(Eh) y metanÃ³lico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de ...

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A. DORLA et al. el DMSO actúa como un trasportador para algunas drogas (Neal et al., 1974; Saunders et al., 1992). Debido a que en este trabajo no se observó ningún efecto sobre las formas quísticas y para descartar modificaciones no perceptibles, tanto bioquímicas como estructurales, sería recomendable realizar otra técnica, como la microscopía electrónica, que permita detectar si se producen tales cambios. La evaluación del Eh y Em de P. distichophylla sobre el número de amibas se realizó a las 24 horas. Algunos investigadores recomiendan para el estudio de extractos naturales y sus efectos sobre Acanthamoeba spp., incubar a partir de 24 horas y extenderlas en el tiempo, para poder observar efectos tales como la capacidad lítica (Chu et al., 1998). Para el extracto Eh a la concentración de 0,75 mg/ml y su respectivo control de DMSO 0,7%, se observó que la tendencia de crecimiento del aislado A27 en presencia de DMSO 0,7% alcanzó el pico máximo de crecimiento a las 72 horas y disminuyó progresivamente hasta las 96 horas de incubación, sin intervención de actividad lítica alguna por parte del DMSO, a diferencia del crecimiento del aislado con el Eh 0,75 mg/ml, el cual alcanzó el pico máximo de crecimiento a las 48 horas y disminuyó rápidamente hasta las 96 horas. Esto parece indicar que la concentración de Eh 0,75 mg/ml afecta al aislado A27 acelerando su crecimiento máximo en estos cultivos al inicio del experimento, pero a su vez propiciando una disminución marcada del número de amibas luego de alcanzar el pico máximo, relacionada a su vez con la capacidad lítica del extracto Eh 0,75 mg/ml, manifiesta a partir de las 72 horas. Para la concentración de Eh 3,8 mg/ml y su respectivo control DMSO 3,5%, el aislado A27 exhibió un comportamiento diferente: en ambos casos no se observó un número máximo de amibas durante el experimento, sino un crecimiento discreto y continuo para el DMSO y poca variación en el recuento de amibas para el extracto, semejando una fase estacionaria, relacionado ambos con la ausencia de capacidad lítica por parte del DMSO y el extracto. Estas observaciones parecen indicar una posible adaptación del aislado al Eh 3,8 mg/ml y su solvente o una disminución en la tasa de proliferación celular del protozoario, lo que podría demostrarse al extenderse el tiempo de incubación hasta obtener un cambio en la tendencia de crecimiento 52 del aislado en presencia de este extracto. El efecto de disminución de la división celular evidenciado a medida que aumenta la concentración del extracto Eh sobre el aislado A27 de Acanthamoeba spp., puede ser comparado con lo obtenido por Salazar (2004) con el mismo aislado de Acanthamoeba y el extracto crudo alcohólico (Ec) de P. distichophylla Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008; por Rodríguez-Ortega y col. (2006) usando el mismo extracto Ec de P. distichophylla sobre epimastigotes de T. cruzi 19 y por otros trabajos que evaluaron actividad amebicida de extractos naturales de plantas como Allium spp., Thymus spp., Ipomoea sp, Kaempferia galanga y Cananga odorata 12,26,15-17 . Sería entonces recomendable probar concentraciones mayores de este extracto, tomando en cuenta que la toxicidad del DMSO como solvente no exceda de 10%. Durante la evaluación del efecto del Em sobre el número de amibas del aislado A27 de Acanthamoeba spp., la obtención de un pico máximo de crecimiento a las 96 horas en presencia de Em 0,75 mg/ml y de DMSO 0,3%, en vez de a las 72 horas como el control de amibas, sugiere un discreto retardo en la tasa de multiplicación relacionado con el efecto de lisis del extracto y su solvente al inicio del experimento y la ausencia del mismo a las 96 horas de incubación. En cuanto al efecto del DMSO 1,5% sobre el aislado A27, éste produjo un posible retraso en la adaptación del parásito hasta las 48 horas y por ende, una aparición tardía del pico máximo de crecimiento a las 96 horas, mientras que el Em 3,8 mg/ml generó una disminución constante del número de parásitos hasta el final del experimento, relacionándose la misma con la presencia de lisis durante todos los tiempos de incubación. Por lo tanto, pareciera que a mayor concentración de Em se prolonga la capacidad lítica del extracto. En este ensayo, según los resultados obtenidos, aparentemente podría haber una interacción entre el Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
extracto Em y su solvente que modificaría la capacidad lítica observada para el DMSO, disminuyéndola o inclusive, anulándola, excepto para el caso del Em 3,8 mg/ml y DMSO 1,5% a las 96 horas de incubación. Este hallazgo no fue observado para el Eh. Se ha reportado que las propiedades terapéuticas y/o tóxicas de algunos agentes probablemente aumenten al combinarse con el DMSO, por ejemplo, para la actividad del diacetato de clorhexidina, pero también hay estudios que refieren poca o ninguna modificación de la actividad de compuestos como la polihexametilen biguanida (Brayton 1986; Larkin et al., 1992; Khunkitti 1996). Esto podría estar ocurriendo en el caso del extracto Em 0,75 mg/ml. La viabilidad del aislado sometido a la actividad de los extractos no mostró cambios importantes, por lo cual, pareciera no haber daños en la membrana plasmática de los trofozoítos ni de la pared quística, lo cual debería ser comprobado con la evaluación a nivel ultraestructural. Sin embargo, sí se observó una posible acción de los extractos a nivel intracelular, ya que las amibas que no fueron afectadas por la acción lítica de los extractos, mostraron cambios morfológicos, en los que se observan modificaciones a nivel citoplasmático como la aparición de vacuolas, con o sin gránulos, pero sin provocar la muerte celular, al menos en el tiempo de experimentación. Estudios anteriores con el Género Pera y amibas del Género Acanthamoeba reportan para ensayos de viabilidad los mismos resultados de este trabajo, demostrándose que estos extractos actúan principalmente sobre la morfología y proliferación celular de estos parásitos (Salazar, 2004). La evaluación cualitativa del crecimiento a los 7 días en cultivos en placas de petri, permitió evidenciar que, aparte de conservar su viabilidad y aun con modificaciones en su morfología en algunos casos, el aislado es capaz de crecer en estos cultivos. Sería recomendable, por lo tanto, realizar este ensayo de manera cuantitativa, ajustando los inóculos iníciales luego de la recolecta de cada pozo, para evaluar la proliferación del aislado en cada caso a los 7 días de incubación y estimar así el efecto de los extractos sobre su crecimiento en cultivos a largo plazo. En conclusión, de los extractos de P. distichophylla ensayados, sólo el Em 0,75 mg/ml afectó la morfología de los trofozoítos del aislado A27 de Acanthamoeba spp., mientras que la morfología Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54 PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL de los quistes no se alteró en presencia ninguno de los extractos. Eh a la concentración de 0,75 mg/ml, aparentemente disminuyó la proliferación celular, no así el Em. Ambos extractos a la concentración de 3,8 mg/ml permiten la proliferación celular. En relación a la lisis celular, solo Em demostró tener capacidad lítica sobre el aislado A27 de Acanthamoeba spp. Estos extractos actúan principalmente sobre la morfología y proliferación celular de estos parásitos sin afectar su viabilidad, demostrado al evidenciarse crecimiento del aislado en cultivos de Page modificado en placas de petri, luego de haber sido expuesto a la acción de los extractos. REFERENCIAS 1. BRAYTON CF. 1986. Dimethyl sulfoxide (DMSO): a review.[Resumen]. Cornell Vet. 76: 61-90. 2. CHU DAN-MY, MILES H, TONEY D, NGYUEN C, MARCIANO-CABRAL F. 1998. Amebicidal activity of plant extracts from Southeast Asia on Acanthamoeba spp. Parasitol. Res. 84: 746-752. 3. DERDA M, HADAS E, THIEM B, SUŁEK A. 2004. Amebicidal plants extracts [Resumen]. Wiad Parazytol. 50: 715-721. 4. DERDA M, SUŁEK-STANKIEWICZ A, HADAŚ E. 2006. Free-living amoebae as vehicles of pathogenic bacteria [Resumen]. Wiad Parazytol. 52: 1-7. 5. ISHIBASHI Y. 1997. Acanthamoeba keratitis. Ophthalmologica. 211 (Suppl 1): 39-44. 6. JERCIC MI. 2007. Amebas de vida libre género Acanthamoeba. Retrato microbiológico. Rev Chil Infect. 24: 491-492. 7. KILVIGTON S, HUGHES R, BYAS J, DART J. 2002. Activities of therapeutic agents and myristamidopropyl dimethylamine against Acanthamoeba isolates. Antimicrob Agents Chemother. 46: 2007-2009. 8. KHUNKITTI W, LLOYD DE, FURR JR, RUSSELL AD. 1996.The letal effects of biguanides on cysts and thophozoites of Acanthamoeba castellani. [Resumen]. J Appl Bacteriol. 81: 73-77. 9. LARKIN DF, KILVINGTON S, DART JK. 1992. Treatment of Acanthamoeba keratitis with polyhexamethylene biguanide. Ophthalmol. 99: 185-191. 10. LUNA D. 2003. Fitoquímica de Pera glabrata y Pera distichopylla, Actividad Biológica [Tesis Doctoral]. Universidad Central de Venezuela, Facultad de Ciencias;. 11. MATHERS WD. 2004. Acanthomoeba A difficult pathogen to evaluate and treat Êditorial. Cornea. 23: 325. 12. MORALES ROJAS T, CASTILLO A. 2005. Catálogo dendrológico comentado del bosque ribereño de las confluencias de los ríos Cuao-Sipapo (Estado Amazonas, Venezuela). Acta Bot.Venez. 28: 63-87. 13. NEAL RA, LATTER VS, RICHARDS WHG. 1974. Survival of Entamoeba and related amoeba at low 53
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