Alfa 1 microglobulina - Medcorp

N Antisera gegen Humanα1 -MikroglobulinAnwendungsbereichIn-vitro-Diagnosticum zur quantitativen Bestimmung von α 1 -Mikroglobulin im Urin mit denBN* Systemen.Diagnostische BedeutungDie klinische Relevanz der α 1 -Mikroglobulin-Bestimmung liegt in der Identifikation tubulärerProteinurien (1 - 4). α 1 -Mikroglobulin, auch als Protein HC bezeichnet (3), ist ein niedermolekularesGlykoprotein (Molekulargewicht ca. 33 000), dessen im Blut frei vorliegenderAnteil glomerulär quantitativ filtriert wird. Reabsorption und Katabolismus erfolgenanalog zu anderen glomerulär filtrierten Plasmaproteinen im proximalen Tubulus.Durch den Nachweis erhöhter Konzentrationen von niedermolekularen Proteinen imUrin, wie z. B. α 1 -Mikroglobulin, kann auf tubuläre Schädigungen geschlossen werden,wie sie im Rahmen von Nephritiden, fortgeschrittener diabetischer Nephropathie, nachSchwermetallexposition oder nach Gabe nephrotoxischer Medikamente auftreten können.Der Nachweis erhöhter Konzentrationen von α 1 -Mikroglobulin im Urin bei Harnwegsinfektionenweist auf eine Nierenbeteiligung hin.Prinzip der MethodeDie im menschlichen Urin enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischen Reaktionmit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreutwird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligenProteins in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standardbekannter Konzentration.ReagenzienInhalt der HandelspackungN α 1 -Mikroglobulin Kit, Bestell-Nr. OWLAN Antiserum gegen Human-α 1 -Mikroglobulin undN Zusatzreagenz Aje 1 Flasche mit 2 mlZusammensetzungDas N Antiserum ist ein flüssiges, tierisches Serum und wird durch Immunisierung von Kaninchenmit hochgereinigtem humanem α 1 -Mikroglobulin hergestellt. Durch ein besonderesStabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus dem Antiserum entfernt. MikrobielleVerunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittelweitgehend ausgeschlossen. Das mittels Festphasenimmunadsorptiongereinigte, spezifische Antiserum wird nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eineoptimale Eignung für die Verwendung in den BN* Systemen gewährleistet ist. Der Antikörper-Titer(T) wird in der radialen Immundiffusion ermittelt und ist auf dem Flaschenetikettausgedruckt. Er gibt an, wieviel mg des Antigens von 1 ml des Antiserums in einem Agarosegelpräzipitiert werden. N Zusatzreagenz A besteht aus Detergenzien in gepufferter Lösung.Konservierungsmittel: 5-Chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (ca. 6 mg/l)2-Methyl-4-isothiazolin-3-on (ca. 2 mg/l)Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten:Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kannmit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.Vorbereitung der ReagenzienDas N Antiserum und das N Zusatzreagenz A sind gebrauchsfertig und können ohneweitere Vorbehandlung eingesetzt werden.Haltbarkeit und LagerungsbedingungenLagerungsdauer bei +2 bis +8 °C:die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben;Stabilität nach Öffnen:4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 °Cgelagert und eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird;N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durchmikrobielle Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beeinträchtigen.In solchen Fällen sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eignensich Einwegfilter mit einem Porendurchmesser von 0,45 µm.Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden.Stabilität auf den BN* Systemen:5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden);BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II EvaporationStoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen;BN ProSpec ® System: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen.Zusätzlich benötigte MaterialienBN* SystemN Protein-Standard UY (human), Bestell-Nr. OQLVN/T Protein-Kontrolle LC, Bestell-Nr. OQLWN Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMSN Diluens, Bestell-Nr. OUMTBN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLEVerbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systemebeschrieben.UntersuchungsmaterialZur Messung werden möglichst frische (max. 8 Tage bei +2 bis +8 °C aufbewahrte) Urinprobeneingesetzt. Für die Bestimmung eignen sich Spontan- und Sammelurine. Urinprobendürfen nicht tiefgefroren werden. Jede Urinprobe ist vor der Analyse zu zentrifugieren(10 min bei ca. 15 000 x g).TestdurchführungHinweise1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitungzu entnehmen.2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendetwerden.3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN* A/BN*100 System Raumtemperatur(+15 bis +25 °C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec ® System können auch bei +2bis +8 °C gelagerte Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden.Assay-Protokolle an den BN* SystemenDie Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligenGerätes enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt.Erstellung der ReferenzkurveReferenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellungwerden automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard UY mit N Diluenshergestellt.Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B.N/T Protein-Kontrolle LC, innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefundenwerden. Bei Verwendung einer anderen Antiserum-Charge muß eine neue Referenzkurveaufgenommen werden.Messung der PatientenprobenProben werden unverdünnt gemessen. Bei Meßwerten, die außerhalb des Meßbereichsliegen, kann die Messung aus einer höheren Probenverdünnung wiederholt werden.Wiederholungsmessungen aus weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungender BN* Systeme beschrieben.Interne QualitätskontrolleDie N/T Protein-Kontrolle LC sollten nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nacherstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Proben eingesetztwerden. Die Kontrollen werden im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenprobebehandelt. Die Sollwerte und Vertrauensbereiche sind der Tabelle der Sollwerte derentsprechenden Kontrolle zu entnehmen.Berechnung der AnalysenergebnisseDie Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion.Einschränkungen der TestdurchführungTrübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmung stören. Deshalb solltenalle Urinproben vor der Bestimmung zentrifugiert werden.Bei pH-Werten unter 6 kann es bei mehrtägiger Aufbewahrung der Urinproben in Einzelfällenzu einer Abnahme der meßbaren α 1 -Mikroglobulin-Konzentration kommen (5).Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellungbzw. gealterter Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendetenBestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertungdieser Ergebnisse an methodenspezifischen Zielwerten vorzunehmen.Erwartete WerteDie Konzentration von α 1 -Mikroglobulin im zweiten Morgenurin gesunder Erwachsenerliegt unter 12 mg/l (6). Die Ermittlung der Referenzbereichs-Obergrenze erfolgte an 115Urinproben. Für andere Arten von Urinproben (erster Morgenurin, 24-Std.-Sammelurin)gelten eigene Referenzbereiche.Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diesevielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden seinkönnen.Leistungsmerkmale der TesteEmpfindlichkeit und MeßbereichDie Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurvefestgelegt und hängt damit von der Konzentration des Proteins im N Protein-Standard UYab. Ein ‚High-Dose-Hook-Effekt‘ tritt bis zu α 1 -Mikroglobulin-Konzentrationen von 600mg/l nicht auf. Typische Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systemeangegeben.SpezifitätDas Antiserum ist spezifisch für das jeweilige Protein.PräzisionMit dem N Antiserum gegen Human-α 1 -Mikroglobulin wurden am BN* System folgendeVariationskoeffizienten (VK) ermittelt (6):Intra-AssayInter-Assay(n = 21) (n = 10)Protein Mittelwert VK Mittelwert VK[mg/l] [%] [mg/l] [%]α 1 -Mikroglobulin 7,7 5,2 6,8 13,241,8 2,9 42,0 7,4MethodenvergleichEs wurden 52 Urinproben mit dem N Antiserum gegen Human-α 1 -Mikroglobulin am BN*System (y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (LC-Partigen**) bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse lieferte folgende Daten:Protein lineare Regression Korrelationskoeffizientα 1 -Mikroglobulin y (BN*) = 1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996AnmerkungDie angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnissedar und sind nicht als Spezifikation für das N Antiserum gegen Human-α 1 -Mikroglobulinanzusehen.LiteraturSiehe Seite 1.BN ProSpec ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH inden USA, Deutschland und anderen Ländern.* BN ist ein Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA.** Partigen ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH inDeutschland und anderen Ländern.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOWLA G11 E0540 (421) H 2 Ausgabe Juni 2001

N Antisérums anti -α 1-Microglobuline humainsDomaine d'utilisationRéactif pour le dosage de l’α 1 -microglobuline dans l’urine à l'aide des systèmes BN*.Intérêt diagnostiqueL’importance clinique du dosage de l’α 1 -microglobuline réside dans l’identification desprotéinuries tubulaires (1 - 4). L’α 1 -microglobuline, appelée aussi protéine HC (3), est uneglycoprotéine de faible poids moléculaire (env. 33 000), dont la fraction qui se trouve àl’état libre dans le sang est filtrée quantitativement par les glomérules. Sa réabsorption etson catabolisme sont analogues à ceux des autres protéines plasmatiques dont la filtrationglomérulaire se situe au niveau du tube proximal. La mise en évidence de concentrationsaugmentées de protéines de faible poids moléculaire dans l’urine, comme par ex.l’α 1 -microglobuline, permet de conclure à des lésions tubulaires, telles celles rencontréesdans le cadre de néphrites, dans les néphropathies diabétiques avancées, après uneexposition à un métal lourd, ou encore après administration de médicaments néphrotoxiques.La mise en évidence d’une augmentation de la concentration urinaire d’α 1 -microglobulineen cas d’infection des voies urinaires indique une participation rénale.Principe de la méthodeLes protéines contenues dans l’urine humaine forment, dans le cadre d’une réactionimmunochimique avec des anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent lalumière projetée. L’intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration dansl’échantillon de la protéine recherchée. L’exploitation se fait par rapport à un standard deconcentration connue.RéactifsConditionnement :N α 1 -Microglobuline kit, code OWLAN Antisérum anti-α 1 -Microglobuline humaine etN Réactif complémentaire A1 flacon de 2 ml de chaque réactifCompositionLe N Antisérum est un sérum liquide, d’origine animale, obtenu par immunisation delapins avec de l’α 1 -microglobuline humaine hautement purifiée. Un procédé spécial destabilisation permet d’éliminer les éléments labiles de l’antisérum. Une filtration etl’addition d’azide de sodium (< 1 g/l) comme agent de conservation excluent pratiquementtoute contamination microbienne. L’antisérum spécifique est purifié par immunoadsorptionen phase solide, puis contrôlé et préparé de façon à garantir une utilisationoptimale sur les systèmes BN*.Le titre en anticorps (T) est déterminé par immunodiffusion radiale et indiqué surl’étiquette du flacon. Il indique combien de mg d’antigène sont précipités en gel d’agarosepar 1 ml d’antisérum. Le N Réactif complémentaire A est composé de détergents ensolution tampon.Le N Réactif complémentaire A est composé de détergents en solution tampon.Agents de conservation : 5-chloro-2-méthyl-4-isothiazol-3-one (env. 6 mg/l)2-méthyl-4-isothiazol-3-one (env. 2 mg/l)Avertissements et mesures de précaution1. A n'utiliser que pour un usage in vitro.2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :Ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses ! L'azide de sodiumpeut devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb.Préparation des réactifsLe N Antisérum et le N Réactif complémentaire A sont prêts à l'emploi et peuvent êtreutilisés sans aucun prétraitement.Stabilités et conditions de conservationConservation à +2/+8°C :La date de péremption est indiquée sur l’étiquette.Stabilité après ouverture :4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de lesreplacer à +2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérumspeuvent devenir troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquentpas une contamination microbienne et qui n’influencent en aucune façon leur activité.Dans ces cas-là, les filtrer à l’aide d’un filtre à usage unique à pores de 0,45 µm dediamètre.Ne pas les congeler.Stabilité sur les systèmes BN* :5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures).BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabilitédes réactifs ; se reporter au manuel d’utilisation du système.BN ProSpec ® : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation du système.Autres réactifs et matériel nécessairesSystème BN*N Standard Protéines UY (humain), code OQLVN/T Contrôle Protéines LC (humain), code OQLWN Tampon de réaction, code OUMSN Diluant, code OUMTBouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d’utilisationdes systèmes BN*.Echantillons à testerUtiliser de préférence des échantillons urinaires frais (conservés 8 jours maximum à +2/+8°C). Il peut s’agir d’urine spontanée ou d’urines des 24 heures. Ne pas congeler les échantillonsurinaires. Centrifuger chaque échantillon avant leur analyse (10 min à env. 15 000 g).Réalisation du testRemarques :1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manueld’utilisation de l’appareil.2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25°C) avant leur analysesur le système BN* A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec ® , ilspeuvent être testés directement à +2/+8°C.Protocoles du test sur les systèmes BN* :Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et la dernière version du logicielde chaque appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système.Etablissement de la courbe d’étalonnage :La courbe d'étalonnage est effectuée selon un étalonnage en plusieurs points. La sériede dilutions du N Standard protéines UY est établie automatiquement avec le N Diluant.Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, parex. le N/T Contrôle Protéines LC, a été trouvés à l'intérieur de leur domaine de confiance.Refaire une nouvelle courbe d’étalonnage à chaque changement de lot de l’antisérum.Mesure des échantillons de patientsTester les échantillons non dilués. Si des valeurs sortent du domaine de mesure, leséchantillons peuvent être retestés dilués. Le protocole pour retester les échantillonsdilués est décrit dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.Contrôle de qualité interneTester le N/T Contrôle Protéines LC à chaque changement de courbe d’étalonnage ou deflacon d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons. Traiter le contrôlecomme un échantillon de patient, aussi bien dans le test que pour l’exploitation des résultats.La valeur théorique ainsi que le domaine de confiance du contrôle sont indiquésdans le tableau des valeurs théoriques.Calcul des résultats d'analyseL'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.Limites du testLes échantillons urinaires troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test.Dans ce cas, les centrifuger avant le test.Dans certains cas où les échantillons urinaires ont un pH inférieur à 6 et qu’ils sont conservésplusieurs jours, on peut observer une diminution de la concentration d’α 1 -microglobuline(5).Les échantillons testés dans le cadre d'un contrôle national ou d'une étude multicentriquepeuvent donner des résultats différents selon la méthode de dosage utilisée. Il peut doncêtre nécessaire de procéder à l'exploitation des résultats selon les valeurs-cibles spécifiquesà la méthode utilisée.Valeurs normalesLa concentration en α 1 -microglobuline de la deuxième urine du matin chez les adultessains est inférieure à 12 mg/l (6), valeur obtenue sur 115 échantillons urinaires. Pour lesautres types d’échantillons urinaires (première urine du matin, urines des 24 heures), iln’existe pas de valeurs de référence.D’une façon générale, il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeursde référence, dans la mesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreuxfacteurs d’influence qui peuvent varier selon le collectif étudié.Caractéristiques des testsDomaine de mesure et sensibilitéLa sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage,et dépend donc de la concentration de la protéine dans le N Standard Protéines UY. Il n’ya pas de ”high-dose-hook-effect” jusqu’à une concentration d’α 1 -microglobuline de 600mg/l. Des domaines de mesure types sur les systèmes BN* sont indiqués dans le manueld’utilisation de chaque appareil.SpécificitéLes N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée.PrécisionLe N Antisérum anti-α 1 -Microglobuline a donné les coefficients de variation (CV) suivantssur le système BN* (6) :intra-essaiinter-essais(n = 21) n = 10)protéine valeur moyenne CV valeur moyenne CV[mg/l] [%] [mg/l] [%]α 1 -microglobuline 7,7 5,2 6,8 13,241,8 2,9 42,0 7,4Comparaison avec une autre méthode52 échantillons urinaires ont été testés en parallèle, d’une part sur le système BN* avec leN Antisérum anti- α 1 -Microglobuline humaine (y), et d’autre part selon une méthoded’immunodiffusion radiale (LC-Partigen**) (x). La corrélation des résultats a donné lesvaleurs suivantes :protéine régression linéaire coefficient decorrélationα 1 -microglobuline y (BN*) = 1,08 x (IDR) - 2,36 mg/l 0,996Remarque :Les valeurs indiquées comme caractéristiques du test représentent des résultats types,et ne doivent pas être considérées comme des spécifications du N Antisérum anti-α 1 -Microglobuline humaine.LittératureVoir page 1.BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, enAllemagne et dans d’autres pays.* BN est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis.** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne etdans d’autres pays.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOWLA G11 E0540 (421) H 3Edition Juin 2001

N Antisueros contraα 1-Microglobulina humanaCampos de aplicaciónReactivos de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de α 1 -microglobulinaen orina usando los sistemas BN*.Significado diagnósticoLa relevancia clínica de la determinación de α 1 -microglobulina está en que permite identificaruna proteinuria tubular (1 - 4). La α 1 -microglobulina, también conocida como proteína HC (3),es una glicoproteína de bajo peso molecular (peso molecular aprox. 33 000), cuya parteglomerular se encuentra libre en la sangre y se puede filtrar cuantitativamente. Su reabsorcióny su catabolisno ocurren al igual que en las otras proteínas plasmáticas que atraviezanel filtro glomerular en los tubulus proximales. Mediante el reconocimiento de concentracioneselevadas de proteínas de bajo peso molecular en orina, como por ej. α 1 -microglobulina,se puede definir un daño tubular, como los que aparecen en nefritis, nefropatía diabéticaavanzada, después de exposición a metales pesados o después de la toma de medicamentosnefrotóxicos. El hallazgo de una elevada concentración de α 1 -microglobulina en orina, enel caso de infecciones de las vías urinarias, indica una participación de los riñones.Principio del métodoLa proteína contenida en la orina humana forma en una reacción inmunoquímica conanticuerpos específicos inmunocomplejos, los cuales pueden dispersar un rayo de luzincidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la correspondienteproteína en la muestra. La valoración se hace por comparación con un estándarde concentración conocida.ReactivosContenido del envase comercial:N α 1 -Microglobulina Kit, N° de pedido OWLAN Antisuero contra α 1 -microglobulina humana yN Reactivo adicional A1 frasco de 2 ml para cada unoComposiciónEl N antisuero es un suero animal, líquido, producido mediante inmunización de conejos conα 1 - microglobulina humana de alta pureza. Los componentes lábiles del antisuero se van aretirar mediante un proceso especial de estabilización. La impurezas microbiológicas se excluyen,en general, por filtración y adición de azida de sodio (< 1 g/l) como medio de conservación.El antisuero específico, purificado por medio de inmunoabsorción de fase sólida,después de ser sometido a pruebas especiales, se ajusta de tal forma que se garantice unacapacidad óptima al usarse en los sistemas BN*. El título del anticuerpo (T) se determina porinmunodifusión radial y viene impreso en la etiqueta del frasco. Este valor indica, cuantos mgde antígeno van a ser precipitados en un gel de agarosa, por 1 ml de antisuero. El N Reactivoadicional A está compuesto por detergentes en una solución tampón.N reacivo adicional A está formado por detergentes en una solución amortiguadora.Medio de conservación: 5-cloro-2-metil-4-isotiazol-3-on (aprox. 6 mg/l)2-metil-4-isotiazol-3-on (aprox. 2 mg/l)Advertencias y medidas de seguridad1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse lasiguiente regla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódicapuede formar azidas explosivas con metales como cobre y plomo.Preparación de reactivosEl N antisuero y el N reactivo adicional A vienen listo para ser utilizados y pueden aplicarsesin ningún otro tratamiento preliminar.Estabilidad y almacenajeTiempo de conservación entre +2 y +8°C:La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta;Estabilidad después de abierto:4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y+8°C, perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos);Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez queno son ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera algunaen su actividad.En estos casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados. Paraesto son apropiados filtros desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No estápermitida su congelación.Estabilidad en los sistemas BN*:5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas);En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapónprotector de la evaporación (N° de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operacionesdel aparato.La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec ® se debe tomar del manual deoperaciones.Materiales adicionales necesariosSistema BN*N Proteína-estándar UY (humana), N° de pedido OQLVN/T Proteína-control LC (humana), N° de pedido OQLWN tampón para reacción, N° de pedido OUMSN diluyente, N° de pedido OUMTTampón protector de evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLEOtros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivosde los sistemas BN*.Material a investigarPara las medidas se deben usar en lo posible muestra de orina fresca (almacenadasmáximo 8 días entre +2 y +8°C). Para la determinación se pueden usar orina espontáneay retenida. Las muestras de orina no se deben congelar. Cada muestra de orina se debecentrifugar antes del análisis (10 min. aprox. 15 000 x g)ProcedimientoAdvertencias:1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientesmanuales de operación.2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento.3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15y +25°C) antes de ser medidos en los sistemas BN* A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BNProSpec ® los reactivos y las muestras almacenados entre +2 y +8°C se pueden utilizar directamentepara la determinación.Protocolos del test en los sistemas BN*Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones,así como en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadasautomáticamente por el sistema.Preparación de la curva de referenciaLas curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboraciónse preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estandarUY con el N diluyente.Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempreque al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej. los N/T proteína-controleLC sus valores se encuentren dentro de los rangos de confianza correspondientes. Alutilizar un nuevo lote de antisueros se deben preparar nuevas curvas de referencia.Medida de las muestras de pacientesLas muestras se miden sin diluir. Para valores que se encuentren por fuera del rango demedida, se puede repetir la medida a una dilución mayor de la muestra. La repetición delas medidas a otras diluciones de las muestras viene descrita en el manual de operacionesdel sistema BN*.Control de calidad internoLos N/T proteína-controles LC se deben utilizar después de cada elaboración de unacurva de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así comotambién, con cada serie de muestras. Los controles deben manejarse en el test y en laevaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianzase deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control.Cálculo de los resultados del análisisLa valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit.Limitaciones del ProcedimientoLa presencia en la muestras de turbidez o de partículas puede alterar la determinación.Por esta razón, las muestras de orina se deben centrifugar antes de la determinación.Para muestras de orina guardadas durante varios días, con valores de pH menores de 6,se puede presentar en algunos casos una disminución de la concentración medida deα 1 - microglobulina (5).Para las muestras control y para las muestras empleadas en estudios en diferentes centros,debido a la técnica de fabricación o al envejecimiento de las muestras, se obtienenresultados diferentes dependiendo del método de determinación utilizado. Por esta razón,puede ser necesario efectuar la valoración de estos resultados en relación con losvalores objetivo del método correspondiente.Valores esperadosLa concentración de α 1 - microglobulina en la segunda orina del día, de adultos sanosestá por debajo de 12 mg/l (6). La determinación del límite superior del rango de referenciase efectuó con 115 muestras de orina. Para otros tipos de muestras de orina (primeraorina del día, orina recolectada durante 24 horas) son válidos sus propios rangos dereferencia.Por esta razón, cada laboratorio debe determinar sus propios rangos de referencia, yaque estos se encuentran influenciados por muchos factores, que pueden ser diferentespara cada colectividad estudiada.Características del testSensibilidad y rango de medidaLa sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva dereferencia y depende por eso, de la concentración de proteína en el N Proteína- estándarUY. Un „High-Dose-Hook-Effekt“ no aparece hasta concentraciones de α 1 - microglobulinade 600 mg/l. Los rangos típicos de medida vienen dados en el manual de operacionesde los sistemas BN*.EspecificidadLos N antisueros son específicos para la respectiva proteína.PrecisiónLos siguientes coeficientes de variación (CV) fueron obtenidos con el N Antisuero contraα 1 -microglobulina en el sistema BN* (6):Intra-assayInter-assay(n=21)(n=10)Proteína promedio CV promedio CV[mg/l] [%] [mg/l] [%]α 1 -microglobulina 7,7 5,2 6,8 13,241,8 2,9 42,0 7,4Comparación de métodosSe midieron 52 muestras de orina con el N Antisuero contra α 1 - Microglobulina humanaen el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x)(LC-Partigen**). La correlación de los resultados dio los siguientes datos:Proteína Regreción lineal Coeficiente decorrelaciónα 1 -microglobulina y(BN*)=1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996Nota:Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se debentomar como especificaciones para el N antisuero contra α 1 - Microglobulina humana.BibliografíaVer página 1.BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA, Alemaniay en otros países.* BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y enotros países.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgOWLA G11 E0540 (421) H 5Edición Junio 2001

N Anti-soro contraα 1-microglobulina humanaCampos de aplicaçãoReagentes de diagnóstico in vitro para determinação quantitativa de α 1 -microglobulinahumana na urina com os sistemas BN*.Significado diagnósticoA relevância clínica da determinação quantitativa da α 1 -microglobulina humana reside naidentificação das proteinúrias tubulares (1 - 4). A α 1 -microglobulina, também chamadaproteína HC (3), é uma glucoproteína de baixo peso molecular (aprox. 33 000), de que afracção que se acha em estado livre no sangue é filtrada quantitativamente pelos glomérulos.A sua reabsorção e catabolismo processam-se, analogamente aos das outrasproteínas plasmáticas filtradas pelos glomérulos, no túbulo proximal. A prova de concentraçõesaumentadas de proteínas de fraco peso molecular na urina, como por ex. a α 1 -microglobulina, pode ser indicativa de lesão tubular, como é frequentemente o caso nasnefrites, nefropatias diabéticas avançadas, após exposição a um metal pesado ou aindaapós administração de medicamentos nefrotóxicos. Concentrações aumentadas de α 1 -microglobulina na urina em infecções das vias urinárias indiciam um envolvimento renal.Princípio do métodoAs proteínas contidas na urina humana formam imunocomplexos, numa reacção imunoquímicacom anticorpos específicos, que dispersam a luz incidente. A intensidade daluz difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação fazsecomparando com um padrão conhecido da concentração.ReagentesConteúdo da embalagemN α 1 -microglobulina Kit, código OWLAN Anti-soro contra α 1 -microglobulina humana eN Reagente complementar A1 frasco de 2 ml de cadaComposiçãoO N Antisoro é um soro líquido de origem animal obtido por imunização de coelhos comα 1 –microglobulina humana altamente purificada. Os componentes instáveis são eliminadosdo antisoro através de um processo especial. As impurezas microbianas são praticamenteexcluídas por meio de filtração e adição de azida de sódio (< 1 g/l) na qualidadede conservante. O antisoro específico, purificado por intermédio de imunoadsorçãona fase sólida, após um controlo especial, é calibrado de forma a garantir uma utilizaçãoóptima nos sistemas BN*. O título de anticorpos (T) é determinado por imunodifusãoradial e está impresso no rótulo do frasco. Ele indica quantos mg de antígeno são precipitadosem gel de agarose por 1 ml do antisoro. N Reagente complementar A consiste dedetergentes em solução tampão.Conservantes:5-cloro-2-metil-isotiazolina-3-on (aprox. 6 mg/l)2-metil-4-isotiazolina-3-on (aprox. 2 mg/l)Advertências e medidas de precaução1. Só para uso diagnóstico in vitro.2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor deazida sódica:Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas! Com metais pesados, comocobre ou chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas.Preparação dos reagentesO N Anti-soro e o N Reagente complementar A estão prontos para o uso e podem serutilizados sem qualquer tratamento prévio.Estabilidade e conservaçãoConservação entre +2 e +8 °C:A estabilidade está indicada no rótulo;Estabilidade depois de aberto:4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechadose conservados entre +2 bis +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através demicroorganismos);Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvaçõesque não são provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhummodo, a actividade. Nesses casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de seremusados. Para esse efeito, são adequados os filtros descartáveis com um diâmetro deporos de 0,45 µm. Não congelar.Estabilidade nos sistemas BN*:5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas);Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* IIEvaporation Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço;Sistema BN ProSpec ® : a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções deserviço.Materiais necessários mas não fornecidosSistemas BN*N Proteína Standard UY (humano), código OQLVN/T Controlo de proteína LC (humano), código OQLWN Tampão de reacção, código OUMSN Diluente, código OUMTBN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLEMaterial de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dossistemas BN*.AmostrasPara a medição são utilizadas amostras de urina tão frescas quanto possíveis (tempo máx. deconservação: 8 dias, entre +2 e +8 °C). Para a determinação são apropriadas urinas frescasespontâneas ou urinas acumuladas. As amostras de urina não podem ser congeladas. É necessáriocentrifugar cada amostra de urina antes da análise (10 min a aprox. 15 000 x g).ProcedimentoNotas:1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruçõesde serviço respectivas.2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada.3. Antes da medição no sistema BN* A/BN* 100, é necessário que os reagentes e asamostras tenham atingido a temperatura ambiente (+15 a +25°C). Os reagentes e asamostras armazenadas entre +2 bis +8 °C podem ser utilizadas directamente no sistemaBN* II/BN ProSpec ® para a determinação.Protocolos de ensaio nos sistemas BN*Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software doaparelho respectivo. Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.OWLA G11 E0540 (421) H 6 Edição Junho 2001Definição da curva de referência:As curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. As séries dediluição do N Proteína Standard UY com o N Diluente são efectuadas automaticamente.As curvas de referências permanecem válidas enquanto os controlos de exactidão, p. ex.N/T Controlos de proteína LC, se encontrarem compreendidos nos respectivos escalõesde confiança. Utilizando-se outro lote de anti-soro, é necessário definir uma nova curva.Medição das amostras de paciente:As amostras são medidas sem serem diluídas. Se os valores medidos se situarem forado escalão de medição, esta pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra maior.As repetições das medições a partir de outra diluição da amostra estão descritas nosmanuais de utilização dos sistemas BN*.Controlo interno de qualidadeOs N/T Controlos de proteína LC deverão ser utilizados após a preparação de uma curvade referência, após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série deamostras. Na preparação e na avaliação do teste, os controlos são tratados comoamostras de paciente. Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão ser retiradosda tabela de valores teóricos do controlo respectivo.Cálculo dos resultadosO resultado é calculado automaticamente mediante uma função logit-log.Limitações do procedimentoA turbidez e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, énecessário centrifugar todas as amostras de urina antes da determinação. Se os valorespH são inferiores a 6 e as amostras são conservadas durante vários dias, pode ocorrerem alguns casos uma redução da concentração mensurável de α 1 -microglobulina (5).Em amostras de controlo ou de ensaios interlaboratoriais pode acontecer obterem-seresultados divergentes, conforme o método de análise utilizado, em virtude da elaboraçãotécnica ou da idade das amostras. Pode ser, por isso, necessário proceder auma avaliação destes resultados em função dos valores específicos do método utilizado.Valores esperadosA concentração de α 1 -microglobulina na segunda urina da manhã de adultos sãos éinferior a 12 mg/l (6). A determinação da curva superior do escalão de referência foi feitacom base em 115 amostras de urina. Para os outros tipos de amostras de urina (primeiraurina da manhã, urina acumulada em 24 horas) aplicam-se escalões de referênciapróprios. Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referênciapróprios, já que estes estão sujeitos a influências múltiplas, que podem ser diferentespara cada população analisada.Características do testeSensibilidade e âmbito de mediçãoA sensibilidade da determinação é definida pelo limite inferior da curva de referência edepende, assim, da concentração de proteína no N Standard de proteína UY. O efeitode ‚High-Dose-Hook‘ não se manifesta até à concentração de α 1 -microglobulina de 600mg/l. Os âmbitos de medição típicos estão indicados no manual de utilização dos sistemasBN*.EspecificidadeOs N Anti-soros são específicos da respectiva proteína.PrecisãoOs seguintes coeficientes de variação (CV) foram obtidos com N Anti-soro contra α 1 -microglobulina no sistema BN* (6):Intra-AssayInter-Assay(n=21)(n=10)Proteína valor médio CV valor médio CV[mg/l] [%] [mg/l] [%]α 1 -microglobulina 7,7 5,2 6,8 13,241,8 2,9 42,0 7,4Comparação de métodosForam medidas 52 amostras de urina com o N Antisoro contra a α 1 -microglobulina humanano sistema BN* (y) e determinadas, comparativamente, com a imunodifusão radial (x)(LC-Partigen**). A correlação dos resultados apresenta os seguintes dados:Proteína Regressão linear Coeficiente decorrelaçãoα 1 -microglobulina y(BN*)=1,08 x (RID) - 2,36 mg/l 0,996NotaOs valores indicados para as características dos testes representam resultados típicos enão devem ser considerados como especificação para o N antisoro contra a α 1 -microglobulinahumana.BibliografiaVide a página 1.BN ProSpec e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, na Alemanhae noutros países.* BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.** Partigen e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha enoutros países.Dade Behring Marburg GmbHEmil-von-Behring-Str. 76D-35041 MarburgSymbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos SímbolosManufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado porIn Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif MédicalIVD Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitariopara Diagnóstico In VitroLOT Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de LoteEXP Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha deCCYY-MM-DDvencimiento / termo da validade8 CStorage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura2 C di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagemCE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CEREF Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número deCatálogoConsult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulter la Noticed'Utilisation / Istruzioni per l'uso / Consultar Instucciones para el Uso / Consulte asInstruções de Utilização