELIMINARLA UTILIZACIÓN DEL BROMURO DE METILOPascual Caro Cayado, G. Grave de Peralta Hechavarría, C. Bustamante, Maritza Rodríguezy Délira NavarroEstación Central de Investigaciones de Café y Cacao. Santiago de Cuba, asistec@ecicc.ciges.inf.cuDebido al daño que producen los nematodos sobre eldesarrollo y producción de la especie de café arábica, yla barrera que constituyen para plantarla en zonas conbuenas condiciones edafoclimáticas, así como eliminarla utilización del bromuro de metilo (BrM) en la desinfecciónde suelo utilizado como sustrato en viveros defitosanidad/135

Sesión /Sessioncafé, se desarrolló en la Estación Central de Investigacionesde Café y Cacao (Ecicc), y se implementó en fincascafetaleras del municipio de Tercer Frente, provincia deSantiago de Cuba, así como en varios sitios de las provinciasde Guantánamo, Holguín y Granma, el proyecto perfeccionamientoy comercialización de la tecnología deinjertación hipocotiledonar en Coffea arabica L. como alternativapara lograr una caficultura sostenible en suelosafectados por nematodos. Se logró una tecnología para lalucha contra estos microorganismos que se implementócon la construcción y puesta a funcionar de dos centros deproducción de injerto de café (CPI) en los municipios deTercer Frente, Santiago de Cuba, Yateras y Guantánamo;se logró además definir otras alternativas de manejoagrotécnico y de lucha para el combate de nematodos conla eliminación de la utilización del BrM en el cultivo delcafé y la introducción de la tecnología en áreas de referencia.Se determinó que las mujeres son más efectivas parainjertar café, y por tal motivo la tecnología constituyeuna fuente de empleo para la mujer serrana.(BM-C13) BROMURO DE METILO, SU RELACIÓN CON EL DETERIORO DE LA CAPADE OZONO Y TENDENCIAS MUNDIALESJosé de MesaPnuma. MéxicoEn la primera parte se realiza una explicación detalladade los fundamentos de la capa de ozono, las reaccionesquímicas que la forman y las que la deterioran.Asimismo se presenta de forma esquemática elfuncionamiento del protocolo de Montreal desde susinicios y sus principales logros. En la segunda partede la presentación se explican las tendencias mundialesde consumo y producción de bromuro de metilo(BrM), con especial atención a los países de la regiónde América Latina y el Caribe. Se hace mención a losproyectos de eliminación anticipada vigentes con lasdiferentes agencias de implementación. Se mencionanademás los principales cultivos, en los que ya se eliminóel BrM, las alternativas más empleadas y aquelloscasos concretos en la región donde es más difícilsu eliminación. En la parte final se comentan los retosfuturos a los que se enfrenta el protocolo deMontreal en materia de BrM.(BM-C14) SITUACIÓN DE LA ELIMINACIÓN DEL BROMURO DE METILO EN EL SECTORDE FRUTILLA, HORTALIZAS PROTEGIDAS Y FLORES DE CORTE EN LA ARGENTINALucrecia Santinoni 1 y Miguel Ángel Sangiacomo 21Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación de Argentina, lusant@mecon.gov.ar2INTA, msangiacomo@cnia.inta.gov.arArgentina, mediante la ley 23.778, ingresa al protocolode Montreal y se compromete a eliminar las sustanciasque afectan la capa de ozono, entre ellas el bromuro demetilo (BrM). Desde 1997 hasta el 2000, el InstitutoNacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) ejecutóun proyecto demostrativo (MP/ARG/97/186) de alternativasal BrM en la producción de frutilla, hortalizasprotegidas y flores de corte. Basado en los resultadosse ejecuta el proyecto MP/ARG/00/033, financiado porel Fondo Multilateral del Protocolo de Montreal. LaOnudi es la agencia de implementación y el INTA elorganismo que lo ejecuta. El objetivo del proyecto esacompañar al productor que usa BrM en la etapa detransición y reconversión tecnológica, e implementarlas alternativas más adecuadas para cada región y situaciónparticular. Funciona con una coordinación nacionaly nueve equipos técnicos regionales, con sedeoperativa en unidades del INTA.136/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009SESIÓN/SESSION: DESARROLLO DE ALTERNATIVASPARA LA ELIMINACIÓN DEL BROMURO DE METILOEN CUARENTENA Y PREMBARQUE, PROCESOS DE POSCOSECHA,ALMACENES, INSTALACIONES Y ESTRUCTURAS / DEVELOPMENTOF ALTERNATIVES FOR ELIMINATING METHYL BROMIDEIN QUARANTINE AND PRE-SHIPMENT, POST-HARVESTPROCESSES, STORE HOUSES, FACILITIES AND STRUCTURES(BM-C15) MANEJO INTEGRADO DE PLAGAS EN ALMACENES, SILOS, INSTALACIONESINDUSTRIALES Y TRANSPORTACIÓN DE ALIMENTOSEduardo Pérez Montesbravo, 1 Luis Miralles Moreno, 2 Gladys Miriam Hernández Hernández 3 y AurelioNavarro 21Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, eperez@inisav.cu2Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento 231 e/ San Pedro y Lombillo, Plazade la Revolución, Ciudad de La Habana3Grupo Empresarial de Logística. Minag, CubaLa necesidad de reducir las pérdidas ocasionadas porplagas en almacenes, silos, instalaciones industrialesy transportación de alimentos sin uso de bromurode metilo (BrM) condujo al desarrollo de un trabajoarmónico de varias instituciones de los ministeriosde agricultura (Minag), comercio interior (Mincin),industria alimenticia (Minal), transporte (Mitrans),azúcar (Minaz), comercio exterior (Alimport-Mincex), reserva estatal (INRE), fuerzas armadas(Minfar), salud pública (Minsap) y otros. El trabajodesarrollado en los últimos cuatro años se ha abordadoen cinco componentes fundamentales: 1) establecimientode un conjunto de controles, medidas,regulaciones y acciones oficiales a través de la operaciónpuerto-transporte-economía interna (Optei), laimplementación de la resolución conjunta Minag-Minsap dirigidas, entre otras cosas, a reducir pérdidasy alcanzar la inocuidad de los alimentos; igualmenteamparado en lo anterior la elaboración,análisis participativo, aprobación e implementaciónde un programa de manejo integrado de plagas (MIP)con profundas bases conceptuales y prácticas. Incluyemedidas organizativas, diagnóstico e inspección,medidas preventivas y de control, capacitación,evaluación y ajuste. Especial énfasis se atribuye aldiseñó de exclusión de plagas e higiene y limpieza; 2)desarrollo de un programa de capacitación teóricoprácticocon la inclusión de cinco cursos nacionales,14 talleres nacionales y asistencia técnica en laimplementación del MIP a las 14 provincias y elmunicipio especial de Isla de la Juventud, y asesoríaespecializada en uso de fosfina, ácaros, insectos, roedores,hongos y micotóxicas; 3) desarrollo a nivel debase de alternativas sostenibles al uso de BrM, talescomo evaluación y uso de medios biológicos para elcontrol de insectos, entre los que se incluyen Trichogrammapintoi contra lepidópteros, y Beauveriabassiana contra coleópteros, trampas de captura deinsectos, optimización del uso de fosfina, que incluyela reducción de dosis de uso y mezclas con CO 2,uso de insecticidas para almacenamiento a largo plazode granos en silos; 4) distribución a las brigadasde fumigación de equipos y suministros para garantizarbuenas prácticas de fumigación, entre los quefitosanidad/137

Sesión/Sessionincluyen caretas, filtros, monitores de fosfina de altay baja concentración, dosificadores de tabletas, sistemaJ y uso de nuevas formulaciones; 5) asimilacióndesde el 2006 del programa de MIP en todas las unidadesde almacenamiento de alimentos del país, con la asistenciatécnica permanente de los inspectores fitosanitariosy la ejecución a cargo de los respectivos responsables decontrol de calidad de cada unidad. Este conjunto de accionesha conducido a la reducción de las pérdidas porplagas en almacenamiento en el 72% en el 2007 comparadocon el 2005. Desde el 2006 se redujeron los consumos deBrM hasta su eliminación total en el sector en el 2008.(BM-C16) OPTIMIZACIÓN DEL USO DE LA FOSFAMINA EN ALMACENES Y SILOSLuis Miralles Moreno, 1 Eduardo Pérez Montesbravo, 2 Gladys Miriam Hernández Hernández 3 y SantiagoTorres Osorio 41Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento 231 e/ San Pedro y Lombillo, Plaza de la Revolución,Ciudad de La Habana2Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, eperez@inisav.cu3Grupo Empresarial de Logística4Brigada de Fumigación de Ciudad de La Habana. Minag, CubaEn Cuba en el 2004 se consumían 7,43 t de bromuro demetilo (BrM) para el control de plagas en almacenes,silos e instalaciones de la economía interna. Durantelos últimos cuatro años se alcanzó la sustitución totaldel uso de este fumigante por fosfamina (PH 3), con unconsumo anual creciente de este último, dentro de laestrategia de manejo establecida en todo el país. Unequipo de trabajo integrado por las brigadas de fumigacióndel Grupo Empresarial de Logística autorizadasa usar estas sustancias, el Centro Nacional de SanidadVegetal y sus dependencias y el Instituto deInvestigaciones de Sanidad Vegetal realizaron diferentestareas para alcanzar un uso eficiente de PH 3. Sedesarrolló un riguroso programa de aprobación paracada tratamiento que incluye diagnóstico de presenciade plagas y su estadio, la orden de tratamiento dadapor los inspectores fitosanitarios y la obligatoriedaddel cumplimiento de buenas prácticas de fumigación(BPF). Para alcanzar las BPF se han entrenado a lostécnicos y obreros calificados encargados de esta tareaen las brigadas de fumigación, se ha propuesto la certificaciónoficial tanto del personal como de las brigadaspara esta tarea, se mejoró la hermetización de las carpasmediante el uso de culebras de arena o gravilla, asícomo el mejoramiento de la calidad de los plásticos usadoscomo carpa y adecuada inspección de ellas antesdel tratamiento, así como pasados 40 min y a las 2 h dela fumigación para detectar fugas. Se dotó a todas lasbrigadas de monitores automatizados de concentracióndel gas en el ambiente de trabajo y el área fumigada,y se confecciona un gasograma de cada fumigaciónefectuada con mediciones al menos tres veces enel carpeo y en lo posible, diariamente, se mejoró elcumplimiento de las medidas de protección y liberacióndel área fumigada después de verificación a travésde mediciones cada 2 h. Se hace un control de laefectividad técnica a través de bioindicadores, adecuadamentedispuestos y por muestreos de los alimentosdespués del tratamiento. Se ha trabajado para el registrooficial de diferentes presentaciones y formulaciones,tales como tabletas, píldoras, bolsas y bandascon usos en diferentes condiciones de almacenamientode alimentos. Bajo las condiciones de Cuba, la concentraciónefectiva se fijó entre 200 y 240 ppm y decinco a ocho días de exposición en dependencia de laplaga y temperatura ambiente, lo que ha conducido aevitar sobredosis innecesarias en muchos casos. Porlas acciones antes señaladas, los análisis en todo elpaís en el 2007 y el 2008 a partir de la informaciónofrecida por los gasogramas y por las efectividadestécnicas efectuadas a cada tratamiento, muestran unamejoría notable en la eficiencia del fumigante PH 3,con mas del 90% de los tratamientos efectivos y en lamayoría de los casos, el mantenimiento de la concentracióndel gas en niveles de 200 ppm durante todo eltiempo de exposición con dosificaciones de 1-2 g/m 3 .138/fitosanidad

Desarrollo de alternativas para.../Development of alternatives for...(BM-C17) CONTROL BIOLÓGICO DE INSECTOS PLAGAS DE ALMACÉN COMO ALTERNATIVAPARA LA SUSTITUCIÓN AL BROMURO DE METILOReynaldo Delgado, 1 Leónides Castellanos, 2 Delvis Sumit, 1 David González, 3 Roquelina Jiménez 3 yYulieska Urdanivia 31Dirección Fitosanitaria de la Provincia de Cienfuegos, Universidad de Cienfuegos. Carretera a RodasKm 3, Cuatro Caminos, Cienfuegos, Cuba2Centro de Estudios para la Transformación Agraria Sostenible. Universidad de Cienfuegos. Carreteraa Rodas Km 3, Cuatro Caminos, Cienfuegos, Cuba3Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera a Palmira Km 4, Cienfuegos, CubaDurante el 2006 y el 2007 se desarrollaron experimentosen los silos de tecnología brasileña donde se almacenamaíz para la alimentación animal ubicados enCienfuegos. Se realizó un ensayo preliminar para el controlde Corcyra cephalonica (Stainton) y Ephestiacautella (Wak), donde se utilizó Trichogranma pintoiVoegelé + Zelus longipes (L.) y Trichogranma pintoi +Tetrastichus howardii (Olliff.). Posteriormente se realizaronensayos en los que se evaluaron medios biológicoscombinados para el control del lepidópteros ycoleópteros en los que se utilizaron las variantesTetratichus howardii + Beauveria bassiana Bals. yTrichogramma pintoi + Metarhizium anisopliae(Metsch.) Sorok y un testigo. Se logró una reducciónde las poblaciones de los lepidópteros Corcyracephalonica y Ephestia cautella con aplicaciones combinadasde Trichogramma pintoi y Tetrastichushowardii, tanto en el ensayo preliminar como en losexperimentos posteriores. La efectividad fue del 100% conTrichogramma pintoi y entre el 60% y el 100% conTetrastichus howardii con aplicaciones semanales en lossilos. En el caso de los biopreparados aplicados cada sietedías para los coleópteros se alcanzó una efectividad técnicaentre 59,5 y 53,5 con Beauveria bassiana, y una mortalidaddel 50% sobre las poblaciones en general, y una efectividadtécnica entre 55 y 61% con Metarhiziumanisopliae. Se determinó un efecto económico entre 406,50y 528,57 pesos para las variantes biológicas con respectoal empleo de insecticidas químicos. Se recomendó tratarlos productos almacenados con las mezclas de Trichogrammapintoi, Tetrastichus howardii, Beauvería bassiana yMetarhizium anisopliae para el control de lepidópteros ycoleópteros, lo cual ha permitido un control efectivo de losinsectos plaga sin la necesidad de químicos.fitosanidad/139

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009SESIÓN/SESSION: USO DE ANTAGONISTAS PARA LA DISMINUCIÓNDEL EMPLEO DE BROMURO DE METILO. SESIÓN CONJUNTACON EL II TALLER LATINOAMERICANO DE BIOCONTROLDE FITOPATÓGENOS / USE OF ANTAGONISTS FOR REDUCINGMETHYL BROMIDE. JOINT SESSION TO THE II LATIN-AMERICANWORKSHOP OF PHYTOPATHOGEN CONTROL(CB-C7) ALTERNATIVAS BIOLÓGICAS AL BROMURO DE METILO EN LA FRESA DE HUELVA(ESPAÑA). RESULTADOS DE DOS AÑOS DE ACTIVIDADESJuan J. Medina, Luis Miranda, Carmen Soria, Pedro Domínguez, Rosa M. Pérez Jiménez, Teresa Zea,Miguel Talavera, Fernando Romero, Berta de Los Santos y José M. López ArandaIfapa, Consejería de Agricultura y Pesca. Junta de Andalucía, EspañaEl proyecto INIA sobre alternativas al bromuro demetilo en España para el cultivo de fresa realiza ensayoscon soluciones no químicas (biológicas) en la finca experimentalEl Cebollar (Ifapa) en Moguer (Huelva). Se presentanresultados de dos campañas (2006-2007 y 2007-2008) en un diseño de bloques al azar con ochotratamientos fumigantes: 1) control no fumigado; 2)biosolarización (biofumigación con estiércol de gallinafresco a 30 000 kg/ha + solarización (agosto); 3) mismotratamiento que 2) anterior con estiércol de gallina fermentado(durante un año); 4) aplicación periódica deTrichoderma (Tusal) a través del riego por goteo; 5) tratamientodescrito en 2) más aplicación periódica vía foliarde proteína Harpin 3% (Messenger); 6) tratamiento descritoen 2) más aplicación periódica por goteo de PapillonComplex (activador del enraizamiento y bioestimulante);7) tratamiento descrito en 2) más aplicación periódicavía foliar de Puxa (Quitosano); 8) tratamiento descritoen 2) (biosolarización) más tratamiento 2) (Trichoderma).El ciclo de cultivo, en macrotúnel con cv. Camarosa fueentre octubre y finales de mayo de cada año. En el primeraño (2006-2007) se detectaron poblaciones deMeloidogyne hapla en todos los tratamientos, con índicesde agallas que oscilaron entre 0,20 para el tratamiento5) y 0,85 para el 4), en una escala de severidad de 0-4.En esa campaña la microbiota fúngica total del sueloantes y después de los tratamientos fumigantes se mantuvoen unos niveles similares entre 104 y 105 ufc/g suelo.La frecuencia de aislamiento de patógenos de suelodetectados a final de campaña fue baja. Los resultadosen sanidad de suelo en la segunda campaña (2007-2008)están en pleno análisis y serán discutidos. En ambascampañas el control no fumigado 1) y el tratamiento 4)con Trichoderma (Tusal) presentaron los rendimientosmás bajos tanto en producción precoz como total. Se hapuesto de manifiesto la mayor incidencia de plantasmuertas y menor desarrollo vegetativo en los tratamientosmenos productivos 1) y 4) (sin biosolarización). Ladiseminación de estos resultados se realiza a través delproyecto UE Alterbromide.(CB-C8) MODELO DE MANEJO INTEGRADO DE PLAGAS COMO ALTERNATIVA AL USO DEL BROMURODE METILO EN LOS CULTIVOS PROTEGIDOS DE LA EMPRESA DE CÍTRICOS LA JÍQUIMAMaira Iris Méndez Ramos, 1 Ángel Polanco Aballe 1 e Ismerio Velásquez Santiesteban 21Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Calle Carbó 40 esq. a calle Holguín, reparto Alturasde Parera, Holguín, Cuba2Empresa de Cítricos La Jíquima. Calixto García, Holguín, Cuba140/fitosanidad

Uso de antagonistas para.../Use of antagonists for...Como resultado de la implementación de prácticas demanejo integrado de plagas dirigidas a lograr suelos ysustratos con bajos niveles poblacionales de organismosnocivos, similares a los que se obtendrían con eluso del bromuro de metilo en la unidad de cultivos protegidosde La Jíquima, provincia de Holguín, se alcanzaronrendimientos satisfactorios en este tipo de tecnología.Se adoptó un modelo integrado de plagas (MIP)a partir de la propuesta de referencia del proyecto, lacual se reajustó a las condiciones de la empresa y sepriorizó el nivel de aplicación de microorganismos benéficos.El esquema aplicado consistió en la utilizaciónde Tsukamurella paurometabola y Trichoderma spp. enla preparación del sustrato del semillero, dos tratamientosen plantación y otro al preparar el suelo para eltrasplante de las posturas. Fue también alto el gradode adopción de alternativas agrotécnicas (roturaciónlimitada al área de los canteros, descanso del suelo entreun cultivo y otro, incorporación de materia orgánica,siembra de lechuga de trasplante como cultivo trampay rotación de cultivos). En cuanto a la aplicación dealternativas físicas, fue factible la exposición directadel suelo al sol, el uso de agua caliente y la biofumigacióncon residuos de col. El empleo de plaguicidas químicosse redujo a tratamientos con formaldehído de formadirigida. La efectividad técnica alcanzada con la aplicacióndel MIP fue superior al 85%, muy ventajosa enrelación con la estrategia anterior, cuando los altos nivelespoblacionales, principalmente nematodos, impedíanla culminación del ciclo de los cultivos.(CB-C9) USO DE AGENTES MICROBIOLÓGICOS EN SISTEMAS DE MANEJO INTEGRADODE PLAGAS COMO ALTERNATIVA AL BROMURO DE METILO EN CULTIVOS PROTEGIDOSDE LA EMPRESA CEIBAOscar Cruz, 1 Ana María Izquierdo, 1 Adrián Céspedes, 1 Berta Lina Muiño, 2 Eleazar Botta, 2 EduardoPérez, 2 Jesús Mena, 3 Emilio Fernández, 2 Adriana Ballester, 2 Davis Moreno 2 y Ricardo Cuadras 41Empresa de Cítricos Ceiba, Minag. Ceiba del Agua, La Habana2Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, bertam@inisav.cu3Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Camagüey. GP 387, CP 70100, Camagüey, Cuba4Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura Tropical Alejandro de Humboldt. Calle 1. aesq. a 2, Santiago de las Vegas, Ciudad de La HabanaLa empresa Ceiba dispone de un total aproximadode 107 instalaciones para el cultivo de hortalizas protegidas,equivalente a 12,5 ha. Los cultivos principalesson tomate, pimiento y pepino, con fines decomercialización en frontera y la exportación. Lasproducciones están afectadas por el ataque de agentesnocivos del suelo como nematodos y especies dehongos, por lo que se introdujo el bromuro de metilo(BrM) como desinfectante del suelo. En el 2003 seaplicó al 2,8% de las casas, en el 2004 se elevó el consumoal 78,5% y en el 2005 al 17,76%. En este mismoaño se inició la adopción de un programa de manejointegrado, que incluyó diagnóstico sistemático,capacitación a productores y técnicos, y demostracionesin situ de las diferentes alternativas propuestas.Este proceso se realizó mediante la facilitaciónde un equipo técnico del proyecto del protocolo deMontrea: «Eliminación total del uso de bromuro demetilo en tratamientos al suelo, sustratos, almacenesy estructuras». (Proyecto No. MP/CUB/04/133).El modelo implementado hace énfasis en la aplicaciónde alternativas biológicas (HeberNem yTrichoderma spp.) combinado con medidas legales,agrotécnicas, físicas y químicas. Se desarrolló la estrategiaa nivel de empresa a partir del enfoque de lareducción paulatina del área afectada con altos nivelesde infectación y el incremento y preservación deáreas con niveles de inóculo no detectables. En el 2006se logró eliminar totalmente el uso del BrM, así comola reducción en más del 50% de las aplicaciones con1,3-dicloropropeno + cloropicrina, con un importanteimpacto económico y ambiental.fitosanidad/141

FITOSANIDAD vol. 13, no. 2, junio 2009SESIÓN DE CARTELES/ POSTERS SESSION(BM-P1) LIBERACIONES DE TRICHOGRAMMA SPP. PARA EL CONTROL DE LEPIDÓPTEROSEN SILOS DE LA EMPRESA DE CEREALES JOSÉ ANTONIO ECHEVARRÍARafael Abreu Ávila y Eduardo Pérez MontesbravoInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600, rabreu@inisav.cuLas plagas que atacan a los productos almacenadosconstituyen una seria problemática a la economía nacional,al ocasionar pérdidas sustanciales. Los métodostradicionales utilizados para el control de plagasde almacenes han estado basados en la utilización defumigantes químicos, como es el caso del bromuro demetilo, el cual constituye un compuesto en vía de eliminaciónpor sus probados daños a la capa de ozono.El control biológico, mediante la utilización de artrópodosbenéficos, constituye una vital herramienta parael control de plagas de almacén, donde el caso del géneroTrichogramma puede utilizarse para el control de plagasinsectiles del orden Lepidóptera en estas instalaciones.Con el objetivo de realizar el control delepidópteros en silos de granos mediante la utilizacióndel parasitoide Trichogramma, se desarrollo este trabajoen la empresa de cereales José Antonio Echevarría.Se seleccionaron dos silos metálicos que almacenabancenteno y uno de concreto con trigo almacenado. Serealizaron muestreos de plagas semanales en las que setomó 1 kg de grano por silo, cuyas muestras se llevaronal laboratorio para el conteo e identificación de plagas.Para las liberaciones de Trichogramma se utilizó la cepa385 de Trichogramma pintoi a dosis que oscilaron entre10 y 24 pulg 2 por silo. Las plagas detectadas fueronTribolium castaneum, Rhizopertha dominica, Tenebriomonitor, Corcyra cephalonica y Ephestia kuhniella. Selogró un control de la incidencia de los lepidópterosCorcyra cephalonica y Ephestia kuhniella mediante eluso del parasitoide Trichogramma.(BM-P2) EVALUACIÓN DE LA MEZCLA DE DIÓXIDO DE CARBONO CON FOSFAMINAPARA EL CONTROL DE PLAGAS DE ALMACÉNEduardo Pérez Montesbravo, 1 Luis Miralles Moreno, 2 Jorge Páez Castillo, 3 Agustín Hernández Alcántara, 3María Peneque Alemán 3 y Osvaldo Díaz Rodríguez 41Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 11600 eperez@inisav.cu2Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento 231 e/ San Pedro y Lombillo, Plazade la Revolución, Ciudad de La Habana3Dirección Provincial Sanidad Vegetal. Avenida Finlay Km 2½, reparto Puerto Príncipe, Camagüey,Cuba, CP 708004Brigada de Fumigación. Camagüey, CubaEn la búsqueda de soluciones más efectivas, menos costosasy a la vez menos nocivas como alternativa al usode bromuro de metilo en tratamiento de plagas de almacén,y dentro de la estrategia del manejo integradode plagas, se realizó un ensayo con mezclas de fosfamina(PH 3) a bajas concentraciones, y CO 2, aprovechandolas condiciones de temperaturas de los meses más cálidosdel año, en los que a la vez que se incrementa la142/fitosanidad

Sesión de carteles /Posters sessionincidencia de plagas se presentan mejores temperaturaspara un rápido y efectivo control de plagas con estasvariantes. El ensayo se inició el 29 de abril del 2008en el combinado de cerveza Tínima, Camagüey, en tresestibas de cebada malteada de 20 m 3 cada una (22 t).Las variantes evaluadas fueron las mezclas de PH 3+CO 2en concentraciones de 0,25 g/m 3 + 0,36 kg/m 3 y0,50 g/m 3 + 0,20 kg/m 3 , respectivamente, comparadocon PH 3a 1 g/m 3 como testigo. Después de colocadaslas tabletas de PH 3, se hermetizó cada estiba y luego seinjertó el CO 2. En cada estiba se colocaron en tres niveles,nueve viales con cantidades conocidas de insectosvivos de las especies Sitophillus orizae, S. granarius,Lasioderma serricorne, Tribolium castaneum, Ephestiaellutella y Corcyra cephalonica, para la determinaciónde la efectividad técnica de los tratamientos. Duranteel período de exposición se determinó la concentraciónde PH 3con el equipo Uniphos 250 con rango de lecturade 0-2000 ppm, y la de CO 2a través del paso de unvolumen conocido de gas del interior de cada carpa endos recipientes herméticos con solución 0,5 molar deNaOH. Posteriormente se evaluó en el laboratorio conClH y se usó naftalina como indicador. El registro detemperatura mostró valores entre 29 y 33°C. La concentraciónde PH 3a las 24 y 48 h de la fumigación enlas variantes de 0,25; 0,50 y 1,0 g/m 3 alcanzó valores de173, 345 y 522 ppm, respectivamente; la concentraciónde CO 2mermó al 75% de lo inyectado. Se realizó unconteo de las plagas en los viales a las 72 h de la fumigación,y en todas las variantes se alcanzó el 100% deefectividad técnica. En evaluaciones posteriores cadasiete días se mantuvieron estos resultados. El uso de lamezcla de PH 3+ CO 2conlleva un ahorro sustancial enel primero, por lo que se prevé seguir la evaluación endiferentes condiciones de almacenamiento, la mezcla conla concentración más baja de la primera.(BM-P3) LA QUITOSANA COMO ALTERNATIVA ECOLÓGICA AL BROMURO DE METILOEN LA PROTECCIÓN DEL TABACO (NICOTIANA TABACUM L.) CONTRA SUS PRINCIPALESPATÓGENOS FUNGOSOSAlejandro B. Falcón Rodríguez, 1 Daimy Costales Menéndez, 1 Dianevys González Peña, 1 Miguel A.Ramírez Arrebato, 2 Caridad Jiménez Arteaga, 3 Gustavo González Gómez 3 y Miguel A. Martínez Téllez 41Grupo de Productos Bioactivos, Departamento de Fisiología y Bioquímica Vegetal, Instituto Nacionalde Ciencias Agrícolas. Carretera a Tapaste Km 3½, San José de las Lajas, 32700, GP 1, La Habana,alfalcon@inca.edu.cu2Estación Experimental del Arroz Los Palacios. Carretera de la Francia Km 1½, Los Palacios, 22900,Pinar del Río, Cuba3Departamento Agroforestal, Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de Granma4Centro de Investigaciones en Alimentación y Desarrollo. Hermosillo, estado de Sonora, MéxicoLa quitosana es un compuesto no tóxico que se obtienedel polímero natural conocido como quitina, cuyafuente principal es el exoesqueleto de los crustáceos.La quitosana inhibe el crecimiento de un gran númerode hongos y bacterias, activa la resistencia basal enplantas contra sus patógenos y promueve el crecimientoy la floración en varios cultivos. El grupo de productosbioactivos del Instituto Nacional de CienciaAnimal ha diseñado metodologías de obtención dequitosana a partir de quitina de langosta cubana, yha caracterizado biológicamente este polímero y susderivados como principio activo en la protección deplantas contra sus patógenos y en el estudio de suefecto sobre el crecimiento de varias especies. Estetrabajo informa los resultados del efecto inhibitoriode varios polímeros y derivados de menor masa sobreel crecimiento in vitro del micelio de varios patógenosaislados de tabaco, así como sobre la germinación dezoosporas de Phytophthora nicotianae. Igualmente seinforma el efecto de estos compuestos sobre la activaciónde indicadores defensivos y resistencia, a escalade bioensayo, en plántulas de tabaco contra este patógeno,que es el causante de la pata prieta, principalenfermedad de este cultivo en la etapa de semilleros.Adicionalmente se ejecutaron experimentos en condicionessemicontroladas para conocer el efecto de posiblescandidatos inductores de resistencia en tabacosobre parámetros del crecimiento en estas plantas. Sepresentan también los primeros resultados en la aplicaciónde polímeros de quitosana sobre plantas encondiciones de campo, y su influencia sobre el crecimientoy la incidencia de patógenos de este cultivo.fitosanidad/143

Sesión de carteles /Posters sessionLa experiencia obtenida en los estudios ejecutadospermite avalar la quitosana, compuesto natural, inocuo,biodegradable y de posible preparación a partirde desechos pesqueros, como alternativa al bromurode metilo en la protección del cultivo del tabaco contrasus principales patógenos.(BM-P4) ENTOMOFAUNA ASOCIADA A PRODUCTOS ALIMENTICIOS EN ALMACENADOS.USO DE TRAMPAS DE CAPTURA COMO ALTERNATIVA DE MANEJOJosé Enrique Domínguez Umpiérrez, 1 Leonel Marrero Artabe 2 y José J. Torrent Molina 31Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Central Km 111, Gelpis, Matanzas, Cuba2Universidad de Matanzas. Autopista Varadero Km 3½, Matanzas, Cuba3Dirección Provincial de Sanidad Vegetal. Matanzas, CubaLa incidencia de insectos plaga afecta la conservación yseguridad de los alimentos en almacenes de la economíainterna cubana, por ello se requiere de una mayoratención fitosanitaria y protección ambiental. Duranteel período julio del 2006 a marzo del 2007 se realizóuna investigación para diseñar una estrategia demonitoreo y manejo de la entomofauna asociada a alimentosalmacenados. Mediante la instalación de sistemasde trampas (melaza, colores y luz) se realizaronmonitoreos sistemáticos a los diferentes productos alimenticiosde seis almacenes de la provincia de Matanzas.Se evaluó la eficacia de captura de insectos y ladisposición espacial según diseños de trampeo. Para ellose estableció un diseño totalmente aleatorizado con arreglobifactorial. Los datos obtenidos se procesaronestadísticamente mediante un Anova, y las medias decaptura se compararon mediante la prueba de rangosmúltiples de Duncan p ≤ 0,01. Se obtuvo un listado dela entomofauna asociada según producto, se observóuna riqueza de 26 especies; de ellas 18 constituyen plagasde alimentos almacenados, con mayor incidencia decoleópteros. Ahasverus advena Walt resultó la especiede mayor abundancia y frecuencia de aparición. Losalmacenes U-302 del Mincin y de la UMCC mostraronla mayor infestación de insectos plaga con superior ataqueen arroz, frijol y maíz, a pesar de la aplicación dePibutrin 33. La mayor eficacia de captura se alcanzócon el tratamiento tres (tres trampas de melaza en elsuelo por arista de la estiba) con diferencias estadísticasaltamente significativas respecto a las restantesdistribuciones espaciales evaluadas. Se detectaron porprimera vez en almacenes de alimentos de la provincialos parasitoides Cephalomia sp. (Hymenoptera:Bethylidae), Anisopteromalus calandrae Howard,Pseudomicromelus sp. (Hymenoptera: Pteromalidae).Este último constituye un nuevo reporte del género paraCuba. Los resultados en este trabajo devienen alternativaspromisorias de manejo a implementar en el programade manejo integrado de plagas de almacenes dealimentos en el territorio de Matanzas.(BM-P5) MANEJO AGROECOLÓGICO DE POBLACIONES DE NEMATODOSEN LA AGRICULTURA URBANA144/fitosanidadJuan M. Pérez, 1 Esther L. Martín, 1 Andrés Espino, 1 Manuel García, 2 Hortensia Gandarilla, 3 Alina Pérez, 3Emilio Fernández, 4 Marusia Stefanova, 4 Noris Olivares, 5 Rubén C. Rodríguez, 6 Ileana Martinez, 7 Carlos M.Andreu 8 y Mayra Mendez 91Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Maleza Km 2½, Santa Clara, Villa Clara, Cuba2Laboratorio Provincial de Suelos. Villa Clara, Cuba3Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento 231 e/ San Pedro y Lombillo, Plazade la Revolución, Ciudad de La Habana4Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudadde La Habana, CP 116005Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera a Santiago de Cuba Km 2½, Guantánamo, Cuba6Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Central Km 111, Gelpis, Matanzas, Cuba7Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Genaro Rojas 86 e/ Marcelino Diéguez y Antonio Barrera,Las Tunas, Cuba, CP 75200

Sesión de carteles /Posters session8Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad Central Martha Abreu. Carretera a Camajuaní Km 5½,Santa Clara, Villa Clara, Cuba9Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Calle Carbó 40 esq. a calle Holguín, reparto Alturas de Parera,Holguín, CubaComo parte de la búsqueda de alternativas no químicaspara el control de nematodos, se realizaron estudiosde la eficacia del tratamiento de áreas contaminadaspor este organismo y destinadas a cultivoseconómicos con diferentes compuestos orgánicos y mediosbiológicos. Se trabajó en condiciones semicontroladasy en campo (cámaras de organopónicos ycasas de cultivo), se evaluó el efecto de la adición detabaquina, cachaza y biopreparados del hongoTrichoderma a suelos con infestación natural denematodos del género Meloidogyne Goeldi sobre la poblacióndel parásito y los rendimientos agrícolas, hastaencontrar los valores adecuados, y siempre se comparócon un testigo. Como resultado se obtuvo una reduccióndel grado de contaminación mayor del 70% y unincremento de los rendimientos agrícolas que alcanzómás del 50%. Se determinaron además los patógenosfungosos Phytium sp., Phytophthora parasitica yRizoctonia solana, y se logró un control efectivo con elantagonista.fitosanidad/145