(Eh) y metanólico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de ...
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CONTINUACIÓN DE PARASITOLOGÍA LATINOAMERICANA Y REVISTA IBÉRICA DE PARASITOLOGÍA<br />
ARTÍCULOS ORIGINALES<br />
• Chagas disease in a wormy world.<br />
• Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> Trypanosoma cruzi obtenidos <strong>de</strong> pacientes venezolanos con<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas infectados por mecanismos <strong>de</strong> transmisión<br />
oral y vectorial.<br />
• Edad <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro en la evolución <strong>de</strong> la infección experimental<br />
con Trypanosoma cruzi en <strong>un</strong> mo<strong>de</strong>lo murino.<br />
• Parasitosis en Gran Canaria (España). Estudio prospectivo<br />
multicéntrico durante <strong>un</strong> año.<br />
• Evaluación <strong>de</strong> la actividad biológica <strong>de</strong> los extractos hexanólico<br />
(<strong>Eh</strong>) y metanólico (<strong>Em</strong>) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp. proveniente <strong>de</strong> <strong>un</strong>a úlcera corneal.<br />
• Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico (Ec) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong> . <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp productor <strong>de</strong><br />
úlcera corneal.<br />
• Comparación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina e ivermectina <strong>sobre</strong><br />
nematodos y la ganancia <strong>de</strong> peso en bovinos en Jalisco, México.<br />
• Aspectos epi<strong>de</strong>miológicos da Theileriose equina e sua relação<br />
com o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus em duas<br />
proprieda<strong>de</strong>s na região da campanha do Rio Gran<strong>de</strong> do Sul -<br />
Brasil.<br />
• Estudio comparativo <strong>de</strong> la eficacia terapéutica <strong>de</strong> oxitetraciclina,<br />
imidocarb y diminazeno,utilizados en el tratamiento <strong>de</strong><br />
hemoparasitosis en equinos pura sangre <strong>de</strong> carrera.<br />
• Detección <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp. en la planta <strong>de</strong><br />
tratamiento <strong>de</strong> aguas residuales “Taiguaiguay” <strong>de</strong>l Estado Aragua,<br />
Venezuela año 2011.<br />
• Comparative study of parasitological techniques and ELISA for<br />
.<br />
analysis of environmental samples, RJ, Brazil.<br />
• Tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica en Chile. Efectos<br />
adversos <strong>de</strong> nifurtimox.<br />
VERSIÓN: ISSN 0718-8730<br />
VOLUMEN 71 ENERO - JUNIO 2012 Núm 1<br />
ORGANO OFICIAL<br />
DE LA FEDERACIÓN<br />
LATINOAMERICANA<br />
DE PARASITÓLOGOS<br />
SOCIEDAD<br />
ESPAÑOLA DE<br />
PARASITOLOGÍA
Revista<br />
Ibero-Latinoamericana<br />
<strong>de</strong> Parasitología<br />
Volumen 71 Nº 1 - 2012<br />
Órgano oficial <strong>de</strong> la Fe<strong>de</strong>ración Latinoamericana <strong>de</strong> Parasitólogos<br />
y <strong>de</strong> la Sociedad Española <strong>de</strong> Parasitología<br />
ISSN: 0718-8730
Producción:<br />
María Cristina Illanes H.<br />
mcristina@editorialiku.cl<br />
Prohibida su reproducción total o parcial sin autorización <strong>de</strong>l editor.<br />
2
REVISTA IBERO-LATINOAMERICANA DE PARASITOLOGIA<br />
Alejandro G. Schijman (Argentina)<br />
Ana Espino (Univ <strong>de</strong> Puerto Rico)<br />
Anne F. Petavy (Lyon, Francia)<br />
Benjamín Cimerman (Brasil)<br />
César Náquira (Perú)<br />
Claudio Genchi (Italia, Milán)<br />
Christian Epe (Hannover, Alemania)<br />
David Rollinson (Natural History Museum<br />
London, UK)<br />
Douglas Colwell (Lethbridge, Alberta. Canadá)<br />
David Botero (Colombia)<br />
Edoardo Pozio (Roma, Italia)<br />
Els Meeusen (Monash University, Australia)<br />
George Hillyer (Puerto Rico, USA)<br />
Guillermo Denegri (Argentina)<br />
Heinz Mehlhorn (Bochum, Alemania)<br />
Hernán Reyes (Chile)<br />
Jacques Cabaret (INRA, Tours, Francia)<br />
Jack Frenkel (Nueva México, USA)<br />
Jean Dupouy-Camet (Paris)<br />
Jorge Guerrero (Phila<strong>de</strong>lfia, USA)<br />
Editor<br />
Héctor Alcaíno Contador (Chile)<br />
Editor Alterno<br />
Antonio Os<strong>un</strong>a Carrillo <strong>de</strong> Albornoz (Universidad <strong>de</strong> Granada - España)<br />
Co-Editores (Receiving Editors)<br />
A. Martínez Fernán<strong>de</strong>z (UCM - España)<br />
F. Martínez Ubeira (USC - España)<br />
Mª D. Bargues (UV - España)<br />
F. Rojo Vazquez (ULE - España)<br />
W. Apt (Universidad <strong>de</strong> Chile)<br />
Secretaria <strong>de</strong> Edición<br />
Dra. Susana Vilchez Tornero<br />
(Universidad <strong>de</strong> Granada - España)<br />
Comité Editorial<br />
Jorge Sap<strong>un</strong>ar (Chile)<br />
J.P. Dubey (Iowa. USA)<br />
JM Correia da Costa (Portugal)<br />
J. Guisantes <strong>de</strong>l Barco (Univ. <strong>de</strong>l País Vasco, España)<br />
Luca Rossi (Turín, Italia)<br />
Michel Tibayrenc (Montpellier, Francia)<br />
Naftale Katz (Belo Horizonte, Brasil)<br />
Osvaldo Ceruzzi (Uruguay)<br />
Pascal Boireau (Francia)<br />
Paul <strong>de</strong> Rycke (Gent, Bélgica)<br />
Peter Schantz (Atlanta, USA)<br />
Philippe Dorchies (Touluse, Francia)<br />
Ramón Carreño Passow (Ohio Wesleyan<br />
University, USA)<br />
Ramón Lazo (Ecuador)<br />
Raúl Romero Cabello (México)<br />
Rodrigo Zeledón (Costa Rica)<br />
Thomas Schnie<strong>de</strong>r (Director Institute for<br />
Parasitology, Hannover, Alemania)<br />
Yves Carlier (Bruselas, Bélgica)<br />
3
Contenido<br />
4<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 4<br />
ARTÍCULOS ORIGINALES<br />
- Chagas disease in a wormy world.<br />
Galán-Pucha<strong>de</strong>s M.T. and Os<strong>un</strong>a A. .............................................................................................. 5<br />
- Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> Trypanosoma cruzi<br />
obtenidos <strong>de</strong> pacientes venezolanos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas infectados por<br />
mecanismos <strong>de</strong> transmisión oral y vectorial.<br />
Muñoz-Cal<strong>de</strong>rón A., Santaniello A., Pereira A., Yannuzzi J., Díaz-Bello Z. y Alarcón <strong>de</strong> Noya B. 14<br />
- Edad <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro en la evolución <strong>de</strong> la infección experimental con Trypanosoma cruzi en<br />
<strong>un</strong> mo<strong>de</strong>lo murino.<br />
Zúñiga C., Bin<strong>de</strong>r N., Paláu M.T., Larenas J. y Vergara U. ........................................................... 23<br />
- Parasitosis en Gran Canaria (España). Estudio prospectivo multicéntrico durante <strong>un</strong> año.<br />
Novo-Veleiro I., Martín-Sánchez A M., Elcuaz-Romano R., Muro A, Afonso- Rodríguez O.,<br />
García-Bar<strong>de</strong>ci D., Bor<strong>de</strong>s-Benítez A., Carranza-Rodríguez C., Hernán<strong>de</strong>z-Cabrera M.,<br />
Alvela-Suárez L. y Pérez-Arellano J. L. ........................................................................................ 34<br />
- Evaluación <strong>de</strong> la actividad biológica <strong>de</strong> los extractos hexanólico (<strong>Eh</strong>) y metanólico (<strong>Em</strong>)<br />
<strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. proveniente <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong>a úlcera corneal.<br />
Dorla A., Wagner C. M., Pérez <strong>de</strong> G. M. V., Blanco <strong>de</strong> M. J., Galindo M. V., Nessi A.,<br />
Vethencourt M. A., Ban<strong>de</strong>s A., Guzmán <strong>de</strong> R. C. T. ........................................................................ 42<br />
- Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico (Ec) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> <strong>un</strong><br />
<strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp productor <strong>de</strong> úlcera corneal.<br />
Wagner C. M., Salazar L. S., Dorla A., Pérez <strong>de</strong> G. M. V., Blanco <strong>de</strong> M. J., Galindo M. V.,<br />
Nessi A., Vethencourt M. A., Ban<strong>de</strong>s A., Guzmán <strong>de</strong> R. C.T. ......................................................... 55<br />
- Comparación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina e ivermectina <strong>sobre</strong> nematodos y la ganancia <strong>de</strong> peso<br />
en bovinos en Jalisco, México.<br />
Quiroz R. H., Mateos R. A., Gómez F. L. E., Cruz M. I., Ulloa-Arvizu R....................................... 62<br />
- Aspectos epi<strong>de</strong>miológicos da Theileriose equina e sua relação com o carrapato<br />
Rhipicephalus (Boophilus) microplus em duas proprieda<strong>de</strong>s na região da campanha do Rio<br />
Gran<strong>de</strong> do Sul - Brasil.<br />
Torres Al. J., Finger I. S., Farias N. A. R., Nizoli L. Q., Silva S. S. e Nogueira C. W.................... 70<br />
- Estudio comparativo <strong>de</strong> la eficacia terapéutica <strong>de</strong> oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno,<br />
utilizados en el tratamiento <strong>de</strong> hemoparasitosis en equinos pura sangre <strong>de</strong> carrera.<br />
Morales A., Villoria D., Romero N., Morales G., Kassar M., Arrieta D. y Comerma S. ............... 78<br />
- Detección <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp. en la planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> aguas<br />
residuales “Taiguaiguay” <strong>de</strong>l Estado Aragua, Venezuela año 2011.<br />
Medina C., Moncada E., González A., Rueda M. y Rojas G. ......................................................... 83<br />
- Comparative study of parasitological techniques and ELISA for analysis of environmental<br />
samples, RJ, Brazil.<br />
Da Silva Barbosa A., Ant<strong>un</strong>es Uchôa C. M., Laurentino da Silva V., Nascimento Duarte A.,<br />
Ban<strong>de</strong>ira Viannaa M., Monteiro Fonseca A. B. and Pereira Bastos O. M. ................................... 90<br />
- Enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica en Chile. Efectos adversos <strong>de</strong> nifurtimox.<br />
Valencia C. N., Mancilla M., Ramos D., Zulantay I., Molina M., Torres A., Corral G. y Apt W. .. 97<br />
CRóNICA<br />
- Nueva Directiva <strong>de</strong> SOCEPA ......................................................................................................... 109
Artículo Original<br />
Chagas Disease in a Wormy World<br />
GALáN-PUCHADES M.T. 1 and OSUNA A. 2<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13<br />
1 Department of Parasitology, Faculty of Pharmacy, University of Valencia, 46100 Burjassot (Valencia), Spain.<br />
2 Group of Biochemistry and Molecular Parasitology, Institute of Biotechnology, University of Granada, 18071<br />
Granada, Spain.<br />
ABSTRACT<br />
Most hosts, including humans, are infected with multiple parasites. Helminth infection can bias the<br />
human imm<strong>un</strong>e response towards a T-helper type 2 over a type 1 response, impairing the host’s ability<br />
to control concurrent intracellular microparasite infections, such as Trypanosoma cruzi. We have revised<br />
literature with the aim to search evi<strong>de</strong>nce on the interactions between worms and T. cruzi, to ascertain<br />
if this co-infection could alter: i) the susceptibility to acquire Chagas disease; ii) the progression of the<br />
disease; and iii) the probability of congenital transmission. As a result of a human autopsy survey, people<br />
who harbored co-infection with cysticercosis and T. cruzi had a longer life expectancy than those who<br />
harbored only one of the two parasites or none, and Chagas disease was 10 times more frequent in patients<br />
co-infected with cysticercosis. Dogs suffering from Chagas disease only, showed impaired heart lesions<br />
compared with those presenting co-infection with Dirofilaria immitis. Chronic helminth infections in<br />
mice showed a significant influence in the susceptibility to T. cruzi. In primates co-infected with T. cruzi<br />
and helminths the differences fo<strong>un</strong>d in T. cruzi seroprevalence and the infection profile were the result of<br />
concomitant helminth infections since all typed isolates were the same. Co-infections with helminths and T.<br />
cruzi can interact and influence the imm<strong>un</strong>e responses to and clinical outcomes of Chagas disease. Studies<br />
addressing these interactions are nee<strong>de</strong>d both in humans and animal mo<strong>de</strong>ls.<br />
Key words: Chagas disease, Trypanosoma cruzi, polyparasitism, helminths, co-infection.<br />
RESUMEN<br />
LA ENFERMEDAD DE CHAGAS EN UN MUNDO DE HELMINTOS<br />
La mayoría <strong>de</strong> los hospedadores están infectados con más <strong>de</strong> <strong>un</strong>a especie parásita. Las infecciones<br />
por helmintos tienen la capacidad <strong>de</strong> <strong>de</strong>sviar la respuesta inm<strong>un</strong>e humana hacia el tipo Th-2, <strong>sobre</strong> el<br />
Th-1, afectando así la habilidad <strong>de</strong>l hospedador por controlar parásitos intracelulares como Trypanosoma<br />
Received: 9 March 2012. Accepted: 16 April 2012.<br />
Corresponding: Maria Teresa Galán-Pucha<strong>de</strong>s: Department of Parasitology, Faculty of Pharmacy,<br />
University of Valencia, Av. Vicent Andrés Estellés s/n, 46100 Burjasssot (Valencia),<br />
Spain. Phone: (34) 963544536. Fax: (34) 963544769.<br />
E-mail: mteresa.galan@uv.es<br />
5
M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA<br />
cruzi. Hemos revisado la literatura buscando evi<strong>de</strong>ncias <strong>sobre</strong> la interacción entre helmintos y T. cruzi<br />
para establecer si esta coinfección pudiera alterar parámetros como: i) la susceptibilidad para adquirir<br />
la enfermedad <strong>de</strong> Chagas; ii) la progresión <strong>de</strong> la enfermedad; y iii) la probabilidad <strong>de</strong> la transmisión<br />
congénita. Según <strong>un</strong> estudio realizado en autopsias humanas, personas que presentaron coinfección entre<br />
cisticercosis y T. cruzi tuvieron <strong>un</strong>a mayor expectativa <strong>de</strong> vida que aquellas que presentaron sólo <strong>un</strong>o <strong>de</strong><br />
los dos parásitos, o ning<strong>un</strong>o <strong>de</strong> ellos. Perros solo chagásicos mostraron más daños cardíacos comparados<br />
con aquellos que presentaban coinfección con Dirofilaria immitis. Las helmintiasis crónicas en ratones<br />
alteraron la susceptibilidad hacia T. cruzi. Primates coinfectados con Chagas y helmintos también mostraron<br />
diferencias tanto en la seroprevalencia <strong>de</strong> T. cruzi y como en las características <strong>de</strong> la infección, siendo los<br />
mismos tipos <strong>de</strong> T. cruzi los implicados. La coinfección con helmintos pue<strong>de</strong> ser capaz <strong>de</strong> interferir <strong>de</strong> <strong>un</strong>a<br />
manera significativa en la enfermedad <strong>de</strong> Chagas, por lo que es <strong>un</strong> potencial factor modulador no explorado<br />
ni a nivel humano ni en mo<strong>de</strong>los experimentales.<br />
Palabras clave: Enfermedad <strong>de</strong> Chagas, Trypanosoma cruzi, poliparasitismo, helmintos, coinfección.<br />
6<br />
INTRODUCTION<br />
Host-parasite interactions are rarely one-onone.<br />
Most hosts, including humans, are often infected<br />
with more than one parasite species (Telfer<br />
et al., 2010). Thus, multiple species parasitic infections<br />
seem to be the norm rather than the exception<br />
(Raso et al., 2004). However, polyparasitism<br />
is a neglected phenomenom. Despite the ubiquity<br />
of polyparasitism, its public health significance has<br />
been ina<strong>de</strong>quately studied (Pullan and Brooker,<br />
2008). In this context, the current disease-by-disease<br />
approach to mo<strong>de</strong>lling and treating infectious<br />
diseases, such as Chagas Disease (CD), may be ina<strong>de</strong>quate.<br />
CD is caused by the protozoan Trypanosoma<br />
cruzi affecting some 18 million people in Latin<br />
America. The World Health Organization estimates<br />
that over 300,000 new cases of American Trypanosomiasis<br />
and 15,000 <strong>de</strong>aths are reported annually<br />
in co<strong>un</strong>tries where 75 million people live at risk of<br />
infection. CD is neither a <strong>un</strong>ique pathological entity<br />
nor a <strong>un</strong>iform disease with the same pattern in all<br />
patients. The existence of a wi<strong>de</strong> range of clinical<br />
manifestations varying from asymptomatic to severe<br />
cardiac and/or digestive (megaesophagus and<br />
megacolon) pathologies during the chronic phase<br />
stresses the necessity to <strong>de</strong>fine the factors related<br />
with the clinical aspects of the disease. What mechanisms<br />
are involved in producing such severe pathologies?<br />
Helminths are among the most common parasites<br />
of free-living animals (Poulin, 2007). Worms<br />
have been shown to induce imm<strong>un</strong>e hyporesponsiveness<br />
in their hosts, which might affect the imm<strong>un</strong>e<br />
reaction to concomitant species since the<br />
modulation of this imm<strong>un</strong>e response is not only directed<br />
at helminths, but also at non-related antigens<br />
(Riet et al., 2007).<br />
In most areas where CD is en<strong>de</strong>mic, helminth<br />
infections are highly prevalent, and evolution of the<br />
host’s imm<strong>un</strong>e responses to both types of parasites<br />
may have adapted Chagas imm<strong>un</strong>ology to the<br />
presence of helminths.<br />
The aim of this review is to gather information<br />
on the effect of co-infection between helminths and<br />
intracellular protozoan parasites, and, in particular,<br />
between worms and Trypanosoma cruzi, to ascertain<br />
if this co-infection could alter: i) the susceptibility<br />
to acquire CD; ii) the progression of the disease; and<br />
iii) the probability of congenital transmission.<br />
INTRACELLULAR PROTOzOAN AND<br />
HELMINTH CO-INFECTIONS<br />
The characteristics of the imm<strong>un</strong>e response to<br />
infection <strong>de</strong>pend on the type of pathogen. Intracellular<br />
protozoan organisms such as Plasmodium sp.,<br />
Toxoplasma gondii, Leishamania sp., and Trypanosoma<br />
cruzi stimulate a Th1-like response associated<br />
with the production of IL-12, IFN-g, IL-2, and<br />
TNF-a and the classical activation of macrophages.<br />
In contrast, extracellular helminths induce aTh2like<br />
response with the production of IL-4, IL-5, IL-<br />
10 and the alternative activation of macrophages.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
Helminth infection can bias the human imm<strong>un</strong>e response<br />
towards a Th2 type over a Th1 and a Th17<br />
response (Walsh et al., 2009), thus impairing the<br />
host’s ability to control concurrent intracellular microparasite<br />
infections (Ezenwa et al., 2010), such<br />
as T. cruzi, and potentially modify disease dynamics.<br />
Hence, helminths are likely to make hosts more<br />
resistant to pathogens in which protection is mediated<br />
by the Th2-like response and more susceptible<br />
to pathogens in which protection is mediated by the<br />
Th1-like response.<br />
In the last five years, several interesting review<br />
articles <strong>de</strong>aling with the imm<strong>un</strong>omodulation of<br />
helminths in their hosts and its consequences on coinfections<br />
with intracellular protozoans have been<br />
published (van Riet et al., 2007; Graham, 2008;<br />
Pullan and Brooker, 2008; Helmby, 2009; Moreau<br />
and Chauvin, 2010; Supali et al., 2010; Ezenwa<br />
and Jolles, 2011, among others), coinciding on<br />
the ability of helminths to alter host imm<strong>un</strong>e<br />
responses. This ability could be of <strong>de</strong>triment to the<br />
host if it negatively interferes in protective imm<strong>un</strong>e<br />
responses against other infections or may have a<br />
beneficial role in controlling autoimm<strong>un</strong>e or other<br />
excessive inflammatory responses provoked by<br />
other pathogens.<br />
Consi<strong>de</strong>ring intracellular protozoan parasites,<br />
the effects of helminth co-infection have been<br />
studied mainly in malaria and secondarily in<br />
leishmaniosis and toxoplasmosis. There are two<br />
main aspects to elucidate as a consequence of the<br />
interaction. First, if the susceptibility to acquire<br />
the protozoan infection is higher or lower in<br />
wormy hosts, and if these hosts present better or<br />
worse clinical signs compared with those free of<br />
helminths.<br />
Malaria and helminths<br />
Although interest in the subject of the interaction<br />
between worms and malaria has recently increased,<br />
there are still no large-scale studies in humans<br />
<strong>de</strong>aling with the real consequences of this interaction,<br />
i. e. to <strong>de</strong>termine whether worms increase<br />
or <strong>de</strong>crease inci<strong>de</strong>nce and whether they protect or<br />
not from different presentations of severe malaria.<br />
An early study performed more than 30 years<br />
ago <strong>de</strong>scribed that anthelminthic treatment of<br />
severe ascariasis in a high-transmission area was<br />
followed by an increase in symptomatic malaria<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13<br />
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD<br />
(Murray et al., 1978). However, several <strong>de</strong>ca<strong>de</strong>s<br />
later, the notion that infection with helminths<br />
increases the susceptibility to malaria infection was<br />
backed (Hartgers and Yazdanbakhsh, 2006).<br />
Concerning the course of the disease, <strong>de</strong>worming<br />
malaria patients would be like ‘robbing Peter<br />
to pay Paul’ since evi<strong>de</strong>nce suggests that helminth<br />
co-infection leads to higher plasmodium loads being<br />
less harmful, as helminth infection protects from<br />
acute renal failure and cerebral malaria (Specht and<br />
Hoerauf, 2007). In a murine mo<strong>de</strong>l, Schistosoma<br />
mansoni infection reduced the inci<strong>de</strong>nce of cerebral<br />
malaria (Waknine-Grinberg et al., 2010). Recently,<br />
a survey carried out in Nigeria provi<strong>de</strong>d evi<strong>de</strong>nce<br />
that asymptomatic falciparum malaria and intestinal<br />
helminth infections do co-exist without clinical<br />
symptoms (Ojurongbe et al., 2011).<br />
However, in filarial/malaria co-infection, the<br />
presence of filarial infection may lead to a profo<strong>un</strong>d<br />
inability to mo<strong>un</strong>t an effective response to provi<strong>de</strong><br />
protection against severe malaria and also dampens<br />
the success of malaria vaccination schemes in<br />
filaria-en<strong>de</strong>mic regions of the world (Metenou et<br />
al., 2011).<br />
These analyses of helminth and malaria coinfections<br />
seem controversial <strong>de</strong>pending on the<br />
helminth species involved, the intensity of duration<br />
of worm infection, and the age of the individual<br />
<strong>un</strong><strong>de</strong>r study. Nevertheless, helminths may be<br />
a missing link in the <strong>un</strong><strong>de</strong>rstanding not only a<br />
number of facts about malaria but also the failures<br />
of certain anti-malaria vaccine strategies (Nacher,<br />
2001; Noland et al., 2010).<br />
Leishmaniosis and helminths<br />
Just as in CD, a Th1-type imm<strong>un</strong>e response<br />
is crucial in the control of leishmania infection.<br />
However, excessive inflammation caused by Th1<br />
cytokine release has also been implicated in the<br />
pathogenesis of cutaneous leishmaniosis.<br />
Two first studies examining the interplay<br />
between schistosomiasis and Leishmania major<br />
(Yoshida et al., 1999; La Flamme et al., 2002)<br />
showed not only a <strong>de</strong>lay in lesion resolution but<br />
also in its <strong>de</strong>velopment (La Flamme et al., 2002)<br />
in mice. Later, the co-infection between a filarial<br />
nemato<strong>de</strong> and also L. major in mice was studied<br />
(Lamb et al., 2005) and the results obtained were<br />
similar to those previously observed (La Flamme<br />
7
M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA<br />
et al., 2002), i.e. both helminths are capable of<br />
altering the progression of leishmaniosis. A preexisting<br />
filarial infection enhanced the imm<strong>un</strong>e<br />
response mo<strong>un</strong>ted against L. major. Co-infected<br />
mice also exhibited a lower pathology during the<br />
course of the experiment compared to mice singly<br />
infected with L. major. Additionally, there was<br />
a trend toward a larger L. major parasite load in<br />
the co-infected mice. Therefore, the pre-existing<br />
helminth infection may explain the elevated<br />
number of parasites and <strong>de</strong>layed lesion size.<br />
However, co-infection with tapeworm Taenia<br />
crassiceps led to increased lesion sizes upon<br />
subsequent L. major and L. mexicana infection<br />
in mice (Ro<strong>de</strong>riguez-Sosa et al., 2006). On the<br />
other hand, comparison of the general course<br />
of Leishmania infection in L. major singly and<br />
L. major ⁄ Strongyloi<strong>de</strong>s ratti co-infected mice<br />
revealed no difference in first and second L. major<br />
infection (Kolbaum et al., 2011).<br />
It seems clear that the results of co-infection are<br />
not always consistent without taking into acco<strong>un</strong>t<br />
the helminth- and Leishmania species, the local or<br />
systemic nature of the infections, and the timing<br />
and the sequence of exposure to parasites.<br />
Only one study carried out in human´s analysed<br />
co-infection between helminths and L. braziliensis<br />
(O’Neil et al., 2007). The authors conclu<strong>de</strong>d that<br />
helminths influence both the clinical outcome and<br />
the imm<strong>un</strong>e response of patients with leishmaniosis.<br />
Patients with helminths tend to have smaller main<br />
lesions whose healing takes longer than those in<br />
their helminth-negative co<strong>un</strong>terparts.<br />
Toxoplasmosis and helminths<br />
More than 30 years ago the concomitant<br />
infection Schistosoma-Toxoplasma in albino mice<br />
was studied (Kloetzel et al., 1977). The results<br />
<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>d on the time-course evolution of the<br />
initial infection. When toxoplasmic mice were<br />
infected with S. mansoni few notable effects were<br />
observed. However, S. mansoni infection was much<br />
more severe in mice previously infected with the<br />
helminth and subsequently by T. gondii. The same<br />
results were obtained years later (Marshall et al.,<br />
1999), since the mortality rate was higher when<br />
mice with schistosomiasis were infected with the<br />
protozoan.<br />
In other helminth infections such as Nip-<br />
8<br />
postrongylus brasiliensis and Fasciola hepatica,<br />
potent imm<strong>un</strong>e responses to T. gondii were capable<br />
of suppressing the responses to helminth infections<br />
(Liesenfeld et al., 2004; Miller et al., 2009). However,<br />
infection of mice with N. brasiliensis did not<br />
alter imm<strong>un</strong>e responses to subsequent infection<br />
with T. gondii and did not alleviate gut pathology<br />
or prevent <strong>de</strong>ath of mice, while prior infection with<br />
Heligmosomoi<strong>de</strong>s polygyrus led to the <strong>de</strong>velopment<br />
of suboptimal adaptive imm<strong>un</strong>ity against T.<br />
gondii, essential for long-term protection against<br />
this parasite (Khan et al., 2008). Once more, the results<br />
of co-infection are not always consistent, thus<br />
highlighting the importance of the species involved<br />
and the sequence of exposure to parasites.<br />
Concerning susceptibility, it has been fo<strong>un</strong>d<br />
that persons infected with Toxocara spp. were<br />
more likely to be infected with T. gondii, and<br />
similarly, persons infected with T. gondii were<br />
more likely to be infected with Toxocara spp.<br />
(Jones et al., 2008).<br />
CHAGAS DISEASE AND HELMINTHS<br />
In humans<br />
To our knowledge there is only one published<br />
paper that <strong>de</strong>als with co-infection between CD and<br />
helminths in humans. An epi<strong>de</strong>miological analysis<br />
in patients co-infected with CD and cysticercosis<br />
was conducted by means of data obtained from<br />
autopsies performed in 1501 corpses (Faleiros<br />
et al., 2009). The authors fo<strong>un</strong>d that CD was 10<br />
times more frequent in patients co-infected with<br />
cysticercosis. Intriguingly, the authors also fo<strong>un</strong>d<br />
that co-infected patients had a longer survivorship<br />
compared to those suffering from CD only or those<br />
with cysticercosis only and even those persons<br />
without any infection.<br />
The impact of co-infection between CD<br />
and concomitant helminth infections has been<br />
analysed in some other hosts such as mice, dogs<br />
and primates.<br />
In mice<br />
Almost 40 years ago, albino mice were exposed<br />
concomitantly to S. mansoni and T. cruzi (Kloetzel<br />
et al., 1973). The findings were very similar to those<br />
obtained in the interaction between S. mansoni<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
and Toxoplasma mentioned above. The authors<br />
observed an enhanced and more persistent T. cruzi<br />
parasitaemia in mixed infections.<br />
It has also been fo<strong>un</strong>d that the presence of<br />
Taenia crassiceps cysticerci in mice modified the<br />
imm<strong>un</strong>e response and the susceptibility to T. cruzi<br />
(Rodriguez et al., 1999). These modifications also<br />
<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>d on the time-course evolution of the initial<br />
infection, since co-infection with the protozoan in<br />
the early stages of the helminth infection induced<br />
a <strong>de</strong>lay in the onset of parasitaemia. However, a<br />
significant increase in susceptibility to T. cruzi was<br />
observed only when mice were co-infected in the<br />
late stages, i.e. when the helminth load is heavier<br />
and a Th2 type response against it is predominant.<br />
Thus, in late co-infection, parasitaemia presented<br />
an early increase, leading to a fourfold parasite<br />
load over the singly infected mice at the peak of<br />
parasitaemia.<br />
In dogs<br />
Natural Dirofilaria immitis and T. cruzi coinfection<br />
was recently studied in dogs from Mexico<br />
(Cruz-Chan et al., 2010). The authors observed a<br />
relatively high prevalence of D. immitis and T. cruzi<br />
co-infection as well as a <strong>de</strong>creased inflammatory<br />
reaction in the heart of D. immitis and T. cruzi<br />
co-infected dogs compared to those only affected<br />
by CD. The authors suggested that D. immitis<br />
infection may modulate T. cruzi imm<strong>un</strong>opathology<br />
by <strong>de</strong>creasing the inflammatory imm<strong>un</strong>e response<br />
induced by T. cruzi and also suggested that great<br />
care should be taken in the interpretation of<br />
imm<strong>un</strong>ological and pathological data from naturally<br />
infected animals, as co-infection may significantly<br />
interfere with host responses and should be taken<br />
into acco<strong>un</strong>t by researchers and clinicians.<br />
In primates<br />
A study on the parasite comm<strong>un</strong>ity interactions<br />
between T. cruzi and intestinal helminths was<br />
performed in wild primates (the gol<strong>de</strong>n lion tamarin<br />
Leontopithecus rosalia and the gol<strong>de</strong>n-hea<strong>de</strong>d<br />
lion tamarin L. chrysomelas) in Brazil (Monteiro<br />
et al., 2007). According to the authors, a better<br />
<strong>un</strong><strong>de</strong>rstanding of the epi<strong>de</strong>miology of T. cruzi in the<br />
wild may improve knowledge on the risk of new<br />
cases and the clinical course of CD in humans and<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13<br />
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD<br />
other mammal species. The authors stated that the<br />
differences fo<strong>un</strong>d in T. cruzi seroprevalence and the<br />
infection profile of the studied primate populations<br />
are the result of concomitant helminth infections.<br />
The authors fo<strong>un</strong>d significantly higher helminth<br />
prevalences in T. cruzi infected tamarins than in T.<br />
cruzi seronegative ones. T. cruzi parasitaemia also<br />
varied <strong>de</strong>pending on the helminth species, which is<br />
the reason why the authors stated that these distinct<br />
T. cruzi infection profiles could not be explained by<br />
the T. cruzi genotype as all typed isolates were the<br />
same.<br />
The obtained data suggested to the authors that<br />
T. cruzi infection could have both beneficial and<br />
<strong>de</strong>trimental effects on the hosts: not only lowering<br />
helminth-linked <strong>de</strong>ath rates but also lowering their<br />
ability to rid themselves of helminth infection. T.<br />
cruzi and helminths would both benefit from these<br />
effects, through increased transmission rates to new<br />
hosts, thanks to the longer persistence of infected<br />
hosts in the population.<br />
Concerning the health status, those tamarins coinfected<br />
with helminths and T. cruzi, were healthier<br />
than those only harbouring helminths (Monteiro et<br />
al., 2010).<br />
Could co-infection with chronic helminthiases<br />
increase the risk of mother-child transmission<br />
of CD?<br />
Parasitaemia in pregnant women seems to be<br />
an important factor contributing to congenital<br />
transmission of T. cruzi. Pregnant women displaying<br />
high parasitaemia present a higher transmission<br />
risk than chronically infected women in whom<br />
blood parasites are hardly <strong>de</strong>tectable (Carlier and<br />
Truyens, 2010; Brutus et al., 2010).<br />
Maternal co-infection with T. cruzi and HIV<br />
results in increasing frequency and severity of<br />
congenital CD, highlighting the important role<br />
of maternal imm<strong>un</strong>ity and high parasitaemia<br />
in favoring parasite transmission to the fetus<br />
(Scapellato et al., 2009; Carlier and Truyens,<br />
2010). Mothers transmitting T. cruzi to their fetuses<br />
display lower T-cell mediated imm<strong>un</strong>e responses to<br />
parasites and produce less IFN-g, which probably<br />
contributes to an increase in parasitaemia (Carlier<br />
and Truyens, 2010).<br />
All the co-infection cases between CD and<br />
chronic helminth infections analyzed resulted<br />
9
M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA<br />
in an increase of T. cruzi parasitaemia, precisely<br />
one of the risks favouring vertical transmission.<br />
Additionally, helminths can also contribute to a<br />
lower IFN-g production via a predominant Th-2<br />
response in pregnant women. Therefore, it would<br />
be interesting to evaluate the helminthological<br />
status of chagasic pregnant women and its possible<br />
influence on vertical transmission.<br />
10<br />
DISCUSSION<br />
In or<strong>de</strong>r to address the questions of whether<br />
helminth infection could affect the susceptibility to<br />
subsequent co-infection with T. cruzi, and whether<br />
a changing environment and cytokine profile<br />
induced by worms may influence the outcome of<br />
CD compared with hosts exclusively infected with<br />
T. cruzi, it was fo<strong>un</strong>d that the presence of helminths<br />
modifies both the susceptibility and, in most cases,<br />
the course of CD.<br />
Concerning susceptibility, in all the studied hosts<br />
(humans, mice, dogs and primates) the presence<br />
of worms increases the likelihood to acquire CD<br />
mainly in the helminth chronic phase. In addition,<br />
co-infection seems to lengthen survivorship of coinfected<br />
hosts compared with those only harboring<br />
T. cruzi. The presence of helminths also tends to<br />
increase T. cruzi parasitaemia and certain helminths<br />
may even improve the health status of chagasic<br />
hosts.<br />
One of the main implications of these findings<br />
is that helminth co-infections could potentially<br />
modify the course of CD among patients with the<br />
same T. cruzi DTU (discrete typing <strong>un</strong>its) (Monteiro<br />
et al., 2007).<br />
In the last two <strong>de</strong>ca<strong>de</strong>s, studies explaining<br />
severe forms of CD have mainly been based on<br />
imm<strong>un</strong>ological findings (Dutra et al., 2005, Rodrigues<br />
et al., 2010). Chagasic myocarditis is<br />
thought to be due to the presence of parasites in<br />
the lesions. However, an <strong>un</strong>balanced imm<strong>un</strong>e homeostasis<br />
can trigger parallel autoimm<strong>un</strong>e phenomena<br />
which increase the imm<strong>un</strong>e response,<br />
thus worsening the outcome of the disease (Gutierrez<br />
et al., 2009). Several results evi<strong>de</strong>nce that an<br />
exacerbated Th1-like specific imm<strong>un</strong>e response<br />
against T. cruzi with high levels of IFN-γ and low<br />
levels of the anti-inflamatory cytokine IL-10 is established<br />
in T. cruzi-infected individuals present-<br />
ing cardiac disease (Gomes et al., 2003). In addition,<br />
there is some limited evi<strong>de</strong>nce regarding the<br />
role of Th17-mediated responses to T. cruzi. The<br />
IL-17 produced during the acute phase of CD controls<br />
cardiac inflammation by modulating the Th1<br />
response, and this pro-inflammatory IL-17 is also<br />
required for the elimination of T. cruzi (Gue<strong>de</strong>s et<br />
al., 2010; Miyazaki et al., 2010). In contrast IL-<br />
27, which suppresses Th17 responses, is beneficial<br />
for the host during T. cruzi infection (Yoshida<br />
and Miyazaki, 2008).<br />
Surprisingly, there is no mention in the literature<br />
that evaluates the possible role of helminth<br />
infections in human CD when helminths are able<br />
to suppress all types (Th1, Th2, and Th17) of responses<br />
(see ref Osada and Kanazawa, 2010).<br />
Consi<strong>de</strong>ring the classical Th1/Th2 paradigm, it is<br />
reasonable to speculate that a helminth-induced<br />
Th2 response with production of IL-4, IL-5, IL-6<br />
and IL-10 skewing with downregulation of Th1<br />
imm<strong>un</strong>e responses could result in an amelioration<br />
of Th1 diseases, such as CD. As IL-4 is known to<br />
suppress Th17 <strong>de</strong>velopment (Romagnani, 2006), a<br />
Th17 response could also be suppressed as well as<br />
Th1 response in helminth-infected hosts. In fact,<br />
certain helminth infections reduce IL-17 mRNA<br />
by MLN cells and inhibit IL-17 production (Elliot<br />
et al., 2008). This is of relevance when consi<strong>de</strong>ring<br />
persistent parasites such as helminths which<br />
are wi<strong>de</strong>ly distributed in humans in <strong>de</strong>veloping<br />
co<strong>un</strong>tries (Maizels et al., 1993), where they coexist<br />
with T. cruzi. Wormy populations are exposed to<br />
two potential risks, namely an increased susceptibility<br />
to T. cruzi and a yet <strong>un</strong>researched course of<br />
the disease. All of this should prompt research on<br />
the possible epi<strong>de</strong>miological relevance of helminth<br />
infections and the impact when controlling them<br />
on the inci<strong>de</strong>nce or the pathogenesis of CD. The<br />
presence of helminth co-infections may represent<br />
a much more important challenge for public health<br />
than recognized <strong>un</strong>til now.<br />
In other co-infections of human parasites such<br />
as malaria and hookworms, it has been stated<br />
that it would be possible to <strong>de</strong>fine co-infection<br />
as a specific “disease”, separate from malaria by<br />
itself, or hookworm by itself (Payne et al., 2009),<br />
and this may also hold true for CD and helminths.<br />
Thus, gathering more reliable data on the true<br />
parasitological status of all chagasic patients would<br />
be <strong>de</strong>sirable.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
CONCLUDING REMARKS<br />
Humans are exposed to a large number of<br />
pathogens interacting in a dynamic manner over<br />
time. Hence, the imm<strong>un</strong>ological networks activated<br />
as a result of these infections are multifactorial<br />
and complicated to study. Classical studies directed<br />
at one single parasite species are rather simplistic<br />
since they ignore the diverse outcome of the multiple<br />
interactions which result from co-infections<br />
by micro- and macroparasites.<br />
There are reasonable indications that coinfections<br />
with helminths and T. cruzi can interact<br />
and influence the imm<strong>un</strong>e responses to and clinical<br />
outcomes of CD. However, studies addressing<br />
these interactions are nee<strong>de</strong>d both in humans and<br />
animal mo<strong>de</strong>ls. A great number of people are likely<br />
to be co-infected with helminths and CD, and the<br />
influence of helminth infections on the course of<br />
the disease needs careful investigation in large<br />
populations. Each type of helminth infection should<br />
be studied separately, since each one of them may<br />
have different effects on the course of the disease.<br />
Treatment of helminth infections ensued by a<br />
<strong>de</strong>tailed follow-up on the infection rate and on the<br />
symptoms of CD will be important to establish the<br />
precise effect of helminth infections on the outcome<br />
of T. cruzi parasitaemia and disease. Needless to<br />
say, the analysis of the imm<strong>un</strong>ological profiles<br />
will shed more light on the mechanisms that are<br />
involved and experimental murine co-infections<br />
will help to dissect the molecular imm<strong>un</strong>ological<br />
pathways involved.<br />
A better <strong>un</strong><strong>de</strong>rstanding of CD in a wormy<br />
world will not only improve the evaluation of T.<br />
cruzi vaccine trials and therapeutic measures but<br />
will also reveal the implications of anthelminthic<br />
treatment schemes in the course of CD and the risk<br />
of vertical transmission.<br />
REFERENCES<br />
1. BRUTUS L, CASTILLO H, BERNAL C, SALAS<br />
NA, SCHNEIDER D, SANTALLA JA, CHIPPAUx<br />
JP. 2010. Detectable Trypanosoma cruzi parasitemia<br />
during pregnancy and <strong>de</strong>livery as a risk factor for<br />
congenital Chagas disease. Am J Trop Med Hyg 83:<br />
1044-1047.<br />
2. CARLIER Y, TRUYENS C. 2010. Maternal-Fetal<br />
Transmission of Trypanosoma cruzi. In: American Try-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13<br />
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD<br />
panosomiasis. Chagas Disease. One H<strong>un</strong>dred Years of<br />
Research (Telleria, J., Tybayrenc, M., Eds.). Elsevier,<br />
539-581.<br />
3. CRUZ-CHAN JV, QUIJANO-HERNáNDEZ I, RA-<br />
MÍREZ-SIERRA MJ, DUMONTEIL E. 2010. Dirofilaria<br />
immitis and Trypanosoma cruzi natural co-infection<br />
in dogs. Vet J 186: 399-401.<br />
4. DUTRA WO, ROCHA MOC, TExEIRA MM. 2005.<br />
The clinical imm<strong>un</strong>ology of human Chagas disease.<br />
Trends Parasitol 21: 581-587.<br />
5. ELLIOTT DE, METWALI A, LEUNG J, SETIAWAN<br />
T, BLUM AM. INCE MN, BAZZONE LE, STADEC-<br />
KER MJ, URBAN Jr JF, WEINSTOCK JV. 2008. Colonization<br />
with Heligmosomoi<strong>de</strong>s polygyrus Suppresses<br />
Mucosal IL-17 Production. J Imm<strong>un</strong>ol 181: 2414-2419.<br />
6. EZENWA VO, ETIENNE RS, LUIKART G, BEJA-<br />
PEREIRA A, JOLLES AE. 2010. Hid<strong>de</strong>n consequences<br />
of living in a wormy world: nemato<strong>de</strong> - induced<br />
imm<strong>un</strong>e suppression facilitates tuberculosis invasion in<br />
African buffalo. Am Nat 176: 613-624.<br />
7. EZENWA VO, JOLLES AE. 2011. From Host Imm<strong>un</strong>ity<br />
to Pathogen Invasion: The Effects of Helminth<br />
Coinfection on the Dynamics of Microparasites. Integr<br />
Comp Biol, 1-12 doi:10.1093/icb/icr058.<br />
8. FALEIROS AC, LINO-JUNIOR R, LIMA V, CAVE-<br />
LLANI C, ROSA CORREA R, LLAGUNO M, REIS<br />
M, TEIxEIRA V. 2009. Análisis epi<strong>de</strong>miológico <strong>de</strong><br />
pacientes coinfectados con enfermedad <strong>de</strong> Chagas y<br />
cisticercosis. Biomédica 29: 127-132.<br />
9. GOMES JAS, BAHIA-OLIVEIRA LMG, ROCHA<br />
MOC, MARTINS-FILHO OA, GAZZINELLI G,<br />
CORREA-OLIVEIRA M. 2003. Evi<strong>de</strong>nce that Development<br />
of Severe Cardiomyopathy in Human Chagas’<br />
Disease Is Due to a Th1-Specific Imm<strong>un</strong>e Response.<br />
Infect Imm<strong>un</strong> 71: 1185-1193.<br />
10. GRAHAM AL. 2008. Ecological rules governing helminth–microparasite<br />
coinfection. Proc Natl Acad Sci<br />
USA 15: 566-570.<br />
11. GUEDES PMDM, GUTIÉRREZ FRS, MAIA FL,<br />
MILANEZI CM, SILVA GK, PAVANELLI WR, SILVA<br />
JS. 2010. IL-17 Produced during Trypanosoma cruzi<br />
Infection Plays a Central Role in Regulating Parasite-<br />
Induced Myocarditis. PLoS Negl Trop Dis 4: e604.<br />
doi:10.1371/journal.pntd.0000604.<br />
12. GUTIÉRREZ FRS, GUEDES PMM, GAZZINELLI<br />
SILVA JS. 2009. The role of parasite persistence in<br />
pathogenesis of Chagas heart disease. Parasite Imm<strong>un</strong>ol<br />
31: 673-685.<br />
13. HARTGERS C, YAZDANBAKHSH M. 2006. Coinfection<br />
of helminths and malaria: modulation of the<br />
imm<strong>un</strong>e responses to malaria. Parasite Imm<strong>un</strong>ol 28:<br />
497-506.<br />
14. HELMBY H. 2009. Helminths and our imm<strong>un</strong>e system:<br />
Friend or foe? Parasitol Int 58: 121-127.<br />
15. JONES JL, KRUSZON-MORAN D, WON K, WIL-<br />
SON M, SCHANTZ PM. 2008. Toxoplasma gondii and<br />
Toxocara spp. Co-infection. Am J Trop Med Hyg 78:<br />
35-39.<br />
16. KHAN IA, HAKAK R, EBERLE K, SAYLES P,<br />
WEISS LM, URBAN JF. Jr. 2008. Coinfection with<br />
Heligmosomoi<strong>de</strong>s polygyrus Fails To Establish CD8<br />
T-Cell Imm<strong>un</strong>ity against Toxoplasma gondii. Infect<br />
Imm<strong>un</strong> 76: 1305-1313.<br />
11
M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA<br />
17. KLOETZEL K, CHIEFFI PP, FALEIROS JJ, FILHO<br />
TJ. 1977. Mortality and other parameters of concomitant<br />
infections in albino mice: the Schistosoma-Toxoplasma<br />
mo<strong>de</strong>l. Trop Geogr Med 29: 407-410.<br />
18. KLOETZEL K, FALEIROS JJ, RUAS MENDES S,<br />
STANLEY CT, SANCHES ARIAS H. 1973. Concomitant<br />
infection of albino mice by Trypanosoma cruzi and<br />
Schistosoma mansoni parasitological parameters. Trans<br />
Roy Soc Trop Med Hyg 67: 652-658.<br />
19. KOLBAUM J, RITTER, U, ZIIMARA N, BREWIG N,<br />
ESCHBACH BRELOER, M. 2011. Efficient control of<br />
Leishmania and Strongyloi<strong>de</strong>s <strong>de</strong>spite partial suppression<br />
of nemato<strong>de</strong>-induced Th2 response in co-infected<br />
mice. Parasite Imm<strong>un</strong>ol 33: 226-235.<br />
20. LA FLAMME AC, SCOTT P, PEARCE EJ. 2002.<br />
Schistosomiasis <strong>de</strong>lays lesion resolution during Leishmania<br />
major infection by impairing parasite killing by<br />
macrophages. Parasite Imm<strong>un</strong>ol 24: 339-345.<br />
21. LAMB TJ, GRAHAM AL, LE GOFF L, ALLEN JE.<br />
2005. Co-infected C57BL/6 mice mo<strong>un</strong>t appropriately<br />
polarized and compartmentalized cytokine responses to<br />
Litomosoi<strong>de</strong>s sigmodontis and Leishmania major but<br />
disease progression is altered. Parasite Imm<strong>un</strong>ol 27:<br />
317-324.<br />
22. LIESENFELD O, DUNAY IR, ERB KJ. 2004. Infection<br />
with Toxoplasma gondii Reduces Established and<br />
Developing Th2 Responses Induced by Nippostrongylus<br />
brasiliensis Infection. Infect Imm<strong>un</strong> 72: 3812-3822.<br />
23. MARSHALL AJ, BRUNET LR, VAN GESSEL Y, AL-<br />
CARAZ A, BLISS SK, PEARCE EJ, DENKERS EY.<br />
1999. Toxoplasma gondii and Schistosoma mansoni<br />
Synergize to Promote Hepatocyte Dysf<strong>un</strong>ction Associated<br />
with High Levels of Plasma TNF-a and Early<br />
Death in C57BL/6 Mice. J Imm<strong>un</strong>ol 163: 2089-2097.<br />
24. METENOU S, DEMBELE B, KONATE S, DOLO<br />
H, COULIBALY YI, DIALLO AA, SOUMAORO<br />
L, COULIBALY ME, COULIBALY SY, SANOGO<br />
D, DOUMBIA SS, TRAORÉ SF, MAHANTY S,<br />
KLION A, NUTMAN TB. 2011. Filarial Infection<br />
Suppresses Malaria-Specific Multif<strong>un</strong>ctional Th1 and<br />
Th17 Responses in Malaria and Filarial Coinfections. J<br />
Imm<strong>un</strong>ol 186: 4725-4733.<br />
25. MILLER CMD, SMITH NC, IKIN RJ, BOULTER<br />
NR, DALTON JP, DONELLY S. 2009. Imm<strong>un</strong>ological<br />
Interactions between 2 Common Pathogens, Th1-<br />
Inducing Protozoan Toxoplasma gondii and the Th2-<br />
Inducing Helminth Fasciola hepatica. PLoS ONE 4:<br />
e5692. doi:10.1371/journal.pone.0005692.<br />
26. MIYAZAKI Y, HAMANO S, WANG S, SHIMANOE<br />
Y, IWAKURA Y, YOSHIDA H. 2010. IL-17 is necessary<br />
for host protection against acute-phase Trypanosoma<br />
cruzi infection. J Imm<strong>un</strong>ol 185: 1150-1157.<br />
27. MONTEIRO RV, DIETZ JM, JANSEN AM. 2010.<br />
The impact of concomitant infections by Trypanosoma<br />
cruzi and intestinal helminths on the health of wild<br />
gol<strong>de</strong>n and gol<strong>de</strong>n-hea<strong>de</strong>d lion tamarins. Res Vet. Sci<br />
89: 27-35.<br />
28. MONTEIRO RV, DIETZ JM, RABOY B, BECK B,<br />
VLEESCHOWER KD, BAKER A, MARTINS A,<br />
JANSEN AM. 2007. Parasite comm<strong>un</strong>ity interactions:<br />
Trypanosoma cruzi and intestinal helminths infecting<br />
wild gol<strong>de</strong>n lion tamarins Leontopithecus rosalia and<br />
gol<strong>de</strong>n-hea<strong>de</strong>d lion tamarins L. chrysomelas (Callitri-<br />
12<br />
chidae, L., 1766). Parasitol Re 101: 1689-1698.<br />
29. MOREAU E, CHAUVIN A. 2010. Imm<strong>un</strong>ity against<br />
Helminths: Interactions with the Host and the Intercurrent<br />
Infections. J Biomed Biotechnol. ID428593: 1-9<br />
doi: 10.1155/2010/428593.<br />
30. MURRAY J, MURRAY A, MURRAY M, MURRAY<br />
C. 1978. The biological suppression of malaria: an<br />
ecological and nutritional interrelationship of a host<br />
and two parasites. Am. J Clin Nutr 31: 1363-1366.<br />
31. NACHER M. 2001. Malaria vaccine trials in a wormy<br />
world. Trends Parasitol 17: 563-565.<br />
32. NOLAND GS, CHOWDHURY DR, URBAN JF Jr,<br />
ZAVALA F, KUMAR N. 2010. Helminth infection impairs<br />
the imm<strong>un</strong>ogenicity of a Plasmodium falciparum<br />
DNA vaccine, but not irradiated sporozoites, in mice.<br />
Vaccine 28: 2917-2923.<br />
33. OJURONGBE O, ADEGBAYI AM, BOLAJI OS,<br />
AKINDELE AA, ADEFIOYE OA, ADEYEBA OA.<br />
2011. Asymptomatic falciparum malaria and intestinal<br />
helminths co-infection among school children in<br />
Osogbo, Nigeria. J Res Med Sci 16: 680-686.<br />
34. O’NEAL SE, GUIMARAES LH, MACHADO PR,<br />
ALCANTARA L, MORGAN DJ, PASSOS S. GLESBY<br />
MJ, CARVALHO EM. 2007. Influence of Helminth<br />
Infections on the Clinical Course of and Imm<strong>un</strong>e<br />
Response to Leishmania braziliensis Cutaneous<br />
Leishmaniasis. J Infect Dis 195: 142-148.<br />
35. OSADA Y, KANAZAWA T. 2010. Parasitic Helminths:<br />
New Weapons against Imm<strong>un</strong>ological Disor<strong>de</strong>rs. J<br />
Biomed Biotechnol, ID 743758, doi:10.1155/2010<br />
/743758.<br />
36. PAYNE RJH, TURNER L, MORGAN ER. 2009.<br />
Inappropriate measures of population health for<br />
parasitic disease? Trends Parasitol 25: 393-395.<br />
37. POULIN R. 2007. Evolutionary ecology of parasites.<br />
2nd ed. Princeton University Press.<br />
38. PULLAN R, BROOKER S. 2008. The health impact<br />
of polyparasitism in humans: are we <strong>un</strong><strong>de</strong>r-estimating<br />
the bur<strong>de</strong>n of parasitic diseases? Parasitology 135: 783-<br />
794.<br />
39. RASO G, LUGINBüHL A, ADJOUA CA, TIAN-<br />
BI NT, SILUÉ KD, MATTHYS B, VOUNATSOU P,<br />
WANG Y, DUMAS M-E, HOLMES E, SINGER BH,<br />
TANNER M, N’GORAN EKN, UTZINGER J. 2004.<br />
Multiple parasite infections and their relationship to<br />
self-reported morbidity in a comm<strong>un</strong>ity of rural Coˆte<br />
d’Ivoire. Int J Epi<strong>de</strong>miol 33: 1092-1102.<br />
40. RODRIGUES CM, VALADARES HMS, FRAN-<br />
CISCO AF, ARANTES JM, CAMPOS CF, TEIxEI-<br />
RA-CARVALHO A, MARTINS-FILHO OA, SILVA<br />
ARAUJO MS, ESTEVES ARANTES RM, CHIARI<br />
E, FRANCO GR, MACHADO CR, JUNHO PENA<br />
SD, CAETANO FARIA AM, MACEDO AM. 2010.<br />
Coinfection with Different Trypanosoma cruzi Strains<br />
Interferes with the Host Imm<strong>un</strong>e Response to Infection.<br />
PLoS Negl Trop Dis 4, e846. doi:10.1371/journal.<br />
pntd.0000846.<br />
41. RODRÍGUEZ M, TERRAZAS LI, MARQUEZ R,<br />
BOJALIL R. 1999. Susceptibility to Trypanosoma<br />
cruzi is modified by a previous non-related infection.<br />
Parasite Imm<strong>un</strong>ol 21: 177-185.<br />
42. RODRÍGUEZ-SOSA M, RIVERA-MONTOYA I,<br />
ESPINOZA A, ROMERO-GRIJALVA M, LÓPEZ-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
FLORES R, GONZáLEZ J, TERRAZAS LL. 2006.<br />
Acute cysticercosis favours rapid and more severe<br />
lesions caused by Leishmania major and Leishmania<br />
mexicana infection, a role for alternatively activated<br />
macrophages. Cell Imm<strong>un</strong>ol 242: 61-71.<br />
43. ROMAGNANI S. 2006. Regulation of the T cell<br />
response. Clin Exp Allergy 36: 1357-1366.<br />
44. SCAPELLATO PG, BOTTARO EG, RODRÍGUEZ-<br />
BRIESCHKE MT. 2009. Mother-child transmission<br />
of Chagas disease: could coinfection with human<br />
imm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>ficiency virus increase the risk? Rev Soc<br />
Brasil Med Trop 42: 107-109.<br />
45. SPECHT S, HOERAUF A. 2007. Does helminth elimination<br />
promote or prevent malaria? Lancet 369: 446-<br />
447.<br />
46. SUPALI T, VERWEIJ JJ, WIRIA AE, DJUARDI Y,<br />
HAMID F, KAISAR MMM, WAMMES LJ, VAN<br />
LIESHOUT L, LUTY AJF, SARTONO E, YAZDAN-<br />
BAKHSH M. 2010. Polyparasitism and its impact on<br />
the imm<strong>un</strong>e system. Int J Parasitol 40: 1171-1176.<br />
47. TELFER S, LAMBIN x, BIRTLES R, BELDOMENI-<br />
CO P, SARAH S, PATERSON S, BEGON M. 2010.<br />
Species Interactions in a Parasite Comm<strong>un</strong>ity Drive<br />
Infection Risk in a Wildlife Population. Science 330:<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13<br />
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD<br />
243-246.<br />
48. VAN RIET E, HARTGERS FC, YAZDANBAKHSH<br />
M. 2007. Chronic helminth infections induce imm<strong>un</strong>omodulation:<br />
consequences and mechanisms. Imm<strong>un</strong>obiol<br />
212: 475-490.<br />
49. WALSH KP, BRADY MT, FINLAY CM, BOON L,<br />
MILLS KHG. 2009. Infection with a Helminth Parasite<br />
Attenuates Autoimm<strong>un</strong>ity through TGF-b-Mediated<br />
Suppression of Th17 and Th1 Responses. J Imm<strong>un</strong>ol<br />
183: 1577-1586.<br />
50. WAKNINE-GRINBERG JH, GOLD D, OHAYON<br />
A, FLESCHER E, HEYFETS A, DOENHOFF<br />
MJ, SCHAMM G, HAAS H, GOLENSER J.<br />
2010. Schistosoma mansoni infection reduces the<br />
inci<strong>de</strong>nce of murine cerebral malaria. Malaria J 9: 5<br />
doi:10.1186/1475-2875-9-5.<br />
51. YOSHIDA H, MIYAZAKI Y. 2008. Regulation of<br />
imm<strong>un</strong>e responses by interleukin- 27. Imm<strong>un</strong>ol Rev<br />
226: 234-247.<br />
52. YOSHIDA A, MARUYAMA H, YABU Y, AMANO T,<br />
KOBAYAKAWA T, OHTA N. 1999. Imm<strong>un</strong>e response<br />
against protozoal and nematodal infection in mice with<br />
<strong>un</strong><strong>de</strong>rlying Schistosoma mansoni infection. Parasitol<br />
Int 48: 73-79.<br />
13
Artículo Original<br />
14<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22<br />
Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol <strong>de</strong><br />
<strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> Trypanosoma cruzi obtenidos <strong>de</strong> pacientes<br />
venezolanos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas infectados por<br />
mecanismos <strong>de</strong> transmisión oral y vectorial<br />
MUÑOZ-CALDERÓN A., SANTANIELLO A., PEREIRA A., YANNUZZI J.,<br />
DÍAZ-BELLO Z. y ALARCÓN <strong>de</strong> NOYA B.<br />
Sección <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>ología, Instituto <strong>de</strong> Medicina Tropical - Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela, Caracas, Distrito Capital,<br />
Venezuela.<br />
ABSTRACT<br />
IN VITRO SUSCEPTIBILITY TO NIFURTIMOX AND BENzNIDAzOLE TO TRYPANOSOMA<br />
CRUZI ISOLATES OBTAINED FROM VENEzUELAN PATIENTS WITH CHAGAS DISEASE<br />
INFECTED BY ORAL AND VECTOR TRANSMISSION MECHANISMS)<br />
The frequent reports of outbreaks of acute Chagas disease (CD) by ingestion of contaminated food,<br />
illustrate the importance of this transmission mo<strong>de</strong>l. The present study, evaluate for the first time the in vitro<br />
susceptibility of parasite isolates obtained from Venezuelan patients with Chagas’ disease infected by oral<br />
and vector transmission mechanisms to the drugs Nifurtimox and Benznidazole. We used epimastigotes<br />
and trypomastigotes of Trypanosoma cruzi isolates from four patients with CD. Concentrations of 1x10 8<br />
P/mL were incubated for 72 hours with drugs Nifurtimox and Benznidazole in a range of 0.03 to 4000μM.<br />
Used the MTT colorimetric technique for assessing cell viability and calculated the IC 50 values for each<br />
of the isolated parasites. The isolates tested and two parasitic <strong>de</strong>velopmental stages were shown to be<br />
susceptible to Nifurtimox and Benznidazole drugs with IC 50 values vary greatly among themselves. The<br />
statistical analysis showed that the drug Nifurtimox was more effective than Benznidazole (p < 0.05) in the<br />
trypomastigote stage and two stage epimastigote isolates. We could characterize the in vitro activity of the<br />
drugs Nifurtimox and Benznidazole against human isolates of T. cruzi with different routes of transmission<br />
in Venezuela, showing greater sensitivity on the epimastigote stage with respect to the trypomastigote stage.<br />
Key words: Chagas disease. Trypanosoma cruzi. Oral transmission. IC 50 . Epimastigote. Trypomastigote.<br />
Recibido: 1 <strong>de</strong> Abril <strong>de</strong> 2012. Aceptado: 10 <strong>de</strong> J<strong>un</strong>io <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Muñoz-Cal<strong>de</strong>rón A. Sección <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>ología, Instituto <strong>de</strong> Medicina Tropical, Facultad <strong>de</strong> Medicina,<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela, Los Chaguaramos, Código Postal 1041, Caracas, Venezuela.<br />
E-mail: arturomc35@gmail.com; belkisyole@yahoo.com.mx. Tel.: (0058)212-6053560. Tel.-fax:<br />
(0058)212-6053551.
RESUMEN<br />
Los frecuentes reportes <strong>de</strong> brotes agudos <strong>de</strong> enfermedad <strong>de</strong> Chagas (ECh) por la ingesta <strong>de</strong> comida<br />
contaminada, ilustran la importancia <strong>de</strong> este mo<strong>de</strong>lo <strong>de</strong> transmisión. El presente evalúa por primera vez,<br />
la susceptibilidad in vitro <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s parasitarios obtenidos <strong>de</strong> pacientes venezolanos con enfermedad <strong>de</strong><br />
Chagas, infectados por mecanismos <strong>de</strong> transmisión oral y vectorial a los fármacos Nifurtimox y Benznidazol.<br />
Para su evaluación, se utilizaron formas epimastigote y tripomastigote <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> Trypanosoma cruzi<br />
proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> pacientes con ECh. Concentraciones <strong>de</strong> 1x10 8 P/mL se incubaron por 72 horas con los<br />
fármacos Nifurtimox y Benznidazol en <strong>un</strong> rango <strong>de</strong> 0,03 a 4000µM. La viabilidad celular se evaluó con<br />
la técnica colorimétrica <strong>de</strong>l MTT, calculando los valores <strong>de</strong> CI 50 . Los <strong>aislado</strong>s parasitarios evaluados y sus<br />
estadios evolutivos mostraron ser susceptibles a los fármacos Nifurtimox y Benznidazol con valores <strong>de</strong><br />
CI 50 variables entre sí. El análisis estadístico arrojó que el fármaco Nifurtimox resultó más efectivo que el<br />
Benznidazol (p < 0,05) en el estadio tripomastigote y en dos <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s en estadio epimastigote. Con<br />
este trabajo se pudo caracterizar la actividad “in vitro” <strong>de</strong> los fármacos Nifurtimox y Benznidazol contra<br />
<strong>aislado</strong>s venezolanos <strong>de</strong> T. cruzi, evi<strong>de</strong>nciándose mayor sensibilidad <strong>sobre</strong> el estadio <strong>de</strong> epimastigote con<br />
respecto al estadio tripomastigote.<br />
Palabras clave: Enfermedad <strong>de</strong> Chagas. Trypanosoma cruzi. Transmisión oral. CI 50 . Epimastigote.<br />
Tripomastigote.<br />
INTRODUCCIóN<br />
La enfermedad <strong>de</strong> Chagas (ECh), incluida por<br />
la Organización M<strong>un</strong>dial <strong>de</strong> la Salud entre las “enfermeda<strong>de</strong>s<br />
<strong>de</strong>satendidas u olvidadas”, es endémica<br />
en el continente americano. Se estima que 15 a 16<br />
millones <strong>de</strong> personas están infectadas y que 75 a<br />
90 millones se encuentran expuestas a la infección<br />
(Coura, 2007). En América Latina, la transmisión<br />
<strong>de</strong>l protozoario Trypanosoma cruzi, agente causal<br />
<strong>de</strong> la ECh, se ha reducido <strong>de</strong> manera constante a<br />
través <strong>de</strong> <strong>un</strong>a serie <strong>de</strong> iniciativas multinacionales<br />
encaminadas a la eliminación <strong>de</strong> los vectores domésticos<br />
en amplias zonas, así como la <strong>de</strong>tección<br />
<strong>de</strong> donantes <strong>de</strong> sangre infectados con T. cruzi<br />
(Schofield et al., 2006). Sin embargo, existen serios<br />
problemas para obtener <strong>un</strong>a completa erradicación<br />
<strong>de</strong> la transmisión principalmente por ser <strong>un</strong>a zoonosis.<br />
Adicionalmente se presentan limitaciones<br />
en la disponibilidad <strong>de</strong> quimioterapias específicas<br />
y <strong>de</strong>ficiencias en la cobertura <strong>de</strong>l tratamiento para<br />
individuos actualmente infectados.<br />
La ten<strong>de</strong>ncia a la migración global incrementa<br />
el alcance <strong>de</strong> expandir la amenaza exponencialmente,<br />
<strong>de</strong>s<strong>de</strong> las áreas rurales a las urbanas y <strong>de</strong> regiones<br />
endémicas a no-endémicas (Franco-Pare<strong>de</strong>s<br />
et al., 2007; Rassi et al., 2010). A este escenario<br />
epi<strong>de</strong>miológico se aña<strong>de</strong> <strong>un</strong> nuevo elemento en la<br />
transmisión, como es la infección oral. El primer<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22<br />
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA<br />
brote fue <strong>de</strong>scrito en Brasil en 1968 reportándose<br />
varias muertes y causado por la ingesta <strong>de</strong> jugo <strong>de</strong>l<br />
fruto Açaí proveniente <strong>de</strong> la palma <strong>de</strong> la familia<br />
Aracaceae (Nóbrega et al., 2009).<br />
Venezuela no ha escapado a esta ten<strong>de</strong>ncia, reportándose<br />
en 2007 el brote más significativo <strong>de</strong><br />
ECh urbano por transmisión oral en América Latina,<br />
confirmándose 103 casos positivos (Alarcón <strong>de</strong><br />
Noya et al., 2010). En cuanto al tratamiento <strong>de</strong> la<br />
ECh, no hay vac<strong>un</strong>as disponibles y la quimioterapia<br />
sigue siendo precaria con sólo dos compuestos<br />
nitro-heterocíclicos disponibles: nifurtimox (NF)<br />
(lanzado por Bayer en 1967, Lampit®) y benznidazol<br />
(BZ) (lanzado por Roche en 1972, Rochagan®<br />
y Radanil®) (Coura y <strong>de</strong> Castro, 2002). Estos fármacos<br />
presentan severas limitaciones como la alta<br />
frecuencia <strong>de</strong> efectos sec<strong>un</strong>darios in<strong>de</strong>seables, largos<br />
protocolos <strong>de</strong> tratamiento y la limitada actividad<br />
anti-parasítica. Estudios clínicos reportan 80%<br />
<strong>de</strong> cura parasitológica en la fase aguda (Cançado<br />
1999; Dias Gontijo 1999; Bahia-Oliverira et al.,<br />
2000), mientras que en fase crónica sólo 5-20%<br />
<strong>de</strong> los pacientes son consi<strong>de</strong>rados curados según<br />
la evaluación por 20 o más años <strong>de</strong> seguimiento<br />
(Urbina y Docampo, 2003; Jannin y Villa, 2007;<br />
Cançado, 2002; Dias, 2006). Las razones para esta<br />
marcada diferencia <strong>de</strong> actividad anti-parasítica en<br />
las fases aguda y crónica <strong>de</strong> la ECh no están completamente<br />
dilucidadas (Cançado, 2002). Adicio-<br />
15
A. MUÑOZ et al.<br />
cionalmente, existen diferencias en los resultados<br />
terapéuticos según la zona geográfica evaluada<br />
(Rassi y Luquetti, 1992; Y<strong>un</strong> et al., 2009), lo que<br />
pue<strong>de</strong> ser explicado por la presencia <strong>de</strong> diferentes<br />
linajes <strong>de</strong>l parásito en las áreas geográficas, con T.<br />
cruzi I predominando en América Central y norte<br />
<strong>de</strong> Sur América y T. cruzi II en el resto <strong>de</strong> Sur<br />
América (Carranza et al., 2009). Las variaciones<br />
en la susceptibilidad a los fármacos entre <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> T. cruzi han sido documentadas ampliamente en<br />
estudios in vitro e in vivo (Filardi y Brener, 1987;<br />
Murta et al., 1998; Toledo et al., 2003; Villareal et<br />
al., 2004; L<strong>un</strong>a et al., 2009; Moreno et al., 2010).<br />
Teniendo en cuenta la variabilidad en la<br />
susceptiblidad a los fármacos NF y BZ por parte<br />
<strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi ya <strong>de</strong>scrita y en vista <strong>de</strong><br />
la evi<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> no curación por parte <strong>de</strong> <strong>un</strong> gran<br />
número <strong>de</strong> pacientes con ECh tratados con BZ y/o<br />
NF, basada en la obtención <strong>de</strong> hemocultivos posttratamiento,<br />
PCR positivas y porcentajes elevados<br />
<strong>de</strong> anticuerpos líticos, el presente estudio propone<br />
evaluar si <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi obtenidos <strong>de</strong>l brote<br />
<strong>de</strong> ECh urbano por transmisión oral ocurrido<br />
en Caracas-Venezuela en el 2007, presentan<br />
variaciones en la susceptibilidad in vitro a los<br />
fármacos NF y BZ. Adicionalmente, se evaluará<br />
si el mecanismo <strong>de</strong> transmisión <strong>de</strong> la enfermedad<br />
influye en la susceptibilidad a los fármacos NF y<br />
BZ, teniendo como referencia <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi<br />
obtenidos <strong>de</strong> pacientes con ECh por transmisión<br />
vectorial.<br />
16<br />
MATERIALES Y MÉTODOS<br />
Aislamiento <strong>de</strong> parásitos y cultivo - Los<br />
<strong>aislado</strong>s parasitarios fueron obtenidos a partir <strong>de</strong><br />
sangre <strong>de</strong> pacientes en fase aguda <strong>de</strong> ECh cultivada<br />
en medio bifásico agar-sangre. Se tomaron 3 mL <strong>de</strong><br />
sangre venosa en tubos con citrato <strong>de</strong> sodio. Todo<br />
el contenido <strong>de</strong>l tubo fue agregado a <strong>un</strong> medio<br />
bifásico agar-sangre con medio MEM (modified<br />
Eagle’s médium) suplementado con 5% <strong>de</strong> Suero<br />
Fetal Bovino (SFB) inactivado y antibióticos. Las<br />
características epi<strong>de</strong>miológicas <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong><br />
T. cruzi empleados en este estudio se muestran en<br />
la Tabla 1.<br />
Fármacos - Nifurtimox (Lampit®) y Benznidazol<br />
(Rochagan®) fueron obtenidos a partir <strong>de</strong><br />
muestras comerciales <strong>de</strong> laboratorios Bayer (Alemania)<br />
y Roche (Suiza), respectivamente. Se disolvieron<br />
100mg <strong>de</strong> cada fármaco en dimethyl sulfoxi<strong>de</strong><br />
(DMSO), manteniendo <strong>un</strong>a concentración<br />
final <strong>de</strong> DMSO que no excediera el 1% v/v. Las<br />
soluciones <strong>de</strong> trabajo fueron preparadas en medio<br />
<strong>de</strong> cultivo LIT o MEM antes <strong>de</strong> cada ensayo.<br />
Ensayo in vitro con epimastigotes - En <strong>un</strong>a<br />
microplaca estéril <strong>de</strong> 96 pozos <strong>de</strong> fondo plano se<br />
agregaron 100 µL <strong>de</strong> <strong>un</strong>a suspensión <strong>de</strong> cada <strong>aislado</strong><br />
a <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> 1x10 6 parásitos/mL a cada<br />
pozo. Se incubó a 37°C durante 96 horas. Una vez<br />
alcanzada la fase logarítmica, se agregó 20 µL <strong>de</strong>l<br />
fármaco en estudio a diversas concentraciones<br />
(0,01 - 0,1 - 1 - 10 - 100 - 1000 µg/mL) y se incubó<br />
durante 72 horas a 37°C. Cumplido el tiempo <strong>de</strong><br />
incubación se agregó a cada pozo 20 µL <strong>de</strong> <strong>un</strong>a<br />
solución <strong>de</strong> bromuro <strong>de</strong> 3-[4,5-dimetiltiazol-2-yl]-<br />
2,5-difeniltetrazolio (MTT). Se re incubó la placa<br />
durante 2 horas a 37°C y se procedió a disolver los<br />
cristales <strong>de</strong> formazán con <strong>un</strong>a solución <strong>de</strong> Sodium-<br />
Do<strong>de</strong>cil-Sulfate (SDS) 0,01% en HCl 0,1N. El<br />
producto <strong>de</strong> formazán solubilizado fue cuantificado<br />
con <strong>un</strong> lector <strong>de</strong> microplacas TECAN-s<strong>un</strong>rise a<br />
570nm. Cada ensayo se realizó por triplicado con<br />
sus respectivos controles, los cuales contaban con<br />
todos los reactivos sin presencia <strong>de</strong> fármaco.<br />
Tabla 1. Características epi<strong>de</strong>miológicas <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> Trypanosoma cruzi<br />
Aislado Origen Geográfico Paciente Modo <strong>de</strong><br />
transmisión<br />
EP Edo. Carabobo (VE) Infante ♂ ND<br />
PM Valencia (VE) Adulto ♀ Vectorial<br />
1593 Caracas (VE) Infante ♀ Oral<br />
1595<br />
ND: No <strong>de</strong>terminado.<br />
Caracas (VE) Adulto ♀ Oral<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
Cultivo <strong>de</strong> línea celular - Se utilizaron células<br />
epiteliales aisladas <strong>de</strong> riñón <strong>de</strong> mono ver<strong>de</strong> africano<br />
(células Vero-ATCC) cultivadas en medio MEM<br />
suplementado con 5% <strong>de</strong> SFB y antibióticos e<br />
incubadas a 37ºC en <strong>un</strong>a atmósfera <strong>de</strong> 5% <strong>de</strong> CO 2 .<br />
Infección celular - Se utilizaron formas tripomastigotes<br />
<strong>de</strong> cada <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s en estudio,<br />
en <strong>un</strong>a proporción 10 tripomastigotes / 1 célula.<br />
Para ello se utilizaron cultivos <strong>de</strong> Células Vero-<br />
ATCC en monocapa con <strong>un</strong> 70-80% <strong>de</strong> confluencia<br />
y se incubó a 37°C. Una vez iniciada la liberación<br />
<strong>de</strong> formas tripomastigotes al medio <strong>de</strong> cultivo, éste<br />
fue colectado y la concentración <strong>de</strong> tripomastigotes<br />
vivos se <strong>de</strong>terminó en cámara <strong>de</strong> Neubauer.<br />
Ensayo in vitro con tripomastigotes - En <strong>un</strong>a<br />
microplaca estéril <strong>de</strong> 96 pozos <strong>de</strong> fondo plano se<br />
agregaron 100 µL <strong>de</strong> <strong>un</strong>a suspensión <strong>de</strong> 1x10 8<br />
parásitos/mL a cada pozo. Inmediatamente se añadió<br />
50 µL <strong>de</strong>l fármaco a diversas concentraciones (0,01<br />
- 0,1 - 1 - 10 - 100 - 1.000 µg/mL). Se incubó a<br />
37ºC durante 72 horas. Cumplido el tiempo <strong>de</strong><br />
incubación se agregó a cada pozo 20 µL <strong>de</strong> <strong>un</strong>a<br />
solución <strong>de</strong> MTT. Se reincubó la placa durante 3<br />
horas a 37°C y se procedió disolver los cristales<br />
<strong>de</strong> formazán con <strong>un</strong>a solución <strong>de</strong> SDS 0,01% en<br />
HCl 0,1N. El producto <strong>de</strong> formazán solubilizado<br />
fue cuantificado con la ayuda <strong>de</strong> <strong>un</strong> lector <strong>de</strong><br />
microplacas TECAN-s<strong>un</strong>rise a 570 nm. Cada<br />
ensayo se realizó por duplicado con sus respectivos<br />
controles mantenidos sin la presencia <strong>de</strong>l fármaco.<br />
Análisis Estadísticos - La actividad <strong>de</strong> los fármacos<br />
fue expresada como la concentración necesaria<br />
para inhibir el 50% <strong>de</strong>l crecimiento parasitario<br />
(CI 50 ) (Alzamora et al., 2007). Fue calculada<br />
con <strong>un</strong> intervalo <strong>de</strong> confianza <strong>de</strong>l 95% mediante<br />
<strong>un</strong>a regresión no lineal, usando para ello el software<br />
GRAPHPAD PRISM (Intuitive Software for<br />
Science, San Diego, CA, USA). Los resultados<br />
son mostrados como la media ± <strong>de</strong>sviación estándar<br />
(DS) <strong>de</strong> tres experimentos in<strong>de</strong>pendientes. Las<br />
comparaciones y significancias estadísticas fueron<br />
<strong>de</strong>terminadas por <strong>un</strong> análisis <strong>de</strong> t <strong>de</strong> Stu<strong>de</strong>nt. Adicionalmente,<br />
se realizaran análisis <strong>de</strong> correlación<br />
lineal <strong>de</strong> Pearson con la finalidad <strong>de</strong> evaluar si el<br />
aumento en la concentración <strong>de</strong> los fármacos tiene<br />
o no relación con la viabilidad celular. Valores <strong>de</strong> p<br />
< 0,05 fueron consi<strong>de</strong>rados significativos.<br />
RESULTADOS<br />
Evaluación <strong>de</strong> la susceptibilidad <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> T. cruzi en estadio <strong>de</strong> epimastigote - La actividad<br />
<strong>de</strong> los fármacos NF y BZ contra epimastigotes <strong>de</strong> T.<br />
cruzi es mostrada en la Tabla 2. Todos los <strong>aislado</strong>s<br />
evaluados fueron susceptibles a NF (CI 50 <strong>de</strong> 3,65<br />
± 1,00 a 63,42 ± 7,43 µM) y a BZ (CI 50 <strong>de</strong> 35,78<br />
± 4,33 a 50,43 ± 9,42 µM). Para el caso específico<br />
<strong>de</strong>l fármaco NF, es posible observar variaciones<br />
los valores <strong>de</strong> CI 50 <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong>. Caso<br />
contrario se obtiene en la evaluación <strong>de</strong>l fármaco<br />
BZ <strong>sobre</strong> los cuatro <strong>aislado</strong>s parasitarios, don<strong>de</strong><br />
los valores <strong>de</strong> CI 50 no presentan variaciones<br />
estadísticamente significativas (p > 0,05). De los<br />
resultados obtenidos para los <strong>aislado</strong>s parasitarios<br />
en estadio epimastigote, el <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> trasmisión<br />
oral 1.593 presentó los valores más bajos <strong>de</strong> CI 50 a<br />
ambos fármacos, con valores <strong>de</strong> 3,65 ± 1,00 µM y<br />
35,78 ± 4,33 µM para NF y BZ, respectivamente.<br />
Por otra parte, el <strong>aislado</strong> EP mostró el valor más<br />
alto <strong>de</strong> CI 50 al fármaco NF (63,42 ± 7,43 µM); caso<br />
similar se obtuvo para el <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> transmisión<br />
vectorial PM con <strong>un</strong> valor <strong>de</strong> CI 50 al fármaco BZ <strong>de</strong><br />
50,43 ± 9,42 µM.<br />
Tabla 2. Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s humanos <strong>de</strong> Trypanosoma cruzi en<br />
estadio <strong>de</strong> epimastigote<br />
Aislado Modo <strong>de</strong> transmisión CI50 (µM) (media ± DS)<br />
NF BZ<br />
EP ND 63,42 ± 7,43 42,36 ± 6,00<br />
PM Vectorial 8,13 ± 2,77 50,43 ± 9,42<br />
1593 Oral 3,65 ± 1,00 35,78 ± 4,33<br />
1595 Oral 26,91 ± 8,60 41,32 ± 7,13<br />
ND: No <strong>de</strong>terminado. Los valores <strong>de</strong> CI50 fueron calculados a partir <strong>de</strong> tres ensayos in<strong>de</strong>pendientes.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22<br />
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA<br />
17
A. MUÑOZ et al.<br />
Evaluación <strong>de</strong> la susceptibilidad <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> T. cruzi en estadio <strong>de</strong> tripomastigote - El<br />
rango <strong>de</strong> actividad <strong>de</strong> los fármacos NF y BZ<br />
contra tripomastigotes <strong>de</strong> T. cruzi se muestra en<br />
la Tabla 3. Los resultados reflejan <strong>un</strong> aumento<br />
en los valores <strong>de</strong> CI 50 para el fármaco NF (46,54<br />
± 0,56 a 213,96 ± 21,28 µM) y BZ (49,32 ± 3,90<br />
a >3.800 µM) estadísticamente significativo (p<br />
< 0,05), con respecto a los obtenidos para el<br />
estadio <strong>de</strong> epimastigote. Los valores <strong>de</strong> CI 50 para<br />
los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> transmisión oral al fármaco NF<br />
presentaron variaciones significativas (46,54 ±<br />
0,56 y 213,96 ± 21,28 µM, para el <strong>aislado</strong> 1.593<br />
y 1.595 respectivamente). Adicionalmente, se pudo<br />
evi<strong>de</strong>nciar que los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> transmisión oral<br />
1.593 y 1.595 reflejaron los valores más bajos <strong>de</strong><br />
CI 50 a los fármacos NF y BZ respectivamente. En<br />
cuanto al <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> transmisión vectorial (PM), no<br />
se encontró diferencia estadísticamente significativa<br />
en sus valores <strong>de</strong> CI 50 en comparación con los<br />
obtenidos para el <strong>aislado</strong> EP, para ambos fármacos.<br />
Es interesante resaltar que estos dos <strong>aislado</strong>s (PM y<br />
EP) bajo las condiciones experimentales evaluadas<br />
en este trabajo, resultaron ser poco susceptibles al<br />
fármaco BZ con valores <strong>de</strong> CI 50 mayores a 3800<br />
µM, la cual fue la máxima concentración utilizada<br />
para este fármaco en los ensayos.<br />
Comparación <strong>de</strong> la susceptibilidad al fármaco<br />
Nz y Bz por parte <strong>de</strong> los estadios epimastigote<br />
y tripomastigote <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi<br />
- Los análisis comparativos se llevaron a cabo<br />
tomando en cuenta los valores <strong>de</strong> CI 50 mostrados<br />
en las tablas 3 y 4 y por observación <strong>de</strong>l comportamiento<br />
<strong>de</strong> la variable porcentaje (%) <strong>de</strong> viabilidad<br />
celular a diferentes concentraciones <strong>de</strong> cada<br />
fármaco. Para el caso <strong>de</strong> NF (Figura 1), es posible<br />
18<br />
observar <strong>un</strong> comportamiento dosis-<strong>de</strong>pendiente<br />
claramente marcado en ambos estadios parasitarios<br />
y para cada <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s evaluados, con valores<br />
<strong>de</strong> correlación <strong>de</strong> Pearson entre 0,70 y 0,85,<br />
los cuales estadísticamente no son significativos,<br />
pero reflejan que el aumento <strong>de</strong> la concentración<br />
<strong>de</strong> los fármacos tiene <strong>un</strong> efecto relacionado con la<br />
disminución <strong>de</strong> la viabilidad celular. Es interesante<br />
resaltar que todos los <strong>aislado</strong>s evaluados en este<br />
estudio, cualquiera que fuese su comportamiento<br />
dosis-respuesta alcanzaron el 0% <strong>de</strong> viabilidad celular<br />
a la máxima concentración evaluada.<br />
Con respecto a las ten<strong>de</strong>ncias obtenidas para<br />
el fármaco BZ (Figura 2), es posible observar <strong>un</strong><br />
comportamiento por parte <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s en estadio<br />
epimastigote y tripomastigote completamente diferente<br />
al <strong>de</strong>scrito anteriormente. Las diferencias observadas<br />
pue<strong>de</strong>n dividir en dos aspectos, el primero<br />
<strong>de</strong> ellos correspon<strong>de</strong> al <strong>aislado</strong> evaluado y el seg<strong>un</strong>do<br />
a la efectividad <strong>de</strong>l fármaco reflejado como<br />
porcentaje (%) <strong>de</strong> viabilidad celular. Con respecto<br />
al tipo <strong>de</strong> <strong>aislado</strong> utilizado, se pue<strong>de</strong> evi<strong>de</strong>nciar que<br />
para el estadio epimastigote los <strong>aislado</strong>s PM y EP<br />
siguen <strong>un</strong>a ten<strong>de</strong>ncia dosis-<strong>de</strong>pendiente similar a la<br />
mostrada para el fármaco NF, presentando valores<br />
<strong>de</strong> correlación <strong>de</strong> Pearson estadísticamente significativos<br />
(p < 0,05); a<strong>un</strong>que es evi<strong>de</strong>nte <strong>un</strong>a menor<br />
efectividad, ya que para la máxima concentración<br />
evaluada solamente se alcanzó aproximadamente<br />
80% <strong>de</strong> susceptibilidad o 20% <strong>de</strong> viabilidad celular<br />
(Figura 2a). Esta misma ten<strong>de</strong>ncia se obtiene en el<br />
estadio <strong>de</strong> tripomastigote, a<strong>un</strong>que la efectividad <strong>de</strong>l<br />
fármaco fue 4 veces menor en comparación con el<br />
estadio <strong>de</strong> epimastigote (Figura 2b). Para los <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> transmisión oral se evi<strong>de</strong>ncian dos comportamientos<br />
diferentes: a) para el caso <strong>de</strong>l estadio<br />
Tabla 3. Susceptibilidad in vitro <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s humanos y cepas <strong>de</strong> referencia <strong>de</strong> T. cruzi en estadio<br />
tripomastigote contra Nifurtimox y Benznidazol<br />
Aislado Hospedador<br />
(fase <strong>de</strong> la ECh)<br />
CI50 (µM) (media ± DS)<br />
NF BZ<br />
EP ND 61,26 ± 1,25 >3800<br />
PM Vectorial 60,84 ± 1,27 >3800<br />
1593 Oral 46,54 ± 0,56 650,53 ± 6,25<br />
1595 Oral 213,96 ± 21,28 49,32 ± 3,90<br />
ND: No <strong>de</strong>terminado. Los valores <strong>de</strong> CI50 fueron calculados a partir <strong>de</strong> tres ensayos in<strong>de</strong>pendientes.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
Figura 1. Curvas <strong>de</strong> viabilidad celular <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi frente a concentraciones crecientes <strong>de</strong>l fármaco Nifurtimox.<br />
a) Estadio <strong>de</strong> epimastigote; b) Estadio <strong>de</strong> tripomastigote. Cada p<strong>un</strong>to <strong>de</strong> la curva fue calculado a partir <strong>de</strong> tres ensayos<br />
in<strong>de</strong>pendientes, con su respectiva <strong>de</strong>sviación estándar.<br />
Figura 2. Curvas <strong>de</strong> viabilidad celular <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi frente a concentraciones crecientes <strong>de</strong>l fármaco<br />
Benznidazol. A) Estadio <strong>de</strong> epimastigote; B) Estadio <strong>de</strong> tripomastigote. Cada p<strong>un</strong>to <strong>de</strong> la curva fue calculado a partir<br />
<strong>de</strong> tres ensayos in<strong>de</strong>pendientes, con su respectiva <strong>de</strong>sviación estándar.<br />
<strong>de</strong> epimastigote los dos <strong>aislado</strong>s presentan <strong>un</strong> comportamiento<br />
similar, con valores <strong>de</strong> correlación <strong>de</strong><br />
Pearson entre 0,54 y 0,62 para el <strong>aislado</strong> 1.593 y<br />
1.595 respectivamente, sugiriendo que los <strong>aislado</strong>s<br />
no se ven afectados directamente al aumentar las<br />
concentraciones <strong>de</strong> los fármacos, quedando algo<br />
menos <strong>de</strong>l 50% <strong>de</strong> la población parasitaria sin ser<br />
afectada por el fármaco (Figura. 1a); b) al observar<br />
las ten<strong>de</strong>ncias obtenidas para el estadio <strong>de</strong> tripomastigote<br />
(Figura 2b) el <strong>aislado</strong> 1.593 presenta <strong>un</strong> comportamiento<br />
dosis-<strong>de</strong>pendiente con <strong>un</strong>a correlación<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22<br />
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA<br />
<strong>de</strong> Pearson <strong>de</strong> 0,99, a<strong>un</strong>que alcanzando el 50% <strong>de</strong><br />
efectividad a <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> 650,53 ± 6,25<br />
µM, lo que se traduce en 14 veces más cantidad <strong>de</strong><br />
fármaco comparado con la CI 50 para el fármaco NF<br />
(Tabla 3) y 18 veces más concentración <strong>de</strong> fármaco<br />
BZ con respecto al estadio <strong>de</strong> epimastigote (Tabla<br />
2). La ten<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> oral 1595 en estadio <strong>de</strong><br />
tripomastigote es similar a la mostrada en el estadio<br />
<strong>de</strong> epimastigote, obteniéndose <strong>un</strong>a correlación <strong>de</strong><br />
Pearson <strong>de</strong> 0,432, comprobándose estadísticamente<br />
que a partir <strong>de</strong> <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> 38,42 µM has-<br />
19
A. MUÑOZ et al.<br />
ta la máxima concentración evaluada (3842 µM) el<br />
<strong>aislado</strong> parasitario no se ve afectado por el fármaco<br />
BZ.<br />
20<br />
DISCUSIóN<br />
Uno <strong>de</strong> los aspectos extensamente reflejados en<br />
la bibliografía es la distinta susceptibilidad <strong>de</strong> las<br />
cepas <strong>de</strong> T. cruzi al tratamiento con fármacos <strong>de</strong><br />
referencia o compuestos químicos <strong>de</strong> diversa índole<br />
en ensayos experimentales. Se ha comprobado que<br />
según la proce<strong>de</strong>ncia geográfica <strong>de</strong> los <strong>aislado</strong>s,<br />
existen fluctuaciones en la eficacia <strong>de</strong> los fármacos<br />
que oscilan entre el 0 al 100% (Filardi y Brener,<br />
1984; Brener, 1987). Esta variabilidad ha sido<br />
vinculada a las variaciones en la absorción y el<br />
metabolismo <strong>de</strong> las drogas, a la fase clínica <strong>de</strong> la<br />
infección o los estadios que pue<strong>de</strong>n presentar las<br />
poblaciones parasitarias. (De Castro y Meirelles<br />
De 1987, Toledo et al. 1990); en la actualidad<br />
se incluyen <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> estas fuentes <strong>de</strong> variación<br />
los grupos genéticos a los cuales pertenezca la<br />
población parasitaria (L<strong>un</strong>a et al., 2009).<br />
La resistencia natural <strong>de</strong> poblaciones <strong>de</strong> T. cruzi<br />
a los nitro <strong>de</strong>rivados ha sido <strong>de</strong>scrita como <strong>un</strong> factor<br />
importante en las bajas tasas <strong>de</strong> efectividad <strong>de</strong> los<br />
fármacos (Filardi y Brener, 1987). Estos autores<br />
<strong>de</strong>scriben la existencia <strong>de</strong> <strong>aislado</strong>s naturalmente<br />
resistentes o sensibles a los fármacos NF y BZ.<br />
Este es el primer estudio que muestra la actividad<br />
in vitro <strong>de</strong> los fármacos NF y BZ contra <strong>aislado</strong>s<br />
humanos <strong>de</strong> T. cruzi con diferentes vías <strong>de</strong><br />
transmisión (oral y vectorial) en Venezuela. Los<br />
cuatro <strong>aislado</strong>s y los dos estadios parasitarios fueron<br />
susceptibles a los dos fármacos evaluados, evi<strong>de</strong>nciándose<br />
mayor sensibilidad <strong>sobre</strong> el estadio <strong>de</strong><br />
epimastigote con respecto al estadio tripomastigote,<br />
lo que se ve sustentado en la bibliografía, don<strong>de</strong><br />
ya es bien conocido que el NF y el BZ tienen acción<br />
tripanocida contra todas las formas <strong>de</strong>l parásito<br />
(Stopani, 1999). Se han informado diferencias <strong>de</strong><br />
varios ór<strong>de</strong>nes <strong>de</strong> magnitud <strong>de</strong> los valores <strong>de</strong> CI 50<br />
entre los estadios epimastigote y tripomastigote<br />
(Moreno et al., 2010).<br />
Al realizar comparaciones con valores <strong>de</strong> CI 50<br />
para las cepas <strong>de</strong> referencia Esmeraldo, Silvio x10<br />
y cepa Y en estadios epimastigotes a nivel in vitro<br />
(siguiendo metodologías similares a las realizadas<br />
en éste trabajo), se pudo observar que el rango <strong>de</strong><br />
CI 50 para el fármaco NF en los <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong>scritos se<br />
ubicó entre 1,56 a 3,50 µM (L<strong>un</strong>a et al., 2009), lo<br />
que se traduce en <strong>un</strong>a diferencia significativa en la<br />
susceptibilidad por parte <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> transmisión<br />
vectorial PM y EP (p = 0,03) y en el <strong>aislado</strong><br />
<strong>de</strong> transmisión oral 1.595 (p < 0,05); el <strong>aislado</strong><br />
1.593 no presentó <strong>un</strong>a variación estadísticamente<br />
significativa en la susceptibilidad al fármaco NF (p<br />
> 0,05). Moreno et al., en el 2010 <strong>de</strong>scriben para<br />
las cepas <strong>de</strong> referencia ya mencionadas <strong>un</strong> rango<br />
<strong>de</strong> CI 50 para el fármaco BZ entre 16,30 a 26,70 µM,<br />
reflejando diferencias significativas para los cuatro<br />
<strong>aislado</strong>s evaluados en el presente trabajo (p < 0,05).<br />
Con los dos estadios parasitarios evaluados,<br />
se observaron diferencias (que en alg<strong>un</strong>os casos<br />
llegaron a ser estadísticamente significativas) entre<br />
el estadio epimastigote y tripomastigote <strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
mismo <strong>aislado</strong>. Este comportamiento ya ha sido<br />
<strong>de</strong>scrito por De Castro et al., (1987, 1990) quien<br />
concluye que en muchas ocasiones “…la propia<br />
forma biológica <strong>de</strong>l parásito <strong>de</strong> <strong>un</strong>a misma cepa<br />
presenta distinta susceptibilidad, por ejemplo,<br />
los amastigotes parecen más resistentes que los<br />
tripomastigotes en el tratamiento con Nifurtimox y<br />
Benzonidazol…”.<br />
En líneas generales, el fármaco NF resultó más<br />
efectivo que el BZ (p < 0,05) en el estadio tripomastigote<br />
y en los <strong>aislado</strong>s 1.593 y PM en estadio<br />
epimastigote, tal como se evi<strong>de</strong>ncia en diversos<br />
estudios in vitro utilizando diferentes <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong><br />
T. cruzi (Maya et al., 2004; Cabrera et al., 2004).<br />
El fármaco BZ mostró gran variabilidad en la actividad<br />
contra los diferentes <strong>aislado</strong>s venezolanos<br />
tanto <strong>de</strong> transmisión oral como vectorial. En este<br />
sentido, existen investigaciones experimentales<br />
que <strong>de</strong>muestran diferencias en la respuesta a NF y<br />
a BZ, por parte <strong>de</strong> diferentes <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> T. cruzi<br />
(Urbina y Docampo 2003, Castro et al., 2006). La<br />
explicación a este fenómeno es <strong>de</strong>sconocida, a<strong>un</strong>que<br />
se ha propuesto que se <strong>de</strong>ba a <strong>un</strong> incremento<br />
en la concentración <strong>de</strong> las enzimas <strong>de</strong> <strong>de</strong>stoxicación<br />
o a través <strong>de</strong> modificaciones en el contenido<br />
<strong>de</strong> tioles intracelulares (Morello et al., 1994; Maya<br />
et al., 1997).<br />
En conclusión, tomando en cuenta que los <strong>aislado</strong>s<br />
<strong>de</strong> transmisión oral 1.593 (infante) y 1.595<br />
(adulto) provienen <strong>de</strong> pacientes infectados <strong>de</strong> la<br />
misma fuente (Alarcón <strong>de</strong> Noya et al., 2010) se esperaría<br />
que el comportamiento en cuanto a la susceptibilidad<br />
a los fármacos NF y BZ fuese similar.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
Obtener diferencias estadísticamente significativas<br />
en los valores <strong>de</strong> CI 50 para ambos estadios parasitarios<br />
y para ambos fármacos es <strong>un</strong> resultado imprevisible.<br />
Por tal motivo, se hace necesario ampliar<br />
el número <strong>de</strong> <strong>aislado</strong> orales <strong>de</strong> este mismo brote y<br />
realizar estudios in vitro a estos dos fármacos con el<br />
fin <strong>de</strong> aclarar si la explicación <strong>de</strong> la falla terapéutica<br />
en alg<strong>un</strong>os pacientes venezolanos con ECh pudiese<br />
<strong>de</strong>berse a diferencias en los <strong>aislado</strong>s parasitarios.<br />
REFERENCIAS<br />
1. ALARCÓN DE NOYA B, DÍAZ-BELLO Z, COLME-<br />
NARES C, et al. 2010. Large urban outbreak of orally<br />
acquired acute Chagas disease at a school in Caracas,<br />
Venezuela. J Infect Dis 201:1308-1315.<br />
2. ALZAMORA L, COLONA E, ACERO DE MESA N,<br />
et al. 2007. Efecto citotóxico <strong>de</strong>l extracto metanólico<br />
<strong>de</strong> tres ecotipos <strong>de</strong> Lepidium peruvianum chacon <strong>sobre</strong><br />
líneas celulares HeLa , HT-29. Rev peru biol 13: 219-<br />
222.<br />
3. BAHIA-OLIVEIRA LM, GOMES JA, CANÇADO<br />
JR, et al. 1999. Imm<strong>un</strong>ological and clinical evaluation<br />
of chagasic patients sub-jected to chemotherapy during<br />
the acute phase of Trypanosoma cruzi infection 14-30<br />
years ago. J Infect Dis 182: 634-638.<br />
4. BRENER Z. 1987. Laboratory-acquired Chagas disease<br />
comment (letter). Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg<br />
81:527.<br />
5. CABRERA AL, DE LEÓN MP, MARROQUÍN LA,<br />
CASTRO J, MATTA V. 2004. Susceptibilidad <strong>de</strong> aislamientos<br />
<strong>de</strong> Trypanosoma cruzi, obtenidos en Guatemala<br />
a diferentes tripanocidas. DIGI - USAC: 95-100.<br />
6. CANÇADO JR. 1999. Criteria of Chagas disease cure.<br />
Mem Inst Oswaldo Cruz 94: 331-335.<br />
7. CANÇADO JR. 2002. Long term evaluation of etiological<br />
treatment of Chagas disease with benznidazole.<br />
Rev Inst Med Trop Sao Paulo 44: 29-37.<br />
8. CARRANZA JC, VALADARES HM, D’AVILA DA, et<br />
al. 2009. Trypanosoma cruzi maxicircle heterogeneity<br />
in Chagas disease patients from Brazil. Int J Parasitol<br />
39:963-973.<br />
9. CASTRO JA, DE MECCA MM, BARTEL LC. 2006.<br />
Toxic si<strong>de</strong> effects of drugs used to treat Chagas’ disease<br />
(American trypanosomiasis). Hum Exp Toxicol 8: 471-<br />
479.<br />
10. COURA JR, DE CASTRO SL. 2002. A critical review<br />
on Chagas disease chemotherapy. Mem Inst Oswaldo<br />
Cruz 97: 3-24.<br />
11. COURA JR. 2007. Chagas disease: what is known<br />
and what is nee<strong>de</strong>d - A backgro<strong>un</strong>d article. Mem. Inst.<br />
Oswaldo Cruz 102: 113-122.<br />
12. SCHOFIELD CJ, JANNIN J, SALVATELLA R. 2006.<br />
The future of Chagas disease control. Trends Parasitol<br />
22: 583-588.<br />
13. DE CASTRO S, Y DE MEIRELLES M. 1987. Effects<br />
of drugs on Trypanosoma cruzi and on its interaction<br />
with heart muscle cell “in vitro”. Mem. Inst Oswaldo<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22<br />
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA<br />
Cruz 82: 209-218.<br />
14. DE CASTRO SL, MEIRELES M. 1990. Mechanism of<br />
action of a nitroimidazole-thiadiazole <strong>de</strong>rivative upon<br />
Trypanosoma cruzi tissue culture amastigotes. Mem<br />
Inst Oswaldo Cruz 85: 95-99.<br />
15. DIAS GONTIJO E, GALVÃO L, ELOI-SANTOS S.<br />
1999. Chagas Disease: Criteria of Cure and Prognosis.<br />
Mem. Inst. Oswaldo Cruz 94: 357-362.<br />
16. DIAS JCP. 2006. The treatment of Chagas disease<br />
(South American trypanosomiasis). Ann Int Med 144:<br />
772-774.<br />
17. FRANCO-PAREDES C, VON A, HIDRON A, et al.<br />
2007. Chagas disease: an impediment in achieving<br />
the Millennium Development Goals in Latin America.<br />
BMC Int Health Hum Rights 7: 7.<br />
18. FILARDÍ LS, Y BRENER Z. 1984. A rapid method<br />
for testing in vivo the susceptibility of different strains<br />
of Trypanosoma cruzi to active of chemotherapeutic<br />
agents. Mem. Inst. Oswaldo Cruz 79: 221-225.<br />
19. FILARDI LS, BRENER Z. 1987. Susceptibility and<br />
natural resistance of Trypanosoma cruzi strains to drugs<br />
used clinically in Chagas disease. Trans R Soc Trop<br />
Med Hyg 81: 755-759.<br />
20. JANNIN J, VILLA L. 2007. An overview of Chagas<br />
disease treatment. Mem Inst Oswaldo Cruz 102: 95-97.<br />
21. LUNA KP, HERNáNDEZ IP, RUEDA CM, ZORRO<br />
MM, CROFT SL, ESCOBAR P. 2009. In vitro susceptibility<br />
of Trypanosoma cruzi strains from Santan<strong>de</strong>r,<br />
Colombia, to hexa<strong>de</strong>cylphosphocholine (miltefosine),<br />
nifurtimox and benznidazole. Biomédica 29: 448-455.<br />
22. MARTÍNEZ R. 1996. Variabilidad intra-específica en<br />
Trypanosoma cruzi y ensayos <strong>de</strong> Nuevos métodos <strong>de</strong><br />
cribado farmacológico. Tesis Doctoral, Universidad<br />
Complutense <strong>de</strong> Madrid.<br />
23. MAYA JD, REPETTO Y, AGOSIN M, et al. 1997.<br />
Effects of nifurtimox and benznidazole upon glutathione<br />
and trypanothione content in epimastigote, trypomastigote<br />
and amastigote forms of Trypanosoma cruzi.<br />
Mol Biochem Parasitol 86: 101-106.<br />
24. MAYA JD, RODRÍGUEZ A, PINO L, et al. 2004.<br />
Effects of buthionine sulfoximine nifurtimox and<br />
benznidazole upon trypanothione and metallothionein<br />
proteins in Trypanosoma cruzi. Biol Res 37: 61-69.<br />
25. MORENO M, D’áVILA DA, SILVA M, et al. 2010.<br />
Trypanosoma cruzi benznidazole susceptibility in vitro<br />
does not predict the therapeutic outcome of human<br />
Chagas disease. Mem Inst Oswaldo Cruz 105: 918-924.<br />
26. MORELLO A, LIPCHENCA I, CASSELS BK, SPEIS-<br />
KY H, ALDUNATE J, REPETTO Y. 1994. Trypanocidal<br />
effect of boldine and related alkaloids upon several<br />
strains of Trypanosoma cruzi. Comp Biochem Physiol<br />
Pharmacol Toxicol Endocrinol 107: 367-371.<br />
27. MURTA SM, GAZZINELLI RT, BRENER Z, RO-<br />
MANHA AJ. 1998. Molecular characterization of susceptible<br />
and naturally resistant strains of Trypanosoma<br />
cruzi to benznidazole and nifurtimox. Mol Biochem<br />
Parasitol 93: 203-214.<br />
28. NÓBREGA A, GARCÍA M, TATTO E, OBARA M,<br />
COSTA E, SOBEL J, ARAUJO W. 2010. Oral Transmission<br />
of Chagas Disease by Consumption of Açaí<br />
Palm Fruit, Brazil. <strong>Em</strong>erging Infectious Diseases 15:<br />
653-655.<br />
29. RASSI A, LUQUETTI AO. 1992. Therapy of Chagas<br />
21
A. MUÑOZ et al.<br />
disease. In S Wen<strong>de</strong>l, Z Brener, ME Camargo, A Rassi<br />
(ed.), Chagas disease (American trypanosomiasis):<br />
its impact on transfusion and clinical medicine, ISBT<br />
Brazil, São Paulo 237-247.<br />
30. RASSI A JR, RASSI A, MARIN-NETO JA. 2010.<br />
Chagas disease.Lancet 375: 1388-1402.<br />
31. STOPPANI AO. 1999. Quimioterapia <strong>de</strong> la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas. Medicina (B Aires) 59: 147-165.<br />
32. TOLEDO M, PEREIRA MES, Y BRENER Z. 1990.<br />
Efects of imm<strong>un</strong>osupression on the especific treatment<br />
of mice experimentally infected with Trypanosoma<br />
cruzi. Mem. Inst Oswaldo Cruz 85: 100.<br />
33. TOLEDO MJO, BAHIA MT, CARNEIRO CM, et al.<br />
2003. Chemotherapy with benznidazole and itraconazole<br />
for mice infected with different Trypanosoma<br />
22<br />
cruzi clonal genotypes. Antimicrob Agents Chemother<br />
47: 223-230.<br />
34. URBINA JA, DOCAMPO R. 1999. Specific chemotherapy<br />
of Chagas disease: controversies and advances.<br />
Trends Parasitol 19: 495-501.<br />
35. VILLARREAL D, BARNABÉ C, SERENO D, TIBA-<br />
YRENC M. 2004. Lack of correlation between in vitro<br />
susceptibility to benznidazole and phylogenetic diversity<br />
of Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease.<br />
Exp Parasitol 108: 24-31.<br />
36. YUN O, LIMA MA, ELLMAN T, et al. 2009. Feasibility,<br />
drug safety, and effectiveness of etiological<br />
treatment programs for Chagas disease in Honduras,<br />
Guatemala, and Bolivia: 10-year experience of Mé<strong>de</strong>cins<br />
sans Frontières. PLoS Negl Trop Dis 3:e488.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
Artículo Original<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33<br />
Edad <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro en la evolución <strong>de</strong><br />
la infección experimental con Trypanosoma cruzi<br />
en <strong>un</strong> mo<strong>de</strong>lo murino<br />
ZÚÑIGA C. 1 , BINDER N. 1 , PALáU M.T. 4 , LARENAS J. 2 y VERGARA U. 1,3<br />
1 Departamento <strong>de</strong> Medicina Preventiva, Facultad <strong>de</strong> Ciencias Veterinarias, Universidad <strong>de</strong> Chile. Avenida Santa<br />
Rosa 11735. La Pintana, Santiago - Chile.<br />
2 Departamento <strong>de</strong> Patología Animal, Facultad <strong>de</strong> Ciencias Veterinarias, Universidad <strong>de</strong> Chile. Avenida Santa Rosa<br />
11735. La Pintana, Santiago- Chile.<br />
3 Escuela <strong>de</strong> Postgrado, Facultad <strong>de</strong> Medicina, Universidad <strong>de</strong> Chile. In<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>ncia 1027, Santiago - Chile.<br />
4 Escuela <strong>de</strong> Nutrición, Universidad Autónoma <strong>de</strong> Chile.<br />
ABSTRACT<br />
AGE EFFECT IN EVOLUTION OF EXPERIMENTAL TRYPANOSOMA CRUzI INFECTION<br />
IN A MURINE MODEL<br />
Two and eight months old Balb/c mice, were infected with 2000 Dm28c trypomastigotes of Trypanosoma.<br />
cruzi. Two weeks after initial infection the yo<strong>un</strong>g males showed parasitemia of 5.1 x 10 5 parasites/mL<br />
and 50% of accumulated mortality, which reached 100% at 40 days after infection. Aged males reached<br />
3.2 x 10 5 parasites/mL and 40% survival longer than four months. Histopathology showed differential<br />
distribution and severity of tissue lesions between the mouse groups. Increased damage and pseudocysts<br />
were fo<strong>un</strong>d in heart of aged mice, which showed a long term tissue repair while lesions seemed to increase<br />
in the striated muscle of yo<strong>un</strong>g mice, <strong>de</strong>spite of the absence of <strong>de</strong>tectable tissue or blood parasites. The<br />
differences in parasite bur<strong>de</strong>n, tissue damage and accumulated mortality observed in our infected mice,<br />
suggest that age may affect the effectiveness of the imm<strong>un</strong>e response in controlling parasite-<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>nt<br />
and/or imm<strong>un</strong>e-mediated damage in specific organs. Although there is no evi<strong>de</strong>nce for the pathogenic<br />
role of parasite persistence and/or autoimm<strong>un</strong>ity in the evolution of the disease, the 100% of accumulated<br />
mortality observed in the yo<strong>un</strong>g mice may be explained by neurological disturbances as those associated<br />
to malignant arrhythmias and sud<strong>de</strong>n <strong>de</strong>ath observed in humans. These disturbances may not be triggered<br />
in the eight months old mice as a consequence of the <strong>de</strong>creased effectiveness of the imm<strong>un</strong>e system which<br />
comes with age.<br />
Key words: Trypanosoma cruzi, aged mice, parasitemia, histopathology.<br />
Recibido: 5 <strong>de</strong> Marzo <strong>de</strong> 2012. Aprobado: 28 <strong>de</strong> <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: U. Vergara<br />
<strong>Em</strong>ail: uvergara@uchile.cl<br />
C. Zuñiga<br />
<strong>Em</strong>ail: clz<strong>un</strong>iga@uchile.cl<br />
23
C. ZÚÑIGA et al.<br />
RESUMEN<br />
Ratones Balb/c, <strong>de</strong> dos y ocho meses <strong>de</strong> edad, se infectaron con 2.000 tripomastigotes Dm28c <strong>de</strong><br />
Trypanosoma cruzi. A las dos semanas <strong>de</strong> infección, los machos jóvenes alcanzaron parasitemia <strong>de</strong> 5.1<br />
x 10 5 parásitos/mL y 50% <strong>de</strong> mortalidad acumulada, la que llegó al 100% a los 40 días. Los machos <strong>de</strong><br />
mayor edad. Alcanzaron parasitemia <strong>de</strong> 3.2 x 10 5 parásitos/mL y supervivencia <strong>de</strong>l 40% más allá <strong>de</strong> los<br />
cuatro meses <strong>de</strong> infección. La histopatología mostró diferencias en la distribución y severidad <strong>de</strong>l daño,<br />
entre ambos grupos <strong>de</strong> ratones. Los <strong>de</strong> mayor edad mostraron pseudoquistes y daño cardiaco seguido <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong>a lenta reparación mientras las lesiones aumentaban en músculo esquelético <strong>de</strong> los ratones jóvenes, en<br />
ausencia <strong>de</strong> pseudoquistes y parásitos libres. Las diferencias en parasitemia, daño tisular y mortalidad<br />
observada en los ratones aquí infectados, sugiere que la edad pue<strong>de</strong> afectar la efectividad <strong>de</strong> la respuesta<br />
inm<strong>un</strong>e para controlar el daño parásito-<strong>de</strong>pendiente y/o inm<strong>un</strong>ológico, en órganos específicos. A<strong>un</strong>que<br />
no hay evi<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong>l rol patogénico <strong>de</strong>l parásito y/o <strong>de</strong> la respuesta autoinm<strong>un</strong>e en la evolución <strong>de</strong> la<br />
enfermedad, la mortalidad <strong>de</strong> los ratones jóvenes pue<strong>de</strong> obe<strong>de</strong>cer a mecanismos adicionales <strong>de</strong> daño, como<br />
las alteraciones neurológicas asociadas a arritmias malignas y muerte súbita en humanos. Estas alteraciones<br />
no ocurrirían en ratones <strong>de</strong> mayor edad, como consecuencia <strong>de</strong>l <strong>de</strong>terioro <strong>de</strong>l sistema inm<strong>un</strong>e que acompaña<br />
al envejecimiento.<br />
Palabras clave: Trypanosoma cruzi, ratones, parasitemia, histopatología, edad.<br />
24<br />
INTRODUCCIóN<br />
La Enfermedad <strong>de</strong> Chagas o tripanosomosis<br />
americana, que pue<strong>de</strong> presentarse como <strong>un</strong>a infección<br />
aguda a menudo asintomática o, como ocurre<br />
en la mayoría <strong>de</strong> los casos, en forma <strong>de</strong> <strong>un</strong> síndrome<br />
crónico y <strong>de</strong>bilitante, es causada por el protozoo<br />
Trypanosoma cruzi. Debido a su amplia distribución<br />
y alta prevalencia en el hombre y animales,<br />
la infección constituye <strong>un</strong> importante problema<br />
<strong>de</strong> salud pública en Centro y Sudamérica (Dias et<br />
al., 2002) causando anualmente la muerte <strong>de</strong> casi<br />
15.000 personas (Rodríguez y Albajar, 2010).<br />
Existen más <strong>de</strong> 100 especies <strong>de</strong> insectos triatominos<br />
que transmiten T. cruzi, el que pue<strong>de</strong> infectar<br />
virtualmente a todos los mamíferos y muchas<br />
especies silvestres parecen actuar como reservorios<br />
naturales <strong>de</strong>l parásito (Guhl, 2007; Costa y Lorenzo,<br />
2009; Rodríguez y Albajar, 2010;). A<strong>de</strong>más <strong>de</strong><br />
la forma habitual <strong>de</strong> infección a través <strong>de</strong>l insecto<br />
hematófago, los humanos pue<strong>de</strong>n infectarse por<br />
transfusión sanguínea, por vía transplacentaria,<br />
transplante <strong>de</strong> órganos, acci<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> laboratorio<br />
o por la ingestión <strong>de</strong> alimentos contaminados con<br />
<strong>de</strong>yecciones <strong>de</strong> insectos infectados (Moncayo y Yanine,<br />
2006; Clayton, 2010). Después <strong>de</strong> ingresar en<br />
el hospe<strong>de</strong>ro vertebrado, el parásito pue<strong>de</strong> infectar<br />
macrófagos, células <strong>de</strong> músculo liso y músculo es-<br />
triado, fibroblastos y virtualmente todas las células<br />
nucleadas <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro (Andra<strong>de</strong> et al., 2010).<br />
El mo<strong>de</strong>lo murino <strong>de</strong> infección experimental<br />
con T. cruzi ha resultado muy útil en el estudio <strong>de</strong><br />
la Enfermedad <strong>de</strong> Chagas, puesto que imita muchos<br />
aspectos <strong>de</strong> la enfermedad humana, incluyendo los<br />
mecanismos <strong>de</strong> daño tisular (Andra<strong>de</strong> y Magalhaes,<br />
1996; Andra<strong>de</strong> et al., 1999; Andra<strong>de</strong> et al., 2002;<br />
Diaz et al., 2004: Valenzuela et al., 2010;) y los mecanismos<br />
inm<strong>un</strong>ológicos involucrados en el control<br />
<strong>de</strong>l parásito (Zúñiga et al., 2002; An<strong>de</strong>rsson et al.,<br />
2003). Distintas cepas <strong>de</strong> ratones difieren en la susceptibilidad<br />
o resistencia a la infección con T. cruzi,<br />
existiendo al parecer <strong>un</strong> complejo control genético<br />
<strong>de</strong> los niveles <strong>de</strong> parasitemia y supervivencia <strong>de</strong> los<br />
animales infectados (Wrightsman et al., 1982; Zúñiga<br />
et al., 1998). Se ha <strong>de</strong>scrito que tanto factores<br />
<strong>de</strong>pendientes <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro como factores <strong>de</strong>pendientes<br />
<strong>de</strong>l parásito pue<strong>de</strong>n tener importante efecto<br />
en el <strong>de</strong>sarrollo y evolución <strong>de</strong> la infección con T.<br />
cruzi. Entre estos factores se encuentran el repertorio<br />
genético, sexo, y edad <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro, así como<br />
la dosis <strong>de</strong>l inoculo inicial y la cepa <strong>de</strong> parásito, aún<br />
cuando la influencia <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>as <strong>de</strong> estas variables no<br />
ha sido claramente establecida (Urzúa et al., 2004).<br />
En el presente trabajo se analizó la influencia<br />
que la edad <strong>de</strong>l individuo infectado pue<strong>de</strong> tener en<br />
la prepatencia, niveles <strong>de</strong> parasitemia, mortalidad y<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
alteraciones histopatológicas a nivel <strong>de</strong> corazón y<br />
músculo esquelético en ratones jóvenes <strong>de</strong> 2 meses<br />
<strong>de</strong> edad y ratones mayores, <strong>de</strong> 8 meses <strong>de</strong> edad,<br />
experimentalmente infectados con T. cruzi.<br />
MATERIALES Y MÉTODOS<br />
Parásitos. La infección experimental se realizó<br />
utilizando tripomastigotes sanguíneos <strong>de</strong>l clon<br />
Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi (Contreras et al., 1988). Esta cepa<br />
<strong>de</strong> parásito es mantenida in vivo en el bioterio <strong>de</strong> la<br />
Unidad <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>ología <strong>de</strong> la Facultad <strong>de</strong> Ciencias<br />
Veterinarias y Pecuarias <strong>de</strong> la Universidad <strong>de</strong> Chile,<br />
mediante el traspaso semanal <strong>de</strong> tripomastigotes en<br />
ratones Balb/c.<br />
Ratones. Se utilizaron cuatro grupos <strong>de</strong> 10 ratones<br />
machos, <strong>de</strong> la cepa Balb/c. Los dos primeros<br />
grupos correspon<strong>de</strong>n a ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses<br />
<strong>de</strong> edad y los dos grupos restantes correspon<strong>de</strong>n<br />
a ratones mayores, <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad. Esta<br />
cepa <strong>de</strong> ratones Balb/c proviene originalmente <strong>de</strong>l<br />
Jackson Laboratory, Bar Arbor, Maine, U.S.A.<br />
Mo<strong>de</strong>lo <strong>de</strong> infección experimental. Para la obtención<br />
<strong>de</strong> parásitos, se extrajo 0,6 mL <strong>de</strong> sangre<br />
mediante p<strong>un</strong>ción cardiaca <strong>de</strong> <strong>un</strong> ratón Balb/c infectado<br />
con el clon Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi, y sacrificado<br />
cumpliendo con las normas bioéticas establecidas<br />
en el Manual <strong>de</strong> Normas <strong>de</strong> Biseguridad <strong>de</strong> la Comisión<br />
Nacional <strong>de</strong> Investigación Científica y Tecnológica<br />
(CONICYT), Chile. La sangre así extraída<br />
se colocó en <strong>un</strong> tubo estéril conteniendo 0,1 mL<br />
<strong>de</strong> citrato <strong>de</strong> sodio, como anticoagulante. Luego se<br />
realizó <strong>un</strong>a dilución <strong>de</strong> 10 uL. <strong>de</strong> sangre infectada<br />
en 490 uL <strong>de</strong> suero fisiológico estéril y se hizo <strong>un</strong><br />
recuento <strong>de</strong> parásitos en cámara <strong>de</strong> Neubauer. Este<br />
procedimiento permitió <strong>de</strong>terminar la cantidad total<br />
<strong>de</strong> parásitos totales en los 0,6 mL <strong>de</strong> sangre extraídos<br />
<strong>de</strong>l ratón experimentalmente infectado. Posteriormente<br />
se realizaron las diluciones requeridas<br />
para obtener 2.000 parásitos en 0,2 mL que fue la<br />
cantidad inoculada por vía intraperitoneal en a cada<br />
<strong>un</strong>o <strong>de</strong> los ratones <strong>de</strong> los grupos experimentalmente<br />
infectados. Los 2 grupos control <strong>de</strong> dos y ocho<br />
meses <strong>de</strong> edad se inocularon con 0,2 mL <strong>de</strong> sangre<br />
<strong>de</strong> ratones Balb/c no infectados y diluida <strong>de</strong> manera<br />
similar a los grupos infectados.<br />
Estudio <strong>de</strong> Parasitemia. Los ratones experimentalmente<br />
infectados se sangraron cada dos días,<br />
a partir <strong>de</strong>l tercer día postinfección (p.i) y los nive-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33<br />
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI<br />
les <strong>de</strong> parasitemia se analizaron hasta la muerte <strong>de</strong><br />
los ratones o hasta la negatividad en los niveles <strong>de</strong><br />
parasitemia. La sangre fue obtenida <strong>de</strong> la vena caudal,<br />
en tubos <strong>de</strong> micro hematocrito heparinizados.<br />
Luego cada muestra fue centrifugada a 700 g por 5<br />
minutos, <strong>de</strong>jando reposar por 30 minutos en estufa<br />
a 37ºC para luego medir el volumen <strong>de</strong> sangre en<br />
cada tubo. Finalmente cada muestra se colocó en <strong>un</strong><br />
portaobjeto para <strong>de</strong>terminar el número <strong>de</strong> parásitos<br />
en 50 campos elegidos al azar y utilizando <strong>un</strong> aumento<br />
<strong>de</strong> 400x. Los resultados se expresaron como<br />
el promedio <strong>de</strong> parasitemia <strong>de</strong>l grupo y la <strong>de</strong>sviación<br />
estándar correspondiente, <strong>de</strong> acuerdo al método<br />
<strong>de</strong>scrito por Arias y Ferro (1988).<br />
Estudio histopatológico. Se sacrificó <strong>un</strong> ratón<br />
<strong>de</strong> cada grupo los días 13, 23 y 33 p.i. y se tomaron<br />
muestras <strong>de</strong> tejido cardiaco y músculo esquelético<br />
para su estudio histopatológico. Los tejidos se<br />
fijaron en Bouin-formalina y se incluyeron en parafina<br />
para finalmente realizar cortes <strong>de</strong> 5 μm que<br />
se tiñeron con hematoxilina-eosina. La severidad<br />
<strong>de</strong>l daño tisular y la presencia <strong>de</strong> pseudoquistes<br />
se realizó utilizando <strong>un</strong> aumento <strong>de</strong> 100x y se representó<br />
como negativo (-) al tejido preservado y<br />
sin signos aparentes <strong>de</strong> daño tisular. La intensidad<br />
<strong>de</strong> las lesiones fue evaluada en conformidad a la<br />
severidad <strong>de</strong> la infiltración inflamatoria, uytilizando<br />
el siguiente criterio: (+) Lesiones inflamatorias<br />
mínimas con discreto infiltrado leucocitario; (++)<br />
Lesiones mo<strong>de</strong>radas, con infiltrado leucocitario,<br />
hiperemia y e<strong>de</strong>ma; (+++) Lesiones severas, infiltrado<br />
leucocitario, hiperemia, e<strong>de</strong>ma y necrosis. El<br />
tropismo tisular y número <strong>de</strong> parásitos intracelulares<br />
se evaluó en 10 campos microscópicos <strong>de</strong> cada<br />
corte <strong>de</strong> tejido, examinados con aumento <strong>de</strong> 600x y<br />
se representó <strong>de</strong> la siguiente manera: (-) Negativo,<br />
ausencia <strong>de</strong> células parasitadas (pseudoquistes);<br />
(+) Leve, presencia <strong>de</strong> 1-5 células infectadas; (++)<br />
Mo<strong>de</strong>rado, presencia <strong>de</strong> 6-10 pseudoquistes; (+++)<br />
Severo, presencia <strong>de</strong> 11 o más pseudoquistes.<br />
Análisis Estadístico. Los resultados <strong>de</strong> los niveles<br />
máximos <strong>de</strong> parasitemia se analizaron mediante<br />
<strong>un</strong>a prueba <strong>de</strong> t. El análisis <strong>de</strong> supervivencia<br />
se realizó <strong>de</strong> acuerdo al método <strong>de</strong> Kaplan y Meier<br />
(1958).<br />
RESULTADOS Y DISCUSIóN<br />
En la Figura 1 se muestra la evolución <strong>de</strong> los<br />
25
C. ZÚÑIGA et al.<br />
niveles <strong>de</strong> parasitemia como <strong>un</strong>a forma <strong>de</strong> expresión<br />
<strong>de</strong>l <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la infección en los ratones jóvenes<br />
<strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad (grupo A) y en los ratones<br />
viejos <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad (grupo B) <strong>de</strong> la<br />
cepa Balb/c, infectados con 2.000 tripomastigotes<br />
sanguíneos <strong>de</strong>l clon Dm 28c <strong>de</strong> T. cruzi. El período<br />
<strong>de</strong> prepatencia sanguínea fue <strong>de</strong> 5 días en ambos<br />
grupos <strong>de</strong> ratones; sin embargo, en la etapa inicial<br />
<strong>de</strong> la infección, los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad<br />
presentaron niveles significativamente más altos (p<br />
< 0,05) <strong>de</strong> parásitos en circulación. En relación a los<br />
niveles máximos <strong>de</strong> parasitemia, éstos se <strong>de</strong>tectaron<br />
al séptimo día post infección en los ratones <strong>de</strong> ocho<br />
26<br />
Figura 1. Niveles <strong>de</strong> parasitemia <strong>de</strong><br />
dos grupos etarios <strong>de</strong> ratones Balb/c<br />
A (ratones jóvenes <strong>de</strong> 2 meses <strong>de</strong><br />
edad) y B (ratones <strong>de</strong> 8 meses <strong>de</strong><br />
edad), experimentalmente infectados<br />
con 2.000 tripomastigotes sanguíneos<br />
<strong>de</strong>l clon Dm 28c <strong>de</strong> T. cruzi.<br />
Figura 2. Porcentaje <strong>de</strong> mortalidad<br />
acumulada en ratones jóvenes <strong>de</strong><br />
dos meses <strong>de</strong> edad <strong>de</strong> la cepa Balb/c<br />
(A) y en ratones mayores, <strong>de</strong> ocho<br />
meses <strong>de</strong> edad (B), infectados con<br />
2000 tripomastigotes sanguíneos <strong>de</strong>l<br />
clon Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi. La diferencia<br />
entre las curvas <strong>de</strong> supervivencia<br />
<strong>de</strong> estos dos grupos <strong>de</strong> ratones, es<br />
estadísticamente significativas (p <<br />
0,02). A los 40 días post infección se<br />
alcanzo el 100% <strong>de</strong> mortalidad en los<br />
ratones jóvenes, mientras el 40% <strong>de</strong><br />
los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad <strong>sobre</strong>vivió<br />
más allá <strong>de</strong> los cuatro meses<br />
postinfección.<br />
meses <strong>de</strong> edad (3,2 x 10 5 parásitos/mL), mientras<br />
en el grupo <strong>de</strong> ratones jóvenes el nivel máximo <strong>de</strong><br />
parasitemia se obtuvo al día 14 p.i. alcanzando 5,1<br />
x 10 5 parásitos/mL (p < 0,05). No se observaron<br />
diferencias significativas (p > 0,05) en la duración<br />
<strong>de</strong> la parasitemia, puesto que ella fue negativa al<br />
día 19 p.i., en los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses<br />
<strong>de</strong> edad y al día 21 p.i. en el grupo <strong>de</strong> los ratones<br />
envejecidos <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad.<br />
Como todos los ratones fueron infectados con<br />
el mismo número <strong>de</strong> parásitos, se utilizó la muerte<br />
o supervivencia como criterio para <strong>de</strong>terminar<br />
la susceptibilidad o resistencia <strong>de</strong> cada grupo <strong>de</strong><br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
atones a la infección con 2.000 tripomastigotes<br />
sanguíneos <strong>de</strong> T. cruzi. La Figura 2 muestra que el<br />
grupo <strong>de</strong> ratones jóvenes, <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad,<br />
presentó <strong>un</strong> 50% <strong>de</strong> mortalidad acumulada a los l5<br />
días p.i., mientras el grupo <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> 8 meses<br />
<strong>de</strong> edad, presentó sólo <strong>un</strong> 10% <strong>de</strong> mortalidad<br />
en el mismo período. Al día 40 p.i. el grupo <strong>de</strong><br />
ratones jóvenes presentó <strong>un</strong> 100% <strong>de</strong> mortalidad<br />
acumulada, mientras en el grupo <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad, el 40% <strong>sobre</strong>vivió más allá <strong>de</strong> los cuatro meses<br />
p.i. No se observó mortalidad en los grupos control<br />
<strong>de</strong> ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses y <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong><br />
ocho meses <strong>de</strong> edad, inoculados con sangre normal<br />
<strong>de</strong> ratones Balb/c sanos, no infectados.<br />
A<strong>un</strong>que en los primeros diez días <strong>de</strong> infección<br />
los niveles <strong>de</strong> parasitemia fueron significativamente<br />
más altos en los ratones <strong>de</strong> mayor edad (p < 0,05),<br />
los animales jóvenes <strong>de</strong>sarrollaron niveles <strong>de</strong><br />
parasitemia <strong>de</strong> casi el doble <strong>de</strong> lo alcanzado por los<br />
animales <strong>de</strong> mayor edad a los 14 días p.i. (Figura<br />
1) lo que coincidió con <strong>un</strong>a también elevada<br />
mortalidad acumulada que alcanzó el 50% al día 15<br />
p.i. en este grupo <strong>de</strong> ratones, lo que parece apoyar la<br />
sugerencia que la persistencia <strong>de</strong>l parásito es <strong>un</strong>a <strong>de</strong><br />
las principales causas <strong>de</strong> la Enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
(Tarleton, 2001). Des<strong>de</strong> luego, <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los aspectos<br />
más sorpren<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la enfermedad es la compleja<br />
red <strong>de</strong> eventos que parece acompañar, tanto el<br />
<strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta inm<strong>un</strong>e protectora,<br />
como el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta autoinm<strong>un</strong>e<br />
que conduce a daño tisular, a medida que progresa<br />
el curso <strong>de</strong> la infección y/o <strong>de</strong> la enfermedad<br />
(Minoprio et al., 1989; Russo et al., 1989; Zúñiga<br />
et al., 1998: Zúñiga et al., 2002).<br />
Estudio Histopatológico<br />
El año tisular que acompaña el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la<br />
infección con T. cruzi se evaluó mediante la comparación<br />
<strong>de</strong> las lesiones histopatológicas presentes<br />
en corazón y músculo esquelético en los dos grupos<br />
<strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> dos y ocho meses <strong>de</strong> edad infectados<br />
con el clon Dm28c (Tabla 1). En los ratones<br />
jóvenes, el mayor daño tisular se observó en el<br />
músculo esquelético, con presencia <strong>de</strong> numerosos<br />
pseudoquistes, aumento <strong>de</strong> lesiones inflamatorias<br />
y necrosis <strong>de</strong>l tejido a medida que progresaba la<br />
infección, mientras en los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad este gran número <strong>de</strong> parásitos y enorme daño<br />
inflamatorio e infiltración celular, se observó en el<br />
tejido cardiaco, en el que, con el transcurso <strong>de</strong> los<br />
días se produjo no sólo <strong>un</strong>a disminución paulatina<br />
<strong>de</strong> la carga parasitaria y <strong>de</strong>l daño inflamatorio, sino<br />
también <strong>un</strong>a lenta reparación tisular.<br />
Un análisis <strong>de</strong>tallado <strong>de</strong> los estudios histopatológicos<br />
muestra que, al día 13 post-infección (p.i.)<br />
los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad presentaron lesiones<br />
inflamatorias y no inflamatorias multifocales<br />
en el tejido cardiaco (1-2 lesiones por campo,<br />
<strong>de</strong> formas redon<strong>de</strong>adas y alargadas, distribuidas al<br />
azar) (Figura 3). En los ratones jóvenes se observó,<br />
en cambio, <strong>un</strong> menor número <strong>de</strong> lesiones inflamatorias<br />
focales (1 cada 5 campos) (Figura 4).<br />
Tabla 1. Estudio histopatológico <strong>de</strong> ratones Balb/c infectados con 2.000 tripomastigotos sanguíneos <strong>de</strong>l clon<br />
Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi<br />
Grupo Tejido Lesión 13 días p.i. 23 días p.i. 33 días p.i.<br />
Ratones <strong>de</strong> ocho<br />
meses <strong>de</strong> edad<br />
Ratones <strong>de</strong> dos<br />
meses <strong>de</strong> edad<br />
Corazón Inflamación<br />
Pseudoquistes<br />
Necrosis<br />
Músculo<br />
esquelético<br />
Inflamación<br />
Pseudoquistes<br />
Necrosis<br />
Corazón Inflamación<br />
Pseudoquistes<br />
Necrosis<br />
Músculo<br />
esquelético<br />
Inflamación<br />
Pseudoquistes<br />
Necrosis<br />
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27
C. ZÚÑIGA et al.<br />
Figura 3. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad al día 13 p.i. Se observan lesiones inflamatorias y no<br />
inflamatorias. Aumento 100x.<br />
Al utilizar <strong>un</strong> aumento <strong>de</strong> 1.000x, se observó,<br />
en los ratones <strong>de</strong> mayor edad, gran cantidad <strong>de</strong><br />
pseudoquistes parasitarios e infiltrado inflamatorio<br />
con predominio <strong>de</strong> macrófagos (Figura 5). En los<br />
ratones jóvenes también se observó inflamación<br />
pero escasa presencia <strong>de</strong> pseudoquistes (Figura 6).<br />
Al día 23 p.pi, el miocardio <strong>de</strong> los ratones <strong>de</strong><br />
8 meses <strong>de</strong> edad mostró células infectadas y aumento<br />
<strong>de</strong> la infiltración celular en las lesiones inflamatorias<br />
focales diseminadas (Figura 7), mientras<br />
los ratones jóvenes mostraron sólo pequeños focos<br />
inflamatorios (Figura 8).<br />
Al día 33 p.i. no se <strong>de</strong>tectaron pseudoquistes<br />
en el miocardio <strong>de</strong> los ratones <strong>de</strong> 8 meses <strong>de</strong> edad,<br />
pero se observaron leves focos inflamatorios y pérdida<br />
<strong>de</strong> tejido muscular, con reemplazo <strong>de</strong> tejido<br />
conectivo (Figura 9). En el tejido cardiaco <strong>de</strong> los<br />
animales jóvenes se observó <strong>un</strong> leve proceso inflamatorio,<br />
sin mayores lesiones (Figura 10).<br />
En el músculo esquelético, tanto <strong>de</strong> los ratones<br />
<strong>de</strong> mayor edad, como en los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos<br />
meses <strong>de</strong> edad, no se <strong>de</strong>tectaron lesiones inflamatorias<br />
evi<strong>de</strong>ntes al día 13 post infección (Figura 11<br />
y Figura 12, respectivamente). Sin embargo, a los<br />
23 días p.i., mientras los ratones <strong>de</strong> mayor edad<br />
mostraban sólo <strong>un</strong>a mo<strong>de</strong>rada inflamación y escaso<br />
infiltrado leucocitario (Figura 13), los ratones jóvenes<br />
presentaron <strong>un</strong> severo proceso inflamatorio<br />
focal diseminado, con predominio linfocitario y necrosis<br />
<strong>de</strong> la fibra muscular (Figura 14).<br />
Al día 33 p.i. el músculo esquelético <strong>de</strong> los<br />
ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad presentó <strong>un</strong>a dis-<br />
28<br />
Figura 4. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad<br />
al día 13 p.i. Se observan leves lesiones inflamatorias.<br />
Aumento 100x.<br />
Figura 5. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad al día 13 p.i. Se observan 4 pseudoquistes. Aumento<br />
1000x.<br />
minución <strong>de</strong> los focos inflamatorios, pérdida <strong>de</strong> la<br />
estriación <strong>de</strong> la fibra muscular y reemplazo por tejido<br />
conectivo (Figura 15); se encontró a<strong>de</strong>más <strong>un</strong><br />
granuloma con gran cantidad <strong>de</strong> células inflamatorias<br />
y parásitos. En los animales jóvenes se observó,<br />
en cambio, <strong>un</strong>a mayor infiltración inflamatoria<br />
<strong>de</strong>l tejido muscular esquelético, con necrosis y <strong>de</strong>pósito<br />
<strong>de</strong> calcio (Figura 16).<br />
Los resultados <strong>de</strong> los estudios histopatológicos<br />
<strong>de</strong> corazón y músculo esquelético <strong>de</strong> los ratones<br />
aquí infectados con el clon Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi indican<br />
que, a pesar que en ambos grupos se presentaron<br />
lesiones inflamatorias <strong>de</strong> distinta consi<strong>de</strong>ración<br />
en estos tejidos, los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
Figura 6. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad al día 13 p.i. Se observa 1 pseudoquiste. Aumento<br />
200x.<br />
Figura 8. Tejido cardiaco en ratones <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong><br />
edad al día 23 p.i. Se observan sólo pequeños focos<br />
inflamatorios. Aumento 100x.<br />
que <strong>sobre</strong>vivieron a la infección fueron capaces<br />
<strong>de</strong> recuperarse y reparar el daño tisular, mientras<br />
que todos los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad<br />
sucumbieron a la infección (Figura 2), a pesar <strong>de</strong><br />
presentar sólo pequeños focos inflamatorios en el<br />
tejido cardiaco, pero <strong>un</strong> gran proceso inflamatorio,<br />
necrosis y <strong>de</strong>pósito <strong>de</strong> calcio en el músculo esquelético,<br />
sin posibilidad <strong>de</strong> poner en marcha mecanismos<br />
<strong>de</strong> reparación <strong>de</strong> este daño tisular (Figura 16).<br />
Estos resultados apoyan la hipótesis <strong>de</strong> la existencia<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong>a compleja red <strong>de</strong> eventos que acompañan<br />
tanto el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta inm<strong>un</strong>e protectora<br />
como el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta que induce<br />
daño tisular, a medida que progresa el curso <strong>de</strong> la<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33<br />
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI<br />
Figura 7. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad, al día 23 p.i. Se observa infiltrado mononuclear en<br />
lesiones inflamatorias diseminadas. Aumento 100.<br />
Figura 9. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong><br />
edad al día 33 p.i.. Se observan focos inflamatorios, pérdida<br />
<strong>de</strong> tejido muscular y reemplazo con tejido conectivo.<br />
No se observan pseudoquistes. Aumento 200x.<br />
infección y/o <strong>de</strong> la enfermedad (Dutra et al., 2009).<br />
Mientras alg<strong>un</strong>os individuos <strong>de</strong>sarrollan <strong>un</strong>a forma<br />
severa <strong>de</strong> la enfermedad y mueren en el curso <strong>de</strong><br />
la misma, otros logran <strong>sobre</strong>vivir a pesar <strong>de</strong>l daño<br />
tisular, como ocurre con el 40% <strong>de</strong> los ratones <strong>de</strong><br />
8 meses <strong>de</strong> edad aquí infectados con 2.000 tripomastigotes<br />
sanguíneos <strong>de</strong>l clon Dm28c <strong>de</strong> T. cruzi,<br />
<strong>de</strong>mostrando la compleja interacción parásito/hospe<strong>de</strong>ro<br />
que acompaña al <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la infección<br />
y/o <strong>de</strong> la enfermedad. La presentación <strong>de</strong> lesiones<br />
<strong>de</strong> distinta consi<strong>de</strong>ración o gravedad en diferentes<br />
tejidos <strong>de</strong> ratones jóvenes y <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> mayor<br />
edad <strong>de</strong> la cepa Balbc, infectados con el mismo<br />
clon <strong>de</strong> T. cruzi, sugiere que la respuesta inm<strong>un</strong>e<br />
29
C. ZÚÑIGA et al.<br />
Figura 10. Tejido cardiaco <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> dos meses<br />
<strong>de</strong> edad al día 33 p.i. Se observa <strong>un</strong> leve proceso<br />
inflamatorio. Aumento 200x.<br />
Figura 12. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones jóvenes <strong>de</strong><br />
dos meses <strong>de</strong> edad al día 13 p.i. Tampoco se observan<br />
lesiones inflamatorias. Aumento 100x.<br />
<strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro es efectivamente <strong>un</strong> factor crítico en<br />
las consecuencias que se observan en la evolución<br />
<strong>de</strong> esta infección parasitaria ((Laguens et al., 1981;<br />
Hontebeyrie-Joskowicz et al., 1987; Villela-Ribeiro<br />
et al., 2002, Lages-Silva et al., 2006).<br />
En humanos la transición <strong>de</strong>s<strong>de</strong> la fase aguda<br />
a la fase crónica <strong>de</strong> la Enfermedad <strong>de</strong> Chagas va<br />
acompañada <strong>de</strong> <strong>un</strong>a disminución en la parasitemia,<br />
como consecuencia <strong>de</strong>l <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta<br />
inm<strong>un</strong>e relativamente eficiente, que logra mantener<br />
el número <strong>de</strong> parásitos por <strong>de</strong>bajo <strong>de</strong> niveles <strong>de</strong>tectables<br />
en el hospe<strong>de</strong>ro, Sin embargo, a pesar <strong>de</strong><br />
estos bajos niveles <strong>de</strong> parasitemia, es precisamente<br />
durante la fase crónica <strong>de</strong> la enfermedad que los<br />
pacientes <strong>de</strong>sarrollan las formas más severas <strong>de</strong><br />
30<br />
Figura 11. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho<br />
meses <strong>de</strong> edad al día 13 p.i. No se observan lesiones<br />
inflamatorias. Aumento 100x.<br />
Figura 13. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses<br />
<strong>de</strong> edad al, día 23 p.i. Se observa <strong>un</strong>a mo<strong>de</strong>rada inflamación<br />
y escaso infiltrado leucocitario. Aumento 100x.<br />
la misma. Aún cuando se <strong>de</strong>sconoce qué factores<br />
<strong>de</strong>terminan que pacientes infectados con T. cruzi<br />
<strong>de</strong>sarrollen distintas formas clínicas <strong>de</strong> la enfermedad,<br />
se ha postulado que la cepa <strong>de</strong> parásito, su<br />
tropismo tisular, el número <strong>de</strong> parásitos en la infección<br />
inicial, la naturaleza <strong>de</strong> la respuesta inm<strong>un</strong>e<br />
<strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro y el repertorio genético <strong>de</strong>l mismo,<br />
juegan <strong>un</strong> rol importante en las consecuencias <strong>de</strong><br />
la infección (Bonney y Engman, 2008; Dutra y Gollob,<br />
2008). Sin embargo, la efectividad <strong>de</strong> la respuesta<br />
inm<strong>un</strong>e inicial <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro, para controlar<br />
al parásito en <strong>un</strong> tejido específico, parece <strong>de</strong>sempeñar<br />
<strong>un</strong> rol tal vez más importante (Marin-Neto et<br />
al., 2007; Dutra y Gollob, 2008); <strong>de</strong> esta manera la<br />
presentación clínica variará <strong>de</strong> acuerdo a la dura-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
Figura 14. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones jóvenes <strong>de</strong><br />
dos meses <strong>de</strong> edad al día 23 p.i. Se observa <strong>un</strong> gran<br />
proceso inflamatorio con infiltrado linfocitario y necrosis<br />
<strong>de</strong> la fibra muscular. Aumento 100x.<br />
Figura 16. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones jóvenes <strong>de</strong><br />
dos meses <strong>de</strong> edad al día 33 p.i. Se observa infiltración<br />
<strong>de</strong>l tejido muscular, necrosis y <strong>de</strong>pósito <strong>de</strong> calcio. Aumento<br />
100x.<br />
ción <strong>de</strong> la enfermedad y la extensión y localización<br />
<strong>de</strong> las lesiones cardiacas (Rassi Jr et al., 2000). En<br />
conformidad con esta hipótesis, cuando el control<br />
inm<strong>un</strong>ológico resulta insuficiente, el número <strong>de</strong> parásitos<br />
y el daño inflamatorio en los tejidos ten<strong>de</strong>rá<br />
a aumentar, mientras el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong> respuesta<br />
inm<strong>un</strong>e efectiva. capaz <strong>de</strong> reducir el número <strong>de</strong> parásitos<br />
y <strong>de</strong> limitar sus consecuencias inflamatorias,<br />
resultará en <strong>un</strong> menor daño tisular.<br />
Así, el <strong>de</strong>terioro <strong>de</strong>l sistema inm<strong>un</strong>e, que viene<br />
con la edad o el envejecimiento, podría explicar la<br />
incapacidad para <strong>de</strong>sarrollar <strong>un</strong>a efectiva respuesta<br />
inm<strong>un</strong>e innata que permita, en la fase aguda <strong>de</strong> la<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33<br />
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI<br />
Figura 15. Músculo esquelético <strong>de</strong> ratones <strong>de</strong> ocho meses<br />
<strong>de</strong> edad al día 33 p.i . Se observan focos inflamatorios,<br />
pérdida <strong>de</strong> las estriaciones y reemplazo por tejido<br />
conectivo. Aumento 100x.<br />
infección, controlar los niveles <strong>de</strong> parasitemia sanguínea<br />
(Figura 1) y la persistencia tisular <strong>de</strong>l parásito<br />
(Figura 5) que conduciría finalmente al daño<br />
inflamatorio que se observa en el tejido cardiaco<br />
<strong>de</strong> los ratones <strong>de</strong> ocho meses <strong>de</strong> edad (Figura 7).<br />
Sin embargo, a pesar <strong>de</strong>l extenso daño tisular, estos<br />
ratones <strong>de</strong> mayor edad logran, paradójicamente,<br />
controlar el número <strong>de</strong> parásitos sanguíneos y tisulares<br />
y reparar finalmente el daño cardiaco, alcanzando<br />
<strong>un</strong> 40% <strong>de</strong> supervivencia más allá <strong>de</strong> los<br />
cuatro meses post-infección (Figura 2), sugiriendo<br />
que la interacción parásito/hospe<strong>de</strong>ro es claramente<br />
más compleja <strong>de</strong> lo que conocemos. Esta sugerencia<br />
se ve reforzada por los resultados obtenidos en<br />
los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong> edad en los<br />
cuales el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> <strong>un</strong>a respuesta innata que<br />
parece controlar el nivel <strong>de</strong> parásitos sanguíneos<br />
en la primera semana post-infección, resulta finalmente<br />
inefectiva, puesto que la carga parasitaria<br />
alcanza niveles que duplican aquella observada en<br />
los ratones <strong>de</strong> mayor edad, a las dos semanas postinfección<br />
(Figura 1), lo que coinci<strong>de</strong> a<strong>de</strong>más con<br />
<strong>un</strong> 50% <strong>de</strong> mortalidad acumulada, en este grupo <strong>de</strong><br />
ratones (Figura 2), a pesar <strong>de</strong> la escasa evi<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong><br />
parásitos y <strong>de</strong> daño inflamatorio en el tejido cardiaco<br />
(Figura 8), que sí se observa en tejido muscular<br />
esquelético (Figuras 14 y 16).<br />
La única señal clínica evi<strong>de</strong>nte observada en<br />
este grupo <strong>de</strong> ratones jóvenes experimentalmente<br />
infectados con T. cruzi, fue la presentación <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong>a paresia <strong>de</strong>l tren posterior poco días antes <strong>de</strong> su<br />
31
C. ZÚÑIGA et al.<br />
muerte súbita, lo que sugiere la participación <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong> mecanismo <strong>de</strong> daño neuronal en la patogénesis<br />
<strong>de</strong> la enfermedad y en las complicaciones y estado<br />
clínico <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro (Rassi Jr. et al., 2000; Marin-<br />
Neto et al., 2007). En humanos la muerte súbita <strong>de</strong><br />
los pacientes con enfermedad <strong>de</strong> Chagas, en ausencia<br />
<strong>de</strong> cualquier síntoma clínico significativo previo,<br />
obe<strong>de</strong>ce generalmente a fibrilación ventricular<br />
que es la causa más frecuente <strong>de</strong> muerte y afecta al<br />
55-65% <strong>de</strong> los pacientes (Rassi Jr. et al., 2001).<br />
Por lo tanto, las diferencias en parasitemia,<br />
daño tisular y mortalidad observada en los ratones<br />
aquí infectados, sugiere que la edad pue<strong>de</strong> afectar<br />
la efectividad <strong>de</strong> la respuesta inm<strong>un</strong>e para controlar<br />
el daño parásito-<strong>de</strong>pendiente o inm<strong>un</strong>o-mediado,<br />
en órganos específicos. A<strong>un</strong>que no hay evi<strong>de</strong>ncia<br />
concluyente <strong>de</strong>l rol patogénico <strong>de</strong>l parásito y/o<br />
<strong>de</strong> la respuesta autoinm<strong>un</strong>e en la evolución <strong>de</strong> la<br />
enfermedad, el 100% <strong>de</strong> mortalidad acumulada<br />
obtenida en los ratones jóvenes <strong>de</strong> dos meses <strong>de</strong><br />
edad, pue<strong>de</strong> obe<strong>de</strong>cer a la inducción <strong>de</strong> mecanismos<br />
adicionales <strong>de</strong> daño, como aquéllos relacionados<br />
con las alteraciones neurológicas asociadas a<br />
las arritmias malignas y muerte súbita observada<br />
en humanos. Estas alteraciones no ocurrirían en<br />
los ratones <strong>de</strong> mayor edad, como consecuencia<br />
<strong>de</strong> la menor efectividad <strong>de</strong>l sistema inm<strong>un</strong>e que<br />
acompaña al envejecimiento.<br />
32<br />
REFERENCIAS<br />
1. ANDRADE LO, GALVAO LMC, MEIREL LES, M<br />
CHIARI E, PENA S, MACEDO A. 2010. Differential<br />
tissue tropismo of Tripanosoma cruzi strains: an in vitro<br />
study. Mem Inst. Oswaldo Cruz 105: 834-837.<br />
2. ANDRADE SG, MAGALHAES JB. 1996. Bio<strong>de</strong>mes<br />
and zymo<strong>de</strong>mes of Trypanosoma cruzi strains: correlations<br />
with clinical data and experimental pathology.Rev<br />
Soc Bras Med Trop 30: 27-35.<br />
3. ANDRADE LO, MACHADO CR, CHIARI E,<br />
PENA SD, MACEDO AM. 1999. Differential tissue<br />
distribution of diverse clones of Trypanosoma cruzi in<br />
infected mice Mol. Biochem Parasitol 100: 163-172.<br />
4. ANDRADE LO, MACHADO CR, CHIARI E, PENA<br />
SD, MACEDO AM. 2002. Trypanosoma cruzi: role<br />
of the host genetic backgro<strong>un</strong>d in the differential<br />
tissue distribution of parasite clonal populations. Exp.<br />
Parasitol 100: 269-275.<br />
5. ANDERSSON J, ENGLUND P, SUNNEMARK D.<br />
DAHLSTEDT A, WESTERBLAD H, NENNESMO I,<br />
OORN A, LUNDBERG IE. 2003. CBA/J mice infected<br />
with Trypanosoma cruzi: an experimental mo<strong>de</strong>l for<br />
inflammatory myophaties Muscle Nerve 27: 442-448.<br />
6. ARIAS A, FERRO E. 1988. Quantification of Trypano-<br />
soma cruzi parasitemia by direct micromethod. Trans<br />
Royal Soc Trop Med Hyg. 82: 248.<br />
7. BONNEY KM, ENGMAN DM. 2008. Chagas Heart<br />
disease pathogenesis one mechanism or many?. Curr.<br />
Mol. Med. 8: 510-518.<br />
8. CLAYTON J. 2010. Chagas disease Nature 465:S4-S5.<br />
9. CONTRERAS V, ARAUJO-JORGE T, BONALDO<br />
M, THOMAZ N, BARBOSA H, MEIRELLES M,<br />
GOLDENBERG S. 1988. Biological aspects of the Dm<br />
28c clone of Trypanosoma cruzi after metacyclogenesis<br />
in chemically <strong>de</strong>fined media. Mem. Inst. Oswaldo Cruz<br />
83: 123-133.<br />
10. COSTA J, LORENZO M. 2009. Biology, diversity and<br />
strategies for thr monitoring and control of triatomines<br />
Mem. Inst. Oswaldo Cruz 104 (SUPPL 1): 46-51.<br />
11. DIAS JCP, SILVEIRA A, SCHOFIELD CJ. 2002. The<br />
impact of Chagas disease control in Latin America- A<br />
review. Mem Inst Oswaldo Cruz 97: 603-612.<br />
12. DÍAZ E, ESCALANTE H, JARA C. 2004. Niveles<br />
<strong>de</strong> parasitemia y alteraciones histopatológicas en Mus<br />
musculus BALB/c infectado con Trypanosoma cruzi<br />
obtenido <strong>de</strong> Panstrongylus chinai <strong>de</strong>l Valle Chamán, La<br />
Libertad - Perú. Parasitol Latinoam. 59: 153-158.<br />
13 DUTRA WO, GOLLOB KJ. 2008. Current concepts<br />
in imm<strong>un</strong>oregulation and pathology of human Chagas<br />
disease. Curr. Opin. Infect. Diss. 27: 287-292.<br />
14. DUTRA WO, SILVA CA, AMARAL FN, da COSTA<br />
GG, da SILVEIRA AB, d’AVILA REIS D, GOLLOB<br />
KJ. 2009. Cellular and genetic mechanisms envolved<br />
in the generation of protective and pathogenic imm<strong>un</strong>e<br />
responses in human Chagas disease. Mem. Oswaldo<br />
Cruz 104 (Suppl.1): 208-218.<br />
15. GUHL F. 2007. Epi<strong>de</strong>miología <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong><br />
Chagas en Latinoamérica y Colombia. En: Enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas. Sociedad Colombiana <strong>de</strong> Cardiología y<br />
Cirugía Cardiovascular. 1ª ed. Bogotá, Colombia, pp<br />
7-14.<br />
16. HONTEBEYRIE-JOSKOWICZ M, SAID G, MI-<br />
LLON G, MARCHALL G, EISEN H. 1987. L3T4 T<br />
cells able to mediate parasite-specific <strong>de</strong>layed type<br />
hypersensitivity play a role in the pathology of experimental<br />
Chagas`disease. Eur. J. Inm<strong>un</strong>ol. 17: 1027-<br />
1032.<br />
17. KAPLAN E, MEIER P. 1958. Non parametric estimation<br />
from incomplete observations. J. Am. Stat. Assoc.<br />
53: 457-481.<br />
18. LAGUENS RP, CABEZA-MECKERT P, CHAMBO J,<br />
GELPI R. 1981. Chronic Chagas disease in the mouse.<br />
Med. 41: 40-45.<br />
19. LAGUES-SILVA F, RALIREZ LE, PEDROSA AL,<br />
CREMA E, da CUNHA GALVAO LM, JUNHO PENA<br />
SD, MACEDO AM, CHIARI F. 2006. Variability of<br />
kinetoplast DNA gene structures of Trypanosoma cruzi<br />
II strains from patients with different forms od Chagas<br />
disease in Brazil. J. Clin. Microbiol. 44: 2167-2171.<br />
20. MARIN-NETO JA, CUNHA-NETO E, MACIEL BC,<br />
SIMOES MV. 2007. Pathogenesis of chronic heart<br />
disease. Circulation 115: 1109-1123.<br />
21. MINOPRIO P, ITOHARA S, HEUSSER C, TONE-<br />
GAWA S, COUTINHO A. 1989. Imm<strong>un</strong>obiology of<br />
murine T. cruzi infection: The predominance of parasite-nonspecific<br />
responses and the activation of TCRI<br />
cells. Imm<strong>un</strong>ol. Rev. 112: 183-207.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
22. MONCAYO A, YANINE MI. 2006. An update of<br />
Chagas disease (human American trypanosomiasis)<br />
Ann. Trop. Med. Parasitol. 64: 475-482.<br />
23. RASSI JR A, RASSI A, LITTLE WC. 2000. Chagas<br />
Herat disease. Clin. Cardiol. 23: 883-889.<br />
24. RASSI JR A, RASSI SG, RASSI A. 2001. Sud<strong>de</strong>n<br />
<strong>de</strong>ath in Chagas dosease Arq. Bras. Cardiol 76: 75-96.<br />
25. RODRÍGUEZ J, ALBAJAR P. 2010.Chagas disease a<br />
new worldwi<strong>de</strong> challenge. Nature 465: S6-S7.<br />
26. RUSSO M, STAROVINAS N, RIBEIRO DOS SAN-<br />
TOS R, MINOPRIO P, EISEN H, HONTEBEYRIE-<br />
JOSKOWISK M. 1989. Susceptible mice present higher<br />
macrophage activation than resistant mice during<br />
infection with myotropic strains of Trypanosoma cruzi.<br />
Parasite Imm<strong>un</strong>ol. 11: 385-389.<br />
27. TARLETON RI. 2001. Parasite persistente in the<br />
aetiology of Chagas disease. Int. J. Parasitol. 31: 550-<br />
554.<br />
28. URZÚA C, MORALES MA, VERGARA U, PALáU<br />
MT, ZÚÑIGA C. 2004. Sexo <strong>de</strong>l hospe<strong>de</strong>ro y dosis<br />
infectante <strong>de</strong> parásitos como factores en el <strong>de</strong>sarrollo<br />
<strong>de</strong> la infección con Trypanosoma cruzi en <strong>un</strong> mo<strong>de</strong>lo<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33<br />
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI<br />
murino. Parasitol Latinoam. 3-4: 104-109.<br />
29. VALENZUELA L, BARRIA C, SEPÚLVEDA S, GA-<br />
LANTI N, CABRERA G. 2010. Enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
crónica : estrés oxidativo y miocarditis chagásica<br />
asociada a la persistencia parasitaria. Av Cs Vet 1: 35-<br />
44.<br />
30. VILLELA-RIBEIRO L, BARBOSA A, ANDRADE<br />
Z. 2002. Pathology of intracardiac nerves in experimental<br />
Chagas disease. Men Ins Oswaldo Cruz. 5:<br />
613-617.<br />
31. WRIGHTSMAN R, KRASSNER S, WATSON J. 1982.<br />
Genetic control of response to Trypanosoma cruzi in<br />
mice: multiple genes influencing parasitemia and<br />
survival. Infect Imm<strong>un</strong>. 36: 637-644.<br />
32. ZÚÑIGA C, PARRA A, VELA H, COURCELLES T,<br />
VARGAS R, VERGARA U. 1998. Estudio histopatológico<br />
en ratones infectados experimentalmente con<br />
Trypanosoma cruzi. Parasitol al Día. 22: 23-28.<br />
33. ZÚÑIGA C, VARGAS R, VERGARA U. 2002.<br />
Evolución <strong>de</strong> la infección con Trypanosoma cruzi en<br />
cepas susceptibles y resistentes <strong>de</strong> ratones. Arch Med<br />
Vet. 2: 183-188.<br />
33
Artículo Original<br />
34<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41<br />
Parasitosis en Gran Canaria (España).<br />
Estudio prospectivo multicéntrico durante <strong>un</strong> año<br />
NOVO-VELEIRO I. 1 , MARTÍN-SáNCHEZ A. M. 2,3 , ELCUAZ-ROMANO R 4 , MURO A 5 , AFONSO-RODRÍGUEZ<br />
O 3 , GARCÍA-BARDECI D 4 , BORDES-BENÍTEZ A. 4 , CARRANZA-RODRÍGUEZ C 6,7 , HERNáNDEZ-CABRERA<br />
M 6,7 , ALVELA-SUáREZ L 1 y PÉREZ-ARELLANO J. L 6,7 .<br />
1 Servicio <strong>de</strong> Medicina Interna. Hospital Clínico. Complejo Hospitalario Universitario <strong>de</strong> Salamanca. Salamanca.<br />
2 Servicio <strong>de</strong> Microbiología y Parasitología. Hospital Insular. Las Palmas.<br />
3 Departamento <strong>de</strong> Ciencias Clínicas. Universidad <strong>de</strong> Las Palmas <strong>de</strong> Gran Canaria. Las Palmas.<br />
4 Servicio <strong>de</strong> Microbiología y Parasitología. Hospital Dr Negrín. Las Palmas.<br />
5 Laboratorio <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>ología y Parasitología Molecular, CIETUS, Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Universidad <strong>de</strong> Salamanca.<br />
Salamanca.<br />
6 Departamento <strong>de</strong> Ciencias Médicas y Quirúrgicas. Universidad <strong>de</strong> Las Palmas <strong>de</strong> Gran Canaria. Las Palmas.<br />
7 Unidad <strong>de</strong> Enfermeda<strong>de</strong>s Infecciosas y Medicina Tropical. Hospital Insular <strong>de</strong> Las Palmas. Las Palmas.<br />
ABSTRACT<br />
HUMAN PARASITIC INFECTIONS IN GRAN CANARIA (SPAIN). A ONE-YEAR<br />
MULTICENTRIC PROSPECTIVE STUDY<br />
Introduction: Parasitic diseases are the most prevalent diseases in the world. The objective of this<br />
study was to evaluate the prevalence and clinical and epi<strong>de</strong>miological characteristics of parasitic diseases<br />
diagnosed in Gran Canaria during a year. Methods: We inclu<strong>de</strong>d all diagnosed cases of parasitosis in<br />
public health centers of Gran Canaria during a year. Then, we conducted a <strong>de</strong>scriptive study, analyzing<br />
socio-<strong>de</strong>mographic characteristics, presentation and associated factors. Results: A total of 957 cases were<br />
diagnosed (55% men). 58.4% were due to protozoa, the most frequent was Giardia intestinalis (84%),<br />
followed by Trichomonas vaginalis (13.4%), Plasmodium sp (3.9%) and Cryptosporidium sp (2.3%). In<br />
relation to helminthiasis (40.7% of total), 76.4% correspon<strong>de</strong>d to Enterobius vermicularis, 6.1% were due<br />
to hookworm, 3.6% for Trichuris trichiura and 3% to different filariasis. The largest age group was between<br />
1 and 10 years. 21.2% of the cases were imported, most of them from sub-Saharan co<strong>un</strong>tries. Conclusions:<br />
The real prevalence of different parasitic diseases on the island of Gran Canaria is greater than that <strong>de</strong>clared<br />
by formal systems. Parasites that more frequently affect the native population of Gran Canaria who has not<br />
traveled to tropical areas are Giardia intestinalis and Enterobius vermicularis.<br />
Key words: Parasitic diseases, Protozoa, Helminths, Gran Canaria.<br />
Recibido: 1 <strong>de</strong> Marzo <strong>de</strong> 2012. Aprobado: 11 <strong>de</strong> Abril <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Prof. J. L. Pérez Arellano. Unidad <strong>de</strong> Enfermeda<strong>de</strong>s Infecciosas y Medicina Tropical. Hospital<br />
Universitario Insular <strong>de</strong> Gran Canaria. Departamento <strong>de</strong> Ciencias Médicas y Quirúrgicas.<br />
Universidad <strong>de</strong> Las Palmas <strong>de</strong> Gran Canaria. 35080 Las Palmas <strong>de</strong> Gran Canaria. Tno 928451455<br />
- Fax 928451413
RESUMEN<br />
Introducción: Las parasitosis son las enfermeda<strong>de</strong>s infecciosas más prevalentes en el m<strong>un</strong>do.<br />
El objetivo <strong>de</strong> este estudio fue evaluar la prevalencia y características clínico-epi<strong>de</strong>miológicas <strong>de</strong><br />
las parasitosis diagnosticadas en Gran Canaria en <strong>un</strong> año. Métodos: Se incluyeron todos los casos <strong>de</strong><br />
parasitosis diagnosticados en todos los centros públicos <strong>de</strong> Gran Canaria durante <strong>un</strong> año. Se llevó a cabo <strong>un</strong><br />
estudio <strong>de</strong>scriptivo, analizando características socio<strong>de</strong>mográficas <strong>de</strong> los pacientes, formas <strong>de</strong> presentación<br />
y factores asociados. Resultados: Se diagnosticaron <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 957 casos (55% varones). El 58,4% se<br />
<strong>de</strong>bían a protozoos, siendo el más frecuente Giardia intestinalis (84%), seguido <strong>de</strong> Trichomonas vaginalis<br />
(13,4%), Plasmodium sp (3,9%) y Cryptosporidium sp (2,3%). En cuanto al diagnóstico etiológico <strong>de</strong> las<br />
helmintosis (40,7% <strong>de</strong>l total), el 76,4% correspondían a Enterobius vermicularis, <strong>un</strong> 6,1% a <strong>un</strong>cinarias, el<br />
3,6% a Trichuris trichiura y el 3% a diferentes filariosis. El grupo <strong>de</strong> edad más numeroso fue el comprendido<br />
entre 1 y 10 años. El 21,2% <strong>de</strong> los casos fueron importados, siendo el origen más frecuente <strong>de</strong> los pacientes<br />
los países subsaharianos. Conclusiones: La prevalencia real <strong>de</strong> las diferentes parasitosis en la isla <strong>de</strong> Gran<br />
Canaria es muy superior a la <strong>de</strong>clarada mediante los sistemas oficiales. Los parásitos que afectan <strong>de</strong> forma<br />
más frecuente a la población autóctona <strong>de</strong> Gran Canaria que no ha viajado a zonas tropicales son Giardia<br />
intestinalis y Enterobius vermicularis.<br />
Palabras clave: Parasitosis, Protozoos, Helmintos, Gran Canaria.<br />
INTRODUCCIóN<br />
Las parasitosis (clínicas o subclínicas) son, sin<br />
lugar a dudas, las enfermeda<strong>de</strong>s infecciosas más<br />
prevalentes en el m<strong>un</strong>do (Watkins, 2003; Muñoz y<br />
Pérez, 2006) a<strong>un</strong>que sus consecuencias patológicas<br />
son muy variables <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong>l agente causal<br />
concreto. Des<strong>de</strong> <strong>un</strong> p<strong>un</strong>to <strong>de</strong> vista epi<strong>de</strong>miológico,<br />
su prevalencia es máxima en zonas tropicales<br />
y subtropicales (Watkins, 2003) fenómeno ligado<br />
a las malas condiciones higiénicas y socio-sanitarias.<br />
Sin embargo, estas enfermeda<strong>de</strong>s también se<br />
<strong>de</strong>scriben en países <strong>de</strong>sarrollados existiendo dos<br />
patrones diferentes: i) parasitosis cosmopolitas,<br />
<strong>de</strong> distribución <strong>un</strong>iversal. A modo <strong>de</strong> ejemplo, en<br />
U.S.A. se diagnostican anualmente 7,4 millones <strong>de</strong><br />
infecciones por Trichomonas vaginalis, siendo la<br />
parasitosis más frecuente en dicho país (Parasitic<br />
Disease Report) y ii) parasitosis importadas, relacionadas<br />
con los viajes a áreas endémicas ( Ryan<br />
et al., 2002; Espinosa et al., 2011) o con la inmigración<br />
<strong>de</strong>s<strong>de</strong> esas zonas m<strong>un</strong>diales (Pardo et al.,<br />
2006). En este sentido, tiene interés recordar el aumento<br />
exponencial <strong>de</strong>l número <strong>de</strong> inmigrantes en<br />
España en la pasada década Sanz y Pérez, 2007).<br />
La información disponible acerca <strong>de</strong> las infecciones<br />
parasitarias en España es escasa y fragmentaria.<br />
A<strong>de</strong>más <strong>de</strong> los casos <strong>aislado</strong>s (o pequeños<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41<br />
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO<br />
grupos), las principales series presentan alg<strong>un</strong>os<br />
sesgos en relación con los grupos etarios consi<strong>de</strong>rados<br />
(principalmente series pediátricas) (Jarabo et<br />
al., 1995; Pérez et al., 1997; Belda et al., 2008),<br />
el tipo específico <strong>de</strong> parasitosis (p. ej. intestinales,<br />
ETS, hidatidosis o fasciolosis) (Orduña et al., 1001;<br />
Cosme et al., 2001; Díaz et al., 2002; Roca et al.,<br />
2002, 2003; Martín et al., 2004; Pardo et al., 2005;<br />
Belda et al., 2008; Monge et al., 2009, González et<br />
al., 2011) o el origen <strong>de</strong> los pacientes (parasitosis<br />
importadas o autóctonas) (Orduña et al., 1001; Jarabo<br />
et al., 1995; Pérez et al., 1997; Cosme et al.,<br />
2001; Díaz et al., 2002; Roca et al., 2002, 2003;<br />
Martín et al., 2004; Pardo et al., 2005; Belda et al.,<br />
2008; Monge et al., 2009, González et al., 2011).<br />
Por ello, el objetivo principal <strong>de</strong> este estudio fue<br />
evaluar tanto la prevalencia como las características<br />
clínicas y epi<strong>de</strong>miológicas básicas <strong>de</strong> las diferentes<br />
parasitosis diagnosticadas en la isla <strong>de</strong> Gran<br />
Canaria durante <strong>un</strong> año natural.<br />
MÉTODOS<br />
Criterios <strong>de</strong> inclusión. Se incluyeron todos<br />
los casos <strong>de</strong> parasitosis diagnosticados en todos<br />
los centros públicos <strong>de</strong> las dos áreas sanitarias <strong>de</strong><br />
la isla <strong>de</strong> Gran Canaria. El área Norte incluye la<br />
35
I. NOVO-VELEIRO et al.<br />
zona norte <strong>de</strong> la ciudad <strong>de</strong> Las Palmas (Hospital<br />
Universitario Dr. Negrín) y los Centros <strong>de</strong> Atención<br />
Especializada (CAEs) relaciona-dos. El área Sur<br />
incluye la zona sur <strong>de</strong> la ciudad <strong>de</strong> Las Palmas<br />
(Complejo Hospitalario Universitario Materno-<br />
Insular) y los CAEs relacionados. El período <strong>de</strong><br />
estudio fue <strong>de</strong>l 1 <strong>de</strong> j<strong>un</strong>io <strong>de</strong> 2000 al 31 <strong>de</strong> mayo <strong>de</strong><br />
2001.<br />
Criterios <strong>de</strong> exclusión. Se excluyeron los casos<br />
en los que se <strong>de</strong>tectaron parásitos no patógenos,<br />
específicamente amebas.<br />
Métodos diagnósticos. El diagnóstico se<br />
efectuó empleando las técnicas directas habituales<br />
<strong>de</strong> cada centro <strong>de</strong> trabajo: técnicas <strong>de</strong> Ritchie<br />
y Kato-Katz para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> parasitosis<br />
intestinales; <strong>de</strong>tección antigénica <strong>de</strong> Gs65 en<br />
heces para el diagnóstico <strong>de</strong> giardiosis (Giardia<br />
II, Techlab/Wampole Inc., Blacksburg, VA, USA);<br />
test <strong>de</strong> Graham para el diagnóstico <strong>de</strong> enterobiosis,<br />
<strong>de</strong>tección <strong>de</strong> adhesina (Gal/GalNAc lectin) para<br />
la i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> Entamoeba histolytica (E.<br />
histolytica II, TechLab/Wampole Inc., Blacksburg,<br />
VA, USA); examen <strong>de</strong>l exudado vaginal en<br />
fresco para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> T. vaginalis así como<br />
estudio <strong>de</strong>l sedimento urinario para la evaluación<br />
<strong>de</strong> Schistosoma haematobium y T. vaginalis en<br />
varones (Shore, 2009). En la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>as<br />
helmintosis se emplearon técnicas serológicas ya<br />
<strong>de</strong>scritas por nuestro grupo (Pardo et al., 2006).<br />
Los parásitos i<strong>de</strong>ntificados se incluyeron en<br />
tres grupos: protozoos, helmintos y artrópodos.<br />
36<br />
Debemos señalar que los casos <strong>de</strong> Blastocystis<br />
hominis se incluyeron, en el grupo <strong>de</strong> protozoos,<br />
a<strong>un</strong>que la taxonomía <strong>de</strong> este género/especie es<br />
controvertida (reino Chromista) (Tan et al., 2002).<br />
Se utilizó la terminología recomendada por Bush et<br />
al., en su trabajo Parasitology meets ecology on its<br />
own terms. Margolis et al., revisited para referirse<br />
a la epi<strong>de</strong>miología <strong>de</strong> las diferentes enfermeda<strong>de</strong>s<br />
parasitarias <strong>de</strong>scritas (Bush et al., 1997).<br />
Variables clínicas. Se evaluaron las siguientes<br />
magnitu<strong>de</strong>s: edad, sexo, mes <strong>de</strong>l año y origen <strong>de</strong><br />
los pacientes (autóctono o importado). En los casos<br />
<strong>de</strong> pacientes atendidos en el medio hospitalario<br />
se recogió a<strong>de</strong>más la existencia o no <strong>de</strong> inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>presión,<br />
la sintomatología que presentaban en el<br />
momento <strong>de</strong>l diagnóstico, así como la presencia <strong>de</strong><br />
anemia y/o eosinofilia en <strong>de</strong>terminadas parasitosis.<br />
Estudio estadístico. Se llevó a cabo <strong>un</strong> estudio<br />
<strong>de</strong>scriptivo <strong>de</strong> cada <strong>un</strong>a <strong>de</strong> las parasitosis diagnosticadas,<br />
analizando las características socio<strong>de</strong>mográficas<br />
<strong>de</strong> los pacientes, las formas <strong>de</strong> presentación y<br />
los factores asociados. Se utilizó para ello el programa<br />
estadístico SPSS versión 17.<br />
RESULTADOS<br />
Se recogieron los datos <strong>de</strong> <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 957 pacientes<br />
con parasitosis (55% varones). La edad media<br />
fue <strong>de</strong> 16 años (DE=25). El 66% <strong>de</strong> los pacientes<br />
tenían <strong>un</strong>a edad inferior a 18 años y el grupo<br />
> 100<br />
51 - 100<br />
31 - 50<br />
11 -30<br />
1 - 10<br />
Sin casos<br />
Figura 1. Distribución <strong>de</strong> los casos<br />
según el m<strong>un</strong>icipio <strong>de</strong> origen.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
etario más numeroso fue el comprendido entre 0<br />
y 9 años, con 460 individuos. Del total <strong>de</strong> casos,<br />
555 fueron diagnosticados en el área Norte y 402<br />
en el área Sur <strong>de</strong> Gran Canaria. En la Figura 1<br />
se observa la distribución <strong>de</strong> los casos autóctonos<br />
diagnosticados en f<strong>un</strong>ción <strong>de</strong>l m<strong>un</strong>icipio <strong>de</strong> proce<strong>de</strong>ncia,<br />
observándose <strong>un</strong>a relación directa entre el<br />
número <strong>de</strong> parasitosis y la tasa <strong>de</strong> población. No<br />
se encontró <strong>un</strong>a relación significativa para ning<strong>un</strong>a<br />
parasitosis con la época <strong>de</strong>l año en la que se realizó<br />
el estudio.<br />
El número <strong>de</strong> casos importados fue <strong>de</strong> 203<br />
(21,2%), <strong>de</strong> los cuales <strong>un</strong> 69,6% procedían <strong>de</strong> países<br />
subsaharianos, <strong>un</strong> 23,2% <strong>de</strong> países <strong>de</strong>l norte <strong>de</strong><br />
áfrica y <strong>un</strong> 7,2% <strong>de</strong> Centroamérica o Sudamérica.<br />
En cuanto al parásito i<strong>de</strong>ntificado en cada caso,<br />
en 559 pacientes (58,4%) se trató <strong>de</strong> protozoos,<br />
394 pacientes (41,2%) se encontraban parasitados<br />
por helmintos y tan sólo en 4 casos (0,4%) la<br />
parasitación se <strong>de</strong>bía a artrópodos.<br />
En 409 (84%) <strong>de</strong> los pacientes parasitados por<br />
protozoos (Tabla 1) se <strong>de</strong>tectó como microorganismo<br />
responsable Giardia intestinalis, siendo estos<br />
f<strong>un</strong>damentalmente niños, con <strong>un</strong>a mediana <strong>de</strong> edad<br />
<strong>de</strong> 6 años. Un 13,2% <strong>de</strong> los casos (54 pacientes)<br />
eran inmigrantes, f<strong>un</strong>damentalmente <strong>de</strong> origen subsahariano.<br />
T. vaginalis fue el seg<strong>un</strong>do protozoo más<br />
frecuentemente <strong>de</strong>tectado, con <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 75 casos<br />
con <strong>un</strong>a media <strong>de</strong> edad <strong>de</strong> 33 años, correspondiendo<br />
todos los casos a población autóctona. La<br />
<strong>de</strong>tección en las mujeres se realizó en muestras <strong>de</strong><br />
exudado vaginal, encontrándose embarazadas en el<br />
momento <strong>de</strong>l diagnóstico el 23,3% <strong>de</strong> las mismas.<br />
El diagnóstico <strong>de</strong> malaria se efectuó en 22 pacientes<br />
siendo el diagnóstico <strong>de</strong> la especie <strong>de</strong> Plasmodium<br />
el siguiente: 17 P. falciparum, 2 P. vivax, 2 P.<br />
ovale y 1 P. malariae. Todos los casos fueron importados<br />
y la mayor parte <strong>de</strong> ellos (90%) provenían<br />
<strong>de</strong> países <strong>de</strong>l áfrica subsahariana. La edad media<br />
fue <strong>de</strong> 32 años y <strong>un</strong> 81% <strong>de</strong> ellos eran varones. La<br />
parasitación por Cryptosporidium sp se diagnosticó<br />
en <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 13 pacientes, 10 <strong>de</strong> ellos menores <strong>de</strong><br />
18 años. Todos los casos fueron autóctonos y presentaban<br />
manifestaciones clínicas (diarrea en todos<br />
ellos). Los tres pacientes adultos diagnosticados<br />
presentaban infección por VIH. Nueve pacientes<br />
fueron diagnosticados <strong>de</strong> amebosis (por Entamoeba<br />
hystolitica/dispar), tan sólo dos <strong>de</strong> ellos fueron<br />
casos autóctonos. Cuatro <strong>de</strong> los pacientes se encontraban<br />
asintomáticos y los <strong>de</strong>más presentaban colitis<br />
amebiana (dos casos), angioe<strong>de</strong>ma (dos casos) y<br />
absceso amebiano (<strong>un</strong> caso).<br />
En nuestra serie se diagnosticaron <strong>un</strong> total <strong>de</strong><br />
31 casos <strong>de</strong> infección por B. hominis. La media <strong>de</strong><br />
edad <strong>de</strong> dichos pacientes fue <strong>de</strong> 33 años, la mayor<br />
parte <strong>de</strong> ellos eran varones (74,2%) y el 20% inmigrantes.<br />
Las manifestaciones clínicas más frecuentes<br />
fueron el dolor abdominal y la diarrea, a<strong>un</strong>que<br />
en ocho <strong>de</strong> los casos diagnosticados los pacientes<br />
se encontraban asintomáticos, tres <strong>de</strong> los cuales<br />
fueron estudiados por la presencia <strong>de</strong> eosinofilia.<br />
Tan sólo tres <strong>de</strong> los pacientes se encontraban inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>primidos<br />
en el momento <strong>de</strong>l diagnóstico.<br />
En lo que respecta a las helmintosis, la mayor<br />
Tabla 1. Protozoosis. Características clínico-epi<strong>de</strong>miológicas según el agente causal. Las variables se<br />
expresan como valores absolutos y tantos por ciento<br />
Protozoo<br />
Giardia intestinalis<br />
Trichomonas<br />
vaginalis<br />
Casos Sexo<br />
Mujeres/<br />
Hombres<br />
Origen<br />
Autóctonos/<br />
Importados<br />
Inm<strong>un</strong>osupresión<br />
Síntomas<br />
409 184/225 355/54 4 (1%) -<br />
75 73/2 75/0 0 -<br />
Plasmodium sp 22 4/18 0/22 0 22 (100%)<br />
Cryptosporidium<br />
sp<br />
13 3/10 13/0 3 (23%) 13 (100%)<br />
Entamoeba sp 9 4/5 2/7 0 5 (55,5%)<br />
Blastocystis<br />
hominis<br />
31 8/23 25/6 3 (9,6%) 23 (74%)<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41<br />
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO<br />
37
I. NOVO-VELEIRO et al.<br />
parte <strong>de</strong> los casos correspondían a Enterobius vermicularis,<br />
con <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 301 casos (76,4% <strong>de</strong>l total<br />
<strong>de</strong> helmintos) (Tabla 2). Todos los pacientes eran<br />
menores <strong>de</strong> 18 años, siendo la mediana <strong>de</strong> edad <strong>de</strong><br />
7 años. Un 9% <strong>de</strong> los pacientes eran inmigrantes,<br />
la mayor parte <strong>de</strong> ellos provenientes <strong>de</strong> países <strong>de</strong>l<br />
norte <strong>de</strong> áfrica. En or<strong>de</strong>n <strong>de</strong> frecuencia, el seg<strong>un</strong>do<br />
grupo <strong>de</strong> helmintos más prevalente fueron las <strong>un</strong>cinarias<br />
(Necator americanus, Ancylostoma duo<strong>de</strong>nale),<br />
diagnosticadas en 24 pacientes, todos ellos<br />
inmigrantes proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> Nigeria. Se trataba<br />
principalmente <strong>de</strong> varones (83%) con <strong>un</strong>a media <strong>de</strong><br />
edad <strong>de</strong> 24 años. Todos se encontraban asintomáticos<br />
en el momento <strong>de</strong>l diagnóstico. En este grupo<br />
se <strong>de</strong>tectó eosinofilia en 14 casos (54%) y anemia<br />
en 5 (21%). La parasitación por Trichuris trichiura<br />
fue objetivada en 14 pacientes, todos inmigrantes<br />
y proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> países <strong>de</strong>l áfrica subsahariana.<br />
Siete <strong>de</strong> ellos presentaban eosinofilia y cinco ane-<br />
38<br />
mia. En 15 pacientes se diagnosticó por métodos<br />
directos o indirectos algún tipo <strong>de</strong> filariosis. En la<br />
mayoría <strong>de</strong> casos (13/15), se trataba <strong>de</strong> inmigrantes<br />
subsaharianos procediendo los dos restantes <strong>de</strong><br />
América Latina (Trinidad y Tobago y Brasil). Todos<br />
ellos presentaban eosinofilia y la mayor parte<br />
se encontraban asintomáticos. Debe indicarse que<br />
el 73% presentaban <strong>un</strong>a inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>presión, la mayor<br />
parte por infección por VIH. Ascaris lumbricoi<strong>de</strong>s<br />
fue <strong>de</strong>tectado en 11 casos (10 importados/1 autóctono),<br />
la mayor parte proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> Nigeria. En<br />
cuanto a las alteraciones analíticas, dos <strong>de</strong> los pacientes<br />
presentaban eosinofilia y otros dos anemia.<br />
Tan sólo cuatro pacientes referían alg<strong>un</strong>a sintomatología<br />
al diagnóstico. El diagnóstico <strong>de</strong> infección<br />
por Fasciola hepatica se realizó en 7 pacientes por<br />
métodos serológicos, todos ellos eran inmigrantes,<br />
en su mayoría originarios <strong>de</strong> Nigeria. En todos ellos<br />
se observó eosinofilia y solamente <strong>un</strong>o refería algu-<br />
Tabla 2. Helmintosis. Características clínico-epi<strong>de</strong>miológicas según el agente causal. Las variables se<br />
expresan como valores absolutos y tantos por ciento<br />
Helminto Casos Sexo<br />
Mujeres/<br />
Varones<br />
Origen<br />
Autóctonos/Importados<br />
Eosinofilia Anemia Inm<strong>un</strong>osupresión<br />
Síntomas<br />
Enterobius<br />
vermicularis<br />
301 135/166 274/27 - - 0 -<br />
Uncinarias 24 4/20 0/24 14 (58%) 5 (21%) 0 0<br />
Filarias* 15 2/13 0/15 15 (100%) 0 12 (80%) 2 (13%)<br />
Ascaris<br />
lumbricoi<strong>de</strong>s<br />
11 3/8 1/10 2 (18%) 2 (18%) 0 4 (36%)<br />
Fasciola<br />
hepática<br />
7 1/6 0/7 7 (100%) 0 0 1 (14%)<br />
Schistosoma<br />
spp<br />
7 1/6 0/7 7 (100%) 0 0 2 (28,5%)<br />
Trichinella<br />
spiralis<br />
5 2/3 0/5 5 (100%) 0 0 2 (40%)<br />
Hymenolepis<br />
nana<br />
3 1/2 0/3 - - 0 -<br />
Larva cutánea<br />
migrans<br />
2 1/1 0/2 2 (100%) 0 0 2 (100%)<br />
Strongyloi<strong>de</strong>s<br />
sp<br />
2 0/2 0/2 2 (100%) 0 0 1 (50%)<br />
* Incluye Mansonella perstans, Loa loa, Onchocerca volvulus, Wuchereria bancrofti.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
na manifestación clínica. Los siete casos <strong>de</strong> esquistosomosis<br />
se diagnosticaron mediante serología en<br />
inmigrantes proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> áfrica subsahariana.<br />
Todos ellos presentaban eosinofilia y la mayoría se<br />
encontraban asintomáticos.<br />
Otras parasitosis importadas producidas por<br />
helmintos fueron: Trichinella spiralis (cinco casos),<br />
Hymenolepis nana (tres casos), larva cutánea<br />
migrans (2 casos diagnosticados por manifestaciones<br />
clínicas características), Strongyloi<strong>de</strong>s sp (dos<br />
casos), Taenia sp (<strong>un</strong> caso), Trychostrongylus sp<br />
(<strong>un</strong> caso) y Echinococcus granulosus (<strong>un</strong> caso).<br />
Se diagnosticaron también cuatro casos <strong>de</strong><br />
parasitosis por artrópodos, tres <strong>de</strong> ellos por Sarcoptes<br />
scabiei y <strong>un</strong>o por Cordylobia anthropophaga.<br />
DISCUSIóN<br />
El análisis <strong>de</strong> los resultados <strong>de</strong>l estudio indica,<br />
en primer lugar, que la prevalencia <strong>de</strong> infección parasitaria<br />
en nuestro medio es mucho más elevada<br />
que la <strong>de</strong>clarada. Así, el número <strong>de</strong> casos diagnosticados<br />
en la isla <strong>de</strong> Gran Canaria en <strong>un</strong> período <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong> año (957) es aproximadamente la mitad <strong>de</strong>l <strong>de</strong>clarado<br />
al Sistema <strong>de</strong> Información Microbiológica<br />
en toda España en las mismas fechas (2.032 casos<br />
en el año 2001 ó 1.812 en el 2000) (Microorganismos<br />
notificados al sistema <strong>de</strong> Información microbiológica<br />
SIM). Por otro lado, el número <strong>de</strong> casos<br />
<strong>de</strong> parasitosis <strong>de</strong>clarado en la Com<strong>un</strong>idad Canaria<br />
en el periodo <strong>de</strong> estudio fue mucho menor (SIM<br />
2008-2010). De hecho, la tasa real <strong>de</strong> parasitación<br />
en la isla <strong>de</strong> Gran Canaria, basándonos en los datos<br />
expuestos, se situaría en los 129 casos por 100.000<br />
habitantes/año, teniendo en cuenta la población <strong>de</strong><br />
la isla en el periodo <strong>de</strong> estudio. Existen dos consi<strong>de</strong>raciones<br />
adicionales que sugieren que la prevalencia<br />
<strong>de</strong> parasitosis en Gran Canaria es superior<br />
a la señalada. Así, el diseño <strong>de</strong>l estudio se basa en<br />
los resultados microbiológicos positivos y no en<br />
<strong>un</strong> protocolo clínico <strong>de</strong> sospecha <strong>de</strong> parasitosis.<br />
Por otro lado, únicamente se incluyeron los casos<br />
diagnosticados en los centros públicos <strong>de</strong> la isla,<br />
pudiendo existir <strong>un</strong> número importante <strong>de</strong> casos<br />
diagnosticados en centros privados que no se incluyeron<br />
en el estudio. Creemos que los datos aportados<br />
en este estudio, a<strong>un</strong>que recogidos en la década<br />
pasada, siguen siendo <strong>de</strong> utilidad por tres razones:<br />
i) se obtuvieron en el período <strong>de</strong> máxima inmigra-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41<br />
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO<br />
ción en Gran Canaria, ii) no se han modificado las<br />
características higiénicas que podrían hacer variar<br />
la prevalencia <strong>de</strong> parasitosis autóctonas y iii) no<br />
hemos encontrado series similares en la población<br />
española. Por tanto, es probable que la prevalencia<br />
<strong>de</strong> las diferentes parasitosis <strong>de</strong>scritas no haya<br />
variado <strong>de</strong>masiado en la última década, a<strong>un</strong>que el<br />
<strong>de</strong>scenso significativo <strong>de</strong>l número <strong>de</strong> inmigrantes<br />
que han llegado a la región en los últimos años posiblemente<br />
haya hecho disminuir alg<strong>un</strong>as <strong>de</strong> ellas.<br />
En cuanto a los datos socio-epi<strong>de</strong>miológicos,<br />
cabe <strong>de</strong>stacar que en pacientes menores <strong>de</strong> 10<br />
años es especialmente prevalente la infección por<br />
E. vermicularis y G. intestinalis. Ambos parásitos<br />
son los más frecuentes en nuestra serie, suponiendo<br />
en conj<strong>un</strong>to el 84,3% <strong>de</strong> los casos autóctonos (G.<br />
intestinalis: 47,6% y E. vermicularis: 36,7%), datos<br />
similares a los encontrados en otras Com<strong>un</strong>ida<strong>de</strong>s<br />
Autónomas, a<strong>un</strong>que con <strong>un</strong> porcentaje superior <strong>de</strong><br />
enterobiosis (Jarabo et al., 1995; Pérez et al., 1997;<br />
Belda et al., 2008).<br />
A<strong>de</strong>más <strong>de</strong> las giardiosis y enterobiosis, nuestro<br />
estudio permite señalar alg<strong>un</strong>as características<br />
<strong>de</strong> otras parasitosis autóctonas en España. Así, T.<br />
vaginalis es el seg<strong>un</strong>do protozoo más frecuente en<br />
nuestra serie y en otros estudios españoles, constituyendo<br />
hasta <strong>un</strong> 23% <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>s <strong>de</strong><br />
transmisión sexual en mujeres, con especial relevancia<br />
durante el embarazo por su potencial gravedad<br />
(Orduña et al., 1991; Johnston y Mabey, 2008).<br />
La infección por B. hominis supone <strong>un</strong> 12,5% <strong>de</strong><br />
los casos diagnosticados en adultos autóctonos en<br />
nuestra serie, prevalencia menor que en otras series<br />
españolas (González et al., 2011), a<strong>un</strong>que su<br />
virulencia es mayor, ya que el 74% presentaban<br />
sintomatología digestiva (Cuadros et al., 2007). Un<br />
pequeño tanto por ciento <strong>de</strong> parasitosis autóctonas<br />
en nuestra serie correspondían a infecciones por<br />
Cryptosporidium sp. En España se <strong>de</strong>claran aproximadamente<br />
100 casos anuales, tanto en forma <strong>de</strong><br />
brotes (asociados a <strong>de</strong>pósitos <strong>de</strong> agua contaminados)<br />
como <strong>de</strong> casos esporádicos (Vigilancia epi<strong>de</strong>miológica<br />
<strong>de</strong> Cryptosporidium en España). A<strong>de</strong>más,<br />
en nuestra serie se diagnosticaron dos casos<br />
<strong>de</strong> amebosis autóctona. A<strong>un</strong>que este hecho es excepcional,<br />
en la población española se han <strong>de</strong>scrito<br />
alg<strong>un</strong>os casos <strong>de</strong> cuadros diarreicos y abscesos<br />
amebianos en pacientes autóctonos que no habían<br />
viajado al extranjero (Díaz et al., 2005; Gutiérrez<br />
et al., 2008). Finalmente, tiene interés señalar que<br />
39
I. NOVO-VELEIRO et al.<br />
otras helmintosis, relativamente frecuentes en pacientes<br />
autóctonos <strong>de</strong> otras regiones <strong>de</strong> nuestro país<br />
como Echinococcus granulosus o Fasciola hepatica,<br />
no se habían <strong>de</strong>scrito en la Com<strong>un</strong>idad Canaria.<br />
(Cosme et al., 2001; Pardo et al., 2005.<br />
Un número importante <strong>de</strong> los pacientes adultos<br />
eran inmigrantes. La malaria era la protozoosis<br />
más frecuente, mientras que las geohelmintosis y<br />
filariosis constituían las helmintosis principales. La<br />
mayor parte <strong>de</strong> los pacientes inmigrantes <strong>de</strong> nuestra<br />
serie provenían <strong>de</strong> países <strong>de</strong>l áfrica subsahariana<br />
con alta inci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> malaria (Martín et al., 2004).<br />
Las geohelmintosis intestinales (Uncinarias, A.<br />
lumbricoi<strong>de</strong>s y T. trichiura), son las parasitosis más<br />
frecuentes <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l colectivo <strong>de</strong> pacientes inmigrantes,<br />
a<strong>un</strong>que con variaciones en los porcentajes<br />
Roca et al., 2002; Díaz et al., 2002; Martín et al.,<br />
2004). En los pacientes con helmintosis, menos <strong>de</strong>l<br />
10% presentaban síntomas clínicos, hecho habitual<br />
en estas infecciones (Bethony, et al., 2006). Sin embargo,<br />
es frecuente la presencia <strong>de</strong> eosinofilia (<strong>un</strong><br />
tercio <strong>de</strong> los casos) y anemia (en los pacientes con<br />
geohelmintosis). Este último dato ya ha sido <strong>de</strong>scrito<br />
previamente y se <strong>de</strong>be al daño que provocan<br />
en la mucosa intestinal a través <strong>de</strong> sus mecanismos<br />
<strong>de</strong> adherencia a la misma (Bethony, et al., 2006). El<br />
tanto por ciento <strong>de</strong> pacientes inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>primidos <strong>de</strong><br />
nuestra serie fue escaso (2,4%). Las dos parasitosis<br />
más frecuentes en inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>primidos fueron las filariosis<br />
y la criptosporidiosis. A<strong>un</strong>que la asociación<br />
entre filariosis e infección por VIH no ha sido <strong>de</strong>mostrada,<br />
existen indicios <strong>de</strong> <strong>un</strong>a interacción entre<br />
los microorganismos que podría facilitar la progresión<br />
<strong>de</strong> ambas enfermeda<strong>de</strong>s (Ramos et al., 2008).<br />
En resumen, en este trabajo se <strong>de</strong>muestra que<br />
la prevalencia real <strong>de</strong> las diferentes parasitosis en<br />
la isla <strong>de</strong> Gran Canaria es muy superior a la <strong>de</strong>clarada<br />
mediante los sistemas oficiales, especialmente<br />
entre la población infantil. En seg<strong>un</strong>do lugar, los<br />
parásitos que afectan <strong>de</strong> forma más frecuente a la<br />
población autóctona <strong>de</strong> Gran Canaria que no ha<br />
viajado a zonas tropicales son G. intestinalis y E.<br />
vermicularis. En tercer lugar, el nivel <strong>de</strong> sospecha<br />
clínica en pacientes proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> áreas endémicas<br />
o en colectivos en los que las enfermeda<strong>de</strong>s parasitarias<br />
son muy frecuentes, como la población<br />
infantil, <strong>de</strong>be ser alto, a<strong>un</strong>que los pacientes se encuentren<br />
asintomáticos. Alg<strong>un</strong>os datos analíticos<br />
como la eosinofilia o anemia pue<strong>de</strong>n alertar <strong>sobre</strong><br />
la posible existencia <strong>de</strong> <strong>un</strong>a helmintosis.<br />
40<br />
REFERENCIAS<br />
1. BETHONY J, BROOKER S, ALBONICO M, GEIGER<br />
SM, LOUKAS A, DIEMERT D, et al. 2006. Soiltransmitted<br />
helminth infections: ascariasis, trichuriasis,<br />
and hookworm. Lancet; 367: 1521-1532.<br />
2. BELDA RUSTARAZO S, MORALES SUáREZ-<br />
VARELA M, GRACIA ANTEQUERA M, ESTEBAN<br />
SANCHIS JG. 2008. Enteroparasitosis en población<br />
escolar <strong>de</strong> Valencia. Aten Primaria; 40: 641-645.<br />
3. BUSH A, LAFFERTY K, LOTZ J, SHOSTAK A. 1997.<br />
Parasitolgy meets ecology on its own terms, Margolis<br />
et al. revisited. J. Parasitol., 83(4): 575-583.<br />
4. COSME A, OJEDA E, CILLA G, TORRADO J, ALZATE<br />
L, BERISTAIN x, et al. 2001. Fasciolasis hepatobiliar.<br />
Estudio <strong>de</strong> <strong>un</strong>a serie <strong>de</strong> 37 pacientes. Gastroenterol<br />
Hepatol; 24: 375-380.<br />
5. CUADROS J, ORELLANA MA, MAZON A. 2007.<br />
Infeccion por Blastocystis hominis y diarrea. Med Clin<br />
(Barc); 128: 638.<br />
6. DÍAZ J, IGUAL R, ALONSO MC, MORENO MJ.<br />
2002. Estudio <strong>de</strong>l parasitismo intestinal en inmigrantes<br />
<strong>de</strong> la comarca <strong>de</strong> La Safor (Com<strong>un</strong>idad Valenciana).<br />
Med Clin (Barc);119: 36.<br />
7. DÍAZ-GONZALVEZ E, MANZANEDO-TERAN<br />
B, LÓPEZ-VELEZ R, DRONDA F. 2005. Absceso<br />
hepatico amebiano autoctono: caso clinico y revision<br />
<strong>de</strong> la literatura medica. Enferm Infecc Microbiol Clin;<br />
23: 179-181.<br />
8. ESPINOSA-VEGA E, MARTÍN-SáNCHEZ AM,<br />
ELCUAZ-ROMANO R, HERNáNDEZ-FEBLES M,<br />
MOLINA-CABRILLANA J, PÉREZ-ARELLANO JL.<br />
2011. Malaria in paradise: characterization of imported<br />
cases in Gran Canaria Island (1993-2006). J Travel<br />
Med; 18: 165-172.<br />
9. GONZáLEZ-MORENO O, DOMINGO L, TEIxI-<br />
DOR J, GRACENEA M. 2011. Prevalence and associated<br />
factors of intestinal parasitisation: a cross-sectional<br />
study among outpatients with gastro-intestinal symptoms<br />
in Catalonia, Spain. Parasitol Res; 108: 87-93.<br />
10. GUTIÉRREZ-CISNEROS MJ, GORGOLAS M,<br />
GARCÍA MARTÍNEZ I, JAIME MUNICOA ML.<br />
2008. Disentería amebiana autóctona. Descripción <strong>de</strong><br />
3 casos. Med Clin (Barc); 131: 717.<br />
11. JARABO MT, GARCÍA-MORAN NP, GARCÍA-MO-<br />
RAN JI. 1995. Prevalencia <strong>de</strong> parasitosis intestinales en<br />
<strong>un</strong>a poblacion escolar. Enferm Infecc Microbiol Clin;<br />
13: 464-468.<br />
12. JOHNSTON VJ, MABEY DC. 2008. Global epi<strong>de</strong>miology<br />
and control of Trichomonas vaginalis. Curr Opin<br />
Infect Dis; 21: 56-64.<br />
13. MARTÍN SáNCHEZ AM, HERNáNDEZ GARCÍA<br />
A, GONZáLEZ FERNáNDEZ M, AFONSO RO-<br />
DRÍGUEZ O, HERNáNDEZ CABRERA M, PÉREZ<br />
ARELLANO JL. 2004. Parasitosis intestinales en poblacion<br />
inmigrante subsahariana asintomatica. Gran<br />
Canaria 2000. Rev Clin Esp; 204: 14-17.<br />
14. MICROORGANISMOS NOTIFICADOS AL SIS-<br />
TEMA DE INFORMACIÓN MICROBIOLÓGICA<br />
(SIM). Años 2000-2001. Instituto <strong>de</strong> Salud Carlos III.<br />
[Consultado el 13-11-11]. Disponible en: http://www.<br />
isciii.es/ISCIII/es/contenidos/fd-servicios-cientifico-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
tecnicos/fd-vigilancias-alertas/fd-sistema-informacionmicrobiologica/sim2001.pdf.<br />
15. MICROORGANISMOS DECLARADOS AL SIS-<br />
TEMA DE INFORMACIÓN MICROBIOLÓGICA.<br />
INFORME POR COMUNIDADES AUTÓNOMAS.<br />
AÑOS 2008-10. Instituto <strong>de</strong> Salud Carlos III. [Consultado<br />
el 13-11-11]. Disponible en: http://www.isciii.es/<br />
ISCIII/es/contenidos/fd-servicios-cientifico-tecnicos/<br />
fd-vigilancias-alertas/fd-sistema-informacion-microbiologica/por-CCAA.pdf<br />
16. MONGE-MAILLO B, JIMÉNEZ BC, PÉREZ-<br />
MOLINA JA, NORMAN F, NAVARRO M, PÉREZ-<br />
AYALA A, et al. 2009. Imported infectious diseases in<br />
mobile populations, Spain. <strong>Em</strong>erg Infect Dis; 15: 1745-<br />
1752.<br />
17. MUÑOZ C, PÉREZ ARELLANO JL. 2006. Características<br />
generales <strong>de</strong> las Enfermeda<strong>de</strong>s parasitarias. En:<br />
Ausina V, Moreno S (eds). Tratado SEIMC <strong>de</strong> Enfermeda<strong>de</strong>s<br />
Infecciosas y Microbiología clínica. Buenos<br />
Aires; Madrid: Editorial Panamericana. 1031-1040.<br />
18. ORDUÑA DOMINGO A, CHU JJ, EIROS BOUZA JM,<br />
BRATOS PÉREZ MA, GUTIÉRREZ RODRÍGUEZ<br />
MP, ALMARAZ GÓMEZ A, et al. 1991. Distribucion<br />
por edad y sexo <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>s <strong>de</strong> transmision<br />
sexual en Valladolid. Estudio <strong>de</strong> 5.076 casos. Rev Sanid<br />
Hig Publica (Madr); 65: 247-258.<br />
19. PARASITIC DISEASES REPORT. Centers for Disease<br />
control and Prevention. Division of Parasitic Diseases<br />
and Malaria. [Consultado el 21-10-11]. Disponible en:<br />
http://www.cdc.gov/ parasites/about.html.<br />
20. PARDO J, MURO A, GALINDO I, CORDERO M,<br />
CARPIO A, SILES-LUCAS M. 2005. Hidatidosis en<br />
la provincia <strong>de</strong> Salamanca: ¿<strong>de</strong>bemos bajar la guardia?<br />
Enferm Infecc Microbiol Clin; 23: 266-9.<br />
21. PARDO J, CARRANZA C, MURO A, ANGEL-<br />
MORENO A, MARTÍN AM, MARTÍN T, et al. 2006.<br />
Helminth-related Eosinophilia in African immigrants,<br />
Gran Canaria. <strong>Em</strong>erg Infect Dis; 12: 1587-1589.<br />
22. PÉREZ ARMENGOL C, ARIZA ASTOLFI C, ÚBE-<br />
DA ONTIVEROS JM, GUEVARA A, BENÍTEZ DC,<br />
ROJAS ALVAREZ M, LOZANO SERRANO C. 1997.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41<br />
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO<br />
Epi<strong>de</strong>miología <strong>de</strong>l parasitismo intestinal infantil en el<br />
Valle <strong>de</strong>l Guadalquivir, España. Rev Esp Salud Pública;<br />
547-552.<br />
23. RAMOS RINCÓN JM, ZUBERO SULIBARRÍA Z,<br />
ENA MUÑOZ J. 2008. Inmigración y VIH. Aproximación<br />
a las enfermeda<strong>de</strong>s parasitarias y virales. Enferm<br />
Infecc Microbiol Clin; 26 (Suppl 5): 42-53.<br />
24. ROCA C, BALANZO x, FERNáNDEZ-ROURE<br />
JL, SAUCA G, SAVALL R, GASCON J, et al. 2002.<br />
Enfermeda<strong>de</strong>s importadas en inmigrantes africanos:<br />
estudio <strong>de</strong> 1.321 pacientes. Med Clin (Barc); 119: 616-<br />
619.<br />
25. ROCA C, BALANZO x, SAUCA G, FERNáNDEZ-<br />
ROURE JL, BOIxEDA R, BALLESTER M. 2003.<br />
Uncinariasis importada por inmigrantes africanos:<br />
estudio <strong>de</strong> 285 casos. Med Clin (Barc); 121: 139-141.<br />
26. RYAN ET, WILSON ME, KAIN KC. 2002. Illness<br />
after international travel. N Engl J Med; 347: 505-516.<br />
27. SANZ PELáEZ O, PÉREZ ARELLANO JL. 2007.<br />
Inmigración en España. Situación actual. Enf <strong>Em</strong>erg;<br />
17: 87-93.<br />
28. SHORE GARCÍA L. 2009. Practical Gui<strong>de</strong> to Diagnostic<br />
Parasitology, 2nd Edition Washington, DC: ASM<br />
Press.<br />
29. TAN KS, SINGH M, YAP EH. 2002. Recent advances<br />
in Blastocystis hominis research: hot spots in terra<br />
incognita. Int J Parasitol; 32: 789-804.<br />
30. VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA <strong>de</strong> la cryptosporidiosis<br />
en España. Informe 1995-2002. Instituto Carlos<br />
III. [Consultado el: 17-11-11]. Disponible en: http://<br />
www.isciii.es/ISCIII/es/contenidos/fd-servicios-cientifico-tecnicos/fd-vigilancias-alertas/fd-sistema-informacion-microbiologica/informes-especificos-microorganismos.shtml.<br />
31. WATKINS BM. 2003. Drugs for the control of parasitic<br />
diseases: current status and <strong>de</strong>velopment. Trends Parasitol;<br />
19: 477-478.<br />
Agra<strong>de</strong>cimientos: Los autores agra<strong>de</strong>cen la aportación<br />
<strong>de</strong> casos por los doctores J Tabares (CAE Vecindario) y H<br />
López Orge (CAE Tel<strong>de</strong>).<br />
41
Artículo Original<br />
42<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
Evaluación <strong>de</strong> la actividad biológica <strong>de</strong> los extractos<br />
hexanólico (<strong>Eh</strong>) y metanólico (<strong>Em</strong>) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp.<br />
proveniente <strong>de</strong> <strong>un</strong>a úlcera corneal<br />
DORLA A. 1 , WAGNER C. M. 1 , PÉREZ DE G. M. V. 1 , BLANCO DE M. J. 2 , GALINDO M. V. 1 , NESSI A. 1 ,<br />
VETHENCOURT M. A., BANDES A. 1 y GUZMáN DE R. C. T. 1<br />
1 Laboratorio <strong>de</strong> Amibiasis, Cátedra <strong>de</strong> Parasitología, Escuela <strong>de</strong> Bioanálisis, Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
E-mail: bioparas@ucv.ve, angelyseb@gmail.com<br />
2 Grupo <strong>de</strong> Productos Naturales, Escuela <strong>de</strong> Química. Facultad <strong>de</strong> Ciencias, Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
ABSTRACT<br />
BIOLOGICAL ACTIVITY OF HEXANOLIC (EH) AND METHANOLIC (EM) EXTRACTS<br />
FROM PERA DISTICHOPHYLLA AGAINST AN ACANTHAMOEBA SPP. ISOLATE<br />
OBTAINED FROM A CORNEAL ULCER<br />
Recently, infections due to Acanthamoeba genus have increased, specially ocular affections and<br />
pharmacological treatment for them has some limitations. Searching for effective alternatives against<br />
this protozoan, we <strong>de</strong>ci<strong>de</strong>d to evaluate natural products obtained from plants, having previous reports of<br />
amoebicidal activity of some extracts against different species of Acanthamoeba. We evaluated in vitro<br />
biological activity of hexanolic (<strong>Eh</strong>) and methanolic (<strong>Em</strong>) extract, obtained from <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, an<br />
amazonic plant, against an Acanthamoeba spp. (A27) strain, isolated from a patient suffering a corneal<br />
ulcer. Trophozoites of isolate A27 exposed to different <strong>Eh</strong> concentrations presented morphological changes,<br />
probably caused by the effect of DMSO as solvent extract, while morphological changes observed after<br />
contact with <strong>Em</strong> seemed to be caused by 0.75 mg/ml <strong>Em</strong> concentration and not by the DMSO; no changes<br />
were observed in the cysts. The 0.75 mg/ml <strong>Eh</strong> concentration apparently <strong>de</strong>creased the proliferation<br />
of Acanthamoeba spp. and <strong>Em</strong> produced lysis. Viability tests not yiel<strong>de</strong>d important changes. Finally,<br />
we recommend evaluating these extracts on other Acanthamoeba spp. isolates, to <strong>de</strong>termine whether<br />
these effects are isolate-<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>nt; performing cytotoxicity tests on corneal cells and in vivo studies in<br />
experimental animals, which would provi<strong>de</strong> more information about its activity and prophylactic potential<br />
or therapeutic use.<br />
Key words: Acanthamoeba spp., corneal ulcer, natural extracts, <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
Recibido: 15 <strong>de</strong> J<strong>un</strong>io <strong>de</strong> 2011. Aceptado: 15 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Carolina M. Wagner. Laboratorio <strong>de</strong> Amibiasis, Cátedra <strong>de</strong> Parasitología, Escuela <strong>de</strong> Bioanálisis,<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
E-mail: bioparas@ucv.ve, angelyseb@gmail.com
RESUMEN<br />
En los últimos años, las infecciones por Acanthamoeba spp. se han incrementado, especialmente las<br />
oculares y el tratamiento farmacológico utilizado tiene ciertas limitaciones. En la búsqueda <strong>de</strong> alternativas<br />
para <strong>un</strong> tratamiento efectivo contra este protozoario, surgió la inquietud <strong>de</strong> evaluar productos naturales<br />
provenientes <strong>de</strong> plantas, ya que se ha reportado la existencia <strong>de</strong> actividad amebicida <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>os extractos<br />
<strong>sobre</strong> diferentes especies <strong>de</strong> Acanthamoeba. Se planteó <strong>un</strong>a evaluación in vitro <strong>de</strong> la actividad biológica<br />
<strong>de</strong> los extractos hexanólico (<strong>Eh</strong>) y metanólico (<strong>Em</strong>) obtenidos <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, <strong>un</strong>a planta <strong>de</strong>l<br />
Amazonas, <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. (A27), proveniente <strong>de</strong> <strong>un</strong>a paciente con úlcera corneal.<br />
Los trofozoítos <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 expuestos a las diferentes concentraciones <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> presentaron modificaciones<br />
morfológicas, probablemente originadas por el efecto <strong>de</strong>l DMSO como solvente <strong>de</strong>l extracto, mientras<br />
que los cambios morfológicos observados <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l contacto con el <strong>Em</strong> sí parecen ser ocasionados por<br />
la concentración <strong>de</strong> 0,75 mg/ml y no por el DMSO; en los quistes no se observó ning<strong>un</strong>a modificación.<br />
El <strong>Eh</strong> a la concentración <strong>de</strong> 0,75 mg/ml, aparentemente disminuyó la proliferación <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. y el <strong>Em</strong>, produjo lisis. Los ensayos <strong>de</strong> viabilidad no arrojaron cambios importantes. Finalmente, se<br />
recomienda evaluar estos extractos <strong>sobre</strong> otros <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., para <strong>de</strong>terminar si estos<br />
efectos son <strong>aislado</strong>-<strong>de</strong>pendientes, realizar ensayos <strong>de</strong> citotoxicidad <strong>sobre</strong> células corneales y ensayos in<br />
vivo en animales <strong>de</strong> experimentación, lo cual permitiría obtener mayor información <strong>sobre</strong> su actividad y<br />
posible uso profiláctico y/o terapéutico.<br />
Palabras clave: Acanthamoeba spp., úlcera corneal, extractos naturales, <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
INTRODUCCIóN<br />
Las amibas <strong>de</strong> vida libre (AVL) son protozoarios<br />
<strong>de</strong>scritos como parásitos facultativos y<br />
patógenos oport<strong>un</strong>istas (Page,1974; Shuster y Wisvesvara,<br />
2004). Entre las AVL que pue<strong>de</strong>n afectar al<br />
hombre se encuentran las <strong>de</strong>l género Acanthamoeba<br />
spp., que son las más ampliamente distribuidas<br />
en la naturaleza (Page, 1988). En el ojo, pue<strong>de</strong>n<br />
ocasionar queratitis y úlceras corneales, afectando<br />
la visión en distintos grados y a<strong>un</strong>que la queratitis<br />
por Acanthamoeba spp. es poco común, se consi<strong>de</strong>ra<br />
<strong>un</strong>a infección <strong>de</strong> la córnea potencialmente grave.<br />
Des<strong>de</strong> 1980 hasta el año 2000, se han reportado<br />
<strong>un</strong> aproximado <strong>de</strong> 3.000 casos <strong>de</strong> queratitis por<br />
Acanthamoeba (Shuster y Wisvesvara, 2004 Jersic,<br />
2007) afectando a individuos <strong>de</strong> cualquier edad,<br />
pero es mas común en adultos jóvenes, usualmente<br />
con buen estado <strong>de</strong> salud e inm<strong>un</strong>ocompetentes<br />
(Shuster y Wisvesvara, 2004; Ishibashi, 1997). Estudios<br />
recientes sugieren <strong>un</strong> estimado <strong>de</strong> 1,2 adultos<br />
por millón por año para infecciones severas por<br />
este género (Mathers, 2004), relacionados en su<br />
mayoría con el uso <strong>de</strong> lentes <strong>de</strong> contacto (Pérez <strong>de</strong><br />
Galindo, 1995; Oddó, 2006; Jersic, 2007), con <strong>un</strong>a<br />
inci<strong>de</strong>ncia entre 0,2 y 0,3 por cada 10.000 usuarios<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL<br />
<strong>de</strong> lentes <strong>de</strong> contacto por año (Seal, 2003; Mathers,<br />
2004). En Venezuela, no se conoce bien la frecuencia<br />
<strong>de</strong> las infecciones oftalmológicas ocasionadas<br />
por Acanthamoeba spp., existiendo sólo alg<strong>un</strong>os<br />
reportes (Pérez <strong>de</strong> Galindo, 2005).<br />
A pesar <strong>de</strong> los avances en el tratamiento <strong>de</strong> las<br />
queratitis producidas por Acanthamoeba spp., continúan<br />
ocurriendo fallas terapéuticas, necesitando<br />
intensificar y prolongar la terapia médica, realizar<br />
intervenciones quirúrgicas y enfrentarse a la posible<br />
pérdida permanente <strong>de</strong> la visión o la enucleación<br />
<strong>de</strong>l ojo (Seal, 2003; Van <strong>de</strong>r Vijl, et al., 2004).<br />
El uso <strong>de</strong> plantas para el tratamiento <strong>de</strong> diferentes<br />
especies <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. ha sido objeto <strong>de</strong><br />
varias investigaciones (Chu et al., 1998, Rodríguez<br />
et al., 1999, Vural et al., 2007; Polat et al., 2007<br />
ayb, 2008). Venezuela posee en el Amazonas, <strong>un</strong>a<br />
gran diversidad <strong>de</strong> especies vegetales, muchas <strong>de</strong><br />
ellas con propieda<strong>de</strong>s curativas; <strong>Pera</strong> spp. es <strong>un</strong><br />
género botánico perteneciente a la familia Euphorbiaceae<br />
(L<strong>un</strong>a, 2003), <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l cual, muchas especies<br />
han sido utilizadas en la medicina tradicional<br />
para la cura <strong>de</strong> enfermeda<strong>de</strong>s. Las quinonas han<br />
sido los compuestos <strong>aislado</strong>s <strong>de</strong> este género con<br />
mayor actividad biológica (Rodríguez et al., 2006).<br />
<strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> se ubica en bosques <strong>de</strong> tierra<br />
43
A. DORLA et al.<br />
firme bajos y bosques in<strong>un</strong>dables <strong>de</strong> arenas blancas<br />
entre 50 y 250 mts <strong>sobre</strong> el nivel <strong>de</strong>l mar. En<br />
Venezuela se encuentra limitada sólo a los estados<br />
Bolívar y Amazonas (L<strong>un</strong>a, 2003, Morales y Castillo,<br />
2005). Utilizando hojas <strong>de</strong> la planta P. <strong>distichophylla</strong>,<br />
para su análisis fitoquímico y biológico,<br />
se <strong>de</strong>mostró que el extracto crudo alcohólico (Ec)<br />
posee actividad antiparasitaria <strong>sobre</strong> Trypanosoma<br />
cruzi y antiviral <strong>sobre</strong> el virus <strong>de</strong>l <strong>de</strong>ngue (L<strong>un</strong>a,<br />
2003). Estos ensayos fueron ampliados por Rodríguez-Ortega<br />
et al., (2006), al evaluar los extractos<br />
acuosos (Ea) y alcohólicos (Ec) <strong>de</strong> P. glabrata y <strong>de</strong><br />
P. <strong>distichophylla</strong> para su actividad anti-parasitaria<br />
<strong>sobre</strong> T. cruzi y antiviral <strong>sobre</strong> los virus <strong>de</strong>l <strong>de</strong>ngue<br />
y <strong>de</strong> la fiebre amarilla. El Ec <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
también fue evaluado in vitro <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp., causante <strong>de</strong> patología ocular,<br />
observándose inhibición <strong>de</strong>l crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong><br />
a <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> 10 mg/ml, probablemente<br />
<strong>de</strong>bido a inhibición <strong>de</strong>l <strong>de</strong>senquistamiento y/o<br />
lisis <strong>de</strong> los quistes y/o trofozoítos, a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> producir<br />
redon<strong>de</strong>amiento y vacuolización <strong>de</strong> los trofozoítos<br />
como señal <strong>de</strong> daño celular (Salazar, 2004).<br />
Es por ello que, al disponer <strong>de</strong> extractos obtenidos<br />
<strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong>, y conociendo los antece<strong>de</strong>ntes<br />
<strong>de</strong> su actividad contra Acanthamoeba spp. y otros<br />
protozoarios como la familia Trypanosomatidae<br />
(Rodríguez et al., 2006), se justificó la evaluación<br />
<strong>de</strong> los efectos <strong>de</strong> los extractos hexanólico (<strong>Eh</strong>) y<br />
metanólico (<strong>Em</strong>) obtenidos <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
<strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. proveniente<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong>a úlcera corneal humana para así conocer<br />
posibles alternativas terapéuticas que permitan<br />
alcanzar la mejoría y/o curación <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>s<br />
producidas por este protozoario.<br />
44<br />
MATERIAL Y MÉTODOS<br />
Extractos naturales: Los extractos fueron<br />
obtenidos a partir <strong>de</strong> la planta P. <strong>distichophylla</strong>, en<br />
el estado Amazonas, Venezuela. El procesamiento<br />
y obtención <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong>, fue realizado en el<br />
Laboratorio <strong>de</strong> Productos Naturales <strong>de</strong> la Escuela<br />
<strong>de</strong> Química <strong>de</strong> la Facultad <strong>de</strong> Ciencias <strong>de</strong> la<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela (UCV) (L<strong>un</strong>a,<br />
2003).<br />
Se prepararon dos (2) soluciones <strong>de</strong> trabajo<br />
<strong>de</strong> <strong>Eh</strong> para ser evaluadas: 0,75 mg/ml y 3,8 mg/<br />
ml, a partir <strong>de</strong> <strong>un</strong>a solución madre <strong>de</strong> 23 mg/ml en<br />
dimetilsulfóxido (DMSO) al 16% como solvente.<br />
Al realizar las diluciones, cada solución <strong>de</strong> trabajo<br />
quedó con <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> DMSO al 0,7% y<br />
3,5% respectivamente. Para el <strong>Em</strong>, se prepararon<br />
igualmente dos (2) soluciones <strong>de</strong> trabajo: 0,75 mg/<br />
ml y 3,8 mg/ml, a partir <strong>de</strong> <strong>un</strong>a solución madre <strong>de</strong><br />
40,3 mg/ml en DMSO al 16% como solvente. Al<br />
realizar las diluciones, cada solución <strong>de</strong> trabajo<br />
quedó con <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> DMSO al 0,3% y<br />
1,5% respectivamente. Se consi<strong>de</strong>ró los porcentajes<br />
<strong>de</strong> DMSO en los cuales quedó cada solución <strong>de</strong><br />
trabajo, a los efectos <strong>de</strong> establecer los controles <strong>de</strong>l<br />
solvente respectivo en cada ensayo.<br />
Aislado <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. mantenido en<br />
medio <strong>de</strong> Page modificado): El <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. fue obtenido por raspado <strong>de</strong> <strong>un</strong>a úlcera<br />
corneal en <strong>un</strong>a paciente <strong>de</strong> 27 años <strong>de</strong> edad, usuaria<br />
<strong>de</strong> lentes <strong>de</strong> contacto. El <strong>aislado</strong>, <strong>de</strong>nominado como<br />
A27 según nomenclatura propia <strong>de</strong>l Laboratorio <strong>de</strong><br />
Amibiasis <strong>de</strong> la Cátedra <strong>de</strong> Parasitología, Escuela<br />
<strong>de</strong> Bioanálisis, Facultad <strong>de</strong> Medicina-U.C.V, ha<br />
sido mantenido en el medio <strong>de</strong> cultivo bifásico <strong>de</strong><br />
Page modificado por Chinchilla et al., (1979), en<br />
placas <strong>de</strong> petri y adaptado al crecimiento en placas<br />
<strong>de</strong> poliestireno <strong>de</strong> 24 pozos con el mismo medio<br />
para realizar los bioensayos. Se preparó <strong>un</strong>a suspensión<br />
<strong>de</strong> trofozoítos y quistes <strong>de</strong> concentración<br />
conocida, para ser utilizada en los diferentes bioensayos.<br />
Ensayos para la evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> <strong>Eh</strong><br />
y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27<br />
<strong>de</strong> Acanthamoeba spp: El efecto <strong>de</strong> las distintas<br />
concentraciones <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>sobre</strong> los trofozoítos<br />
y quistes <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp.<br />
fue evaluado en cultivos en placas <strong>de</strong> poliestireno<br />
<strong>de</strong> 24 pozos (N<strong>un</strong>c®). Se agregó 0,5 ml <strong>de</strong> las<br />
soluciones madres <strong>de</strong> cada extracto a estudiar o el<br />
DMSO respectivo, como control. A todos los pozos<br />
se agregó, aproximadamente 0,1 ml <strong>de</strong> suspensión<br />
<strong>de</strong> Escherichia coli y 0,5 ml <strong>de</strong> la suspensión <strong>de</strong><br />
amibas (65,5 x 10 3 amibas/ml) y se completó hasta<br />
<strong>un</strong> volumen final <strong>de</strong> 2 ml con medio líquido. Al<br />
diluir las respectivas soluciones madres <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y<br />
<strong>Em</strong> con la suspensión <strong>de</strong> amibas y la suspensión<br />
<strong>de</strong> E. coli, las concentraciones <strong>de</strong> ambos extractos<br />
quedaron a 0,75% y 3.8% mg/ml.<br />
Los controles empleados fueron: a.- Control<br />
<strong>de</strong> amibas más bacterias; b.-Control <strong>de</strong> DMSO<br />
al 0,7% y 3,5% para <strong>Eh</strong> y al 0,3% y 1,5% para el<br />
extracto <strong>Em</strong>. Para ambos extractos los experimentos<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
se realizaron por duplicado. Los trofozoítos y<br />
quistes se incubaron con los extractos a 37ºC,<br />
evaluando el efecto <strong>de</strong> cada concentración y <strong>de</strong> los<br />
controles <strong>sobre</strong> las amibas a diferentes tiempos <strong>de</strong><br />
exposición: 2, 24, 48, 72 y 96 horas. Al concluir<br />
cada tiempo, se recolectó el contenido <strong>de</strong> cada pozo,<br />
midió el volumen obtenido, realizó el recuento<br />
final <strong>de</strong> las amibas y se observó la morfología.<br />
Posteriormente, se realizó <strong>un</strong> lavado con medio <strong>de</strong><br />
cultivo líquido, posterior centrifugación a 150 g y<br />
<strong>de</strong>scarte <strong>de</strong>l <strong>sobre</strong>nadante, para <strong>de</strong>tener el efecto<br />
<strong>de</strong> los extractos y <strong>de</strong>l DMSO en el caso <strong>de</strong> los<br />
controles respectivos. El sedimento obtenido fue<br />
resuspendido en medio líquido y se evaluó el efecto<br />
<strong>de</strong> los extractos en los quistes y trofozoítos <strong>sobre</strong><br />
su viabilidad y el crecimiento en cultivo en medio<br />
<strong>de</strong> Page modificado por Chinchilla y col. (1979)<br />
en placas <strong>de</strong> petri. Los bioensayos realizados se<br />
<strong>de</strong>scriben a continuación:<br />
1.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P.<br />
<strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> la morfología <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27<br />
<strong>de</strong> Acanthamoeba spp.<br />
La morfometría <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. fue evaluada antes y <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l contacto<br />
con los extractos, mediante examen al fresco<br />
con objetivo <strong>de</strong> 40x. Para <strong>de</strong>terminar el posible<br />
efecto <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong>, se tomaron en consi<strong>de</strong>ración<br />
los siguientes parámetros: a) Para los trofozoítos,<br />
redon<strong>de</strong>amiento, variaciones <strong>de</strong>l tamaño, vacuolización<br />
<strong>de</strong>l citoplasma y variaciones <strong>de</strong>l tamaño <strong>de</strong><br />
la vacuola contráctil, b) para los quistes, igualmente<br />
se consi<strong>de</strong>ró cambios <strong>de</strong> forma y/o tamaño <strong>de</strong> los<br />
mismos.<br />
2.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong><br />
P.<strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> el número <strong>de</strong> trofozoítos y<br />
quistes <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. Determinación<br />
<strong>de</strong> la capacidad lítica.<br />
La evaluación <strong>de</strong> la capacidad lítica se realizó<br />
mediante el recuento <strong>de</strong> amibas antes y <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l<br />
contacto con los extractos. Al concluir cada tiempo<br />
<strong>de</strong> incubación, se recogió el volumen <strong>de</strong> cada pozo<br />
por separado y se colocó <strong>un</strong>a gota <strong>de</strong> la suspensión<br />
en cámara <strong>de</strong> Neubauer para realizar el recuento<br />
final <strong>de</strong> las amibas por duplicado. El porcentaje <strong>de</strong><br />
lisis se calculó utilizando la siguiente fórmula:<br />
Para comparar los resultados <strong>de</strong>l porcentaje (%)<br />
<strong>de</strong> lisis obtenido al emplear esta metodología, con<br />
los reportes <strong>de</strong> lisis celular producidos por extractos<br />
naturales <strong>sobre</strong> células (epitelio corneal) <strong>de</strong>scrito<br />
por otros autores (Polat et al., 2007ª), se hizo <strong>un</strong>a<br />
transformación <strong>de</strong> los mismos a la siguiente escala<br />
numérica: 0= lisis no <strong>de</strong>tectable (0%); 1 = menos<br />
<strong>de</strong> 20% <strong>de</strong> lisis; 2 = 20-40% <strong>de</strong> lisis; 3 = > 40 a <<br />
60% <strong>de</strong> lisis; 4 = > 60 a < 80% <strong>de</strong> lisis; 5 > <strong>de</strong> 80%<br />
<strong>de</strong> lisis.<br />
3.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
<strong>sobre</strong> la viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. mediante el método <strong>de</strong> exclusión <strong>de</strong><br />
colorantes: azul <strong>de</strong> tripano.<br />
Al concluir los tiempos <strong>de</strong> incubación <strong>de</strong> las<br />
amibas con los extractos, se recolectó el contenido<br />
<strong>de</strong> cada pozo, se lavó y se obtuvo el sedimento <strong>de</strong>spués<br />
<strong>de</strong> centrifugar. Se colocó <strong>un</strong>a gota <strong>de</strong>l mismo<br />
con <strong>un</strong>a gota <strong>de</strong>l colorante supravital azul <strong>de</strong> tripano,<br />
se observó al microscopio y <strong>de</strong>terminó el porcentaje<br />
<strong>de</strong> amibas vivas y muertas. Como controles<br />
<strong>de</strong> la prueba, se examinó amibas sin tratamiento y<br />
amibas muertas por calor o con lugol, con el azul<br />
<strong>de</strong> tripano. Se contaron las amibas en cada preparación,<br />
por duplicado. Se consi<strong>de</strong>raron como amibas<br />
vivas, los trofozoítos y quistes que no tomaron el<br />
colorante, y lo contrario en el caso <strong>de</strong> las amibas<br />
muertas. Se estimó el % <strong>de</strong> viabilidad según la fórmula<br />
siguiente:<br />
% viabilidad: Nº <strong>de</strong> amibas vivas x 100<br />
Total <strong>de</strong> amibas contadas<br />
4.- Crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. en el medio <strong>de</strong> Page modificado por Chinchilla<br />
y col. (1979), luego <strong>de</strong> diferentes tiempos <strong>de</strong> exposición<br />
a <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong>.<br />
Una alícuota (no cuantificada) <strong>de</strong> las amibas<br />
expuestas a los extractos y al DMSO fue sembrada<br />
en el medio <strong>de</strong> Page modificado por Chinchilla<br />
et al., (1979), en placas <strong>de</strong> petri, e incubadas a<br />
37ºC. La placa <strong>de</strong> cultivo fue examinada mediante<br />
microscopio invertido con objetivo <strong>de</strong> 25x,<br />
a las 2 horas y a los 7 días y se estimó semicuantitativamente<br />
la cantidad <strong>de</strong> amibas presentes<br />
% <strong>de</strong> lisis= Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) iniciales - Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) finales x 100<br />
Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) iniciales<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL<br />
45
A. DORLA et al.<br />
en los campos observados. El inóculo sembrado en<br />
cada placa fue variable, ya que estuvo constituido<br />
por las amibas recolectadas <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> la acción<br />
<strong>de</strong> cada extracto y control <strong>de</strong> DMSO respectivo.<br />
Se <strong>de</strong>terminó si hubo crecimiento al comparar la<br />
observación realizada a las 2 horas respecto a la<br />
observación <strong>de</strong> los 7 días.<br />
Análisis estadístico: Los datos obtenidos <strong>de</strong><br />
los experimentos para evaluar el efecto <strong>de</strong> ambos<br />
extractos <strong>sobre</strong> el número <strong>de</strong> amibas, se agruparon<br />
en tablas <strong>de</strong> contingencia, para ser analizados posteriormente<br />
mediante la prueba <strong>de</strong> chi-cuadrado,<br />
usando el programa GraphPad Instad 3.02 (software<br />
GraphPad, San Diego, c.a). Los valores <strong>de</strong><br />
los resultados se consi<strong>de</strong>raron significativos, si p <<br />
0,05, para 1 grado <strong>de</strong> libertad.<br />
46<br />
RESULTADOS<br />
1.- Morfología <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A 27 <strong>de</strong> Acantthomoeba<br />
spp.: El <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp.,<br />
antes <strong>de</strong> ser expuesto a las diferentes concentraciones<br />
<strong>de</strong> los extractos, presentó las siguientes características<br />
al microscopio óptico: a) Trofozoítos:<br />
forma irregular, con <strong>un</strong>a medida promedio <strong>de</strong> 26 m<br />
<strong>de</strong> diámetro mayor; emisión <strong>de</strong> filopodios (acanto-<br />
podios). Endoplasma granular, 1 ó 2 vacuolas contráctiles<br />
con <strong>un</strong> diámetro promedio <strong>de</strong> 4 m y alg<strong>un</strong>as<br />
vacuolas digestivas (Figura 1-A). b) Quistes: con<br />
doble pared quística, exoquiste ligeramente ondulado<br />
y endoquiste irregular o poliédrico con varias<br />
p<strong>un</strong>tas; diámetro promedio <strong>de</strong> 14 m. El citoplasma<br />
se observó finamente granuloso y el núcleo no fue<br />
evi<strong>de</strong>nciado en el examen al fresco (Figura 1-B).<br />
En los trofozoítos, la exposición al <strong>Eh</strong> y sus<br />
controles <strong>de</strong> DMSO a diferentes tiempos, sólo<br />
produjo cambios en la forma, observándose redon<strong>de</strong>amiento<br />
celular, con <strong>un</strong> diámetro promedio <strong>de</strong><br />
20 µ, vacuolas <strong>de</strong>generativas <strong>de</strong> aproximadamente<br />
12,5 µ y numerosos gránulos intracitoplasmáticos<br />
(Figura 2). Estas modificaciones fueron evi<strong>de</strong>ntes<br />
a partir <strong>de</strong> las 48 horas, presentándose en los controles<br />
<strong>de</strong> DMSO, mientras que a las 72 horas, los<br />
cambios mencionados se observaron tanto en los<br />
controles <strong>de</strong> DMSO como en las concentraciones<br />
<strong>de</strong>l <strong>Eh</strong>. Cabe <strong>de</strong>stacar que, a las 96 horas no hubo<br />
modificaciones <strong>de</strong> la morfología <strong>de</strong> los trofozoítos,<br />
en ning<strong>un</strong>o <strong>de</strong> los controles ni <strong>de</strong> las concentraciones<br />
<strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong>.<br />
Luego <strong>de</strong> la exposición <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 a las<br />
concentraciones <strong>de</strong> DMSO y <strong>de</strong>l extracto <strong>Em</strong>,<br />
tampoco se evi<strong>de</strong>nciaron cambios morfológicos en<br />
los quistes, sólo en la forma vegetativa, los cuales<br />
Figura 1. A: Trofozoíto <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27, antes <strong>de</strong> la exposición a los extractos <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong>. Examen directo en medio liquido <strong>de</strong> Page modificado, 1.000 aumentos. Se observa el ectoplasma (a)<br />
con escasos acantopodios (b) y endoplasma (c) Vacuola contráctil (d) y digestivas (e) Núcleo con cariosoma evi<strong>de</strong>nte<br />
(f). B: Quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27, antes <strong>de</strong> la exposición a los extractos <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
Examen directo en medio líquido <strong>de</strong> Page modificado. 1.000 aumentos. arriba: quiste con 4 p<strong>un</strong>tas; abajo: quiste<br />
con 6 p<strong>un</strong>tas. Se observan dos quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., don<strong>de</strong> se evi<strong>de</strong>ncia ecto (a) y endoquiste (b), con poro<br />
u ostiolo (c).<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
Figura 2. Trofozoítos <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27, luego <strong>de</strong> la exposición al extracto <strong>Eh</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
(Examen directo en medio líquido <strong>de</strong> Page modif. 1.000 aumentos). A: trofozoíto en DMSO 3,5% a las 48 horas <strong>de</strong><br />
incubación, con vacuola <strong>de</strong>generativa (a), ectoplasma hialino (b) con numerosos acantopodios (c) y endoplasma granuloso<br />
y vacuolado (d), B: trofozoíto en DMSO 3,5% a las 48 horas <strong>de</strong> incubación, redon<strong>de</strong>ado sin acantopodios, con<br />
gránulos (e), C: se observan 3 trofozoítos vivos redon<strong>de</strong>ados, vacuolados y con gránulos, expuestos al <strong>Eh</strong> 3,8 mg/ml a<br />
las 72 horas (Examen directo con colorante supravital Azul <strong>de</strong> Tripano, 1.000 aumentos).<br />
Figura 3. Trofozoítos <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27, luego <strong>de</strong> la exposición al extracto <strong>Em</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
A: trofozoíto en <strong>Em</strong> 3,8% a las 48 horas <strong>de</strong> incubación (Examen directo en medio líquido <strong>de</strong> Page modificado. 1.000 aumentos),<br />
redon<strong>de</strong>ado y vacuolado, con gránulos en endoplasma (a), B: trofozoíto vivo redon<strong>de</strong>ado, con gránulos finos<br />
(a). C: trofozoíto muerto, redon<strong>de</strong>ado y vacuolado, con gránulos endoplásmicos (a). B y C: trofozoítos expuestos al <strong>Em</strong><br />
3,8 mg/ml a las 96 horas (Examen directo con colorante supravital Azul <strong>de</strong> Tripano, 1.000 aumentos). Los trofozoítos<br />
en A, B y C se observan ro<strong>de</strong>ados <strong>de</strong> material granuloso (b), proveniente <strong>de</strong>l extracto <strong>Em</strong>.<br />
fueron semejantes a los <strong>de</strong>scritos para el <strong>Eh</strong> (Figura<br />
3). Estos cambios se presentaron a las 24 horas para<br />
el DMSO 1,5% y <strong>Em</strong> 0,75 mg/ml. A las 48 y 72<br />
horas, las modificaciones también fueron evi<strong>de</strong>ntes<br />
en el <strong>aislado</strong> expuesto al <strong>Em</strong> 3,8%, manteniéndose<br />
las mismas hasta las 96 horas <strong>de</strong> exposición, a<br />
diferencia <strong>de</strong> lo que ocurre al <strong>aislado</strong> expuesto al<br />
<strong>Em</strong> 0,75 mg/ml, que no presenta alteraciones en su<br />
morfología.<br />
2.- Efecto <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong><br />
el número <strong>de</strong> amibas (trofozoítos y quistes) <strong>de</strong>l<br />
Aislado A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. Evaluación<br />
<strong>de</strong> la capacidad lítica: Antes <strong>de</strong> la evaluación<br />
<strong>de</strong> los extractos a las diferentes concentraciones<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL<br />
se realizo <strong>un</strong>a curva <strong>de</strong> crecimiento <strong>de</strong>l parásito<br />
en cultivos en placas <strong>de</strong> poliestireno 24 pozos. Al<br />
realizar los recuentos <strong>de</strong>l número <strong>de</strong> amibas durante<br />
las distintas horas <strong>de</strong> duración <strong>de</strong>l experimento,<br />
se obtuvo que, a las 2 horas <strong>de</strong> haber colocado<br />
el inóculo inicial, ocurrió <strong>un</strong>a disminución en el<br />
número <strong>de</strong> amibas, que se prolongó hasta la 24<br />
horas. A partir <strong>de</strong> este tiempo, y hasta las 72 horas,<br />
hubo <strong>un</strong> aumento en el número <strong>de</strong> amibas, el cual<br />
<strong>de</strong>creció a las 96 horas <strong>de</strong> observación, por lo cual,<br />
se consi<strong>de</strong>ró las 24 horas como el tiempo inicial y<br />
por en<strong>de</strong>, el recuento basal <strong>de</strong> cada ensayo.<br />
2.1.- Efecto <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> P. <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> el<br />
número <strong>de</strong> trofozoítos y quistes. Evaluación <strong>de</strong> la<br />
capacidad lítica.<br />
47
A. DORLA et al.<br />
En la Figura 4, se observa el crecimiento <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27 a diferentes tiempos<br />
<strong>de</strong> exposición con el <strong>Eh</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
y los respectivos controles. Al comparar con el recuento<br />
basal <strong>de</strong> amibas, se observa que en presencia<br />
<strong>de</strong> DMSO 0,7%, hay <strong>un</strong> aumento en el número<br />
<strong>de</strong> amibas a las 48, 72 y 96 horas, con diferencia<br />
significativa en todos los tiempos (p < 0,05). En<br />
contacto con el <strong>Eh</strong> 0,75 mg/ml, hay <strong>un</strong> aumento a<br />
las 48 horas y <strong>un</strong>a disminución para las 72 y 96 horas,<br />
con diferencia significativa en ambos casos (p<br />
< 0,05). Tanto el control <strong>de</strong> amibas como las que estuvieron<br />
en contacto con el DMSO 0,7%, alcanzaron<br />
<strong>un</strong> pico máximo <strong>de</strong> crecimiento a las 72 horas.<br />
Sin embargo, las amibas en DMSO 0,7% crecieron<br />
48<br />
Figura 4. Efecto <strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> <strong>de</strong><br />
<strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> 0,75 mg/ml y<br />
<strong>de</strong>l control <strong>de</strong> DMSO 0,7% <strong>sobre</strong> los<br />
trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp., <strong>aislado</strong> A27. (*: p < 0,05).<br />
Figura 5. Efecto <strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> <strong>de</strong><br />
<strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> 3,8 mg/ml y <strong>de</strong>l<br />
control <strong>de</strong> DMSO 3,5% <strong>sobre</strong> los<br />
trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp., <strong>aislado</strong> A27. (*: p < 0,05).<br />
más lentamente que el control <strong>de</strong> amibas antes <strong>de</strong><br />
llegar al pico máximo <strong>de</strong> crecimiento. En presencia<br />
<strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> 0,75% mg/ml, el pico máximo ocurrió<br />
a las 48 horas, es <strong>de</strong>cir, antes que el control <strong>de</strong><br />
amibas y el <strong>aislado</strong> en presencia <strong>de</strong>l DMSO 0,7%,<br />
<strong>de</strong>creciendo rápidamente en las siguientes horas.<br />
La evaluación <strong>de</strong>l crecimiento <strong>de</strong> las amibas<br />
expuestas al DMSO 3,5%, reflejó <strong>un</strong> aumento <strong>de</strong>l<br />
número <strong>de</strong> trofozoítos y quistes a las 48, 72 y 96<br />
horas <strong>de</strong> exposición, al compararse con el recuento<br />
base, con diferencias significativas en todos los<br />
tiempos observados (Figura 5). En relación con el<br />
<strong>aislado</strong> A27 expuesto al <strong>Eh</strong> 3,8 mg/ml, el parásito<br />
mostró <strong>un</strong> aumento discreto en su número, con<br />
significancia estadística en todas las horas <strong>de</strong><br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
Tabla 1. Capacidad lítica <strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> y <strong>de</strong> los controles <strong>de</strong> DMSO, <strong>sobre</strong> los<br />
trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., <strong>aislado</strong> A27<br />
Tiempo <strong>de</strong> exposición/<br />
Concentración<br />
48 horas 72 horas 96 horas<br />
Control DMSO 0,7% 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)<br />
Control DMSO 3,5% 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)<br />
<strong>Eh</strong> 0,75 mg/ml 0 (0%) 1 (16,60%) 4 (76,47%)<br />
<strong>Eh</strong> 3,8 mg/ml 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)<br />
0= lisis no <strong>de</strong>tectable (0%); 1= menos <strong>de</strong> 20% <strong>de</strong> lisis; 2=20-40% <strong>de</strong> lisis; 3= >40 a 60 a 40 a 60 a
A. DORLA et al.<br />
número <strong>de</strong> amibas<br />
número <strong>de</strong> amibas<br />
extracto <strong>Em</strong> y <strong>de</strong> los controles <strong>de</strong> DMSO. Las concentraciones<br />
ensayadas <strong>de</strong> los controles <strong>de</strong> DMSO<br />
(0,3 y 1,5%) presentaron efecto lítico <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong><br />
a las 48 y 72 horas <strong>de</strong>l ensayo, siendo mayor éste<br />
a la concentración <strong>de</strong> 1,5%. En cuanto al extracto<br />
metanólico, tiene capacidad lítica en ambas concentraciones<br />
a las 48 horas <strong>de</strong> incubación, pero el<br />
efecto se prolonga hasta las 96 horas para el extracto<br />
a mayor concentración (3,8 mg/ml). Al comparar<br />
ambas concentraciones <strong>de</strong>l <strong>Em</strong> con sus respectivos<br />
controles <strong>de</strong> DMSO, estos mostraron menor capacidad<br />
lítica en todas las horas <strong>de</strong> observación, excepto<br />
el <strong>Em</strong> 3,8 mg/ml a las 96 horas.<br />
3.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>sobre</strong> la<br />
viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp.<br />
Al evaluar la viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 en<br />
50<br />
horas <strong>de</strong> exposición<br />
horas <strong>de</strong> exposición<br />
Control amibas<br />
Control DMSO<br />
0,3%<br />
<strong>Em</strong> 0,75 mg/ml<br />
Control amibas<br />
Control DMSO<br />
1,5%<br />
<strong>Em</strong> 3,8 mg/ml<br />
Figura 6. Efecto <strong>de</strong>l extracto <strong>Em</strong><br />
<strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> 0,75 mg/ml<br />
y <strong>de</strong>l control <strong>de</strong> DMSO 0,3% <strong>sobre</strong><br />
los trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp., <strong>aislado</strong> A27. (*: p <<br />
0,05).<br />
Figura 7. Efecto <strong>de</strong>l extracto <strong>Em</strong><br />
<strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> 3,8 mg/ml<br />
y <strong>de</strong>l control <strong>de</strong> DMSO 1,5% <strong>sobre</strong><br />
los trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp., <strong>aislado</strong> A27 (*: p <<br />
0,05).<br />
presencia <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong>, se observó que el porcentaje<br />
<strong>de</strong> viabilidad <strong>de</strong> los trofozoítos y quistes oscila<br />
entre 80 y 100% en todas las concentraciones <strong>de</strong><br />
DMSO y <strong>de</strong> los extractos a lo largo <strong>de</strong> los ensayos,<br />
excepto a las 24 horas para el extracto <strong>Em</strong> 3,8 mg/<br />
ml, con <strong>un</strong> 72,7% <strong>de</strong> viabilidad.<br />
4.- Comprobación <strong>de</strong>l efecto <strong>sobre</strong> el crecimiento<br />
<strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A 27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp. en<br />
medio <strong>de</strong> Page modificado en placas <strong>de</strong> Petri, a<br />
los 7 días <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> ser expuesto a diferentes<br />
concentraciones <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P.<strong>distichophylla</strong><br />
y <strong>de</strong> los controles <strong>de</strong> DMSO en distintos tiempos.<br />
La presencia <strong>de</strong> trofozoítos y el incremento en<br />
su número, al comparar la observación efectuada<br />
a las 2 horas respecto a la observación a los 7 días,<br />
<strong>de</strong>mostró crecimiento.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
DISCUSIóN<br />
Se ha señalado que el diagnóstico temprano <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong>a lesión corneal por Acanthamoeba spp. podría<br />
resultar en curación (Kilvigton et al., 2002). Sin<br />
embargo, recientes trabajos <strong>de</strong>muestran que la amiba<br />
pue<strong>de</strong> permanecer en la cornea <strong>de</strong> <strong>un</strong> paciente<br />
curado clínicamente. Los quistes presentes en el<br />
estroma, resistentes a la terapia son consi<strong>de</strong>rados<br />
“quistes durmientes” (Shuste y Visvesvara, 2004).<br />
En estos casos, los tratamientos alternativos adquieren<br />
mayor importancia.<br />
El uso <strong>de</strong> productos naturales y/o sus <strong>de</strong>rivados<br />
en el tratamiento <strong>de</strong> pacientes con queratitis<br />
acantamibiana y úlceras corneales ha sido evaluado<br />
tanto in vitro (Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;<br />
Polat et al., 2007a, 2008) como in vivo (Vural et<br />
al., 2007). De estos reportes, se <strong>de</strong>riva la necesidad<br />
<strong>de</strong> evaluar la susceptibilidad <strong>de</strong> cada especie <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba a los diferentes extractos <strong>de</strong> <strong>un</strong>a<br />
misma planta, ya que estudios previos con plantas<br />
<strong>de</strong> la familia Apocynaceae muestran que in vitro no<br />
poseen la misma actividad contra microorganismos<br />
similares. Adicionalmente, <strong>un</strong> número <strong>de</strong> extractos<br />
<strong>de</strong> plantas relativamente importante se ha reportado<br />
con efecto tumoricida y microbicida, sin embargo,<br />
no mostraron actividad contra Acanthamoeba (Chu<br />
et al., 1998).<br />
La evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> obtenidos<br />
<strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. in vitro, se realizó <strong>de</strong>terminando la<br />
actividad <strong>de</strong> dos concentraciones diferentes <strong>de</strong> cada<br />
extracto. La selección <strong>de</strong> estas concentraciones se<br />
estableció con base en los resultados obtenidos por<br />
Salazar (2004), quien utilizó y evaluó <strong>un</strong> extracto<br />
crudo alcohólico (Ec) <strong>de</strong> esta planta <strong>sobre</strong> el mismo<br />
<strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp., a concentraciones<br />
<strong>de</strong> 1 mg/ml y 10 mg/ml (Salazar ,2004).<br />
La acción <strong>de</strong> varios extractos <strong>de</strong> plantas como<br />
Thymus sipyleus subsp. sipyleus var. sipyleus, especies<br />
<strong>de</strong> Allium y plantas <strong>de</strong>l sureste asiático, entre<br />
otras, <strong>sobre</strong> especies <strong>de</strong> Acanthamoeba ha sido<br />
evaluada empleando concentraciones que variaron<br />
entre 0,1 hasta 32 mg/ml (Chu et al., 1998; Polat<br />
et al., 2007 a y b). En este estudio, con P. <strong>distichophylla</strong>,<br />
la evaluación <strong>de</strong> concentraciones <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> y<br />
<strong>Em</strong> a 0,75 y 3,8 mg/ml en vez <strong>de</strong> 1 y 10 mg/ml, se<br />
<strong>de</strong>bió a que, por ser estos extractos particularmente<br />
pigmentados, no se pudieron emplear las concentraciones<br />
superiores a 5 mg/ml, ya que dificultaron<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL<br />
las observaciones al microscopio.<br />
Al exponer los trofozoítos <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp. a las diferentes concentraciones<br />
<strong>de</strong>l <strong>Eh</strong>, las modificaciones morfológicas observadas<br />
a partir <strong>de</strong> las 72 horas, <strong>de</strong>tectadas también en los<br />
controles <strong>de</strong> DMSO respectivos, parecen ser efecto<br />
<strong>de</strong> la acción <strong>de</strong> este solvente. Resultados similares<br />
fueron obtenidos por Salazar (2004), en los que el<br />
mismo <strong>aislado</strong> expuesto al Ec a la concentración <strong>de</strong><br />
1 mg/ml, presentó modificaciones en la morfología<br />
<strong>de</strong> los trofozoítos ocasionados por el DMSO. Este<br />
mismo efecto parece ocurrir para el extracto <strong>Em</strong><br />
sólo a la concentración <strong>de</strong> 3,8 mg/ml y su control<br />
<strong>de</strong> DMSO 1,5%, a diferencia <strong>de</strong>l control <strong>de</strong> DMSO<br />
0,3% don<strong>de</strong> no se observó variaciones morfológicas<br />
significativas, pero sí a la concentración <strong>de</strong>l <strong>Em</strong> 0,75<br />
mg/ml, indicando <strong>un</strong> posible efecto <strong>de</strong>l extracto a<br />
esta concentración sin influencia <strong>de</strong>l DMSO.<br />
Cabe resaltar que a las 96 horas <strong>de</strong> exposición<br />
a ambas concentraciones <strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong>, no se observó<br />
ning<strong>un</strong>a alteración en los trofozoítos. Con el<br />
<strong>Em</strong>, se observó este mismo efecto para la concentración<br />
<strong>de</strong> 0,75 mg/ml. Estos hallazgos sugieren<br />
que los cambios pudieran ser reversibles o que los<br />
extractos afectaron a alg<strong>un</strong>os <strong>de</strong> los trofozoítos y a<br />
otros no, permaneciendo sin alteraciones morfológicas<br />
los no afectados a las 96 horas. Sin embargo,<br />
a la concentración <strong>de</strong> 3,8 mg/ml <strong>de</strong>l <strong>Em</strong>, sí se presentaron<br />
alteraciones morfológicas en el <strong>aislado</strong> a<br />
las 96 horas, pero a diferencia <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> la concentración<br />
<strong>de</strong> 0,75 mg/ml, que se evi<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong>s<strong>de</strong><br />
las 2 horas hasta las 72 horas <strong>de</strong> exposición, el efecto<br />
<strong>de</strong>l <strong>Em</strong> 3,8 mg/ml se manifiesta a partir <strong>de</strong> las 48<br />
horas, extendiéndose hasta el final <strong>de</strong>l experimento,<br />
indicando <strong>un</strong> posible retraso en la aparición <strong>de</strong> las<br />
variaciones morfológicas y por en<strong>de</strong>, <strong>un</strong>a prolongación<br />
<strong>de</strong>l efecto.<br />
Por otra parte, no se observó ning<strong>un</strong>a modificación<br />
<strong>de</strong> las formas quísticas <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 al<br />
microscopio óptico, durante el tiempo <strong>de</strong> exposición<br />
a los extractos <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong>. Dado que la pared<br />
quística <strong>de</strong> este protozoario es <strong>de</strong> naturaleza quitinosa,<br />
conformada por dos capas, el exo y el endoquiste,<br />
esta característica pareciera conferir cierta<br />
resistencia a la penetración tanto <strong>de</strong> los extractos<br />
como <strong>de</strong>l DMSO. Estas observaciones difieren <strong>de</strong><br />
lo reportado por alg<strong>un</strong>os autores para el DMSO y<br />
su efecto en el aumento <strong>de</strong> la penetración <strong>de</strong> ciertas<br />
drogas <strong>sobre</strong> las formas quísticas <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. resistentes a la propamidina, proponiendo que<br />
51
A. DORLA et al.<br />
el DMSO actúa como <strong>un</strong> trasportador para alg<strong>un</strong>as<br />
drogas (Neal et al., 1974; Sa<strong>un</strong><strong>de</strong>rs et al., 1992).<br />
Debido a que en este trabajo no se observó ningún<br />
efecto <strong>sobre</strong> las formas quísticas y para <strong>de</strong>scartar<br />
modificaciones no perceptibles, tanto bioquímicas<br />
como estructurales, sería recomendable realizar<br />
otra técnica, como la microscopía electrónica, que<br />
permita <strong>de</strong>tectar si se producen tales cambios.<br />
La evaluación <strong>de</strong>l <strong>Eh</strong> y <strong>Em</strong> <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
<strong>sobre</strong> el número <strong>de</strong> amibas se realizó a las 24<br />
horas. Alg<strong>un</strong>os investigadores recomiendan para el<br />
estudio <strong>de</strong> extractos naturales y sus efectos <strong>sobre</strong><br />
Acanthamoeba spp., incubar a partir <strong>de</strong> 24 horas<br />
y exten<strong>de</strong>rlas en el tiempo, para po<strong>de</strong>r observar<br />
efectos tales como la capacidad lítica (Chu et al.,<br />
1998).<br />
Para el extracto <strong>Eh</strong> a la concentración <strong>de</strong> 0,75<br />
mg/ml y su respectivo control <strong>de</strong> DMSO 0,7%, se<br />
observó que la ten<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong><br />
A27 en presencia <strong>de</strong> DMSO 0,7% alcanzó el pico<br />
máximo <strong>de</strong> crecimiento a las 72 horas y disminuyó<br />
progresivamente hasta las 96 horas <strong>de</strong> incubación,<br />
sin intervención <strong>de</strong> actividad lítica alg<strong>un</strong>a por parte<br />
<strong>de</strong>l DMSO, a diferencia <strong>de</strong>l crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong><br />
con el <strong>Eh</strong> 0,75 mg/ml, el cual alcanzó el pico<br />
máximo <strong>de</strong> crecimiento a las 48 horas y disminuyó<br />
rápidamente hasta las 96 horas. Esto parece indicar<br />
que la concentración <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> 0,75 mg/ml afecta al<br />
<strong>aislado</strong> A27 acelerando su crecimiento máximo<br />
en estos cultivos al inicio <strong>de</strong>l experimento, pero<br />
a su vez propiciando <strong>un</strong>a disminución marcada<br />
<strong>de</strong>l número <strong>de</strong> amibas luego <strong>de</strong> alcanzar el pico<br />
máximo, relacionada a su vez con la capacidad<br />
lítica <strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> 0,75 mg/ml, manifiesta a<br />
partir <strong>de</strong> las 72 horas.<br />
Para la concentración <strong>de</strong> <strong>Eh</strong> 3,8 mg/ml y su respectivo<br />
control DMSO 3,5%, el <strong>aislado</strong> A27 exhibió<br />
<strong>un</strong> comportamiento diferente: en ambos casos<br />
no se observó <strong>un</strong> número máximo <strong>de</strong> amibas durante<br />
el experimento, sino <strong>un</strong> crecimiento discreto<br />
y continuo para el DMSO y poca variación en<br />
el recuento <strong>de</strong> amibas para el extracto, semejando<br />
<strong>un</strong>a fase estacionaria, relacionado ambos con la ausencia<br />
<strong>de</strong> capacidad lítica por parte <strong>de</strong>l DMSO y el<br />
extracto. Estas observaciones parecen indicar <strong>un</strong>a<br />
posible adaptación <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> al <strong>Eh</strong> 3,8 mg/ml y su<br />
solvente o <strong>un</strong>a disminución en la tasa <strong>de</strong> proliferación<br />
celular <strong>de</strong>l protozoario, lo que podría <strong>de</strong>mostrarse<br />
al exten<strong>de</strong>rse el tiempo <strong>de</strong> incubación hasta<br />
obtener <strong>un</strong> cambio en la ten<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> crecimiento<br />
52<br />
<strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> en presencia <strong>de</strong> este extracto.<br />
El efecto <strong>de</strong> disminución <strong>de</strong> la división celular<br />
evi<strong>de</strong>nciado a medida que aumenta la concentración<br />
<strong>de</strong>l extracto <strong>Eh</strong> <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp., pue<strong>de</strong> ser comparado con lo<br />
obtenido por Salazar (2004) con el mismo <strong>aislado</strong><br />
<strong>de</strong> Acanthamoeba y el extracto crudo alcohólico<br />
(Ec) <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong> Chu et al., 1998; Derda<br />
et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al.,<br />
1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008<br />
Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al.,<br />
2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;<br />
Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda<br />
et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al.,<br />
1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008<br />
Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al.,<br />
2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;<br />
Polat et al., 2007a, 2008; por Rodríguez-Ortega y<br />
col. (2006) usando el mismo extracto Ec <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
<strong>sobre</strong> epimastigotes <strong>de</strong> T. cruzi 19 y por<br />
otros trabajos que evaluaron actividad amebicida<br />
<strong>de</strong> extractos naturales <strong>de</strong> plantas como Allium spp.,<br />
Thymus spp., Ipomoea sp, Kaempferia galanga<br />
y Cananga odorata 12,26,15-17 . Sería entonces recomendable<br />
probar concentraciones mayores <strong>de</strong> este<br />
extracto, tomando en cuenta que la toxicidad <strong>de</strong>l<br />
DMSO como solvente no exceda <strong>de</strong> 10%.<br />
Durante la evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l <strong>Em</strong><br />
<strong>sobre</strong> el número <strong>de</strong> amibas <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp., la obtención <strong>de</strong> <strong>un</strong> pico<br />
máximo <strong>de</strong> crecimiento a las 96 horas en presencia<br />
<strong>de</strong> <strong>Em</strong> 0,75 mg/ml y <strong>de</strong> DMSO 0,3%, en vez <strong>de</strong><br />
a las 72 horas como el control <strong>de</strong> amibas, sugiere<br />
<strong>un</strong> discreto retardo en la tasa <strong>de</strong> multiplicación<br />
relacionado con el efecto <strong>de</strong> lisis <strong>de</strong>l extracto y su<br />
solvente al inicio <strong>de</strong>l experimento y la ausencia<br />
<strong>de</strong>l mismo a las 96 horas <strong>de</strong> incubación. En cuanto<br />
al efecto <strong>de</strong>l DMSO 1,5% <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27,<br />
éste produjo <strong>un</strong> posible retraso en la adaptación<br />
<strong>de</strong>l parásito hasta las 48 horas y por en<strong>de</strong>, <strong>un</strong>a<br />
aparición tardía <strong>de</strong>l pico máximo <strong>de</strong> crecimiento a<br />
las 96 horas, mientras que el <strong>Em</strong> 3,8 mg/ml generó<br />
<strong>un</strong>a disminución constante <strong>de</strong>l número <strong>de</strong> parásitos<br />
hasta el final <strong>de</strong>l experimento, relacionándose la<br />
misma con la presencia <strong>de</strong> lisis durante todos los<br />
tiempos <strong>de</strong> incubación. Por lo tanto, pareciera<br />
que a mayor concentración <strong>de</strong> <strong>Em</strong> se prolonga la<br />
capacidad lítica <strong>de</strong>l extracto.<br />
En este ensayo, según los resultados obtenidos,<br />
aparentemente podría haber <strong>un</strong>a interacción entre el<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
extracto <strong>Em</strong> y su solvente que modificaría la capacidad<br />
lítica observada para el DMSO, disminuyéndola<br />
o inclusive, anulándola, excepto para el caso<br />
<strong>de</strong>l <strong>Em</strong> 3,8 mg/ml y DMSO 1,5% a las 96 horas <strong>de</strong><br />
incubación. Este hallazgo no fue observado para el<br />
<strong>Eh</strong>. Se ha reportado que las propieda<strong>de</strong>s terapéuticas<br />
y/o tóxicas <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>os agentes probablemente<br />
aumenten al combinarse con el DMSO, por ejemplo,<br />
para la actividad <strong>de</strong>l diacetato <strong>de</strong> clorhexidina,<br />
pero también hay estudios que refieren poca o ning<strong>un</strong>a<br />
modificación <strong>de</strong> la actividad <strong>de</strong> compuestos<br />
como la polihexametilen biguanida (Brayton 1986;<br />
Larkin et al., 1992; Kh<strong>un</strong>kitti 1996). Esto podría<br />
estar ocurriendo en el caso <strong>de</strong>l extracto <strong>Em</strong> 0,75<br />
mg/ml.<br />
La viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> sometido a la actividad<br />
<strong>de</strong> los extractos no mostró cambios importantes, por<br />
lo cual, pareciera no haber daños en la membrana<br />
plasmática <strong>de</strong> los trofozoítos ni <strong>de</strong> la pared quística,<br />
lo cual <strong>de</strong>bería ser comprobado con la evaluación a<br />
nivel ultraestructural. Sin embargo, sí se observó<br />
<strong>un</strong>a posible acción <strong>de</strong> los extractos a nivel intracelular,<br />
ya que las amibas que no fueron afectadas<br />
por la acción lítica <strong>de</strong> los extractos, mostraron cambios<br />
morfológicos, en los que se observan modificaciones<br />
a nivel citoplasmático como la aparición<br />
<strong>de</strong> vacuolas, con o sin gránulos, pero sin provocar<br />
la muerte celular, al menos en el tiempo <strong>de</strong> experimentación.<br />
Estudios anteriores con el Género <strong>Pera</strong><br />
y amibas <strong>de</strong>l Género Acanthamoeba reportan para<br />
ensayos <strong>de</strong> viabilidad los mismos resultados <strong>de</strong> este<br />
trabajo, <strong>de</strong>mostrándose que estos extractos actúan<br />
principalmente <strong>sobre</strong> la morfología y proliferación<br />
celular <strong>de</strong> estos parásitos (Salazar, 2004).<br />
La evaluación cualitativa <strong>de</strong>l crecimiento a<br />
los 7 días en cultivos en placas <strong>de</strong> petri, permitió<br />
evi<strong>de</strong>nciar que, aparte <strong>de</strong> conservar su viabilidad<br />
y a<strong>un</strong> con modificaciones en su morfología en<br />
alg<strong>un</strong>os casos, el <strong>aislado</strong> es capaz <strong>de</strong> crecer en estos<br />
cultivos. Sería recomendable, por lo tanto, realizar<br />
este ensayo <strong>de</strong> manera cuantitativa, ajustando los<br />
inóculos iníciales luego <strong>de</strong> la recolecta <strong>de</strong> cada<br />
pozo, para evaluar la proliferación <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> en<br />
cada caso a los 7 días <strong>de</strong> incubación y estimar así<br />
el efecto <strong>de</strong> los extractos <strong>sobre</strong> su crecimiento en<br />
cultivos a largo plazo.<br />
En conclusión, <strong>de</strong> los extractos <strong>de</strong> P. <strong>distichophylla</strong><br />
ensayados, sólo el <strong>Em</strong> 0,75 mg/ml afectó la<br />
morfología <strong>de</strong> los trofozoítos <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp., mientras que la morfología<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54<br />
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL<br />
<strong>de</strong> los quistes no se alteró en presencia ning<strong>un</strong>o <strong>de</strong><br />
los extractos. <strong>Eh</strong> a la concentración <strong>de</strong> 0,75 mg/ml,<br />
aparentemente disminuyó la proliferación celular,<br />
no así el <strong>Em</strong>. Ambos extractos a la concentración<br />
<strong>de</strong> 3,8 mg/ml permiten la proliferación celular. En<br />
relación a la lisis celular, solo <strong>Em</strong> <strong>de</strong>mostró tener<br />
capacidad lítica <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. Estos extractos actúan principalmente<br />
<strong>sobre</strong> la morfología y proliferación celular <strong>de</strong> estos<br />
parásitos sin afectar su viabilidad, <strong>de</strong>mostrado al<br />
evi<strong>de</strong>nciarse crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> en cultivos <strong>de</strong><br />
Page modificado en placas <strong>de</strong> petri, luego <strong>de</strong> haber<br />
sido expuesto a la acción <strong>de</strong> los extractos.<br />
REFERENCIAS<br />
1. BRAYTON CF. 1986. Dimethyl sulfoxi<strong>de</strong> (DMSO): a<br />
review.[Resumen]. Cornell Vet. 76: 61-90.<br />
2. CHU DAN-MY, MILES H, TONEY D, NGYUEN C,<br />
MARCIANO-CABRAL F. 1998. Amebicidal activity<br />
of plant extracts from Southeast Asia on Acanthamoeba<br />
spp. Parasitol. Res. 84: 746-752.<br />
3. DERDA M, HADAS E, THIEM B, SUŁEK A. 2004.<br />
Amebicidal plants extracts [Resumen]. Wiad Parazytol.<br />
50: 715-721.<br />
4. DERDA M, SUŁEK-STANKIEWICZ A, HADAŚ E.<br />
2006. Free-living amoebae as vehicles of pathogenic<br />
bacteria [Resumen]. Wiad Parazytol. 52: 1-7.<br />
5. ISHIBASHI Y. 1997. Acanthamoeba keratitis. Ophthalmologica.<br />
211 (Suppl 1): 39-44.<br />
6. JERCIC MI. 2007. Amebas <strong>de</strong> vida libre género Acanthamoeba.<br />
Retrato microbiológico. Rev Chil Infect. 24:<br />
491-492.<br />
7. KILVIGTON S, HUGHES R, BYAS J, DART J. 2002.<br />
Activities of therapeutic agents and myristamidopropyl<br />
dimethylamine against Acanthamoeba isolates. Antimicrob<br />
Agents Chemother. 46: 2007-2009.<br />
8. KHUNKITTI W, LLOYD DE, FURR JR, RUSSELL<br />
AD. 1996.The letal effects of biguani<strong>de</strong>s on cysts and<br />
thophozoites of Acanthamoeba castellani. [Resumen].<br />
J Appl Bacteriol. 81: 73-77.<br />
9. LARKIN DF, KILVINGTON S, DART JK. 1992.<br />
Treatment of Acanthamoeba keratitis with polyhexamethylene<br />
biguani<strong>de</strong>. Ophthalmol. 99: 185-191.<br />
10. LUNA D. 2003. Fitoquímica <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> glabrata y <strong>Pera</strong><br />
distichopylla, Actividad Biológica [Tesis Doctoral].<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela, Facultad <strong>de</strong> Ciencias;.<br />
11. MATHERS WD. 2004. Acanthomoeba A difficult<br />
pathogen to evaluate and treat Êditorial. Cornea. 23:<br />
325.<br />
12. MORALES ROJAS T, CASTILLO A. 2005. Catálogo<br />
<strong>de</strong>ndrológico comentado <strong>de</strong>l bosque ribereño <strong>de</strong> las<br />
confluencias <strong>de</strong> los ríos Cuao-Sipapo (Estado Amazonas,<br />
Venezuela). Acta Bot.Venez. 28: 63-87.<br />
13. NEAL RA, LATTER VS, RICHARDS WHG. 1974.<br />
Survival of Entamoeba and related amoeba at low<br />
53
A. DORLA et al.<br />
temperature-II. Viability of amoeba and cysts stored in<br />
liquid nitrogen. Int. J Parasitol. 4: 353-360.<br />
14. ODDÓ D. 2006. Infecciones por amebas <strong>de</strong> vida libre.<br />
Comentarios históricos, taxonomía y nomenclatura,<br />
protozoología y cuadros anatomo-clínicos. Rev Chil<br />
Infect. 23: 200-214.<br />
15. PAGE FC. 1974. A further study of taxonomic criteria<br />
for Limax amoebae, with <strong>de</strong>scriptions of new species<br />
and a key to genera. Arch. Protistenkd. 116: 149.<br />
16. PAGE FC. 1988. A new key to freshwater and soil<br />
Gymnamoebae. Freshwater, biological association. UK<br />
Amblesi<strong>de</strong>. Cumbria. 122.<br />
17. PÉREZ DE GALINDO MV. 1995. Hallazgo <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
sp, Naegleria sp y otras amibas <strong>de</strong> vida libre<br />
en pacientes y portadores asintomáticos [Trabajo<br />
presentado ante la Facultad <strong>de</strong> Medicina, Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela, para optar al ascenso en el escalafón<br />
<strong>un</strong>iversitario a Profesor Agregado]. Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Escuela<br />
<strong>de</strong> Bioanálisis; 1995.<br />
18. PÉREZ DE GALINDO MV. 2005. Actualización en el<br />
conocimiento <strong>de</strong> amibas <strong>de</strong> vida libre potencialmente<br />
patógenas. Aportes a su estudio en Venezuela, particularmente<br />
<strong>de</strong> los géneros Acanthamoeba y Naegleria.<br />
[Trabajo presentado ante la Facultad <strong>de</strong> Medicina, Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela, para optar al ascenso<br />
en el escalafón <strong>un</strong>iversitario a Profesor Asociado]. Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela. Facultad <strong>de</strong> Medicina.<br />
Escuela <strong>de</strong> Bioanálisis;<br />
19. POLAT ZA, TEPE B, VURAL A. 2007a. In vitro<br />
effectiveness of Thymus sipyleus subsp. sipyleus var.<br />
sipyleus on Acanthamoeba castellani and its cytotoxic<br />
potential on corneal cells. Parasitol Res.101: 1551-1555.<br />
20. POLAT ZA, VURAL A, TEPE B, CETIN A. 2007b.<br />
In vitro amoebicidal activity of four Allium species on<br />
Acanthamoeba castellani and their cytotoxic potentials<br />
on corneal cells. Parasitol Res. 101: 397- 402.<br />
21. POLAT ZA, VURAL A, OZAN F, TEPE B, OZCELIC<br />
S, CETIN A. 2008. In vitro evaluation of the amoebici-<br />
54<br />
dal activity of garlic (Allium sativum) extract on Acanthamoeba<br />
castellani and its cytotoxic potentials on corneal<br />
cells [Resumen]. J Ocul Pharmacol Ther. 24: 8-14.<br />
22. RODRÍGUEZ-ZARAGOZA S, ORDAZ C, AVILAS<br />
G, MUÑOZ G, ARCINIEGAS A, ROMO AS. 1999.<br />
In vitro evaluation of the amebicidal activity of Budleia<br />
cordata (Loganiaceae, H.B.K.) on several strains of<br />
Acanthamoeba. J Ethnopharmacol. 66: 327-334.<br />
23. RODRÍGUEZ-ORTEGA M, LUNA D, CANÓNICO<br />
Y, CARVAJAL Z, MÉNDEZ J, BRICEÑO L. 2006.<br />
Extracts from <strong>Pera</strong> glabrata (Schott) and <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong> with anti-parasite and antiviral activity.<br />
Ciencia. 14: 492-497.<br />
24. SALAZAR LS. 2004. Evaluación <strong>de</strong> la actividad<br />
biológica <strong>de</strong>l extracto crudo alcohólico (Ec) obtenido<br />
<strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> (Euphorbiaceae) proveniente<br />
<strong>de</strong>l Amazonas <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. [Trabajo Especial <strong>de</strong> Investigación para optar al<br />
título <strong>de</strong> Licenciada en Bioanálisis-UCV]. Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Escuela<br />
<strong>de</strong> Bioanálisis;.<br />
25. SAUNDERS PP, PROCTOR EM, ROLLINGS DF, RI-<br />
CHARDS JS. 1992. Enhanced killing of Acanthamoeba<br />
cysts in vitro using Dimethylsulfoxi<strong>de</strong> [Resumen].<br />
Ophthalmol. 99: 1197-200.<br />
26. SCHUSTER FL, VISVESVARA G. 2004. Amebae<br />
and ciliated protozoa as causal agents of waterborne<br />
zoonotic disease. Vet Parasitol. 26: 91-120.<br />
27. SEAL DV.2003. Acanthamoeba queratitis: update,<br />
inci<strong>de</strong>nce, molecular epi<strong>de</strong>miology and new drugs for<br />
treatment. Eye. 17: 893-905.<br />
28. VAN DER BIJL P, VAN EYK A, SEIFART H, MEYER<br />
D. 2004. In vitro transcorneal penetration of metronidazole<br />
and its potential use as adj<strong>un</strong>ct therapy in Acanthamoeba<br />
keratitis. Cornea. 23: 386-389.<br />
29. VURAL A, POLAT ZA, TOPALKARA A, TOKER MI,<br />
ERDOGAN H, ARICI MK, et al. 2007.The effect of<br />
propolis in experimental Acanthamoeba keratitis. Clin<br />
Experiment Ophthalmol. 35: 749-754..<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
Artículo Original<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61<br />
Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico<br />
(Ec) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp productor <strong>de</strong> úlcera corneal<br />
WAGNER C. M. 1 , SALAZAR L. S. 1 , DORLA A. 1, PÉREZ DE G. M. V. 1 , BLANCO DE M J. 2 , GALINDO M. V. 1 ,<br />
NESSI A. 1 , VETHENCOURT M. A. 1 , BANDES A. 1 , GUZMáN DE R. C. T 1 .<br />
1 Laboratorio <strong>de</strong> Amibiasis, Cátedra <strong>de</strong> Parasitología, Escuela <strong>de</strong> Bioanálisis, Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
2 Grupo <strong>de</strong> Productos Naturales, Escuela <strong>de</strong> Química. Facultad <strong>de</strong> Ciencias, Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
ABSTRACT<br />
PRELIMINARY IN VITRO SCREENING USING A PERA DISTICHOPHYLLA ALCOHOLIC<br />
EXTRACT (EC) AGAINST AN ACANTHAMOEBA SPP ISOLATE RESPONSIBLE OF<br />
CORNEAL ULCER<br />
Actually, infections due to Acanthamoeba spp have increased, specially at cornea and its treatment has<br />
limitations. New options for treatment have been proved, including a large number of therapeutic agents and<br />
natural products, which have been tested in vitro to evaluate the amoebicidal activities against this pathogen<br />
organism. In this sense, we proposed to evaluate in vitro biological activities of cru<strong>de</strong> alcoholic extract (Ec)<br />
from <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, an amazonic plant, against an Acanthamoeba spp isolate (A27), obtained from<br />
a patient who suffered a corneal ulcer. We evaluated the effects of 1 and 10 mg/ml concentrations of Ec<br />
against Acanthamoeba spp trophozoites and cysts in 24-wells polystyrene microplates. Growth amoeba<br />
inhibition was observed, at both Ec concentrations exposure, being greater at 10 mg/ml; morphologic<br />
changes were also <strong>de</strong>tected in vegetative forms, as ro<strong>un</strong>ding and vacuolization, signs of cell <strong>de</strong>generation<br />
or <strong>de</strong>ath. No morphologic variations at light microscopy were seen in cystic forms after exposure to both<br />
Ec concentrations. These results suggest that Ec could produce trophozoites lysis and have amoebostatic,<br />
lytic and amoebicidal effects at 1 and 10 mg/ml concentrations. We recommend to complement this study<br />
evaluating other concentrations of Ec and possible ultrastructural cell changes by other techniques like<br />
electronic microscopy.<br />
Key words: Acanthamoeba spp, <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, corneal ulcer, treatment.<br />
RESUMEN<br />
Las infecciones causadas por Acanthamoeba spp se han incrementado, especialmente en la cornea y<br />
Recibido: 15 <strong>de</strong> J<strong>un</strong>io <strong>de</strong> 2011. Aceptado 15 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Carolina M. Wagner A.<br />
E-mail: bioparas@ucv.ve, cwagnera@gmail.com<br />
55
C. M. WAGNER et al.<br />
el tratamiento <strong>de</strong> las mismas tiene limitaciones. En la constante búsqueda <strong>de</strong> nuevos medicamentos para el<br />
tratamiento <strong>de</strong> estas afecciones, <strong>un</strong> gran número <strong>de</strong> agentes terapéuticos y <strong>de</strong> extractos <strong>de</strong> plantas han sido<br />
analizados in vitro para evaluar su actividad amebicida contra este patógeno. En este sentido, se planteó evaluar<br />
in vitro la actividad biológica <strong>de</strong>l extracto crudo alcohólico (Ec), obtenido <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, <strong>un</strong>a<br />
planta <strong>de</strong>l Amazonas, <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba spp (A27), proveniente <strong>de</strong> <strong>un</strong> paciente con úlcera<br />
corneal. Se evaluó el efecto <strong>de</strong>l extracto Ec a concentraciones <strong>de</strong> 1 mg/ml y 10 mg/ml <strong>sobre</strong> trofozoitos<br />
y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp, en placas <strong>de</strong> poliestireno <strong>de</strong> 24 pozos. Se observó inhibición en el<br />
crecimiento amibiano, a ambas concentraciones evaluadas, siendo mayor el efecto a 10 mg/ml; también<br />
se observaron cambios morfológicos en los trofozoitos, como redon<strong>de</strong>amiento y vacuolización, como<br />
signos <strong>de</strong> <strong>de</strong>generación y muerte celular. En los quistes, no se observaron cambios morfológicos visibles<br />
al microscopio <strong>de</strong> luz, ni variaciones en el tamaño, al ser enfrentados a las concentraciones estudiadas. Los<br />
resultados sugieren que el extracto pareciera producir lisis en los trofozoítos y activida<strong>de</strong>s amebostática,<br />
lítica y amebicida a las concentraciones <strong>de</strong> 1 y 10 mg/ml. Se sugiere evaluar otras concentraciones para<br />
complementar los resultados obtenidos en este trabajo y realizar estudios ultraestructurales para la <strong>de</strong>tección<br />
<strong>de</strong> modificaciones en la célula.<br />
Palabras claves: Acanthamoeba spp, <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, úlcera corneal, tratamiento.<br />
56<br />
INTRODUCCIóN<br />
Las plantas y sus <strong>de</strong>rivados han representado,<br />
<strong>de</strong>s<strong>de</strong> la antigüedad, <strong>un</strong>a buena opción terapéutica<br />
para alg<strong>un</strong>as enfermeda<strong>de</strong>s. Venezuela posee en el<br />
Amazonas, gran diversidad <strong>de</strong> especies vegetales<br />
alg<strong>un</strong>as con propieda<strong>de</strong>s curativas, y se ubica como<br />
<strong>un</strong>o <strong>de</strong> los países con mayores fuentes naturales<br />
para el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la industria farmacéutica en el<br />
tratamiento <strong>de</strong> enfermeda<strong>de</strong>s. En los últimos años,<br />
las infecciones por Acanthamoeba spp se han incrementado,<br />
especialmente las afecciones oculares por<br />
Acanthamoeba spp (Díaz et al., 1993; Bermú<strong>de</strong>z<br />
et al., 1997;) y el tratamiento farmacológico utilizado<br />
tiene ciertas limitaciones (Dribe et al.,1988;<br />
Kilvington et al., 1990). En la búsqueda <strong>de</strong> nuevas<br />
opciones terapéuticas para <strong>un</strong> tratamiento efectivo<br />
contra este protozoario, surge la inquietud <strong>de</strong> evaluar<br />
productos naturales provenientes <strong>de</strong> plantas,<br />
ya que se ha reportado la existencia <strong>de</strong> actividad<br />
amebicida <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>os extractos <strong>sobre</strong> diferentes<br />
especies <strong>de</strong> Acanthamoeba (My Chu et al., 1998;<br />
Vural et al., 2007; Polat et al., 2007a,b; 2008). Con<br />
el análisis fitoquímico y biológico <strong>de</strong> <strong>un</strong>a planta <strong>de</strong>l<br />
Amazonas, <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, se <strong>de</strong>mostró que<br />
el extracto crudo alcohólico (Ec) <strong>de</strong> hojas y ramas<br />
posee actividad antiparasitaria <strong>sobre</strong> Trypanosoma<br />
cruzi (L<strong>un</strong>a, 2003). Estos ensayos fueron ampliados<br />
por Rodríguez-Ortega y colaboradores, al<br />
evaluar la actividad anti- parasitaria para T. cruzi<br />
<strong>de</strong> los extractos acuosos (Ea) y alcohólicos (Ec) <strong>de</strong><br />
<strong>Pera</strong> glabrata y <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, así como<br />
su actividad antiviral <strong>sobre</strong> los virus <strong>de</strong> <strong>de</strong>ngue y<br />
fiebre amarilla, obteniéndose inhibición <strong>de</strong> la replicación<br />
<strong>de</strong> epimastigotes <strong>de</strong> T. cruzi por los Ea <strong>de</strong><br />
ambas plantas y en especial, <strong>de</strong>l Ea <strong>de</strong> P. glabrata<br />
<strong>sobre</strong> la replicación <strong>de</strong> las formas amastigotas <strong>de</strong>l<br />
parásito. En relación con el virus <strong>de</strong>l <strong>de</strong>ngue y <strong>de</strong> la<br />
fiebre amarilla, los Ec fueron más efectivos que los<br />
Ea (Rodríguez et al., 2006). En las infecciones por<br />
Acanthamoeba spp, el uso <strong>de</strong> extractos naturales<br />
sería <strong>un</strong>a excelente alternativa ante las limitaciones<br />
actuales para el tratamiento <strong>de</strong> las mismas. Basado<br />
en estas investigaciones, se planteó evaluar in vitro<br />
la actividad biológica <strong>de</strong>l Ec obtenido <strong>de</strong> <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong>, <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp, A27, proveniente <strong>de</strong> <strong>un</strong> paciente con úlcera<br />
corneal.<br />
MATERIAL Y MÉTODO<br />
Material vegetal: <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> (Euphorbiaceae),<br />
fue i<strong>de</strong>ntificada y recolectada por el Prof.<br />
Anibal Castillo (Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela,<br />
Instituto <strong>de</strong> Biología Experimental), cerca <strong>de</strong>l Río<br />
Sipapo, M<strong>un</strong>icipio Autana, Estado Amazonas. En<br />
el Laboratorio <strong>de</strong> Productos Naturales <strong>de</strong> la Escuela<br />
<strong>de</strong> Química <strong>de</strong> la Facultad <strong>de</strong> Ciencias <strong>de</strong> la Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela fueron obtenidos 3<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
extractos (crudo alcohólico, hexanólico y metanólico)<br />
(L<strong>un</strong>a, 2003). En este trabajo se evaluó el extracto<br />
crudo alcohólico (Ec).<br />
Se prepararon dos soluciones madres <strong>de</strong>l Ec: 3<br />
mg/ml y 30 mg/ml, solubilizadas en dimetilsulfóxido<br />
(DMSO) al 100 % y se completó con agua <strong>de</strong>stilada<br />
estéril hasta <strong>un</strong> volumen final <strong>de</strong> 15 ml. El<br />
porcentaje final <strong>de</strong> DMSO <strong>de</strong> cada solución fue <strong>de</strong><br />
10%. Previamente, se realizaron ensayos <strong>de</strong> toxicidad<br />
<strong>de</strong> este compuesto <strong>sobre</strong> el <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp, empleando concentraciones <strong>de</strong>s<strong>de</strong> 1%<br />
hasta 12,5%.<br />
Material biológico: El <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp, <strong>de</strong>signado como A27 según nomenclatura<br />
propia <strong>de</strong>l Laboratorio <strong>de</strong> Amibiasis <strong>de</strong> la Escuela<br />
<strong>de</strong> Bioanálisis <strong>de</strong> la Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela<br />
(UCV), fue obtenido en este laboratorio<br />
a partir <strong>de</strong> <strong>un</strong>a muestra <strong>de</strong> raspado <strong>de</strong> úlcera corneal,<br />
tomada a <strong>un</strong>a paciente <strong>de</strong> 27 años <strong>de</strong> edad,<br />
quien presentó <strong>un</strong>a lesión ocular, la cual ameritó la<br />
toma <strong>de</strong> esta muestra para el diagnóstico etiológico;<br />
como antece<strong>de</strong>nte epi<strong>de</strong>miológico, la paciente<br />
informó ser usuaria <strong>de</strong> lentes <strong>de</strong> contacto blandos<br />
por 9 años. Este <strong>aislado</strong> ha sido mantenido en el<br />
medio <strong>de</strong> cultivo bifásico <strong>de</strong> Page modificado por<br />
Chinchilla et al., (1979) en placas <strong>de</strong> petri y fue<br />
adaptado al crecimiento en placas <strong>de</strong> poliestireno<br />
<strong>de</strong> 24 pozos para realizar los bioensayos.<br />
Bioensayos: El efecto <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong> la morfología<br />
y viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp,<br />
así como la capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong> el mismo,<br />
fueron evaluados al exponer <strong>un</strong>a suspensión <strong>de</strong> 1 x<br />
10 4 amibas/ml <strong>de</strong> cultivo (trofozoítos y quistes) a las<br />
concentraciones <strong>de</strong> 1 mg/ml y 10 mg/ml a las 24,<br />
48, 72 y 96 horas. Estos bioensayos se realizaron en<br />
el medio <strong>de</strong> cultivo bifásico <strong>de</strong> Page modificado por<br />
Chinchilla et al., (1979), en placas <strong>de</strong> poliestireno <strong>de</strong><br />
24 pozos N<strong>un</strong>c®, y <strong>un</strong>a suspensión <strong>de</strong> Escherichia<br />
coli (patrón 0,5 Mac Farland) en la fase líquida <strong>de</strong><br />
este medio (Pérez <strong>de</strong> Galindo, 1975; Chinchilla<br />
et al., 1979). Para todos los ensayos, se estableció<br />
<strong>un</strong> control <strong>de</strong> amibas con el medio <strong>de</strong> cultivo y <strong>un</strong><br />
control <strong>de</strong> DMSO al 3%, siendo ésta la concentración<br />
<strong>de</strong>l solvente que se obtuvo al realizar las diluciones<br />
<strong>de</strong> las soluciones madres en los pozos.<br />
Los bioensayos se realizaron por duplicado,<br />
incubando los trofozoítos y/o quistes con las dos<br />
concentraciones <strong>de</strong>l Ec a 37ºC; al concluir cada<br />
tiempo, se recolectó el contenido <strong>de</strong> cada pozo,<br />
colocando en tubos <strong>de</strong> centrífuga graduados y<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61<br />
ExTRACTO CRUDO DE PERA DISTICHOPHYLLA CONTRA ACANTHAMOEBA CORNEAL<br />
estériles y se midió el volumen obtenido. Se tomó<br />
<strong>un</strong>a alícuota para observar la morfología y se<br />
realizó el recuento <strong>de</strong> las amibas. Posteriormente,<br />
se realizó <strong>un</strong> lavado con medio <strong>de</strong> cultivo líquido,<br />
se centrifugó a 150 g y se eliminó el <strong>sobre</strong>nadante,<br />
para <strong>de</strong>tener el efecto <strong>de</strong> los extractos y <strong>de</strong>l DMSO.<br />
Estos bioensayos se <strong>de</strong>tallan a continuación:<br />
1.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong> la<br />
morfología <strong>de</strong> Acanthamoeba spp<br />
La morfología <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> fue estudiada cualitativa<br />
y morfométricamente. Los criterios que <strong>de</strong>finen<br />
el efecto <strong>sobre</strong> la morfología <strong>de</strong>scrita al microscopio<br />
<strong>de</strong> luz con 400 aumentos son: modificaciones<br />
en el tamaño y forma <strong>de</strong> los trofozoítos y quistes,<br />
cambios en el aspecto <strong>de</strong>l citoplasma respecto a<br />
vacuolas digestivas y/o contráctiles, al compararlo<br />
con la morfología característica <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> antes <strong>de</strong><br />
ser expuesto al Ec.<br />
2.- Evaluación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong> la<br />
viabilidad <strong>de</strong> los trofozoítos y quistes <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp<br />
La viabilidad <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> se evaluó posterior<br />
al contacto con el Ec, utilizando el método <strong>de</strong><br />
exclusión <strong>de</strong> dos colorantes supravitales: Azul <strong>de</strong><br />
Tripano 0,4% y Rojo Congo 0,4 % y fue reportada<br />
en porcentaje (%) <strong>de</strong> células vivas (Jiménez, 2003).<br />
Las observaciones se realizaron en <strong>un</strong> microscopio<br />
óptico (Olympus), con objetivo <strong>de</strong> 10x y 40x,<br />
consi<strong>de</strong>rando el número <strong>de</strong> células vivas entre 100<br />
células totales contadas. El % <strong>de</strong> viabilidad celular<br />
se calculó, según la siguiente fórmula:<br />
% Viabilidad celular = N° células vivas x 100<br />
Total <strong>de</strong> células<br />
3.- Evaluación <strong>de</strong> la capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong><br />
los trofozoítos y quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp<br />
La evaluación <strong>de</strong> la capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec <strong>sobre</strong><br />
el <strong>aislado</strong> se realizó mediante el recuento <strong>de</strong><br />
amibas antes y <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l contacto <strong>de</strong> las mismas<br />
con el extracto. Se colocó <strong>un</strong> inóculo inicial y posteriormente,<br />
al concluir cada tiempo <strong>de</strong> incubación<br />
<strong>de</strong> las amibas con las concentraciones <strong>de</strong>l Ec, se<br />
recogió el volumen <strong>de</strong> cada <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los pozos por<br />
separado y se colocó <strong>un</strong>a gota <strong>de</strong> la suspensión en<br />
cámara <strong>de</strong> Neubauer para realizar el recuento final<br />
<strong>de</strong> las amibas. El porcentaje <strong>de</strong> lisis se calculó utilizando<br />
la siguiente fórmula:<br />
57
C. M. WAGNER et al.<br />
Porcentaje (%) <strong>de</strong> lisis= Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) iniciales - Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) finales x 100<br />
Nº <strong>de</strong> amibas (T y Q) iniciales<br />
T: trofozoítos<br />
Q: quistes<br />
58<br />
RESULTADOS Y DISCUSIóN<br />
El uso <strong>de</strong> productos naturales y/o sus <strong>de</strong>rivados<br />
en el tratamiento <strong>de</strong> pacientes con queratitis<br />
acantamibiana y ulceras corneales ha sido evaluado<br />
tanto in vitro (Polat et al., 2007a,b; 2008; My Chu,<br />
1998; Derda et al., 2004) como in vivo (Vural et<br />
al., 2007). De estos reportes, se <strong>de</strong>riva la necesidad<br />
<strong>de</strong> evaluar la susceptibilidad <strong>de</strong> cada especie <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba a los diferentes extractos <strong>de</strong> <strong>un</strong>a<br />
misma planta, ya que estudios previos con plantas<br />
<strong>de</strong> la familia Apocynaceae muestran que in vitro no<br />
poseen la misma actividad contra microorganismos<br />
similares. La disponibilidad <strong>de</strong> alg<strong>un</strong>os extractos <strong>de</strong><br />
la planta <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> y sus antece<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong><br />
actividad antiparasitaria ofrecieron la posibilidad<br />
<strong>de</strong> evaluar sus efectos in vitro <strong>sobre</strong> <strong>un</strong> <strong>aislado</strong><br />
<strong>de</strong> Acanthamoeba spp, A27, productor <strong>de</strong> úlcera<br />
corneal (L<strong>un</strong>a, 2003; Rodríguez et al., 2006).<br />
La morfología <strong>de</strong> los trofozoítos y quistes <strong>de</strong>l<br />
<strong>aislado</strong> A27 se observó al microscopio óptico<br />
a 400 aumentos, antes <strong>de</strong> ser expuesto al Ec. En<br />
los quistes se apreció <strong>un</strong>a doble pared quística,<br />
conformada por <strong>un</strong> exoquiste, mo<strong>de</strong>radamente<br />
ondulado y <strong>un</strong> endoquiste poliédrico o estrellado.<br />
Se <strong>de</strong>stacó <strong>un</strong> citoplasma granular y vacuolar, pero<br />
sin distinguirse el núcleo. Cuando se realizaron las<br />
medidas <strong>de</strong> los mismos, presentaron <strong>un</strong> diámetro<br />
entre 12,5 y 20 µm, con <strong>un</strong> tamaño promedio <strong>de</strong> 16<br />
µm (Figura 1).<br />
Los trofozoítos mostraron <strong>un</strong>a movilización<br />
lenta, a través <strong>de</strong> la emisión <strong>de</strong> <strong>un</strong>o o dos pseudópodos<br />
hialinos, con ab<strong>un</strong>dantes acantopodios a lo largo <strong>de</strong><br />
toda la célula. El endoplasma se observó granular,<br />
con <strong>un</strong>a o dos vacuolas contráctiles. Las medidas<br />
oscilaron entre 17,5 y 37,7 µm, teniendo <strong>un</strong> valor<br />
medio <strong>de</strong> 27 µm (Figura 2), concordando estas<br />
<strong>de</strong>scripciones <strong>de</strong> trofozoítos y quistes <strong>de</strong>l género<br />
Acanthamoeba con las hechas por otros autores<br />
(Rondanelli y Scala, 1987).<br />
Después <strong>de</strong> haber sido expuestos al efecto <strong>de</strong>l<br />
Ec a concentraciones <strong>de</strong> 1 y 10 mg/ml, se realizó la<br />
observación microscópica y micrometría para los<br />
quistes y trofozoítos. Los parámetros morfométri-<br />
Figura 1. Quistes <strong>de</strong> Acanthamoeba spp, <strong>aislado</strong> A27,<br />
antes <strong>de</strong> la exposición al extracto Ec <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
Examen directo en medio líquido <strong>de</strong> Page modificado.<br />
1.000 aumentos. Quiste con 4 p<strong>un</strong>tas, don<strong>de</strong> se evi<strong>de</strong>ncia<br />
ecto (a) y endoquiste (b), con poro u ostiolo (c) .<br />
cos <strong>de</strong> los trofozoítos y quistes se resumen en la<br />
Tabla 1. La morfología <strong>de</strong> los quistes no varió a<br />
ning<strong>un</strong>a <strong>de</strong> las dos concentraciones <strong>de</strong>l Ec evaluadas:<br />
ni en el control con el DMSO 3%. El tamaño<br />
y las características morfológicas <strong>de</strong> la pared y <strong>de</strong>l<br />
interior <strong>de</strong> los quistes variaron poco comparados<br />
con los quistes control y los expuestos al DMSO,<br />
<strong>de</strong>bido probablemente a la naturaleza quitinosa <strong>de</strong><br />
la pared quística, lo cual le confiere resistencia a la<br />
penetración <strong>de</strong>l Ec. Para complementar estas observaciones<br />
y al no <strong>de</strong>terminarse cambios morfológicos<br />
visibles en los quistes al microscopio óptico,<br />
se sugiere realizar estudios ultraestructurales, para<br />
<strong>de</strong>tectar si hay modificaciones en alg<strong>un</strong>o <strong>de</strong> los organelos<br />
celulares.<br />
Respecto a la morfometría <strong>de</strong> los trofozoítos,<br />
para todos los casos, se observó <strong>un</strong>a disminución<br />
en el tamaño, al ser comparados con el control sin<br />
exponer al tratamiento con Ec y DMSO. A<strong>de</strong>más,<br />
se observó redon<strong>de</strong>amiento <strong>de</strong> los mismos, lo cual<br />
se mantuvo a lo largo <strong>de</strong>l experimento, para la con-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
Figura 2. Trofozoíto <strong>de</strong> Acanthamoeba spp, <strong>aislado</strong> A27,<br />
antes <strong>de</strong> la exposición al extracto Ec <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>.<br />
Examen directo en medio liquido <strong>de</strong> Page modificado,<br />
1.000 aumentos. Se observa el ectoplasma (a)<br />
con escasos acantopodios (b) y endoplasma (c) Vacuola<br />
contráctil (d).<br />
centración <strong>de</strong> 1 mg/ml y para el control <strong>de</strong> DMSO<br />
3%, por lo tanto, se pue<strong>de</strong> consi<strong>de</strong>rar que el cambio<br />
<strong>de</strong> forma <strong>de</strong>l trofozoíto no es <strong>de</strong>bido al Ec evaluado<br />
a esa concentración, sino al efecto <strong>de</strong>l DMSO<br />
3%. Para la concentración <strong>de</strong> 10 mg/ml, los trofo-<br />
zoítos presentaron señales <strong>de</strong> <strong>de</strong>generación celular<br />
como múltiples vacuolas. A<strong>de</strong>más, se observó que<br />
a esta concentración pareciera se inhibió la capacidad<br />
<strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 para enquistarse, ya que en el<br />
grupo control sin extracto, se observaron quistes a<br />
las 48 horas, mientras que las amibas expuestas al<br />
extracto no presentaron quistes para ese tiempo <strong>de</strong><br />
estudio (Figura 3).<br />
Luego <strong>de</strong> la exposición <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong><br />
Acanthamoeba spp a las dos concentraciones <strong>de</strong>l<br />
Ec en todos los tiempos <strong>de</strong> exposición, se obtuvo<br />
quistes y trofozoítos 100% viables. Sin embargo,<br />
se <strong>de</strong>staca que para el recuento a la concentración<br />
<strong>de</strong> 10 mg/ml, el número <strong>de</strong> amibas fue inferior a<br />
100, por lo que se infiere que probablemente hubo<br />
lisis <strong>de</strong> los quistes y trofozoítos, comparados con<br />
el control <strong>de</strong> DMSO 3% y con el recuento para la<br />
concentración <strong>de</strong> Ec 1 mg/ml.<br />
La <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> la capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec<br />
presentó alg<strong>un</strong>os inconvenientes relacionados con<br />
la pigmentación intensa <strong>de</strong>l mismo, lo cual dificultó<br />
el recuento <strong>de</strong> las formas evolutivas, especialmente<br />
a la concentración <strong>de</strong> 10 mg/ml.<br />
La capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec a la concentración <strong>de</strong><br />
1 mg/ml a las 2 horas <strong>de</strong> exposición, fue <strong>de</strong> 37,5%,<br />
incrementando a medida que aumenta el tiempo <strong>de</strong><br />
exposición al extracto, ya que a las 24 y 48 horas<br />
fue superior a 80% y para las 96 horas <strong>de</strong> exposición<br />
fue <strong>de</strong> 89,5%, indicando estos resultados que<br />
la capacidad lítica <strong>de</strong>l Ec a la menor concentración<br />
Tabla 1. Medidas <strong>de</strong> los quistes y trofozoítos <strong>de</strong>l Aislado A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp.<br />
<strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber sido enfrentados al extracto crudo alcohólico (Ec) <strong>de</strong>P. <strong>distichophylla</strong><br />
Ec 1 mg/ml Ec 10 mg/ml Control DMSO 3%<br />
Quistes Trofozoítos Quistes Trofozoítos Quistes Trofozoítos<br />
15,0 30,0 15,0 15,0 15,0 10,0<br />
15,0 25,0 12,5 30,0 20,0 20,0<br />
17,5 15,0 15,0 12,5 20,0 25,0<br />
12,5 17,5 17,5 17,5 15,0 15,0<br />
15,0 15,0 15,0 10,0 12,5 15,0<br />
17,5 30,0 15,0 10,0 17,5 30,0<br />
15,0 25,0 17,5 12,5 15,0 37,5<br />
17,5 10,0 20,0 15,0 17,5 15,0<br />
15,0 15,0 12,5 15,0 15,0 15,0<br />
20,0 15,0 12,5 17,5 20,0 27,5<br />
x= 16 x= 20 x= 15,3 x= 15,5 x= 17 x= 18<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61<br />
ExTRACTO CRUDO DE PERA DISTICHOPHYLLA CONTRA ACANTHAMOEBA CORNEAL<br />
59
C. M. WAGNER et al.<br />
estudiada es tiempo <strong>de</strong>pendiente. Para la concentración<br />
<strong>de</strong> 10 mg/ml solo se calculó la capacidad lítica<br />
para las 24 horas <strong>de</strong> exposición, por las dificulta<strong>de</strong>s<br />
<strong>de</strong> observación ya mencionadas, la cual fue <strong>de</strong><br />
89,5%. Se pudiera inferir que la acción es dosis<br />
<strong>de</strong>pendiente para esta concentración. Para <strong>de</strong>terminar<br />
el posible uso terapéutico <strong>de</strong>l Ec, se requiere<br />
ampliar este diseño experimental probando otras<br />
concentraciones <strong>de</strong>l Ec y relacionando la capacidad<br />
lítica <strong>de</strong>l Ec y <strong>de</strong>l DMSO, previa solución <strong>de</strong> los<br />
problemas presentados en el recuento <strong>de</strong> las amibas<br />
por la pigmentación <strong>de</strong>l extracto Ec, empleando<br />
técnicas más específicas como el marcaje celular.<br />
Los ensayos preliminares <strong>de</strong>l extracto crudo<br />
alcohólico (Ec) <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong> <strong>sobre</strong> el<br />
<strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp permitieron<br />
<strong>de</strong>mostrar que a <strong>un</strong>a concentración <strong>de</strong> 10 mg/ml,<br />
el Ec produce redon<strong>de</strong>amiento y vacuolización<br />
<strong>de</strong>l citoplasma <strong>de</strong> los trofozoítos <strong>de</strong> la amiba, sin<br />
modificaciones en los quistes. El Ec inhibió el<br />
crecimiento <strong>de</strong>l <strong>aislado</strong> A27 <strong>de</strong> Acanthamoeba spp,<br />
a la concentración <strong>de</strong> 10 mg/ml y en menor grado a<br />
1 mg/ml, <strong>de</strong>bido probablemente a <strong>un</strong>a inhibición en<br />
el <strong>de</strong>senquistamiento y/o a <strong>un</strong>a lisis <strong>sobre</strong> los quistes<br />
y trofozoítos respectivamente. Debido a que el Ec <strong>de</strong><br />
P.<strong>distichophylla</strong>, mostró tener actividad <strong>sobre</strong> este<br />
<strong>aislado</strong>, se sugiere evaluar otras concentraciones <strong>de</strong>l<br />
Ec y otros extractos <strong>de</strong> esta planta <strong>sobre</strong> el mismo.<br />
60<br />
Figura 3. Trofozoítos <strong>de</strong> Acanthamoeba spp , <strong>aislado</strong> A27 (A y B), <strong>de</strong>spués <strong>de</strong><br />
la exposición al extracto Ec <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> <strong>distichophylla</strong>, 10 mg/ml. Examen directo<br />
en medio líquido <strong>de</strong> Page modificado, 1.000 aumentos. Se observa redon<strong>de</strong>amiento,<br />
vacuolización e inclusiones citoplasmáticas.<br />
REFERENCIAS<br />
1. BERMÚDEZ A, DIAZ O, PÉREZ MV, PÉREZ E.<br />
1993. Acanthamoeba en el Servicio <strong>de</strong> Oftalmología <strong>de</strong>l<br />
Hospital Universitario <strong>de</strong> Caracas. An. Inst. Barraquer<br />
(Barc). 94; 24: 63-68.<br />
2. CHINCHILLA M, CASTRO E, ALFARO M, PORTI-<br />
LLA E. 1979. Amebas <strong>de</strong> Vida Libre productoras <strong>de</strong><br />
Meningoencefalitis. Primeros Hallazgos en Costa Rica.<br />
Rev Lat-Amer Microbiol. 21: 135-142.<br />
3. DERDA M, HADAS E, THIEM B, SUŁEK A. 2004.<br />
Amebicidal plants extracts [Resumen]. Wiad Parazytol.<br />
50: 715-21.<br />
4. DÍAZ O, BERMÚDEZ A, PÉREZ MV, PÉREZ E.<br />
1993. Acanthamoeba en el Servicio <strong>de</strong> Oftalmología<br />
<strong>de</strong>l hospital Universitario <strong>de</strong> Caracas. Boletín INDIO<br />
(Ven). 10: 27-34.<br />
5. DRIBE W, STERN G, EPSTEIN RJ, VISVESVARA<br />
GS, ADI M, KOMADINA T. 1988. Acanthamoeba<br />
Keratitis. Potencial role for topical clotrimazole in<br />
combination chemoterapy. Arch Opthalmology. 106:<br />
1196-1201.<br />
6. JIMÉNEZ M. 2003. Estandarización <strong>de</strong> <strong>un</strong> protocolo<br />
<strong>de</strong> criopreservación para <strong>un</strong> <strong>aislado</strong> <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
spp. Trabajo especial <strong>de</strong> grado para optar por el título<br />
<strong>de</strong> Licenciada en Bioanálisis. Facultad <strong>de</strong> Medicina.<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
7. KILVINGTON S, LARKIN DF, WHITE DG, BEE-<br />
CHING JR. 1990 Laboratory Investigation of Acanthamoeba<br />
keratitis. J Clin Microbiol. 28: 2722-2725.<br />
8. LUNA D. 2003. Fitoquímica <strong>de</strong> <strong>Pera</strong> glabrata y <strong>Pera</strong><br />
distichopylla, Actividad Biológica [Tesis Doctoral].<br />
Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela, Facultad <strong>de</strong> Ciencias.<br />
9. MY CHU D, MILES H, TONEY D, NGYUEN C,<br />
MARCIANO-CABRAL F. 1998. Amebicidal activity<br />
of plant extracts from Southeast Asia on Acanthamoeba<br />
spp. Parasitol Res. 84: 746-752.<br />
10. PÉREZ DE GALINDO MV. 1995. Hallazgo <strong>de</strong> Acanthamoeba<br />
sp, Naegleria sp y otras amibas <strong>de</strong> vida libre<br />
en pacientes y portadores asintomáticos [Trabajo<br />
presentado ante la Facultad <strong>de</strong> Medicina, Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela, para optar al ascenso en el escalafón<br />
<strong>un</strong>iversitario a Profesor Agregado]. Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Escuela<br />
<strong>de</strong> Bioanálisis.<br />
11. POLAT ZA, TEPE B, VURAL A. 2007a. In vitro<br />
effectiveness of Thymus sipyleus subsp. sipyleus var.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
sipyleus on Acanthamoeba castellani and its cytotoxic<br />
potential on corneal cells. Parasitol Res. 101: 1551-<br />
1555.<br />
12. POLAT ZA, VURAL A, TEPE B, CETIN A. 2007b.<br />
In vitro amoebicidal activity of four Allium species on<br />
Acanthamoeba castellani and their cytotoxic potentials<br />
on corneal cells. Parasitol Res. 101: 397- 402.<br />
13. POLAT ZA, VURAL A, OZAN F, TEPE B, OZCELIC<br />
S, CETIN A. 2008. In vitro evaluation of the amoebicidal<br />
activity of garlic (Allium sativum) extract on Acanthamoeba<br />
castellani and its cytotoxic potentials on corneal<br />
cells [Resumen]. J Ocul Pharmacol Ther. 24: 8-14.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61<br />
ExTRACTO CRUDO DE PERA DISTICHOPHYLLA CONTRA ACANTHAMOEBA CORNEAL<br />
14. RODRÍGUEZ-ORTEGA M, LUNA D, CANÓNICO<br />
Y, CARVAJAL Z, MÉNDEZ J, BRICEÑO L. 2006.<br />
Extracts from <strong>Pera</strong> glabrata (Schott) and <strong>Pera</strong><br />
<strong>distichophylla</strong> with anti-parasite and antiviral activity.<br />
Ciencia. 14: 492-497.<br />
15. RONDANELLI EG, SCAGLIA M. 1987. Pathogenic<br />
Amphizoic Amoebae. Infectious Diseases. Edit. Piccin<br />
Nuova Libraria. Pardua. Italia; 59-91.<br />
16. VURAL A, POLAT ZA, TOPALKARA A, TOKER MI,<br />
ERDOGAN H, ARICI MK, et al. 2007. The effect of<br />
propolis in experimental Acanthamoeba keratitis. Clin<br />
Experiment Ophthalmol. 35: 749-754.<br />
61
Artículo Original<br />
62<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69<br />
Comparación <strong>de</strong>l efecto <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina e<br />
ivermectina <strong>sobre</strong> nematodos y la ganancia<br />
<strong>de</strong> peso en bovinos en Jalisco, México<br />
QUIROZ R. H. 1 , MATEOS R. A. 2 , GÓMEZ F. L. E. 2 , CRUZ M. I. 1 , ULLOA-ARVIZUR. 1<br />
1 Facultad <strong>de</strong> Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma <strong>de</strong> México, Av. Universidad 3000,<br />
México, D. F. 04510.<br />
2 Fort Dodge Animal Health, Sevilla 821, México, D.F.<br />
ABSTRACTS<br />
COMPARISON OF EFFECT OF MOXIDECTIN AND IVERMECTIN 0N NEMATODES AND<br />
THE WEIGHT GAIN IN BOVINES IN JALISCO, MEXICO<br />
With the aim to compare the effect of moxi<strong>de</strong>ctin and ivermectin,and levamisol on the reduction of<br />
gastrointestinal nemato<strong>de</strong> eggs elimination and the weight gain in calves in a warm climate. The field study<br />
was done in Jalisco, Mexico. Brahman naturally infected with gastrointestinal nemato<strong>de</strong>s (GIN) was used.<br />
Three groups of 30 bovines each, with homogeneous weight, without statistical difference between groups<br />
(P < 0.05) were integrated, individual fecal samples were collected on days 1, 75 and 150, and examined<br />
by McMaster technique, the individual weight was registered the same days, on day 1 the anthelmintic<br />
treatment was applied. Group 1 was treated with long-action moxi<strong>de</strong>ctin at 10 % (100 mg/1mL) in dose of<br />
1 mg/kg (1 mL/100kg) of weight by injection given subcutaneously. Group 2 was treated with ivermectin<br />
at 3.15 % (10 mg/1ml) at a dose of 0.2 mg/kg of weight by sc. via. The Group 3 or control was treated<br />
with levamisol at 12 % (120 mg/ml) at a dose of 6 mg/kg, by intramuscular via. In Group 1 the effect of<br />
moxi<strong>de</strong>ctin was 100 % at 75 and 150 days. In group 2, ivermectin fluctuated from 97.5 to 94.1 % on days<br />
75 to 150, respectively. In the Group 3 the effect of levamisol was 100 and 82.1% for the same days. In<br />
relation to the difference in weight gain between day 1 and 150, in Group 1 (moxi<strong>de</strong>ctin) it was 30.7 ±<br />
3.9 kg. Group 2 (ivermectin), 23.5 ± 4.0 kg. Group 3 (levamisol) or control, 25.8 ± 4.0 kg; there were no<br />
statistical difference between the three groups (P < 0.05). Numerically moxi<strong>de</strong>ctin was the best in efficacy<br />
and weight gain; nevertheless, it was not significantly different with the other groups at 150 days.<br />
Key words: Moxi<strong>de</strong>ctin, ivermectin, levamisol nemato<strong>de</strong>s, weigth gain, bovines.<br />
Recibido: 21 <strong>de</strong> Febrero <strong>de</strong> 2012. Aceptado: 23 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Héctor Quiroz Romero. Departamento <strong>de</strong> Parasitología, Facultad <strong>de</strong> Medicina Veterinaria y<br />
Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma <strong>de</strong> México, Av. Universidad 3000, cp 04510, México,<br />
D.F.
RESUMEN<br />
Con el objetivo <strong>de</strong> comparar el efecto <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina, ivermectina, y levamisol en la reducción <strong>de</strong><br />
eliminación <strong>de</strong> huevos <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales (NGI) y la diferencia en la ganancia <strong>de</strong> peso en<br />
bovinos localizados en Jalisco, México; se emplearon bovinos Brahma, infectados <strong>de</strong> manera natural con<br />
NGI. Se integraron tres grupos <strong>de</strong> 30 bovinos cada <strong>un</strong>o, homogéneos en el peso, sin que hubiera diferencia<br />
estadística entre los grupos (P < 0,05); se practicaron muestreos individuales <strong>de</strong> heces los días 1,75 y 150<br />
y se examinaron por la técnica <strong>de</strong> McMaster, el registro <strong>de</strong> peso individual los mismos días, el día 1 fue el<br />
tratamiento antihelmíntico. El Grupo 1 fue tratado con moxi<strong>de</strong>ctina al 10% (100 mg/1 ml) en dosificaciones<br />
<strong>de</strong> 1 mg/kg <strong>de</strong> peso, vía subcutánea. El Grupo 2 fue <strong>de</strong>sparasitado con ivermectina al 3,15% (10 mg/1 mL)<br />
en dosificaciones <strong>de</strong> 0,2 mg /kg <strong>de</strong> peso, por vía subcutánea. El Grupo 3 o testigo fue tratado con levamisol al<br />
12% (120 mg/ml) en dosificaciones <strong>de</strong> 6 mg/kg vía intramuscular. En el Grupo1 el porcentaje <strong>de</strong> reducción<br />
<strong>de</strong> huevos fue <strong>de</strong>l 100% los dias 75 y 150. En el Grupo 2 fue 97,5 y 94,1%. En el Grupo 3, (testigo) fue<br />
<strong>de</strong> 100% y 82% respectivamente. En relación a la diferencia en la ganancia <strong>de</strong> peso entre el día 1 y 150,<br />
el Grupo 1 fue <strong>de</strong> 30,7 ± 3,9 kg, en el Grupo 2 <strong>de</strong> 23,5 ± 4,0 kg, y en el Grupo 3 o testigo <strong>de</strong> 25,8 ± 4,0,<br />
sin diferencia estadística significativa entre los tres grupos P < 0,05). Los géneros <strong>de</strong> NGI en los diferentes<br />
grupos fueron: Haemonchus Cooperia, Trichostrongylus, Chabertia, B<strong>un</strong>ostomum, Oesophagostomum, y<br />
Ostertagia. El porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> huevos a los 150 días en el Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) fue mejor que<br />
el Grupo 2 ivermectina y G3 testigo, sin embargo, en la ganancia <strong>de</strong> peso, no fue significativa entre los tres<br />
grupos.<br />
Palabras clave: Moxi<strong>de</strong>ctina, Ivermectina, Levamisol, Ganancia <strong>de</strong> peso, Bovinos.<br />
INTRODUCCIóN<br />
Las nematodosis gastrointestinales (NGI) en el<br />
ganado bovino, especialmente en animales jóvenes,<br />
representan <strong>un</strong> problema <strong>de</strong> gran importancia económica,<br />
ya que, reducen la ingesta <strong>de</strong> nutrientes,<br />
afectan la digestión y absorción <strong>de</strong> proteínas que<br />
ocasionan <strong>de</strong>ficiente conversión alimenticia, retardo<br />
en el crecimiento y enfermeda<strong>de</strong>s en becerros<br />
(Gibbs 1985).<br />
Las infecciones por NGI son particularmente<br />
importantes en becerros post-<strong>de</strong>stete, ya que ocasionan<br />
que en las hembras lleguen a la pubertad en<br />
más tiempo y en los machos afectan su crecimiento,<br />
alcanzando el peso para el mercado en más tiempo<br />
y con menor calidad <strong>de</strong> la carne obtenida.<br />
El efecto persistente <strong>de</strong> las lactonas macrocíclicas<br />
para mantener reducida la eliminación fecal <strong>de</strong><br />
huevos <strong>de</strong> NGI es <strong>de</strong> interés en el control y ha sido<br />
señalada por varios autores en ganado bovino, en<br />
clima templado (Williams et al., 1995; Williams<br />
et al., 1997) a<strong>de</strong>más otros autores reportan en<br />
clima cálido en ganado cebú (Meeus et al., 1997;<br />
Quiroz et al., 2003). Se informa que hay reducción<br />
<strong>de</strong> huevos <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales por<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69<br />
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO<br />
persistencia <strong>de</strong>l antihelmíntico hasta el día 42<br />
(Barger 2004). En el caso <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina se tiene<br />
<strong>un</strong>a nueva formulación <strong>de</strong> mayor concentración al<br />
10% y perfil farmacocinético diferente al <strong>de</strong> otras<br />
lactonas macrocíclicas, que provoca que se tenga<br />
efecto persistente contra NGI <strong>de</strong> hasta 150 días y<br />
pulmonares hasta por 120 días (Delay et al., 2003).<br />
El objetivo fue comparar el efecto persistente <strong>de</strong><br />
moxi<strong>de</strong>ctina al 10%, contra ivermectina al 1%, en<br />
el porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> huevos, los géneros<br />
<strong>de</strong> NGI involucrados y la diferencia en la ganancia<br />
<strong>de</strong> peso en becerros <strong>de</strong>stetados localizados en <strong>un</strong><br />
clima cálido en <strong>un</strong> periodo <strong>de</strong> 150 días.<br />
MATERIAL Y MÉTODOS<br />
zona <strong>de</strong> estudio: El estudio <strong>de</strong> campo se<br />
realizó en el rancho Tempizque, en el m<strong>un</strong>icipio<br />
<strong>de</strong> Etzatlán, Jalisco, México; está situado 1.390<br />
msnm; la precipitación pluvial anual es <strong>de</strong> 1.169<br />
mm; el mes con mayor lluvia es julio con 307,2<br />
mm, y <strong>de</strong> menor intensidad es febrero con 1,3 mm;<br />
la temperatura media anual es <strong>de</strong> 21,6 ºC, en enero<br />
con 17,2º C y j<strong>un</strong>io con 25,6º C (García 2004).<br />
63
R. H. QUIROZ et al.<br />
Productos experimentales: Se emplearon presentaciones<br />
comerciales <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina 10%*,<br />
ivermectina al 3,15%** y levamisol al 12%.***<br />
Animales: Se emplearon 90 becerros <strong>de</strong>stetados,<br />
<strong>de</strong> cruzas comerciales <strong>de</strong> cebú (Bos indicus),<br />
con pesos <strong>de</strong> 210 a 446 kg, infectados <strong>de</strong> manera<br />
natural con NGI con cuentas <strong>de</strong> huevos mínima<br />
<strong>de</strong> 50 hpg, sometidos a pastoreo en pastos nativos<br />
(Paspalum spp y Axonopus spp) y pasto estrella <strong>de</strong><br />
áfrica (Cynodon plectostachyus). El estudio se realizó<br />
en invierno-primavera, (diciembre a mayo) en<br />
<strong>un</strong> período <strong>de</strong> 150 días. El registro <strong>de</strong>l peso <strong>de</strong> los<br />
becerros se hizo en <strong>un</strong>a báscula mecánica el día 1,<br />
75 y 150 días postratamiento.<br />
Diseño experimental: Los grupos experimentales<br />
se conformaron al or<strong>de</strong>nar los pesos <strong>de</strong> los 90<br />
animales <strong>de</strong> menor a mayor, distribuyéndolos en<br />
cada grupo y siguiendo <strong>un</strong> esquema en forma <strong>de</strong><br />
S, <strong>de</strong> tal manera que los grupos tuvieran <strong>un</strong> promedio<br />
y rango <strong>de</strong> pesos similares. Se integraron tres<br />
grupos <strong>de</strong> 30 bovinos cada <strong>un</strong>o, homogéneos en el<br />
peso en pie, sin que hubiera diferencia estadística<br />
(P < 0,05), se practicaron muestreos individuales<br />
<strong>de</strong> heces los días 1, 75 y 150, el día 1 fue el tratamiento<br />
antihelmíntico y el registro <strong>de</strong> peso individual<br />
los días 1, 75 y 150.<br />
El Grupo 1 fue tratado con moxi<strong>de</strong>ctina al 10%<br />
(100 mg/1 ml) en dosis <strong>de</strong> 1 mg/kg <strong>de</strong> peso (1<br />
ml/100 kg <strong>de</strong> peso), por vía subcutánea en el primer<br />
tercio <strong>de</strong> la cara externa <strong>de</strong> la oreja.<br />
El Grupo 2 fue <strong>de</strong>sparasitado con ivermectina<br />
al 1% (10 mg/1 ml) a <strong>un</strong>a dosis <strong>de</strong> 0,2 mg/kg <strong>de</strong><br />
peso (1 ml/50 kg <strong>de</strong> peso), por vía subcutánea en la<br />
región escapular.<br />
El Grupo 3 fue el testigo y fue tratado con<br />
levamisol al 12% (120 mg/ml) en dosis <strong>de</strong> 6<br />
mg/kg, igual a 1 ml por 20 kg <strong>de</strong> peso, por vía<br />
intramuscular en la región <strong>de</strong> la grupa. Dicho grupo<br />
fue consi<strong>de</strong>rado el testigo, <strong>de</strong> acuerdo con Wood<br />
et al., (1995), y Vercruysse et al., (2001) quienes<br />
señalan que el grupo testigo pue<strong>de</strong> o no ser tratado<br />
con <strong>un</strong> antihelmíntico comercial, en este caso, el<br />
levamisol era el antihelmíntico empleado <strong>de</strong> rutina<br />
en el rancho.<br />
Procedimientos parasicológicos: Se hizo colecta<br />
individual <strong>de</strong> heces <strong>de</strong> los becerros en dos<br />
64<br />
ocasiones, las muestras fueron examinadas mediante<br />
la técnica modificada <strong>de</strong> McMaster (Hendrix<br />
1999). De las muestras <strong>de</strong> heces <strong>de</strong> los días<br />
1 y 150, se prepararon coprocultivos por grupos y<br />
por muestreo, con homogeneizados <strong>de</strong> cada grupo,<br />
aproximadamente 20 g, c/u, se incubaron a 27-30°<br />
C durante 12 días, <strong>un</strong>a vez <strong>de</strong>sarrollada la larva 3,<br />
se concentraron mediante la técnica <strong>de</strong> Baermann<br />
(Hendrix, 1999), se i<strong>de</strong>ntificaron por género (Niec<br />
1968; Hulinka, 1969) aproximadamente 100 larvas<br />
<strong>de</strong> cada cultivo y se obtuvo el porcentaje <strong>de</strong> cada<br />
<strong>un</strong>o <strong>de</strong> los géneros <strong>de</strong> los NGI presentes.<br />
Análisis estadístico: Para el análisis <strong>de</strong> la cantidad<br />
<strong>de</strong> huevos.<br />
Antes <strong>de</strong>l análisis estadístico, el conteo <strong>de</strong> huevos,<br />
se transformó a logaritmo (conteo +1) para estabilizar<br />
la varianza y normalizar los datos.<br />
Para precisar las diferencias <strong>de</strong>l promedio <strong>de</strong><br />
hpg entre grupos <strong>de</strong>l mismo muestreo se hizo <strong>un</strong><br />
análisis <strong>de</strong> varianza (ANOVA) y para comparar<br />
medias entre grupos se realizó la prueba <strong>de</strong> diferencia<br />
mínima significativa (Daniel, 2010; Gill<br />
1981).<br />
Para evaluar estadísticamente el porcentaje<br />
<strong>de</strong> muestras positivas se empleó la prueba <strong>de</strong> c 2 .<br />
Para conocer cuales tratamientos eran diferentes se<br />
realizó la prueba exacta <strong>de</strong> Fisher (Cleale, 2008).<br />
Cálculo <strong>de</strong> la actividad persistente <strong>de</strong> los<br />
antihelmínticos a través <strong>de</strong>l porcentaje <strong>de</strong> reducción.<br />
Para calcular el porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg<br />
por efecto <strong>de</strong> los tratamientos antihelmínticos se<br />
empleó la siguiente fórmula, consi<strong>de</strong>rando la media<br />
geométrica <strong>de</strong> hpg (Wood et al., 1995).<br />
Porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> huevos = [Te - Tx] x 100<br />
Te<br />
Don<strong>de</strong>: Te = Media geométrica <strong>de</strong> huevos por<br />
gramo <strong>de</strong> heces <strong>de</strong>l grupo testigo.<br />
Tx = media geométrica <strong>de</strong> huevos por gramo <strong>de</strong><br />
heces <strong>de</strong>l grupo tratado.<br />
Para evaluar la ganancia <strong>de</strong> peso.<br />
Se realizó <strong>un</strong> análisis <strong>de</strong> covarianza para ajustar<br />
por peso inicial <strong>de</strong> la prueba (Daniel, 2010).<br />
* Cy<strong>de</strong>ctin Onyx, marca registrada, Fort Dodge Animal Health, México.<br />
** Ivomec Gold, marca registrada por Merial, México.<br />
*** Parasitol, marca registrada por Confe<strong>de</strong>ración Nacional Gana<strong>de</strong>ra, maquilado por Laboratorio Andoci, México.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
Para precisar las diferencias <strong>de</strong>l promedio <strong>de</strong><br />
peso entre grupos <strong>de</strong>l mismo muestreo se hizo <strong>un</strong><br />
análisis <strong>de</strong> varianza (ANOVA) y para comparar<br />
medias entre grupos se realizó la prueba <strong>de</strong> diferencia<br />
mínima significativa (Daniel, 2010; Gill, 1981).<br />
En los análisis estadísticos <strong>de</strong>scritos anteriormente<br />
se empleó el programa SPSS, a <strong>un</strong> nivel significativo<br />
<strong>de</strong>l 95%.<br />
RESULTADOS<br />
El número <strong>de</strong> animales con heces rectales en el<br />
Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) varió durante el experimento<br />
<strong>de</strong> 30 a 29. La media geométrica <strong>de</strong> hpg el día 1 fue<br />
<strong>de</strong> 134,9 posteriormente fue <strong>de</strong> 0,0 a los 150 días,<br />
mientras que el rango <strong>de</strong> hpg el día 1 varió <strong>de</strong> 50<br />
a 850 Tabla 1. El porcentaje <strong>de</strong> reducción por el<br />
efecto persistente <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina fue <strong>de</strong>l 100% el<br />
día 75 y 150.<br />
En el Grupo 2 (ivermectina) el número <strong>de</strong><br />
animales con heces rectales fue <strong>de</strong> 28, la media<br />
geométrica <strong>de</strong> hpg fue <strong>de</strong> 56,0 el día 1, posteriormente<br />
osciló <strong>de</strong> 1,4 a 3,3 el día 150, el rango cambió<br />
<strong>de</strong> 0 a 850, Tabla 1, mientras que el porcentaje<br />
<strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg fue <strong>de</strong> 94,1% día 150<br />
En el Grupo 3, (testigo levamisol) el número<br />
<strong>de</strong> animales con heces rectales fue <strong>de</strong> 28, la media<br />
geométrica el día 1 fue <strong>de</strong> 21,9, mientras que el día<br />
150 fue d 3,9, el rango <strong>de</strong> hpg fue <strong>de</strong> 50 a 700,<br />
Tabla 2, mientras el porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg<br />
fue <strong>de</strong> 100 y 82,1% igualmente para los día 75 y<br />
150.<br />
El día 150 el porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg<br />
en el Grupo 1 fue <strong>de</strong> 100%, en el Grupo 2 fue <strong>de</strong><br />
31,1% con diferencia estadística entre éstos dos y el<br />
Grupo 1 (P < 0,05), Tabla 3.<br />
En relación a la diferencia en la ganancia <strong>de</strong><br />
Tabla 1. Media aritmética, error estándar, rango y media geométrica <strong>de</strong> huevos <strong>de</strong> nematodos<br />
gastrointestinales, tratados con moxi<strong>de</strong>ctina, ivermectina y levamisol<br />
Grupos Parámetros hpg día 1 hpg día 75 hpg día 150<br />
Grupo 1<br />
Media aritmética<br />
283,3<br />
0,0<br />
0,0<br />
n = 30<br />
± e.e.<br />
± 46,32<br />
Moxi<strong>de</strong>ctina Rango<br />
850 - 0<br />
0.0<br />
0.0<br />
Media geométrica<br />
134,9<br />
0,0<br />
0,0<br />
Grupo 2<br />
Media aritmética<br />
98,2<br />
30,3<br />
35,7<br />
n = 28<br />
± error estándar<br />
±15,5<br />
±14,1<br />
± 13,0<br />
ivermectina Rango<br />
850 - 0<br />
0 - 250<br />
0 - 250<br />
Media geométrica<br />
56,0<br />
1,4<br />
3,3<br />
Grupo 3<br />
Media aritmética<br />
135,7<br />
0,0<br />
37,5<br />
n = 28<br />
± e.e.<br />
± 32,7<br />
0,0<br />
± 13,2<br />
Levamisol<br />
Rango<br />
0 - 700<br />
0 - 0<br />
0 - 250<br />
(testigo)<br />
Media geométrica<br />
21,9<br />
0,0<br />
3.9<br />
Tabla 2. Porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> huevos <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales en bovinos tratados con<br />
moxi<strong>de</strong>ctina 10% e ivermectina 3,15%, calculada con la media aritmética y la geométrica <strong>de</strong> huevos por<br />
gramo <strong>de</strong> heces<br />
Grupos Día 1 Día 1 Día 75 Día 75 Día 150 Día 150<br />
MA MG MA MG MA MG<br />
G1<br />
Moxi<strong>de</strong>ctina<br />
0,0 0,0 100 100 100 100<br />
G 2<br />
Ivermectina<br />
0 0 69,1 97,5 63,6 94,1<br />
G3 (Testigo)<br />
Levamisol<br />
0 0 100 100 72,3 82,1<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69<br />
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO<br />
65
R. H. QUIROZ et al.<br />
peso el Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) entre el día 1 y 75<br />
fue <strong>de</strong> 17,9 ± 2,9 kg, mientras que en el período<br />
<strong>de</strong> 75 a 150 días, fue únicamente <strong>de</strong> 12,8 ± 3,8 kg,<br />
el total <strong>de</strong> la ganancia <strong>de</strong> peso <strong>de</strong>l día 1 al 150 fue<br />
<strong>de</strong> 30,7 ± 3,9 kg. En el Grupo 2 (ivermectina) la<br />
ganancia <strong>de</strong> peso <strong>de</strong>l día 1 al 75 fue <strong>de</strong> 17,0 ± 3,0,<br />
no obstante entre el día 75 y 150 la mencionada<br />
diferencia fue <strong>de</strong> 10,1 ± 3,8, mientras en el período<br />
1 a 150 días fue <strong>de</strong> 23,5 ± 4,0 kg. En el Grupo 3<br />
(levamisol) o testigo, la ganancia entre el día 1 y<br />
Tabla 3. Porcentaje <strong>de</strong> muestras positivas a huevos <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales en bovinos tratados con<br />
moxi<strong>de</strong>ctina 10%, ivermectina 3,15% y levamisol los días 1, 75 y 150<br />
Tratamiento Día 1 Día 75 Día 150<br />
Grupo1<br />
moxi<strong>de</strong>ctina<br />
90,0 a 0,0 b 0,0 b<br />
Grupo 2<br />
ivermectina<br />
89,3 a 17,9 a 32,1 a<br />
Grupo 3<br />
Levamisol (testigo)<br />
60,7 a 0,0 b 35,7 a<br />
Letras distintas indican diferencia estadística (P < 0,05).<br />
66<br />
75 fue <strong>de</strong> 17,3 ± 3,0, mientras que en el período <strong>de</strong><br />
75 a 150 días fue <strong>de</strong> 8,8 ± 3,8 y en el total <strong>de</strong>l día<br />
1 al 150 fue <strong>de</strong> 25,8 ± 4,0 kg, no hubo diferencia<br />
significativa entre los tres grupos, Tabla 4.<br />
El porcentaje <strong>de</strong> géneros <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales<br />
osciló en los diferentes grupos: Haemonchus<br />
<strong>de</strong> 35 a 42%, Cooperia <strong>de</strong> 38 a 28%, Trichostrongylus<br />
<strong>de</strong> 7 a 33%, Chabertia <strong>de</strong> 0 a 19%,<br />
B<strong>un</strong>ostomum <strong>de</strong> 0 a 4%, Oesophagostomum <strong>de</strong> 0 a<br />
3%, y Ostertagia <strong>de</strong> 0 a 2%, Tabla 5.<br />
Tabla 4. Pesos promedios <strong>de</strong> la diferencia <strong>de</strong> ganancia <strong>de</strong> peso por períodos,<br />
en bovinos tratados con tres antihelmínticos<br />
Tratamiento 1 - 75<br />
Período en días<br />
75 - 150 1 - 150<br />
Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) 17,9 ± 2,9 12,8 ± 3,7 30,7 ± 3,9<br />
Grupo 2 (ivermectina) 13,4 ± 3,0 10,1 ± 3,8 23,5 ± 4,0<br />
Grupo 3 testigo (levamisol)<br />
No hubo diferencia estadística.<br />
17,0 ± 3,0 8,8 ± 3,8 25,8 ± 4,0<br />
Tabla 5. Porcentajes <strong>de</strong> géneros <strong>de</strong> nematodos gastrointestinales obtenidos en coprocultivos <strong>de</strong> larva<br />
infectante (L3) en los tres grupos <strong>de</strong> bovinos<br />
Grupos G1 moxi<strong>de</strong>ctina G2 ivermectina G3 levamisol<br />
Porcentaje <strong>de</strong> géneros<br />
<strong>de</strong> nematodos<br />
% día 1 % día 150 % día 1 % día 150 % día 1 % día 150<br />
Haemonchus 35 40 42 38 40 35<br />
Trichostrongylus 7 8 12 33 8 21<br />
Chabertia 9 19 0 0 2 0<br />
B<strong>un</strong>ostomum 3 0 0 0 0 4<br />
Cooperia 36 30 38 29 38 36<br />
Oesophagostomum 10 3 0 12 2<br />
Ostertagia 0 0 0 0 0 2<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
DISCUSIóN<br />
El número <strong>de</strong> animales por grupo en el estudio<br />
varió <strong>de</strong> 28 a 30, a<strong>un</strong>que se inició con 30 hubo dos<br />
muertes y en alg<strong>un</strong>os casos no había heces rectales,<br />
sin embargo, se consi<strong>de</strong>ró el promedio. Alg<strong>un</strong>os<br />
autores recomiendan en estos estudios <strong>un</strong> mínimo<br />
<strong>de</strong> seis animales por grupo (Cleale et al., 2004),<br />
<strong>de</strong>bido a que el presente estudio fue <strong>de</strong> campo con<br />
infección natural con gran<strong>de</strong>s variaciones en el peso<br />
y la cantidad <strong>de</strong> hpg <strong>de</strong> NGI al inicio <strong>de</strong>l estudio,<br />
se consi<strong>de</strong>ró conveniente incrementar el número <strong>de</strong><br />
animales.<br />
Se consi<strong>de</strong>ró necesario incluir en los cuadros <strong>de</strong><br />
resultados <strong>de</strong> hpg la media geométrica y la aritmética,<br />
ya que alg<strong>un</strong>os autores Geu<strong>de</strong>n et al., (2004),<br />
recomiendan el empleo <strong>de</strong> la media geométrica, sin<br />
embargo, otros Entrocasso et al., (1996) presentan<br />
ambas medias, haciendo más comprensible el problema.<br />
Se señalan en estudios realizados en Argentina,<br />
Brasil y Colombia Soutello et al., 2003), para<br />
comparar la actividad persistente <strong>de</strong> ivermectina y<br />
moxi<strong>de</strong>ctina, contra nematodos gastrointestinales<br />
en ganado bovino, al inicio en dichos experimentos<br />
la media geométrica <strong>de</strong> hpg era <strong>de</strong> 230 a 400,<br />
situación que difiere <strong>de</strong> nuestro estudio en que las<br />
medias geométricas al inicio <strong>de</strong>l estudio oscilaron<br />
<strong>de</strong> 21,9 a 134,0, estas diferencias sugieren que<br />
se <strong>de</strong>be a que son distintas regiones geográficas<br />
y estaciones <strong>de</strong>l año, que <strong>de</strong>terminan entre otros<br />
factores las cargas parasitarias. En este estudio<br />
(diciembre mayo) la precipitación pluvial osciló<br />
<strong>de</strong> 1,3 mm en febrero a 23,3 mm en mayo (García,<br />
2004), situación que se interpreta que se reduce el<br />
<strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> las larvas en el pasto y por lo tanto, la<br />
re-infección es baja, sin embargo, en los tres grupos<br />
hubo reinfección el Grupo 2 (ivermectina) y al Grupo<br />
3 (levamisol) hubo re-infección <strong>de</strong> NGI con medias<br />
aritméticas <strong>de</strong> hpg <strong>de</strong> 35,7 y 37,5 respectivamente,<br />
así como porcentajes <strong>de</strong> muestras positivas a hpg<br />
<strong>de</strong> 32,1 y 35,7 que se pue<strong>de</strong>n consi<strong>de</strong>rar bajas, no<br />
obstante, se interpreta que en el Grupo 1 <strong>de</strong>bido al<br />
efecto persistente <strong>de</strong> la moxi<strong>de</strong>ctina, la reinfección<br />
medida a través <strong>de</strong> la eliminación fecal <strong>de</strong> huevos<br />
ningún animal eliminó 50 hpg, dada la sensibilidad<br />
<strong>de</strong> la técnica <strong>de</strong> McMaster, no obstante, en los<br />
coprocultivos realizados con más <strong>de</strong> 20 g <strong>de</strong> heces,<br />
hubo <strong>de</strong>sarrollo y recuperación <strong>de</strong> larvas 3 <strong>de</strong> NGI.<br />
Cleale, et al., (2004) señalan el efecto persis-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69<br />
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO<br />
tente <strong>de</strong> la moxi<strong>de</strong>ctina al 10%, larga duración, en<br />
inyección subcutánea en becerros en pastoreo en<br />
Arkansas, Idaho, Illinois y Wisconsin, EE.UU., la<br />
media geométrica <strong>de</strong> hpg al inicio <strong>de</strong> los experimento<br />
fue respectivamente <strong>de</strong> 82,5, 57,5, 25,6 y<br />
10,1, mientras que en nuestro estudio para el Grupo<br />
1 (moxi<strong>de</strong>ctina) la media geométrica fue <strong>de</strong> 134,9,<br />
situación que se interpreta que se <strong>de</strong>be a diferente<br />
condición geográfica y época <strong>de</strong>l año, no obstante,<br />
el porcentaje <strong>de</strong> reducción en parte por el efecto<br />
persistente <strong>de</strong> la moxi<strong>de</strong>ctina citada por esos autores<br />
fue <strong>de</strong> 99,7% a 94,1% a los 55-56 días, contra<br />
100% observada en nuestro estudio, esta diferencia<br />
se interpreta, que en parte se <strong>de</strong>be a la diferente región<br />
geográfica y manejo zootécnico <strong>de</strong> los animales.<br />
En EE.UU., Williams et al., (1999) realizaron<br />
varios estudios con moxi<strong>de</strong>ctina al 10% <strong>de</strong> larga acción<br />
en ganado bovino, ellos señalan que protege al<br />
ganado contra la re-infección en <strong>un</strong> período <strong>de</strong> 150<br />
días, situación que coinci<strong>de</strong> parcialmente con nuestro<br />
estudio, dado el comportamiento <strong>de</strong>l porcentaje<br />
<strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg <strong>de</strong>l 100% por la moxi<strong>de</strong>ctina<br />
en el Grupo 1, sin embargo, en los coprocultivos<br />
<strong>de</strong>l mencionado Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) hubo crecimiento<br />
<strong>de</strong> varios géneros <strong>de</strong> nematodos, como se ve<br />
en el cuadro 5, situación que sugiere que la cantidad<br />
<strong>de</strong> hpg <strong>de</strong>terminada en el día 150 por la técnica<br />
modificada <strong>de</strong> McMaster que tiene <strong>un</strong>a sensibilidad<br />
para <strong>de</strong>tectar menos <strong>de</strong> 50 hpg.<br />
Por otra parte, el presente estudio se realizó entre<br />
diciembre y mayo, temporada <strong>de</strong> “sequía” en<br />
Etzatlán, Jalisco, con precipitación pluvial en esos<br />
meses <strong>de</strong> 1,3 (enero) a 23 mm en mayo, en el Grupo<br />
3 (testigo) y tratado con levamisol que no tiene<br />
efecto persistente, la media geométrica <strong>de</strong> hpg al<br />
final <strong>de</strong>l estudio fue <strong>de</strong> 3,9 con 35,7 <strong>de</strong> muestras<br />
positivas a hpg, lo que <strong>de</strong>muestra que hay re-infección,<br />
mientras que en el Grupo 1 (moxi<strong>de</strong>ctina) no<br />
fue perceptible la cantidad <strong>de</strong> hpg, con la técnica <strong>de</strong><br />
McMaster interpretándose que el efecto persistente<br />
bajo esas condiciones es bueno, no obstante, en los<br />
coprocultivos hubo <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> larvas, interpretándose<br />
que fue <strong>de</strong>bido a que había menos <strong>de</strong> 50<br />
hpg.<br />
En áfrica Meeus et al., (1997) reportan en ganado<br />
<strong>de</strong> 1 a 2 años <strong>de</strong> razas cebuinas que el 90% <strong>de</strong><br />
las larvas <strong>de</strong> NGI i<strong>de</strong>ntificadas <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l tratamiento<br />
con ivermectina y moxi<strong>de</strong>ctina fue Cooperia,<br />
mientras que Haemonchus fue <strong>de</strong>l 7% y otros<br />
67
R. H. QUIROZ et al.<br />
géneros el resto. Nuestro estudio difiere ya que el<br />
porcentaje <strong>de</strong> Cooperia en los tres grupos fue <strong>de</strong><br />
35 a 42%, situación que probablemente se <strong>de</strong>be a<br />
diferencia epi<strong>de</strong>miológica <strong>de</strong> estas nematodosis entre<br />
Zambia y México. En ese estudio Meeus et al.,<br />
(1997), no encontraron diferencia significativa entre<br />
los grupos tratados con moxi<strong>de</strong>ctina e ivermectina,<br />
sin embargo, en nuestro estudio, interpretado<br />
a través <strong>de</strong>l porcentaje <strong>de</strong> muestras positivas a hpg<br />
<strong>de</strong> NGI si hubo diferencia a los 75 y 150 días.<br />
La eficacia profiláctica <strong>de</strong> moxi<strong>de</strong>ctina al 10%,<br />
fórmula <strong>de</strong> larga acción fue probada en Europa<br />
Geu<strong>de</strong>n et al., (2004), encontraron 100% <strong>de</strong> <strong>de</strong> reducción<br />
<strong>de</strong> hpg contra NGI hasta el día 56, permaneciendo<br />
arriba <strong>de</strong>l 90% durante los 168 días <strong>de</strong>l<br />
experimento, situación que coinci<strong>de</strong> parcialmente<br />
con nuestro estudio. Los mismos autores Geu<strong>de</strong>n<br />
et al., (2004) señalan como los principales géneros<br />
i<strong>de</strong>ntificados a Ostertagia, Cooperia y Trichostrongylus,<br />
no obstante, en nuestro estudio los géneros<br />
con mayor porcentaje fueron Haemonchus, Cooperia<br />
y Trichostrongylus, a<strong>un</strong>que estuvieron presentes<br />
en bajo porcentaje Chabertia, B<strong>un</strong>ostomum<br />
Oesophagostomum y Ostertagia, diferencia que se<br />
interpreta es <strong>de</strong>bido a las condiciones epi<strong>de</strong>miológicas<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong> clima cálido en Etzatlán, Jalisco, México,<br />
con <strong>un</strong>o templado húmedo en Bélgica.<br />
En relación a la diferencia en la ganancia <strong>de</strong> peso<br />
en <strong>un</strong> estudio realizado en Zambia, áfrica, Meeus<br />
et al., (1997) notifican que no hubo diferencia<br />
estadística en la ganancia <strong>de</strong> peso en becerros, entre<br />
los grupos tratados con moxi<strong>de</strong>ctina e ivermectina,<br />
el estudio se inició en febrero, principio <strong>de</strong> la<br />
temporada <strong>de</strong> lluvia, no obstante nuestro estudio se<br />
realizó en la temporada <strong>de</strong> sequía y tampoco hubo<br />
diferencia estadística.<br />
En conclusión se encontró que el porcentaje<br />
<strong>de</strong> reducción <strong>de</strong> hpg el día 75, <strong>de</strong>l Grupo 1<br />
(moxi<strong>de</strong>ctina) fue mayor al G2 (ivermectina)<br />
(P < 0,5), no así en el G3 (levamisol), mientras<br />
que el día 150 el porcentaje <strong>de</strong> reducción <strong>de</strong><br />
hpg <strong>de</strong>l G1 (moxi<strong>de</strong>ctina) fue mayor contra el<br />
Grupo 2 (ivermectina) y Grupo 3 (levamisol)<br />
(P < 0,05). En relación a la diferencia <strong>de</strong> peso<br />
se encontró diferencia numérica <strong>de</strong> 5 kg contra<br />
el testigo tratado con levamisol y 7 ks contra el<br />
grupo 2 tratado con ivermectina, no obstante<br />
no fue significativa. Los géneros <strong>de</strong> NGI más<br />
frecuentes fueron Haemonchus, Cooperia y<br />
Trichostrongylus.<br />
68<br />
REFERENCIAS<br />
1. BARGER I. 2004. Moxi<strong>de</strong>ctin the macrocíclic lactone<br />
preferer for the nemato<strong>de</strong>s control in sheep. Tech<br />
Review Fort Dodge Animal Health. 5:1-5.<br />
2. CLEALE RM, HART KB, HUTCHENS DE, JOHN-<br />
SON EG, PAUL, AJ, SMITH LL, TUCKER C, YA-<br />
ZWINSKI TA, DOSSIER ME, GRUBBS ST, WULS-<br />
TER-RADCLIFFE M, AMODIE DM. 2004. Effect<br />
of subcutaneous injection of a long action moxi<strong>de</strong>ctin<br />
formulation in grazing beef cattle on parasite fecal egg<br />
reduction and animal weight gain. Vet Parasitol 126:<br />
325-338.<br />
3. DANIEL WW. 2010. Bioestadística, base para el<br />
análisis <strong>de</strong> las ciencias <strong>de</strong> la salud. 1ª edición, editorial<br />
Limusa, México, D.F.<br />
4. DELAY R, STEBER W. Cy<strong>de</strong>ctin Moxi<strong>de</strong>ctin longaction<br />
injectable formulation providing exten<strong>de</strong>d protection<br />
for cattle against parasites. In: Proceeding of the<br />
19 th International Conference of the World Association<br />
for the Advancement of Veterinary Parasitology. 10-14<br />
august , 1997 New Orleans, USA. p 15-20.<br />
5. ENTROCASSO C, PARRA D, VOTTERO D, FARIAS<br />
M, URIBE LF RYAN WG. 1996. Comparison of the<br />
persistent activity of ivermectin, abamectin, doramectin<br />
and moxi<strong>de</strong>ctin in cattle. Vet Rec 138: 91-92.<br />
6. GARCÍA E. 2004. Modificaciones al sistema <strong>de</strong> Clasificación<br />
Climática <strong>de</strong> Köppen para adaptarlo a las condiciones<br />
<strong>de</strong> la República Mexicana. 5ª edición, Instituto<br />
<strong>de</strong> Geografía, Universidad Nacional Autónoma <strong>de</strong><br />
México, México, D. F.<br />
7. GEUDEN T, CLAREBOUT E, DEROOVER E, VER-<br />
CRUYSSE J. 2004. Evaluation of the chemoprophylactic<br />
efficacy of 10% long action injectable moxi<strong>de</strong>ctin<br />
against gastrointestinal nemato<strong>de</strong> infections in calves<br />
in Belgium. Vet Parasitol 120: 331-338.<br />
8. GIBBS CH. 1985. The effect gastrointestinal nemato<strong>de</strong>s<br />
on digestion and energy metabolism in calves.<br />
Proceeding of the MSD AGVET symposium, in association<br />
with the xxIII Veterinary Congress, Montreal,<br />
Québec, Canada, 45-48.<br />
9. GILL JL. 1981. Design and Analysis of Experimental<br />
in the Animal and Medical Science. 2 nd edition Vol 1,<br />
Iowa State University Press, Iowa, USA.<br />
10. HENDRIx CM. 1999. Diagnóstico Parasitológico<br />
Veterinario, Harcourt Brace, Madrid, España.<br />
11. HULINKá I. 1969. Die <strong>de</strong>terminationsmerkmale <strong>de</strong>r<br />
invasionslarven <strong>de</strong>i schafdarmhelminthen. Acta Sc Nat<br />
Brno 8: 1-35.<br />
12. MEEUS PFM, BONT JDE, VERCRUYSEE J, DE<br />
BONT J. 1997. Comparison of the persistent activity of<br />
ivermectin, abamectin, doramectin and moxi<strong>de</strong>ctin in<br />
cattle in Zambia. Vet Parasitol 70: 219-224.<br />
13. NIEC R. 1968. Cultivo e i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> larvas infectantes<br />
<strong>de</strong> nematodos gastrointestinales <strong>de</strong>l bovino y<br />
ovino. Instituto Nacional <strong>de</strong> Tecnología Agropecuaria,<br />
República Argentina.<br />
14. QUIROZ RH, IBARRA, VF, LIÉBANO HE, PÉREZ<br />
CJ, RAMOS ME, OCHOA GP. Effect of the weight gain<br />
and eggs elimination in calves with ivermectin. The 19 th<br />
International Conference of the World Association for<br />
the Advancement of Veterinary Parasitology, August<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
10-14, 2003, New Orleans, USA., p252.<br />
15. SOUTELLO RVG, AMARANTE AFT, ZOCOLLER-<br />
SENO MC. 2003. The prevalence of anthelmintic<br />
resístanse in nemato<strong>de</strong> parasites of cattle in Sao Paulo<br />
State, Brazil. The 19 th International Conference of the<br />
World Association for the Advancement of Veterinary<br />
Parasitology. August 10-14, 2003, New Orleans, USA,<br />
257.<br />
16. VERCRUYSSE J, HOLDSWORTH P, LETONJA T.<br />
BARTH D, CONDE G.; HAMAMOTO K, OKANO<br />
K. 2001. International harmonization of anthelmintic<br />
efficacy gui<strong>de</strong>lines. Vet Parasitol 90; 171-173.<br />
17. WILLIAMS JC, BROUSSARD, SD.1995. Persistent<br />
activity of ivermectin against gastrointestinal nemato<strong>de</strong>s<br />
in cattle. Am J Vet Res 56: 1169-1175.<br />
18. WILLIAMS JC, LOYACANO AF, DEROSA A, GU-<br />
RIE J, COOMBS DF, STOGERBOE TL. 1997. A comparison<br />
of the efficacy of two treatments of doramectin<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69<br />
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO<br />
injectable, ivermectin injectable, and ivermectin pouron<br />
against naturally acquired gastrointestinal nemato<strong>de</strong><br />
infection of cattle during a winter-spring grazing season.<br />
Vet Parasitol 72: 69-77.<br />
19. WILLIAMS JC, LOYACANO AF, DEROSA A, GU-<br />
RIE J, CLYMER BC, GUERINO F. 1999. A comparison<br />
of persistent anthelmintic efficacy of topical formulation<br />
of doramectin, ivermectin, eprinomectin and<br />
moxi<strong>de</strong>ctin against naturally acquired nemato<strong>de</strong> infections<br />
of beef calves. Vet Parasitol 85: 277-278.<br />
20. WOOD IB, AMARAL NK, BAIRDEN K, DUNCAN<br />
JL, KASSAI T, MALONE JB, PANKAVICH JA,<br />
REINECKE RK, SCOLOMBE O, TAYLOR SM,<br />
VERCRUYSSE J. 1995. World Association for the<br />
Advancement of Veterinary Parasitology (W.A.A.V.P.)<br />
second edition of gui<strong>de</strong>lines for evaluating the efficacy<br />
of anthelmintic in ruminants (bovine, ovine, caprine).<br />
Vet Parasitol 58: 181-213.<br />
69
Artículo Original<br />
70<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77<br />
Aspectos epi<strong>de</strong>miológicos da Theileriose equina e sua<br />
relação com o carrapato Rhipicephalus (Boophilus)<br />
microplus em duas proprieda<strong>de</strong>s na região da<br />
campanha do Rio Gran<strong>de</strong> do Sul - Brasil<br />
TORRES Al. J. 1 , FINGER I. S. 2 , FARIAS N. A. R. 3 , NIZOLI L. Q. 3 , SILVA S. S. 4 , e NOGUEIRA C. E. W. 3<br />
1 Mestre, Médico Veterinário autônomo, UFPel.<br />
2 Acadêmica, Medicina Veterinária, UFPel.<br />
3 Doutor. Professor. UFPel.<br />
4 Mestre. Professor. UFPel.<br />
ABSTRACT<br />
EPIDEMIOLOGICAL ASPECTS OF EQUINE THEILERIOSIS AND YOUR RELATIONSHIP<br />
WITH THE TICK RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS IN THE TWO FARMS<br />
LOCATED IN THE SOUTHERN RIO GRANDE DO SUL STATE<br />
The equine theileriosis is consi<strong>de</strong>red one of the major parasitic diseases in horses. It`s caused by<br />
infection with Theileria equi, naturally transmitted by ticks. The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus<br />
is the only fo<strong>un</strong>d in horses in the region and also cattle parasite. The objective of this study was to compare<br />
the inci<strong>de</strong>nce of the disease with the coexistence of cattle and horses with infestation of R. B. microplus.<br />
Used (n = 47) horses located in two different farms. In on this farm, 25 animals without contact with<br />
the cattle and the other farm, 22 animals, also created with direct contact with cattle. During one year,<br />
information was obtained as clinical signs of animals, serology equine. Theileriosis, tick infestation in<br />
these horses and climatic characteristics of the region. The positive sorology for equine theileriosis was<br />
40%, for horses do not contact with cattle and the positive serology was 90.9%, for horses that are in direct<br />
contact. Only fo<strong>un</strong>d Rhipicephalus (Boophilus) microplus in horses that are in direct contact with cattle.<br />
The importance of ticks in disease transmission its suggested that the horse represents an alternative for the<br />
tick R. B. microplus infestation occurs only when there is direct contact between horses and cattle, but also<br />
evi<strong>de</strong>nced the potential of Rhipicephalus B. microplus in the transmission of T equi in horses.<br />
Key words: Theileria equi, Direct Contact, prevalence.<br />
Recibido: 18 <strong>de</strong> Octubre <strong>de</strong> 2011. Aceptado 18 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Dr. Anibal Torres<br />
Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral <strong>de</strong> Pelotas (UFPel) - Campus Universitário, Caixa Postal 354 CEP 96010 900<br />
Pelotas, RS, Brasil.<br />
E-mail: anibaltorres@ig.com.br; ilusca-finger@hotmail.com
RESUMO<br />
A theileriose equina é consi<strong>de</strong>rada uma das principais doenças parasitárias em cavalos. É causada pela<br />
infecção <strong>de</strong> Theileria equi, transmitida naturalmente por carrapatos. O carrapato Rhipicephalus (Boophilus)<br />
microplus é o único encontrado em cavalos na região e que também parasita bovinos. O objetivo <strong>de</strong>ste<br />
trabalho foi relacionar a incidência da doença com a convivência dos equinos com bovinos e a infestação<br />
<strong>de</strong> carrapatos R. B. microplus nestes cavalos. Os equinos utilizados (n = 47) se localizavam em duas<br />
proprieda<strong>de</strong>s distintas. <strong>Em</strong> uma proprieda<strong>de</strong>, 25 animais criados a campo sem contato com bovinos e em<br />
outra proprieda<strong>de</strong>, 22 animais, também criados a campo com contato direto com bovinos. Durante um ano,<br />
foram obtidas informações como sinais clínicos dos animais, sorologia para theileriose equina, infestação<br />
por carrapatos nestes equinos e características climáticas da região. Os equinos que não convivem com<br />
bovinos apresentaram sorologia positiva para theileriose equina <strong>de</strong> 40%. Já para os equinos que estão em<br />
contato direto, a sorologia positiva foi <strong>de</strong> 90,9%. Somente foram encontrados carrapatos Rhipicephalus<br />
B. microplus nos equinos que são criados em conj<strong>un</strong>to com bovinos. Dessa forma, po<strong>de</strong>-se perceber a<br />
importância <strong>de</strong>ste carrapato na transmissão da doença. Sugere-se que o equino represente um hospe<strong>de</strong>iro<br />
alternativo para o carrapato Rhipicephalus B. microplus e que esta infestação ocorra apenas quando existe<br />
convívio direto entre equinos e bovinos, como também fica evi<strong>de</strong>nciado o potencial do R. B. microplus na<br />
transmissão <strong>de</strong> T. equi em equinos.<br />
Palabras clave: Theileria equi, contacto directo, prevalencia.<br />
INTRODUÇÃO<br />
A piroplasmose equina, atualmente reconhecida<br />
como theileriose e babesiose é consi<strong>de</strong>rada uma das<br />
principais doenças parasitárias em cavalos, com<br />
gran<strong>de</strong> impacto econômico na indústria equina. As<br />
perdas associadas a infecções por Theileria equi e<br />
Babesia caballi estão relacionadas tanto aos fatores<br />
clínicos como a restrição ao trânsito internacional<br />
<strong>de</strong> animais soropositivos. Os parasitas causam, em<br />
gran<strong>de</strong>s parasitemias, crises hemolíticas e anemia.<br />
Equinos cronicamente infectados são passíveis<br />
<strong>de</strong> reagudizações com queda no <strong>de</strong>sempenho<br />
(Knowles et al., 1980; Friedhoff, 1990).<br />
Esta hemoparasitose po<strong>de</strong> ser causada por dois<br />
protozoários distintos, T. equi e B. caballi que são<br />
transmitidas naturalmente por carrapatos. Os equí<strong>de</strong>os<br />
po<strong>de</strong>m ser parasitados por uma ou ambas as<br />
espécies. Os dois agentes são bastante distintos e<br />
<strong>de</strong>terminam manifestações diferentes da doença.<br />
B. caballi induz sintomatologia clínica muito mais<br />
branda em relação a T. equi (Ambawat,1992).<br />
Durante a fase crônica não há alteração significativa<br />
entre o hematócrito <strong>de</strong> equinos não infectados<br />
e <strong>de</strong> portadores <strong>de</strong> T. equi. Equinos com a<br />
doença crônica são consi<strong>de</strong>rados reservatório para<br />
a transmissão <strong>de</strong> T. equi. Uma vez infectados, os<br />
equinos se mantêm com a doença crônica por toda<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77<br />
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL<br />
a vida (Schein, 1988). Altas prevalências <strong>de</strong> T. equi<br />
têm sido associadas com a criação conj<strong>un</strong>ta <strong>de</strong><br />
equinos e bovinos (Kerber et al., 1999; Heuchert<br />
et al., 1999). Esta relação sugere que, pelo menos<br />
no Brasil, o Rhipicephalus (Boophilus) microplus,<br />
principal carrapato <strong>de</strong> bovinos e em muitas áreas<br />
o único encontrado também em equinos, <strong>de</strong>sempenha<br />
um papel importante na transmissão <strong>de</strong> T. Equi<br />
(Friedhoff 1988; Knowles et al., 1992).<br />
Os ácaros transmissores <strong>de</strong> Babesia e Theileria<br />
são parasitos para o homem e animais domésticos.<br />
Pertencem a sub-or<strong>de</strong>m Ixodi<strong>de</strong>s, a família Ixodidae<br />
aos gêneros Anocentor, Rhipicephalus, Hyaloma<br />
e Rhipicephalus Boophilus e são vulgarmente<br />
chamados <strong>de</strong> carrapatos (Amstrong, et al., 1998).<br />
Estudos <strong>sobre</strong> o comportamento <strong>de</strong> R. B. microplus<br />
em outros animais <strong>de</strong>monstram que o equino<br />
po<strong>de</strong> ser hospe<strong>de</strong>iro <strong>de</strong>ste carrapato, porém, não<br />
com a mesma eficiência que em bovinos. Após infestações<br />
artificiais <strong>de</strong> larvas <strong>de</strong>ste carrapato em<br />
equinos, não se obteve fêmeas ingurgitadas. Através<br />
<strong>de</strong> infestação natural do vetor em equinos, foi<br />
possível observar que o equino é um hospe<strong>de</strong>iro alternativo<br />
para R. B. microplus e que <strong>de</strong>senvolve até<br />
uma geração neste, po<strong>de</strong>ndo posteriormente terminar<br />
seu ciclo nos bovinos ( Bittencourt et al., 1990).<br />
Mason & Norval (1981) <strong>de</strong>monstraram que a<br />
larva e o macho adulto <strong>de</strong> R. B. microplus são ca-<br />
71
A. J. TORRES et al.<br />
pazes <strong>de</strong> trocar <strong>de</strong> um hospe<strong>de</strong>iro a outro em condições<br />
adversas. A alta motilida<strong>de</strong> dos machos e a sua<br />
consi<strong>de</strong>rável longevida<strong>de</strong> sugerem a possibilida<strong>de</strong><br />
<strong>de</strong>stes se transferirem <strong>de</strong> animais infectados a não<br />
infectados, um aspecto significante na epi<strong>de</strong>miologia<br />
da doença.<br />
O <strong>de</strong>senvolvimento do esporozoíto <strong>de</strong> T. equi<br />
na glândula salivar <strong>de</strong> fêmeas adultas <strong>de</strong> R. B.<br />
microplus, foi observado e a taxa <strong>de</strong> infecção nos<br />
carrapatos com T. equi foi <strong>de</strong> aproximadamente<br />
80%. Percebe-se que a transmissão da doença pelo<br />
hospe<strong>de</strong>iro ocorre ocasionalmente (Guimaraes et<br />
al., 1998a).<br />
Também foi <strong>de</strong>monstrado que o esporozoíto <strong>de</strong><br />
T. equi é capaz <strong>de</strong> completar seu <strong>de</strong>senvolvimento<br />
em R. B. microplus, o qual é capaz <strong>de</strong> transmitir o<br />
parasita <strong>de</strong> um hospe<strong>de</strong>iro a outro (Guimaraes et<br />
al., 1998b). O autor sugere, assim como Massaro<br />
(2005), que o R. B. microplus seja um vetor natural<br />
<strong>de</strong> T. Equi . .<br />
Este trabalho teve por objetivo avaliar a prevalência<br />
sorológica e sinais clínicos <strong>de</strong> Theileriose<br />
equina nos cavalos das raças, Crioula e PSI em<br />
duas proprieda<strong>de</strong>s na região da Campanha do Rio<br />
Gran<strong>de</strong> do Sul, com manejo <strong>de</strong> pastagem diferentes,<br />
relacionando-se a incidência com a infestação<br />
<strong>de</strong> carrapato R. B. microplus em equinos que convivem<br />
com bovinos diretamente e os que não tem<br />
esse convívio.<br />
72<br />
MATERIAIS E MÉTODOS<br />
O trabalho consistiu em um estudo transversal<br />
realizado em duas proprieda<strong>de</strong>s distintas na região<br />
da Campanha, sul do estado do Rio Gran<strong>de</strong> do<br />
Sul (m<strong>un</strong>icípios <strong>de</strong> Bagé e Dom Pedrito) <strong>de</strong><br />
outubro <strong>de</strong> 2007 a Setembro <strong>de</strong> 2008. A população<br />
alvo do projeto foi constituída <strong>de</strong> 47 equinos, na<br />
proprieda<strong>de</strong> 1 foram avaliados 25 cavalos da raça<br />
PSI criados em um haras, em sistema <strong>de</strong> criação<br />
sem a presença <strong>de</strong> bovinos, localizada a latitu<strong>de</strong><br />
30° 58’ 42’’ sul, longitu<strong>de</strong> 54° 06’ 20’’ oeste. Na<br />
proprieda<strong>de</strong> 2, foram avaliados 22 cavalos da raça<br />
Crioula, em sistema <strong>de</strong> criação concomitante com<br />
bovinos, criados em fazenda, localizada a latitu<strong>de</strong><br />
<strong>de</strong> 30° 58’ 42’’ sul, longitu<strong>de</strong> <strong>de</strong> 54° 40’ 18’’ oeste.<br />
As duas proprieda<strong>de</strong>s estão distantes 70 Km uma<br />
da outra em linha reta.<br />
Foram observados, no período do experimento,<br />
os índices pluviométricos, umida<strong>de</strong> relativa do ar<br />
e temperatura média durante o período na região.<br />
Os índices pluviométricos e <strong>de</strong> umida<strong>de</strong> relativa<br />
do ar no período foram comparados com as médias<br />
normais na região nos últimos <strong>de</strong>z anos.<br />
Os animais da proprieda<strong>de</strong> 1 foram mantidos<br />
em pastagem cultivada, rodízio <strong>de</strong> piquetes e roçadas<br />
frequentes. Os animais da proprieda<strong>de</strong> 2 foram<br />
mantidos em pastagens nativas, campos sujos<br />
com presença <strong>de</strong> vegetação arbustivas e invasoras,<br />
e pastagens cultivadas com manejo <strong>de</strong> rodízio conforme<br />
a disponibilida<strong>de</strong> <strong>de</strong> forrageiras.<br />
Estes animais foram i<strong>de</strong>ntificados pela resenha,<br />
marca, pelagem, nome e foto. Os animais da<br />
proprieda<strong>de</strong> 1 tinham um escore corporal entre 8-9<br />
(escala <strong>de</strong> 1 a 10), enquanto os da proprieda<strong>de</strong> 2, o<br />
escore corporal entre 6-7 (escala <strong>de</strong> 1 a 10, seg<strong>un</strong>do<br />
escala <strong>de</strong> Speirs, 1998). Os animais do experimento<br />
apresentaram média <strong>de</strong> 8 anos (ida<strong>de</strong> mínima =<br />
3; ida<strong>de</strong> máxima = 15; <strong>de</strong>svio padrão = 8,48) na<br />
proprieda<strong>de</strong> 1, e média <strong>de</strong> 12 anos (ida<strong>de</strong> mínima<br />
= 5; ida<strong>de</strong> máxima = 22; <strong>de</strong>svio padrão = 12,0) na<br />
proprieda<strong>de</strong> 2.<br />
Foram realizados exame clínico geral, uma vez<br />
ao mês em todos os animais, durante os doze meses<br />
do experimento, para <strong>de</strong>tecção dos sinais vitais e<br />
possíveis alterações clínicas. O exame clínico geral<br />
consistiu em coletar dados <strong>de</strong> frequência cardíaca<br />
(FC), frequência respiratória (FR), coloração <strong>de</strong><br />
mucosa oral e ocular, tempo <strong>de</strong> perfusão capilar,<br />
temperatura retal e movimentos intestinais.<br />
Trimestralmente foram obtidas amostras <strong>de</strong><br />
sangue através <strong>de</strong> p<strong>un</strong>ção venosa em tubos <strong>de</strong> 10<br />
mL sem anticoagulante, centrifugadas a 5.000 rpm<br />
para separação do soro, adicionadas em tubos específicos<br />
e estocados a -20 graus Celsius para a realização<br />
do exame sorológico <strong>de</strong> im<strong>un</strong>ofluorescência<br />
indireta para diagnóstico <strong>de</strong> theileriose equina. Estes<br />
exames sorológicos foram realizados pelo Laboratório<br />
<strong>de</strong> Doenças Parasitárias da Universida<strong>de</strong><br />
Fe<strong>de</strong>ral <strong>de</strong> Pelotas (UFPel) seg<strong>un</strong>do a técnica <strong>de</strong>scrita<br />
por C<strong>un</strong>ha et al., (1998). O hematócrito <strong>de</strong> todos<br />
os animais foram <strong>de</strong>terminados quando realizada<br />
a colheita <strong>de</strong> sangue. Nas duas proprieda<strong>de</strong>s não<br />
foram realizados banhos carrapaticidas, o controle<br />
parasitário com anti-helmínticos foram realizados a<br />
cada entrada <strong>de</strong> estação do ano, com alternância <strong>de</strong><br />
princípios ativos, sendo a ivermectina (0,2 mg/Kg)<br />
utilizada duas vezes ao ano.<br />
Foram avaliados a presença <strong>de</strong> carrapatos, utili-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
zando-se a anamnese com as pessoas que manejavam<br />
os equinos e inspeção e coleta dos carrapatos<br />
com um pente fino. Estas coletas foram realizadas<br />
uma vez ao mês durante os doze meses do experimento.<br />
Inicialmente foi realizado um exame visual<br />
para avaliar a possível infestação. Os equinos<br />
foram penteados na região maxilar, pescoço, peito,<br />
antebraços, região lombar, região corpórea lateral,<br />
ventre, flanco, garupa, períneo e entre as pernas. A<br />
região nasal, meato nasal, e orelhas foram inspecionadas<br />
visualmente para avaliar a presença <strong>de</strong>stes<br />
vetores. Todos os carrapatos encontrados foram<br />
coletados diretamente a um pote <strong>de</strong> f<strong>un</strong>do branco,<br />
armazenados com a i<strong>de</strong>ntificação do equino e a respectiva<br />
região corporal do animal em que foram<br />
encontrados.<br />
Os parasitos encontrados foram encaminhados<br />
ao Laboratório <strong>de</strong> Parasitologia Veterinária da<br />
UFPel para i<strong>de</strong>ntificação e classificação. Os instares<br />
foram separados por fase e por equino infestado.<br />
Nos carrapatos adultos foi coletada hemolinfa para<br />
análise direta <strong>de</strong> T. equi.<br />
Os dados foram avaliados estatisticamente<br />
adotando o nível <strong>de</strong> significância <strong>de</strong> 5%, utilizando<br />
o software Statistix 8.0 (2003).<br />
RESULTADOS<br />
No exame clínico, nenhum animal <strong>de</strong>monstrou<br />
mucosas amareladas, febre, apatia, emagrecimento,<br />
que pu<strong>de</strong>sse caracterizar sinal <strong>de</strong> theileriose aguda.<br />
Os animais das duas proprieda<strong>de</strong>s apresentaram a<br />
coloração <strong>de</strong> mucosas rósea pálida; tempo <strong>de</strong> perfusão<br />
capilar entre 1 e 3 seg<strong>un</strong>dos; sons e movimentos<br />
intestinais <strong>de</strong>ntro dos padrões fisiológicos e<br />
temperatura retal entre 37,5°C e 38,3°C.<br />
Foi observada diferença entre as médias obtidas<br />
para frequência respiratória entre os animais da<br />
diferentes proprieda<strong>de</strong>, <strong>de</strong>monstrando maior média<br />
nos animais da proprieda<strong>de</strong> 2. Os resultados obtidos<br />
para frequência cardíaca, frequência respiratória,<br />
hematócrito e número <strong>de</strong> hemácias esta apresentada<br />
na Tabela 1<br />
Na proprieda<strong>de</strong> em que os equinos não convivem<br />
diretamente com bovinos foi constatada a sorologia<br />
positiva para theileriose equina em 10 animais<br />
(40%). Na proprieda<strong>de</strong> em que há convívio<br />
direto com bovinos se observou sorologia positiva<br />
em 20 animais (90,9%). Não houveram alterações<br />
nos resultados durante as quatro coletas trimestrais,<br />
ou seja, os equinos que eram soropositivos se mantiveram<br />
positivos e os soronegativos se mantiveram<br />
negativos.<br />
Na proprieda<strong>de</strong> 1 não foram encontrados carrapatos<br />
nos animais em nenhum momento do experimento.<br />
Na proprieda<strong>de</strong> 2, sete animais (31,8%)<br />
estiveram infestação por carrapatos. Todos os carrapatos<br />
eram do gênero R. B.s microplus, e foram<br />
colhidos da região do peito (90%) e axilas (10%)<br />
dos equinos. O estágio <strong>de</strong> vida e a quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong><br />
carrapatos R. B. microplus na proprieda<strong>de</strong> 2, estão<br />
<strong>de</strong>monstrados na Figura 1. Dos carrapatos coletados,<br />
235 (93,25%) eram formas jovens como metalarvas,<br />
ninfas, metaninfas, neandros e neóginas, e<br />
apenas 17 (6,75%) eram formas adultas como gonandros<br />
e partenóginas.<br />
Os meses em que foram observados carrapatos<br />
foram os meses <strong>de</strong> <strong>de</strong>zembro <strong>de</strong> 2007, janeiro, março,<br />
abril, maio, j<strong>un</strong>ho e julho <strong>de</strong> 2008. Apenas em<br />
outubro e novembro, <strong>de</strong> 2007, e agosto e setembro<br />
<strong>de</strong> 2008 não foram observadas infestações nos<br />
equinos, conforme a Figura 2.<br />
Dos equinos da proprieda<strong>de</strong> 2, que tinham car-<br />
Tabela 1. Média ± <strong>de</strong>svio padrão, valores mínimos e máximos para frequência cardíaca, frequência<br />
respiratória, hematócrito e número <strong>de</strong> hemácias dos grupos.<br />
Proprieda<strong>de</strong> 1 Proprieda<strong>de</strong> 2<br />
Média Mín-Máx Média Mín-Máx<br />
FC (bpm) 44,76 ± 3,19ª 40,00 - 54,18 49,98 ± 4,58ª 42,00 - 60,00<br />
FR (mpm) 20,48 ± 2,97b 16,00 - 31,67 25,82 ± 5,70a 19,00 - 44,00<br />
Hematócrito (%) 45,62 ± 3.86ª 38,00 - 52,50 37,11 ± 5.48ª 28,50 - 52,67<br />
Hemácias (x10) 10,79 ± 1,37ª 7,48 - 12,77 8,02 ± 1,62a 6,05 - 12,9<br />
*Letras diferentes (a,b) na mesma linha significam (P < 0,05).<br />
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EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL<br />
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74<br />
Figura 1. Estágios <strong>de</strong> vida e quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong> carrapatos Rhipicephalus Boophilus microplus encontrados<br />
nos animais da proprieda<strong>de</strong> 2 (com a presença <strong>de</strong> bovinos) durante o período <strong>de</strong><br />
experimento.<br />
Figura 2. Relação do número <strong>de</strong> animais com carrapatos e o número <strong>de</strong> carrapatos encontrados<br />
durante o período <strong>de</strong> experimento.<br />
Figura 3. Chuvas e umida<strong>de</strong> relativa do ar no período <strong>de</strong> experimento.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
apatos, 100% apresentaram sorologia positiva<br />
para theileriose equina e os que não apresentaram<br />
carrapatos, 15 (66,67%) também eram soropositivos.<br />
A quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong> éguas parasitadas e a quantida<strong>de</strong><br />
<strong>de</strong> carrapatos colhidos durante os meses <strong>de</strong><br />
experimento estão na Figura 2.<br />
As chuvas no período foram relacionadas com<br />
a temperatura média durante o mesmo período,<br />
seg<strong>un</strong>do dados do INMET (Instituto Nacional <strong>de</strong><br />
Meteorologia). Foram observados altos índices<br />
pluviométricos em Outubro 2007 (170 mm), J<strong>un</strong>ho<br />
2008 (180 mm) e Agosto 2008 (180 mm). As<br />
médias da temperatura se mantiveram elevadas nos<br />
meses <strong>de</strong> Dezembro 2007, Janeiro 2008, Fevereiro<br />
2008 e Março 2008.<br />
As chuvas nos meses <strong>de</strong> experimento e a<br />
umida<strong>de</strong> relativa do ar nos dias <strong>de</strong> coleta durante<br />
o período foram relacionadas, seg<strong>un</strong>do dados do<br />
INMET e estão na Figura 3.<br />
DISCUSSÃO<br />
Neste estudo foram avaliados os resultados<br />
sorológicos <strong>de</strong> theileriose equina, através do método<br />
<strong>de</strong> Im<strong>un</strong>ofluorescência Indireta, em 47 equinos,<br />
sendo que 21 animais <strong>de</strong>monstraram positivida<strong>de</strong><br />
para T. equi. Os resultados sorológicos positivos<br />
para os equinos da raça PSI foram <strong>de</strong> 40%, este<br />
resultado assemelha-se ao obtido por Nizoli et<br />
al., (2008), que observaram incidência <strong>de</strong> 15,05%<br />
para esta enfermida<strong>de</strong> em equinos <strong>de</strong>sta mesma<br />
raça e mesma região do estudo. Para os animais<br />
da raça Crioula, obteve-se incidência <strong>de</strong> 90,9%,<br />
este resultado está diretamente relacionado com a<br />
presença dos carrapatos vetores na proprieda<strong>de</strong>, já<br />
que em 2008, foi obtido em animais da raça Crioula<br />
incidência <strong>de</strong> 55%.<br />
As variações <strong>de</strong> prevalência, relacionados <strong>de</strong><br />
acordo com os sistemas <strong>de</strong> criação, já foram <strong>de</strong>scritos<br />
por em diferentes regiões do Brasil, caracterizando<br />
que os equinos que trabalham e convivem<br />
com bovinos apresentaram as maiores prevalências<br />
(C<strong>un</strong>ha et al., 1996). Isto po<strong>de</strong> ser explicado pelas<br />
altas prevalências encontradas em equinos utilizados<br />
no manejo <strong>de</strong> bovinos e manutenção em campos<br />
consi<strong>de</strong>rados sujos e carrapateados (Kerber et<br />
al., 1999).<br />
Os animais positivos para theileriose equina<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77<br />
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL<br />
não <strong>de</strong>monstraram alterações no exame clínico,<br />
fato também observado em animais utilizados para<br />
o trabalho <strong>de</strong> campo, cronicamente positivos, os<br />
quais não apresentaram alterações significativas<br />
nos parâmetros clínicos (Torres et al., 2008). Isto<br />
po<strong>de</strong> ser explicado pois durante a fase crônica<br />
não há alteração significativa entre hematócrito<br />
<strong>de</strong> equinos não infectados e portadores <strong>de</strong> T. equi<br />
(Hailat et al., 1997).<br />
Na comparação entre animais positivos e<br />
negativos não se obteve diferença significativa na<br />
avaliação <strong>de</strong> hematócrito e número <strong>de</strong> hemácias (P<br />
< 0,05). O valor para o hematócrito dos animais<br />
positivos para a doença é inferior 12,2% em relação<br />
ao valor obtido para os animais negativos. Assim,<br />
a queda do hematócrito é um sensível indicador<br />
do inicio das alterações patológicas induzidas pelo<br />
parasito e que a ocorrência da parasitemia está<br />
diretamente relacionada com a queda nos valores<br />
do hematócrito. Porém, neste estudo não foram<br />
observados casos agudos, não havendo, portanto,<br />
oscilação nestes valores De Waal et al., 1988;<br />
Kutler et al., 1988).<br />
Os resultados do exame clínico realizado nos<br />
animais <strong>de</strong>ste estudo não tiveram relação com a<br />
infestação <strong>de</strong> carrapatos, com a <strong>de</strong>terminação do<br />
hematócrito nem com a sorologia positiva para a<br />
doença nos meses em que foram realizados exames<br />
<strong>de</strong> alg<strong>un</strong>s parâmetros do hemograma. Isto po<strong>de</strong><br />
ser atribuído a continua estimulação do sistema<br />
im<strong>un</strong>e pelos parasitos que persistem no organismo<br />
durante a fase crônica da enfermida<strong>de</strong>. Dessa<br />
forma, estes valores po<strong>de</strong>m estar relacionados a<br />
capacida<strong>de</strong> <strong>de</strong> adaptação do organismo frente as<br />
taxas <strong>de</strong> hematopoiese, hematócrito e hemoglobina<br />
circulante.<br />
A presença <strong>de</strong> carrapatos nos equinos da proprieda<strong>de</strong><br />
2 (31,8% das éguas), está relacionada a<br />
convivência dos equinos diretamente com os bovinos,<br />
hospe<strong>de</strong>iros preferenciais do R. B. microplus.<br />
Po<strong>de</strong>-se relacionar a presença <strong>de</strong> carrapatos<br />
nesta proprieda<strong>de</strong>, com os campos <strong>de</strong> pastagem<br />
naturais, os quais não são roçados com frequência,<br />
favorecendo a presença do vetor. A vegetação é<br />
f<strong>un</strong>damental no ciclo <strong>de</strong> vida do R. B. microplus,<br />
garantindo abrigo a teleóginas, ovos e larvas, protegendo-os<br />
da incidência solar direta e mantendo<br />
a temperatura e umida<strong>de</strong> relativa favoráveis, <strong>de</strong>sta<br />
forma, os campos sujos, com invasoras e arbustos,<br />
são excelentes para o carrapato e ocasionam altas<br />
75
A. J. TORRES et al.<br />
infestações. Estes fatores justificam a elevada incidência<br />
da doença (81,8%) nos equinos da proprieda<strong>de</strong><br />
que convivem diretamente com bovinos<br />
(Cardoso y Franchi, 1994).<br />
Somente a transmissão através <strong>de</strong> carrapatos é<br />
capaz <strong>de</strong> manter uma área endêmica. A taxa <strong>de</strong> prevalência<br />
<strong>de</strong> infecção por Theileria equi está diretamente<br />
relacionada com a epi<strong>de</strong>miologia dos carrapatos<br />
vetores na região (Knowles y Unisss-Floyd,<br />
1983). Estudos epi<strong>de</strong>miológicos realizados em vários<br />
estados brasileiros, <strong>de</strong>monstraram prevalências<br />
superiores as obtidas neste estudo, variando <strong>de</strong>s<strong>de</strong><br />
49,2% até 100% sob diferentes condições epi<strong>de</strong>miológicas,<br />
<strong>sobre</strong>tudo expostos a altas infestações<br />
por carrapatos ( Heuchert et al., 1999; C<strong>un</strong>ha et al.,<br />
1998).<br />
Neste estudo apenas sete animais (31,8%) da<br />
proprieda<strong>de</strong> com criação conj<strong>un</strong>ta com bovinos<br />
estavam infestados com carrapatos, caracterizando<br />
uma incidência baixa durante o ano <strong>de</strong> experimento<br />
(Figura 2), assim é possível reafirmar que o carrapato<br />
R. B. microplus seja um parasito alternativo para os<br />
equinos nestes locais da região da Campanha, assim<br />
como concluído no Rio <strong>de</strong> Janeiro e em São Paulo<br />
(Bittencourt et al., 1990; Labr<strong>un</strong>a et al., 2001).<br />
O período seco, <strong>de</strong> temperaturas e umida<strong>de</strong><br />
mais baixas, entre os meses <strong>de</strong> abril e setembro,<br />
prejudica o <strong>de</strong>senvolvimento da fase <strong>de</strong> vida livre,<br />
fazendo com que o ciclo se alongue (Furlong,<br />
1993). No presente estudo foram observadas chuvas<br />
acima da média na região, nos meses <strong>de</strong> j<strong>un</strong>ho/2008<br />
e agosto/2008, o que parece ter influenciado na<br />
reduzida infestação <strong>de</strong> carrapatos nos equinos<br />
pela quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong> água que encharcou os campos<br />
e prejudicou o <strong>de</strong>senvolvimento da fase <strong>de</strong> vida<br />
livre (González, 1975). Também foram observadas<br />
maiores infestações <strong>de</strong> carrapatos na Região Sul do<br />
país no intervalo entre os meses <strong>de</strong> janeiro a j<strong>un</strong>ho<br />
(Brumt, et al., 1987).<br />
Não foram encontradas teleóginas nos equinos<br />
<strong>de</strong>ste experimento, as formas adultas encontradas<br />
foram gonandros e partenóginas. Foi <strong>de</strong>monstrada<br />
a transmissão <strong>de</strong> T. equi via glândulas salivares<br />
<strong>de</strong> formas adultas <strong>de</strong> R. B. microplus, acreditase<br />
que partenóginas possam estar envolvidas na<br />
infecção. Assim como, equinos portadores crônicos<br />
transmitem T. equi para as ninfas (formas jovens).<br />
No presente estudo foram observados que 93,25%<br />
dos carrapatos encontrados eram formas jovens, o<br />
que po<strong>de</strong> indicar uma alta transmissão <strong>de</strong> T. equi<br />
76<br />
para estes carrapatos, mesmo que poucas formas<br />
adultas cheguem a parasitar os equinos e com<br />
isso possam transmitir a doença. Porém ainda são<br />
necessários maiores informações a este respeito<br />
(Massaro, 2005).<br />
Sugere-se que o equino represente um hospe<strong>de</strong>iro<br />
alternativo para o carrapato R. B. microplus<br />
e que esta infestação ocorra apenas quando existe<br />
convívio direto entre equinos e bovinos, como também<br />
fica evi<strong>de</strong>nciado o potencial do Rhipicephalus<br />
Boophilus microplus na transmissão <strong>de</strong> T. equi em<br />
equinos.<br />
REFERÊNCIAS<br />
1. AMBAWAT H K, MALHOTRA DV, KUMAR S,<br />
DHAR S. 1999. Erythrocyte associated haemato-biochemical<br />
changes in Babesia equi infection experimentally<br />
produced in donkeys. Vet Parasitol, 85: 319-324.<br />
2. ARMSTRONG PM, et al. 1998. Diversity of Babesia<br />
infecting <strong>de</strong>er ticks (Ixo<strong>de</strong>s dammini). Am. J. Trop.<br />
Med. Hyg. 58: 739-742.<br />
3. BITTENCOURT AJ, FONSECA AH, FACCINI JLH,<br />
BUENO BH, 1990. Comportamento do Boophilus<br />
microplus (Canestrini, 1887) (Acari) em infestações<br />
artificiais e naturais em diferentes hospe<strong>de</strong>iros.<br />
Arquivos da Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral Rural do Rio <strong>de</strong><br />
Janeiro, 13: 173-182, 1990.<br />
4. BRUM JGW, COSTA, PRP, RIBEIRO PB, GONZA-<br />
LES J.C. 1987. Flutuação sazonal <strong>de</strong> B. microplus<br />
(Canestrini, 1887) no m<strong>un</strong>icípio <strong>de</strong> Pelotas, RS. Arq<br />
Brasil Med Vet Zoot, Belo Horizonte, v.39, n.6, p.<br />
891-896.<br />
5. CARDOSO H, FRANCHI M. 1994. Garrapata:<br />
epi<strong>de</strong>miologia y control <strong>de</strong> Boophilus microplus. In:<br />
NARI, A.; FIEL, C. (Eds.) Enfermida<strong>de</strong>s parasitárias<br />
<strong>de</strong> importancia económica en bovinos. Montevi<strong>de</strong>o:<br />
Ed. Hemisferio Sur,. p. 369-407.<br />
6. CUNHA C W, SILVA SS, PIMENTEL C A, DAPPER E.<br />
1996. Avaliação da freqüência <strong>de</strong> eqüinos soropositivos<br />
a Babesia equi no Jóquei Clube <strong>de</strong> Pelotas e em dois<br />
haras da zona sul do Rio Gran<strong>de</strong> do Sul. Revista<br />
Brasileira <strong>de</strong> Parasitologia Veterinária, v.5, p. 119-122.<br />
7. CUNHA CW, SILVA SS, OSÓRIO BL, DUTRA C.<br />
L. 1998. Alterações hematológicas e sorológicas em<br />
eqüinos experimentalmente infectados com Babesia<br />
equi. Ciência Rural, v.28, p. 283-286, 1998.<br />
8. DE WAAL DT, VAN HEERDEN J, VAN DEN BERG<br />
SS, STEGMANN GF, POTGIETER FT.1988. Isolation<br />
of pure Babesia equi and Babesia caballi organisms in<br />
horses splenectomized from en<strong>de</strong>mic areas in South<br />
Africa. On<strong>de</strong>rstepoort J. Vet Res v.55, p. 33-35.<br />
9. FRIEDHOFF KT. 1988. Transmission of Babesia. In:<br />
Ristic M (ed) Babesiosis of domestic animals and man.<br />
CRC, Boca Raton, Fla, pp 23-52.<br />
10. FRIEDHOFF. 1990 FRIEDHOFF K T. 1990. Interaction<br />
between parasite and tick vector. Int J Parasitol; 20;<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
525-535.<br />
11. FURLONG J.1993. Controle do carrapato dos bovinos<br />
na região Su<strong>de</strong>ste do Brasil.Ca<strong>de</strong>rno Técnico da Esc.<br />
Veterinária UFMG, n.8, p. 49-61.<br />
12. GONZALES JC.1975. O controle dos carrapatos dos<br />
bovinos. Porto Alegre. Sulina,. 104 p.<br />
13. GUIMARÃES AM, LIMA JD, RIBEIRO MFB.1998a.<br />
Sporogony and experimental transmission of Babesia<br />
equi by Boophilus microplus. Parasitol. Res. 84, 323-<br />
327.<br />
14. GUIMARÃES AM, LIMA JD, RIBEIRO MFB,<br />
CAMARGOS ERS, BOZZI IA. 1998b. Ultrastructure<br />
of sporogony in Babesia equi in salivary glands of adult<br />
female Boophilus microplus ticks. Parasitol. Res. 84,<br />
69-74, 1998.<br />
15. HAILAT NQ, LAFI SQ, A1-DARRAJI AM, A1-ANI<br />
FK. 1997.Equine babesiosis associated with strenuous<br />
exercise: clinical and pathological studies in Jordan.<br />
Vet Parasitol. 69, 1-8. 1997.<br />
16. HEUCHERT. 1999. HEUCHERT CMS, GIULLI Jr V,<br />
ATHAIDE DF, BÖSE R, FRIEDHOFF KT. Seroepi<strong>de</strong>miologic<br />
studies on Babesia equi and Babesia caballi<br />
infections in Brazil. Vet Parasitol, v.85, p. 1-11, 1999.<br />
17. KERBER. 1999. KERBER CE, FERREIRA F,<br />
PEREIRA MC. Control of equine piroplasmosis in<br />
Brazil. On<strong>de</strong>rstepoort J. Vet Res, 1999; 66: 123-127.<br />
18. KNOWLES RC, UNISS-FLOYD R. 1983. Equine<br />
Piroplasmosis (Babesiosis) of the Babesia caballi type.<br />
Equine Pratice, v.5, n.3, p. 18-22.<br />
19. KNOWLES DP, LOWELL DP, KAPPMEYER S,<br />
STILLER D, HENNAGER SG, PERRYMAN LE.<br />
1992. Antibody to a recombinant merozoite protein<br />
epitope i<strong>de</strong>ntifies horses infected with Babesia equi. J<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77<br />
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL<br />
Clin Microbiol 30: 3122-3126, 1992.<br />
20. KNOWLES RC, HOURRIGAN JL, HOLBROOK AA.<br />
1980 Equine Piroplasmosis. Equine Pratice, 2; 10-14.<br />
21. KUTTLER KL, GOFF WL, GIPSON CA, BLACK-<br />
BURN BO. 1988. Serologic response of Babesia equiinfected<br />
horses as measured by complement-fixation<br />
and indirect fluorescent antibody tests. Vet Parasitol,<br />
.26: 199-205.<br />
22. LABRUNA MB, KERBER CE, FERREIRA F,<br />
FACCINI LH, WAAL DT, GENNARI S. 2001. Risk<br />
factors to tick infestations and their occurrence on<br />
horses in the state of São Paulo, Brazil. Vet Parasitol,<br />
97: 1-14.<br />
23. MASON CA, NORVAL R. 1981. Thetransfer of<br />
Boophilus microplus (Acarina:Ixodidae) from infested<br />
to <strong>un</strong>infested cattle <strong>un</strong><strong>de</strong>r eld conditions.Vet Parasitol<br />
8: 185-188.<br />
24. MASSARO WU. 2005. Babesia equi - Boophilus microplus<br />
interface:parasite gene expression and tickacquisition<br />
during the chronic phase of infection. Dissertation,<br />
Washington State University, maio.<br />
25. NIZOLI LQ, GOTZE MM, RODRÍGUEZ S, SILVA<br />
SWAYNE CE. 2008. Frequency of seropositive equines<br />
for Theileria equi in the Southern Rio Gran<strong>de</strong> do Sul<br />
State, Brazil. Parasitol Latinoamer. l63, (1-2-3-4): 46-<br />
50.<br />
26. SCHEIN E. 1988. Equine babesiosis. In: Ristic M (ed)<br />
Babesiosis of domestic animals and man. CRC Press,<br />
Boca Raton, Fla, 197-208.<br />
27. TORRES AJ, NIZOLI LQ, CORREA MN, SILVA SS,<br />
NOGUEIRA CEW. 2008. Efeitos do dipropionato <strong>de</strong><br />
imidocarb (Imizol ® ) no metabolismo <strong>de</strong> eqüinos com<br />
Babesiose crônica. A Hora Veterinária.<br />
77
Artículo Original<br />
78<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82<br />
Estudio comparativo <strong>de</strong> la eficacia terapéutica <strong>de</strong><br />
oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno, utilizados<br />
en el tratamiento <strong>de</strong> hemoparasitosis en equinos pura<br />
sangre <strong>de</strong> carrera<br />
MORALES A.¹ , ², VILLORIA D.², ROMERO N.³, MORALES G.³, KASSAR M.³, ARRIETA D.¹,<br />
y COMERMA S.¹<br />
¹ Departamento <strong>de</strong> Patología Veterinaria, Cátedra <strong>de</strong> Farmacología y Toxicología, Cátedra <strong>de</strong> Fisiología Facultad <strong>de</strong><br />
Ciencias Veterinarias Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
² División <strong>de</strong> Sanidad Animal Instituto Nacional <strong>de</strong> Hipódromos “La Rinconada” Caracas, Venezuela.<br />
³ Facultad <strong>de</strong> Farmacia Universidad Santa María .<br />
ABSTRACT<br />
COMPARATIVE STUDY OF THE THERAPEUTIC EFFICIENCY OF OXITETRACICLINE,<br />
IMIDOCARB AND DIMINAzENE, USED IN THE TREATMENT OF EQUINE<br />
THOROUGBREED HEMOPARASITES<br />
It presents a comparative study of the therapeutic efficacy of oxytetracycline, imidocarb and diminazene,<br />
used in the treatment of equine hemoparasitosis Thoroughbreds. We studied a total of 105 horses, Thoroughbreds,<br />
all <strong>un</strong><strong>de</strong>r 2 years old, during the quarantine period November to December 2011. They practice<br />
a clinical examination, blood samples were taken for a complete blood co<strong>un</strong>t and blood smear for disposal<br />
of taxon. They were then medicated with single dose intramuscular (IM) as follows diminazene 28 (3.5 mg/<br />
kg), Oxytetracycline 46 (10 mg/kg) and Imidocard 30 (2.4 mg/kg). At 07 days blood samples were taken<br />
for hematology and blood smears for the presence of taxon. A study was conducted Competitive ELISA<br />
for <strong>de</strong>tecting antibodies against Babesia caballi, Theileria equi and Trypanosoma evansi. The results were<br />
analyzed statistically. In conclusion, we observed a high prevalence of hemoparasitosis studied in horses.<br />
The diminazene, imidocarb oxytetracycline and are drugs of choice for treating infestations haematozoa<br />
and in all cases were effective. The best evi<strong>de</strong>nce diminazene clinical therapeutic response and less toxicity<br />
compared to other treatments oxytetracycline and imidocarb in horses studied.<br />
Key words: Diminazene, oxytetracycline, imidocarb, hemoparasites, equine.<br />
RESUMEN<br />
Se plantea <strong>un</strong> estudio comparativo <strong>de</strong> la eficacia terapéutica <strong>de</strong> oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno,<br />
Recibido: 3 <strong>de</strong> Marzo <strong>de</strong> 2012. Aceptado: 22 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Abelardo Morales<br />
<strong>Em</strong>ail: aamorales13@gmail.com
utilizados en el tratamiento <strong>de</strong> hemoparasitosis en equinos Pura Sangre <strong>de</strong> Carrera. Se estudiaron <strong>un</strong> total <strong>de</strong><br />
105 equinos, Pura Sangre <strong>de</strong> Carrera, todos <strong>de</strong> 2 años <strong>de</strong> edad, durante el periodo <strong>de</strong> cuarentena noviembrediciembre<br />
2011. Se practico <strong>un</strong> examen clínico, fueron tomadas muestras <strong>de</strong> sangre para <strong>un</strong> estudio<br />
hematológico y frotis sanguíneo para el <strong>de</strong>scarte <strong>de</strong> hematozoarios. Posteriormente fueron medicados con<br />
dosis única intramuscular (IM) <strong>de</strong> la siguiente manera Diminaceno 28 (3,5 mg/kg), Oxitetraciclina 46 (10<br />
mg/kg) e Imidocard 30 (2,4 mg/kg). A los 07 días fueron tomadas muestras <strong>de</strong> sangre para hematología<br />
completa y frotis sanguíneo para <strong>de</strong>terminar la presencia <strong>de</strong> hematozoarios. Se realizo <strong>un</strong> estudio <strong>de</strong> ELISA<br />
Competitivo para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> anticuerpos contra Babesia caballi, Theileria equi y Trypanosoma evansi.<br />
Los resultados fueron analizados estadísticamente. En conclusión se observo <strong>un</strong>a alta prevalencia <strong>de</strong><br />
hemoparasitosis en los equinos estudiados. El diminaceno, la oxitetraciclina y el imidocarb son fármacos<br />
<strong>de</strong> elección para el tratamiento <strong>de</strong> las infestaciones por hematozoarios y en todos los casos fueron efectivos.<br />
El diminaceno evi<strong>de</strong>ncia mejor respuesta terapéutica y clínica con menor grado <strong>de</strong> toxicidad con respecto<br />
a los otros tratamientos oxitetraciclina e imidocarb en los equinos estudiados.<br />
Palabras clave: Diminaceno, imidocarb, oxitetraciclina, hemoparasitos, equinos.<br />
INTRODUCCIóN<br />
El incremento global <strong>de</strong> la industria <strong>de</strong>l caballo<br />
representa <strong>un</strong>a fuente potencial para la diseminación<br />
<strong>de</strong> infectocontagiosas. Las enfermeda<strong>de</strong>s<br />
asociadas hematozoarios afectan drásticamente a<br />
los equinos. Los agentes etiológicos son Erlichia<br />
risticci, Erlichia equi, Theileria equi, Babesia caballi,<br />
Trypanosoma evansi, Trypanosoma equi. La<br />
piroplasmosis o babesiosis es <strong>un</strong>a enfermedad producida<br />
por protozoos Theileria equi y B. caballi,<br />
que afecta a los équidos ya que parasita a los glóbulos<br />
rojos en el tejidos sanguíneo y es transmitido<br />
por garrapatas <strong>de</strong>l genero Ixo<strong>de</strong>s. La distribución<br />
es m<strong>un</strong>dial. La presentación clínica varía <strong>de</strong>s<strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
cuadro hiperagudo, agudo y crónico (Jubb et al.,,<br />
1984; Donald 1996). La signología está caracterizada<br />
por fiebre, anorexia, congestión/hemorragia<br />
petequial e ictericia, hematuria, pelo hirsuto, emaciación,<br />
trombocitopenia, anemia, leucopenia, hemolisis<br />
e intolerancia al ejercicio (Jubb et al., 1984;<br />
Donald 1996). Las rickettsias E. risticci (Neorickettsia<br />
risttici), E. equi (Anaplasma phagocytophila)<br />
afectan específicamente a los monocitos y macrófagos<br />
<strong>de</strong>l tejido sanguíneo. Los signos clínicos<br />
fiebre, <strong>de</strong>presión, anorexia, hemorragia petequial,<br />
ictericia, trombocitopenia, anemia y leucopenia así<br />
como cuerpos <strong>de</strong> inclusión en alg<strong>un</strong>os casos pue<strong>de</strong><br />
conllevar a la muerte (Jubb et al., 1984; Donald<br />
1996). El T. evansi es <strong>un</strong> protozoario hemoflagelado<br />
asociado a vectores, <strong>de</strong> distribución m<strong>un</strong>dial, la<br />
signologia clínica se caracteriza por fiebre recurrente,<br />
linfa<strong>de</strong>nomegalia, e<strong>de</strong>ma, anemia, emaciación<br />
y mieloencefalomalacia, con consecuente muerte<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82<br />
EFICACIA DE TRES TRATAMIENTOS DE HEMOPARASITOSIS EQUINAS<br />
(Jubb et al., 1984; Donald 1996). La terapéutica<br />
para el tratamiento <strong>de</strong> las hemoparasitosis se basa<br />
en el uso <strong>de</strong> oxitetraciclina, diminaceno y sulfato<br />
<strong>de</strong> imidocard. La Oxitetraciclina es <strong>un</strong>a tetraciclinas<br />
capaz <strong>de</strong> inhibir la síntesis <strong>de</strong> proteínas <strong>de</strong> las<br />
bacterias al ligarse al ribosoma bacteriano 30S e<br />
impedir la llegada <strong>de</strong>l ARNt aminoaacíclico receptor<br />
(A) en el complejo ARNm - ribosoma (Botana<br />
et al., 2002). El Diminaceno <strong>un</strong>a amina aromática,<br />
actúa <strong>sobre</strong> las membranas citoplasmáticas y nucleares<br />
<strong>de</strong>l hemoparásito (Botana et al., 2002). El<br />
Imidocarb directamente <strong>sobre</strong> el parásito causando<br />
<strong>un</strong>a alteración en el número y el tamaño <strong>de</strong>l núcleo<br />
y en la morfología <strong>de</strong>l citoplasma (vacuolización,<br />
<strong>de</strong>generación <strong>de</strong>l espacio en el protoplasma <strong>de</strong> la<br />
célula, al cual se le atribuyen f<strong>un</strong>ciones digestivas y<br />
excretorias) (Botana et al., 2002). A<strong>de</strong>más previene<br />
la entrada <strong>de</strong> inositol en el eritrocito que contiene<br />
el parásito intracelular. En virtud <strong>de</strong> esta importante<br />
área se plantea <strong>un</strong> estudio comparativo <strong>de</strong> la eficacia<br />
terapéutica <strong>de</strong> oxitetraciclina, imidocarb y<br />
diminazeno, utilizados en el tratamiento <strong>de</strong> hemoparasitosis<br />
en equinos Pura Sangre <strong>de</strong> Carrera.<br />
MATERIALES Y MÉTODOS<br />
Se estudiaron <strong>un</strong> total <strong>de</strong> 105 equinos (Eqqus<br />
caballus), raza Pura Sangre <strong>de</strong> Carrera, todos <strong>de</strong><br />
2 años <strong>de</strong> edad, durante el período <strong>de</strong> cuarentena<br />
noviembre-diciembre 2011. Todos los ejemplares<br />
fueron evaluados mediante <strong>un</strong> examen clínico<br />
exhaustivo. Se tomaron muestras <strong>de</strong> sangre para<br />
<strong>un</strong> estudio hematológico y frotis sanguíneo para<br />
79
A. MORALES et al.<br />
el <strong>de</strong>scarte <strong>de</strong> hematozoarios (Banks 1996; Alujas<br />
y Constantino, 2002). Los equinos positivos a<br />
la presencia <strong>de</strong> hematozoarios fueron medicados<br />
con dosis única intramuscular (IM) <strong>de</strong> la siguiente<br />
manera Diminaceno 28 (3,5 mg/kg) (Pyroject 100<br />
ml); Oxitetraciclina 46 (10 mg/kg) (Oxitetraciclina<br />
Calox 50 mg/ml) e Imidocard 30 (2,4 mg/kg)<br />
(Imizol), y se mantuvo a <strong>un</strong> ejemplar negativo sin<br />
tratamiento. A los 07 días fueron tomadas muestras<br />
<strong>de</strong> sangre para hematología completa y frotis<br />
sanguíneo para <strong>de</strong>terminar la presencia <strong>de</strong> hematozoarios<br />
(Banks 1996; Alujas y Constantino, 2002).<br />
En los casos positivos post tratamiento se le aplico<br />
la misma terapéutica y se reevaluó a los 7 días. Se<br />
realizo <strong>un</strong> estudio <strong>de</strong> ELISA Competitivo para la<br />
<strong>de</strong>tección <strong>de</strong> anticuerpos contra B. caballi, Theileria<br />
equi y T. evansi (Katz et al., 2000). Se consi<strong>de</strong>ro<br />
Positivo (+) en los casos en los cuales los niveles <strong>de</strong><br />
anticuerpos fueron superiores > 40%. Los resultados<br />
fueron analizados estadísticamente mediante la<br />
Prueba <strong>de</strong> McNemar y <strong>de</strong> manera porcentual.<br />
80<br />
RESULTADOS<br />
Clínica: Los hallazgos clínicos evi<strong>de</strong>nciaron<br />
ictericia, fiebre, anorexia, <strong>de</strong>presión, pelo hirsuto<br />
en todos los casos estudiados. Sólo en 12/105 casos<br />
se observaron ectoparásitos (vectores), <strong>de</strong>l género<br />
Ixo<strong>de</strong>s.<br />
Laboratorio: Los resultados hematológicos<br />
evi<strong>de</strong>nciaron en promedio: hematíes: 9,16 mm³,<br />
hemoglobina: 11,2 g/dL, plaquetas: 230 mm³. Los<br />
leucocitos en promedio 6,05 mm³, neutrofilos 2,4<br />
mm³, linfocitos 2,0 mm³, eosinofilos 7 mm³, monocitos<br />
0,3 mm³. Los frotis sanguíneos permitieron la<br />
<strong>de</strong>tección <strong>de</strong> B. caballi 49 y T. equi 28/105 y Erlichia<br />
sp 11/105.<br />
Serología: Los resultados serológicos por ELI-<br />
SA competitivo permitieron la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> anticuerpos<br />
contra B. caballi y T. equi. y T. evansi en<br />
los equinos medicados con diminaceno promedio<br />
56%, oxitetraciclina promedio 64% y promedio<br />
71% imidocarb post-tratamiento. Todos los medicamentos<br />
fueron superiores al 40%.<br />
Estadística: Los resultados <strong>de</strong>l análisis estadístico<br />
se presentan en la Tabla 1.<br />
Los tratamientos fueron efectivos contra los<br />
hematozoarios <strong>de</strong>tectados en los equinos.<br />
DISCUSIóN<br />
Los resultados clínicos, hematológicos, frotis<br />
sanguíneo y <strong>de</strong> ELISA, confirmaron la presencia<br />
<strong>de</strong> hematozoarios específicamente: B. caballi<br />
51%, T. equi 29,80% y Erlichia sp 11,54%, en los<br />
equinos estudiados. Reportes previos señalan <strong>un</strong>a<br />
prevalencia <strong>de</strong> 13,1%, 7,8% en el Hipódromo “La<br />
Rinconada”, Caracas-Venezuela y en el Hipódromo<br />
De Valencia 18,5% (De Vera et al., 2006). Existen<br />
reportes en Venezuela en el estado Lara en la cual<br />
se consi<strong>de</strong>ra <strong>un</strong>a zona enzootica a piroplasmosis,<br />
(Mujica et al., 2011), a pesar <strong>de</strong> que este estudio fue<br />
realizado en Caracas-Venezuela, <strong>de</strong> manera similar<br />
se evi<strong>de</strong>ncio <strong>un</strong>a alta prevalencia en los caballos<br />
Tabla 1. Análisis estadístico prueba <strong>de</strong> McNemar <strong>de</strong> los equinos medicados con diminaceno,<br />
oxitetraciclina e imidocarb<br />
Después <strong>de</strong>l Tratamiento Total<br />
Antes <strong>de</strong>l Tratamiento<br />
- +<br />
- 94 4 98<br />
+ 6 1 7<br />
Total 100 5 105<br />
c 2 = ((94 - 1) - 1) 2 = 8464 = 86,37 calculado vs tabulado<br />
94 + 4 98<br />
gdl = 1<br />
p < 0,001 altamente significativo<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82
estudiados. En líneas generales todos equinos respondieron<br />
a la terapéutica sin embargo se observaron<br />
variaciones por tratamiento y no se observaron<br />
estadísticamente diferencias significativas por tratamiento.<br />
Con respecto a la medicación es necesario<br />
consi<strong>de</strong>rar que los efectos sec<strong>un</strong>darios fueron<br />
observados en los caballos tratados con Imidocarb,<br />
los mismos presentaron gastrotoxicidad, dolor abdominal<br />
e taquicardia, taquipnea, intranquilidad.<br />
El tratamiento con oxitetraciclina por el volumen<br />
<strong>de</strong>l medicamento evi<strong>de</strong>ncio miositis cervical. El<br />
diminaceno no mostro sintomatología clínica sec<strong>un</strong>daria.<br />
Existen varios medicamentos disponibles<br />
para el tratamiento <strong>de</strong> la piroplasmosis equina. El<br />
diminazeno diaceturate es eficaz en el quimioesterilizacion<br />
<strong>de</strong> B. caballi y en la eliminación <strong>de</strong> los<br />
sígnos clínicos en las infecciones por B. equi (Brüning,<br />
1996). Fármacos tales como Antitheilericida<br />
buparvaquone han <strong>de</strong>mostrado ser eficaces en la lucha<br />
contra la enfermedad <strong>de</strong>bida a B. equi y pue<strong>de</strong><br />
en combinación con imidocarb eliminar el parásito<br />
(Brüning, 1996). El control <strong>de</strong> la piroplasmosis<br />
equina <strong>de</strong>be incluir el control <strong>de</strong> garrapatas eficaz,<br />
seromonitoring <strong>de</strong> los animales y la aplicación <strong>de</strong><br />
la quimioterapia. El control <strong>de</strong> las infecciones con<br />
estos protozoos se ve obstaculizada por la falta <strong>de</strong><br />
<strong>un</strong> fármaco a<strong>de</strong>cuado antiprotozoario y <strong>un</strong>a prueba<br />
serológica fiable (Friedhoff et al., 1990). No hay<br />
vac<strong>un</strong>a disponible. E. risticii (el agente causal <strong>de</strong> la<br />
fiebre <strong>de</strong>l caballo Potomac) y E. equi rickettsias son<br />
parásitos que son difíciles <strong>de</strong> controlar (Friedhoff et<br />
al., 1990). El diagnóstico precoz se requiere para la<br />
terapia <strong>de</strong> tetraciclina para ser eficaz y hay <strong>un</strong>a necesidad<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong>a prueba rápida para proporcionar <strong>un</strong><br />
diagnóstico precoz (Friedhoff et al., 1990). El imidocarb<br />
pue<strong>de</strong> no ser capaz <strong>de</strong> eliminar las infecciones<br />
por B. caballi y T. equi a partir <strong>de</strong> portadores sanos<br />
(Butler et al., 2008). En <strong>un</strong> estudio se examinaron<br />
en 6 caballos sanos tras 4 dosis intramusculares<br />
<strong>de</strong> 4 mg/kg administrada dipropionato imidocarb<br />
cada 72 horas. Este régimen <strong>de</strong> tratamiento ha sido<br />
reportado para esterilizar experimentales <strong>de</strong> B. equi<br />
en caballos <strong>de</strong> infecciones y pue<strong>de</strong> tener <strong>un</strong> valor en<br />
la prevención <strong>de</strong> la propagación <strong>de</strong> esta enfermedad<br />
en la exportación <strong>de</strong> caballos <strong>de</strong> transporte posibles<br />
para países no endémicos, se concluyó que este régimen<br />
<strong>de</strong> tratamiento no tuvo ningún efecto <strong>de</strong>letéreo<br />
clínicamente <strong>de</strong>tectable en la f<strong>un</strong>ción hepática<br />
en caballos sanos. Los cambios en la orina GGT:<br />
ratios <strong>de</strong> creatinina en orina observados en este es-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82<br />
EFICACIA DE TRES TRATAMIENTOS DE HEMOPARASITOSIS EQUINAS<br />
tudio también aporta datos <strong>sobre</strong> el valor <strong>de</strong> este<br />
ratio para la <strong>de</strong>tección precoz <strong>de</strong> la toxicidad renal,<br />
tras la exposición a agentes nefrotóxicos (Meyer et<br />
al., 2005). En <strong>un</strong> estudio para <strong>de</strong>mostrar la el efecto<br />
<strong>de</strong>l ejercicio intenso y la babesiosis evi<strong>de</strong>ncio<br />
en el examen post-mortem ictericia, hepatomegalia<br />
y la vejiga llena con la orina <strong>de</strong> color rojo oscuro<br />
(Friedhoff et al., 1990). El examen histopatológico<br />
<strong>de</strong>l hígado evi<strong>de</strong>ncio <strong>de</strong>generación y necrosis<br />
centrolobulillar masiva. Los canalículos biliares y<br />
los conductos biliares eran prominentes y <strong>de</strong> color<br />
marrón oscuro con pigmentos biliares <strong>de</strong> color<br />
amarillo (Friedhoff et al., 1990). Los pulmones tenían<br />
congestión, e<strong>de</strong>ma y trombosis <strong>de</strong> las venas<br />
pulmonares (Friedhoff et al., 1990). Los resultados<br />
sugieren que los caballos presentaron las mismas<br />
manifestaciones clínicas <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l ejercicio Los<br />
hallazgos clínicos, hematológicos y patológicos indican<br />
que los animales sufren <strong>de</strong> anemia hemolítica<br />
y que respondieron a la terapia imidocarb (Friedhoff<br />
et al., 1990). La vigilancia emergente radica<br />
en el hecho <strong>de</strong> que la enfermedad persiste en su patogénesis.<br />
La persistencia <strong>de</strong>l patógeno es la habilidad<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong> organismo infeccioso <strong>de</strong> permanecer por<br />
largo tiempo en el hospe<strong>de</strong>ro, incluso <strong>de</strong> por vida,<br />
en la ausencia <strong>de</strong> signos clínicos pero bajo condiciones<br />
<strong>de</strong> estrés e inm<strong>un</strong>osupresión se exacerba y<br />
produce sintomatología clínica. Actualmente las<br />
normas aprobadas para las autorida<strong>de</strong>s fe<strong>de</strong>rales y<br />
estatales <strong>de</strong> los Estados Unidos, para equinos diagnosticados<br />
como reactores positivos a la PE en el<br />
territorio <strong>de</strong> la Unión Americana son la cuarentena<br />
perpetua o el sacrificio mediante eutanasia (USDA<br />
2009).<br />
En conclusión se observo <strong>un</strong>a alta prevalencia<br />
<strong>de</strong> hemoparasitosis en los equinos estudiados. El<br />
diminaceno, la oxitetraciclina y el imidocarb son<br />
fármacos <strong>de</strong> elección para el tratamiento <strong>de</strong> las<br />
infestaciones por hematozoarios y en todos los<br />
casos fueron efectivos. El diminaceno evi<strong>de</strong>ncia<br />
mejor respuesta terapéutica y clínica con menor<br />
grado <strong>de</strong> toxicidad con respecto a los otros<br />
tratamientos oxitetraciclina e imidocarb en los<br />
equinos estudiados.<br />
REFERENCIAS<br />
1. ABUTARBUSH SM, ALQAWASMEH DM, MUK-<br />
BEL RM, AL-MAJALI AM. 2011. Equine Babesiosis:<br />
81
A. MORALES et al.<br />
Seroprevalence, Risk Factors and Comparison of Different<br />
Diagnostic Methods in Jordan. Transbo<strong>un</strong>d <strong>Em</strong>erg<br />
Dis.<br />
2. ADASZEK L, GÓRNA M, KRZYSIAK M, ADAS-<br />
ZEK M, GARBAL M, WINIARCZYK S. 2011. I<strong>de</strong>ntification<br />
of the piroplasms isolated from horses with clinical<br />
piroplasmosis in Poland. Wiad Parazytol.; 57(1):<br />
21-26.<br />
3. ALUJA A, CONSTANTINO C. 2002. Technical of<br />
Necropsy in domestic animals. 2nd ed., pp 103. Manual<br />
Mo<strong>de</strong>rno. México.<br />
4. BANKS W. 1996. Veterinary Applied Histology. 2nd<br />
ed., 487-492. Manual Mo<strong>de</strong>rno México.<br />
5. BOTANA L, LANDONI F, MARTÍN T. 2002. Veterinary<br />
Pharmacology and therapeutical. 1 ed., pp 3-690.<br />
Madrid España.<br />
6. BRüNING A. 1996. Equine piroplasmosis an update<br />
on diagnosis, treatment and prevention. Br Vet J. Mar;<br />
152(2): 139-151.<br />
7. BUTLER CM, NIJHOF AM, VAN DER KOLK JH,<br />
DE HASETH OB, TAOUFIK A, JONGEJAN F,<br />
HOUWERS DJ. 2008. Repeated high dose imidocarb<br />
dipropionate treatment did not eliminate Babesia<br />
caballi from naturally infected horses as <strong>de</strong>termined by<br />
PCR-reverse line blot hybridization. Vet Parasitol. Feb<br />
14; 151 (2-4): 320-322.<br />
8. DE VERA M, GUILLÉN A, GARCÍA F, CONTRERAS<br />
R, SIERRALTA A, LEÓN E. 2006. Seroprevalencia <strong>de</strong><br />
la babesiosis equina en caballos purasangre <strong>de</strong> carrera<br />
alojados en los Hipódromos La Rinconada y Nacional<br />
<strong>de</strong> Valencia, Venezuela. Veterinaria Trop. 31(1-2): 43-<br />
52.<br />
82<br />
9. DONALD M. 1996. Special Veterinary Pathology. 3rd<br />
ed., 24-29. Mosby. USA.<br />
10. FRIEDHOFF KT, TENTER AM, MüLLER I.<br />
Haemoparasites of equines: impact on international<br />
tra<strong>de</strong> of horses. Rev Sci Tech. 1990 Dec; 9(4): 1187-<br />
1194.<br />
11. HAILAT NQ, LAFI SQ, AL-DARRAJI AM, AL-ANI<br />
FK. 1997. Equine babesiosis associated with strenuous<br />
exercise: clinical and pathological studies in Jordan.<br />
Vet Parasitol. Apr; 69(1-2): 1-8.<br />
12. JUBB K, KENNEDY P, PALMER N. 1984. Domestic<br />
animal pathology. 3 ed., vol. 2., 59-90. Hemisferio Sur,<br />
S.R.L. Uruguay.<br />
13. KATZ J, DEWALD R, NICHOLSON J. 2000. Procedurally<br />
similar competitive imm<strong>un</strong>oassay systems for<br />
the serodiagnosis of Babesia equi, Babesia caballi, and<br />
Trypanosoma equidperdum, and Burkhol<strong>de</strong>ria mallei<br />
infection in horses. J Vet. Diagn. Invest 12: 46-50.<br />
14. USDA. Seroprevalence of Equine Piroplasmosis Disease<br />
Agents in the United States. 2009. APHIS. Info<br />
Sheet. Veterinary Services. Centers for Epi<strong>de</strong>miology<br />
and Animal Health. USDA.<br />
15. MEYER C, GUTHRIE AJ, STEVENS KB. 2005.<br />
Clinical and clinicopathological changes in 6 healthy<br />
ponies following intramuscular administration of<br />
multiple doses of imidocarb dipropionate. J S Afr Vet<br />
Assoc. Mar; 76(1): 26-32.<br />
16. MUJICA FF, PERRONE T, FORLANO M, CORONA-<br />
DO A, MELÉNDEZ RD, BARRIOS N, ALVAREZ R,<br />
GRANDA F. 2011. Serological prevalence of Babesia<br />
caballi and Theileria equi in horses of Lara State, Venezuela.<br />
Vet Parasitol. May 31; 178(1-2): 180-183.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82
Artículo Original<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89<br />
Detección <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp.<br />
en la planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> aguas residuales<br />
“Taiguaiguay” <strong>de</strong>l Estado Aragua,<br />
Venezuela año 2011<br />
MEDINA C. 1 , MONCADA E. 1 , GONZALEZ A. 1 , RUEDA M. 2 , y ROJAS G. 1<br />
1 Universidad <strong>de</strong> Carabobo, Facultad <strong>de</strong> ciencias <strong>de</strong> la Salud, Escuela <strong>de</strong> Bioanálisis.<br />
2 Universidad Central <strong>de</strong> Venezuela, Facultad <strong>de</strong> ciencias Veterinarias, Escuela <strong>de</strong> Veterinaria.<br />
ABSTRACT<br />
DETECTION OF CRYPTOSPORIDIUM OOCYSTS IN THE WATER TREATMENT RESIDUAL<br />
PLANT OF TAIGUAIGUAY, ESTADO ARAGUA, VENEzUELA<br />
Cryptosporidiosis is a gastrointestinal parasitic disease of man and animals caused by a opport<strong>un</strong>istic<br />
protozoan called Cryptosporidium. It is a zoonosis that can be acquired through human and animal feces. The<br />
infective stage is the oocyst, which is resistant to adverse conditions in the environment. In Latin America<br />
there is an increase of mortality due to high prevalence in patients infected with Human Imm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>ficiency<br />
Virus (HIV). In the present investigation was assessed by The presence of Cryptosporidium in the water<br />
treatment plant residual Taiguaiguay Venezuelan Aragua State was assessed by direct imm<strong>un</strong>ofluorescence<br />
(DIF). We analyzed 14 samples of water (7 at the entrance and 7 in the output of the water treatment plant)<br />
resulting 57% of the samples collected at the entrance of the plant contaminated with Cryptosporidium<br />
oocysts and 43% at the start, with an overall average of 50% of contaminated water with oocysts (maximum<br />
and minimum values fo<strong>un</strong>d in the input were 16 Ooq / L and 4 Ooq / L at the output of 6Ooq / L and 3 Ooq<br />
/ L), representing a risk level for human consumption.<br />
Key words: Wastewater, Cryptosporidium spp, direct imm<strong>un</strong>ofluorescence (DIF).<br />
RESUMEN<br />
La criptosporidiosis es <strong>un</strong>a enfermedad parasitaria gastrointestinal <strong>de</strong>l hombre y <strong>de</strong> los animales causada<br />
por <strong>un</strong> protozoario patógeno <strong>de</strong>nominado Cryptosporidium. Es <strong>un</strong>a zoonosis que pue<strong>de</strong> adquirirse a través<br />
<strong>de</strong> heces <strong>de</strong> animales y humanos, El ooquiste es el estadio infectivo, resistente a condiciones adversas en el<br />
medio ambiente. En Latinoamérica existe <strong>un</strong> incremento <strong>de</strong> morbimortalidad <strong>de</strong>bido a <strong>un</strong>a alta prevalencia<br />
en pacientes infectados por el Virus <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>ficiencia Humana (VIH). En la presente trabajo se evaluó<br />
Recibido: 18 <strong>de</strong> Febrero <strong>de</strong> 2012. Aceptado: 30 <strong>de</strong> Mayo <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Claudio Medina<br />
E-mail: set504@hotmail.com / set504@yahoo.com 0412-8310593.<br />
83
C. MEDINA et al.<br />
la presencia <strong>de</strong> Cryptosporidium spp en la planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> agua residual Taiguaiguay <strong>de</strong>l estado<br />
Aragua Venezuela, por la técnica<strong>de</strong> inm<strong>un</strong>oflurescencia directa. Se analizaron 14 muestras <strong>de</strong> aguas (7 en<br />
la entrada y 7 en la salida <strong>de</strong> la planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> agua) resultando 57% <strong>de</strong> las muestras recolectadas<br />
en la entrada <strong>de</strong> la planta contaminadas con ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp y 43% en la salida, con <strong>un</strong><br />
promedio general <strong>de</strong> 50% <strong>de</strong> aguas contaminados con ooquistes (valores máximos y mínimos encontrados<br />
en la entrada fueron <strong>de</strong> 16 Ooq/L y 4 Ooq/L en la salida <strong>de</strong> 6 Ooq/L y 3 Ooq/L).<br />
Palabras clave: Aguas residuales, Cryptosporidium spp, Inm<strong>un</strong>ofluorescencia directa (IFA).<br />
84<br />
INTRODUCCIóN<br />
La criptosporidiosis es <strong>un</strong>a enfermedad gastrointestinal<br />
que afecta a humanos y animales, producida<br />
por <strong>un</strong> coccidio <strong>de</strong>l género Cryptosporidium<br />
perteneciente al Phylum Apicomplexa, clase Coccidia,<br />
or<strong>de</strong>n Eucoccidiorida, familia Cryptosporidiidae,<br />
la cual se adquiere por consumo <strong>de</strong> agua y<br />
alimentos contaminados con heces <strong>de</strong> individuos<br />
infectados y es <strong>de</strong> distribución cosmopolita provocada<br />
por falta <strong>de</strong> saneamiento ambiental. (Zanaro y<br />
Garbossa, 2008).<br />
Esta parasitosis es actualmente consi<strong>de</strong>rada<br />
<strong>un</strong>a enfermedad emergente y representa <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los<br />
principales problemas parasitarios en ambientes<br />
acuáticos a nivel m<strong>un</strong>dial (Centro Panamericano<br />
<strong>de</strong> Ingeniería Sanitaria y Ciencias <strong>de</strong>l ambiente,<br />
CEPIS, 1995; Del Coco et al, 2009).<br />
El género Cryptosporidium es <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los protozoarios<br />
que están asociados con la reutilización<br />
<strong>de</strong>l agua residual, siendo Cryptosporidium parvum,<br />
el que se presenta con mayor frecuencia en<br />
este tipo <strong>de</strong> sistema (Luján y Garbossa 2008), la<br />
concentracion <strong>de</strong> 1-10 ooquistes/L representa <strong>un</strong><br />
nivel <strong>de</strong> riesgo para el consumo humano (Del Coco<br />
et al,. 2009). En la criptosporidiosis el ooquiste <strong>de</strong><br />
Cryptosporidium spp constituye la forma parasitaria<br />
infectante, la cual es eliminada a través <strong>de</strong> las<br />
heces. La transmisión se lleva a cabo principalmente<br />
por dos vías: <strong>un</strong>a directa que es la vía oral-fecal<br />
y otra indirecta que es por consumo <strong>de</strong> alimentos<br />
principalmente hortalizas y legumbres contaminadas<br />
a través <strong>de</strong>l riego con aguas residuales, luego<br />
el hospedador ingiere estos ooquistes por vía oral,<br />
lo que indica que la principal vía <strong>de</strong> transmisión <strong>de</strong><br />
este parásito es por contaminación hídrica (Hurst y<br />
Murphy, 1996).<br />
Existen evi<strong>de</strong>ncias biológicas que soportan la<br />
hipótesis <strong>de</strong> que hay múltiples especies en el género<br />
Cryptosporidium; hasta el presente se han <strong>de</strong>scrito<br />
20 especies. Se reconocen a las especies C. parvum<br />
y C. hominis, como las más frecuentes que afectan<br />
a los humanos, a<strong>un</strong>que se han <strong>de</strong>scrito infecciones<br />
por otros genotipos con menor relevancia,<br />
tales como: C. felis, C. muris, C. meleagridis, C.<br />
canis, C. suis, C. ubiquitum, C. c<strong>un</strong>iculus y Cryptosporidium<br />
genotipo <strong>de</strong> mono. C. meleagridis es la<br />
tercera especie en importancia, ya que se <strong>de</strong>scriben<br />
tanto en individuos inm<strong>un</strong>ocompetentes como inm<strong>un</strong>osuprimidos<br />
(Navarro et al., 2011).<br />
La intensidad <strong>de</strong> las manifestaciones clínicas, la<br />
patogenicidad, el grado <strong>de</strong> excreción <strong>de</strong> ooquistes<br />
y la inci<strong>de</strong>ncia varía entre las distintas especies<br />
que afectan a humanos. Por tanto, para conocer el<br />
riesgo en la salud pública <strong>de</strong> la criptosporidiosis es<br />
importante la correcta i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> especies<br />
y genotipos, tanto en muestras humanas, como <strong>de</strong><br />
otros animales o ambientales (Navarro et al, 2011).<br />
Existen varios factores que contribuyen al<br />
<strong>de</strong>senca<strong>de</strong>namiento <strong>de</strong> brotes <strong>de</strong> Criptosporidiosis:<br />
la elevada contaminación <strong>de</strong> aguas superficiales y<br />
subterráneas con ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium,<br />
la notable resistencia <strong>de</strong> estos ooquistes frente al<br />
tratamiento con cloro y <strong>de</strong>rivados y la ineficacia<br />
<strong>de</strong> filtros utilizados en las plantas potabilizadoras<br />
(Navarro et al, 2011).<br />
A nivel m<strong>un</strong>dial se han registrado epi<strong>de</strong>mias<br />
causadas por Cryptosporidium parvum como<br />
consecuencia <strong>de</strong>l consumo <strong>de</strong> aguas provenientes<br />
<strong>de</strong> plantas <strong>de</strong> tratamiento con <strong>un</strong>a inci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> 28%<br />
en países como Estados Unidos, Brasil, Argentina,<br />
Costa Rica, Ecuador, Guatemala, Haití, y Colombia,<br />
obteniendo <strong>un</strong>a alta tasa <strong>de</strong> mortalidad afectando<br />
en su mayoría a niños, el brote <strong>de</strong> criptosporidiosis<br />
ocurrido en 1993 en Milwaukee, Estados Unidos,<br />
ha sido <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los brotes más importantes<br />
relacionados con el consumo <strong>de</strong> agua contaminada.<br />
Este afectó a 400.000 personas, entre las cuales se<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
encontraban hospedadores inm<strong>un</strong>ocomprometidos<br />
que <strong>de</strong>senca<strong>de</strong>naron formas graves <strong>de</strong> la infección<br />
(Rose, 1988; Vergara et al, 2000; Cabral et al,<br />
2002).<br />
En Venezuela, Cryptosporidium sp. es endémico<br />
y ha sido reportado en heces <strong>de</strong> individuos que<br />
pa<strong>de</strong>cen infecciones gastrointestinales, con cifras<br />
<strong>de</strong> prevalencia que oscilan entre 5,35 y 7,4%<br />
(Millar et al, 2003).<br />
En personas inm<strong>un</strong>ocompetentes, la enfermedad<br />
es asintomática o autolimitada y pue<strong>de</strong> persistir<br />
entre 7-10 días y alg<strong>un</strong>as semanas (Chen<br />
et al., 2002). Sin embargo, en los individuos con<br />
<strong>de</strong>ficiencias inm<strong>un</strong>itarias relacionadas con malnutrición,<br />
infecciones virales como el sarampión y el<br />
virus <strong>de</strong> la inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>ficiencia adquirida (SIDA) y<br />
en pacientes con inm<strong>un</strong>oterapia exógena para el<br />
cáncer u otras enfermeda<strong>de</strong>s, pue<strong>de</strong>n causar hasta<br />
la muerte (Fayer, 2004). La criptosporidiosis pue<strong>de</strong><br />
convertirse en <strong>un</strong>a enfermedad crónica que se prolonga<br />
meses y hasta años. En casos extremos, como<br />
en los pacientes con SIDA, la enfermedad pue<strong>de</strong><br />
ser extremadamente severa, y la mortalidad pue<strong>de</strong><br />
llegar al 50% (Bogitsh y Cheng, 1998).<br />
Bukhari y Smith (1995), señala que Cryptosporidium<br />
spp es introducido en las aguas por medio <strong>de</strong><br />
las excretas contaminadas <strong>de</strong> animales, como aves<br />
y reptiles, que se encuentran en las plantas <strong>de</strong> tratamiento.<br />
Esta es otra posible fuente <strong>de</strong> infección que<br />
podrían tener los efluentes <strong>de</strong> salida que explicaría<br />
las concentraciones <strong>de</strong> ooquistes encontrados a este<br />
nivel, j<strong>un</strong>to con <strong>un</strong> tratamiento poco eficiente para<br />
su remoción.<br />
El tratamiento <strong>de</strong> las aguas residuales da como<br />
resultado la eliminación <strong>de</strong> microorganismos patógenos,<br />
evitando así que estos microorganismos<br />
lleguen a ríos o a otras fuentes <strong>de</strong> abastecimiento.<br />
Específicamente el tratamiento biológico <strong>de</strong> estas<br />
aguas es consi<strong>de</strong>rado <strong>un</strong> tratamiento sec<strong>un</strong>dario ya<br />
que está ligado íntimamente a dos procesos microbiológicos,<br />
los cuales pue<strong>de</strong>n ser aerobios y anaerobios<br />
(León, 1995).<br />
Este coccidio es <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los más resistente en<br />
este tipo <strong>de</strong> aguas en comparación con otros protozoarios<br />
que suelen ser más lábiles, sumado a esto<br />
es consi<strong>de</strong>rado <strong>un</strong> parásito emergente puesto que es<br />
<strong>un</strong>a causa potencial <strong>de</strong> diarrea prolongada y <strong>de</strong>shidratante,<br />
la cual <strong>de</strong>senca<strong>de</strong>na visitas a emergencias<br />
e incluso la muerte en personas inm<strong>un</strong>ocomprometidas<br />
(Hurst y Murphy, 1996).<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89<br />
CRYPTOSPORIDIUM EN AGUAS RESIDUALES DE ARAGUA, VENEZUELA<br />
La presente investigación tiene como finalidad<br />
<strong>de</strong>terminar la presencia <strong>de</strong> Cryptosporidium spp en<br />
aguas residuales tratadas en el embalse <strong>de</strong> Taiguaiguay,<br />
i<strong>de</strong>ntificar los ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp por la técnica <strong>de</strong> Inm<strong>un</strong>oflorescencia directa<br />
en la entrada y salida <strong>de</strong> la planta <strong>de</strong> aguas residuales<br />
Taiguaiguay, <strong>de</strong>terminar la concentración <strong>de</strong><br />
ooquistes/L <strong>de</strong> Cryptosporidium spp en las muestras<br />
<strong>de</strong> aguas residuales analizadas, <strong>de</strong>terminar la<br />
concentración <strong>de</strong> ooquistes Cryptosporidium spp<br />
según las diferentes épocas <strong>de</strong>l año (verano e invierno).<br />
MATERIALES Y MÉTODOS<br />
Área <strong>de</strong> estudio: La planta <strong>de</strong> tratamiento en<br />
estudio es Taiguaiguay, ubicada en el estado Aragua,<br />
M<strong>un</strong>icipio José ángel Lamas, específicamente en<br />
la ciudad <strong>de</strong> Santa Cruz <strong>de</strong> Aragua a 10°08’52.98’’<br />
N 67°28’47.35’’ O, limitando al Noreste con la<br />
Ciudad <strong>de</strong> Cagua, al Noroeste con la población <strong>de</strong><br />
Palo Negro, y al sur con el embalse <strong>de</strong>l Taiguaiguay<br />
(Machado y Colina, 2002), en la Figura 1 se muestra<br />
<strong>un</strong> mapa georeferencial.<br />
La planta recibe las aguas servidas <strong>de</strong> los<br />
siguientes efluentes: área metropolitana <strong>de</strong> Maracay,<br />
Palo Negro, Santa Cruz, Turmero, Cagua, Bella<br />
Vista, y San Mateo, a través <strong>de</strong> los ríos Turmero y<br />
Aragua, mediante dos obras <strong>de</strong> captación y <strong>un</strong> canal<br />
aductor, cubre <strong>un</strong>a población <strong>de</strong> más <strong>de</strong> 1 millón <strong>de</strong><br />
habitantes (Herrera, 2003).<br />
Muestra: Estuvo constituida por 7 muestras <strong>de</strong><br />
aguas residuales en la entrada y 7 muestras en la<br />
salida <strong>de</strong> la planta <strong>de</strong> tratamiento para <strong>un</strong> total <strong>de</strong><br />
14 muestras ambientales proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la planta<br />
<strong>de</strong> tratamiento Taiguaiguay.<br />
Obtención <strong>de</strong> la muestra: Las muestras fueron recolectadas<br />
en recipientes <strong>de</strong> polietileno con capacidad<br />
<strong>de</strong> 5 L cada <strong>un</strong>o previamente lavados con agua<br />
<strong>de</strong>stilada, se utilizó <strong>un</strong> muestreador metálico <strong>de</strong> 3 m<br />
<strong>de</strong> longitud, <strong>un</strong>ido a <strong>un</strong> recipiente <strong>de</strong> polietileno en<br />
<strong>un</strong>o <strong>de</strong> sus extremos con capacidad aproximada <strong>de</strong><br />
500 mL, ya obtenidas fueron transportadas al laboratorio<br />
<strong>de</strong>l instituto <strong>de</strong> investigaciones biomédicas<br />
(BIOMED) y refrigeradas a 4°C hasta el momento<br />
<strong>de</strong> su procesamiento.<br />
Recuperación <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp. mediante la técnica <strong>de</strong> floculación con<br />
carbonato <strong>de</strong> calcio: Para ello se procedió según<br />
85
C. MEDINA et al.<br />
la metodología <strong>de</strong>scrita por Vesey et al., (1993). A<br />
cada muestra <strong>de</strong> 5 L se le realizó el siguiente tratamiento:<br />
se hizo <strong>un</strong> filtrado grueso a través <strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
colador <strong>de</strong> plástico cubierto con <strong>un</strong>a gasa, pasando<br />
así la muestras a recipientes <strong>de</strong> polietileno con capacidad<br />
<strong>de</strong> 6L. Utilizando <strong>un</strong> cilindro graduado se<br />
agregó <strong>un</strong>a <strong>de</strong> solución <strong>de</strong> cloruro <strong>de</strong> calcio (CaCl 2 )<br />
1 M (10 mL/L <strong>de</strong> muestra). Se sometió a <strong>un</strong>a agitación<br />
con movimiento circular, luego se agregó<br />
bicarbonato <strong>de</strong> sodio (NaHCO 3 ) 1M (10 mL/L <strong>de</strong><br />
muestra) nuevamente se sometió a <strong>un</strong>a agitación<br />
con movimiento circular, posteriormente se midió<br />
el pH inicial y luego se fue agregando <strong>un</strong>a solución<br />
hidróxido <strong>de</strong> sodio (NaOH) 3 N hasta que la muestra<br />
llegara a <strong>un</strong> pH <strong>de</strong> 10, en este p<strong>un</strong>to la muestra<br />
así tratada, se <strong>de</strong>jó tapada en reposo por 4 horas a<br />
temperatura ambiente. Al cabo <strong>de</strong>l período se sedimentación,<br />
se eliminó cuidadosamente el <strong>sobre</strong>nadante,<br />
mediante la presión <strong>de</strong> succión ejercida por<br />
<strong>un</strong>a bomba portátil (sin perturbar el sedimento),<br />
seguidamente se lavó el envase con búffer fosfato<br />
salino estéril (PBS) más TWEEN 20 y se recuperó<br />
este volumen j<strong>un</strong>to con el resto <strong>de</strong>l sedimento. El<br />
sedimento se trató con solución <strong>de</strong> Acido Sulfámico<br />
(H 2 NSO 3 H) al 10% hasta observar la disolución<br />
<strong>de</strong>l floculo, la mezcla resultante se llevó a tubos <strong>de</strong><br />
50 mL.<br />
Concentración <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp: La mezcla resultante ya en los tubos <strong>de</strong><br />
50 mL, se centrifugaron a 3.314 g por 15 minutos<br />
a 4°C <strong>de</strong> temperatura luego cada tubo se añadió<br />
búffer fosfato salino estéril (PBS) más TWEEN 20<br />
para lavar, nuevamente se centrifugó 3.314 G por<br />
15 minutos a 4°C <strong>de</strong> temperatura, para concentrar<br />
86<br />
Figura 1. Mapa georeferencial <strong>de</strong><br />
los sitios <strong>de</strong> muestreo en la planta <strong>de</strong><br />
tratamiento Taiguaiguay, Maracay Estado<br />
Aragua Venezuela. Fuente: Claudio<br />
Medina 2011.<br />
a<strong>un</strong> más la muestra. Una vez finalizado este proceso<br />
se agregan todos los sedimentos a <strong>un</strong> único tubo<br />
<strong>de</strong> 50 mL pasando a ser la muestra concentrada.<br />
Purificación <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp. mediante la técnica <strong>de</strong> Flotación por sacarosa:<br />
Se trabajo seguen la metodología <strong>de</strong> Vesey<br />
et al., (1993), se agregó en <strong>un</strong> tubo <strong>de</strong> 50 mL, 15<br />
mL <strong>de</strong> sacarosa al 2,5 M y 5 mL <strong>de</strong> la muestra concentrada<br />
muy lentamente por las pare<strong>de</strong>s <strong>de</strong>l recipiente,<br />
se llevo a centrifugar por 10 minutos a 994<br />
g a 4°C <strong>de</strong> temperatura. Trascurrido ese tiempo con<br />
<strong>un</strong>a pipeta pasteur se tomo <strong>de</strong>l <strong>sobre</strong>nadante <strong>de</strong> la<br />
capa más superficial y se coloco en <strong>un</strong> tubo <strong>de</strong> 50<br />
mL, se completo con (PBS) a 45 mL para realizar el<br />
lavado, luego se llevo a centrifugar por 10 minutos<br />
a 3.314 G a 4°C y posteriormente se <strong>de</strong>scartó el<br />
<strong>sobre</strong>nadante y el sedimento generado se coloco<br />
en <strong>un</strong> tubo <strong>de</strong> ensayo representado esta la muestra<br />
final purificada.<br />
I<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp. mediante la técnica <strong>de</strong> Microscopia<br />
<strong>de</strong> inm<strong>un</strong>ofluorescencia directa (IFD): Se agregó<br />
50 µL <strong>de</strong> la muestra purificada a la lamina SuperSticK<br />
(Waterborne, Inc.) se <strong>de</strong>jó secar a temperatura<br />
ambiente, <strong>de</strong>spués que secó se colocó 1 gota <strong>de</strong><br />
metanol y se <strong>de</strong>jo secar nuevamente, se agrego 50<br />
µL <strong>de</strong> buffer por 1 minuto y se escurrió al culminar<br />
el tiempo, luego se añadió <strong>un</strong>a 1 gota <strong>de</strong> Cryt-agloTM<br />
y se incubó en cámara húmeda por 25 minutos<br />
a 37°C <strong>de</strong> temperatura, pasado este tiempo se<br />
agregó 50 µL <strong>de</strong> buffer por 1 minuto y se escurrió<br />
al culminar este tiempo, posteriormente se colocó<br />
1 gota <strong>de</strong> BlockOut para <strong>de</strong>jar incubar por 1 min<br />
a temperatura ambiente, para <strong>de</strong>spués agregar 50<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
µL <strong>de</strong> buffer por 1 minuto y escurrir al culminar el<br />
tiempo, por último se colocó <strong>un</strong>a gota <strong>de</strong>l líquido<br />
<strong>de</strong> montaje y se cubrió con <strong>un</strong>a laminilla. Las láminas<br />
se mantuvieron refrigerada a 4°C <strong>de</strong> temperatura<br />
y protegida <strong>de</strong> la luz hasta el momento <strong>de</strong> su<br />
observación.<br />
Las láminas se observaron en <strong>un</strong> microscopio<br />
<strong>de</strong> Epifluorescencia <strong>de</strong> marca Axios xop 2 plus<br />
(Zeiss) con filtro <strong>de</strong> 430-480 nm, en objetivos <strong>de</strong><br />
40x y 100x.<br />
Lectura <strong>de</strong>l recuento <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp. Una vez hecho el recuento <strong>de</strong><br />
ooquistes se aplico la fórmula que se <strong>de</strong>scribe<br />
a continuación para obtener el número total <strong>de</strong><br />
ooquistes/L (Herrera 2003).<br />
Ooq/L = Nº Ooq. contados x Vol. purificado (mL)<br />
Vol. estudiado (mL) x Vol. Muestra (L)<br />
Ooq/L= representa la forma <strong>de</strong> reportar la concentración<br />
<strong>de</strong> ooquiste.<br />
N° Ooq. Contados = El número <strong>de</strong> ooquistes contados<br />
en las laminas por IFD.<br />
Vol. Purificado (mL) = Volumen obtenido <strong>de</strong> la purificación<br />
<strong>de</strong> la muestra.<br />
Vol. Estudiado (mL) = Volumen utilizados para rea-<br />
lizar la coloración con IFD.<br />
Vol. Muestra (L) = Volumen original <strong>de</strong> cada muestras<br />
antes <strong>de</strong>l tratamiento.<br />
RESULTADOS Y DISCUSIóN<br />
Con la finalidad <strong>de</strong> i<strong>de</strong>ntificar la presencia <strong>de</strong><br />
Cryptosporidium spp. en la planta <strong>de</strong> tratamiento<br />
Taiguaiguay, se procesaron 14 muestras <strong>de</strong> aguas<br />
residuales, organizadas en dos grupos según el sitio<br />
<strong>de</strong> muestreo, siete en la entrada y siete en la salida<br />
<strong>de</strong> la planta. En la Tabla 1, se presenta el recuento<br />
<strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp en relación<br />
a los volúmenes <strong>de</strong> muestras <strong>de</strong> aguas residuales<br />
procesados. Se <strong>de</strong>tectó la presencia <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong><br />
Cryptosporidium spp tanto en la entrada como la<br />
salida <strong>de</strong> la planta, observándose variaciones en el<br />
numero <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong>tectados en cada muestra<br />
analizada.<br />
Estos resultados son comparados con los reportados<br />
por Alarcon et al., (2005), don<strong>de</strong> reportan<br />
concentraciones variables <strong>de</strong> Cryptosporidium spp<br />
en las muestras analizadas en la cuenca alta <strong>de</strong>l<br />
rio Bogotá, Colombia <strong>de</strong>mostraron la presencia <strong>de</strong><br />
Cryptosporidium spp en cinco muestreos realiza-<br />
Tabla 1. Recuento <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium spp en las muestras <strong>de</strong> aguas residuales recolectadas en<br />
la planta <strong>de</strong> tratamiento “Taiguaiguay” <strong>de</strong>l Estado Aragua año 2011<br />
Sitio <strong>de</strong><br />
muestreo<br />
Muestras Vol. <strong>de</strong> la<br />
muestra (L)<br />
Vol. purificado<br />
(mL)<br />
Vol. Estudiado<br />
(µL)<br />
Numero <strong>de</strong><br />
Ooq.<br />
M-1 5 2 50 4<br />
M-2 5 1 100 ND<br />
M-3 5 1 100 ND<br />
Entrada<br />
M-4 5 2 100 ND<br />
M-5 5 1 100 1<br />
M-6 5 2 100 2<br />
M-7 5 2 100 2<br />
M-8 5 3 50 ND<br />
M-9 5 2 100 ND<br />
M-10 5 1,5 100 1<br />
Salida<br />
M-11 5 1,5 100 2<br />
M-12 5 1,5 100 ND<br />
M-13 5 1 100 ND<br />
M-14 5 2 100 1<br />
M: muestra, ND: no <strong>de</strong>tectado, Ooq: Ooquiste, Vol: volumen.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89<br />
CRYPTOSPORIDIUM EN AGUAS RESIDUALES DE ARAGUA, VENEZUELA<br />
87
C. MEDINA et al.<br />
Tabla 2. Valor máximo y mínimo promedio y coeficiente <strong>de</strong> variación para el recuento <strong>de</strong> ooquistes/L <strong>de</strong><br />
Cryptosporidium spp en la planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> agua residual<br />
“Taiguaiguay” <strong>de</strong>l estado Aragua año 2011<br />
Mínimo (Ooq/L) Máximo (Ooq/L) Promedio<br />
(Ooq/L)<br />
CV (%)<br />
Entrada 4 16 4,57 ≠ 5 14<br />
Salida 3 6 1,85 ≠ 2 14<br />
CV: Coeficiente <strong>de</strong> variación, Ooq: Ooquiste.<br />
dos sólo en dos se obtuvieron ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp lo que lleva a pensar que no en<br />
todos los muestreos se pue<strong>de</strong>n encontrar ooquistes.<br />
Mediante la técnica <strong>de</strong> microscopia <strong>de</strong> inm<strong>un</strong>ofluorescencia,<br />
se <strong>de</strong>tectaron <strong>un</strong> promedio <strong>de</strong> 5<br />
Ooq/L en la entrada <strong>de</strong> agua <strong>de</strong> la planta <strong>de</strong> tratamiento<br />
y 2 Ooq/L en la salida <strong>de</strong> la planta, el coeficiente<br />
<strong>de</strong> variación se mantuvo tanto en la entrada<br />
como en la salida en 14%. Los valores máximos<br />
y mínimos encontrados en la entrada fueron <strong>de</strong> 16<br />
Ooq/L y 4 Ooq/L, se reportaron valor máximo y<br />
mínimo en la salida <strong>de</strong> 6 Ooq/L y 3 Ooq/L como se<br />
pue<strong>de</strong> observar en la Tabla 2.<br />
Los resultados obtenidos en esta investigación<br />
<strong>de</strong>mostraron la presencia <strong>de</strong> Cryptosporidium spp<br />
en 57% <strong>de</strong> las muestras procesadas recolectadas<br />
a nivel <strong>de</strong> la entada <strong>de</strong> la planta y en 43% <strong>de</strong> las<br />
muestras recolectadas en la salida; como promedio<br />
general se pue<strong>de</strong> señalar que 50% <strong>de</strong> las muestras<br />
<strong>de</strong> agua analizadas están contaminadas con este<br />
coccidio. Los valores obtenidos en la presente investigación,<br />
se relacionan con la presencia <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp en aguas residuales tratadas en el<br />
estado Bolívar, como lo <strong>de</strong>scribieron Cermeño y<br />
Arenas en el año 2008, don<strong>de</strong> encontraron 71,4%<br />
en la salida y <strong>un</strong> 85,7% en la entrada, lo que evi<strong>de</strong>ncia<br />
que hay mayor cantidad <strong>de</strong> parásitos que entran<br />
a la planta que los que salen por todo el tratamiento<br />
que se le realiza a este tipo <strong>de</strong> aguas.<br />
L<strong>un</strong>a et al., en Costa Rica en el año 2002,<br />
al estudiar <strong>un</strong>a planta <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> aguas<br />
residuales encontraron <strong>un</strong> porcentaje <strong>de</strong> 85,7%<br />
en la entrada y 57% en la salida <strong>de</strong> ooquistes<br />
<strong>de</strong> Cryptosporidium spp. Existen antece<strong>de</strong>ntes<br />
similares <strong>de</strong> <strong>un</strong> trabajo realizado en Hermosillo,<br />
México por (Díaz et al., 1999), en el que se<br />
encontraron ooquistes en 37% <strong>de</strong> las muestras <strong>de</strong><br />
aguas analizadas.<br />
Los muestreos se realizaron en diferentes pe-<br />
88<br />
ríodos <strong>de</strong>l año permitiendo abarcar el período <strong>de</strong><br />
verano y el período <strong>de</strong> lluvia esto causó diferencia<br />
en cuanto a la concentración <strong>de</strong> las muestras analizadas,<br />
más no así en la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> ooquistes/L,<br />
resultados similares al estudio <strong>de</strong> L<strong>un</strong>a y colaboradores<br />
en el año 2002, cuando en sus muestra había<br />
la presencia <strong>de</strong> Cryptosporidium spp in<strong>de</strong>pendientemente<br />
<strong>de</strong> las estaciones <strong>de</strong>l año.<br />
Las concentraciones <strong>de</strong> ooquistes encontrados<br />
en las muestras analizadas en la salida <strong>de</strong> la planta<br />
<strong>de</strong> tratamiento, posiblemente sea por lo comentado<br />
por Bukhari en 1995 en don<strong>de</strong> las concentraciones<br />
<strong>de</strong> ooquiste en la entrada <strong>de</strong> la planta se <strong>de</strong>ban a que<br />
Cryptosporidium spp es endémico en nuestro país<br />
como lo <strong>de</strong>scribe Millar y colaboradores en el 2003<br />
y a las características particulares que mencionan<br />
por Dillingham en el 2002 que presenta el ooquiste.<br />
La concentración <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
spp encontrados en las muestras analizadas en<br />
la entrada y salida <strong>de</strong> la planta <strong>de</strong> tratamiento se<br />
encuentra <strong>de</strong>ntro rango <strong>de</strong> (1-10 ooquistes) lo que<br />
se conoce como nivel riesgo para infectar animales<br />
y seres humanos causando patologías gastrointestinales,<br />
trayendo como consecuencia <strong>un</strong> riesgo para<br />
la salud pública <strong>de</strong>bido al uso <strong>de</strong> estas aguas para<br />
fines agrícolas y/o <strong>de</strong> consumo humano.<br />
A la luz <strong>de</strong> los resultados obtenidos recomendamos<br />
aplicar la técnica <strong>de</strong> colorantes vitales DAPI<br />
(4`,6-diamidino-2-phenylindole) e IP (yoduro <strong>de</strong><br />
propidio) para las muestras que presenten ooquistes<br />
con IFD. A<strong>de</strong>más estimamos que se <strong>de</strong>be incluir<br />
en el estudio <strong>de</strong> las plantas <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> agua<br />
el monitoreo e i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> este coccidio con<br />
evaluaciones periódicas.<br />
Estos resultados <strong>de</strong>ben ser tomados en cuenta<br />
por los organismos competentes para el reusó<br />
responsable <strong>de</strong> estas aguas con fines agrícolas y <strong>de</strong><br />
consumo humano.<br />
Con base en los resultados, se requiere <strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
programa <strong>de</strong> educación y promoción a la salud<br />
ambiental que permita implementar los criterios<br />
<strong>de</strong> la OMS <strong>sobre</strong> el reusó responsable <strong>de</strong> las aguas<br />
residuales.<br />
REFERENCIAS<br />
1. ALARCÓN M, BELTRáN M, CáRDENAS M, CAM-<br />
POS M. 2005. Recuento y <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> viabilidad<br />
<strong>de</strong> Giardia sp. y Cryptosporidium sp. en aguas potables<br />
y residuales en la cuenca alta <strong>de</strong>l río Bogotá. Biomédica,<br />
25(41), 353-365.<br />
2. BOGITSH J, CHENG C. 1998. For more information<br />
about this parasite and how to protect yourself, explore<br />
this website, Parasitology, 2(1), 23-24.<br />
3. BUKHARI Z, SMITH H. 1995. Effect of Three Concentration<br />
Techniques on Viability of Cryptosporidium<br />
parvum Oocysts Recovered from Bovine Feces. Journal<br />
of Clinical Microbiology, 33(10), 2592-2595.<br />
4. CABRAL M, ATWILL E, BARBOSA A, SILVA S,<br />
GARCÍA Z. 2002. Intra-familial and extra-familial<br />
risk factors associated with Cryptosporidium parvum<br />
infection among children hospitalized for diarrhoea in<br />
Goiania. American Journal of Tropical Medicine and<br />
Hygiene, 66(6), 787-793.<br />
5. CENTRO PANAMERICANO DE INGENIERÍA SA-<br />
NITARIA Y CIENCIAS DEL AMBIENTE (CEPIS).<br />
1995 “Proceso <strong>de</strong> tratamiento <strong>de</strong> aguas residuales, Objetivos<br />
y Selección <strong>de</strong> Tecnologías en F<strong>un</strong>ción al tipo<br />
<strong>de</strong> reutilización”. Publicaciones CEPIS. Lima-Perú.<br />
6. CERMEÑO R, JULMAN ARENAS R, JEWEL R,<br />
HERNáNDEZ N, ISABEL C. 2008. Cryptosporidium<br />
parvum y Giardia lamblia en aguas crudas y tratadas<br />
<strong>de</strong>l estado bolívar, Venezuela. Universidad Ciencia y<br />
tecnología, 12(46), 39-42.<br />
7. CHEN M, KEITHLY S, PAYA V, RUSSO F. 2002.<br />
Cryptosporidiosis. The New England Journal of Medicine,<br />
3(46), 1723-1731.<br />
8 DEL COCO M, CÓRDOBA A, BASUALDO. 2009.<br />
Criptosporidiosis: <strong>un</strong>a zoonosis emergente. Revista<br />
argentina <strong>de</strong> microbiología, 41, 185-196.<br />
9. DÍAZ M, AGUILAR J, GÓMEZ C, TORRES F, MATA<br />
V. (1999). Relación entre la inci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
parvum en agua y niños con diarrea. Memorias <strong>de</strong><br />
la VI Re<strong>un</strong>ión Sobre Investigación en Salud <strong>de</strong>l Estado<br />
<strong>de</strong> Sonora. 131-133.<br />
10. DILLINGHAM A, LIMA A, GUERRANT L. 2002.<br />
Cryptosporidiosis: epi<strong>de</strong>miology and impact. Microbes<br />
and Infection, 4, 1059-1066.<br />
11. FAYER R. 2004. Cryptosporidium: a waterborne zoonotic<br />
parasite. Veterinary Parasitology, 126, 37-56.<br />
12. HERRERA A, 2003. Diagnóstico <strong>de</strong> la situación actual<br />
<strong>de</strong> los planes <strong>de</strong> recuperación <strong>de</strong> la calidad <strong>de</strong> las aguas<br />
<strong>de</strong>l <strong>Em</strong>balse Taiguaiguay, Papeles <strong>de</strong> F<strong>un</strong>dacite Aragua.<br />
[Revista en línea], 2(18),34-38 Disponible:. www.<br />
f<strong>un</strong>dacitearagua.gob.ve/archivos/pdf/p.f_taiguaiguay_.<br />
pdf, [Mayo 23, 2010].<br />
13. HURST C, MURPHY P. 1996. The transmission and<br />
prevention of infectious disease Cambridge. University<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89<br />
CRYPTOSPORIDIUM EN AGUAS RESIDUALES DE ARAGUA, VENEZUELA<br />
of Cambridge Press, 2(5), 408.<br />
14. LEÓN G. 1995. Procesos <strong>de</strong> Tratamiento <strong>de</strong> Aguas Residuales,<br />
Objetivos y Selección <strong>de</strong> Tecnologías en f<strong>un</strong>ción<br />
al tipo <strong>de</strong> Reutilización. Congreso Venezuela <strong>de</strong> Ingeniería<br />
Agrícola. Maracaibo-Estado Zulia. Venezuela.<br />
15. LUJáN N, GARBOSSA G. 2008. Cryptosporidium:<br />
cien años <strong>de</strong>spués. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana,<br />
42(2), 195-201.<br />
16. LUNA S, REYES L, CHINCHILLA M, CATARINE-<br />
LLA G. 2002. Presencia <strong>de</strong> ooquistes <strong>de</strong> Cryptosporidium<br />
en aguas superficiales en Costa Rica. Parasitología<br />
Latinoamericana, 57, 63-65.<br />
17. MACHADO R, COLINA N. 2002. Evaluación <strong>de</strong> la<br />
calidad <strong>de</strong> agua tratada por la planta <strong>de</strong> tratamiento<br />
Taiguaiguay y el embalse <strong>de</strong>l mismo nombre, ubicada<br />
en el M<strong>un</strong>icipio José ángel Lamas <strong>de</strong>l Estado Aragua<br />
durante el año 2002. Tesis <strong>de</strong> Pregrado, Universidad<br />
Central <strong>de</strong> Venezuela.<br />
18. MILLAR S, ROSARIO C, ROJAS E, SCORZA J.<br />
2003. Intestinal parasitic infection and associated<br />
symptoms in children attending day care centers in<br />
Trujillo, Venezuela. Tropical Medicine International<br />
Health, 5(8), 346-347.<br />
19. NAVARRO L, MARTINEZA C, DEL áGUILAB Y,<br />
FERNANDO J, BORNAY L. 2011. Cryptosporidium:<br />
<strong>un</strong> género en revisión. Situación en España. Enferm<br />
Infecc Microbiol Clin. 29(2) 135-143.<br />
20. ROSE J. 1988. Occurrence and significance of Cryptosporidium<br />
in water. Jawwa.80: 53.<br />
21. VERGARA C, SANTOS N, FREIRE S, ARES M. 2000.<br />
La Criptosporidiosis en la región andina <strong>de</strong> Colombia:<br />
seroprevalencia y reconocimiento <strong>de</strong> antígenos. Pan<br />
American Journal of Public Health, 8, 373-379.<br />
22. VESEY G, SLADE J, BYRNE M, SHEPHERD K,<br />
FRICKER C. 1993. A new method for the concentration<br />
of Cryptosporidium oocysts from water. Journal of<br />
Applied Bacteriology. 75, 82-86.<br />
23. WATERBORNE INC. 2011. Inserto <strong>de</strong>l estuche comercial<br />
A400FLK. Crypt-a-Glo Comprehensive Kit. Procedimiento<br />
<strong>de</strong> <strong>de</strong>tección por Inm<strong>un</strong>ofluorescencía Directa<br />
<strong>de</strong> Cryptosporidium spp. Referencia No. 250050.<br />
24. ZANARO N , GARBOSSA G. 2008. Cryptosporidium:<br />
cien años <strong>de</strong>spués. Acta Latinoamericana <strong>de</strong> Bioquímica<br />
Clinica 42(2), 195-201.<br />
Agra<strong>de</strong>cimientos: Agra<strong>de</strong>cemos la colaboración y ayuda<br />
prestada al Consejo <strong>de</strong> Desarollo Científico y Humanístico<br />
(CDCH), al Prof. Edgar Palacios <strong>de</strong>l <strong>de</strong>partamento <strong>de</strong><br />
toxicología (UC-FCS), a Walter Betancourt. PhD. <strong>de</strong>l<br />
Instituto Venezolano <strong>de</strong> Investigaciones Científicas (IVIC),<br />
Dra. Carmen Bracho (IVIC), al Dr. Alexis Marques en el<br />
Laboratorio <strong>de</strong> biotecnología animal. (INIA), al Dr. José<br />
Fernán<strong>de</strong>z. Laboratorio biología <strong>de</strong> vectores y reservorios.<br />
(IAE), a los Prof. Ledia Triana, Licda. Daria Camacho en<br />
el Instituto <strong>de</strong> investigaciones biomédicas (BIOMED-<br />
Lab 8-5), a la Prof. Zuleyma Medina en el Laboratorio <strong>de</strong><br />
análisis <strong>de</strong> alimentos (UCV-FCV), al Ing. Giovanni Arriechi,<br />
y Licdo. Juan Romero en el ministerio <strong>de</strong>l po<strong>de</strong>r popular<br />
para el ambiente (MPPA), al Sr. Eddy Ramos en la Planta<br />
<strong>de</strong> tratamiento Taiguaiguay, a la Prof. Mary Marques <strong>de</strong>l<br />
Departamento <strong>de</strong> parasitología (UCV-FCS) y por ultimo<br />
al personal <strong>de</strong>l Laboratorio <strong>de</strong> Parasitologia Witrem<strong>un</strong>do<br />
Torrealba (UC-FCS).<br />
89
Artículo Original<br />
90<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96<br />
Comparative study of parasitological techniques<br />
and ELISA for analysis of environmental<br />
samples, RJ, Brazil<br />
DA SILVA BARBOSA A. 1 , ANTUNES UCHÔA C. M. 1 , LAURENTINO DA SILVA V. 2 ,<br />
NASCIMENTO DUARTE A. 2 , BANDEIRA VIANNA M. 1 , MONTEIRO FONSECA A. B. 3<br />
and PEREIRA BASTOS O. M. 1<br />
1 Departamento <strong>de</strong> Microbiologia e Parasitologia. Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral Fluminense. Rua Prof. Hernani Pires <strong>de</strong><br />
Melo, 101, Niterói, Rio <strong>de</strong> Janeiro, Brasil, 24210 -130.<br />
2 Departamento <strong>de</strong> Ciências Biológicas, F<strong>un</strong>dação Oswaldo Cruz. Avenida Brasil, 4.365, Manguinhos, Rio <strong>de</strong><br />
Janeiro, Brasil, 21040-900.<br />
3 Departamento <strong>de</strong> Estatística, Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral Fluminense. Rua Mário Santos Braga, s/n, Niterói - RJ, Brasil,<br />
24020-140.<br />
ABSTRACT<br />
The aim of this study was to compare the <strong>de</strong>gree of agreement between Ritchie’s technique modified<br />
by Yo<strong>un</strong>g, Sheather’s technique modified by Huber and the enzyme imm<strong>un</strong>oassay technique for survey of<br />
Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in water and soil samples. Overall, 48<br />
water samples were collected from the supply system and 64 of the soil on the surro<strong>un</strong>dings of constructions<br />
in Guarani Indian Villages of the State of Rio <strong>de</strong> Janeiro. The microscopic techniques for the survey of<br />
amoeboid cysts and Giardia sp. cysts in water samples and eggs of Ascaris sp. in soil samples could<br />
be associated. The ELISA, when compared to the microscopic techniques, presented a higher number of<br />
positive samples protozoa investigated, both in water and soil. These results suggest the use of enzyme<br />
imm<strong>un</strong>oassay to monitor water quality parasites or to investigate environmental contamination.<br />
Key words: Environmental samples. Parasitological techniques. Enzyme Imm<strong>un</strong>oassay.<br />
RESUMEN<br />
El objetivo <strong>de</strong> este estudio fue comparar el grado <strong>de</strong> acuerdo entre la técnica <strong>de</strong> Ritchie modificada por<br />
Yo<strong>un</strong>g et al., la técnica <strong>de</strong> Sheather modificada por Huber et al., y la técnica <strong>de</strong> inm<strong>un</strong>oensayo enzimático<br />
para la encuesta <strong>de</strong> Giardia lamblia, Entamoeba histolytica y Cryptosporidium sp. en muestras <strong>de</strong> agua y<br />
el suelo. En total, 48 muestras <strong>de</strong> agua fueron recolectadas en el sistema <strong>de</strong> abastecimiento y 64 <strong>de</strong>l suelo<br />
en los alre<strong>de</strong>dores <strong>de</strong> las construcciones en guaraníes pueblos <strong>de</strong> la India <strong>de</strong>l Estado <strong>de</strong> Río <strong>de</strong> Janeiro. Las<br />
Recibed: 5 May 2012. Accepted: 5 J<strong>un</strong>e 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>nce: Alynne. Da Silva Barbosa. Departamento <strong>de</strong> Microbiologia e Parasitologia. Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral<br />
Fluminense. Rua Prof. Hernani Pires <strong>de</strong> Melo, 101, Niterói, Rio <strong>de</strong> Janeiro, Brasil, 24210 -130.<br />
E-mail: alynnedsb@vm.uff.br; alynne.barbosa@ioc.fiocruz.br
técnicas <strong>de</strong> microscopía para el estudio <strong>de</strong> los quistes ameboi<strong>de</strong>s y Giardia sp. quistes en muestras <strong>de</strong> agua<br />
y los huevos <strong>de</strong> Ascaris sp. en muestras <strong>de</strong> suelo podría estar asociada. El ELISA, cuando se compara con<br />
las técnicas microscópicas, presenta <strong>un</strong> mayor número <strong>de</strong> muestras positivas protozoos investigado, tanto<br />
en agua y suelo. Estos resultados sugieren el uso <strong>de</strong> inm<strong>un</strong>oensayo enzimático para controlar los parásitos<br />
<strong>de</strong> calidad <strong>de</strong>l agua o para investigar la contaminación ambiental.<br />
Palabras clave: Muestras ambientales, Técnicas parasitológicas, Inm<strong>un</strong>oensayo enzimático.<br />
INTRODUCTION<br />
Many parasites, including protozoa and helminths,<br />
may be water and soil-borne, transmitting<br />
diseases to the population. It is worth to mention<br />
that the presence of intestinal parasites in soil, water<br />
or food, in addition to its importance specifically<br />
related to the <strong>de</strong>velopment of pathogenies, is a significant<br />
biological indicator of fecal contamination,<br />
pointing to the possible transmission of pathogenic<br />
agents (Silva et al., 1991). Investigations on soil<br />
and water contamination by parasites constitute an<br />
important part of public health studies because of<br />
the possibility transmission (Silva et al., 2009).<br />
The <strong>de</strong>tection of evolutionary forms of protozoa<br />
and helminths in water is performed by few laboratories<br />
of supply companies, which attribute this<br />
fact to the lack of standardization, technical complexity<br />
and high cost (Lima and Stamford, 2009).<br />
Until 2007, at least 325 water-associated outbreaks<br />
of parasitic protozoan disease have been reported in<br />
the world (Karanis, 2007).<br />
According to the OPAS report, it is estimated<br />
that two billion people in the world are infected by<br />
some form of parasite acquired through the contact<br />
with the soil, 800 million of which are infected<br />
children (40%), with about 20-30% occurring in<br />
Latin America populations (<strong>Eh</strong>renberg, 2002). In<br />
soil, the <strong>de</strong>tection of these evolutionary forms is<br />
typically performed in epi<strong>de</strong>miological researches,<br />
chiefly in samples collected in gar<strong>de</strong>ns, amusement<br />
parks, public squares and beaches (Santos et al.,<br />
2006; Rocha et al., 2011).<br />
Different diagnostic techniques have been employed<br />
for the <strong>de</strong>tection of parasites in environmental<br />
samples, usually the same ones used in clinical<br />
fecal samples. Each technique has its own advantages<br />
and disadvantages, but there is no one <strong>un</strong>iversally<br />
accepted as the gold standard in the survey<br />
of evolutionary forms of protozoa and helminths in<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96<br />
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES<br />
water and soil samples (Smith, 1998).<br />
Owing to the diversity of existing laboratory<br />
techniques and the importance of the water and soil<br />
in the transmission of intestinal parasites, it becomes<br />
relevant for the performance of studies which aim<br />
to compare the efficiency of the parasitological<br />
techniques and the enzyme imm<strong>un</strong>oassay in<br />
environmental samples.<br />
The aim of this study was to compare the <strong>de</strong>gree<br />
of agreement in the <strong>de</strong>tection of evolutionary forms<br />
of parasites in water samples and soil collected in<br />
Guarani Indian Villages using the Ritchie et al.,<br />
parasitological technique (1948) modified by Yo<strong>un</strong>g<br />
et al., (1979), Sheather’s parasitological technique<br />
(1923) modified by Huber et al., (2003) and the<br />
enzyme imm<strong>un</strong>oassay for the survey of Giardia<br />
lamblia, Cryptosporidium sp. and Entamoeba<br />
histolytica.<br />
MATERIAL AND METHODS<br />
Collection of the samples: The survey was<br />
performed in four Guarani Indian Villages in the<br />
cities of Angra dos Reis (Sapukai Village) Paraty<br />
(Araponga, Rio Pequeno and Paraty Mirim<br />
Villages) in the State of Rio <strong>de</strong> Janeiro.<br />
Quadruplicate samples were collected over the<br />
period from February to November, 2010. In the<br />
end, there were 48 samples of water of the supply<br />
systems of the Guarani Indian Villages, divi<strong>de</strong>d in<br />
24 raw water samples and 24 treated water samples<br />
from six different systems, thus distributed: three<br />
systems in Sapukai Village, the single system of<br />
Araponga Village, one in Rio Pequeno Village and<br />
one in Paraty Mirim Village, totaling eight samples<br />
of water for each system. For the soil, a total of<br />
64 samples were collected in four different points<br />
of the places allowed by the caciques, using the<br />
greatest concentration of human and/or domestic<br />
91
A. da S. BARBOSA et al.<br />
animals as the parameter of choice, totaling 16 soil<br />
samples collected for each collection point.<br />
The water from surface sources (raw water)<br />
was collected by means of the discharge of 2000<br />
liters in commercial Aqualimp® filters, having<br />
blanket cartridges and coiled wire with 1 µm<br />
porosity of C<strong>un</strong>o® DPPPY-1 Micro Wind II mo<strong>de</strong>l.<br />
After filtration, the cartridges were packaged in<br />
properly marked plastic bags. Aro<strong>un</strong>d two liters of<br />
reservoir-bottom sediments were collected from<br />
two polyethylene reservoirs (treated water) with<br />
the aid of a 1’ plastic hose through siphoning.<br />
This sediment was stored in 2 liter plastic bottles,<br />
previously cleaned and i<strong>de</strong>ntified.<br />
In the soil, the collections were standardized<br />
in pool system, which represents the points<br />
surro<strong>un</strong>ding each place previously <strong>de</strong>termined as<br />
reference. Each collection point is 150 cm distant<br />
from the reference, and the collection points are<br />
250 cm equidistant from each other. All the soil<br />
collected from the chosen point was stored in the<br />
same plastic bag, forming one sample. The material<br />
collected was obtained by surface scraping of the<br />
soil with a stainless steel paddle insi<strong>de</strong> a square<br />
of 25 cm 2 , and a template was used. After the<br />
collection, soil samples were packaged in properly<br />
marked plastic bags.<br />
The water and soil samples were stored in refrigerated<br />
isothermal container and sent to the Parasitology<br />
Laboratory of the Biomedical Institute, at<br />
Fe<strong>de</strong>ral Fluminense University (UFF) and then sent<br />
to the Imm<strong>un</strong>odiagnostic Laboratory of the Department<br />
of Biological Sciences (DCB), at the National<br />
School of Public Health (ENSP)/FIOCRUZ.<br />
Preprocessing:The filter cartridges were eluted<br />
by washing with one liter of neutral <strong>de</strong>tergent solution<br />
at 0.001% (q.s.p.), gauze filtered and placed for<br />
sedimentation. The samples stored in 2-liter plastic<br />
bottles were filtered and placed for sedimentation.<br />
In the soil, 100 g of each sample were used by <strong>de</strong>posit<br />
in conical bottom cups with 1-liter <strong>de</strong>tergent<br />
solution at 0.001% (q.s.p.), and the material was<br />
homogenized and filtered with a gauze and placed<br />
for sedimentation.<br />
Surveys of protozoa cysts and helminth eggs<br />
using microscopic techniques: The sediment was<br />
aliquoted and all samples were subject to survey<br />
of evolutionary forms of protozoa and helminths.<br />
One mililiter of the sediment was used for each<br />
microscopic concentration technique. Three glass<br />
92<br />
sli<strong>de</strong>s per sample were read in Ritchie’s technique<br />
modified by Yo<strong>un</strong>g et al, whereas one glass sli<strong>de</strong> per<br />
sample was read in Sheather’s technique modified<br />
by Huber et al.<br />
All sli<strong>de</strong>s were covered with a 24 x 32 mm<br />
coverslip, and viewing and photomicrography were<br />
ma<strong>de</strong> on a Olympus® Bx 41 binocular optical<br />
microscope with an increase of approximately<br />
100 times and confirmation in 400 times, coupled<br />
to a Sams<strong>un</strong>g® SDC415 digital camera, complete<br />
with Honestech® PVR capture software. For<br />
morphometry, we used an Olympus® CH30<br />
monocular optical microscope with 400 times<br />
magnification, and an ocular micrometer.<br />
Survey of surface antigens via Imm<strong>un</strong>odiagnosis:<br />
The Enzyme-linked Imm<strong>un</strong>osorbent Assay,<br />
ELISA, was conducted in all samples for survey<br />
of G. lamblia, Cryptosporidium sp., and E. histolytica.<br />
The kits were purchased commercially:<br />
Techlab ® Wampole Cryptosporidium II test, which<br />
surveys the antigens of the oocyst wall of Crypstosporidium<br />
sp.; Entamoeba Ridascreen ® , which<br />
surveys adhesins specific of E. histolytica (N-acetyl-D-galactosamine<br />
lectin inhibitor), present on<br />
the parasite membrane; and Giardia Ridascreen ® ,<br />
which surveys antigens specific of the cyst wall of<br />
G. lamblia.<br />
Before the performance of ELISA, a predilution<br />
of 60 μL of the sample and 60 μL of the<br />
diluent provi<strong>de</strong>d by manufacturer was performed,<br />
and 100 μL of this solution was transferred to the<br />
duplicate test plate. Then, we followed the protocol<br />
recommen<strong>de</strong>d by the manufacturer. The reading<br />
was ma<strong>de</strong> in ELISA rea<strong>de</strong>r (Testline® ELx 800)<br />
with wavelength according to the manufacturer’s<br />
technical standards.<br />
Statistical treatment of results: The McNemar’s<br />
statistical test with a significance level of 5% was<br />
used with comparison <strong>de</strong>gree of agreement between<br />
the laboratory techniques, using SPSS® (Statistical<br />
Package for Social Sciences, Chicago), of version<br />
17.0.<br />
RESULTS<br />
In the 48 water samples examined, was observed<br />
agreement applying Sheather’s modified<br />
and Ritchie’s modified techniques to <strong>de</strong>tect the<br />
amoeboid cyst with more than four nuclei, four-<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
nucleus amoeboid cyst and cyst of Giardia sp. in<br />
the same samples. It was not possible to compare<br />
the <strong>de</strong>gree of agreement between these techniques<br />
in the survey of the oocyst of Cystoisospora sp.,<br />
nemato<strong>de</strong> larvae and eggs, coccidia oocysts and<br />
eggs of Trichuris sp., as these evolutionary forms<br />
were <strong>de</strong>tected only in one of the techniques and, for<br />
comparison using McNemar’s test, it must be positive<br />
at least once in the two of them (Table 1).<br />
In water, ELISA <strong>de</strong>tected more positive samples<br />
for the protozoa G. lamblia, E. histolytica e<br />
Cryptosporidium sp. than the microscopic Ritchie’s<br />
and Sheather’s modified techniques. Despite the<br />
greater positivity in ELISA, it was still possible to<br />
find the <strong>de</strong>gree of agreement with the microscopic<br />
techniques. This agreement happened in the <strong>de</strong>tection<br />
of four-nucleus amoeboid cysts in two samples<br />
with sizes compatible with E. histolytica/E. dispar<br />
complex, confirmed for E. histolytica in ELISA,<br />
cysts of Giardia sp. in four samples with dimensions<br />
compatible with G. lamblia, confirmed with<br />
ELISA. Comparing the <strong>de</strong>gree of agreement in the<br />
survey of Cryptosporidium sp. was not possible, as<br />
the result was possible only in ELISA (Table 2).<br />
In the 64 soil samples collected, there was<br />
agreement between the microscopic techniques<br />
Table 1. Comparison between the results obtained with Sheather’s modified and Ritchie’s modified<br />
techniques for <strong>de</strong>tection protozoa and helminths in 48 water samples<br />
Protozoa and helminthes Ritchie’s mod. technique Sheather’s mod. technique MN<br />
No+ No - No+ No - SxR<br />
Amoeboid cyst with more<br />
than 4 nuclei<br />
2 46 4 44 0.5<br />
Four-nucleus amoeboid<br />
cyst<br />
2 46 2 46 1<br />
Cyst of Giardia sp. 4 44 4 44 1<br />
Cyst of Cystoisospora sp. 0 48 1 47 NF<br />
Nemato<strong>de</strong> larvae 4 44 0 48 NF<br />
Nemato<strong>de</strong> egg 0 48 3 45 NF<br />
Coccidia oocyst 0 48 1 47 NF<br />
Egg of Trichuris sp. 0 48 1 47 NF<br />
No+: Number of positive samples; No-: Number of negative samples; R: Ritchie’s technique modified by Yo<strong>un</strong>g et<br />
al.; S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar Test.<br />
Table 2. Comparison between the results obtained with Ritchie’s modified technique, Sheather’s modified<br />
technique and ELISA for <strong>de</strong>tection of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and<br />
Cryptosporidium sp. in 48 water samples<br />
Protozoa ELISA Ritchie’s mod.<br />
technique<br />
Sheather’s mod.<br />
technique<br />
No.+ No.- No.+ No.- No.+ No.- ExR ExS<br />
Cyst of Entamoeba histolytica 6 42 2 46 2 46 0.08 0.08<br />
Oocyst of Cryptosporidium sp. 10 38 0 48 0 48 NF NF<br />
Cyst of Giardia lamblia 9 39 4 44 4 44 0.06 0.06<br />
No.+: Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified<br />
by Yo<strong>un</strong>g et al.; S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar<br />
Test.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96<br />
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES<br />
MN<br />
93
A. da S. BARBOSA et al.<br />
Table 3. Comparison between Ritchie’s modified technique and Sheather’s modified technique for <strong>de</strong>tection<br />
of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in 64 soil samples<br />
Protozoa and helminthes<br />
Ritchie’s mod. technique Sheather’s mod. technique MN<br />
No.+ No.- No.+ No.- RxS<br />
Coccidia oocyst 0 64 2 62 NF<br />
Egg of Ascaris sp. 1 63 1 63 1<br />
Nemato<strong>de</strong> egg 1 63 0 64 NF<br />
Egg of Trichuris sp. 0 64 2 62 NF<br />
No.+ Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified<br />
by Yo<strong>un</strong>g et al., S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar<br />
Test.<br />
Table 4. Comparison between Ritchie’s modified technique, Sheather’s modified technique and ELISA for<br />
<strong>de</strong>tection of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in 64 soil samples<br />
Protozoa ELISA Sheather’s mod. technique/<br />
Ritichie’s mod. Technique<br />
MN<br />
N+ N- N+ N- ExR / ExS<br />
Giardia lamblia 4 60 0 64 NF<br />
Cryptosporidium sp. 5 59 0 64 NF<br />
Entamoeba histolytica 9 55 0 64 NF<br />
No.+ Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified<br />
by Yo<strong>un</strong>g et al., S: Sheather’s technique modified by Huber et al., NF: Comparison was not possible; MN: McNema<br />
Test.<br />
only in the <strong>de</strong>tection of Ascaris sp. eggs, which<br />
were <strong>de</strong>tected in the same samples. The comparison<br />
with other parasites was not possible, because<br />
the evolutionary forms were only fo<strong>un</strong>d using a<br />
laboratorial technique (Table 3).<br />
In the survey of protozoa G. lamblia and<br />
Cryptosporidium sp. in soil samples, the <strong>de</strong>gree<br />
of agreement was not calculed, as only ELISA<br />
managed to i<strong>de</strong>ntify the positive samples (Table 4).<br />
94<br />
DISCUSSION<br />
Despite the microscopic techniques used in this<br />
study presented different principles, an agreement<br />
in the <strong>de</strong>tection of cysts of some protozoa could<br />
be observed. The Ritchie’s technique modified by<br />
Yo<strong>un</strong>g et al., is based on the centrifugal sedimentation<br />
using ethyl acetate, and Sheather’s technique<br />
modified by Huber et al., is based on the centrifugal<br />
flotation with sucrose solution.<br />
These microscopic techniques are wi<strong>de</strong>ly used<br />
in clinical fecal analyses, and, hence, have been<br />
evaluated by different authors in fecal examinations.<br />
Ritchie’s technique modified by Yo<strong>un</strong>g et al.,<br />
presented satisfactory results in children’s feces in<br />
the city of Araraquara, State of São Paulo (García et<br />
al., 2006) and in feces of patients who lived in slums<br />
in the city of Belo Horizonte, State of Minas Gerais<br />
(Mello et al., 1989). Sheather’s technique modified<br />
by Huber et al., (Huber et al, 2003) has been shown<br />
to be highly efficient for the diagnosis of cysts of<br />
Giardia sp. and oocysts of Cryptosporidium sp. in<br />
calves’ feces.<br />
In the soil, the microscopic techniques presented<br />
agreement only in the <strong>de</strong>tection of eggs of<br />
Ascaris sp., given that most of the positive results<br />
were fo<strong>un</strong>d with Sheather’s modified technique. It<br />
should be <strong>un</strong><strong>de</strong>rscored that, even with gauze filtration<br />
with sedimentation, the reading of the slabs for<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
microscopy applying the Ritchie’s modified technique<br />
was difficult, as the sediment had become<br />
very thick, while in Sheather’s modified technique,<br />
owing to the sugar solution with high concentration,<br />
the sediment on the microscope sli<strong>de</strong> was<br />
clear and easily readable. As an alternative to improve<br />
the reading of the slabs in the Ritchie’s modified<br />
technique, Carvalho et al., (2002) suggest the<br />
dilution of the material obtained with a drop of salt<br />
solution for obtainment of clearer fields of reading.<br />
Thus, we suggest that Ritchie’s modified technique<br />
is not used in the processing of soil samples, as it<br />
may lead to false negative results, owing to excess<br />
residues in the fields of reading.<br />
ELISA showed a larger number of positive<br />
samples compared to the microscopic techniques in<br />
the survey of G. lamblia, E. histolytica and Cryptosporidium<br />
sp. These results are in keeping with the<br />
studies performed with fecal samples in the city of<br />
Belém, State of Pará, for which ELISA was consi<strong>de</strong>red<br />
the most sensitive technique for <strong>de</strong>tecting<br />
G. lamblia in children’s feces by Machado et al.,<br />
(2001) and for <strong>de</strong>tecting E. histolytica in feces of<br />
dwellers of the Metropolitan Region by Silva et al.,<br />
(2005).<br />
In this study, the agreement between microscopic<br />
and ELISA techniques allowed to confirm species<br />
of protozoa which could not be i<strong>de</strong>ntified by<br />
microscopy. This fact was substantiated by cysts<br />
of Giardia sp. confirmed for G. lamblia and<br />
four-nucleus amoeboid cysts confirmed for E.<br />
histolytica. The confirmation of species of protozoa<br />
through the enzyme imm<strong>un</strong>oassay was possible<br />
due to the use of species-specific kits.<br />
The <strong>de</strong>gree of agreement between the microscopic<br />
techniques and ELISA in soil samples was<br />
not ascertained, as protozoa G. lamblia, E. histolytica<br />
and Cryptosporidium sp. were <strong>de</strong>tected only<br />
in the enzyme imm<strong>un</strong>oassay, and the microscopy<br />
did not find any compatible structure.<br />
The high sensitivity of the enzyme imm<strong>un</strong>oassay<br />
in water and soil samples may be explained by the<br />
fact that this technique is capable of capturing<br />
surface antigens, given that the integrity of the cyst<br />
and oocyst is not necessary. On the other hand, in<br />
microscopic techniques, the integrity of the cysts<br />
and oocysts of protozoa is essential for the diagnosis.<br />
The high efficiency of the enzyme imm<strong>un</strong>oassay is<br />
also the result of its ability to <strong>de</strong>tect small amo<strong>un</strong>ts<br />
of antigens, which stand as low parasite load. This<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96<br />
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES<br />
may facilitate the <strong>de</strong>tection of antigens in water,<br />
since these antigens are usually at low loads, owing<br />
to high dilution.<br />
Vidal and Catapani (2005) reported that the<br />
main disadvantages of enzyme imm<strong>un</strong>oassays are<br />
related to the high cost compared to the traditional<br />
microscopic techniques. In this study, for each<br />
sample, ELISA cost BRL 25.00 in average, while<br />
Sheather’s technique modified by Huber et al.,<br />
cost BRL 0.37, and Ritchie’s technique modified<br />
by Yo<strong>un</strong>g et al., cost BRL 0.55. In addition to this,<br />
the enzyme imm<strong>un</strong>oassay, as a specific kit, does<br />
not <strong>de</strong>tect other parasites, and the i<strong>de</strong>ntification of<br />
parasite in ELISA does not ensure its feasibility.<br />
Comparing the results of ELISA with other imm<strong>un</strong>ological<br />
techniques is necessary; these techniques<br />
inclu<strong>de</strong> the direct imm<strong>un</strong>ofluorescence,<br />
which uses monoclonal antibodies with high sensitivity,<br />
and is capable of <strong>de</strong>tecting <strong>un</strong>divi<strong>de</strong>d cysts<br />
and oocysts. Still, ELISA has the advantage of being<br />
less costly than imm<strong>un</strong>ofluorescence, is swifter,<br />
facilitating concomitant analysis of a number of<br />
samples, and is easy to handle. Nonetheless, it has<br />
been subject to few tests in environmental samples.<br />
Other relevant factors to be consi<strong>de</strong>red would be<br />
the need for less technology infrastructure, as some<br />
kits may be processed by visual reading and do not<br />
require a trained operator to i<strong>de</strong>ntify the evolutionary<br />
parasitic forms.<br />
The consensus is that the i<strong>de</strong>ntification of a given<br />
parasite must be confirmed by a parasitological<br />
laboratory technique. It is recommen<strong>de</strong>d, however,<br />
the combination of techniques with different<br />
principles to increase the probability of <strong>de</strong>tection<br />
of evolutionary forms of protozoa and helminths,<br />
taking into acco<strong>un</strong>t the morphological variability<br />
they present. However, based on the results<br />
fo<strong>un</strong>d, we suggest the use of imm<strong>un</strong>oenzymatic<br />
technique for monitoring the water quality or for<br />
investigating environmental contamination, as<br />
the mere <strong>de</strong>tection of antigens may indicate risk<br />
of infection and, chiefly, the occurrence of fecal<br />
source contamination, with the possible presence<br />
of other pathogens.<br />
REFERENCES<br />
1. CARVALHO FM, FALCÃO AO, ALBUQUERQUE<br />
MC, SILVA P, BASTOS OMP, UCHÔA CM. 2002.<br />
95
A. da S. BARBOSA et al.<br />
Diagnóstico coproparasitológico: estudo comparativo<br />
entre os métodos <strong>de</strong> Faust e cols., Lutz, Bearman e<br />
Moraes, e Coprotest. Rev Bras Anal Clin 34: 75-77.<br />
2. EHRENBERG J. 2002. Por um continente livre <strong>de</strong><br />
verminoses. Washington: Organização Pan-Americana<br />
da Saú<strong>de</strong>.<br />
3. GARCÍA JGD, SIMÕES MJS, ALVARENGA VLS.<br />
2006. Avaliação <strong>de</strong> diferentes métodos no diagnóstico<br />
laboratorial <strong>de</strong> Giardia lamblia. Rev Ciên Farm Básica<br />
Apl 27: 253-258.<br />
4. KARANIS P, KOURENTI C, SMITH H. 2007.<br />
Waterborne transmission of protozoan parasites: A<br />
worldwi<strong>de</strong> review of outbreaks and lessons learnt. J<br />
Water Health 5: 1-37.<br />
5. HUBER F, BOMFIM TC, GOMES RS. 2003. Comparação<br />
da eficiência da Técnica <strong>de</strong> Sedimentação pelo<br />
formal<strong>de</strong>ído-éter e da técnica <strong>de</strong> centrífugo-flutuação<br />
modificada na <strong>de</strong>tecção <strong>de</strong> cistos <strong>de</strong> Giardia sp. e oocistos<br />
<strong>de</strong> Cryptosporidium sp. em amostras fecais <strong>de</strong> bezerros.<br />
Rev Bras Parasitol Vet 12: 135-137.<br />
6. LIMA EC, STAMFORD TLM. 2003. Cryptosporidium<br />
spp. no ambiente aquático: aspectos relevantes da<br />
disseminação e diagnóstico. Cien Saú<strong>de</strong> Colet 8: 791-<br />
800.<br />
7. MACHADO RLD, FIGUEIREDO MC, FRADE AF,<br />
KUDÓ ME, FILHO MGS, PÓVOA MM. 2001. Comparação<br />
<strong>de</strong> quatro métodos laboratoriais para diagnóstico<br />
da Giardia lamblia em fezes <strong>de</strong> crianças resi<strong>de</strong>ntes<br />
em Belém, Pará. Rev Soc Bras Med Trop 34: 91-93.<br />
8. MELLO RT, ROCHA MO, COSTA CA, GIOVANNINI<br />
HR, MOREIRA MCCG. 1989. Estudo Comparativo<br />
entre métodos Coprotest e <strong>de</strong> Hofman, Pons e Janer<br />
no diagnóstico <strong>de</strong> Parasitoses intestinais. Rev Farm<br />
Bioquim. 10: 9-15.<br />
9. RITCHIE LS. 1948. An ether sedimentation technique<br />
for routine stool examinations. The Bull U S Army Med<br />
Dep 8: 326.<br />
10. ROCHA S, PINTO RMF, FLORIANO AP, TEIxEIRA<br />
LH, BASSILI B, MARTÍNEZ A, COSTA SOP,<br />
CASEIRO MM. 2011. Environmental analyses of the<br />
parasitic profile fo<strong>un</strong>d in the sandy soil from the Santos<br />
m<strong>un</strong>icipality beaches, SP, Brazil. Rev Inst Soc Bras<br />
Med Trop S Paulo 53: 277-281.<br />
11. SANTOS NM, DA SILVA VMG, THÉ TS, DOS<br />
96<br />
SANTOS AB, DE SOUZA TP. 2006. Contaminação das<br />
praias por parasitos caninos <strong>de</strong> importância zoonótica<br />
na orla da parte alta da cida<strong>de</strong> <strong>de</strong> Salvador - Ba. Rev Ci<br />
Méd Biol 5: 40-47.<br />
12. SHEATHER LA. 1923. The <strong>de</strong>tection of intestinal<br />
protozoa and mange parasites by a flotation technique.<br />
J Comp Pathol Ther 36: 266-275.<br />
13. SILVA JP, MARZOCHI MCA, SANTOS ECL. 1991.<br />
Avaliação da contaminação experimental <strong>de</strong> areias <strong>de</strong><br />
praia por enteroprasitas, pesquisa <strong>de</strong> ovos <strong>de</strong> helmintos.<br />
Cad Saú<strong>de</strong> Pública 7: 90-99, 1991.<br />
14. SILVA MCM, MONTEIRO CDS, ARAÚJO BAV,<br />
SILVA JV, PÓVOA MM. 2005. Determinação da infecção<br />
por Entamoeba histolytica em resi<strong>de</strong>ntes da área<br />
metropolitana <strong>de</strong> Belém, Pará, Brasil, utilizando ensaio<br />
im<strong>un</strong>oenzimático (ELISA) para a <strong>de</strong>tecção <strong>de</strong> antígenos.<br />
Cad Saú<strong>de</strong> Pública 21: 969-973.<br />
15. SILVA PF, CAVALCANTI IMD, IRMÃO JI, ROCHA<br />
FJS. 2009. Commom beach sand contamination due<br />
to enteropasites on the southern coast of Pernambuco<br />
State, Brazil. Rev Inst Soc Bras Med Trop S Paulo 51:<br />
217-218.<br />
16. SMITH HV. 1998. Detection of parasites in the<br />
environmental. Parasitol 117: S113-S141.<br />
17. VIDAL AMB, CATAPANI WR. 2005. Enzyme - linked<br />
imm<strong>un</strong>osorbent assay (ELISA) imm<strong>un</strong>oassaying versus<br />
microscopy: advantages and drawbacks for diagnosing<br />
giardiasis. São Paulo Med J 123: 282-285.<br />
18. YOUNG KH, BULLOCK SL, MELVIN DM, SPRUILL<br />
CL. 1979. Ethyl acetate as a aubstitute for diethyl ether<br />
in the formalin-ether sedimentation technique. J Clin<br />
Microbiol 10: 852-853.<br />
Acknowledgments: The Guarani Indians of the cities of<br />
Angra dos Reis and Paraty, State of Rio <strong>de</strong> Janeiro, for<br />
cooperating with this study, and the Sanitation Department<br />
of the National Health Fo<strong>un</strong>dation (FUNASA) for their<br />
logistic support in the collection of samples. FINANCIAL<br />
SUPPORT: The study received financial support from the<br />
Coordination for the Improvement of Higher Education<br />
Personnel (CAPES), Department of Microbiology and<br />
Parasitology, at the Biomedical Institute (CMB - UFF) and<br />
of the National School of Public Health (ENSP - FIOCRUZ).<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
Artículo Original<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108<br />
Tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica<br />
en Chile. Efectos adversos <strong>de</strong> nifurtimox<br />
VALENCIA C. N. 1 , MANCILLA M. 2 , RAMOS D. 3 , ZULANTAY I. 2 , MOLINA M. 4 , TORRES A. 4 ,<br />
CORRAL G. 5 y APT W. 2<br />
1 Hospital <strong>de</strong> Salamanca, Servicio <strong>de</strong> Salud Coquimbo, IV Región, Chile.<br />
2 Laboratorio <strong>de</strong> Parasitología Básico-Clínico, Programa <strong>de</strong> Biología Celular y Molecular, Instituto <strong>de</strong> Ciencias<br />
Biomédicas. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Universidad <strong>de</strong> Chile.<br />
3 Interno Carrera <strong>de</strong> Medicina. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Universidad <strong>de</strong> Chile.<br />
4 Hospital <strong>de</strong> Combarbalá, Servicio <strong>de</strong> Salud Coquimbo, IV Región, Chile.<br />
5 Hospital <strong>de</strong> Illapel, Servicio <strong>de</strong> Salud Coquimbo, IV Región, Chile.<br />
ABSTRACT<br />
CHEMOTHERAPY OF CHRONIC CHAGAS DISEASE IN CHILE.<br />
ADVERSE EFFECTS OF NIFURTIMOX<br />
Today the only drugs approved for treatment of Chagas disease are nifurtimox (NFx) and benzinazole<br />
(BNZ). To know the adverse effects of NFx a study was conducted in 60 patients with chronic Chagas<br />
disease who were administered the drug at doses of 10 mg/kg/day (but not more than 700 mg/day) during<br />
60 days. 4 cases discontinued treatment, 49 (88.1%) had si<strong>de</strong> effects (21 urban and 28 rural) and 7 (11.6%)<br />
had not clinical manifestations by the therapy. The most frequent adverse effects were: nauseas, epigastric<br />
pain, skin rash, anorexia, asthenia and paresthesia. A high percentages of cases (80.6%) presented low<br />
weight. No modification of the test scores of CBC liver profile due to NFx administration was observed.<br />
It is necessary to perform a strict clinical and laboratory control when the NFx is administrated, always<br />
consi<strong>de</strong>ring co-morbility and inclusion-exclusion criteria.<br />
Key words: Chronic Chagas disease, treatment, nifurtimox, adverse effects.<br />
RESUMEN<br />
Hoy en día, los únicos fármacos aceptados para el tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas, son nifurtimox<br />
Recibido: 5 <strong>de</strong> Febrero <strong>de</strong> 2012. Aceptado: 05 <strong>de</strong> J<strong>un</strong>io <strong>de</strong> 2012.<br />
Correspon<strong>de</strong>ncia: Dr. Werner Apt B.<br />
E-mail: wapt@med.uchile.cl<br />
Dra. Inés Zulantay A.<br />
E-mail: izulanta@med.uchile.cl<br />
Laboratorio <strong>de</strong> Parasitología Básico-Clínico. Programa <strong>de</strong> Biología Celular y Molecular. Instituto<br />
<strong>de</strong> Ciencias Biomédicas. Facultad <strong>de</strong> Medicina. Universidad <strong>de</strong> Chile. Casilla 427. Santiago 3.<br />
Santiago Chile.<br />
Fono-Fax: 56-2-9786122<br />
97
C. N. VALENCIA et al.<br />
(NFx) y benznidazol (BNZ). Con el fin <strong>de</strong> conocer los efectos adversos <strong>de</strong> NFx, se realizó <strong>un</strong> estudio en<br />
60 pacientes con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica a quienes se administró el fármaco a dosis <strong>de</strong> 10mg/kg./día<br />
(sin <strong>sobre</strong>pasar los 700mg/día) por 60 días. 4 casos abandonaron la terapia, 49 (88,1%) presentaron efectos<br />
sec<strong>un</strong>darios (21 pacientes urbanos y 28 rurales) y 7 (11,6%) no presentaron manifestaciones clínicas por<br />
la terapia. Los efectos adversos más frecuentes fueron: náuseas, epigastralgias, rash cutáneos, anorexia,<br />
astenia y parestesias. Un alto porcentaje <strong>de</strong> los casos presentó baja <strong>de</strong> peso. No hubo modificación <strong>de</strong> los<br />
resultados en los exámenes <strong>de</strong> hemograma y perfil hepático por la administración <strong>de</strong>l NFx. Se concluye<br />
que se <strong>de</strong>be efectuar <strong>un</strong> estricto control clínico y <strong>de</strong> laboratorio (monitoreo) al administrar el fármaco,<br />
consi<strong>de</strong>rando siempre co-morbilidad y criterios <strong>de</strong> inclusión-exclusión.<br />
Palabras clave: Enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica, tratamiento, nifurtimox, efectos adversos.<br />
98<br />
INTRODUCCIóN<br />
Después <strong>de</strong> la malaria y la esquitosomiasis, la<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas constituye <strong>un</strong>a <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>s<br />
parasitarias más importantes a nivel<br />
global (Morillo, 2012). En las Américas, existen<br />
actualmente 8 millones <strong>de</strong> individuos que cursan la<br />
fase crónica (WHO, 2006), mientras que en Chile<br />
se estima que existen 142.000 infectados en el área<br />
comprendida entre el límite norte <strong>de</strong> la provincia<br />
<strong>de</strong> Parinacota (latitud sur 18” 30’) y las provincias<br />
centrales <strong>de</strong> O’Higgins y Colchagua (latitud<br />
sur 34” 36’) (Rozas et al., 2005). El propósito <strong>de</strong>l<br />
tratamiento etiológico <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
en los individuos infectados, es eliminar el parásito,<br />
disminuir la posibilidad <strong>de</strong> <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> las<br />
formas clínicas <strong>de</strong> la enfermedad y romper la ca<strong>de</strong>na<br />
<strong>de</strong>l ciclo <strong>de</strong> transmisión (Sosa-Estani et al.,<br />
2006). Al respecto, existe consenso que la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas <strong>de</strong>be ser tratada siempre en niños y<br />
eventualmente en adultos hasta los 50 años <strong>de</strong> edad<br />
(Sosa-Estani et al., 2009; Sosa-Estani et al., 2012).<br />
Sólo dos fármacos recomendados por la OMS, están<br />
disponibles para el tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas: benznidazol (BNZ) y nifurtimox<br />
(NFx), los que pue<strong>de</strong>n originar efectos adversos<br />
que limitan su utilización, <strong>sobre</strong> todo en adultos,<br />
tales como rash alérgicos, paresias, parestesias,<br />
baja <strong>de</strong> peso, anemia y alteraciones <strong>de</strong> las enzimas<br />
hepáticas (Apt 2010; Apt & Zulantay 2011; Matta-<br />
Gue<strong>de</strong>s et al., 2012).<br />
Actualmente, NFx está disponible en Chile a<br />
través <strong>de</strong> los servicios <strong>de</strong> salud, para el tratamiento<br />
<strong>de</strong> casos congénitos, niños menores <strong>de</strong> 15 años,<br />
mujeres en edad fértil y adultos que cursan la fase<br />
crónica inicial e intermedia (hasta los 50 años)<br />
(MINSAL, 2011). Nos parece relevante reportar<br />
la tolerancia y efectos adversos observados en pacientes<br />
con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica tratados<br />
con NFx, proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> <strong>un</strong>a zona endémica <strong>de</strong><br />
Chile.<br />
MATERIAL Y MÉTODOS<br />
Se realizó <strong>un</strong> estudio retrospectivo no experimental<br />
<strong>de</strong> tipo <strong>de</strong>scriptivo longitudinal no randomizado.<br />
Se analizaron fichas clínicas, fichas ad<br />
hoc y registros <strong>de</strong> laboratorio, <strong>de</strong> 75 individuos<br />
con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica proce<strong>de</strong>ntes<br />
<strong>de</strong> zonas urbanas y rurales <strong>de</strong> la Com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca,<br />
Provincia <strong>de</strong> Choapa, IV Región, tratados<br />
entre los años 2009 y 2011. Las dosis <strong>de</strong> NFx fueron<br />
las recomendadas según normativas internacionales<br />
y protocolos nacionales <strong>de</strong> atención <strong>de</strong>l<br />
individuo con enfermedad <strong>de</strong> Chagas (MINSAL,<br />
2011), es <strong>de</strong>cir, cada paciente recibió entre 8 y 10<br />
mg/Kg/peso <strong>de</strong> NFx durante 60 días, el que fue<br />
administrado y controlado por médicos generales<br />
<strong>de</strong> los centros <strong>de</strong> salud urbanos y rurales <strong>de</strong> la red<br />
<strong>de</strong> servicios <strong>de</strong> salud. En esta instancia, se invitó a<br />
<strong>un</strong> grupo <strong>de</strong> personas con infección por Trypanosoma<br />
cruzi confirmada mediante las técnicas serológicas<br />
<strong>de</strong> ELISA e IFI IgG (Zulantay et al., 1998)<br />
a participar, bajo Consentimiento Informado (CI)<br />
aprobado por el Comité <strong>de</strong> Ética <strong>de</strong> la Facultad <strong>de</strong><br />
Medicina, Universidad <strong>de</strong> Chile, a <strong>un</strong> estudio <strong>de</strong><br />
evaluación <strong>de</strong> eficacia <strong>de</strong> NFx (investigaciones en<br />
curso). En 15/75 (20%) pacientes tratados bajo CI<br />
proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> esta com<strong>un</strong>a, la información clínica<br />
y <strong>de</strong> laboratorio relacionada con el tratamiento <strong>de</strong><br />
NFx fue incompleta y no se incluye en este reporte.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
La presentación <strong>de</strong> la información recopilada en el<br />
80% restante, que correspon<strong>de</strong> a 60 pacientes tratados,<br />
se organizó como sigue:<br />
1. Características <strong>de</strong> la población en estudio:<br />
proce<strong>de</strong>ncia (urbana o rural), género, edad y enfermeda<strong>de</strong>s<br />
pre-existentes con fármacos prescritos<br />
no constituyentes <strong>de</strong> exclusión en las normativas<br />
vigentes, tales como cardiopatías, hepatopatías y<br />
nefropatías severas, inm<strong>un</strong>o<strong>de</strong>presión, edad avanzada,<br />
embarazo y lactancia (MINSAL, 2011; Apt &<br />
Zulantay 2011; Matta-Gue<strong>de</strong>s et al., 2012).<br />
2. Tolerancia: clasificada según se establece en Apt<br />
1999 (Tabla 1), que consi<strong>de</strong>ra signos, síntomas y<br />
exámenes <strong>de</strong> laboratorio, como hemograma y perfil<br />
hepático.<br />
3. Descripción <strong>de</strong> efectos sec<strong>un</strong>darios: clasificadas<br />
en manifestaciones digestivas, reacciones cutáneas,<br />
alteraciones neurológicas, alteraciones <strong>de</strong>l aparato<br />
locomotor y otros signos y síntomas inespecíficos.<br />
A<strong>de</strong>más, se incluye registro <strong>de</strong> peso antes y <strong>de</strong>spués<br />
<strong>de</strong> la terapia.<br />
4. Descripción <strong>de</strong> causas <strong>de</strong> suspensión <strong>de</strong> tera-<br />
pia: patologías y condiciones fisiológicas incompatibles<br />
con la terapia.<br />
RESULTADOS<br />
1. Características <strong>de</strong> la población en estudio:<br />
<strong>de</strong>l <strong>un</strong>iverso <strong>de</strong> personas tratadas (n=60), 54 (90%)<br />
son mujeres y 6 (10%) hombres. En la Tabla 2 se<br />
observan las variables etarias, cuya media es <strong>de</strong><br />
41,42 y 48,33 para mujeres y hombres, respectivamente.<br />
Veintíseis (43,3%) pacientes tratados (23<br />
mujeres y 3 hombres), proce<strong>de</strong>n <strong>de</strong> zonas urbanas<br />
y 34 (56,7%) (31 mujeres y 3 hombres) viven en<br />
diferentes localida<strong>de</strong>s rurales <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a, tales<br />
como Chillepín, Tranquilla, Llimpo y El Tambo.<br />
En relación a enfermeda<strong>de</strong>s pre-existentes en el<br />
grupo <strong>de</strong> estudio, se consi<strong>de</strong>raron sólo aquellos que<br />
tenían registro en la ficha clínica y que correspon<strong>de</strong>n<br />
a 26/60 casos (43,33%), 2 hombres y 24 mujeres.<br />
El promedio <strong>de</strong> edad es 46 años (intervalo:<br />
23-59 años). En la Tabla 3, se observan los antece<strong>de</strong>ntes<br />
<strong>de</strong> co-morbilidad que no constituyeron,<br />
según criterio médico y <strong>de</strong> inclusión/exclusión en<br />
las normativas vigentes, motivo <strong>de</strong> exclusión para<br />
el tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica.<br />
Tabla 1. Tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica con nifurtimox en individuos con enfermedad <strong>de</strong><br />
Chagas crónica proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile, 2009-2011.<br />
Criterios <strong>de</strong> tolerancia<br />
Tolerancia Signos o síntomas Hemograma Perfil hepático<br />
Mala Severos Anemia, trombocitopenia,<br />
y leucopenias severas<br />
Regular Leves, mo<strong>de</strong>rados Anemia, trombocitopenia<br />
y leucopenia leves<br />
Buena Ausentes Normal Normal<br />
Enzimas hepáticas aumentadas<br />
<strong>sobre</strong> 2,5 veces<br />
Enzimas hepáticas aumentadas<br />
hasta 2,5 veces<br />
Tabla 2. Variables etarias <strong>de</strong> 60 individuos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica tratados con nifurtimox<br />
proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011)<br />
Variable Mujeres<br />
n = 54<br />
Hombres<br />
n = 6<br />
Edad<br />
Media 41,42 48,33 42,11<br />
Mediana 43,00 52,00 43,00<br />
DS 11,57 9,91 11,53<br />
Mínima 18,00 34,00 18,00<br />
Máxima 60,00 58,00 60,00<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108<br />
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA<br />
99
C. N. VALENCIA et al.<br />
Tabla 3. Antece<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> co-morbilidad registrados en fichas clínicas <strong>de</strong> 60 pacientes tratados con nifurtimox<br />
entre los años 2009 y 2011 proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile, que no constituyeron<br />
criterios <strong>de</strong> exclusión<br />
100<br />
Caso Sexo Edad Patología y/o manifestación clínica<br />
1 H 58 hipertensión, <strong>de</strong>presión, asma<br />
2 M 41 migrañas, colon irritable<br />
3 M 43 hipotiroidismo, diabetes<br />
4 M 47 hipertensión<br />
5 M 45 hipotiroidismo<br />
6 M 31 migrañas<br />
7 M 39 <strong>de</strong>presión<br />
8 M 44 <strong>de</strong>presión<br />
9 M 43 <strong>de</strong>presión<br />
10 M 54 hipertensión, diabetes<br />
11 M 47 <strong>de</strong>presión, colon irritable, gastritis<br />
12* M 59 colopatía<br />
13 M 34 hipertensión<br />
14* M 58 hipertensión<br />
15 M 23 hipertensión<br />
16 M 39 migrañas<br />
17 M 49 reflujo gastroesofágico, dispepsia, miomatosis<br />
18 M 41 hipertensión y soplo cardíaco<br />
19* M 54 artritis<br />
20 M 45 intolerancia a la glucosa y obesidad<br />
21 M 57 hipotiroidismo, hipertensión, diabetes<br />
22 M 52 hipotiroidismo, hipertensión, diabetes<br />
23 H 52 <strong>de</strong>presión<br />
24 M 52 hipertensión, <strong>de</strong>presión<br />
25 M 37 obesidad<br />
26 M 52 <strong>de</strong>presión<br />
*suspensión <strong>de</strong> terapia.<br />
La <strong>de</strong>presión e hipertensión arterial, sola o acompañada<br />
<strong>de</strong> otras patologías, son las principales enfermeda<strong>de</strong>s<br />
pre-existentes que presentaba al inicio <strong>de</strong>l<br />
tratamiento con NFx parte <strong>de</strong>l grupo <strong>de</strong> estudio. En<br />
3/26 casos (11,53%) <strong>de</strong> este grupo <strong>de</strong> pacientes se<br />
suspendió la terapia.<br />
2. Tolerancia: <strong>de</strong> acuerdo a los criterios establecidos<br />
en la Tabla 1 para evaluar tolerancia <strong>de</strong> NFx, fue<br />
posible <strong>de</strong>terminar que sólo en 7 (11,66%) pacientes<br />
<strong>de</strong>l grupo <strong>de</strong> estudio (n = 60) no se observó signos o<br />
síntomas asociados a la administración <strong>de</strong>l fármaco<br />
durante el período <strong>de</strong> tratamiento, mientras que en<br />
49 (88,14%) (Tablas 4 y 5) se presentó al menos <strong>un</strong>a<br />
manifestación clínica que alteró su normal estado<br />
<strong>de</strong> salud. En 9 <strong>de</strong> ellos, fue necesario suspen<strong>de</strong>r la<br />
terapia (18,36%) (Tabla 7). Las manifestaciones<br />
clínicas observadas permitieron <strong>de</strong>terminar que la<br />
tolerancia fue Mala en 9 casos (16,07%), Regular<br />
en 40 (71,43%) y Buena en 7 (12,5%).<br />
En cuanto a las pruebas <strong>de</strong> laboratorio recomendadas<br />
(hemograma y f<strong>un</strong>ción hepática), en 37/60<br />
casos (61,66%) <strong>de</strong>l grupo <strong>de</strong> estudio existe registro<br />
completo o parcial <strong>de</strong> resultados. Sólo en 13 <strong>de</strong><br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
Tabla 4. Registro <strong>de</strong> efectos adversos a nifurtimox en 21 individuos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica<br />
proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> sectores urbanos <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011) 1<br />
Caso Género<br />
(edad)<br />
Manifestaciones<br />
digestivas a<br />
Reacción<br />
cutánea b<br />
Alteraciones<br />
neurológicas c<br />
1 H (58) N C, PA, SÑ, PTM,<br />
AL<br />
Alteracioneslocomotorasd<br />
A, M AS<br />
Otros signos y<br />
síntomas e<br />
2 M (25) N, EL C, D, PTM, PA AS, F, PO,<br />
3 M (45) EL D, PTM, TC T, Ax<br />
4 M (45) EM P C M, A Ax, PO, AS<br />
5 M (54) N, V, EM, DI P, U, R C, PA, TC T, PO, AS,<br />
6 M (24) N, DI C, D, PA, PTM AS, PP, DT<br />
7 M (47) C, DF, EM C, PA, PTM,TC M, A T, AS, Ax, PO, F, DP<br />
8 M (42) EL, DI C<br />
9 M (49) N C, FB, D, PTM AS,TC, MM<br />
10 M (57) EM, DI, T P C, D, PTM M, A AS<br />
11 M (52) N, EM, DI D, PA, C,TC A T, PP, DT, Ax, AS<br />
12 H (52) EL, DI C, D, PTM,TC M, A AS, T<br />
13 M (42) EL MM<br />
14 M (52) N, V, DI C, PA, SÑ, PTM,TC M, A, EDM AS, T, PO, Ax,PP, SS<br />
15* H (56) ES<br />
16** M (60) ES rabdomiolisis<br />
17* M (59) ES, N C<br />
18* M (58) M Ax, AS<br />
19* M (53) R<br />
20* M (58) C,TC AS, F, PO, T, PP<br />
21* M (54) EP, V M<br />
a N: náuseas, V: vómitos, EL, EM, ES: epigastralgia leve, mo<strong>de</strong>rada y severa, DI: diarrea, C: constipación, DF:<br />
disfagia, OF: odinofagia, T: tenesmo.<br />
b R: rash, P: prurito, U: urticaria.<br />
c C: cefalea, PTM: pérdida temporal <strong>de</strong> memoria; PA: parestesia, SÑ: alteración sueño, AL: alucinaciones, D: <strong>de</strong>sconcentración,<br />
FB: fotofobia.<br />
d A: artralgia, M: mialgia, EDM: e<strong>de</strong>ma <strong>de</strong> miembros.<br />
e Ax: anorexia, PO: polidipsia, AS: astenia, F: fiebre, TC: temblores corporales, DT: dolor torácico, SS: sudoración,<br />
TT: tinnitus, PP: palpitaciones, DP: <strong>de</strong>presión, MM: mareos, TQ: taquicardia.<br />
* Suspensión <strong>de</strong> terapia con NFx.<br />
** Caso fatal asociado a NFx. Otros efectos adversos en Tabla 7.<br />
1 Se excluyen 3 casos que no presentaron reacciones adversas y 2 casos que abandonaron tratamiento.<br />
ellos (21,66%), se registran resultados <strong>de</strong> ambas<br />
pruebas antes, durante y <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> la terapia, 2<br />
(3,33%) <strong>de</strong> proce<strong>de</strong>ncia rural. A<strong>un</strong> cuando los 37<br />
pacientes <strong>de</strong>bían registrar resultados <strong>de</strong> al menos 6<br />
<strong>de</strong>terminaciones durante los períodos mencionados<br />
(3 hemogramas y 3 f<strong>un</strong>ciones hepáticas), 78 <strong>de</strong> las<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108<br />
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA<br />
222 <strong>de</strong>terminaciones esperadas (35,13%), no cuentan<br />
con registro (SR). Con resultados parciales <strong>de</strong><br />
hemograma, fue posible <strong>de</strong>terminar que solo <strong>un</strong>o y<br />
dos casos podrían ser indicadores <strong>de</strong> mala y regular<br />
tolerancia, respectivamente. Lo mismo ocurrió con<br />
los resultados <strong>de</strong> perfil hepático, en que sólo <strong>un</strong>o <strong>de</strong><br />
101
C. N. VALENCIA et al.<br />
Tabla 5. Registro <strong>de</strong> efectos adversos a nifurtimox en 28 individuos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica<br />
proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> sectores rurales <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011) 1<br />
Caso Género<br />
(edad)<br />
102<br />
Manifestaciones<br />
digestivas a<br />
Reacción<br />
cutánea b<br />
Alteraciones<br />
neurológicas c<br />
Alteraciones<br />
locomotoras d<br />
Otros signos y<br />
síntomas e<br />
1 M (38) N,V, ES P C,TC M, A AS, PO, F, MM<br />
2 H (52) P C, D, PA, TC M, A AS, PO, SS<br />
3 M (41) N, V, EM, DI C AS, Ax, PO<br />
4 M (43) C, DI C, PA, D PO, TQ, F, Ax<br />
5 M (47) N, EM, OF C, D,TC M, A AS, PO<br />
6 M (31) C, D, PTM, PA M, A AS, PO<br />
7 M (39) N, DI D, PA M, A AS<br />
8 M (44) N, EM, DI P C, D, PTM, TC M, A AS, PO<br />
9 M (43) N, V, DI C, D, SÑ, FB, TC M, A AS, DP, PO, Ax, MM<br />
10 M (32) N Ax, PO<br />
11 M (31) N AS, PO<br />
12 M (24) N, V, DI C, D M, A PO, F, AS<br />
13 M (34) D, N, V, EM C M, A AS, Ax<br />
14 M (23) N, V, EM U, R C, D, TC M, A A, PO, Ax, F<br />
15 M (39) N, V, EM P C, TC M, A A, TQ, Ax, PO<br />
16 H (34) P PO, SS<br />
17 M (41) N, EM U, P C, PA, D M, A F, AS, PO, MM<br />
18 M (23) N, V, DI, EM R C, D, TC M, A AS, PO, F, MM<br />
19 M (25) N PA AS, TC, PO, DT<br />
20 M (45) N, EM C, D, PA, PTM AS<br />
21 M (52) N, D, EM C, D, PTM, SÑ M F<br />
22 M (23) N, V, EM Ax, PO<br />
23 M (37) N C PO, MM<br />
24 M (34) N, V, EM C, D, TC M, A AS, PO<br />
25 M (36) N AS, PO<br />
26* M (54) ES, N, V R, P C, TC M, A F, AS, PO, MM<br />
27* M (52) ES, N, V C, D, PA M, A AS, PO, F, DT<br />
28 H (38) N TC<br />
a N: náuseas, V: vómitos, EL, EM, ES: epigastralgia leve, mo<strong>de</strong>rada y severa, DI: diarrea, C: constipación, OF:<br />
odinofagia.<br />
b R: rash, P: prurito, U: urticaria.<br />
c C: cefalea, PTM: pérdida temporal <strong>de</strong> memoria; PA: parestesia, SÑ: alteración sueño, D: <strong>de</strong>sconcentración, FB:<br />
fotofobia.<br />
d A: artralgia, M: mialgia.<br />
e Ax: anorexia, PO: polidipsia, AS: astenia, F: fiebre, TC: temblores corporales, DT: dolor torácico, SS: sudoración,<br />
DP: <strong>de</strong>presión, MM: mareos, TQ: taquicardia<br />
* Suspensión <strong>de</strong> terapia con NFx.<br />
1 Se excluyen 4 casos que no presentaron reacciones adversas y 2 casos que abandonaron tratamiento.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
Tabla 6. Diferencia (DIF) entre el peso corporal <strong>de</strong> inicio <strong>de</strong> tratamiento (PCIT) y término <strong>de</strong> tratamiento<br />
(PCTT) con nifurtimox en 46 individuos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> sectores rurales<br />
<strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011)<br />
Caso Sexo Edad PCIT PCTT DIF Caso Sexo Edad PCIT PCTT DIF<br />
1 M 38 68 62 -6 24 M 23 53 49 -4<br />
2 H 58 71 67 -4 25 M 39 79 74 -5<br />
3 H 52 71 66 -5 26 H 34 74 66 -8<br />
4 M 25 60 57 -3 27 M 49 55 55 0<br />
5 M 41 70 65 -5 28 M 41 72 65 -7<br />
6 M 45 67 64 -3 29 M 23 45 45 0<br />
7 M 43 73 67 -6 30 M 33 90 86 -4<br />
8 M 43 80 76 -4 31 M 25 60 57 -3<br />
9 M 47 62 58 -4 32 M 45 85 80 -5<br />
10 M 45 76 76 0 33 M 57 62 56 -6<br />
11 M 31 70 72 +2 34 M 28 66 66 0<br />
12 M 39 50 46 -4 35 M 52 62 56 -6<br />
13 M 44 58 54 -4 36 M 52 68 68 0<br />
14 M 43 74 58 -16 37 M 45 65 65 0<br />
15 M 32 60 52 -8 38 H 52 83 75 -8<br />
16 M 54 93 87 -6 39 M 23 60 55 -5<br />
17 M 50 53 51 -2 40 M 37 74 68 -6<br />
18 M 24 70 67 -3 41 H 60 81 74 -7<br />
19 M 47 80 72 -8 42 M 34 70 65 -5<br />
20 M 42 70 69 -1 43 M 36 60 55 -5<br />
21 M 31 75 72 -3 44 M 42 84 79 -5<br />
22 M 24 58 53 -5 45 H 38 75 80 +5<br />
23 M 34 62 56 -6 46 M 52 49 43 -6<br />
los resultados disponibles podría ser indicador <strong>de</strong><br />
mala tolerancia a NFx.<br />
Finalmente, 4/60 casos <strong>de</strong>l grupo <strong>de</strong> estudio<br />
(6,66%) abandonaron el tratamiento. Si bien no<br />
existe registro a<strong>de</strong>cuado <strong>de</strong> las causas, entrevistas<br />
personales con los pacientes permitieron <strong>de</strong>tectar<br />
mala tolerancia y/o adherencia al fármaco.<br />
3. Descripción <strong>de</strong> efectos sec<strong>un</strong>darios: en las Tablas<br />
4 y 5, se <strong>de</strong>scribe en <strong>de</strong>talle los efectos adversos<br />
asociados a NFx en individuos con enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas crónica proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> áreas urbanas<br />
o rurales, respectivamente. Las manifestaciones<br />
digestivas, presentes en 43 pacientes (72,88%),<br />
fueron náuseas, vómitos, epigastralgias, diarrea,<br />
constipación, disfagia y tenesmo. Las reacciones<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108<br />
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA<br />
cutáneas observadas en 13 casos (22,03%), correspondieron<br />
a prurito, rash cutáneo, urticaria y<br />
cambios <strong>de</strong> color <strong>de</strong> la piel. Los problemas <strong>de</strong> origen<br />
neurológico fueron observados en 37 pacientes<br />
(62,71%) y abarcaron <strong>de</strong>s<strong>de</strong> cuadros leves <strong>de</strong><br />
<strong>de</strong>sconcentración hasta problemas más serios como<br />
parestesia y pérdida <strong>de</strong> memoria. Veintíseis casos<br />
(44,06%), manifestaron algún tipo <strong>de</strong> alteración<br />
<strong>de</strong>l aparato locomotor, como mialgias, artralgias,<br />
dolor y calambres con dificultad para caminar. En<br />
44 pacientes (74,57%), se presentaron, <strong>de</strong> acuerdo<br />
con los registros observados y consultas realizadas,<br />
manifestaciones clínicas inespecíficas.<br />
En relación a la variación <strong>de</strong> peso corporal al<br />
inicio y al finalizar la administración <strong>de</strong> NFx, <strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
total <strong>de</strong> 46 pacientes con registros <strong>de</strong> peso corporal<br />
103
C. N. VALENCIA et al.<br />
en los dos períodos, 38 (82,60%) tuvieron <strong>un</strong>a<br />
disminución <strong>de</strong> peso corporal. La mayor diferencia<br />
entre el peso inicial y <strong>de</strong> término, se observó en <strong>un</strong><br />
paciente <strong>de</strong> 43 años, sexo femenino, que perdió 16<br />
kg durante los dos meses <strong>de</strong> terapia (Tabla 6).<br />
4. Causas <strong>de</strong> suspensión <strong>de</strong> terapia: en la Tabla 7,<br />
se <strong>de</strong>scriben las causas <strong>de</strong> suspensión <strong>de</strong> NFx registradas<br />
en 9 casos <strong>de</strong>l estudio. Entre las manifestaciones<br />
clínicas <strong>de</strong>stacan alteraciones <strong>de</strong>l aparato<br />
digestivo, sistema nervioso central y periférico, reacciones<br />
cutáneas adversas y problemas <strong>de</strong>l aparato<br />
locomotor. Un caso fatal, cuya muerte se ha asociado<br />
a la administración <strong>de</strong> NFx, correspon<strong>de</strong> a <strong>un</strong>a<br />
mujer <strong>de</strong> 60 años tratada bajo CI, que presentó entre<br />
otras alteraciones, eritro<strong>de</strong>rmia y rabdomiolisis<br />
masiva con falla renal (caso 2, Tabla 7). Los antece<strong>de</strong>ntes<br />
clínicos, farmacológicos y co-morbilidad<br />
entre otros, se encuentran bajo revisión.<br />
104<br />
DISCUSIóN<br />
La base <strong>de</strong> todo tratamiento médico en el que se<br />
utilizan fármacos con potenciales efectos adversos,<br />
es la calidad <strong>de</strong>l proceso terapéutico en todos sus<br />
aspectos. El uso <strong>de</strong>l NFx en el tratamiento <strong>de</strong> la<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas requiere <strong>de</strong>l establecimiento<br />
<strong>de</strong> estrictos criterios <strong>de</strong> inclusión y exclusión,<br />
análisis <strong>de</strong> co-morbilidad y fármacos prescritos,<br />
correcta dosificación <strong>de</strong>l medicamento, control<br />
<strong>de</strong> la administración, a<strong>de</strong>cuada farmacovigilancia<br />
<strong>de</strong> reacciones adversas a medicamentos (RAM),<br />
consejería al paciente y entrenamiento <strong>de</strong>l equipo<br />
<strong>de</strong> salud a cargo, entre otros factores relevantes <strong>de</strong>l<br />
proceso.<br />
En cuanto a la <strong>de</strong>finición <strong>de</strong> los criterios <strong>de</strong> selección<br />
para el tratamiento con NFx, está contraindicado<br />
en embarazo, lactancia, alcoholismo crónico,<br />
hepatopatías, nefropatías y hemopatías graves<br />
(Rodrigues & De Castro, 2002; Apt & Zulantay,<br />
2011). En este reporte, <strong>un</strong> 43,33% <strong>de</strong> los pacientes<br />
tratados registran antece<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> co-morbilidad<br />
pre-existente, no obstante, no se evi<strong>de</strong>nció la presencia<br />
<strong>de</strong> patologías o estado fisiológico que contraindicara<br />
la utilización <strong>de</strong> NFx. Respecto al límite<br />
etario <strong>de</strong> los adultos con enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
crónica que reciben tratamiento con medicamentos<br />
tripanocidas, las normativas nacionales e internacionales<br />
recomiendan el tratamiento etiológico a<br />
infectados no mayores a 50 años, informando a<strong>de</strong>cuadamente<br />
<strong>sobre</strong> los beneficios y efectos adversos<br />
potenciales <strong>de</strong> las drogas utilizadas (Bern et al.,<br />
2007; Viotti et al., 2012). Otros estudios con NFx<br />
Tabla 7. Descripción <strong>de</strong> las causas <strong>de</strong> suspensión <strong>de</strong> terapia con nifurtimox registradas en 9 individuos con<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> sectores urbanos y rurales <strong>de</strong> la com<strong>un</strong>a <strong>de</strong> Salamanca, IV<br />
Región, Chile (2009-2011)<br />
Caso Sexo Edad Proce<strong>de</strong>ncia Causas <strong>de</strong> suspensión<br />
1 H 56 Urbano epigastralgia severa<br />
2 M 60 Urbano eritro<strong>de</strong>rmia, rabdomiolisis masiva, falla renal,<br />
neumonia, shock séptico, muerte<br />
3 M 59 Urbano epigastralgia severa, náuseas, cefalea<br />
4 M 58 Urbano anorexia, astenia, mialgias<br />
5 M 53 Urbano rash cutáneo generalizado<br />
6 M 54 Urbano epigastralgia severa, náuseas, vómitos, polidipsia,<br />
cefalea, mialgias, artralgias, fiebre, mareos, astenia,<br />
rash cutáneo<br />
7 M 52 Rural epigastralgia severa, náuseas, vómitos, cefalea,<br />
<strong>de</strong>sconcentración, paresias, astenia, polidipsia, fiebre,<br />
dolor torácico<br />
8 M 58 Urbano cefalea, astenia, fiebre, polidipsia, temblores, palpitaciones<br />
9 M 54 Urbano epigastralgia severa, vómitos, mialgias<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
y BNZ, han incluido pacientes entre 50 y 60 años<br />
(Lauria-Pires et al, 2000; Fabbro De Suasnabar et<br />
al., 2000). Otros ensayos clínicos con BNZ y placebo,<br />
incorporan individuos entre 18 y 75 años <strong>de</strong><br />
edad (Matta-Gue<strong>de</strong>s et al., 2012). En el presente<br />
estudio, 19/60 pacientes (31,66%) y cuyas eda<strong>de</strong>s<br />
fluctuaban entre 51 y 60 años <strong>de</strong> edad, recibieron<br />
NFx bajo los criterios médicos y <strong>de</strong> inclusión/exclusión<br />
establecidos. Nueve <strong>de</strong> ellos (47,3%) registran<br />
suspensión <strong>de</strong> terapia (Tabla 7), concordante<br />
con la literatura que <strong>de</strong>scribe mejor tolerancia <strong>de</strong><br />
NFx en lactantes y niños pequeños (Freilij & Altcheh,<br />
1995; Guhl, 2000; Apt, 2010; Altcheh et al.,<br />
2011; Apt & Zulantay, 2011). La diferencia <strong>de</strong> tolerancia<br />
al NFx según edad, no ha sido explicada<br />
a<strong>de</strong>cuadamente y la posibilidad <strong>de</strong> que la producción<br />
<strong>de</strong> metabolitos tóxicos juegue <strong>un</strong> rol importante<br />
en este aspecto, no ha sido evaluada (Altcheh et<br />
al., 2012).<br />
En pacientes con co-morbilidad registrada al<br />
inicio <strong>de</strong> la terapia con NFx (n = 26), el 96,15%<br />
presentó efectos adversos durante el tratamiento.<br />
La administración <strong>de</strong> fármacos específica para estas<br />
patologías paralelo al uso <strong>de</strong> tripanocidas pue<strong>de</strong><br />
resultar contraproducente, por tanto, no sólo se<br />
<strong>de</strong>bería excluir en el tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas crónica a pacientes con los criterios <strong>de</strong><br />
exclusión establecidos hasta ahora, sino a<strong>de</strong>más, a<br />
aquellos pacientes que requieran recibir fármacos<br />
durante el tratamiento que afectasen el metabolismo<br />
<strong>de</strong>l tripanocida (Rodríguez-Guardado et al., 2012)<br />
y por consiguiente el resultado <strong>de</strong> la terapia. La<br />
diabetes se registró en el 26% <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>s<br />
preexistentes observadas en el presente estudio,<br />
siendo la mayoría <strong>de</strong> los casos mujeres. En esto<br />
hay <strong>un</strong>a clara concordancia, ya que la diabetes<br />
es <strong>un</strong>a co-morbilidad muy frecuente en la mujer<br />
con enfermedad <strong>de</strong> Chagas, complicando muchas<br />
veces la evolución <strong>de</strong> la cardiopatía, acelerando<br />
su evolución <strong>de</strong>sfavorable (Gimenez & Mitelman,<br />
2009). Entre 1999 y 2010, se realizó <strong>un</strong> estudio<br />
para evaluar la acción <strong>de</strong>l BNZ en pacientes adultos<br />
con enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica y se consi<strong>de</strong>ró<br />
a la hipertensión como <strong>un</strong>o <strong>de</strong> los criterios para<br />
excluir a los pacientes <strong>de</strong>l tratamiento tripanocida<br />
(Riarte et al., 2012). Toda co-morbilidad requiere<br />
<strong>de</strong> medicación y se <strong>de</strong>be consi<strong>de</strong>rar que las<br />
interacciones medicamentosas son causantes <strong>de</strong><br />
4,4% <strong>de</strong> todas las hospitalizaciones atribuidas<br />
a fármacos representando el 4,6% <strong>de</strong> todas las<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108<br />
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA<br />
RAM en pacientes hospitalizados (Gac, 2012). Si<br />
comparamos las eda<strong>de</strong>s medias <strong>de</strong> los pacientes<br />
que presentaron co-morbilida<strong>de</strong>s vs los que no<br />
las presentaron al inicio <strong>de</strong> la terapia con NFx, la<br />
diferencia es importante, la media <strong>de</strong> los pacientes<br />
que presentaron co-morbilidad fue <strong>de</strong> 46 años,<br />
superando levemente el promedio <strong>de</strong> edad <strong>de</strong>l<br />
grupo <strong>de</strong> estudio (42 años) y la media <strong>de</strong> 39 años<br />
<strong>de</strong> pacientes sin comorbilidad. El número <strong>de</strong><br />
medicamentos recibidos y la edad avanzada, es <strong>un</strong><br />
factor clave en la frecuencia <strong>de</strong> aparición <strong>de</strong> efectos<br />
adversos a medicamentos (Gac, 2012).<br />
En relación a las pruebas <strong>de</strong> laboratorio recomendadas<br />
antes <strong>de</strong> iniciar tratamiento con NFx, las<br />
pruebas <strong>de</strong> f<strong>un</strong>ción hepática y hemograma <strong>de</strong>ben<br />
ser normales. Se consi<strong>de</strong>ra motivo <strong>de</strong> exclusión <strong>de</strong><br />
la terapia con tripanocidas, pacientes que presenten<br />
aspartato aminotransferasa (AST) o alanina aminotransferasa<br />
(ALT) > 2,5 veces el límite superior<br />
normal en el momento <strong>de</strong>l tamizaje y la creatinina<br />
sérica no <strong>de</strong>be ser > 2,5 mg/dl (Montoya, 2000;<br />
Morillo, 2012). Apt (1999) <strong>de</strong>scribe que para <strong>de</strong>tectar<br />
efectos sec<strong>un</strong>darios en el uso <strong>de</strong> tripanocidas<br />
se <strong>de</strong>ben realizan tests <strong>de</strong> bilirrubinemia, colesterol<br />
total, AST, ALT y fosfatasas alcalinas, no sólo antes<br />
<strong>de</strong> la terapia, sino que <strong>un</strong>a vez al mes <strong>de</strong> iniciada<br />
ésta y hasta 30 días <strong>de</strong>spués al término <strong>de</strong>l tratamiento.<br />
Asimismo, otras fuentes coinci<strong>de</strong>n en realizar<br />
controles al inicio, a los 15/20 días y al terminar<br />
la terapia, incluyendo entre las pruebas <strong>de</strong> laboratorio,<br />
hemograma, creatinina o urea y transaminasas,<br />
a<strong>de</strong>más, <strong>de</strong> prueba <strong>de</strong> embarazo en púberes y<br />
adultas. En el presente estudio 37/60 pacientes <strong>de</strong>l<br />
grupo <strong>de</strong> estudio presentaron registros completos o<br />
parciales <strong>de</strong> hemograma y f<strong>un</strong>ción hepática. En los<br />
23 restantes no se obtuvo registro <strong>de</strong> su realización.<br />
Si bien más <strong>de</strong>l 80% <strong>de</strong> las pruebas <strong>de</strong> laboratorio<br />
disponibles pre-tratamiento con NFx fueron normales,<br />
no es posible concluir su utilidad <strong>de</strong>bido a<br />
registros insuficientes durante y al término <strong>de</strong> la<br />
terapia, sugiriendo la a<strong>de</strong>cuada solicitud y registro<br />
<strong>de</strong> pruebas <strong>de</strong> laboratorio en el control <strong>de</strong> tolerancia<br />
por NFx.<br />
BNZ y NFx son en la actualidad los únicos<br />
medicamentos disponibles para la infección por T.<br />
cruzi (Morel & Lazdins, 2003; Sosa-Estani et al.,<br />
2009; MINSAL, 2011; Morillo, 2012). El NFx tiene<br />
acción tripanocida contra las formas tripomastigote<br />
y amastigote <strong>de</strong>l T. cruzi, se absorbe bien por<br />
vía oral, dif<strong>un</strong><strong>de</strong> con rapi<strong>de</strong>z a los tejidos y se meta-<br />
105
C. N. VALENCIA et al.<br />
boliza ab<strong>un</strong>dantemente, eliminándose los metabolitos<br />
por riñón. Sus niveles séricos son bajos (llegando<br />
su pico en 3,5 h), por lo que pue<strong>de</strong> suponerse<br />
<strong>un</strong> volumen <strong>de</strong> distribución amplio (Flores, 1997;<br />
Vives et al., 2004). Las tasas <strong>de</strong> respuesta terapéutica<br />
<strong>de</strong>l NFx <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>n <strong>de</strong> la fase <strong>de</strong> la enfermedad,<br />
en los casos <strong>de</strong> infección crónica el grado <strong>de</strong> evi<strong>de</strong>ncia<br />
se reduce consi<strong>de</strong>rablemente, llegándose a<br />
conseguir <strong>un</strong>as tasas <strong>de</strong> curación entre el 15 y el<br />
40% (Bern, 2011).<br />
El tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
en pacientes adultos en fase crónica aún es<br />
<strong>un</strong>a interrogante en el control <strong>de</strong> esta zoonosis<br />
endémica. Si a las cifras <strong>de</strong> curación insuficientes<br />
mencionadas, se agrega la elevada tasa <strong>de</strong> efectos<br />
adversos, que en aproximadamente <strong>un</strong> 20% <strong>de</strong> los<br />
casos obliga a suspen<strong>de</strong>r la medicación, se reduce<br />
consi<strong>de</strong>rablemente la tasa <strong>de</strong> éxito <strong>de</strong>l medicamento<br />
(Urbina & Docampo, 2003; Molina et al., 2012).<br />
Del total <strong>de</strong> 60 pacientes en estudio, 9 (15%)<br />
suspendieron su terapia, 4 (6,66%) abandonaron<br />
por mala tolerancia o adherencia, en 49 (81,66%)<br />
existe registro <strong>de</strong> más <strong>de</strong> <strong>un</strong> efecto adverso, 1 caso<br />
falleció por causas eventualmente asociadas a la<br />
administración con NFx y sólo en 7 (11,66%) no se<br />
presentaron efectos adversos. En este estudio, los<br />
problemas <strong>de</strong> salud que presentaron los pacientes<br />
durante el tratamiento fueron diversos, concordante<br />
con las investigaciones que se han realizado <strong>de</strong>s<strong>de</strong><br />
1969 en casos agudos y crónicos <strong>de</strong> la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas administrando NFx (Rodrigues &<br />
De Castro, 2002). Otros estudios con altas tasas <strong>de</strong><br />
efectos adversos y suspensión temprana <strong>de</strong>l tratamiento<br />
también avalan las observaciones realizadas<br />
en el presente estudio (Morel & Lazdins, 2003;<br />
Sosa-Estani et al., 2004; Molina et al., 2012).<br />
Los efectos colaterales <strong>de</strong> NFx más frecuentes<br />
son anorexia, pérdida <strong>de</strong> peso, alteraciones psíquicas,<br />
excitabilidad o la somnolencia, polineuropatía<br />
periférica, <strong>de</strong>rmatitis alérgica, mialgias, artralgias y<br />
manifestaciones digestivas, como náusea, diarrea,<br />
vómito y cólico intestinal (Stoppani, 1999; Faún<strong>de</strong>z<br />
et al., 2005; Sosa-Estani et al., 2009). La actividad<br />
anti-T. cruzi <strong>de</strong> BZN y NFx, así como su<br />
toxicidad, es consecuencia <strong>de</strong> la reducción <strong>de</strong> su<br />
grupo nitro por el sistema citocromo P450 lo que<br />
podría dar lugar a toxicidad aditiva (Pérez-Molina<br />
et al., 2012). En este estudio, las alteraciones cutáneas<br />
tuvieron <strong>un</strong>a frecuencia aproximada <strong>de</strong> 26%<br />
durante el tratamiento, mientras que Apt (1999)<br />
106<br />
reporta la observación en el 30% <strong>de</strong> los casos, <strong>de</strong><br />
<strong>de</strong>rmatitis atópica leve o severa, por lo general <strong>de</strong>spués<br />
<strong>de</strong>l noveno día <strong>de</strong> tratamiento. Pérez-Molina<br />
et al., (2012), <strong>de</strong>scribe <strong>un</strong> 83,3% <strong>de</strong> pacientes con<br />
reacciones adversas asociadas a NFx, <strong>de</strong> los cuales,<br />
el 27,8% suspendió el fármaco, principalmente<br />
por intolerancia gastrointestinal y/o alteraciones<br />
<strong>de</strong>l sistema nervioso periférico. Los resultados obtenidos<br />
en nuestro estudio son concordantes con lo<br />
<strong>de</strong>scrito, ya que más <strong>de</strong>l 85% <strong>de</strong> los 60 casos tratados<br />
con NFx presentaron efectos adversos.<br />
En relación a los antece<strong>de</strong>ntes registrados en<br />
los pacientes tratados con NF, sin duda, la pérdida<br />
<strong>de</strong> peso corporal es <strong>un</strong> elemento <strong>de</strong> especial interés<br />
médico. En este sentido, Vives et al., (2004), señalan<br />
que posterior a <strong>un</strong> tratamiento prolongado, la<br />
anorexia pue<strong>de</strong> ser tan severa como para ocasionar<br />
pérdida <strong>de</strong> peso que obligue a la suspensión <strong>de</strong>l<br />
tratamiento. Del mismo modo, terapias sin <strong>un</strong>a<br />
supervisión a<strong>de</strong>cuada <strong>de</strong>l peso corporal y el ajuste<br />
<strong>de</strong> las dosis <strong>de</strong> NFx podrían eventualmente inducir<br />
al abandono temprano <strong>de</strong> la terapia.<br />
Recientemente, Pérez-Molina et al., (2012),<br />
<strong>de</strong>terminan tolerancia a NFx, basados en la graduación<br />
<strong>de</strong> los efectos adversos según criterios <strong>de</strong>l<br />
National Cancer Institute (CTCAE; Versión 3.0,<br />
2006). Sus resultados <strong>de</strong> tolerancia son Buena:<br />
16,6%, Regular: 55,6% y Mala: 27,8%. En nuestro<br />
estudio se mantiene la ten<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> presentación<br />
<strong>de</strong> tolerancia en el or<strong>de</strong>n <strong>de</strong> regular > mala > buena,<br />
según los criterios para <strong>de</strong>terminar la tolerancia<br />
<strong>de</strong>scritos en la Tabla 1. En el presente estudio,<br />
muchos pacientes con tolerancia regular al NFx,<br />
cumplieron con la terapia por <strong>de</strong>cisión personal y/o<br />
apoyo familiar, a pesar <strong>de</strong> haber referido síntomas<br />
severos durante todo el tratamiento.<br />
El presente estudio permite concluir que las<br />
RAM atribuibles o no, al uso <strong>de</strong> NFx, pue<strong>de</strong>n aparecer<br />
en cualquier momento <strong>de</strong> la terapia; los pacientes<br />
presentan, al mismo tiempo, más <strong>de</strong> <strong>un</strong> tipo<br />
<strong>de</strong> reacción adversa, limitando <strong>de</strong> <strong>sobre</strong>manera su<br />
calidad <strong>de</strong> vida y/o <strong>de</strong>sempeño laboral; la inci<strong>de</strong>ncia<br />
<strong>de</strong> efectos adversos por NFx en pacientes con<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica, podría estar relacionada<br />
con la presencia <strong>de</strong> co-morbilida<strong>de</strong>s; el tratamiento<br />
<strong>de</strong> la hipertensión, diabetes y el hipotiroidismo<br />
j<strong>un</strong>to al uso <strong>de</strong> NFx forman <strong>un</strong>a interacción<br />
medicamentosa que <strong>de</strong>s<strong>de</strong> el p<strong>un</strong>to <strong>de</strong> vista farmacológico,<br />
requiere evaluación, así mismo, trastornos<br />
<strong>de</strong>presivos o antece<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> <strong>de</strong>presión ante-
ior, podrían exacerbar los efectos sec<strong>un</strong>darios <strong>de</strong><br />
NFx. Por otra parte, la edad <strong>de</strong> los pacientes influiría<br />
en la presentación <strong>de</strong> las RAM, sin embargo, <strong>un</strong><br />
promedio <strong>de</strong> edad bajo los 50 años, no presenta diferencia<br />
significativa en la aparición <strong>de</strong> efectos adversos<br />
asociados al NFx. La disminución <strong>de</strong>l peso<br />
corporal podría aumentar la inci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> efectos<br />
sec<strong>un</strong>darios y/o agravar otros, sino se ajusta la dosis<br />
<strong>de</strong> NFx al nuevo peso durante los 60 días que dura<br />
la administración <strong>de</strong>l fármaco; según lo observado,<br />
no existe <strong>un</strong>a relación sexo-presentación <strong>de</strong> RAM<br />
atribuibles al NFx, lo mismo ocurre con la proce<strong>de</strong>ncia<br />
<strong>de</strong> los pacientes; las pruebas <strong>de</strong> laboratorio<br />
<strong>de</strong>ben constituir <strong>un</strong> parámetro tangible que requiere<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong>a solicitud a<strong>de</strong>cuada y mejores registros; la<br />
tolerancia <strong>de</strong> NFx es regular; se requiere a<strong>de</strong>cuada<br />
farmacovigilancia y acompañamiento <strong>de</strong>l paciente<br />
por parte <strong>de</strong>l equipo <strong>de</strong> salud; educación continua<br />
<strong>de</strong> los equipos <strong>de</strong> salud incluido los procedimientos<br />
<strong>de</strong> notificación por RAM que aparezcan durante o<br />
<strong>de</strong>spués <strong>de</strong> la terapia con NFx a fin <strong>de</strong> suspen<strong>de</strong>r la<br />
administración <strong>de</strong>l fármaco cuando sea necesario.<br />
Este trabajo, se enmarca en el estudio <strong>de</strong> evaluación<br />
<strong>de</strong> eficacia parasitológica <strong>de</strong> NFx para el<br />
tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica<br />
(Proyecto Fon<strong>de</strong>cyt 1100768, Zulantay I., Apt W.<br />
et al., 2010-2013). Consi<strong>de</strong>ramos <strong>de</strong> relevancia informar<br />
a la com<strong>un</strong>idad científica <strong>de</strong> los hallazgos<br />
observados en este estudio, con el fin <strong>de</strong> contribuir<br />
a la discusión en relación a los efectos adversos y<br />
al costo-beneficio <strong>de</strong> NFx en el tratamiento <strong>de</strong> la<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica.<br />
REFERENCIAS<br />
1. ALTCHEH J, MOSCATELLI G, MORONI S, GAR-<br />
CÍA-BOURNISSEN F, FREILIJ H. 2011. Adverse<br />
events after the use of benznidazole in infants and children<br />
with Chagas disease. Pediatrics 127: 212-218.<br />
2. ALTCHEH J, MOSCATELLI G, MORONI S, MAS-<br />
TRANTONIO G, MARSON E, GARCÍA F. 2012. Estudios<br />
farmacológicos <strong>de</strong> benznidazol y nifurtimox en<br />
niños y mujeres lactantes con enfermedad <strong>de</strong> Chagas.<br />
In: VIII Taller <strong>sobre</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas importada:<br />
avances en el tratamiento antiparasitario. Barcelona,<br />
España. Pág. 40-44.<br />
3. APT W. 1999. Tratamiento <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas.<br />
Parasitol al Día 23: 3-4.<br />
4. APT W. 2010. Current and <strong>de</strong>veloping therapeutic<br />
agents in the treatment of Chagas disease. Drug Des<br />
Dev Ther 4: 243-253.<br />
5. APT W, ZULANTAY I. 2011. Estado actual en el tratamiento<br />
<strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas. Rev Med Chile<br />
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA<br />
139: 247-257.<br />
6. BERN C, MONTGOMERY S, HERWALDT B, RASI<br />
A, MARIN-NETO J, DANTAS R. 2007. Evaluation<br />
and treatment of Chagas disease in the United States: a<br />
systematic review. JAMA 298: 2171-2181.<br />
7. BERN C. 2011. Antitrypanosomal therapy for chronic<br />
Chagas’ disease. N Engl J Med 364: 2527-3254.<br />
8. Common Terminology Criteria for Adverse Events<br />
v3.0 (CTCAE) Versión 3.0 2006. Available in: http://<br />
ctep.cancer.gov/protocolDevelopment/electronic_<br />
applications/docs/ctcaev3.pdf [Consulta 6-07-2012].<br />
9. FABBRO DE SUASNABAR D, ARIAS E, STREIGER<br />
M, et al. 2000 Evolutive behavior towards cardiomyopathy<br />
of treated (nifurtimox or benznidazole) and <strong>un</strong>treated<br />
chronic chagasic patients. Rev Inst Med Trop<br />
Sao Paulo 42: 99-109.<br />
10. FAUNDEZ M, PINO L, LETELIER P, ORTIZ C, LÓ-<br />
PEZ R, SEGUEL C, et al. 2005. Buthionine Sulfoximine<br />
Increases the Toxicity of Nifurtimox and Benznidazole<br />
to Trypanosoma cruzi. Antimicrob Agents<br />
Chemother 49: 126-130.<br />
11. FLORES C. 1997. Farmacología humana. 3ra edición.<br />
Masson, S.A. Ed. Barcelona, España Pág. 1228-1230.<br />
12. FREILIJ H, ALTCHEH J. 1995. Congenital Chagas’<br />
disease: diagnostic and clinical aspects. Clin Infect Dis<br />
21: 551-555.<br />
13. GAC H. 2012. Polifarmacia y morbilidad en adultos<br />
mayores. Rev Med Clin 23: 36-41.<br />
14. GIMÉNEZ L, MITELMAN J. 2009. La Mujer y la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas. Simposio <strong>de</strong>l Comité <strong>de</strong> Chagas<br />
<strong>de</strong> FAC. http://www.fac.org.ar/6cvc/llave/c063/gimenezl.php<br />
[Consulta 10-05-2012].<br />
15. GUHL F. 2000. Enfermedad <strong>de</strong> Chagas o Tripanosomiasis<br />
Americana. Rev Med 53: 87-95.<br />
16. LAURIA-PIRES L, BRAGA MS, VExENAT AC, et<br />
al. 2000. Progressive chronic Chagas heart disease ten<br />
years after treatment with anti-Trypanosoma cruzi nitro<strong>de</strong>rivates.<br />
Am J Trop Med Hyg 63: 111-118.<br />
17. MATTA-GUEDES PM, GUTIÉRREZ FR, NASCI-<br />
MIENTO MS, DO-VALLE-MATTA MA, SILVA JS.<br />
2012. Antiparasitical chemotherapy in Chagas disease<br />
cardiomyopathy: current evi<strong>de</strong>nce. Trop Med Int<br />
Health E-pub J<strong>un</strong>e 2012.<br />
18. MINSAL. 2011, Guía <strong>de</strong> Diagnóstico, Tratamiento y<br />
Prevención <strong>de</strong> la Enfermedad <strong>de</strong> Chagas. Santiago,<br />
Chile.<br />
19. MOLINA I, GÓMEZ J, SALVADOR F, TREVIÑO B.<br />
2012. Evaluación <strong>de</strong> posaconazol como nuevo agente<br />
contra la enfermedad <strong>de</strong> Chagas. In: VIII Taller <strong>sobre</strong><br />
la enfermedad <strong>de</strong> Chagas importada: avances en el<br />
tratamiento antiparasitario. Barcelona, España. Pág.<br />
21-22.<br />
20. MONTOYA R. 2000. Tratamiento etiológico <strong>de</strong> la<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas. Rev Med 53: 134-140.<br />
21. MOREL CM, LAZDINS J. 2003. Chagas disease. Nat<br />
Rev Microbiol 1: 14-15.<br />
22. MORILLO C. 2012. The benznidazole evaluation for<br />
interrupting tripanosomiasis. In: VIII Taller <strong>sobre</strong> la<br />
enfermedad <strong>de</strong> Chagas importada: avances en el tratamiento<br />
antiparasitario. Barcelona, España. Pág. 35-39.<br />
23. PÉREZ-MOLINA JA, SOJO-DORADO J, NORMAN<br />
F, MONGE-MAILLO B, DÍAZ-MENÉNDEZ M, AL-<br />
BAJAR-VIÑAS P, et al. 2012. Tolerabilidad al nifurti-<br />
107
C. N. VALENCIA et al.<br />
mox en pacientes con reacciones <strong>de</strong> hipersensibilidad<br />
al benznidazol. In: VIII Taller <strong>sobre</strong> la enfermedad <strong>de</strong><br />
Chagas importada: avances en el tratamiento antiparasitario.<br />
Barcelona, España. Pág. 27-28.<br />
24. RIARTE A, VELáZQUEZ E, PRADO N, SCHIJ-<br />
MAN AG, RAMÍREZ JC, DE RISSIO M, et al. 2012.<br />
“TRAENA” tratamiento en pacientes adultos. Una evaluación<br />
preliminar <strong>de</strong> <strong>un</strong> ensayo clínico aleatorizado<br />
con benznidazol en la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica.<br />
In: VIII Taller <strong>sobre</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas importada:<br />
avances en el tratamiento antiparasitario. Barcelona,<br />
España. Pág. 30-35.<br />
25. RODRIGUES J, DE CASTRO S. 2002. A Critical<br />
Review on Chagas Disease Chemotherapy. Mem Inst<br />
Oswaldo Cruz 97: 3-24.<br />
26. RODRÍGUEZ-GUARDADO A, RODRÍGUEZ M, PÉ-<br />
REZ F, CARCABA V, CARTON J. 2012. Prevención<br />
<strong>de</strong> las reacciones adversas asociadas al benznidazol<br />
mediante el uso combinado <strong>de</strong> dosis escalonadas y <strong>de</strong>xclorfeniramina.<br />
In: VIII Taller <strong>sobre</strong> la enfermedad <strong>de</strong><br />
Chagas importada: avances en el tratamiento antiparasitario.<br />
Barcelona, España. Pág. 26-27.<br />
27. ROZAS M, BOTTO-MAHAN C, CORONADO x,<br />
ORTIZ S, CATTAN P. 2005. Short report: Trypanosoma<br />
cruzi infection in wild mammals from a Chagasic area<br />
of Chile. Am J Trop Med Hyg 73: 517-519.<br />
28. SOSA-ESTANI S, ARMENTI A, ARAUJO G, VIOT-<br />
TI R, LOCOCO B, RUIZ-VERA B, et al. 2004. Tratamiento<br />
<strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas con benznidazol y<br />
ácido tióctico. Medicina 64: 1-6.<br />
29. SOSA-ESTANI, SEGURA E. 2006. Etiological treatment<br />
in patients infected by Trypanosoma cruzi:<br />
experiences in Argentina. Curr Opin Infect Dis 19: 583-<br />
587.<br />
30. SOSA-ESTANI S, VIOTTI R, SEGURA L. 2009. Therapy,<br />
diagnosis and prognosis of chronic Chagas disease:<br />
insight gained in Argentina. Mem Inst Oswaldo<br />
Cruz 104: 167-180.<br />
108<br />
31. SOSA-ESTANI, COLANTONIO L, SEGURA L. 2012.<br />
Therapy of Chagas disease: implications for levels of<br />
prevention. J Trop Med 2012: Epub Mar 5.<br />
32. STOPPANI A. 1999. Quimioterapia <strong>de</strong> la enfermedad<br />
<strong>de</strong> Chagas. Medicina 59: 147-165.<br />
33. URBINA JA, DOCAMPO R. 2003. Specific chemotherapy<br />
of Chagas disease: controversies and advances.<br />
Trends Parasitol 19: 495-501.<br />
34. VIOTTI R, VIGLIANO C, LOCOCO B, PETTI M,<br />
BERTOCCHI G, ALVEREZ MG. 2012. Nuevas evi<strong>de</strong>ncias<br />
<strong>de</strong> efectividad <strong>de</strong>l tratamiento antiparasitario<br />
en la enfermedad <strong>de</strong> Chagas crónica. In: VIII Taller <strong>sobre</strong><br />
la enfermedad <strong>de</strong> Chagas importada: avances en el<br />
tratamiento antiparasitario. Barcelona, España. Pág.11-<br />
16.<br />
35. VIVES E, VENTRIGLIA M, MEDVEDOVSKY D,<br />
ROTHLIN R. Farmacología II: nitroimidazoles y nitrofuranos<br />
2004; http://farmacomedia.files.wordpress.<br />
com/2010/05/nitroimidazoles-y nitrofuranos.pdf [Consulta<br />
11- 10 - 2011].<br />
36. World Health Organization (WHO). 2006. Estimación<br />
cuantitativa <strong>de</strong> la enfermedad <strong>de</strong> Chagas en las Américas.<br />
OPS/HDM/CD/425-06, Pan American Health<br />
Organization (PAHO), Washington, DC, USA.<br />
37. ZULANTAY I, APT W, RODRÍGUEZ J, VENEGAS J,<br />
SáNCHEZ G. 1998. Serologic evaluation of treatment<br />
of chronic Chagas disease with allopurinol and itraconazole.<br />
Rev Med Chile 126: 265-270.<br />
Agra<strong>de</strong>cimientos: Este estudio fue financiado por los Proyectos<br />
FONDECYT 1100768 (Inés Zulantay A.) y 1120382<br />
(Werner Apt B.). Los autores agra<strong>de</strong>cen en forma especial a<br />
todo el personal <strong>de</strong> salud <strong>de</strong> los centros hospitalarios urbanos<br />
y rurales <strong>de</strong> la provincia <strong>de</strong> Choapa por su disposición<br />
en la atención <strong>de</strong> los pacientes con enfermedad <strong>de</strong> Chagas<br />
crónica.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
Crónica<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 109<br />
NUEVO DIRECTORIO DE LA SOCIEDAD ESPAÑOLA DE PARASITOLOGÍA<br />
(SOCEPA) (www.socepa.es)<br />
Durante la realización <strong>de</strong> la Asamblea <strong>de</strong> la Sociedad Española <strong>de</strong> Parasitología celebrada durante el xII<br />
Congreso Ibérico <strong>de</strong> Parasitología realizado en Zaragoza, se realizó <strong>un</strong>a sesión especial para elegir su nuevo<br />
Directorio:<br />
El nuevo Directorio quedó constituido por las siguientes personas:<br />
Presi<strong>de</strong>nte: Prof. Dr. Antonio Os<strong>un</strong>a Carrillo <strong>de</strong> Albornoz.<br />
Instituto <strong>de</strong> Biotecnología, Universidad <strong>de</strong> Granada.<br />
Vicepresi<strong>de</strong>nte: Profa. Dra. Cristina Arias Fernán<strong>de</strong>z. Facultad <strong>de</strong> Ciencias, Universidad <strong>de</strong> Vigo.<br />
Secretario: Prof. Dr. Enrique Martínez Carretero.<br />
Parasitología y Enfermeda<strong>de</strong>s Parasitarias. Facultad <strong>de</strong> Farmacia. Universidad <strong>de</strong> la<br />
Lag<strong>un</strong>a.<br />
Vocales: Prof. Dr. álvaro Martínez Moreno.<br />
Facultad <strong>de</strong> Veterinaria, Córdoba<br />
Prof. Dr. Antonio Muro álvarez.<br />
Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Salamanca.<br />
Prof. Dr. Jorge Martínez Quesada.<br />
Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Vitoria.<br />
Prof. Dr. Antonio Clavel Parrilla.<br />
Facultad <strong>de</strong> Medicina, Zaragoza.<br />
Prof. Dr. Carlos Feliu.<br />
Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Barcelona.<br />
Prof. Dra. Natividad Díez Baños.<br />
Facultad <strong>de</strong> Veterinaria, León.<br />
Prof. Dr. Rafael Toledo Navarro.<br />
Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Valencia.<br />
Prof. Dra. Carmen Cuellar <strong>de</strong>l Hoyo.<br />
Facultad <strong>de</strong> Farmacia, Madrid.<br />
Prof. Dr. José Manuel González Molina.<br />
Facultad <strong>de</strong> Veterinaria, Las Palmas<br />
Editor alterno: Dr. Antonio Os<strong>un</strong>a Carrillo <strong>de</strong> Albornoz.<br />
Secretaria <strong>de</strong> edición: Prof. Dra. Susana Vílchez Tornero.<br />
Instituto <strong>de</strong> Biotecnología, Universidad <strong>de</strong> Granada. www.ibtugr.es.<br />
109
NORMAS DE PUBLICACIóN<br />
1. Los trabajos serán remitidos a:<br />
1.1 Secretaria <strong>de</strong> Edición, Prof. Dra. Susana Vilchez<br />
Tornero, Instituto <strong>de</strong> Biotecnología Universidad <strong>de</strong><br />
Granada, Campus Universitario <strong>de</strong> Fuentenueva,<br />
18071 Granada España. E-mail: svt@ugr.es<br />
1.2 Editor Prof. Héctor Alcaíno, Casilla 9183, Santiago<br />
1, Chile. E-mail: hectoralcaino@gmail.com<br />
2. Los autores <strong>de</strong>berán remitir el manuscrito <strong>de</strong>l<br />
trabajo, que será original y aceptado por todos los<br />
autores, mediante <strong>un</strong> soporte informático, a ser posible<br />
en formato RTF, Microsoft Word (DOC) u Openoffice<br />
(ODT).<br />
3. La Revista Ibero-Latinoamericana <strong>de</strong> Parasitología<br />
no dispone limitación en el número <strong>de</strong> páginas<br />
<strong>de</strong> los trabajos, siempre que la información aportada<br />
lo justifique.<br />
4. ESTILO:<br />
- Los trabajos podrán ser escritos en español, portugués<br />
o inglés (la Comisión Editorial aconseja este<br />
último idioma), <strong>de</strong>ben remitirse usando <strong>un</strong>a fuente<br />
Times New Roman tamaño 12 y con márgenes <strong>de</strong>recho<br />
e izquierdo <strong>de</strong> 3 cm, normas que <strong>de</strong>ben guardar<br />
también las cabeceras <strong>de</strong> tablas y pies <strong>de</strong> figuras. Todas<br />
las páginas <strong>de</strong>berán ser numeradas consecutivamente,<br />
tablas y figuras incluidas.<br />
- Las letras en cursiva se utilizarán para los nombres<br />
científicos <strong>de</strong> géneros y especies, así como para<br />
palabras en idioma distinto al que se escribe.<br />
- Cuando se cite <strong>un</strong>a especie por primera vez en el<br />
texto, se hará con su nombre científico completo.<br />
- Para nombrar las enfermeda<strong>de</strong>s se seguirán las<br />
normas publicadas por Kassai T., Cor<strong>de</strong>ro M.,<br />
Euzeby J., Gaafar, S., Hiepe Th. and Himonas,<br />
C.A. 1988. Standardized Nomenclature of Animal<br />
Parasitic Diseases (SNOAPAD). Vet Parasitol 29:<br />
299-326, las cuales están aceptadas por la SEP.<br />
- Los números <strong>de</strong>l <strong>un</strong>o al diez, se escribirán con<br />
letras (nueve), salvo si prece<strong>de</strong>n a <strong>un</strong>a <strong>un</strong>idad <strong>de</strong><br />
medida (4 m) o se utilizan como marcadores (día<br />
3). Los números mayores <strong>de</strong> diez se escribirán con<br />
letras únicamente cuando vayan al principio <strong>de</strong> <strong>un</strong><br />
párrafo. Los números que <strong>sobre</strong>pasen las <strong>un</strong>ida<strong>de</strong>s<br />
<strong>de</strong> millar se anotarán, <strong>un</strong>iformemente en ambas<br />
lenguas, sin signos <strong>de</strong> p<strong>un</strong>tuación, ejemplo “10000<br />
y no 10.000 o 10,000”. Por su parte los números<br />
<strong>de</strong>cimales se anotarán siguiendo la forma “xx’xx<br />
(xx.xx), según se trate <strong>de</strong> textos en español o inglés”.<br />
Igualmente, <strong>de</strong>ben evitarse números muy largos,<br />
como “(250000000), escribiendo 250 millones o 2,5<br />
x 10 8 ”.<br />
- Las horas <strong>de</strong>l día se nombrarán <strong>de</strong> “0 a 24 (18 h y<br />
no 6 p.m.)”.<br />
110<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112<br />
- Los años se expresarán <strong>de</strong> forma completa (por<br />
ejemplo “1999-2000 y no 1999-00”).<br />
- Las abreviaturas podrán usarse, siempre claras y<br />
carentes <strong>de</strong> ambigüedad. Las abreviaturas <strong>de</strong> uso<br />
muy frecuente, no necesitarán <strong>de</strong>letrearse previamente:<br />
“ADP, AMP, ATP, bp, kDa, cpm, D.F., ADN,<br />
Fig., g, h, i.m., i.p., mAb, min, NAD, NADH, no.,<br />
pH, p.i., %, ARN, sec, sp., spp., s.c., s.d., s.e., OMS,<br />
etc.”<br />
- Los artículos constarán <strong>de</strong> los siguientes apartados,<br />
a menos que la naturaleza <strong>de</strong>l trabajo requiera otra<br />
estructura:<br />
A) Página <strong>de</strong> título: Constará <strong>de</strong>:<br />
- Título.<br />
- Título abreviado ( A r<strong>un</strong>ning title)<br />
- Nombre(s) <strong>de</strong> autor(es) y su centro <strong>de</strong> trabajo,<br />
subrayando el autor para correspon<strong>de</strong>ncia:<br />
REINA D., SERRANO F.J. y NAVARRETE I.<br />
Parasitología. Facultad <strong>de</strong> Veterinaria. 10071 Cáceres.<br />
España.<br />
- Autor para correspon<strong>de</strong>ncia: Nombre, dirección<br />
completa, teléfono, fax y dirección electrónica.<br />
B) Resumen y Abstract (siempre en español e<br />
inglés), no excediendo <strong>de</strong> 200 palabras; Palabras<br />
Clave y Key words (en número máximo <strong>de</strong> seis en<br />
cada idioma),<br />
C) Introducción, Material y Métodos, Resultados<br />
- Discusión.<br />
D) Referencias:<br />
Se relacionarán únicamente los artículos citados<br />
en el texto.<br />
Las referencias <strong>de</strong> las publicaciones <strong>de</strong>berán ir<br />
numeradas y se hará <strong>de</strong> la manera siguiente:<br />
1. ALLENDE A, SELMA MV, LÓPEZ-GáLVEZ F,<br />
VILLAESCUSA R, GIL MI. 2008. Impact of wash<br />
water quality on sensory and microbial quality,<br />
including Escherichia coli cross-contamination, of<br />
fresh-cut escarole. J Food Prot 71: 2514-2518.<br />
Cuando varios artículos <strong>de</strong>l mismo o <strong>de</strong> los<br />
mismos autores hayan sido publicados el mismo año<br />
serán citados como “Brown (1980 a, b). Las referencias<br />
a observaciones no publicadas, resúmenes<br />
o publicaciones en preparación, <strong>de</strong>berán ser<br />
excepcionales, apareciendo sólo en el texto como<br />
“com. pers.”. La relación bibliográfica <strong>de</strong>berá ser<br />
or<strong>de</strong>nada alfabéticamente por autores, incluyendo<br />
el título completo <strong>de</strong>l trabajo y según los mo<strong>de</strong>los<br />
siguientes:<br />
Artículos en revistas:<br />
SERRANO F., PÉREZ-MARTÍN J.E., REINA D.,<br />
NAVARRETE I., KAPEL C.M.O. 2000. Influence
of infection intensity on predilection sites in swine<br />
trichinellosis. J Helminthol 73: 251-254.<br />
Libros y publicaciones no periódicas:<br />
NAVARRETE I., CALERO R., REINA D., SERRA-<br />
NO F. 1989. Programa <strong>de</strong> Acciones contra la Trichinellosis.<br />
Servicio <strong>de</strong> Publicaciones Universidad <strong>de</strong><br />
Extremadura. Cáceres/Badajoz.<br />
Artículos en libros:<br />
ARROWOOD M.J. 1997. Diagnosis. In: Cryptosporidium<br />
and Cryptosporidiosis (Ronald Fayer,<br />
Ed.). CRC Press. Boca Ratón. USA., 43-64.<br />
Tesis Doctorales:<br />
FRONTERA E. 2000. Repercusiones orgánicas <strong>de</strong><br />
la infección experimental por Ascaris suum en el<br />
cerdo ibérico. Tesis Doctoral, Universidad <strong>de</strong> Extremadura.<br />
España.<br />
Trabajos no publicados: (Se citarán únicamente si<br />
han sido aceptados para su publicación).<br />
SERRANO F.J., REINA D., FRONTERA E.,<br />
NAVARRETE I., ROEPSTORFF A. Resistance<br />
against migrating Ascaris suum larvae in pigs<br />
imm<strong>un</strong>ized with adult worm antigens. Parasitology<br />
(en prensa).<br />
Las abreviaturas <strong>de</strong> los nombres <strong>de</strong> las revistas<br />
estarán <strong>de</strong> acuerdo con las indicaciones <strong>de</strong> los<br />
Journal Citation Reports (JCR); en caso <strong>de</strong> no estar<br />
incluidas en esa relación, se citará con el nombre<br />
completo.<br />
E) Tablas y Figuras:<br />
Se presentarán en página aparte, perfectamente<br />
numeradas y con referencia, en el reverso, al primer<br />
autor y al título <strong>de</strong>l trabajo. Deberán tener suficiente<br />
calidad para que cuando se reduzcan a los formatos<br />
<strong>de</strong> <strong>un</strong>a o dos columnas (8 ó 16 cm, respectivamente)<br />
conserven suficiente niti<strong>de</strong>z. En el manuscrito<br />
<strong>de</strong>berá aparecer <strong>un</strong>a llamada <strong>de</strong>stacada (ejemplo:<br />
AQUÍ TABLA 2), para la colocación <strong>de</strong> cada tabla o<br />
figura en su lugar en el texto.<br />
5. El autor, <strong>un</strong>a vez aceptado para su publicación el<br />
trabajo, recibirá <strong>un</strong>a prueba <strong>de</strong> imprenta para que sea<br />
corregida, y <strong>de</strong>berá <strong>de</strong>volverla antes <strong>de</strong> diez días. En<br />
caso <strong>de</strong> que el autor introduzca modificaciones sustanciales<br />
en el texto aceptado por el comité editorial,<br />
los gastos correrían a su cargo.<br />
6. El autor podrá recibir separatas <strong>de</strong> su trabajo, previo<br />
pago <strong>de</strong> su importe. Así mismo, las reproducciones<br />
<strong>de</strong> figuras en color, serán por cuenta <strong>de</strong> los autores.<br />
7. El Comité <strong>de</strong> Redacción se reserva el <strong>de</strong>recho<br />
<strong>de</strong> hacer alg<strong>un</strong>as correcciones <strong>de</strong> forma cuando lo<br />
estime necesario<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112<br />
NORMAS DE PUBLICACIÓN<br />
8. Los autores <strong>de</strong>berán pagar la suma <strong>de</strong> 10 US<br />
por cada página impresa que ocupe el trabajo<br />
en la revista. Esta cantidad se pagará cuando se<br />
com<strong>un</strong>ique a los autores que el trabajo está aceptado<br />
para su publicación.<br />
INSTRUCTION TO AUTHORS<br />
1. Papers should be sent to:<br />
1.1 Edition Secretary, Prof. Dra. Susana Vilchez<br />
Tornero, Instituto <strong>de</strong> Biotecnología Universidad <strong>de</strong><br />
Granada, Campus Universitario <strong>de</strong> Fuentenueva,<br />
18071 Granada España. E-mail: svt@ugr.es<br />
1.2 Editor Prof. Héctor Alcaíno, Casilla 9183, Santiago<br />
1, Chile. E-mail: hectoralcaino@gmail.com<br />
2. Authors should be submitted the manuscript,<br />
which will be original and accepted by all the<br />
named authors, in an electronic copy. The format is<br />
MS Word (DOC), Openoffice (ODT) or Ritch Text<br />
Format (RTF).<br />
3. Ibero-Latin American Journal of Parasitology<br />
haven’t lower limit on manuscript size, provi<strong>de</strong>d<br />
that sufficient essential information is given. Unnecessarily<br />
long papers will be returned to the authors<br />
for revision.<br />
4. STYLE:<br />
- Manuscripts should be in Spanish, Portuguese or<br />
English, typewritten using Times New Roman 12,<br />
with 3 cm left and right margin, including figure<br />
and table headings. All pages should be numbered<br />
consecutively, figures and tables inclu<strong>de</strong>d.<br />
- The italic typeface should be reserved for scientific<br />
names of genera and species, and also for words<br />
typewritten in a different to the mean paper language.<br />
- Species names should be given in full on first<br />
appearance in the text.<br />
- Parasitic disease will be named according to: Kassai<br />
T., Cor<strong>de</strong>ro M., Euzeby J., Gaafar S., Hiepe Th.<br />
and Himonas C.A. 1988. Standardized Nomenclature<br />
of Animal Parasitic Diseases (SNOAPAD). Vet<br />
Parasitol 29: 299-326.<br />
- Numbers one to ten should be written as words<br />
<strong>un</strong>less they prece<strong>de</strong> a measurement <strong>un</strong>it (e.g. 4 m) or<br />
serve as markers (e.g. day 3). Numbers larger than<br />
ten should only be written as words at the beginning<br />
of a sentence.<br />
- Large numbers should be set out without commas,<br />
<strong>un</strong>iformly and in both languages (e.g. 10000 not<br />
10,000 or 10.000). On the other hand, <strong>de</strong>cimal<br />
number will appear following the type xx.xx.<br />
Equally, very large numbers should be avoi<strong>de</strong>d, e.g.<br />
250 million or 2.5 x 10 8 and not 250 000 000.<br />
- Times should be expressed according to a 24-h<br />
111
NORMAS DE PUBLICACIÓN<br />
clock (e.g. authors should write 18.00 rather than 6<br />
p.m.).<br />
- Years should not be abridged to the last two figures<br />
(e.g. 1999-2000 rather than 1999-00 should be used).<br />
- Abbreviations should be used sparingly and<br />
<strong>un</strong>ambiguously. The following abbreviations are<br />
commonly used and need not be spelled out: ADP,<br />
AMP, ATP, bp, kDa, cpm, D.F., DNA, Fig., g, h<br />
(hour), i.m., i.p., mAb, min, NAD, NADH, no., pH,<br />
p.i., %, RNA, sec, sp., spp., s.c., s.d., s.e., WHO.<br />
- Articles will consist of the following sections,<br />
<strong>un</strong>less its structure makes any of them red<strong>un</strong>dant:<br />
A) Title-page:<br />
- A concise but informative full title.<br />
- A r<strong>un</strong>ning title<br />
- Name(s) of author(s) and working Centre. Corresponding<br />
author’s name should be <strong>un</strong><strong>de</strong>rlined.<br />
REINA D., SERRANO F.J. and NAVARRETE I.<br />
Parasitología. Facultad <strong>de</strong> Veterinaria. 10071<br />
Cáceres. España.<br />
- Corresponding author: Name, complete address,<br />
phone, fax and e-mail address.<br />
B) Abstract and Resumen.<br />
Always in English and Spanish, no more than 200<br />
words; Key words and Palabras Clave (a maximum<br />
of six key words for each language).<br />
C) Introduction, Material and Methods, Results,<br />
Discussion.<br />
D) References:<br />
The list of references will be composed only by<br />
articles cited in the text.<br />
References should be numbered and will be cited as<br />
follow:<br />
1. ALLENDE A, SELMA MV, LÓPEZ-GáLVEZ F,<br />
VILLAESCUSA R, GIL MI. 2008. Impact of wash<br />
water quality on sensory and microbial quality,<br />
including Escherichia coli cross-contamination, of<br />
fresh-cut escarole. J Food Prot 71: 2514-2518.<br />
When several papers by the same author(s) have<br />
been published in the same year, they should be cited<br />
as “Brown (1980 a, b). References to <strong>un</strong>published<br />
observations, abstracts or papers in preparation<br />
should only be cited in exceptional circumstances,<br />
and should be cited only as “pers. com.” (personal<br />
comm<strong>un</strong>ication). References must be listed in<br />
alphabetical or<strong>de</strong>r of the author’s name and the title<br />
of the paper should be given in full.<br />
Articles should conform to the following formats:<br />
Journal articles:<br />
SERRANO F., PÉREZ-MARTÍN J.E., REINA D.,<br />
NAVARRETE I.,KAPEL C.M.O. 2000. Influence<br />
112<br />
of infection intensity on predilection sites in swine<br />
trichinellosis. J Helminthol 73: 251-254.<br />
Books and other non-periodical publications:<br />
NAVARRETE I., CALERO R., REINA D., SE-<br />
RRANO F. 1989. Programa <strong>de</strong> Acciones contra la<br />
Trichinellosis. Servicio <strong>de</strong> Publicaciones Universidad<br />
<strong>de</strong> Extremadura. Cáceres/ Badajoz.<br />
Chapter in edited books:<br />
ARROWOOD M.J. 1997. Diagnosis. In: Cryptosporidium<br />
and Cryptosporidiosis (Ronald Fayer,<br />
Ed.). CRC Press. Boca Ratón. USA., 43-64.<br />
Doctoral Theses:<br />
FRONTERA E. 2000. Repercusiones orgánicas<br />
<strong>de</strong> la infección experimental por Ascaris suum en<br />
el cerdo ibérico. Tesis Doctoral, Universidad <strong>de</strong><br />
Extremadura.<br />
Unpublished works: (This should only be cited if it<br />
has been accepted for publication and be styled as<br />
follows).<br />
SERRANO F.J., REINA D., FRONTERA E.,<br />
NAVARRETE I., ROEPSTORFF A. Resistance<br />
against migrating Ascaris suum larvae in pigs<br />
imm<strong>un</strong>ized with adult worm antigens. Parasitology<br />
(In press).<br />
Abbreviations of Journal titles should conform<br />
to those of the Journal Citation Reports (JCR); if<br />
Journal is not in<strong>de</strong>xed full name of Journal should<br />
be noted.<br />
E) Figure and Table headings:<br />
In a separate page, perfectly numbered and with a<br />
reference in the reverse to both the first author and<br />
the title of the paper. Their approximate inten<strong>de</strong>d<br />
location in the text should be marked clearly in the<br />
manuscript (eg. HERE FIG. 2). Figures and tables<br />
may be accepted provi<strong>de</strong>d that they are of a high<br />
quality such us to fit neatly into one column (80 mm)<br />
or two columns (166 mm) maintaining its quality.<br />
5. The gallery proofs of each paper will be sent in due<br />
course to the author(s) for correction and should be<br />
returned within ten days of receipt. Expenses incurred<br />
as results of substantial modifications to the original<br />
text at this stage will be charged to the author(s).<br />
6. Authors could be supplied with offprints of their<br />
paper, charging its full value.<br />
7. The Redaction Committee reserves its right to<br />
make some form corrections when necessary.<br />
8. Authors must pay the equivalent sum of 10 USD<br />
per each printed page in the Journal. This amo<strong>un</strong>t<br />
must be paid when the paper is accepted.<br />
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112