(Eh) y metanólico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de ...
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C. ZÚÑIGA et al. niveles de parasitemia como una forma de expresión del desarrollo de la infección en los ratones jóvenes de dos meses de edad (grupo A) y en los ratones viejos de ocho meses de edad (grupo B) de la cepa Balb/c, infectados con 2.000 tripomastigotes sanguíneos del clon Dm 28c de T. cruzi. El período de prepatencia sanguínea fue de 5 días en ambos grupos de ratones; sin embargo, en la etapa inicial de la infección, los ratones de ocho meses de edad presentaron niveles significativamente más altos (p < 0,05) de parásitos en circulación. En relación a los niveles máximos de parasitemia, éstos se detectaron al séptimo día post infección en los ratones de ocho 26 Figura 1. Niveles de parasitemia de dos grupos etarios de ratones Balb/c A (ratones jóvenes de 2 meses de edad) y B (ratones de 8 meses de edad), experimentalmente infectados con 2.000 tripomastigotes sanguíneos del clon Dm 28c de T. cruzi. Figura 2. Porcentaje de mortalidad acumulada en ratones jóvenes de dos meses de edad de la cepa Balb/c (A) y en ratones mayores, de ocho meses de edad (B), infectados con 2000 tripomastigotes sanguíneos del clon Dm28c de T. cruzi. La diferencia entre las curvas de supervivencia de estos dos grupos de ratones, es estadísticamente significativas (p < 0,02). A los 40 días post infección se alcanzo el 100% de mortalidad en los ratones jóvenes, mientras el 40% de los ratones de ocho meses de edad sobrevivió más allá de los cuatro meses postinfección. meses de edad (3,2 x 10 5 parásitos/mL), mientras en el grupo de ratones jóvenes el nivel máximo de parasitemia se obtuvo al día 14 p.i. alcanzando 5,1 x 10 5 parásitos/mL (p < 0,05). No se observaron diferencias significativas (p > 0,05) en la duración de la parasitemia, puesto que ella fue negativa al día 19 p.i., en los ratones jóvenes de dos meses de edad y al día 21 p.i. en el grupo de los ratones envejecidos de ocho meses de edad. Como todos los ratones fueron infectados con el mismo número de parásitos, se utilizó la muerte o supervivencia como criterio para determinar la susceptibilidad o resistencia de cada grupo de Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
atones a la infección con 2.000 tripomastigotes sanguíneos de T. cruzi. La Figura 2 muestra que el grupo de ratones jóvenes, de dos meses de edad, presentó un 50% de mortalidad acumulada a los l5 días p.i., mientras el grupo de ratones de 8 meses de edad, presentó sólo un 10% de mortalidad en el mismo período. Al día 40 p.i. el grupo de ratones jóvenes presentó un 100% de mortalidad acumulada, mientras en el grupo de ocho meses de edad, el 40% sobrevivió más allá de los cuatro meses p.i. No se observó mortalidad en los grupos control de ratones jóvenes de dos meses y de ratones de ocho meses de edad, inoculados con sangre normal de ratones Balb/c sanos, no infectados. Aunque en los primeros diez días de infección los niveles de parasitemia fueron significativamente más altos en los ratones de mayor edad (p < 0,05), los animales jóvenes desarrollaron niveles de parasitemia de casi el doble de lo alcanzado por los animales de mayor edad a los 14 días p.i. (Figura 1) lo que coincidió con una también elevada mortalidad acumulada que alcanzó el 50% al día 15 p.i. en este grupo de ratones, lo que parece apoyar la sugerencia que la persistencia del parásito es una de las principales causas de la Enfermedad de Chagas (Tarleton, 2001). Desde luego, uno de los aspectos más sorprendentes de la enfermedad es la compleja red de eventos que parece acompañar, tanto el desarrollo de una respuesta inmune protectora, como el desarrollo de una respuesta autoinmune que conduce a daño tisular, a medida que progresa el curso de la infección y/o de la enfermedad (Minoprio et al., 1989; Russo et al., 1989; Zúñiga et al., 1998: Zúñiga et al., 2002). Estudio Histopatológico El año tisular que acompaña el desarrollo de la infección con T. cruzi se evaluó mediante la comparación de las lesiones histopatológicas presentes en corazón y músculo esquelético en los dos grupos de ratones de dos y ocho meses de edad infectados con el clon Dm28c (Tabla 1). En los ratones jóvenes, el mayor daño tisular se observó en el músculo esquelético, con presencia de numerosos pseudoquistes, aumento de lesiones inflamatorias y necrosis del tejido a medida que progresaba la infección, mientras en los ratones de ocho meses de edad este gran número de parásitos y enorme daño inflamatorio e infiltración celular, se observó en el tejido cardiaco, en el que, con el transcurso de los días se produjo no sólo una disminución paulatina de la carga parasitaria y del daño inflamatorio, sino también una lenta reparación tisular. Un análisis detallado de los estudios histopatológicos muestra que, al día 13 post-infección (p.i.) los ratones de ocho meses de edad presentaron lesiones inflamatorias y no inflamatorias multifocales en el tejido cardiaco (1-2 lesiones por campo, de formas redondeadas y alargadas, distribuidas al azar) (Figura 3). En los ratones jóvenes se observó, en cambio, un menor número de lesiones inflamatorias focales (1 cada 5 campos) (Figura 4). Tabla 1. Estudio histopatológico de ratones Balb/c infectados con 2.000 tripomastigotos sanguíneos del clon Dm28c de T. cruzi Grupo Tejido Lesión 13 días p.i. 23 días p.i. 33 días p.i. Ratones de ocho meses de edad Ratones de dos meses de edad Corazón Inflamación Pseudoquistes Necrosis Músculo esquelético Inflamación Pseudoquistes Necrosis Corazón Inflamación Pseudoquistes Necrosis Músculo esquelético Inflamación Pseudoquistes Necrosis Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33 EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI + +++ - - + - - + - + - - ++ ++ - ++ - - + - - +++ - + + - - + - + + - - +++ - +++ 27
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niveles <strong>de</strong> parasitemia como <strong>un</strong>a forma <strong>de</strong> expresión<br />
<strong>de</strong>l <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la infección en los ratones jóvenes<br />
<strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad (grupo A) y en los ratones<br />
viejos <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad (grupo B) <strong>de</strong> la<br />
cepa Balb/c, infectados con 2.000 tripomastigotes<br />
sanguíneos <strong>de</strong>l clon Dm 28c <strong>de</strong> T. cruzi. El período<br />
<strong>de</strong> prepatencia sanguínea fue <strong>de</strong> 5 días en ambos<br />
grupos <strong>de</strong> ratones; sin embargo, en la etapa inicial<br />
<strong>de</strong> la infección, los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad<br />
presentaron niveles significativamente más altos (p<br />
< 0,05) <strong>de</strong> parásitos en circulación. En relación a los<br />
niveles máximos <strong>de</strong> parasitemia, éstos se <strong>de</strong>tectaron<br />
al séptimo día post infección en los ratones <strong>de</strong> ocho<br />
26<br />
Figura 1. Niveles <strong>de</strong> parasitemia <strong>de</strong><br />
dos grupos etarios <strong>de</strong> ratones Balb/c<br />
A (ratones jóvenes <strong>de</strong> 2 meses <strong>de</strong><br />
edad) y B (ratones <strong>de</strong> 8 meses <strong>de</strong><br />
edad), experimentalmente infectados<br />
con 2.000 tripomastigotes sanguíneos<br />
<strong>de</strong>l clon Dm 28c <strong>de</strong> T. cruzi.<br />
Figura 2. Porcentaje <strong>de</strong> mortalidad<br />
acumulada en ratones jóvenes <strong>de</strong><br />
dos meses <strong>de</strong> edad <strong>de</strong> la cepa Balb/c<br />
(A) y en ratones mayores, <strong>de</strong> ocho<br />
meses <strong>de</strong> edad (B), infectados con<br />
2000 tripomastigotes sanguíneos <strong>de</strong>l<br />
clon Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi. La diferencia<br />
entre las curvas <strong>de</strong> supervivencia<br />
<strong>de</strong> estos dos grupos <strong>de</strong> ratones, es<br />
estadísticamente significativas (p <<br />
0,02). A los 40 días post infección se<br />
alcanzo el 100% <strong>de</strong> mortalidad en los<br />
ratones jóvenes, mientras el 40% <strong>de</strong><br />
los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad <strong>sobre</strong>vivió<br />
más allá <strong>de</strong> los cuatro meses<br />
postinfección.<br />
meses <strong>de</strong> edad (3,2 x 10 5 parásitos/mL), mientras<br />
en el grupo <strong>de</strong> ratones jóvenes el nivel máximo <strong>de</strong><br />
parasitemia se obtuvo al día 14 p.i. alcanzando 5,1<br />
x 10 5 parásitos/mL (p < 0,05). No se observaron<br />
diferencias significativas (p > 0,05) en la duración<br />
<strong>de</strong> la parasitemia, puesto que ella fue negativa al<br />
día 19 p.i., en los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses<br />
<strong>de</strong> edad y al día 21 p.i. en el grupo <strong>de</strong> los ratones<br />
envejecidos <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad.<br />
Como todos los ratones fueron infectados con<br />
el mismo número <strong>de</strong> parásitos, se utilizó la muerte<br />
o supervivencia como criterio para <strong>de</strong>terminar<br />
la susceptibilidad o resistencia <strong>de</strong> cada grupo <strong>de</strong><br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33