Promefa - Guia de procedimientos 2009.pdf - Facultad de ...

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresPrograma para el mejoramiento de laevaluación de forrajes y alimentos- PROMEFA -Guía de procedimientos analíticosAño 2009G. JaurenaM. WawrzkiewiczCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Departamento de Producción AnimalFacultad de Agronomía – Universidad de Buenos AiresTel: 4524-8005; cisna1@ agro.uba.ar

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresTabla de contenidosTABLA DE CONTENIDOS .......................................................................................................2PROTOCOLOS ANALÍTICOS ............................................................................................4FIBRA DETERGENTE NEUTRO (AFDN) – V1 ..........................................................................4CENIZAS 600ºC × 2 H – V1..................................................................................................7CENIZAS 550ºC × 4 H – V1..................................................................................................9CENIZAS 450ºC × 12 H – V1..............................................................................................11FIBRA DETERGENTE ÁCIDO (FDA) – V1..............................................................................13RECUPERACIÓN DE N (AOAC, 1996 – 4.2.09) – V5............................................................16LIGNINA EN DETERGENTE ÁCIDO CON ÁCIDO SULFURICO (LDAAS) – V2 ................................20MATERIA SECA PARCIAL – V2.............................................................................................23MATERIA SECA TOTAL – V2...............................................................................................25NITRÓGENO TOTAL (KJELDAHL) – V1..................................................................................27PROTOCOLOS MISCELÁNEOS......................................................................................32CORRECCIÓN DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS POR MATERIA SECA TOTAL – V2...................32MODELOS PROPUESTOS PARA PREDECIR LA CONCENTRACIÓN ENERGÉTICA DE LOS ALIMENTOSPARA RUMIANTES – V1 ......................................................................................................34PROCESAMIENTO ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS – V2..................................38

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProtocolos AnalíticosFibra Detergente Neutro (aFDN) – v1Por equipo ANKOM (Ankom, 2005)Alimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.El residuo fibroso (aFDN, fundamentalmente celulosa, hemicelulosa y lignina) seobtiene luego de disolver con detergente neutro los compuestos presentes en el contenidocelular junto con sustancias de la pared celular de fácil digestión (e.g. pectinas).Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• El Lauril sulfato de sodio puede irritar las mucosas. Usar máscara y guantes cuando estémanipulando este reactivo y trabajar bajo campana.• Asegurarse que el tamaño de partícula de la muestra sea de 1 mm.Equipamiento• Balanza analítica.• Estufa de secado regulada a 105ºC.• Aparato de digestión- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER• Bolsitas filtrantes- ANKON Technology F57 filter bags• Desecador.• Sellador por calor.Reactivosa) Solución de detergente neutro (SDN): por cada litro de solución• 30,0 g de lauril sulfato de sodio (SDS),• 18.61 g de EDTA-sodio dihidratado;• 6,81 g de tetraborato de sodio decahidratado;• 4,56 g de fosfato dibásico de sodio anhidro;• 10 ml de trietilengilcol,

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires• Agitar y calentar la solución hasta ebullición para garantizar la estabilidad de la misma.Ajustar el rango de pH entre 6,9 y 7,1.b) Alfa-amilasa-- alfa amilasa bacteriana termoestable, actividad = 340,000 modificadoWohlgemuth Units / mlc) Sulfito de sodio- Na 2 SO 3 anhidro.d) Acetona- Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados deevaporación.Procedimiento1. Preparación de la muestra (pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por digestión).a. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).b. Pesar las bolsas de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.c. Pesar aproximadamente 0,5 g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a65°C (MH1) (para alimentos con bajo contenido de agua solo es necesariomolerlos) directamente en la bolsa de filtro.d. Pesar dos bolsitas de filtro para determinar el blanco (Tbco1).e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.g. Exceptuando las muestras de forraje, las restantes deberán ser sometidas a unlavado por inmersión con acetona durante 3 min y luego las muestras se debensecar completamente antes de ser sometidas a la digestión.2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solución de Detergente Neutro(SDN) dentro del vaso de digestión. Si se procesan menos de 20 bolsas se agregan100 ml/bolsa de la SDN. El volumen mínimo de solución es de 1500 ml.3. Agregar 4 ml de la alfa amilasa termoestable durante la digestión. En caso de norealizar el procedimiento secuencial para la determinación de fibra en detergente ácido(FDA) adicionar también 20 g (0,5g/50ml de NDS) de sulfito de sodio en la solución enel vaso de digestión. Si se realizará el procedimiento secuencial de determinación deFDA se debe omitir el agregado de sulfito de sodio.4. Calentar hasta 90-100°C la SDN dentro del vaso digestor antes de colocar lasmuestras.5. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez que la solución estácaliente, colocar en el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso de digestión. Digestardurante 60 minutos.6. Interrumpir la agitación y el calentamiento, abrir la válvula y dejar salir la solución(precaución: la solución dentro del vaso está bajo presión). La válvula se abre primero

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Airespara liberar la presión, para luego abrir la tapa del vaso. Una vez liberada la soluciónse debe volver a cerrar la válvula.7. Después de que la solución ha salido toda del vaso se abre la tapa del mismo. Seagrega c.a. 2000 ml de agua destilada a 70-90°C con 4 ml de alfa amilasa. Se cierra elvaso y se prende el agitador por 3 – 5 min. Luego se libera el agua y se repite elprocedimiento cuatro veces en total, siendo solo en los dos primeros que se agrega laamilasa.8. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionándolas.Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos. Remover el excesode acetona por presión.9. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Luego completar el secado a 105°Cdurante 4 horas. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T+aFDN) y los blancos(Tbco2).CálculosaFDN (%bs) = 100 x {(T+aFDN) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)]} / (MH1 x MS105)}Donde,%bs:MH1 (g):MS105 (g/g):T+aFDN (g):T1 (g):Tbco1 (g):Tbco2 (g):Porcentaje sobre base seca.peso de la muestra.coeficiente de materia seca a 105°C.peso final de la bolsa con la fibra.Peso de la bolsa vacía.Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial(previo a la digestión con el detergente).Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luegode la digestión con el detergente)ReferenciasAnkom. 2005. Subject: Neutral Degerteng Fiber in Feeds. Filter bags technique (ANKOM200).Accessed 9/5/2007, 2007.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analisys. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I. Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCenizas 600ºC × 2 h – v1Alimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos (según la referencia para alimentos y plantas).La materia orgánica de la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origenfuncional en el material de origen).PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Equipamiento• Balanza de precisión.• Cápsulas de porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.Procedimiento10. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.11. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.12. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estarcompletamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menosdesde la tarde anterior.13. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)14. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se debe retirarcon pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza concuidado.15. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente2 g) (MH)16. Regular la mufla a 600ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior.17. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 2 horas.18. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C.19. Retirar las cápsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).20. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro, regular la temperatura

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Airesen 110ºC, de esta manera las cenizas se mantendrán secas.21. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulaspreparadas con que se determinó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 delpresente protocolo.CálculosCen (%) = {[(T+Cen.) – T] / MH} × 100Cen (%bs) = [(T+Cen.) – T] / (MH × MS105 / 100) × 100Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)Donde,Referencias%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): TaraAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCenizas 550ºC × 4 h – v1Alimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.La materia orgánica de la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origenfuncional en el material de origen).Equipamiento• Balanza de precisión.• Cápsulas de porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Procedimiento22. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.23. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.24. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estarcompletamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menosdesde la tarde anterior.25. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)26. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se debe retirarcon pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza concuidado.27. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente2 g) (MH)28. Regular la mufla a 550ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior.29. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 4 horas.30. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C.31. Retirar las cápsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires32. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro, regular la temperaturaen 110ºC, de esta manera las cenizas se mantendrán secas.33. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulaspreparadas con que se determinó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 delpresente protocolo.CálculosCen. (%) = [((T+Cen) – T) / MH] × 100Cen (%bs) = [((T+Cen) – T) / (MH × MS105 / 100)] × 100Cen (%bs) = Cen (%) / (MS105 / 100)Donde,%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): TaraReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 942.05.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCenizas 450ºC × 12 h – v1Alimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.Recopilación: M. Wawrzkiewicz y G. JaurenaLa materia orgánica de la muestra es combustionada, eliminándose como CO 2 , por loque el residuo recuperado reúne las sustancias minerales (independientemente de su origenfuncional en el material de origen).Equipamiento• Balanza de precisión.• Cápsulas de porcelana• Desecador• MuflaReactivosNo hay.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Procedimiento34. El sustrato con que se trabaja es la muestra molida y secada a 65ºC.35. El procedimiento se debe realizar por duplicado para cada una de las muestras.36. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estarcompletamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menosdesde la tarde anterior.37. Se retiran las cápsulas de la estufa en desecador y se dejan enfriar (aprox. 15-30 min.)38. Registrar el peso de la cápsula (T) en una balanza analítica. Para ello se debe retirarcon pinza la cápsula del desecador y colocarla sobre el plato de la balanza concuidado.39. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente2 g; MH)40. Regular la mufla a 450ºC y encenderla una vez que las cápsulas están en su interior.41. Una vez alcanzada la temperatura final se debe mantener durante 12 horas.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires42. Apagar la mufla y dejar enfriar hasta 150-200°C.43. Retirar las cápsulas en desecador, dejar enfriar y pesar (T+Cen).44. Si se dejan las cenizas dentro de la mufla de un día para otro, regular la temperaturaen 110ºC, de esta manera las cenizas se mantendrán secas.45. Se puede continuar con la determinación de cenizas a partir de las cápsulaspreparadas con que se determinó materia seca a 105°C. Una vez pesadas lascápsulas y finalizada la determinación de MS 105°C se procede desde el punto 7 delpresente protocolo.CálculosCen. (%) = [((T+Cen.) – T) / MH] * 100Cen (%bs) = [((T+Cen.) – T) / (MH * MS105 / 100)] * 100Cen (%bs) = Cen (%) * (MS105 / 100)Donde,%bs % en base secaCen: CenizasMH (g): Materia húmeda o tal cualMS105 (%): % MS secada a 105ºCT (g): Tara

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresAlimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.Fibra Detergente Ácido (FDA) – v1Por equipo ANKOMRecopilación: M. Wawrzkiewicz y G. JaurenaSe denomina fibra insoluble en detergente ácido (FDA) al residuo fibroso que quedaluego de disolver el contenido celular y las hemicelulosas de la FDN (fibra insoluble endetergente neutro) empleando detergente ácido, el cuál está constituido fundamentalmentepor celulosa y lignina .Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. Sea muy cuidadosocuando agregue el ácido sulfúrico al agua. “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”.• El CTAB puede irritar las mucosas. Usar máscara y guantes cuando estémanipulando este reactivo siempre bajo campana.• Asegurarse que el tamaño de partícula de la muestra sea de 1 mm.Equipamiento• Aparato de digestión- ANKON 200/220 FIBER ANALYZER• Balanza de precisión.• Bolsitas filtrantes - ANKON Technology F57 filter bags• Desecador.• Sellador por calor.Reactivosa. Solución de Detergente Ácido (SDA): por cada litro de solución• 20 g bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB o Cetrimida)• 27.7 ml ácido sulfúrico (H 2 SO 4 ) concentrado.b. Acetona. Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados deevaporación.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProcedimiento1. Preparación de la muestraa. En caso de utilizar el procedimiento secuencial para la determinación seguir elprotocolo desde el punto siguiente "g")b. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).c. Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a 65ºC (MH1), Pesaruna bolsa de filtro y digerirla para determinar el blanco (Tbco1).e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.g. Pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por vez.2. Para procesar las 24 bolsas se agregan 2000 ml de solución de Detergente Ácidodentro del vaso de digestión. Si se procesan menos de 20 bolsas se agrega la soluciónSDA a razón de 100 ml/bolsa. El volumen mínimo de solución es de 1500 ml.3. Calentar hasta 90-100°C la solución de detergente dentro del vaso digestor antes decolocar las muestras.4. Poner las bolsas con las muestras en la gradilla y una vez caliente la solución, colocaren el vaso digestor. Cerrar y sellar el vaso de digestión.5. Después de 60 minutos interrumpir la agitación y el calentamiento, abrir la válvula ydejar salir la solución. Precaución: la solución dentro del vaso está bajo presión. Laválvula se abre primero para liberar la presión, para luego abrir la tapa del vaso. Unavez liberada la solución se debe volver a cerrar la válvula.6. Después que la solución ha salido del vaso se abre la tapa del mismo. Se agregaaproximadamente 2000 ml de agua destilada a 70-90°C. Se cierra el vaso y se prendeel agitador por 5 minutos. Luego se libera el agua y se repite el procedimiento dosveces más o hasta obtener pH neutro en el agua de lavado descartada.7. Sacar las bolsas del digestor y sacar el exceso de agua de las mismas presionandocon los dedos. Lavar las bolsitas con acetona por inmersión durante tres minutos.Remover el exceso de acetona por presión.8. Dejar secar las bolsas a temperatura ambiente. Completar el secado a 105°C durante4 horas. Enfriar en desecador y pesar las muestras (T1+FDA) y los blancos (Tbco2)

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCálculosFDA (%bs) = 100 x {(T1+FDA) - [T1 x (Tbco2/Tbco1)] / (MH1 x MS105)}Donde,%bs:MH1 (g):MS105 (g/g) :T1 (g):T1+FDA (g):Tbco1 (g):Tbco2 (g):Porcentaje sobre base seca.peso de la muestracoeficiente de materia seca a 105°C.peso de tara de la bolsapeso final de la bolsa con la fibra.Promedio de pesos de bolsas para blanco inicial(previo a la digestión con el detergente).Promedio de pesos de bolsas para blanco final (luegode la digestión con el detergente)ReferenciasAnkon, 2005. Acid detergent fiber in feeds. Filter bag technique (ANKOM 200 ). AnkonTechnoligy.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresAlimentos de aplicaciónPrincipiosRecuperación de N (AOAC, 1996 – 4.2.09) – v5Recopilación: G. Jaurena y M. WawrzkiewiczSólo aplicable sobre los estándares apropiados.Se emplean lisina, sulfato de amonio o fosfato diácido de amonio para chequear elproceso completo de digestión y destilación. Dado que la cantidad de N puesta a digestar esconocida se espera recuperar el 100%.Se asume que la técnica es satisfactoria si se recupera más del 98% del N.PrecaucionesHay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación de los digestores y el ácidosulfúrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.Se trata de materiales higroscópicos, por lo que es necesario manipularlos con losrecaudos correspondientes.EquipamientoReactivos• Balanza analítica• Tubos de digestión• Erlenmeyers• Equipo digestor y destilador para Kjeldahl• BuretaUsar NH 4 H 2 PO 4 certificado (12.15% N) o Lisina clorhidrato de alta pureza (e.g. L-lisinaSigma Nr. Catalogo L-5626: C 6 H 14 N 2 O 2 .HCl, PM = 182.6; 15.33% N; pureza mínima 98%).Para chequear el método completo estándar de referencia consultar NIST Nº194 (NationalInstitut of Standards and Technology).El resto de los reactivos son los mismos de la determinación de N por Kjedahl (Prtcl NT01).Características de los patrones provistos por el Promefa:• Sulfato de amonio (Art. 961506, Biopack, Argentina), H 8 N 2 O 4 S, PM: 132.14, 21.2%N;pureza: 99.9%.• Lisina (Art. 971106, Biopack, Argentina), L-Lisina monoclorhidrato (C 6 H 14 N 2 O 2 HCl, PM:182.65; 15.3%N; pureza: 99.9%.ProcedimientoPesar una alícuota de la muestra y registrar el peso (MH1; c.a. 0.1 g de NH 4 H 2 PO 4 olisina).Proceder de acuerdo a las determinaciónes de N por Kjedahl (Prtcl NT 01) o pormétodo de Dumas (Prtcl NT 02).

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCálculos(T1 – Tbco.) x 1.4 x N(SO 4 H 2 )NT (%, bs) = ------------------------------------------------MH1 x MS105Donde,% Recuperación de N = NT (%, bs) / NT E (%, bs) × 100NT E (H 8 N 2 O 4 S, %, bs) = 21.2 x MS105 × 0.999NT E (Lisina, C 6 H 14 N 2 O 2 HCl, %, bs) = 15.3 × MS105 × 0.999T1 (ml):Titulación con SO 4 H 2 de la muestraTbco. (ml): Titulación con SO 4 H 2 del blancoN(SO 4 H 2 )(N): Normalidad del SO 4 H 2 de titulaciónNT E (%, bs): N total esperado para los reactivos provistosNT (%, bs): N total medido en la alícuota ensayadaMH1 (g):Peso de la muestraMS105 (g/g): Coeficiente de materia seca a 105ºC

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresDeterminación del porcentaje de materia seca de los patronesSe realizará la determinación del porcentaje de materia seca de los patrones (sulfatode amonio y lisina) para luego realizar las correcciones necesarias.Alimentos de aplicaciónPrincipiosSólo aplicable sobre los estándares apropiados.El agua se evapora por encima de los 100ºC, consecuentemente el residuo remanentepermite estimar gravimétricamente el contenido de materia seca (MS105) del material puestoa secar inicialmente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Prestar atención al manejo de las estufas para evitar el ingreso de muestras húmedasnuevas en momentos cercanos a la finalización del secado, dado que pueden afectar ladeterminación.Equipamiento• Balanza de precisión.• Estufa termorregulada a 105ºC.• Desecador.• Cápsulas de porcelana, aluminio o acero inoxidable.ReactivosNo hay.Procedimiento9. Se debe realizar una determinación en duplicado para cada uno de los patrones.10. Las cápsulas de porcelana utilizadas en este procedimiento deben estarcompletamente secas. Para ello deben permanecer en la estufa a 105°C por lo menosdesde la tarde anterior.11. Retirar las cápsulas de la estufa en desecador y dejar enfriar (aprox. 15-30 min.).12. Registrar el peso de la cápsula en una balanza analítica. Para ello se debe retirar lacápsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado(T1)13. Colocar en la cápsula una alícuota del patrón de peso conocido (aproximadamente 500miligramos; MH1)14. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y dejar durante 4

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aireshoras o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no más).15. Retirar de la estufa en desecador, dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar(T1+MS1).CálculosMS105 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100MST (%) = MS105 (%)MH1 (g): Material tal cual.MS105 (%): MS secada a 105ºC.MS1 (g): MS obtenida luego de secar a 105ºC.MST (%) Materia seca total (%)T1 (g): Peso del recipiente empleado para el secado a 105ºC.ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Academic PressIncorporated, 1965.Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-MacroPublishing, 1991.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresLignina en detergente ácido con ácido sulfurico (LDAAS) – v2Por equipo ANKOMAlimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.El residuo de la fibra ácido detergente consiste principalmente de lignocelulosa, lasolución de ácido sulfúrico (72%) disuelve la celulosa, quedando la lignina y la cenizainsoluble en ácido en el residuo final recuperado. La cutina también es retenida yconsecuentemente se toma como si fuera parte de la lignina.Precauciones• La acetona es altamente inflamable. Manipular la acetona con la campana funcionandoevitar la inhalación y el contacto con la piel.• Usar guantes y la campana cuando manipule el ácido sulfúrico. Sea muy cuidadosocuando agregue el ácido sulfúrico al agua. “Al sulfúrico no le gusta que lo mojen”.Equipamiento• Balanza de precisión.• Estufa de secado regulada a 105ºC.• Bolsitas filtrantes—ANKON F57 Filter bags• Desecador• Vasos de precipitadoReactivos16. Ácido sulfúrico (72% peso en peso)a. Mezclar manualmente para estandarizar el reactivo. El grado del ácido sulfúricoes de 1,634 g/l (a 20°C) o 24,00 N. Agregar 1200 g de ácido sulfúrico a 440 mlde agua destilada.17. Acetonaa. Use un grado que esté libre de colores y que no tenga niveles elevados deevaporación

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProcedimiento18. Preparación de la muestraa. En caso de utilizar el procedimiento secuencial seguir el protocolo desde elpunto "b)" del procedimiento para determinar FDA (Prtcl FDA 01).b. Rotular debidamente la bolsitas filtrantes (2 por cada muestra a analizar y 2para los blancos).c. Pesar la bolsa de filtro (T1) y llevar a cero la balanza.d. Pesar 0,5g (+/- 0,05 g) de la muestra molida y secada a temperatura ambiente(MH1). Pesar una bolsa de filtro vacía para usar como blanco e incorporarla enel procedimiento junto con las muestras.e. Sellar por calor las bolsas cercano al borde (c.a. 4 mm) cuidando que el ladointerno de las mismas estén bien limpios para garantizar el sellado.f. Distribuya la muestra uniformemente dentro de las bolsas.g. Pueden procesarse un máximo de 24 bolsas por vez.h. Determinar FDA con el “ANKON Fiber analyzer” (Prtcl FDA 01 desde el punto“2” al “7”).19. Poner las 24 bolsas con muestra digerida en solución DA y las bolsas “blanco” dentrode un vaso de precipitados de 1 litro y agregar suficiente cantidad (aprox. 250 ml) deH 2 SO 4 al 72 % p/v. Importante: las bolsas deben estar completamente secas y atemperatura ambiente antes de agregar el ácido.20. Poner un vaso de 500 ml dentro del vaso de 1 l para que las muestras quedensumergidas en el ácido sulfúrico. Agitar 30 veces cada 30 min presionando con el vasode precipitado de 500 ml.21. Después de tres horas sacar el ácido sulfúrico y enjuagar con agua destilada (90-100ºC 1 ) para remover los restos del ácido. Repita este procedimiento hasta que el pHesté neutro.22. Enjuagar con acetona durante 3 min para luego secar las bolsas a temperaturaambiente.23. Complete el secado a 105 °C durante 4 horas. Enfriar en desecador y pesar la bolsa(T1+LDAyCen). Luego poner la bolsa en una cápsula previamente pesada (T2) y llevara 525°C en la mufla durante 3 horas, luego pesar (T2+Cen). Pesar los crisoles para losblancos (T3) y llevar a la mufla junto con las muestras, luego registrar el peso(T3+Cen).1 En el protocolo sugerido por ANKOM Technology (2005) indica emplear “agua de grifo” sin indicación detemperatura. Considerando la variabilidad en calidad de agua disponible entre los laboratorios participantespareció mas conveniente utilizar el procedimiento anterior.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresCálculosLDA (%bs) = 100 x {T1+LDAyCen – [T1 x (Tbco2/Tbco1) – A] / (MH1 x MS105)}A = (T2+Cen – T2) – [T1 x (T3+Cen – T3) / Tbco.1)]Donde,A (g):cenizas insolubles de la muestraMH1 (g):peso de la muestraMS105 (g/g): coeficiente de materia seca a 105°CT1 (g):tara del sobre para muestrasT1+LDAyCen (g): peso final de la bolsa con la lignina y las cenizasT2 (g):tara del crisol para muestrasT2+Cen (g) peso final del crisol mas las cenizas de la muestraT3 (g):tara del crisol para blancosT3+Cen (g) peso final del crisol mas las cenizas del blancoTbco1 (g): tara del sobre en blanco inicialTbco2 (g): tara del sobre en blanco final.ReferenciasAnkom, 2005. Method for determining acid detergent lignin in beakers. ANKOM Technology.Van Soest, P. J. 1982. Nutritional Ecology of the Ruminant. O and B Brooks, Inc., Corvallis,OR.Goering, H. K. and Van Soest, P. J. 1970. Forage fiber analices. Agric. Handbook No 379.ARS, USDA.Van Soest P. J. 1975. Physio-chemical aspects of fiber digestion in I. W. McDonald and A. C.I Warner (Eds.), Digestion and Metabolism in the Ruminant. The Univ. New EnglandPubl. Unit., Armidale, Australia.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 973.18. Pag. 82.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresMateria seca parcial – v2Alimentos de aplicaciónForrajes y alimentos con más de un 20% de humedad.En alimentos con alto contenido de sustancias volátiles (e.g. silajes), el secado enestufa eliminará los compuestos volátiles junto con el agua y consecuentemente ladeterminación de humedad por esta vía estará sobrestimada.PrincipiosEste procedimiento se utiliza para preparar las muestras con alto contenidos dehumedad (>20%) y dado que en general tiene un mínimo efecto sobre la composición químicapermite almacenar las muestras y efectuar posteriormente los análisis necesarios.Dado que el agua se evapora a 100°C, ésta técnica no elimina toda el agua contenidaen la muestra y consecuentemente se trata de una MS parcial que elimina aproximadamenteel 95% de la humedad (Harris, 1970).El contenido de materia seca parcial (MSp) de la muestra se obtiene luego de habereliminado por evaporación parcialmente el agua y equilibrado dicha muestra con la humedadambiente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Equipamiento• Balanza de precisión.• Estufa con termorregulación a 65ºC.• Bandejas de aluminio.ReactivosNo hay.Procedimiento24. Registrar el peso del recipiente en el cual se colocará la muestra a secar (T1)25. Colocar una alícuota de la muestra en el recipiente previamente pesado y registrar elpeso de la misma habiendo llevado a cero la balanza con el recipiente (MH1). Lamuestra debe quedar uniformemente esparcida sobre el recipiente para permitir unarápida evaporación del agua.26. Llevar a estufa a una temperatura de 65ºC durante 48 h o hasta peso constante.27. Retirar las muestras de la estufa, dejarlas enfriar sobre una mesada hasta que seequilibren con el ambiente y pesarlas (T1+MS1).28. La muestra así secada debe ser molida y preservada en un envase de vidrio o plástico

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Airescon un cierre que no permita la entrada de aire.CálculosMS65 (%) = [((T1+MS1) – T1) / MH1] × 100Donde,T1 (g):MH1 (g):MS1 (g)MS65 (%):Peso del recipiente vacío.Material húmedo o tal cual (g).MS obtenida luego de secar a 65ºC por 48 h (g)Estimación del contenido de MS parcial luego de eliminar el aguaen estufa a 65ºC.ReferenciasHarris, L. E. 1970. Compilación de datos analíticos y biológicos en la preparación de cuadrosde composición de alimentos para uso en los trópicos de America Latina. University ofFlorida, Gainesville, Fl (USA).

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresMateria Seca Total – v2Alimentos de aplicaciónTodo tipo de forrajes y alimentos con bajo contenido de humedad (

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Airescápsula del desecador con pinza y colocarla sobre el plato de la balanza con cuidado(T2)33. Colocar en la cápsula una alícuota de la muestra de peso conocido (aproximadamente2 g; MH2)34. Poner las cápsulas con muestra en una estufa regulada a 105°C y dejar durante 4horas o hasta peso constante (recomendable durante toda una noche, no más).35. Retirar de la estufa en desecador, dejar enfriar (hasta temperatura ambiente) y pesar(T2+MS2).CálculosMS105 (%) = [((T2+MS2) – T2) / MH2] × 100MST (%) = MS65 (%) × MS105 (%) / 100Donde,MS65 (%) = {(T1+MS1) – T1] / MH1} × 100MH1 (g): Materia húmeda o tal cualMH2 (g): Material tal cual o muestra de material húmedo previamente secadoa 65ºC.MS1 (g): MS obtenida luego de secar a 65ºC por 48 hMS105 (%): MS secada a 105ºCMS2 (g): MS obtenida luego de secar a 105ºCMS65 (%): Estimación del contenido de MS luego de eliminar el agua en estufaa 65ºC.MST (%) materia seca total (%)T1 (g): Peso del recipiente empleado para el secado a 65ºC.T2 (g): Peso del recipiente empleado para el secado a 105ºC.ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 130.15.AOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1990. Nro. 167.03. 15th Edition.Correcciones2007 Mayo.Shirley Furtado y Gabriela AriasBollati, G.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresNitrógeno Total (Kjeldahl) – v1Alimentos de aplicaciónPrincipiosTodo tipo de forrajes y alimentos.En este paso se oxida la materia orgánica a CO 2 y H 2 O, mientras se reduce el N aamonio. Una vez finalizada la digestión, se tiene en solución:MO CO 2 + H 2 ON (NH 4 ) 2 SO 4El éxito de la técnica de determinación de nitrógeno puede controlarse mediante el usode sustancias patrón de concentración conocida de nitrógeno. Una sal de amonio puede serusada para testar el proceso de destilación de la técnica, mientras que la lisina y el ácidonicotínico son usados para chequear el proceso de digestión. La recuperación porcentual delnitrógeno agregado en el patrón indica la eficiencia de la técnica (se esperan valores derecuperación mayores al 98%). Este procedimiento debe ser incorporado como rutina a modode control del funcionamiento de la técnica.Se deberán realizar blancos para determinar posibles aportes de nitrógeno por losreactivos y materiales empleados. El procedimiento para la determinación de los blancos esigual a la de las muestras pero sin la colocación de la misma y debe ser reconfirmadafrecuentemente.PrecaucionesBásicas relacionadas con el manejo de equipos eléctricos y con actividades delaboratorio.Hay que ser especialmente cuidadoso en la manipulación de los digestores y el ácidosulfúrico concentrado, utilizar lentes protectores y guantes resistentes al calor.EquipamientoReactivos• Balanza analítica• Tubos de digestión• Erlenmeyers• Equipo digestor y destilador para Kjeldahl• BuretaÁcido Bórico al 2%:a) Hervir 20 g de ácido bórico en 500 ml de agua destilada para solubilizarlob) Agregar 250 ml de agua fríac) Cuando llega a temperatura ambiente agregar:i) 10 ml de Verde de Bromocresol (100 mg / 100 ml etanol)ii) 7 ml de Rojo de Metilo (100 mg / 100 ml etanol)d) Llevar a 1 litro en matraz con agua destilada

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresHidróxido de Sodio:a) 40 g NaOH (grado reactivo) / 100 ml agua :::: 800 g / 2000 ml ::: 1600 g / 4000 mlAcido sulfúrico 0.1 NSe emplean 6 ml SO 4 H 2 (96-98% grado reactivo)/ 2000 ml agua destiladaValoración con Biftalato de potasioi) Preparar 3 erlenmeyers con:(1) 200 mg de Biftalato de potasio (registrar el peso exacto P Bif )(2) agregar 30 ml agua destilada(3) agregar 3 gotas de fenolftaleina(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T1)ii) Preparar 3 erlenmeyers con:(1) 10 ml SO 4 H 2 a valorar(2) agregar 30 ml agua destilada(3) agregar 3 gotas de fenolftaleina(4) titular con NaOH 0.1 N valorado o comprado (T2)iii) Cálculo de la valoración:ml (T2) x mg (P Bif )N (SO 4 H 2 ) = -----------------------------------------ml (T1) x 204,23 x 10Valoración con patrón primario (Trometamina, tris PM: 121.14)Usar verde de bromocresol como indicador (azul en medio básico, amarillo en medioácido).a) Disolver el patrón primario en agua y agregar 2 o 3 gotas del indicador.b) Titular el ácido a valorar.mg Trometamina (mg)N (SO 4 H 2 ) = -------------------------------------121.14 × SO 4 H 2 (ml)

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProcedimientoDigestión1) Pesar un alícuota de la muestra y registrar el peso (MH1) (0.5 g MS 65°C forrajes y0.1 g MS 65°C carne)22) Colocar la muestra en tubos de digestión3) Agregar 15 g de Sulfato de potasio (SO 4 K 2 )4) Agregar 1 ml de Sulfato de cobre 10% (SO 4 Cu 10%)5) Agregar 25 ml de ácido Sulfúrico concentrado (SO 4 H 2 concentrado)6) Encender el digestor a 400°C7) Activar el mecanismo necesario para evitar el escape de vapores al ambiente.8) La digestión de las muestras se llevará a cabo hasta que la solución dentro de lostubos quede de color verde translúcido (dependiendo de las muestras y equipo,puede tomar entre 30 min a 4 h).9) Retirar los tubos con la gradilla del block digestor y dejar enfriar sin retirar la taparecolectora de vapores. Al enfriarse la solución se torna incolora y translúcida10) Agregar 20 ml de agua destilada en cada tubo y dejar enfriar agitar 2 ó 3 vecescada 5 minutos para evitar que se formen cristales grandes de Sulfato de potasio.11) Dejar enfriar para comenzar la destilaciónDestilación1) Preparar tantos erlenmeyer como tubos para destilar haya preparados con 25 ml deÁcido Bórico 2%2) Colocar un erlenmeyer con ácido bórico 2% en la salida del refrigerante del equipocon el final del tubo de vidrio sumergido en la solución (así quedará hastainmediatamente antes de apagar la bomba generadora de vapor para concluir eldestilado)3) Colocar el tubo con la muestra digestada en el destilador asegurándose que elcierre superior con la goma sea completo (se recomienda presionar en sentidoascendente desde el tubo)4) Dosificar el Hidróxido de Sodio 40% hasta neutralizar la solución del tubo (el colordel la solución del tubo pasa de incoloro-blanco a marrón o celeste en caso deexceso de NaOH)2 En caso de ser muestras líquidas o de elevado contenido de agua (>30% de humedad, se debe elevar latemperatura del digestor a razón de 100°C cada 30 minutos hasta los 400°C y a partir de entonces contar las 2horas de digestión.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires5) Destilar hasta recoger c.a. 150 ml en el erlenmeyer.6) Apagar la bomba generadora de vapor.7) Retirar el tubo del equipo cuidando los goteos de solución desde la goma y elerlenmeyer8) Una vez destilados todos los tubos se debe lavar el frente del equipo de lassalpicaduras de NaOH y vaciar y enjuagar la bomba generadora de vapor desde elrobinete superior y descargando la suciedad hacia la canaleta trasera de lamesada.Titulación• Con Ácido Sulfúrico 0,1 N hasta cambio de color verde a rosa intenso (mantenersiempre el mismo criterio de color final en la titulación de todas las muestras). (T1)Cálculos(T1 – Tbco.) x 1.4 x N SO 4 H 2Nt (%bs) = ------------------------------------------------MH1 x MS105Donde,PB (%bs) = Nt (%bs) x 6,25*T1 (ml): Titulación con SO 4 H 2 de la muestraTbco. (ml): Titulación con SO 4 H 2 del blancoN SO 4 H 2 (N): Normalidad del SO 4 H 2 de titulaciónMH1 (g): Peso de la muestraMS105(g/g):Coeficiente de materia seca a 105ºC* El valor asume que todo el nitrógeno del alimento se encuentra en6.25forma de proteína y que está presente en ella en un 16%ReferenciasAOAC International (formerly the Association of Official Analytical Chemists). Official Methodsof Analysis. Arlington, VA: AOAC International, 1995.Bradstreet, R. B. The Kjeldahl Method for Organic Nitrogen. New York, NY: Academic PressIncorporated, 1965.Jones, J. Benton. Kjeldahl Method for Nitrogen Determination. Athens, GA: Micro-MacroPublishing, 1991.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProtocolos misceláneosCorrección de los resultados analíticos por Materia Seca Total – v2Alimentos de aplicaciónTodas las muestras de las pruebas interlaboratorios del Promefa (previamente secadasa 65ºC).PrincipiosLas muestras de alimento, establecen un equilibrio con la humedad ambiente, por loque el contenido de agua puede variar entre laboratorios y aún para un mismo laboratorio a lolargo del tiempo.Los resultados analíticos se deben reportar sobre base seca total para evitar lasvariaciones debidas a la humedad residual contenidas en las muestras.ProcedimientoA partir de los procedimientos explicados en el Prtcl MS Total 01 se puede estimar lamateria seca obtenida por secado a 105ºC (MS105) de cada muestra con la cual seprocederá a corregir los valores analíticos obtenidos sobre las muestras parcialmente secas(MS 65º y equilibradas con la humedad ambiente del laboratorio).Los análisis (e.g. aFDN, PB) se llevan a cabo sobre las muestras parcialmente secas(base parcialmente seca [bps]; i.e. 65ºC o en el caso de las muestras del Promefa tal comollegan al laboratorio).Una alícuota de la muestra recibida se usará para estimar la MS105 (secando a 105ºC)Una vez obtenidos los resultados analíticos y la MS105 se procederá a efectuar lacorrección, aplicando la siguiente fórmula (ejemplificado para aFDN):aFDN (g/kg MS bs) = aFDN (g/kg MS bps) / MS105 (g/kg MH2) / 1000donde:aFDN (g/kg MS bs): contenido de aFDN expresado en base seca (bs)aFDN (g/kg MS bps): contenido de aFDN expresado sobre base parcialmenteseca (bps)MS105 (%): materia seca obtenida luego de secar la muestra a 105ºC deacuerdo al Prtcl MS Total 01Ejemplo

ケーションを 行 っている 層 として、 国 民 健 康 保 険 の 被 保 険 者 の 人 数 から 推 計 患 者 数 をひいた 人 数 を 利 用 した。 説 明 変 数 は 次 の 通 りである。 s j / gは「1 日 当 たりの 外 来 患 者数 」を、 都 道 府 県 別 の 推 計 外 来 患 者 数 でそれぞれ 叙 した 数 値 を 利 用 した。 p jは「1 日患 者 1 人 当 たり 診 療 収 入 」を 利 用 した。 医 療 機 関 の 属 性 としては、SCALEは 病 床 数 が500 以 上 の 大 病 院 か 否 かを 識 別 する 大 病 院 ダミー、STAFF は「 全 職 員 数 」、DEPARTMENTは 各 医 療 機 関 のホームページでそれぞれ 調 べた「 診 療 科 目 数 」とした。 推 計 結 果 は 次 の 表 5-6 の 通 りである。表 5-6 関 東 地 方 の 公 立 病 院 OLS 推 計 結 果OLS(Robust)Coef. t-value t-valuelnsjg 0.571 8.48 *** 6.30 ***price 0.000 -4.64 *** -4.29 ***scale -0.389 -2.17 ** -2.09 **department 0.015 2.93 *** 2.87 ***staff 0.001 4.54 *** 4.20 ***_cons -4.933 -9.36 *** -6.71 ***Number of obs 103 -Adj R-squared 0.7606 -BP test chi2(5)=7.59,Prob>chi2=0.1805 -以 下 、OLS の 推 定 結 果 を 記 述 する。 全 ての 係 数 が 有 意 となり、それぞれの 係 数 の 符号 は、 都 道 府 県 内 シェアの s /、 診 療 科 目 数 の department、 医 師 数 の staff が 正 で、jg大 病 院 ダミーの scale は 負 、 価 格 の price は 0 である。 不 均 一 分 散 の 検 定 の 結 果 、 均一 分 散 と 言 える。また、ロバスト 修 正 した t 値 も、 全 ての 説 明 変 数 において 有 意 であった。次 に、(5.16) 式 を 利 用 して BLP の 指 摘 する 価 格 の 内 生 性 を 考 慮 した 操 作 変 数 法 を 利 用する。しかし、 日 本 の 医 療 サービスの 価 格 は、 厚 生 労 働 省 の 中 央 社 会 保 険 医 療 協 議 会 によって 定 められた 診 療 点 数 表 に 基 づくため、 医 療 機 関 によって 価 格 設 定 を 変 えることはできず、 内 生 性 を 与 える 操 作 変 数 として 一 般 に 利 用 されている 費 用 等 を 採 用 することはできない。よって、 本 論 文 で 価 格 として 採 用 している「1 日 1 人 患 者 当 たりの 診 療 収 入 」に 内 生29

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresModelos propuestos para predecir la concentración energética de losalimentos para rumiantes – v1IntroducciónUn objetivo primordial de los sistemas de evaluación de alimentos para animales espredecir con razonable exactitud la producción animal a partir del suministro de los alimentosanalizados. Es aceptado que la productividad animal lograda como consecuencia delsuministro de un dado alimento constituye el criterio último para valorar un alimento, pero estasituación de valoración ideal está estrictamente circunscripta al trabajo de investigacióndesarrollado en instituciones especializadas.La valoración comercial de los alimentos para animales requiere de métodos objetivos,repetibles y económicos que permitan efectuar predicciones sobre la capacidad de losalimentos para suministrar los nutrientes y la energía necesarios para cubrir los distintosprocesos vitales de los animales y preservar su estado de salud y la calidad de los productosobtenidos a partir de ellos.El valor nutritivo (VN, entendido como la combinación de consumo, digestibilidad yeficiencia en el uso de los nutrientes) se relaciona estrechamente con la producción animal yes sobre este principio (y sobre las asociaciones empíricas descritas entre los componentesdel VN y las determinaciones efectuadas en el laboratorio) que se basa el funcionamiento delos sistemas de alimentación animal (congruencia entre la valoración de alimentos y lapredicción de los requerimientos animales).Por las razones antes expuestas, es que la predicción de la concentración energéticade los alimentos es un paso crítico del sistema de valoración de alimentos.Existen dos alternativas para predecir el aporte energético de los alimentos a partir demuestras en el laboratorio: sistemas de valoración in vitro y análisis químicos. Los primerosen sus distintas variantes presentan buenas asociaciones con los valores obtenidos a partirde ensayos in vivo. Las determinaciones químicas del laboratorio son empleadas parapredecir la digestibilidad de los alimentos en base a relaciones empíricas descritas porecuaciones que suelen basarse en las asociaciones negativas de la digestibilidad con elcontenido de la fibra de los alimentos. Las ecuaciones son específicas para cada tipo dealimento y su exactitud es función de la de los análisis de los laboratorios y de losexperimentos in vivo sobre los cuales fueron ajustadas.La aplicación de estas ecuaciones presenta varias limitaciones que deben ser tenidasen cuenta:• Aún cuando se trate de alimentos similares, su aplicación no deja de ser unaextrapolación respecto a los datos originales sobre los cuales se ajustaron.• En las mayoría de los casos no hay evidencia de valoraciones independientesde las mismas.• En su gran mayoría se trata de ecuaciones obtenidas por institucionesextranjeras en condiciones no necesariamente comparables.• No siempre está específicamente establecido en que forma se obtuvieron losdatos analíticos para su calibración (e.g. FDN o FDN MO ) o bajo que condicionesde manejo se efectuaron los experimentos de calibración in vivo.• No es sencillo realizar constataciones respecto a valores de referenciapublicados (e.g. Tablas del NRC) dado que éstos tampoco está claramenteexplicado como fueron obtenidos.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresNo obstante lo anterior la falta de normalización respecto al uso de éstas formulas hallevado a que distintos laboratorios suelan emplear fórmulas diferentes para predecir el valorenergético de alimentos similares llevando en consecuencia a introducir una fuente de erroradicional y espuria.Con el objeto de evitar esta fuente de error es que en este documento se proponenuna serie de ecuaciones que fueron seleccionadas en base al consenso de los participantesdel PROMEFA. Es deseable que en el futuro cercano se cuenten con validacionesexperimentales de las mismas o desarrollo de ecuaciones específicas para nuestrascondiciones.Ecuaciones de predicción para las distintas clases de alimentosLos alimentos se clasifican en base a su composición (fundamentalmente por sucontenido de fibra y proteína) y uso en la formulación de dietas (Jaurena and Danelón, 2001).Como en cualquier clasificación, las “clases” pueden resultar arbitrarias y en ciertos casos unalimento es asignado a una clase de acuerdo a su uso en la práctica corriente.En las secciones que siguen se presentan las definiciones de las categorías dealimentos que aportan energía junto con las ecuaciones propuestas para estimar el contenidode EM (Mcal/kg MS) de los alimentos.Para las conversiones de las unidades de energía se emplearon los siguientessupuestos:DMS = TNDED = DMS × 4.4 Mcal/kg MSDEM = ED × 0.82EM = 3.6 × TND o DMSDonde%FDA:%FDN:%LDA:%TND:DMS:ED:EM:MS:MSD:fibra insoluble en detergente ácido expresada en g/100 g MSfibra insoluble en detergente neutro expresada en g/100 g MSlignina detergente ácido expresada en g/100 g MStotal de nutrientes digestibles expresada en g/100 g TNDDigestibilidad de la materia seca (kg/kg MS)Energía digestible (Mcal/kg MS)Energía metabolizable (Mcal/kg MS)Materia secaMateria seca digestible.Clase I - Forrajes secos y alimentos groserosTodos los forrajes y materiales groseros cortados y secados, así como otros productoscon más de 18% de fibra cruda o más de 35% de pared celular (FDN, sobre base seca). Engeneral, son alimentos con baja concentración energética. Ejemplo de forrajes secos: heno,paja, rastrojos. Ejemplo de alimentos groseros: cáscaras, vainas.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresDe uso generalEcuación Ia (Sumativa de Van Soest, (Goering and Van Soest, 1970)EM (Mcal/kg MS) = 3.6 / 100 × {(100 - %FDN) × 0.98 + %FDN ×Gramíneas y leguminosasEcuación Ib (Rohweder, et al.))× (1.473 – 0.789 Log 10 [LDA/FDA×100]) – 12.9}EM (Mcal/kg MS) = 3.20 – 0.028 x %FDALeguminosasEcuación Ic (McLeod and Minson, 1976)EM (Mcal/kg MS) = 3.6 × [92.3 – 0.91 × %FDA]Clase II - Pasturas y forrajes frescosAgrupa a todos los alimentos forrajeros consumidos en forma directa (pasturas yverdeos) o cortados y suministrados en fresco.Se sugieren las mismas ecuaciones que las presentadas para la Clase I.Clase III - SilajesEsta clase agrupa a los forrajes ensilados: maíz, sorgo, alfalfa, praderas, etc.,excluyendo a los silajes de pescado, vísceras, granos o raíces.Silaje de planta entera de maízEcuación IIIa (Schmidt, et al., 1976)EM (Mcal/kg MS) = 3.16 – (0.025 × %FDAClase IV - Alimentos energéticosAlimentos con menos de 20% de proteína bruta (PB) y 18% de fibra cruda (FC) o 35%de FDN (sobre MS); por ejemplo granos, subproductos de molienda, frutas y tubérculos, aúncuando estos productos se encuentren ensilados.Grano de maíz enteroEcuación IVa (Pennsylvania State)EM (Mcal/kg MS) = 3.32 – 0.055 × %FDAConcentradosEcuación IVb (Menke and Steingass, 1988)EM (Mcal/Kg MS) = 3,50 - 0,035 × %FDA

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresMezcla de granosEcuación IVc (New York State Pred. Eq.; Hach, 1987))EM (Mcal/Kg MS) = 3.6 × [81.41 – 0.48 × %FDA]ReferenciasGoering, H. K. and P. J. Van Soest. 1970. Forage Fiber Analysis. 379. USDA, ARS.Hach. 1987. Feed analysis manual. Hach Co.,Ames, Iowa., Ames, Iowa (USA).Jaurena, G. and J. L. Danelón. 2001. Tabla de composicion de alimentos para rumiantes de laregion pampeana Argentina. Hemisferio Sur, Buenos Aires.McLeod, M. N. and D. J. Minson. 1976. The analystical and biological accuracyof estimatingthe dry mater digestibility of different legume species. Animal Feed Sci. and Technol.1:61-72.Menke, K. H. and H. Steingass. 1988. Estimation of the energetic feed value obtained fromchemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid. Anim. ßes. Dev.28:209-221.Rohweder, Barnes, and H. Jorgensen. Journal of Anim. Sci. 68:403-.Schmidt, A. R., R. D. Goodrich, R. M. Jordon, G. C. Marten, and J. C. M. . 1976. Relationshipsamong agronomic characteristics of corn and sorghum cultivars and silage quality.Agronomy Journal. 68:403-406.

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos AiresProcesamiento estadístico de los resultados analíticos – v2PrincipiosLos resultados analíticos no deberán sufrir selección alguna y se reportarán sobre baseseca total (Prtcl MS 105 01). Sin embargo cabe considerar algunas situaciones excepcionalespor las cuales puede ser necesario reemplazar un resultado:• Medición perdida (resultado extraviado), se deberá repetir la determinacióninmediatamente para reemplazar el resultado• Razón a priori debidamente fundamentada (e.g. pérdida de material durante elprocedimiento, falla fehaciente del equipo)• En el caso de resultados sospechosos de “outliers” se aplicará el test de Dixon(Q test; α = 0.01).Ámbito de apicación del Test de DixonEl test de Dixon (Dixon, 1951) permite aplicar un criterio de discriminación de datos“outliers” a nivel del operador del laboratorio, previo al envío de los resultados al coordinadordel programa interlaboratorio.Este test se deberá aplicar una sola vez por conjunto de repeticiones para una mismadeterminación (e.g. aFDN) y sólo se permite reemplazar un dato (“outlier” confirmado) porconjunto de repeticiones. En el caso de rechazar el resultado, la muestra será analizadanuevamente por la misma característica y se reportarán ambos valores (el “outlier” en el lugarconsignado en la planilla para tal fin).Procedimiento1. Calcular el parámetro q, i.e. (para n < 7):q = (D – N)/RDondeD: valor sospechoso,N: valor mas cercano al valor sospechoso,R: rango total2. Comparar el valor q contra el Q tabulado (α = 0.01; Tabla 1)Tabla 1. Valores para aplicar el test de Dixon (Q) para outliersNr. de repeticiones Valor Q para α = 0.013 0.9944 0.9265 0.8213. Regla de decisión, el valor sospechoso será descartado si supera el Q tabulado (α =0.01 para el número de repeticiones especificado).

PROMEFAGenerated by Foxit PDF Creator © Foxit Softwarehttp://www.foxitsoftware.com For evaluation only.Programa para el Mejoramiento de la Evaluación de Forrajes y AlimentosCentro de Investigación y Servicios en Nutrición Animal (CISNA)Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires4. Inmediatamente luego de tomada la decisión de descartar un dato, se deberá procedera reemplazar el dato por uno nuevo.Ejemplo6. Resultados analíticosRepeticiones analíticasResultado (g/kg MS)r1 560 Valor mínimor2 580r3 570r4 610 Valor máximo7. Cálculo de qEl resultado sospechoso es r4, por lo tantoD = 610N = 580R = 610 – 560 = 50q = (610 – 580)/ 50 = 30/50 = 0.60q < Q n=4; 1% no se rechaza el valor bajo sospecha (D)Téngase en cuenta que para fallar éste test el valor D debería ser superior a 626.3.ReferenciasDixon, W. J. 1951. Ratios involving extreme values. J. Ann. Math. Stat. 22(1):68-78.