(Eh) y metanólico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de ...

A. DORLA et al.
firme bajos y bosques inundables de arenas blancas
entre 50 y 250 mts sobre el nivel del mar. En
Venezuela se encuentra limitada sólo a los estados
Bolívar y Amazonas (Luna, 2003, Morales y Castillo,
2005). Utilizando hojas de la planta P. distichophylla,
para su análisis fitoquímico y biológico,
se demostró que el extracto crudo alcohólico (Ec)
posee actividad antiparasitaria sobre Trypanosoma
cruzi y antiviral sobre el virus del dengue (Luna,
2003). Estos ensayos fueron ampliados por Rodríguez-Ortega
et al., (2006), al evaluar los extractos
acuosos (Ea) y alcohólicos (Ec) de P. glabrata y de
P. distichophylla para su actividad anti-parasitaria
sobre T. cruzi y antiviral sobre los virus del dengue
y de la fiebre amarilla. El Ec de P. distichophylla
también fue evaluado in vitro sobre un aislado de
Acanthamoeba spp., causante de patología ocular,
observándose inhibición del crecimiento del aislado
a una concentración de 10 mg/ml, probablemente
debido a inhibición del desenquistamiento y/o
lisis de los quistes y/o trofozoítos, además de producir
redondeamiento y vacuolización de los trofozoítos
como señal de daño celular (Salazar, 2004).
Es por ello que, al disponer de extractos obtenidos
de P. distichophylla, y conociendo los antecedentes
de su actividad contra Acanthamoeba spp. y otros
protozoarios como la familia Trypanosomatidae
(Rodríguez et al., 2006), se justificó la evaluación
de los efectos de los extractos hexanólico (Eh) y
metanólico (Em) obtenidos de P. distichophylla
sobre un aislado de Acanthamoeba spp. proveniente
de una úlcera corneal humana para así conocer
posibles alternativas terapéuticas que permitan
alcanzar la mejoría y/o curación de las enfermedades
producidas por este protozoario.
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MATERIAL Y MÉTODOS
Extractos naturales: Los extractos fueron
obtenidos a partir de la planta P. distichophylla, en
el estado Amazonas, Venezuela. El procesamiento
y obtención de Eh y Em, fue realizado en el
Laboratorio de Productos Naturales de la Escuela
de Química de la Facultad de Ciencias de la
Universidad Central de Venezuela (UCV) (Luna,
2003).
Se prepararon dos (2) soluciones de trabajo
de Eh para ser evaluadas: 0,75 mg/ml y 3,8 mg/
ml, a partir de una solución madre de 23 mg/ml en
dimetilsulfóxido (DMSO) al 16% como solvente.
Al realizar las diluciones, cada solución de trabajo
quedó con una concentración de DMSO al 0,7% y
3,5% respectivamente. Para el Em, se prepararon
igualmente dos (2) soluciones de trabajo: 0,75 mg/
ml y 3,8 mg/ml, a partir de una solución madre de
40,3 mg/ml en DMSO al 16% como solvente. Al
realizar las diluciones, cada solución de trabajo
quedó con una concentración de DMSO al 0,3% y
1,5% respectivamente. Se consideró los porcentajes
de DMSO en los cuales quedó cada solución de
trabajo, a los efectos de establecer los controles del
solvente respectivo en cada ensayo.
Aislado de Acanthamoeba spp. mantenido en
medio de Page modificado): El aislado de Acanthamoeba
spp. fue obtenido por raspado de una úlcera
corneal en una paciente de 27 años de edad, usuaria
de lentes de contacto. El aislado, denominado como
A27 según nomenclatura propia del Laboratorio de
Amibiasis de la Cátedra de Parasitología, Escuela
de Bioanálisis, Facultad de Medicina-U.C.V, ha
sido mantenido en el medio de cultivo bifásico de
Page modificado por Chinchilla et al., (1979), en
placas de petri y adaptado al crecimiento en placas
de poliestireno de 24 pozos con el mismo medio
para realizar los bioensayos. Se preparó una suspensión
de trofozoítos y quistes de concentración
conocida, para ser utilizada en los diferentes bioensayos.
Ensayos para la evaluación del efecto de Eh
y Em de P. distichophylla sobre el aislado A27
de Acanthamoeba spp: El efecto de las distintas
concentraciones de Eh y Em sobre los trofozoítos
y quistes del aislado A27 de Acanthamoeba spp.
fue evaluado en cultivos en placas de poliestireno
de 24 pozos (Nunc®). Se agregó 0,5 ml de las
soluciones madres de cada extracto a estudiar o el
DMSO respectivo, como control. A todos los pozos
se agregó, aproximadamente 0,1 ml de suspensión
de Escherichia coli y 0,5 ml de la suspensión de
amibas (65,5 x 10 3 amibas/ml) y se completó hasta
un volumen final de 2 ml con medio líquido. Al
diluir las respectivas soluciones madres de Eh y
Em con la suspensión de amibas y la suspensión
de E. coli, las concentraciones de ambos extractos
quedaron a 0,75% y 3.8% mg/ml.
Los controles empleados fueron: a.- Control
de amibas más bacterias; b.-Control de DMSO
al 0,7% y 3,5% para Eh y al 0,3% y 1,5% para el
extracto Em. Para ambos extractos los experimentos
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54