Kit DxSelect de captura para virus dengue IgM Características de ...

Utilizó el método de incubación de una noche para realizar el ensayo y elELISA IgM del investigador.Sensibilidad con pares de sueros agudos (centro 2)Prueba Tiempo tras el inicio Sensibilidad IC 95%ELISA Focus 0 días 35% (6/17) 14,2-61,7%ELISA Focus 7-10 días 82% (14/17) 56,6-96,2%ELISA del investigador 0 días 29% (5/17) 10,3-56%ELISA del investigador 7-10 días 71% (12/17) 44,0-89,7%Kit DxSelect de captura para virusdengue IgMCódigo del producto: EL1500MRev. ICaracterísticas de rendimientoNo para su distribución en Estados UnidosINCUBACIÓN EN UNA NOCHE COMPARADA CON INCUBACIÓNDE 2 HORASUn investigador interno comparó el rendimiento del ensayo entre elprocedimiento de incubación de 2 horas y el de incubación en una noche. Seevaluaron ciento doce (112) sueros. La concordancia total fue del 97,3%(109/112). De los 112 sueros, el ensayo de una noche dio positivo en 55 ynegativo en 57. De los 55 positivos de una noche, el ensayo de 2 horas diopositivo en el 98,2% (54/55). La única muestra que dio positivo en el ensayode una noche y negativo en el ensayo de 2 horas se procesó por duplicado. Uníndice del duplicado fue 0,97 y el otro 1,08 para una media de 1,03. De los 57negativos de una noche, el ensayo de 2 horas dio negativo en el 96,5%(55/57). De las dos muestras que dieron negativo en el ensayo de una nochey positivo en el ensayo de 2 horas, una tuvo un índice de 1,1 y la otra de 1,4.2 horasUna nochePositivo Negativo TotalPositivo 98,2% (54/55) 3,5% (2/57)IC 95% = 90,3-100% IC 95% = 0,4-12,1%56Negativo 1,8% (1/55) 96,5% (55/57)IC 95% = 0-9,7% IC 95% = 87,9-99,6%56Total 55 57 112SENSIBILIDADEl centro de investigación 1 evaluó la sensibilidad examinando sueros biencaracterizados utilizando el método de incubación durante una noche pararealizar el ensayo. Cada suero fue:1) Obtenido de pacientes que mostraron síntomas de fiebre del dengue (FD)o fiebre del dengue hemorrágico (FDH).2) La muestra primaria inicial del paciente3) Obtenido entre 1 y 16 días del inicio4) Confirmado anteriormente como infectado con el virus del dengue porELISA, IH y/o PCR.Sensibilidad del ELISA IgM Focus en suero agudo (centro 1)Afección Sensibilidad IC 95%FD 96% (48/50) 86,33-99,5%FDH 96% (25/26) 80,4-99,9%Total 96% (73/76) 88,9-99,9%El centro de investigación 2 evaluó la sensibilidad mediante un ensayo depares de sueros (n = 34) de 17 pacientes sospechosos de estar infectados porel virus del dengue. Cada paciente fue examinado al inicio y de 7 a 10 díastras el inicio. El investigador examinó los sueros mediante el producto.El centro de investigación 3 evaluó la sensibilidad examinando un panel desueros con virus dengue reunido por las autoridades de EE.UU. Se utilizó elmétodo de incubación de una noche para realizar el ensayo. El panel desueros incluyó muestras de infecciones primarias recientes, muestras deinfecciones primarias y muestras de infecciones secundarias.Sensibilidad del ELISA IgM Focus con sueros de infecciones primarias ysecundarias (centro 3)Afección Sensibilidad IC 95%Infección primaria 86% (32/37) 71,2-95,5%recienteInfección primaria 92% (47/51) 81,1-97,8%Infección secundaria 100% (15/15) 78,2-100%Total 91% (94/103) 82,7-99,4%El centro de investigación 4 evaluó la sensibilidad examinando dos panelesde sueros reunidos por las autoridades de EE.UU. Los paneles de suerosincluyeron un panel de DO baja y un panel de seroconversor primario. Elpanel de DO baja incluyó sueros que mostraron una DO baja con el ELISAdel investigador. El panel seroconversor primario incluyó muestras deespecificidad conocida de tipo con dengue. Se utilizó el método deincubación de una noche para realizar el ensayo.Sensibilidad del ELISA IgM Focus con seroconversor primario y suerocon DO baja (centro 4)Afección Sensibilidad IC 95%DO baja 92% (12/13) 64,0-99,8%Seroconversor (tipo 1) 100% (2/2) 15,8-100%Seroconversor (tipo 2) 100% (2/2) 15,8-100%Seroconversor (tipo 4) 100% (2/2) 15,8-100%Total 95% (18/19) 74,0-99,9%El centro de investigación 5 evaluó la sensibilidad examinando un panel desueros con infecciones recientes consistente en 15 sueros de pacientespositivos en cultivo (específico tipo dengue) y pacientes positivos coninhibición de la hemaglutinación (IH). Se utilizó el método de incubación deuna noche para realizar el ensayo.Sensibilidad del ELISA IgM Focus con cultivo y sueros positivos con IH(centro 5)Afección Sensibilidad IC 95%Cultivo positivo tipo 1 75% (6/8) 34,9-96,8%Cultivo positivo tipo 2 100% (1/1) N/CCultivo positivo tipo 3 100% (5/5) 47,8-100%Cultivo positivo tipo 4 100% (1/1) N/CIH positivo 92% (22/24) 73-99%Total 90% (35/39) 75,8-97,1%El centro de investigación 7 evaluó la sensibilidad examinando cuatropaneles de sueros reunidos por las autoridades de EE.UU. Los paneles desueros incluyeron un panel de IgM baja, un panel de infección primaria, unpanel de infección secundaria y un panel de infecciones antiguas. Se utilizó elmétodo de incubación de una noche para realizar el ensayo.Sensibilidad del ELISA IgM Focus con sueros de infecciones primarias,secundarias y antiguas (centro 7)Afección Sensibilidad IC 95%IgM baja 97% (29/30) 82,8-99,9%Infección primaria 100% (10/10) 69,2-100%Infección secundaria 90% (9/10) 55,5-99,8%Infección antigua 7% (1/14) 0,2-33,9%

FOCUS DiagnosticsDxSelect para virus dengue IgMPágina 2Total excluyendo las 96% (48/50) 86,3-99,5%infecciones antiguasTotal 77% (49/64) 64,3-86,2%El centro de investigación 8 evaluó la sensibilidad examinando 29 pares desueros y tres sueros del mismo paciente (total de pacientes = 30, total demuestras 61). Cada paciente fue sospechoso de estar infectado por el virus deldengue, y los pares mostraron seroconversión o al menos un aumento dosveces mayor del título del anticuerpo por IH. Se utilizó el método deincubación de una noche para realizar el ensayo.Sensibilidad del ELISA IgM Focus con cultivo y sueros positivos con IH(centro 8)PruebaELISA IgM FocusIH del investigadorELISA IgM delinvestigadorPrimeramuestra37% (11/30)19,9-56,1%13% (4/30)3,8-30,7%20% (6/30)7,7-38,6%Segundamuestra100% (30/30)88,4-100%100% (30/30)88,4-100%100% (30/30)88,4-100%Terceramuestra100% (1/1)ND100% (1/1)ND100% (1/1)NDESPECIFICIDADLos centros de investigación 3, 4, 5, 7 y 8 evaluaron la especificidadexaminando sueros de personas asintomáticas. El panel de sueros deasintomáticos del centro 5 también dio positivo con inhibición de lahemaglutinación (IH) para el virus del dengue y/o encefalitis japonesa. Seutilizó el método de incubación de una noche para realizar el ensayo.Especificidad del ELISA IgM Focus con sueros normales (centro 5)Afección Especificidad IC 95%Normal endémicos (centro 3) 95% (53/56) 85,1-98,9%Normal endémicos (centro 4) 100% (6/6) 54,1-100%Positivo con IH endémicos(centro 5)94% (31/33) 79,8-99,3%Niños endémicos (centro 8) 100% (43/43) 91,8-100%Adultos endémicos (centro 8) 94% (64/68) 85,6-98,4%Especificidad total endémicos 96% (197/206) 91,9-98,0%Normal no endémico (centro 7) 99% (99/100) 94,6-100%Endémico general yespecificidad no endémicos97% (296/306) 94,1-98,4%REACTIVIDAD CRUZADAEl centro de investigación 2 evaluó la reactividad cruzada mediante elexamen de sueros de pacientes vacunados con el virus de la fiebre amarilla,de pacientes con infección por gripe y de pacientes con infecciones por elvirus Epstein-Barr. Se utilizó el método de incubación de una noche pararealizar el ensayo.El centro de investigación 6 evaluó la reactividad cruzada mediante elexamen de sueros de pacientes de una zona endémica que mostraron unaenfermedad febril aguda que inicialmente se creyó que era dengue, pero quefinalmente resultó ser seronegativo para dengue. Se utilizó el método deincubación de una noche para realizar el ensayo.Especificidad del ELISA IgM Focus con sueros potencialmente cruzadosreactivos (centros 2 y 6)Afección Especificidad IC 95%Vacunas del virus de lafiebre amarilla* (centro 2)100% (6/6)* 54,1-100%Infecciones por gripe*(centro 2)100% (15/15) 78,2-100%Infecciones por virusEpstein-Barr (centro 2)88% (7/8) 47,3-99.7%Enfermedad febril aguda(centro 6)100% (8/8)** 63,1-100%Especificidad total 97% (36/37) 85,8-99,9%* El centro de investigación 2 también descubrió que todos los sueros convacunación para el virus de la fiebre amarilla y los sueros con infección por gripedieron negativo con el ELISA IgM para dengue del investigador. El centro deinvestigación 2 no estableció ningún paralelismo entre los sueros con infecciónpor VEB y el ELISA del investigador.El centro de investigación 8 evaluó la reactividad cruzada examinandosueros de pacientes con otros flavivirus y sueros de pacientes infectados conotros virus. Se realizó un ensayo de ambos paneles de sueros mediante laprueba Focus, el método de incubación de una noche, la IH del investigador yel ELISA IgM del investigador. El panel de sueros de flavivirus consistió en33 sueros de pacientes infectados con otros flavivirus: virus de la fiebreamarilla, virus del Oeste del Nilo, virus Chikungunya, virus de la encefalitisjaponesa, virus de la fiebre del tábano, virus Langat, virus Bunya y virusWesselsbron.Reactividad cruzada con infecciones por flavivirus (centro 8)PruebaIH para dengue tipo 2del investigadorELISA IgM paradengue delinvestigadorELISA IgM Focus paradengueReactividadcruzadaIC 95%39% (13/33) 22,9-57,9%12% (4/32) 3,5-29%27% (9/33) 13,3-45,5%Reactividad cruzada para infecciones virales no flavivirus (centro 8)PruebaIH delinvestigadorELISA IgGFocusReactividad cruzadaVEB AVC CMV VHS VVZ Parvovirus Total0% 0% 0% 33% 20% 10%(0/4) (0/4) (0/5) (1/3) (1/5) (2/21)25% 0% 0% 0% 60% 19%(1/4) (0/4) (0/5) (0/3) (3/5) (4/21)El centro de investigación 9 evaluó el procedimiento de fondo sustraídoexaminando 114 muestras con consenso de dengue de un panel de suerosreunido por la OMS. El panel incluyó 87 muestras clínicamentediagnosticadas como positivas y 27 muestras diagnosticadas como negativasen dengue. Se determinó mediante pruebas serológicas con consenso quecatorce de las muestras negativas eran positivas en malaria, y las 13 muestrasrestantes fueron examinadas por consenso como fiebre amarilla, dengue,infecciones previas por dengue o no infectadas. Se utilizó el método deincubación de 2 horas para realizar el ensayo.Sin fondo sustraídoEl ensayo IgM Focus dio positivo en el 100% (87/87) de las muestrasdiagnosticadas con virus del dengue. De las 27 muestras sin un diagnóstico devirus dengue, el ensayo IgM Focus dio negativo en un 7,7% (1/13) de lasmuestras que no eran de malaria, y negativo en el 0% (0/14) de las muestrasde malaria.Resultados del ELISA IgM Focus con muestras de dengue con consenso(centro 9)Sin fondo sustraídoDiagnóstico clínico n Positivo Negativo %Positivo 87 87 0100% (87/87)IC 95% 95,8-100%Negativo (no malaria) 13 12 17,7% (1/13)IC 95% 1,4-33,3%Negativo (malaria) 14 14 00% (0/14)IC 95% 0-21,5%Con fondo sustraídoEl ensayo IgM Focus dio positivo en el 98,9% (86/87) de las muestrasdiagnosticadas con virus del dengue. De las 27 muestras sin un diagnóstico devirus dengue, el ensayo IgM Focus dio negativo en un 46,2% (6/13) de las

FOCUS DiagnosticsDxSelect para virus dengue IgMPágina 3muestras que no eran de malaria, y negativo en el 0% (0/14) de las muestrasde malaria.Resultados del ELISA IgM Focus con muestras de dengue con consenso(centro 9)Fondo sustraídoDiagnóstico clínico n Positivo Negativo %Positivo 87 86 198,9% (86/87)IC 95% 93,8-99,8%Negativo (no malaria) 13 7 646,2% (6/13)IC 95% 23,2-70,9%Negativo (malaria) 14 14 00% (0/14)IC 95% 0-21,5%ESTABILIDADEl centro de investigación 7 evaluó la estabilidad. Se aceleraroncomponentes liberados a al menos el equivalente a 2 años a una temperaturade entre 2 y 8 ºC mediante incubación a 37 ºC. Después, los componentesacelerados fueron examinados según el prospecto en paralelo concomponentes sin acelerar mediante el método de incubación de una nochepara realizar el ensayo. Los componentes se consideran estables si reúnen loscriterios de CC especificados en el prospecto. La prueba pasó cada uno de loscriterios de CC.COMPARACIÓN DE MÉTODOSSe llevó a cabo una validación interna para comparar una incubación deantígeno de 1 hora con el protocolo del CDC de una noche. El estudio mostróque el rendimiento del ensayo de 1 hora era equivalente al de la incubación deuna noche.Cypress, California 90630 EE.UU.www.focusdx.comPC.EL1500MRev. IFecha de redacción: 3-dic.-2010Reproducibilidad intraensayoEl centro de investigación 7 evaluó la variación intraensayo. Se retiraron dostiras (8 pocillos por tira) de cada una de las seis placas y se colocaron en unanueva placa (12 tiras en total, 96 pocillos en total). La nueva placa se utilizópara procesar un ensayo según el prospecto y el método de incubación de unanoche mediante el calibrador de punto de corte como muestra.Reproducibilidad intraensayo con ELISA IgM FocusPocillos DO media Coeficiente devariaciónTirasPlaca1 y 2 1 0,197 3,0%3 y 4 2 0,176 3,2%5 y 6 3 0,177 3,2%7 y 8 4 0,165 2,5%9 y10 5 0,175 2,7%11 y 12 6 0,172 3,9%Las doce tiras, dos tirasde cada placa (n = 96 pocillos)0,180 6,9%Reproducibilidad interensayoEl centro de investigación 7 evaluó la variación interensayo examinando loscontroles y ocho muestras diferentes (cuatro para cada suero positivo ynegativo) en tres días no consecutivos. La prueba mostró una concordanciade interpretación del 100% entre los tres días.Reproducibilidad interloteEl centro de investigación 7 evaluó la variación interlote. Se procesaron loscontroles y muestras diferentes (tres sueros positivos y dos negativos) con doslotes de kits diferentes.Reproducibilidad interlote con ELISA IgM FocusN.º de muestraInterpretaciónLote 1 Lote 2 Lote 3 % ConcordanciaQC 1 0,000 0,003 0,177 100%QC 2 0,558 0,524 0,565 100%QC 5 6,131 5,725 4,287 100%QC 8 6,968 6,429 5,033 100%QC 9 7,985 8,119 7,678 100%