Promefa - Guia de procedimientos 2009.pdf - Facultad de ...
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PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresPrograma para el mejoramiento <strong>de</strong> laevaluación <strong>de</strong> forrajes y alimentos- PROMEFA -Guía <strong>de</strong> <strong>procedimientos</strong> analíticosAño 2009G. JaurenaM. WawrzkiewiczCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Departamento <strong>de</strong> Producción Animal<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía – Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresTel: 4524-8005; cisna1@ agro.uba.ar
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresTabla <strong>de</strong> contenidosTABLA DE CONTENIDOS .......................................................................................................2PROTOCOLOS ANALÍTICOS ............................................................................................4FIBRA DETERGENTE NEUTRO (AFDN) – V1 ..........................................................................4CENIZAS 600ºC × 2 H – V1..................................................................................................7CENIZAS 550ºC × 4 H – V1..................................................................................................9CENIZAS 450ºC × 12 H – V1..............................................................................................11FIBRA DETERGENTE ÁCIDO (FDA) – V1..............................................................................13RECUPERACIÓN DE N (AOAC, 1996 – 4.2.09) – V5............................................................16LIGNINA EN DETERGENTE ÁCIDO CON ÁCIDO SULFURICO (LDAAS) – V2 ................................20MATERIA SECA PARCIAL – V2.............................................................................................23MATERIA SECA TOTAL – V2...............................................................................................25NITRÓGENO TOTAL (KJELDAHL) – V1..................................................................................27PROTOCOLOS MISCELÁNEOS......................................................................................32CORRECCIÓN DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS POR MATERIA SECA TOTAL – V2...................32MODELOS PROPUESTOS PARA PREDECIR LA CONCENTRACIÓN ENERGÉTICA DE LOS ALIMENTOSPARA RUMIANTES – V1 ......................................................................................................34PROCESAMIENTO ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS – V2..................................38
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProtocolos AnalíticosFibra Detergente Neutro (aFDN) – v1Por equipo ANKOM (Ankom, 2005)Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.El residuo fibroso (aFDN, fundamentalmente celulosa, hemicelulosa y lignina) seobtiene luego <strong>de</strong> disolver con <strong>de</strong>tergente neutro los compuestos presentes en el contenidocelular junto con sustancias <strong>de</strong> la pared celular <strong>de</strong> fácil digestión (e.g. pectinas).Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• El Lauril sulfato <strong>de</strong> sodio pue<strong>de</strong> irritar las mucosas. Usar máscara y guantes cuando estémanipulando este reactivo y trabajar bajo campana.• Asegurarse que el tamaño <strong>de</strong> partícula <strong>de</strong> la muestra sea <strong>de</strong> 1 mm.Equipamiento• Balanza analítica.• Estufa <strong>de</strong> secado regulada a 105ºC.• Aparato <strong>de</strong> digestión- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER• Bolsitas filtrantes- ANKON Technology F57 filter bags• Desecador.• Sellador por calor.Reactivosa) Solución <strong>de</strong> <strong>de</strong>tergente neutro (SDN): por cada litro <strong>de</strong> solución• 30,0 g <strong>de</strong> lauril sulfato <strong>de</strong> sodio (SDS),• 18.61 g <strong>de</strong> EDTA-sodio dihidratado;• 6,81 g <strong>de</strong> tetraborato <strong>de</strong> sodio <strong>de</strong>cahidratado;• 4,56 g <strong>de</strong> fosfato dibásico <strong>de</strong> sodio anhidro;• 10 ml <strong>de</strong> trietilengilcol,
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires• Agitar y calentar la solución hasta ebullición para garantizar la estabilidad <strong>de</strong> la misma.Ajustar el rango <strong>de</strong> pH entre 6,9 y 7,1.b) Alfa-amilasa-- alfa amilasa bacteriana termoestable, actividad = 340,000 modificadoWohlgemuth Units / mlc) Sulfito <strong>de</strong> sodio- Na 2 SO 3 anhidro.d) Acetona- Use un grado que esté libre <strong>de</strong> colores y que no tenga niveles elevados <strong>de</strong>evaporación.Procedimiento1. Preparación <strong>de</strong> la muestra (pue<strong>de</strong>n procesarse un máximo <strong>de</strong> 24 bolsas por digestión).a. Rotular <strong>de</strong>bidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).b. Pesar las bolsas <strong>de</strong> filtro (T1) y llevar a cero la balanza.c. Pesar aproximadamente 0,5 g (+/- 0,05 g) <strong>de</strong> la muestra molida y secada a65°C (MH1) (para alimentos con bajo contenido <strong>de</strong> agua solo es necesariomolerlos) directamente en la bolsa <strong>de</strong> filtro.d. Pesar dos bolsitas <strong>de</strong> filtro para <strong>de</strong>terminar el blanco (Tbco1).e. Sellar por calor las bolsas cercano al bor<strong>de</strong> (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno <strong>de</strong> las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> las bolsas.g. Exceptuando las muestras <strong>de</strong> forraje, las restantes <strong>de</strong>berán ser sometidas a unlavado por inmersión con acetona durante 3 min y luego las muestras se <strong>de</strong>bensecar completamente antes <strong>de</strong> ser sometidas a la digestión.2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml <strong>de</strong> solución <strong>de</strong> Detergente Neutro(SDN) <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso <strong>de</strong> digestión. Si se procesan menos <strong>de</strong> 20 bolsas se agregan100 ml/bolsa <strong>de</strong> la SDN. El volumen mínimo <strong>de</strong> solución es <strong>de</strong> 1500 ml.3. Agregar 4 ml <strong>de</strong> la alfa amilasa termoestable durante la digestión. En caso <strong>de</strong> norealizar el procedimiento secuencial para la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> fibra en <strong>de</strong>tergente ácido(FDA) adicionar también 20 g (0,5g/50ml <strong>de</strong> NDS) <strong>de</strong> sulfito <strong>de</strong> sodio en la solución enel vaso <strong>de</strong> digestión. Si se realizará el procedimiento secuencial <strong>de</strong> <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong>FDA se <strong>de</strong>be omitir el agregado <strong>de</strong> sulfito <strong>de</strong> sodio.4. Calentar hasta 90-100°C la SDN <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso digestor antes <strong>de</strong> colocar lasmuestras.5. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez que la solución estácaliente, colocar en el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso <strong>de</strong> digestión. Digestardurante 60 minutos.6. Interrumpir la agitación y el calentamiento, abrir la válvula y <strong>de</strong>jar salir la solución(precaución: la solución <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso está bajo presión). La válvula se abre primero
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Airespara liberar la presión, para luego abrir la tapa <strong>de</strong>l vaso. Una vez liberada la soluciónse <strong>de</strong>be volver a cerrar la válvula.7. Después <strong>de</strong> que la solución ha salido toda <strong>de</strong>l vaso se abre la tapa <strong>de</strong>l mismo. Seagrega c.a. 2000 ml <strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada a 70-90°C con 4 ml <strong>de</strong> alfa amilasa. Se cierra elvaso y se pren<strong>de</strong> el agitador por 3 – 5 min. Luego se libera el agua y se repite elprocedimiento cuatro veces en total, siendo solo en los dos primeros que se agrega laamilasa.8. Sacar las bolsas <strong>de</strong>l digestor y sacar el exceso <strong>de</strong> agua <strong>de</strong> las mismas presionándolas.Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos. Remover el exceso<strong>de</strong> acetona por presión.9. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Luego completar el secado a 105°Cdurante 4 horas. Enfriar en <strong>de</strong>secador y pesar las muestras (T+aFDN) y los blancos(Tbco2).CálculosaFDN (%bs) = 100 x {(T+aFDN) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)]} / (MH1 x MS105)}Don<strong>de</strong>,%bs:MH1 (g):MS105 (g/g):T+aFDN (g):T1 (g):Tbco1 (g):Tbco2 (g):Porcentaje sobre base seca.peso <strong>de</strong> la muestra.coeficiente <strong>de</strong> materia seca a 105°C.peso final <strong>de</strong> la bolsa con la fibra.Peso <strong>de</strong> la bolsa vacía.Promedio <strong>de</strong> pesos <strong>de</strong> bolsas para blanco inicial(previo a la digestión con el <strong>de</strong>tergente).Promedio <strong>de</strong> pesos <strong>de</strong> bolsas para blanco final (luego<strong>de</strong> la digestión con el <strong>de</strong>tergente)ReferenciasAnkom. 2005. Subject: Neutral Degerteng Fiber in Feeds. Filter bags technique (ANKOM200).Accessed 9/5/2007, 2007.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analisys. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I. Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCenizas 600ºC × 2 h – v1Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos (según la referencia para alimentos y plantas).La materia orgánica <strong>de</strong> la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (in<strong>de</strong>pendientemente <strong>de</strong> su origenfuncional en el material <strong>de</strong> origen).PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Cápsulas <strong>de</strong> porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.Procedimiento10. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.11. El procedimiento se <strong>de</strong>be realizar por duplicado para cada una <strong>de</strong> las muestras.12. Las cápsulas <strong>de</strong> porcelana utilizadas en este procedimiento <strong>de</strong>ben estarcompletamente secas. Para ello <strong>de</strong>ben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos<strong>de</strong>s<strong>de</strong> la tar<strong>de</strong> anterior.13. Se retiran las cápsulas <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador y se <strong>de</strong>jan enfriar (aprox. 15-30 min.)14. Registrar el peso <strong>de</strong> la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se <strong>de</strong>be retirarcon pinza la cápsula <strong>de</strong>l <strong>de</strong>secador y colocarla sobre el plato <strong>de</strong> la balanza concuidado.15. Colocar en la cápsula una alícuota <strong>de</strong> la muestra <strong>de</strong> peso conocido (aproximadamente2 g) (MH)16. Regular la mufla a 600ºC y encen<strong>de</strong>rla una vez que las cápsulas están en su interior.17. Una vez alcanzada la temperatura final se <strong>de</strong>be mantener durante 2 horas.18. Apagar la mufla y <strong>de</strong>jar enfriar hasta 150-200°C.19. Retirar las cápsulas en <strong>de</strong>secador, <strong>de</strong>jar enfriar y pesar (T+Cen).20. Si se <strong>de</strong>jan las cenizas <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la mufla <strong>de</strong> un día para otro, regular la temperatura
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Airesen 110ºC, <strong>de</strong> esta manera las cenizas se mantendrán secas.21. Se pue<strong>de</strong> continuar con la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> cenizas a partir <strong>de</strong> las cápsulaspreparadas con que se <strong>de</strong>terminó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> MS 105°C se proce<strong>de</strong> <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el punto 7 <strong>de</strong>lpresente protocolo.CálculosCen (%) = {[(T+Cen.) – T] / MH} × 100Cen (%bs) = [(T+Cen.) – T] / (MH × MS105 / 100) × 100Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)Don<strong>de</strong>,Referencias%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): TaraAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCenizas 550ºC × 4 h – v1Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.La materia orgánica <strong>de</strong> la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (in<strong>de</strong>pendientemente <strong>de</strong> su origenfuncional en el material <strong>de</strong> origen).Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Cápsulas <strong>de</strong> porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Procedimiento22. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.23. El procedimiento se <strong>de</strong>be realizar por duplicado para cada una <strong>de</strong> las muestras.24. Las cápsulas <strong>de</strong> porcelana utilizadas en este procedimiento <strong>de</strong>ben estarcompletamente secas. Para ello <strong>de</strong>ben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos<strong>de</strong>s<strong>de</strong> la tar<strong>de</strong> anterior.25. Se retiran las cápsulas <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador y se <strong>de</strong>jan enfriar (aprox. 15-30 min.)26. Registrar el peso <strong>de</strong> la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se <strong>de</strong>be retirarcon pinza la cápsula <strong>de</strong>l <strong>de</strong>secador y colocarla sobre el plato <strong>de</strong> la balanza concuidado.27. Colocar en la cápsula una alícuota <strong>de</strong> la muestra <strong>de</strong> peso conocido (aproximadamente2 g) (MH)28. Regular la mufla a 550ºC y encen<strong>de</strong>rla una vez que las cápsulas están en su interior.29. Una vez alcanzada la temperatura final se <strong>de</strong>be mantener durante 4 horas.30. Apagar la mufla y <strong>de</strong>jar enfriar hasta 150-200°C.31. Retirar las cápsulas en <strong>de</strong>secador, <strong>de</strong>jar enfriar y pesar (T+Cen).
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires32. Si se <strong>de</strong>jan las cenizas <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la mufla <strong>de</strong> un día para otro, regular la temperaturaen 110ºC, <strong>de</strong> esta manera las cenizas se mantendrán secas.33. Se pue<strong>de</strong> continuar con la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> cenizas a partir <strong>de</strong> las cápsulaspreparadas con que se <strong>de</strong>terminó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> MS 105°C se proce<strong>de</strong> <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el punto 7 <strong>de</strong>lpresente protocolo.CálculosCen. (%) = [((T+Cen) – T) / MH] × 100Cen (%bs) = [((T+Cen) – T) / (MH × MS105 / 100)] × 100Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)Don<strong>de</strong>,%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): TaraReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCenizas 450ºC × 12 h – v1Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.Recopilación: M. Wawrzkiewicz y G. JaurenaLa materia orgánica <strong>de</strong> la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (in<strong>de</strong>pendientemente <strong>de</strong> su origenfuncional en el material <strong>de</strong> origen).Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Cápsulas <strong>de</strong> porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Procedimiento34. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.35. El procedimiento se <strong>de</strong>be realizar por duplicado para cada una <strong>de</strong> las muestras.36. Las cápsulas <strong>de</strong> porcelana utilizadas en este procedimiento <strong>de</strong>ben estarcompletamente secas. Para ello <strong>de</strong>ben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos<strong>de</strong>s<strong>de</strong> la tar<strong>de</strong> anterior.37. Se retiran las cápsulas <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador y se <strong>de</strong>jan enfriar (aprox. 15-30 min.)38. Registrar el peso <strong>de</strong> la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se <strong>de</strong>be retirarcon pinza la cápsula <strong>de</strong>l <strong>de</strong>secador y colocarla sobre el plato <strong>de</strong> la balanza concuidado.39. Colocar en la cápsula una alícuota <strong>de</strong> la muestra <strong>de</strong> peso conocido (aproximadamente2 g; MH)40. Regular la mufla a 450ºC y encen<strong>de</strong>rla una vez que las cápsulas están en su interior.41. Una vez alcanzada la temperatura final se <strong>de</strong>be mantener durante 12 horas.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires42. Apagar la mufla y <strong>de</strong>jar enfriar hasta 150-200°C.43. Retirar las cápsulas en <strong>de</strong>secador, <strong>de</strong>jar enfriar y pesar (T+Cen).44. Si se <strong>de</strong>jan las cenizas <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la mufla <strong>de</strong> un día para otro, regular la temperaturaen 110ºC, <strong>de</strong> esta manera las cenizas se mantendrán secas.45. Se pue<strong>de</strong> continuar con la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> cenizas a partir <strong>de</strong> las cápsulaspreparadas con que se <strong>de</strong>terminó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> MS 105°C se proce<strong>de</strong> <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el punto 7 <strong>de</strong>lpresente protocolo.CálculosCen. (%) = [((T+Cen.) – T) / MH] * 100Cen (%bs) = [((T+Cen.) – T) / (MH * MS105 / 100)] * 100Cen (%bs) = Cen (%) * (MS105 / 100)Don<strong>de</strong>,%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): Tara
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresAlimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.Fibra Detergente Ácido (FDA) – v1Por equipo ANKOMRecopilación: M. Wawrzkiewicz y G. JaurenaSe <strong>de</strong>nomina fibra insoluble en <strong>de</strong>tergente ácido (FDA) al residuo fibroso que quedaluego <strong>de</strong> disolver el contenido celular y las hemicelulosas <strong>de</strong> la FDN (fibra insoluble en<strong>de</strong>tergente neutro) empleando <strong>de</strong>tergente ácido, el cuál está constituido fundamentalmentepor celulosa y lignina .Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. Sea muy cuidadosocuando agregue el ácido sulfúrico al agua. “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”.• El CTAB pue<strong>de</strong> irritar las mucosas. Usar máscara y guantes cuando estémanipulando este reactivo siempre bajo campana.• Asegurarse que el tamaño <strong>de</strong> partícula <strong>de</strong> la muestra sea <strong>de</strong> 1 mm.Equipamiento• Aparato <strong>de</strong> digestión- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Bolsitas filtrantes - ANKON Technology F57 filter bags• Desecador.• Sellador por calor.Reactivosa. Solución <strong>de</strong> Detergente Ácido (SDA): por cada litro <strong>de</strong> solución• 20 g bromuro <strong>de</strong> cetil trimetilamonio (CTAB o Cetrimida)• 27.7 ml ácido sulfúrico (H 2 SO 4 ) concentrado.b. Acetona. Use un grado que esté libre <strong>de</strong> colores y que no tenga niveles elevados <strong>de</strong>evaporación.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProcedimiento1. Preparación <strong>de</strong> la muestraa. En caso <strong>de</strong> utilizar el procedimiento secuencial para la <strong>de</strong>terminación seguir elprotocolo <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el punto siguiente "g")b. Rotular <strong>de</strong>bidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).c. Pesar la bolsa <strong>de</strong> filtro (T1) y llevar a cero la balanza.d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) <strong>de</strong> la muestra molida y secada a 65ºC (MH1), Pesaruna bolsa <strong>de</strong> filtro y digerirla para <strong>de</strong>terminar el blanco (Tbco1).e. Sellar por calor las bolsas cercano al bor<strong>de</strong> (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno <strong>de</strong> las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> las bolsas.g. Pue<strong>de</strong>n procesarse un máximo <strong>de</strong> 24 bolsas por vez.2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml <strong>de</strong> solución <strong>de</strong> Detergente Ácido<strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso <strong>de</strong> digestión. Si se procesan menos <strong>de</strong> 20 bolsas se agrega la soluciónSDA a razón <strong>de</strong> 100 ml/bolsa. El volumen mínimo <strong>de</strong> solución es <strong>de</strong> 1500 ml.3. Calentar hasta 90-100°C la solución <strong>de</strong> <strong>de</strong>tergente <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso digestor antes <strong>de</strong>colocar las muestras.4. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez caliente la solución, colocaren el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso <strong>de</strong> digestión.5. Después <strong>de</strong> 60 minutos interrumpir la agitación y el calentamiento, abrir la válvula y<strong>de</strong>jar salir la solución. Precaución: la solución <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso está bajo presión. Laválvula se abre primero para liberar la presión, para luego abrir la tapa <strong>de</strong>l vaso. Unavez liberada la solución se <strong>de</strong>be volver a cerrar la válvula.6. Después que la solución ha salido <strong>de</strong>l vaso se abre la tapa <strong>de</strong>l mismo. Se agregaaproximadamente 2000 ml <strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada a 70-90°C. Se cierra el vaso y se pren<strong>de</strong>el agitador por 5 minutos. Luego se libera el agua y se repite el procedimiento dosveces más o hasta obtener pH neutro en el agua <strong>de</strong> lavado <strong>de</strong>scartada.7. Sacar las bolsas <strong>de</strong>l digestor y sacar el exceso <strong>de</strong> agua <strong>de</strong> las mismas presionandocon los <strong>de</strong>dos. Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos.Remover el exceso <strong>de</strong> acetona por presión.8. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Completar el secado a 105°C durante4 horas. Enfriar en <strong>de</strong>secador y pesar las muestras (T1+FDA) y los blancos (Tbco2)
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCálculosFDA (%bs) = 100 x {(T1+FDA) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)] / (MH1 x MS105)}Don<strong>de</strong>,%bs:MH1 (g):MS105 (g/g) :T1 (g):T1+FDA (g):Tbco1 (g):Tbco2 (g):Porcentaje sobre base seca.peso <strong>de</strong> la muestracoeficiente <strong>de</strong> materia seca a 105°C.peso <strong>de</strong> tara <strong>de</strong> la bolsapeso final <strong>de</strong> la bolsa con la fibra.Promedio <strong>de</strong> pesos <strong>de</strong> bolsas para blanco inicial(previo a la digestión con el <strong>de</strong>tergente).Promedio <strong>de</strong> pesos <strong>de</strong> bolsas para blanco final (luego<strong>de</strong> la digestión con el <strong>de</strong>tergente)ReferenciasAnkon, 2005. Acid <strong>de</strong>tergent fiber in feeds. Filter bag technique (ANKOM 200 ). AnkonTechnoligy.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresAlimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosRecuperación <strong>de</strong> N (AOAC, 1996 – 4.2.09) – v5Recopilación: G. Jaurena y M. WawrzkiewiczSólo aplicable sobre los estándares apropiados.Se emplean lisina, sulfato <strong>de</strong> amonio o fosfato diácido <strong>de</strong> amonio para chequear elproceso completo <strong>de</strong> digestión y <strong>de</strong>stilación. Dado que la cantidad <strong>de</strong> N puesta a digestar esconocida se espera recuperar el 100%.Se asume que la técnica es satisfactoria si se recupera más <strong>de</strong>l 98% <strong>de</strong>l N.PrecaucionesHay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación <strong>de</strong> los digestores y el ácidosulfúrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.Se trata <strong>de</strong> materiales higroscópicos, por lo que es necesario manipularlos con losrecaudos correspondientes.EquipamientoReactivos• Balanza analítica• Tubos <strong>de</strong> digestión• Erlenmeyers• Equipo digestor y <strong>de</strong>stilador para Kjeldahl• BuretaUsar NH 4 H 2 PO 4 certificado (12.15% N) o Lisina clorhidrato <strong>de</strong> alta pureza (e.g. L-lisinaSigma Nr. Catalogo L-5626: C 6 H 14 N 2 O 2 .HCl, PM = 182.6; 15.33% N; pureza mínima 98%).Para chequear el método completo estándar <strong>de</strong> referencia consultar NIST Nº194 (NationalInstitut of Standards and Technology).El resto <strong>de</strong> los reactivos son los mismos <strong>de</strong> la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> N por Kjedahl (Prtcl NT01).Características <strong>de</strong> los patrones provistos por el <strong>Promefa</strong>:• Sulfato <strong>de</strong> amonio (Art. 961506, Biopack, Argentina), H 8 N 2 O 4 S, PM: 132.14, 21.2%N;pureza: 99.9%.• Lisina (Art. 971106, Biopack, Argentina), L-Lisina monoclorhidrato (C 6 H 14 N 2 O 2 HCl, PM:182.65; 15.3%N; pureza: 99.9%.ProcedimientoPesar una alícuota <strong>de</strong> la muestra y registrar el peso (MH1; c.a. 0.1 g <strong>de</strong> NH 4 H 2 PO 4 olisina).Proce<strong>de</strong>r <strong>de</strong> acuerdo a las <strong>de</strong>terminaciónes <strong>de</strong> N por Kjedahl (Prtcl NT 01) o pormétodo <strong>de</strong> Dumas (Prtcl NT 02).
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCálculos(T1 – Tbco.) x 1.4 x N(SO 4 H 2 )NT (%, bs) = ------------------------------------------------MH1 x MS105Don<strong>de</strong>,% Recuperación <strong>de</strong> N = NT (%, bs) / NT E (%, bs) × 100NT E (H 8 N 2 O 4 S, %, bs) = 21.2 x MS105 × 0.999NT E (Lisina, C 6 H 14 N 2 O 2 HCl, %, bs) = 15.3 × MS105 × 0.999T1 (ml):Titulación con SO 4 H 2 <strong>de</strong> la muestraTbco. (ml): Titulación con SO 4 H 2 <strong>de</strong>l blancoN(SO 4 H 2 )(N): Normalidad <strong>de</strong>l SO 4 H 2 <strong>de</strong> titulaciónNT E (%, bs): N total esperado para los reactivos provistosNT (%, bs): N total medido en la alícuota ensayadaMH1 (g):Peso <strong>de</strong> la muestraMS105 (g/g): Coeficiente <strong>de</strong> materia seca a 105ºC
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresDeterminación <strong>de</strong>l porcentaje <strong>de</strong> materia seca <strong>de</strong> los patronesSe realizará la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong>l porcentaje <strong>de</strong> materia seca <strong>de</strong> los patrones (sulfato<strong>de</strong> amonio y lisina) para luego realizar las correcciones necesarias.Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosSólo aplicable sobre los estándares apropiados.El agua se evapora por encima <strong>de</strong> los 100ºC, consecuentemente el residuo remanentepermite estimar gravimétricamente el contenido <strong>de</strong> materia seca (MS105) <strong>de</strong>l material puestoa secar inicialmente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Prestar atención al manejo <strong>de</strong> las estufas para evitar el ingreso <strong>de</strong> muestras húmedasnuevas en momentos cercanos a la finalización <strong>de</strong>l secado, dado que pue<strong>de</strong>n afectar la<strong>de</strong>terminación.Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Estufa termorregulada a 105ºC.• Desecador.• Cápsulas <strong>de</strong> porcelana, aluminio o acero inoxidable.ReactivosNo hay.Procedimiento9. Se <strong>de</strong>be realizar una <strong>de</strong>terminación en duplicado para cada uno <strong>de</strong> los patrones.10. Las cápsulas <strong>de</strong> porcelana utilizadas en este procedimiento <strong>de</strong>ben estarcompletamente secas. Para ello <strong>de</strong>ben permanecer en la estufa a 105°C por lo menos<strong>de</strong>s<strong>de</strong> la tar<strong>de</strong> anterior.11. Retirar las cápsulas <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador y <strong>de</strong>jar enfriar (aprox. 15-30 min.).12. Registrar el peso <strong>de</strong> la cápsula en una balanza analítica. Para ello se <strong>de</strong>be retirar lacápsula <strong>de</strong>l <strong>de</strong>secador con pinza y colocarla sobre el plato <strong>de</strong> la balanza con cuidado(T1)13. Colocar en la cápsula una alícuota <strong>de</strong>l patrón <strong>de</strong> peso conocido (aproximadamente 500miligramos; MH1)14. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y <strong>de</strong>jar durante 4
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aireshoras o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no más).15. Retirar <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador, <strong>de</strong>jar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar(T1+MS1).CálculosMS105 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100MST (%) = MS105 (%)MH1 (g): Material tal cual.MS105 (%): MS secada a 105ºC.MS1 (g): MS obtenida luego <strong>de</strong> secar a 105ºC.MST (%) Materia seca total (%)T1 (g): Peso <strong>de</strong>l recipiente empleado para el secado a 105ºC.ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Aca<strong>de</strong>mic PressIncorporated, 1965.Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-MacroPublishing, 1991.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresLignina en <strong>de</strong>tergente ácido con ácido sulfurico (LDAAS) – v2Por equipo ANKOMAlimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.El residuo <strong>de</strong> la fibra ácido <strong>de</strong>tergente consiste principalmente <strong>de</strong> lignocelulosa, lasolución <strong>de</strong> ácido sulfúrico (72%) disuelve la celulosa, quedando la lignina y la cenizainsoluble en ácido en el residuo final recuperado. La cutina también es retenida yconsecuentemente se toma como si fuera parte <strong>de</strong> la lignina.Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. Sea muy cuidadosocuando agregue el ácido sulfúrico al agua. “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”.Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Estufa <strong>de</strong> secado regulada a 105ºC.• Bolsitas filtrantes—ANKON F57 Filter bags• Desecador• Vasos <strong>de</strong> precipitadoReactivos16. Ácido sulfúrico (72% peso en peso)a. Mezclar manualmente para estandarizar el reactivo. El grado <strong>de</strong>l ácido sulfúricoes <strong>de</strong> 1,634 g/l (a 20°C) o 24,00 N. Agregar 1200 g <strong>de</strong> ácido sulfúrico a 440 ml<strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada.17. Acetonaa. Use un grado que esté libre <strong>de</strong> colores y que no tenga niveles elevados <strong>de</strong>evaporación
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProcedimiento18. Preparación <strong>de</strong> la muestraa. En caso <strong>de</strong> utilizar el procedimiento secuencial seguir el protocolo <strong>de</strong>s<strong>de</strong> elpunto "b)" <strong>de</strong>l procedimiento para <strong>de</strong>terminar FDA (Prtcl FDA 01).b. Rotular <strong>de</strong>bidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).c. Pesar la bolsa <strong>de</strong> filtro (T1) y llevar a cero la balanza.d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) <strong>de</strong> la muestra molida y secada a temperatura ambiente(MH1). Pesar una bolsa <strong>de</strong> filtro vacía para usar como blanco e incorporarla enel procedimiento junto con las muestras.e. Sellar por calor las bolsas cercano al bor<strong>de</strong> (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno <strong>de</strong> las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> las bolsas.g. Pue<strong>de</strong>n procesarse un máximo <strong>de</strong> 24 bolsas por vez.h. Determinar FDA con el “ANKON Fiber analyzer” (Prtcl FDA 01 <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el punto“2” al “7”).19. Poner las 24 bolsas con muestra digerida en solución DA y las bolsas “blanco” <strong>de</strong>ntro<strong>de</strong> un vaso <strong>de</strong> precipitados <strong>de</strong> 1 litro y agregar suficiente cantidad (aprox. 250 ml) <strong>de</strong>H 2 SO 4 al 72 % p/v. Importante: las bolsas <strong>de</strong>ben estar completamente secas y atemperatura ambiente antes <strong>de</strong> agregar el ácido.20. Poner un vaso <strong>de</strong> 500 ml <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l vaso <strong>de</strong> 1 l para que las muestras que<strong>de</strong>nsumergidas en el ácido sulfúrico. Agitar 30 veces cada 30 min presionando con el vaso<strong>de</strong> precipitado <strong>de</strong> 500 ml.21. Después <strong>de</strong> tres horas sacar el ácido sulfúrico y enjuagar con agua <strong>de</strong>stilada (90-100ºC 1 ) para remover los restos <strong>de</strong>l ácido. Repita este procedimiento hasta que el pHesté neutro.22. Enjuagar con acetona durante 3 min para luego secar las bolsas a temperaturaambiente.23. Complete el secado a 105 °C durante 4 horas. Enfriar en <strong>de</strong>secador y pesar la bolsa(T1+LDAyCen). Luego poner la bolsa en una cápsula previamente pesada (T2) y llevara 525°C en la mufla durante 3 horas, luego pesar (T2+Cen). Pesar los crisoles para losblancos (T3) y llevar a la mufla junto con las muestras, luego registrar el peso(T3+Cen).1 En el protocolo sugerido por ANKOM Technology (2005) indica emplear “agua <strong>de</strong> grifo” sin indicación <strong>de</strong>temperatura. Consi<strong>de</strong>rando la variabilidad en calidad <strong>de</strong> agua disponible entre los laboratorios participantespareció mas conveniente utilizar el procedimiento anterior.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresCálculosLDA (%bs) = 100 x {T1+LDAyCen – [T1 x (Tbco2/Tbco1) – A] / (MH1 x MS105)}A = (T2+Cen – T2) – [T1 x (T3+Cen – T3) / Tbco.1)]Don<strong>de</strong>,A (g):cenizas insolubles <strong>de</strong> la muestraMH1 (g):peso <strong>de</strong> la muestraMS105 (g/g): coeficiente <strong>de</strong> materia seca a 105°CT1 (g):tara <strong>de</strong>l sobre para muestrasT1+LDAyCen (g): peso final <strong>de</strong> la bolsa con la lignina y las cenizasT2 (g):tara <strong>de</strong>l crisol para muestrasT2+Cen (g) peso final <strong>de</strong>l crisol mas las cenizas <strong>de</strong> la muestraT3 (g):tara <strong>de</strong>l crisol para blancosT3+Cen (g) peso final <strong>de</strong>l crisol mas las cenizas <strong>de</strong>l blancoTbco1 (g): tara <strong>de</strong>l sobre en blanco inicialTbco2 (g): tara <strong>de</strong>l sobre en blanco final.ReferenciasAnkom, 2005. Method for <strong>de</strong>termining acid <strong>de</strong>tergent lignin in beakers. ANKOM Technology.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresMateria seca parcial – v2Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónForrajes y alimentos con más <strong>de</strong> un 20% <strong>de</strong> humedad.En alimentos con alto contenido <strong>de</strong> sustancias volátiles (e.g. silajes), el secado enestufa eliminará los compuestos volátiles junto con el agua y consecuentemente la<strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> humedad por esta vía estará sobrestimada.PrincipiosEste procedimiento se utiliza para preparar las muestras con alto contenidos <strong>de</strong>humedad (>20%) y dado que en general tiene un mínimo efecto sobre la composición químicapermite almacenar las muestras y efectuar posteriormente los análisis necesarios.Dado que el agua se evapora a 100°C, ésta técnica no elimina toda el agua contenidaen la muestra y consecuentemente se trata <strong>de</strong> una MS parcial que elimina aproximadamenteel 95% <strong>de</strong> la humedad (Harris, 1970).El contenido <strong>de</strong> materia seca parcial (MSp) <strong>de</strong> la muestra se obtiene luego <strong>de</strong> habereliminado por evaporación parcialmente el agua y equilibrado dicha muestra con la humedadambiente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Equipamiento• Balanza <strong>de</strong> precisión.• Estufa con termorregulación a 65ºC.• Ban<strong>de</strong>jas <strong>de</strong> aluminio.ReactivosNo hay.Procedimiento24. Registrar el peso <strong>de</strong>l recipiente en el cual se colocará la muestra a secar (T1)25. Colocar una alícuota <strong>de</strong> la muestra en el recipiente previamente pesado y registrar elpeso <strong>de</strong> la misma habiendo llevado a cero la balanza con el recipiente (MH1). Lamuestra <strong>de</strong>be quedar uniformemente esparcida sobre el recipiente para permitir unarápida evaporación <strong>de</strong>l agua.26. Llevar a estufa a una temperatura <strong>de</strong> 65ºC durante 48 h o hasta peso constante.27. Retirar las muestras <strong>de</strong> la estufa, <strong>de</strong>jarlas enfriar sobre una mesada hasta que seequilibren con el ambiente y pesarlas (T1+MS1).28. La muestra así secada <strong>de</strong>be ser molida y preservada en un envase <strong>de</strong> vidrio o plástico
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Airescon un cierre que no permita la entrada <strong>de</strong> aire.CálculosMS65 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100Don<strong>de</strong>,T1 (g):MH1 (g):MS1 (g)MS65 (%):Peso <strong>de</strong>l recipiente vacío.Material húmedo o tal cual (g).MS obtenida luego <strong>de</strong> secar a 65ºC por 48 h (g)Estimación <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> MS parcial luego <strong>de</strong> eliminar el aguaen estufa a 65ºC.ReferenciasHarris, L. E. 1970. Compilación <strong>de</strong> datos analíticos y biológicos en la preparación <strong>de</strong> cuadros<strong>de</strong> composición <strong>de</strong> alimentos para uso en los trópicos <strong>de</strong> America Latina. University ofFlorida, Gainesville, Fl (USA).
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresMateria Seca Total – v2Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos con bajo contenido <strong>de</strong> humedad (
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Airescápsula <strong>de</strong>l <strong>de</strong>secador con pinza y colocarla sobre el plato <strong>de</strong> la balanza con cuidado(T2)33. Colocar en la cápsula una alícuota <strong>de</strong> la muestra <strong>de</strong> peso conocido (aproximadamente2 g; MH2)34. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y <strong>de</strong>jar durante 4horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no más).35. Retirar <strong>de</strong> la estufa en <strong>de</strong>secador, <strong>de</strong>jar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar(T2+MS2).CálculosMS105 (%) = [((T2+MS2) – T2) / MH2] × 100MST (%) = MS65 (%) × MS105 (%) / 100Don<strong>de</strong>,MS65 (%) = {(T1+MS1) – T1] / MH1} × 100MH1 (g): Materia húmeda o tal cualMH2 (g): Material tal cual o muestra <strong>de</strong> material húmedo previamente secadoa 65ºC.MS1 (g): MS obtenida luego <strong>de</strong> secar a 65ºC por 48 hMS105 (%): MS secada a 105ºCMS2 (g): MS obtenida luego <strong>de</strong> secar a 105ºCMS65 (%): Estimación <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> MS luego <strong>de</strong> eliminar el agua en estufaa 65ºC.MST (%) materia seca total (%)T1 (g): Peso <strong>de</strong>l recipiente empleado para el secado a 65ºC.T2 (g): Peso <strong>de</strong>l recipiente empleado para el secado a 105ºC.ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 130.15.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 167.03. 15th Edition.Correcciones2007 Mayo.Shirley Furtado y Gabriela AriasBollati, G.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresNitrógeno Total (Kjeldahl) – v1Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónPrincipiosTodo tipo <strong>de</strong> forrajes y alimentos.En este paso se oxida la materia orgánica a CO 2 y H 2 O, mientras se reduce el N aamonio. Una vez finalizada la digestión, se tiene en solución:MO CO 2 + H 2 ON (NH 4 ) 2 SO 4El éxito <strong>de</strong> la técnica <strong>de</strong> <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> nitrógeno pue<strong>de</strong> controlarse mediante el uso<strong>de</strong> sustancias patrón <strong>de</strong> concentración conocida <strong>de</strong> nitrógeno. Una sal <strong>de</strong> amonio pue<strong>de</strong> serusada para testar el proceso <strong>de</strong> <strong>de</strong>stilación <strong>de</strong> la técnica, mientras que la lisina y el ácidonicotínico son usados para chequear el proceso <strong>de</strong> digestión. La recuperación porcentual <strong>de</strong>lnitrógeno agregado en el patrón indica la eficiencia <strong>de</strong> la técnica (se esperan valores <strong>de</strong>recuperación mayores al 98%). Este procedimiento <strong>de</strong>be ser incorporado como rutina a modo<strong>de</strong> control <strong>de</strong>l funcionamiento <strong>de</strong> la técnica.Se <strong>de</strong>berán realizar blancos para <strong>de</strong>terminar posibles aportes <strong>de</strong> nitrógeno por losreactivos y materiales empleados. El procedimiento para la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> los blancos esigual a la <strong>de</strong> las muestras pero sin la colocación <strong>de</strong> la misma y <strong>de</strong>be ser reconfirmadafrecuentemente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo <strong>de</strong> equipos eléctricos y con activida<strong>de</strong>s <strong>de</strong>laboratorio.Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación <strong>de</strong> los digestores y el ácidosulfúrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.EquipamientoReactivos• Balanza analítica• Tubos <strong>de</strong> digestión• Erlenmeyers• Equipo digestor y <strong>de</strong>stilador para Kjeldahl• BuretaÁcido Bórico al 2%:a) Hervir 20 g <strong>de</strong> ácido bórico en 500 ml <strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada para solubilizarlob) Agregar 250 ml <strong>de</strong> agua fríac) Cuando llega a temperatura ambiente agregar:i) 10 ml <strong>de</strong> Ver<strong>de</strong> <strong>de</strong> Bromocresol (100 mg / 100 ml etanol)ii) 7 ml <strong>de</strong> Rojo <strong>de</strong> Metilo (100 mg / 100 ml etanol)d) Llevar a 1 litro en matraz con agua <strong>de</strong>stilada
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresHidróxido <strong>de</strong> Sodio:a) 40 g NaOH (grado reactivo) / 100 ml agua :::: 800 g / 2000 ml ::: 1600 g / 4000 mlAcido sulfúrico 0.1 NSe emplean 6 ml SO 4 H 2 (96-98% grado reactivo)/ 2000 ml agua <strong>de</strong>stiladaValoración con Biftalato <strong>de</strong> potasioi) Preparar 3 erlenmeyers con:(1) 200 mg <strong>de</strong> Biftalato <strong>de</strong> potasio (registrar el peso exacto P Bif )(2) agregar 30 ml agua <strong>de</strong>stilada(3) agregar 3 gotas <strong>de</strong> fenolftaleina(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T1)ii) Preparar 3 erlenmeyers con:(1) 10 ml SO 4 H 2 a valorar(2) agregar 30 ml agua <strong>de</strong>stilada(3) agregar 3 gotas <strong>de</strong> fenolftaleina(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T2)iii) Cálculo <strong>de</strong> la valoración:ml (T2) x mg (P Bif )N (SO 4 H 2 ) = -----------------------------------------ml (T1) x 204,23 x 10Valoración con patrón primario (Trometamina, tris PM: 121.14)Usar ver<strong>de</strong> <strong>de</strong> bromocresol como indicador (azul en medio básico, amarillo en medioácido).a) Disolver el patrón primario en agua y agregar 2 o 3 gotas <strong>de</strong>l indicador.b) Titular el ácido a valorar.mg Trometamina (mg)N (SO 4 H 2 ) = -------------------------------------121.14 × SO 4 H 2 (ml)
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProcedimientoDigestión1) Pesar un alícuota <strong>de</strong> la muestra y registrar el peso (MH1) (0.5 g MS 65°C forrajes y0.1 g MS 65°C carne)22) Colocar la muestra en tubos <strong>de</strong> digestión3) Agregar 15 g <strong>de</strong> Sulfato <strong>de</strong> potasio (SO 4 K 2 )4) Agregar 1 ml <strong>de</strong> Sulfato <strong>de</strong> cobre 10% (SO 4 Cu 10%)5) Agregar 25 ml <strong>de</strong> ácido Sulfúrico concentrado (SO 4 H 2 concentrado)6) Encen<strong>de</strong>r el digestor a 400°C7) Activar el mecanismo necesario para evitar el escape <strong>de</strong> vapores al ambiente.8) La digestión <strong>de</strong> las muestras se llevará a cabo hasta que la solución <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> lostubos que<strong>de</strong> <strong>de</strong> color ver<strong>de</strong> translúcido (<strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong> las muestras y equipo,pue<strong>de</strong> tomar entre 30 min a 4 h).9) Retirar los tubos con la gradilla <strong>de</strong>l block digestor y <strong>de</strong>jar enfriar sin retirar la taparecolectora <strong>de</strong> vapores. Al enfriarse la solución se torna incolora y translúcida10) Agregar 20 ml <strong>de</strong> agua <strong>de</strong>stilada en cada tubo y <strong>de</strong>jar enfriar agitar 2 ó 3 vecescada 5 minutos para evitar que se formen cristales gran<strong>de</strong>s <strong>de</strong> Sulfato <strong>de</strong> potasio.11) Dejar enfriar para comenzar la <strong>de</strong>stilaciónDestilación1) Preparar tantos erlenmeyer como tubos para <strong>de</strong>stilar haya preparados con 25 ml <strong>de</strong>Ácido Bórico 2%2) Colocar un erlenmeyer con ácido bórico 2% en la salida <strong>de</strong>l refrigerante <strong>de</strong>l equipocon el final <strong>de</strong>l tubo <strong>de</strong> vidrio sumergido en la solución (así quedará hastainmediatamente antes <strong>de</strong> apagar la bomba generadora <strong>de</strong> vapor para concluir el<strong>de</strong>stilado)3) Colocar el tubo con la muestra digestada en el <strong>de</strong>stilador asegurándose que elcierre superior con la goma sea completo (se recomienda presionar en sentidoascen<strong>de</strong>nte <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el tubo)4) Dosificar el Hidróxido <strong>de</strong> Sodio 40% hasta neutralizar la solución <strong>de</strong>l tubo (el color<strong>de</strong>l la solución <strong>de</strong>l tubo pasa <strong>de</strong> incoloro-blanco a marrón o celeste en caso <strong>de</strong>exceso <strong>de</strong> NaOH)2 En caso <strong>de</strong> ser muestras líquidas o <strong>de</strong> elevado contenido <strong>de</strong> agua (>30% <strong>de</strong> humedad, se <strong>de</strong>be elevar latemperatura <strong>de</strong>l digestor a razón <strong>de</strong> 100°C cada 30 minutos hasta los 400°C y a partir <strong>de</strong> entonces contar las 2horas <strong>de</strong> digestión.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires5) Destilar hasta recoger c.a. 150 ml en el erlenmeyer.6) Apagar la bomba generadora <strong>de</strong> vapor.7) Retirar el tubo <strong>de</strong>l equipo cuidando los goteos <strong>de</strong> solución <strong>de</strong>s<strong>de</strong> la goma y elerlenmeyer8) Una vez <strong>de</strong>stilados todos los tubos se <strong>de</strong>be lavar el frente <strong>de</strong>l equipo <strong>de</strong> lassalpicaduras <strong>de</strong> NaOH y vaciar y enjuagar la bomba generadora <strong>de</strong> vapor <strong>de</strong>s<strong>de</strong> elrobinete superior y <strong>de</strong>scargando la suciedad hacia la canaleta trasera <strong>de</strong> lamesada.Titulación• Con Ácido Sulfúrico 0,1 N hasta cambio <strong>de</strong> color ver<strong>de</strong> a rosa intenso (mantenersiempre el mismo criterio <strong>de</strong> color final en la titulación <strong>de</strong> todas las muestras). (T1)Cálculos(T1 – Tbco.) x 1.4 x N SO 4 H 2Nt (%bs) = ------------------------------------------------MH1 x MS105Don<strong>de</strong>,PB (%bs) = Nt (%bs) x 6,25*T1 (ml): Titulación con SO 4 H 2 <strong>de</strong> la muestraTbco. (ml): Titulación con SO 4 H 2 <strong>de</strong>l blancoN SO 4 H 2 (N): Normalidad <strong>de</strong>l SO 4 H 2 <strong>de</strong> titulaciónMH1 (g): Peso <strong>de</strong> la muestraMS105(g/g):Coeficiente <strong>de</strong> materia seca a 105ºC* El valor asume que todo el nitrógeno <strong>de</strong>l alimento se encuentra en6.25forma <strong>de</strong> proteína y que está presente en ella en un 16%ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Aca<strong>de</strong>mic PressIncorporated, 1965.Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-MacroPublishing, 1991.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProtocolos misceláneosCorrección <strong>de</strong> los resultados analíticos por Materia Seca Total – v2Alimentos <strong>de</strong> aplicaciónTodas las muestras <strong>de</strong> las pruebas interlaboratorios <strong>de</strong>l <strong>Promefa</strong> (previamente secadasa 65ºC).PrincipiosLas muestras <strong>de</strong> alimento, establecen un equilibrio con la humedad ambiente, por loque el contenido <strong>de</strong> agua pue<strong>de</strong> variar entre laboratorios y aún para un mismo laboratorio a lolargo <strong>de</strong>l tiempo.Los resultados analíticos se <strong>de</strong>ben reportar sobre base seca total para evitar lasvariaciones <strong>de</strong>bidas a la humedad residual contenidas en las muestras.ProcedimientoA partir <strong>de</strong> los <strong>procedimientos</strong> explicados en el Prtcl MS Total 01 se pue<strong>de</strong> estimar lamateria seca obtenida por secado a 105ºC (MS105) <strong>de</strong> cada muestra con la cual seproce<strong>de</strong>rá a corregir los valores analíticos obtenidos sobre las muestras parcialmente secas(MS 65º y equilibradas con la humedad ambiente <strong>de</strong>l laboratorio).Los análisis (e.g. aFDN, PB) se llevan a cabo sobre las muestras parcialmente secas(base parcialmente seca [bps]; i.e. 65ºC o en el caso <strong>de</strong> las muestras <strong>de</strong>l <strong>Promefa</strong> tal comollegan al laboratorio).Una alícuota <strong>de</strong> la muestra recibida se usará para estimar la MS105 (secando a 105ºC)Una vez obtenidos los resultados analíticos y la MS105 se proce<strong>de</strong>rá a efectuar lacorrección, aplicando la siguiente fórmula (ejemplificado para aFDN):aFDN (g/kg MS bs) = aFDN (g/kg MS bps) / MS105 (g/kg MH2) / 1000don<strong>de</strong>:aFDN (g/kg MS bs): contenido <strong>de</strong> aFDN expresado en base seca (bs)aFDN (g/kg MS bps): contenido <strong>de</strong> aFDN expresado sobre base parcialmenteseca (bps)MS105 (%): materia seca obtenida luego <strong>de</strong> secar la muestra a 105ºC <strong>de</strong>acuerdo al Prtcl MS Total 01Ejemplo
ケーションを 行 っている 層 として、 国 民 健 康 保 険 の 被 保 険 者 の 人 数 から 推 計 患 者 数 をひいた 人 数 を 利 用 した。 説 明 変 数 は 次 の 通 りである。 s j / gは「1 日 当 たりの 外 来 患 者数 」を、 都 道 府 県 別 の 推 計 外 来 患 者 数 でそれぞれ 叙 した 数 値 を 利 用 した。 p jは「1 日患 者 1 人 当 たり 診 療 収 入 」を 利 用 した。 医 療 機 関 の 属 性 としては、SCALEは 病 床 数 が500 以 上 の 大 病 院 か 否 かを 識 別 する 大 病 院 ダミー、STAFF は「 全 職 員 数 」、DEPARTMENTは 各 医 療 機 関 のホームページでそれぞれ 調 べた「 診 療 科 目 数 」とした。 推 計 結 果 は 次 の 表 5-6 の 通 りである。表 5-6 関 東 地 方 の 公 立 病 院 OLS 推 計 結 果OLS(Robust)Coef. t-value t-valuelnsjg 0.571 8.48 *** 6.30 ***price 0.000 -4.64 *** -4.29 ***scale -0.389 -2.17 ** -2.09 **<strong>de</strong>partment 0.015 2.93 *** 2.87 ***staff 0.001 4.54 *** 4.20 ***_cons -4.933 -9.36 *** -6.71 ***Number of obs 103 -Adj R-squared 0.7606 -BP test chi2(5)=7.59,Prob>chi2=0.1805 -以 下 、OLS の 推 定 結 果 を 記 述 する。 全 ての 係 数 が 有 意 となり、それぞれの 係 数 の 符号 は、 都 道 府 県 内 シェアの s /、 診 療 科 目 数 の <strong>de</strong>partment、 医 師 数 の staff が 正 で、jg大 病 院 ダミーの scale は 負 、 価 格 の price は 0 である。 不 均 一 分 散 の 検 定 の 結 果 、 均一 分 散 と 言 える。また、ロバスト 修 正 した t 値 も、 全 ての 説 明 変 数 において 有 意 であった。次 に、(5.16) 式 を 利 用 して BLP の 指 摘 する 価 格 の 内 生 性 を 考 慮 した 操 作 変 数 法 を 利 用する。しかし、 日 本 の 医 療 サービスの 価 格 は、 厚 生 労 働 省 の 中 央 社 会 保 険 医 療 協 議 会 によって 定 められた 診 療 点 数 表 に 基 づくため、 医 療 機 関 によって 価 格 設 定 を 変 えることはできず、 内 生 性 を 与 える 操 作 変 数 として 一 般 に 利 用 されている 費 用 等 を 採 用 することはできない。よって、 本 論 文 で 価 格 として 採 用 している「1 日 1 人 患 者 当 たりの 診 療 収 入 」に 内 生29
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresMo<strong>de</strong>los propuestos para pre<strong>de</strong>cir la concentración energética <strong>de</strong> losalimentos para rumiantes – v1IntroducciónUn objetivo primordial <strong>de</strong> los sistemas <strong>de</strong> evaluación <strong>de</strong> alimentos para animales espre<strong>de</strong>cir con razonable exactitud la producción animal a partir <strong>de</strong>l suministro <strong>de</strong> los alimentosanalizados. Es aceptado que la productividad animal lograda como consecuencia <strong>de</strong>lsuministro <strong>de</strong> un dado alimento constituye el criterio último para valorar un alimento, pero estasituación <strong>de</strong> valoración i<strong>de</strong>al está estrictamente circunscripta al trabajo <strong>de</strong> investigación<strong>de</strong>sarrollado en instituciones especializadas.La valoración comercial <strong>de</strong> los alimentos para animales requiere <strong>de</strong> métodos objetivos,repetibles y económicos que permitan efectuar predicciones sobre la capacidad <strong>de</strong> losalimentos para suministrar los nutrientes y la energía necesarios para cubrir los distintosprocesos vitales <strong>de</strong> los animales y preservar su estado <strong>de</strong> salud y la calidad <strong>de</strong> los productosobtenidos a partir <strong>de</strong> ellos.El valor nutritivo (VN, entendido como la combinación <strong>de</strong> consumo, digestibilidad yeficiencia en el uso <strong>de</strong> los nutrientes) se relaciona estrechamente con la producción animal yes sobre este principio (y sobre las asociaciones empíricas <strong>de</strong>scritas entre los componentes<strong>de</strong>l VN y las <strong>de</strong>terminaciones efectuadas en el laboratorio) que se basa el funcionamiento <strong>de</strong>los sistemas <strong>de</strong> alimentación animal (congruencia entre la valoración <strong>de</strong> alimentos y lapredicción <strong>de</strong> los requerimientos animales).Por las razones antes expuestas, es que la predicción <strong>de</strong> la concentración energética<strong>de</strong> los alimentos es un paso crítico <strong>de</strong>l sistema <strong>de</strong> valoración <strong>de</strong> alimentos.Existen dos alternativas para pre<strong>de</strong>cir el aporte energético <strong>de</strong> los alimentos a partir <strong>de</strong>muestras en el laboratorio: sistemas <strong>de</strong> valoración in vitro y análisis químicos. Los primerosen sus distintas variantes presentan buenas asociaciones con los valores obtenidos a partir<strong>de</strong> ensayos in vivo. Las <strong>de</strong>terminaciones químicas <strong>de</strong>l laboratorio son empleadas parapre<strong>de</strong>cir la digestibilidad <strong>de</strong> los alimentos en base a relaciones empíricas <strong>de</strong>scritas porecuaciones que suelen basarse en las asociaciones negativas <strong>de</strong> la digestibilidad con elcontenido <strong>de</strong> la fibra <strong>de</strong> los alimentos. Las ecuaciones son específicas para cada tipo <strong>de</strong>alimento y su exactitud es función <strong>de</strong> la <strong>de</strong> los análisis <strong>de</strong> los laboratorios y <strong>de</strong> losexperimentos in vivo sobre los cuales fueron ajustadas.La aplicación <strong>de</strong> estas ecuaciones presenta varias limitaciones que <strong>de</strong>ben ser tenidasen cuenta:• Aún cuando se trate <strong>de</strong> alimentos similares, su aplicación no <strong>de</strong>ja <strong>de</strong> ser unaextrapolación respecto a los datos originales sobre los cuales se ajustaron.• En las mayoría <strong>de</strong> los casos no hay evi<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> valoraciones in<strong>de</strong>pendientes<strong>de</strong> las mismas.• En su gran mayoría se trata <strong>de</strong> ecuaciones obtenidas por institucionesextranjeras en condiciones no necesariamente comparables.• No siempre está específicamente establecido en que forma se obtuvieron losdatos analíticos para su calibración (e.g. FDN o FDN MO ) o bajo que condiciones<strong>de</strong> manejo se efectuaron los experimentos <strong>de</strong> calibración in vivo.• No es sencillo realizar constataciones respecto a valores <strong>de</strong> referenciapublicados (e.g. Tablas <strong>de</strong>l NRC) dado que éstos tampoco está claramenteexplicado como fueron obtenidos.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresNo obstante lo anterior la falta <strong>de</strong> normalización respecto al uso <strong>de</strong> éstas formulas hallevado a que distintos laboratorios suelan emplear fórmulas diferentes para pre<strong>de</strong>cir el valorenergético <strong>de</strong> alimentos similares llevando en consecuencia a introducir una fuente <strong>de</strong> erroradicional y espuria.Con el objeto <strong>de</strong> evitar esta fuente <strong>de</strong> error es que en este documento se proponenuna serie <strong>de</strong> ecuaciones que fueron seleccionadas en base al consenso <strong>de</strong> los participantes<strong>de</strong>l PROMEFA. Es <strong>de</strong>seable que en el futuro cercano se cuenten con validacionesexperimentales <strong>de</strong> las mismas o <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> ecuaciones específicas para nuestrascondiciones.Ecuaciones <strong>de</strong> predicción para las distintas clases <strong>de</strong> alimentosLos alimentos se clasifican en base a su composición (fundamentalmente por sucontenido <strong>de</strong> fibra y proteína) y uso en la formulación <strong>de</strong> dietas (Jaurena and Danelón, 2001).Como en cualquier clasificación, las “clases” pue<strong>de</strong>n resultar arbitrarias y en ciertos casos unalimento es asignado a una clase <strong>de</strong> acuerdo a su uso en la práctica corriente.En las secciones que siguen se presentan las <strong>de</strong>finiciones <strong>de</strong> las categorías <strong>de</strong>alimentos que aportan energía junto con las ecuaciones propuestas para estimar el contenido<strong>de</strong> EM (Mcal/kg MS) <strong>de</strong> los alimentos.Para las conversiones <strong>de</strong> las unida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> energía se emplearon los siguientessupuestos:DMS = TNDED = DMS × 4.4 Mcal/kg MSDEM = ED × 0.82EM = 3.6 × TND o DMSDon<strong>de</strong>%FDA:%FDN:%LDA:%TND:DMS:ED:EM:MS:MSD:fibra insoluble en <strong>de</strong>tergente ácido expresada en g/100 g MSfibra insoluble en <strong>de</strong>tergente neutro expresada en g/100 g MSlignina <strong>de</strong>tergente ácido expresada en g/100 g MStotal <strong>de</strong> nutrientes digestibles expresada en g/100 g TNDDigestibilidad <strong>de</strong> la materia seca (kg/kg MS)Energía digestible (Mcal/kg MS)Energía metabolizable (Mcal/kg MS)Materia secaMateria seca digestible.Clase I - Forrajes secos y alimentos groserosTodos los forrajes y materiales groseros cortados y secados, así como otros productoscon más <strong>de</strong> 18% <strong>de</strong> fibra cruda o más <strong>de</strong> 35% <strong>de</strong> pared celular (FDN, sobre base seca). Engeneral, son alimentos con baja concentración energética. Ejemplo <strong>de</strong> forrajes secos: heno,paja, rastrojos. Ejemplo <strong>de</strong> alimentos groseros: cáscaras, vainas.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresDe uso generalEcuación Ia (Sumativa <strong>de</strong> Van Soest, (Goering and Van Soest, 1970)EM (Mcal/kg MS) = 3.6 / 100 × {(100 - %FDN) × 0.98 + %FDN ×Gramíneas y leguminosasEcuación Ib (Rohwe<strong>de</strong>r, et al.))× (1.473 – 0.789 Log 10 [LDA/FDA×100]) – 12.9}EM (Mcal/kg MS) = 3.20 – 0.028 x %FDALeguminosasEcuación Ic (McLeod and Minson, 1976)EM (Mcal/kg MS) = 3.6 × [92.3 – 0.91 × %FDA]Clase II - Pasturas y forrajes frescosAgrupa a todos los alimentos forrajeros consumidos en forma directa (pasturas yver<strong>de</strong>os) o cortados y suministrados en fresco.Se sugieren las mismas ecuaciones que las presentadas para la Clase I.Clase III - SilajesEsta clase agrupa a los forrajes ensilados: maíz, sorgo, alfalfa, pra<strong>de</strong>ras, etc.,excluyendo a los silajes <strong>de</strong> pescado, vísceras, granos o raíces.Silaje <strong>de</strong> planta entera <strong>de</strong> maízEcuación IIIa (Schmidt, et al., 1976)EM (Mcal/kg MS) = 3.16 – (0.025 × %FDAClase IV - Alimentos energéticosAlimentos con menos <strong>de</strong> 20% <strong>de</strong> proteína bruta (PB) y 18% <strong>de</strong> fibra cruda (FC) o 35%<strong>de</strong> FDN (sobre MS); por ejemplo granos, subproductos <strong>de</strong> molienda, frutas y tubérculos, aúncuando estos productos se encuentren ensilados.Grano <strong>de</strong> maíz enteroEcuación IVa (Pennsylvania State)EM (Mcal/kg MS) = 3.32 – 0.055 × %FDAConcentradosEcuación IVb (Menke and Steingass, 1988)EM (Mcal/Kg MS) = 3,50 - 0,035 × %FDA
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresMezcla <strong>de</strong> granosEcuación IVc (New York State Pred. Eq.; Hach, 1987))EM (Mcal/Kg MS) = 3.6 × [81.41 – 0.48 × %FDA]ReferenciasGoering, H. K. and P. J. Van Soest. 1970. Forage Fiber Analysis. 379. USDA, ARS.Hach. 1987. Feed analysis manual. Hach Co.,Ames, Iowa., Ames, Iowa (USA).Jaurena, G. and J. L. Danelón. 2001. Tabla <strong>de</strong> composicion <strong>de</strong> alimentos para rumiantes <strong>de</strong> laregion pampeana Argentina. Hemisferio Sur, Buenos Aires.McLeod, M. N. and D. J. Minson. 1976. The analystical and biological accuracyof estimatingthe dry mater digestibility of different legume species. Animal Feed Sci. and Technol.1:61-72.Menke, K. H. and H. Steingass. 1988. Estimation of the energetic feed value obtained fromchemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid. Anim. ßes. Dev.28:209-221.Rohwe<strong>de</strong>r, Barnes, and H. Jorgensen. Journal of Anim. Sci. 68:403-.Schmidt, A. R., R. D. Goodrich, R. M. Jordon, G. C. Marten, and J. C. M. . 1976. Relationshipsamong agronomic characteristics of corn and sorghum cultivars and silage quality.Agronomy Journal. 68:403-406.
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos AiresProcesamiento estadístico <strong>de</strong> los resultados analíticos – v2PrincipiosLos resultados analíticos no <strong>de</strong>berán sufrir selección alguna y se reportarán sobre baseseca total (Prtcl MS 105 01). Sin embargo cabe consi<strong>de</strong>rar algunas situaciones excepcionalespor las cuales pue<strong>de</strong> ser necesario reemplazar un resultado:• Medición perdida (resultado extraviado), se <strong>de</strong>berá repetir la <strong>de</strong>terminacióninmediatamente para reemplazar el resultado• Razón a priori <strong>de</strong>bidamente fundamentada (e.g. pérdida <strong>de</strong> material durante elprocedimiento, falla fehaciente <strong>de</strong>l equipo)• En el caso <strong>de</strong> resultados sospechosos <strong>de</strong> “outliers” se aplicará el test <strong>de</strong> Dixon(Q test; α = 0.01).Ámbito <strong>de</strong> apicación <strong>de</strong>l Test <strong>de</strong> DixonEl test <strong>de</strong> Dixon (Dixon, 1951) permite aplicar un criterio <strong>de</strong> discriminación <strong>de</strong> datos“outliers” a nivel <strong>de</strong>l operador <strong>de</strong>l laboratorio, previo al envío <strong>de</strong> los resultados al coordinador<strong>de</strong>l programa interlaboratorio.Este test se <strong>de</strong>berá aplicar una sola vez por conjunto <strong>de</strong> repeticiones para una misma<strong>de</strong>terminación (e.g. aFDN) y sólo se permite reemplazar un dato (“outlier” confirmado) porconjunto <strong>de</strong> repeticiones. En el caso <strong>de</strong> rechazar el resultado, la muestra será analizadanuevamente por la misma característica y se reportarán ambos valores (el “outlier” en el lugarconsignado en la planilla para tal fin).Procedimiento1. Calcular el parámetro q, i.e. (para n < 7):q = (D – N)/RDon<strong>de</strong>D: valor sospechoso,N: valor mas cercano al valor sospechoso,R: rango total2. Comparar el valor q contra el Q tabulado (α = 0.01; Tabla 1)Tabla 1. Valores para aplicar el test <strong>de</strong> Dixon (Q) para outliersNr. <strong>de</strong> repeticiones Valor Q para α = 0.013 0.9944 0.9265 0.8213. Regla <strong>de</strong> <strong>de</strong>cisión, el valor sospechoso será <strong>de</strong>scartado si supera el Q tabulado (α =0.01 para el número <strong>de</strong> repeticiones especificado).
PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento <strong>de</strong> la Evaluación <strong>de</strong> Forrajes y AlimentosCentro <strong>de</strong> Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)<strong>Facultad</strong> <strong>de</strong> Agronomía - Universidad <strong>de</strong> Buenos Aires4. Inmediatamente luego <strong>de</strong> tomada la <strong>de</strong>cisión <strong>de</strong> <strong>de</strong>scartar un dato, se <strong>de</strong>berá proce<strong>de</strong>ra reemplazar el dato por uno nuevo.Ejemplo6. Resultados analíticosRepeticiones analíticasResultado (g/kg MS)r1 560 Valor mínimor2 580r3 570r4 610 Valor máximo7. Cálculo <strong>de</strong> qEl resultado sospechoso es r4, por lo tantoD = 610N = 580R = 610 – 560 = 50q = (610 – 580)/ 50 = 30/50 = 0.60q < Q n=4; 1% no se rechaza el valor bajo sospecha (D)Téngase en cuenta que para fallar éste test el valor D <strong>de</strong>bería ser superior a 626.3.ReferenciasDixon, W. J. 1951. Ratios involving extreme values. J. Ann. Math. Stat. 22(1):68-78.