(Eh) y metanólico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de ...

CONTINUACIÓN DE PARASITOLOGÍA LATINOAMERICANA Y REVISTA IBÉRICA DE PARASITOLOGÍA
ARTÍCULOS ORIGINALES
• Chagas disease in a wormy world.
• Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol de aislados
de Trypanosoma cruzi obtenidos de pacientes venezolanos con
enfermedad de Chagas infectados por mecanismos de transmisión
oral y vectorial.
• Edad del hospedero en la evolución de la infección experimental
con Trypanosoma cruzi en un modelo murino.
• Parasitosis en Gran Canaria (España). Estudio prospectivo
multicéntrico durante un año.
• Evaluación de la actividad biológica de los extractos hexanólico
(Eh) y metanólico (Em) de Pera distichophylla sobre un aislado de
Acanthamoeba spp. proveniente de una úlcera corneal.
• Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico (Ec) de Pera
distichophylla . sobre un aislado de Acanthamoeba spp productor de
úlcera corneal.
• Comparación del efecto de moxidectina e ivermectina sobre
nematodos y la ganancia de peso en bovinos en Jalisco, México.
• Aspectos epidemiológicos da Theileriose equina e sua relação
com o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus em duas
propriedades na região da campanha do Rio Grande do Sul -
Brasil.
• Estudio comparativo de la eficacia terapéutica de oxitetraciclina,
imidocarb y diminazeno,utilizados en el tratamiento de
hemoparasitosis en equinos pura sangre de carrera.
• Detección de ooquistes de Cryptosporidium spp. en la planta de
tratamiento de aguas residuales “Taiguaiguay” del Estado Aragua,
Venezuela año 2011.
• Comparative study of parasitological techniques and ELISA for
.
analysis of environmental samples, RJ, Brazil.
• Tratamiento de la enfermedad de Chagas crónica en Chile. Efectos
adversos de nifurtimox.
VERSIÓN: ISSN 0718-8730
VOLUMEN 71 ENERO - JUNIO 2012 Núm 1
ORGANO OFICIAL
DE LA FEDERACIÓN
LATINOAMERICANA
DE PARASITÓLOGOS
SOCIEDAD
ESPAÑOLA DE
PARASITOLOGÍA

Revista
Ibero-Latinoamericana
de Parasitología
Volumen 71 Nº 1 - 2012
Órgano oficial de la Federación Latinoamericana de Parasitólogos
y de la Sociedad Española de Parasitología
ISSN: 0718-8730

Producción:
María Cristina Illanes H.
mcristina@editorialiku.cl
Prohibida su reproducción total o parcial sin autorización del editor.
2

REVISTA IBERO-LATINOAMERICANA DE PARASITOLOGIA
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3

Contenido
4
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 4
ARTÍCULOS ORIGINALES
- Chagas disease in a wormy world.
Galán-Puchades M.T. and Osuna A. .............................................................................................. 5
- Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol de aislados de Trypanosoma cruzi
obtenidos de pacientes venezolanos con enfermedad de Chagas infectados por
mecanismos de transmisión oral y vectorial.
Muñoz-Calderón A., Santaniello A., Pereira A., Yannuzzi J., Díaz-Bello Z. y Alarcón de Noya B. 14
- Edad del hospedero en la evolución de la infección experimental con Trypanosoma cruzi en
un modelo murino.
Zúñiga C., Binder N., Paláu M.T., Larenas J. y Vergara U. ........................................................... 23
- Parasitosis en Gran Canaria (España). Estudio prospectivo multicéntrico durante un año.
Novo-Veleiro I., Martín-Sánchez A M., Elcuaz-Romano R., Muro A, Afonso- Rodríguez O.,
García-Bardeci D., Bordes-Benítez A., Carranza-Rodríguez C., Hernández-Cabrera M.,
Alvela-Suárez L. y Pérez-Arellano J. L. ........................................................................................ 34
- Evaluación de la actividad biológica de los extractos hexanólico (Eh) y metanólico (Em)
de Pera distichophylla sobre un aislado de Acanthamoeba spp. proveniente de
una úlcera corneal.
Dorla A., Wagner C. M., Pérez de G. M. V., Blanco de M. J., Galindo M. V., Nessi A.,
Vethencourt M. A., Bandes A., Guzmán de R. C. T. ........................................................................ 42
- Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico (Ec) de Pera distichophylla sobre un
aislado de Acanthamoeba spp productor de úlcera corneal.
Wagner C. M., Salazar L. S., Dorla A., Pérez de G. M. V., Blanco de M. J., Galindo M. V.,
Nessi A., Vethencourt M. A., Bandes A., Guzmán de R. C.T. ......................................................... 55
- Comparación del efecto de moxidectina e ivermectina sobre nematodos y la ganancia de peso
en bovinos en Jalisco, México.
Quiroz R. H., Mateos R. A., Gómez F. L. E., Cruz M. I., Ulloa-Arvizu R....................................... 62
- Aspectos epidemiológicos da Theileriose equina e sua relação com o carrapato
Rhipicephalus (Boophilus) microplus em duas propriedades na região da campanha do Rio
Grande do Sul - Brasil.
Torres Al. J., Finger I. S., Farias N. A. R., Nizoli L. Q., Silva S. S. e Nogueira C. W.................... 70
- Estudio comparativo de la eficacia terapéutica de oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno,
utilizados en el tratamiento de hemoparasitosis en equinos pura sangre de carrera.
Morales A., Villoria D., Romero N., Morales G., Kassar M., Arrieta D. y Comerma S. ............... 78
- Detección de ooquistes de Cryptosporidium spp. en la planta de tratamiento de aguas
residuales “Taiguaiguay” del Estado Aragua, Venezuela año 2011.
Medina C., Moncada E., González A., Rueda M. y Rojas G. ......................................................... 83
- Comparative study of parasitological techniques and ELISA for analysis of environmental
samples, RJ, Brazil.
Da Silva Barbosa A., Antunes Uchôa C. M., Laurentino da Silva V., Nascimento Duarte A.,
Bandeira Viannaa M., Monteiro Fonseca A. B. and Pereira Bastos O. M. ................................... 90
- Enfermedad de Chagas crónica en Chile. Efectos adversos de nifurtimox.
Valencia C. N., Mancilla M., Ramos D., Zulantay I., Molina M., Torres A., Corral G. y Apt W. .. 97
CRóNICA
- Nueva Directiva de SOCEPA ......................................................................................................... 109

Artículo Original
Chagas Disease in a Wormy World
GALáN-PUCHADES M.T. 1 and OSUNA A. 2
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
1 Department of Parasitology, Faculty of Pharmacy, University of Valencia, 46100 Burjassot (Valencia), Spain.
2 Group of Biochemistry and Molecular Parasitology, Institute of Biotechnology, University of Granada, 18071
Granada, Spain.
ABSTRACT
Most hosts, including humans, are infected with multiple parasites. Helminth infection can bias the
human immune response towards a T-helper type 2 over a type 1 response, impairing the host’s ability
to control concurrent intracellular microparasite infections, such as Trypanosoma cruzi. We have revised
literature with the aim to search evidence on the interactions between worms and T. cruzi, to ascertain
if this co-infection could alter: i) the susceptibility to acquire Chagas disease; ii) the progression of the
disease; and iii) the probability of congenital transmission. As a result of a human autopsy survey, people
who harbored co-infection with cysticercosis and T. cruzi had a longer life expectancy than those who
harbored only one of the two parasites or none, and Chagas disease was 10 times more frequent in patients
co-infected with cysticercosis. Dogs suffering from Chagas disease only, showed impaired heart lesions
compared with those presenting co-infection with Dirofilaria immitis. Chronic helminth infections in
mice showed a significant influence in the susceptibility to T. cruzi. In primates co-infected with T. cruzi
and helminths the differences found in T. cruzi seroprevalence and the infection profile were the result of
concomitant helminth infections since all typed isolates were the same. Co-infections with helminths and T.
cruzi can interact and influence the immune responses to and clinical outcomes of Chagas disease. Studies
addressing these interactions are needed both in humans and animal models.
Key words: Chagas disease, Trypanosoma cruzi, polyparasitism, helminths, co-infection.
RESUMEN
LA ENFERMEDAD DE CHAGAS EN UN MUNDO DE HELMINTOS
La mayoría de los hospedadores están infectados con más de una especie parásita. Las infecciones
por helmintos tienen la capacidad de desviar la respuesta inmune humana hacia el tipo Th-2, sobre el
Th-1, afectando así la habilidad del hospedador por controlar parásitos intracelulares como Trypanosoma
Received: 9 March 2012. Accepted: 16 April 2012.
Corresponding: Maria Teresa Galán-Puchades: Department of Parasitology, Faculty of Pharmacy,
University of Valencia, Av. Vicent Andrés Estellés s/n, 46100 Burjasssot (Valencia),
Spain. Phone: (34) 963544536. Fax: (34) 963544769.
E-mail: mteresa.galan@uv.es
5

M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA
cruzi. Hemos revisado la literatura buscando evidencias sobre la interacción entre helmintos y T. cruzi
para establecer si esta coinfección pudiera alterar parámetros como: i) la susceptibilidad para adquirir
la enfermedad de Chagas; ii) la progresión de la enfermedad; y iii) la probabilidad de la transmisión
congénita. Según un estudio realizado en autopsias humanas, personas que presentaron coinfección entre
cisticercosis y T. cruzi tuvieron una mayor expectativa de vida que aquellas que presentaron sólo uno de
los dos parásitos, o ninguno de ellos. Perros solo chagásicos mostraron más daños cardíacos comparados
con aquellos que presentaban coinfección con Dirofilaria immitis. Las helmintiasis crónicas en ratones
alteraron la susceptibilidad hacia T. cruzi. Primates coinfectados con Chagas y helmintos también mostraron
diferencias tanto en la seroprevalencia de T. cruzi y como en las características de la infección, siendo los
mismos tipos de T. cruzi los implicados. La coinfección con helmintos puede ser capaz de interferir de una
manera significativa en la enfermedad de Chagas, por lo que es un potencial factor modulador no explorado
ni a nivel humano ni en modelos experimentales.
Palabras clave: Enfermedad de Chagas, Trypanosoma cruzi, poliparasitismo, helmintos, coinfección.
6
INTRODUCTION
Host-parasite interactions are rarely one-onone.
Most hosts, including humans, are often infected
with more than one parasite species (Telfer
et al., 2010). Thus, multiple species parasitic infections
seem to be the norm rather than the exception
(Raso et al., 2004). However, polyparasitism
is a neglected phenomenom. Despite the ubiquity
of polyparasitism, its public health significance has
been inadequately studied (Pullan and Brooker,
2008). In this context, the current disease-by-disease
approach to modelling and treating infectious
diseases, such as Chagas Disease (CD), may be inadequate.
CD is caused by the protozoan Trypanosoma
cruzi affecting some 18 million people in Latin
America. The World Health Organization estimates
that over 300,000 new cases of American Trypanosomiasis
and 15,000 deaths are reported annually
in countries where 75 million people live at risk of
infection. CD is neither a unique pathological entity
nor a uniform disease with the same pattern in all
patients. The existence of a wide range of clinical
manifestations varying from asymptomatic to severe
cardiac and/or digestive (megaesophagus and
megacolon) pathologies during the chronic phase
stresses the necessity to define the factors related
with the clinical aspects of the disease. What mechanisms
are involved in producing such severe pathologies?
Helminths are among the most common parasites
of free-living animals (Poulin, 2007). Worms
have been shown to induce immune hyporesponsiveness
in their hosts, which might affect the immune
reaction to concomitant species since the
modulation of this immune response is not only directed
at helminths, but also at non-related antigens
(Riet et al., 2007).
In most areas where CD is endemic, helminth
infections are highly prevalent, and evolution of the
host’s immune responses to both types of parasites
may have adapted Chagas immunology to the
presence of helminths.
The aim of this review is to gather information
on the effect of co-infection between helminths and
intracellular protozoan parasites, and, in particular,
between worms and Trypanosoma cruzi, to ascertain
if this co-infection could alter: i) the susceptibility
to acquire CD; ii) the progression of the disease; and
iii) the probability of congenital transmission.
INTRACELLULAR PROTOzOAN AND
HELMINTH CO-INFECTIONS
The characteristics of the immune response to
infection depend on the type of pathogen. Intracellular
protozoan organisms such as Plasmodium sp.,
Toxoplasma gondii, Leishamania sp., and Trypanosoma
cruzi stimulate a Th1-like response associated
with the production of IL-12, IFN-g, IL-2, and
TNF-a and the classical activation of macrophages.
In contrast, extracellular helminths induce aTh2like
response with the production of IL-4, IL-5, IL-
10 and the alternative activation of macrophages.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13

Helminth infection can bias the human immune response
towards a Th2 type over a Th1 and a Th17
response (Walsh et al., 2009), thus impairing the
host’s ability to control concurrent intracellular microparasite
infections (Ezenwa et al., 2010), such
as T. cruzi, and potentially modify disease dynamics.
Hence, helminths are likely to make hosts more
resistant to pathogens in which protection is mediated
by the Th2-like response and more susceptible
to pathogens in which protection is mediated by the
Th1-like response.
In the last five years, several interesting review
articles dealing with the immunomodulation of
helminths in their hosts and its consequences on coinfections
with intracellular protozoans have been
published (van Riet et al., 2007; Graham, 2008;
Pullan and Brooker, 2008; Helmby, 2009; Moreau
and Chauvin, 2010; Supali et al., 2010; Ezenwa
and Jolles, 2011, among others), coinciding on
the ability of helminths to alter host immune
responses. This ability could be of detriment to the
host if it negatively interferes in protective immune
responses against other infections or may have a
beneficial role in controlling autoimmune or other
excessive inflammatory responses provoked by
other pathogens.
Considering intracellular protozoan parasites,
the effects of helminth co-infection have been
studied mainly in malaria and secondarily in
leishmaniosis and toxoplasmosis. There are two
main aspects to elucidate as a consequence of the
interaction. First, if the susceptibility to acquire
the protozoan infection is higher or lower in
wormy hosts, and if these hosts present better or
worse clinical signs compared with those free of
helminths.
Malaria and helminths
Although interest in the subject of the interaction
between worms and malaria has recently increased,
there are still no large-scale studies in humans
dealing with the real consequences of this interaction,
i. e. to determine whether worms increase
or decrease incidence and whether they protect or
not from different presentations of severe malaria.
An early study performed more than 30 years
ago described that anthelminthic treatment of
severe ascariasis in a high-transmission area was
followed by an increase in symptomatic malaria
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD
(Murray et al., 1978). However, several decades
later, the notion that infection with helminths
increases the susceptibility to malaria infection was
backed (Hartgers and Yazdanbakhsh, 2006).
Concerning the course of the disease, deworming
malaria patients would be like ‘robbing Peter
to pay Paul’ since evidence suggests that helminth
co-infection leads to higher plasmodium loads being
less harmful, as helminth infection protects from
acute renal failure and cerebral malaria (Specht and
Hoerauf, 2007). In a murine model, Schistosoma
mansoni infection reduced the incidence of cerebral
malaria (Waknine-Grinberg et al., 2010). Recently,
a survey carried out in Nigeria provided evidence
that asymptomatic falciparum malaria and intestinal
helminth infections do co-exist without clinical
symptoms (Ojurongbe et al., 2011).
However, in filarial/malaria co-infection, the
presence of filarial infection may lead to a profound
inability to mount an effective response to provide
protection against severe malaria and also dampens
the success of malaria vaccination schemes in
filaria-endemic regions of the world (Metenou et
al., 2011).
These analyses of helminth and malaria coinfections
seem controversial depending on the
helminth species involved, the intensity of duration
of worm infection, and the age of the individual
under study. Nevertheless, helminths may be
a missing link in the understanding not only a
number of facts about malaria but also the failures
of certain anti-malaria vaccine strategies (Nacher,
2001; Noland et al., 2010).
Leishmaniosis and helminths
Just as in CD, a Th1-type immune response
is crucial in the control of leishmania infection.
However, excessive inflammation caused by Th1
cytokine release has also been implicated in the
pathogenesis of cutaneous leishmaniosis.
Two first studies examining the interplay
between schistosomiasis and Leishmania major
(Yoshida et al., 1999; La Flamme et al., 2002)
showed not only a delay in lesion resolution but
also in its development (La Flamme et al., 2002)
in mice. Later, the co-infection between a filarial
nematode and also L. major in mice was studied
(Lamb et al., 2005) and the results obtained were
similar to those previously observed (La Flamme
7

M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA
et al., 2002), i.e. both helminths are capable of
altering the progression of leishmaniosis. A preexisting
filarial infection enhanced the immune
response mounted against L. major. Co-infected
mice also exhibited a lower pathology during the
course of the experiment compared to mice singly
infected with L. major. Additionally, there was
a trend toward a larger L. major parasite load in
the co-infected mice. Therefore, the pre-existing
helminth infection may explain the elevated
number of parasites and delayed lesion size.
However, co-infection with tapeworm Taenia
crassiceps led to increased lesion sizes upon
subsequent L. major and L. mexicana infection
in mice (Roderiguez-Sosa et al., 2006). On the
other hand, comparison of the general course
of Leishmania infection in L. major singly and
L. major ⁄ Strongyloides ratti co-infected mice
revealed no difference in first and second L. major
infection (Kolbaum et al., 2011).
It seems clear that the results of co-infection are
not always consistent without taking into account
the helminth- and Leishmania species, the local or
systemic nature of the infections, and the timing
and the sequence of exposure to parasites.
Only one study carried out in human´s analysed
co-infection between helminths and L. braziliensis
(O’Neil et al., 2007). The authors concluded that
helminths influence both the clinical outcome and
the immune response of patients with leishmaniosis.
Patients with helminths tend to have smaller main
lesions whose healing takes longer than those in
their helminth-negative counterparts.
Toxoplasmosis and helminths
More than 30 years ago the concomitant
infection Schistosoma-Toxoplasma in albino mice
was studied (Kloetzel et al., 1977). The results
depended on the time-course evolution of the
initial infection. When toxoplasmic mice were
infected with S. mansoni few notable effects were
observed. However, S. mansoni infection was much
more severe in mice previously infected with the
helminth and subsequently by T. gondii. The same
results were obtained years later (Marshall et al.,
1999), since the mortality rate was higher when
mice with schistosomiasis were infected with the
protozoan.
In other helminth infections such as Nip-
8
postrongylus brasiliensis and Fasciola hepatica,
potent immune responses to T. gondii were capable
of suppressing the responses to helminth infections
(Liesenfeld et al., 2004; Miller et al., 2009). However,
infection of mice with N. brasiliensis did not
alter immune responses to subsequent infection
with T. gondii and did not alleviate gut pathology
or prevent death of mice, while prior infection with
Heligmosomoides polygyrus led to the development
of suboptimal adaptive immunity against T.
gondii, essential for long-term protection against
this parasite (Khan et al., 2008). Once more, the results
of co-infection are not always consistent, thus
highlighting the importance of the species involved
and the sequence of exposure to parasites.
Concerning susceptibility, it has been found
that persons infected with Toxocara spp. were
more likely to be infected with T. gondii, and
similarly, persons infected with T. gondii were
more likely to be infected with Toxocara spp.
(Jones et al., 2008).
CHAGAS DISEASE AND HELMINTHS
In humans
To our knowledge there is only one published
paper that deals with co-infection between CD and
helminths in humans. An epidemiological analysis
in patients co-infected with CD and cysticercosis
was conducted by means of data obtained from
autopsies performed in 1501 corpses (Faleiros
et al., 2009). The authors found that CD was 10
times more frequent in patients co-infected with
cysticercosis. Intriguingly, the authors also found
that co-infected patients had a longer survivorship
compared to those suffering from CD only or those
with cysticercosis only and even those persons
without any infection.
The impact of co-infection between CD
and concomitant helminth infections has been
analysed in some other hosts such as mice, dogs
and primates.
In mice
Almost 40 years ago, albino mice were exposed
concomitantly to S. mansoni and T. cruzi (Kloetzel
et al., 1973). The findings were very similar to those
obtained in the interaction between S. mansoni
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13

and Toxoplasma mentioned above. The authors
observed an enhanced and more persistent T. cruzi
parasitaemia in mixed infections.
It has also been found that the presence of
Taenia crassiceps cysticerci in mice modified the
immune response and the susceptibility to T. cruzi
(Rodriguez et al., 1999). These modifications also
depended on the time-course evolution of the initial
infection, since co-infection with the protozoan in
the early stages of the helminth infection induced
a delay in the onset of parasitaemia. However, a
significant increase in susceptibility to T. cruzi was
observed only when mice were co-infected in the
late stages, i.e. when the helminth load is heavier
and a Th2 type response against it is predominant.
Thus, in late co-infection, parasitaemia presented
an early increase, leading to a fourfold parasite
load over the singly infected mice at the peak of
parasitaemia.
In dogs
Natural Dirofilaria immitis and T. cruzi coinfection
was recently studied in dogs from Mexico
(Cruz-Chan et al., 2010). The authors observed a
relatively high prevalence of D. immitis and T. cruzi
co-infection as well as a decreased inflammatory
reaction in the heart of D. immitis and T. cruzi
co-infected dogs compared to those only affected
by CD. The authors suggested that D. immitis
infection may modulate T. cruzi immunopathology
by decreasing the inflammatory immune response
induced by T. cruzi and also suggested that great
care should be taken in the interpretation of
immunological and pathological data from naturally
infected animals, as co-infection may significantly
interfere with host responses and should be taken
into account by researchers and clinicians.
In primates
A study on the parasite community interactions
between T. cruzi and intestinal helminths was
performed in wild primates (the golden lion tamarin
Leontopithecus rosalia and the golden-headed
lion tamarin L. chrysomelas) in Brazil (Monteiro
et al., 2007). According to the authors, a better
understanding of the epidemiology of T. cruzi in the
wild may improve knowledge on the risk of new
cases and the clinical course of CD in humans and
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13
CHAGAS DISEASE IN A WORMY WORLD
other mammal species. The authors stated that the
differences found in T. cruzi seroprevalence and the
infection profile of the studied primate populations
are the result of concomitant helminth infections.
The authors found significantly higher helminth
prevalences in T. cruzi infected tamarins than in T.
cruzi seronegative ones. T. cruzi parasitaemia also
varied depending on the helminth species, which is
the reason why the authors stated that these distinct
T. cruzi infection profiles could not be explained by
the T. cruzi genotype as all typed isolates were the
same.
The obtained data suggested to the authors that
T. cruzi infection could have both beneficial and
detrimental effects on the hosts: not only lowering
helminth-linked death rates but also lowering their
ability to rid themselves of helminth infection. T.
cruzi and helminths would both benefit from these
effects, through increased transmission rates to new
hosts, thanks to the longer persistence of infected
hosts in the population.
Concerning the health status, those tamarins coinfected
with helminths and T. cruzi, were healthier
than those only harbouring helminths (Monteiro et
al., 2010).
Could co-infection with chronic helminthiases
increase the risk of mother-child transmission
of CD?
Parasitaemia in pregnant women seems to be
an important factor contributing to congenital
transmission of T. cruzi. Pregnant women displaying
high parasitaemia present a higher transmission
risk than chronically infected women in whom
blood parasites are hardly detectable (Carlier and
Truyens, 2010; Brutus et al., 2010).
Maternal co-infection with T. cruzi and HIV
results in increasing frequency and severity of
congenital CD, highlighting the important role
of maternal immunity and high parasitaemia
in favoring parasite transmission to the fetus
(Scapellato et al., 2009; Carlier and Truyens,
2010). Mothers transmitting T. cruzi to their fetuses
display lower T-cell mediated immune responses to
parasites and produce less IFN-g, which probably
contributes to an increase in parasitaemia (Carlier
and Truyens, 2010).
All the co-infection cases between CD and
chronic helminth infections analyzed resulted
9

M. T. GALáN-PUCHADES and A. OSUNA
in an increase of T. cruzi parasitaemia, precisely
one of the risks favouring vertical transmission.
Additionally, helminths can also contribute to a
lower IFN-g production via a predominant Th-2
response in pregnant women. Therefore, it would
be interesting to evaluate the helminthological
status of chagasic pregnant women and its possible
influence on vertical transmission.
10
DISCUSSION
In order to address the questions of whether
helminth infection could affect the susceptibility to
subsequent co-infection with T. cruzi, and whether
a changing environment and cytokine profile
induced by worms may influence the outcome of
CD compared with hosts exclusively infected with
T. cruzi, it was found that the presence of helminths
modifies both the susceptibility and, in most cases,
the course of CD.
Concerning susceptibility, in all the studied hosts
(humans, mice, dogs and primates) the presence
of worms increases the likelihood to acquire CD
mainly in the helminth chronic phase. In addition,
co-infection seems to lengthen survivorship of coinfected
hosts compared with those only harboring
T. cruzi. The presence of helminths also tends to
increase T. cruzi parasitaemia and certain helminths
may even improve the health status of chagasic
hosts.
One of the main implications of these findings
is that helminth co-infections could potentially
modify the course of CD among patients with the
same T. cruzi DTU (discrete typing units) (Monteiro
et al., 2007).
In the last two decades, studies explaining
severe forms of CD have mainly been based on
immunological findings (Dutra et al., 2005, Rodrigues
et al., 2010). Chagasic myocarditis is
thought to be due to the presence of parasites in
the lesions. However, an unbalanced immune homeostasis
can trigger parallel autoimmune phenomena
which increase the immune response,
thus worsening the outcome of the disease (Gutierrez
et al., 2009). Several results evidence that an
exacerbated Th1-like specific immune response
against T. cruzi with high levels of IFN-γ and low
levels of the anti-inflamatory cytokine IL-10 is established
in T. cruzi-infected individuals present-
ing cardiac disease (Gomes et al., 2003). In addition,
there is some limited evidence regarding the
role of Th17-mediated responses to T. cruzi. The
IL-17 produced during the acute phase of CD controls
cardiac inflammation by modulating the Th1
response, and this pro-inflammatory IL-17 is also
required for the elimination of T. cruzi (Guedes et
al., 2010; Miyazaki et al., 2010). In contrast IL-
27, which suppresses Th17 responses, is beneficial
for the host during T. cruzi infection (Yoshida
and Miyazaki, 2008).
Surprisingly, there is no mention in the literature
that evaluates the possible role of helminth
infections in human CD when helminths are able
to suppress all types (Th1, Th2, and Th17) of responses
(see ref Osada and Kanazawa, 2010).
Considering the classical Th1/Th2 paradigm, it is
reasonable to speculate that a helminth-induced
Th2 response with production of IL-4, IL-5, IL-6
and IL-10 skewing with downregulation of Th1
immune responses could result in an amelioration
of Th1 diseases, such as CD. As IL-4 is known to
suppress Th17 development (Romagnani, 2006), a
Th17 response could also be suppressed as well as
Th1 response in helminth-infected hosts. In fact,
certain helminth infections reduce IL-17 mRNA
by MLN cells and inhibit IL-17 production (Elliot
et al., 2008). This is of relevance when considering
persistent parasites such as helminths which
are widely distributed in humans in developing
countries (Maizels et al., 1993), where they coexist
with T. cruzi. Wormy populations are exposed to
two potential risks, namely an increased susceptibility
to T. cruzi and a yet unresearched course of
the disease. All of this should prompt research on
the possible epidemiological relevance of helminth
infections and the impact when controlling them
on the incidence or the pathogenesis of CD. The
presence of helminth co-infections may represent
a much more important challenge for public health
than recognized until now.
In other co-infections of human parasites such
as malaria and hookworms, it has been stated
that it would be possible to define co-infection
as a specific “disease”, separate from malaria by
itself, or hookworm by itself (Payne et al., 2009),
and this may also hold true for CD and helminths.
Thus, gathering more reliable data on the true
parasitological status of all chagasic patients would
be desirable.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 5-13

CONCLUDING REMARKS
Humans are exposed to a large number of
pathogens interacting in a dynamic manner over
time. Hence, the immunological networks activated
as a result of these infections are multifactorial
and complicated to study. Classical studies directed
at one single parasite species are rather simplistic
since they ignore the diverse outcome of the multiple
interactions which result from co-infections
by micro- and macroparasites.
There are reasonable indications that coinfections
with helminths and T. cruzi can interact
and influence the immune responses to and clinical
outcomes of CD. However, studies addressing
these interactions are needed both in humans and
animal models. A great number of people are likely
to be co-infected with helminths and CD, and the
influence of helminth infections on the course of
the disease needs careful investigation in large
populations. Each type of helminth infection should
be studied separately, since each one of them may
have different effects on the course of the disease.
Treatment of helminth infections ensued by a
detailed follow-up on the infection rate and on the
symptoms of CD will be important to establish the
precise effect of helminth infections on the outcome
of T. cruzi parasitaemia and disease. Needless to
say, the analysis of the immunological profiles
will shed more light on the mechanisms that are
involved and experimental murine co-infections
will help to dissect the molecular immunological
pathways involved.
A better understanding of CD in a wormy
world will not only improve the evaluation of T.
cruzi vaccine trials and therapeutic measures but
will also reveal the implications of anthelminthic
treatment schemes in the course of CD and the risk
of vertical transmission.
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13

Artículo Original
14
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol de
aislados de Trypanosoma cruzi obtenidos de pacientes
venezolanos con enfermedad de Chagas infectados por
mecanismos de transmisión oral y vectorial
MUÑOZ-CALDERÓN A., SANTANIELLO A., PEREIRA A., YANNUZZI J.,
DÍAZ-BELLO Z. y ALARCÓN de NOYA B.
Sección de Inmunología, Instituto de Medicina Tropical - Universidad Central de Venezuela, Caracas, Distrito Capital,
Venezuela.
ABSTRACT
IN VITRO SUSCEPTIBILITY TO NIFURTIMOX AND BENzNIDAzOLE TO TRYPANOSOMA
CRUZI ISOLATES OBTAINED FROM VENEzUELAN PATIENTS WITH CHAGAS DISEASE
INFECTED BY ORAL AND VECTOR TRANSMISSION MECHANISMS)
The frequent reports of outbreaks of acute Chagas disease (CD) by ingestion of contaminated food,
illustrate the importance of this transmission model. The present study, evaluate for the first time the in vitro
susceptibility of parasite isolates obtained from Venezuelan patients with Chagas’ disease infected by oral
and vector transmission mechanisms to the drugs Nifurtimox and Benznidazole. We used epimastigotes
and trypomastigotes of Trypanosoma cruzi isolates from four patients with CD. Concentrations of 1x10 8
P/mL were incubated for 72 hours with drugs Nifurtimox and Benznidazole in a range of 0.03 to 4000μM.
Used the MTT colorimetric technique for assessing cell viability and calculated the IC 50 values for each
of the isolated parasites. The isolates tested and two parasitic developmental stages were shown to be
susceptible to Nifurtimox and Benznidazole drugs with IC 50 values vary greatly among themselves. The
statistical analysis showed that the drug Nifurtimox was more effective than Benznidazole (p < 0.05) in the
trypomastigote stage and two stage epimastigote isolates. We could characterize the in vitro activity of the
drugs Nifurtimox and Benznidazole against human isolates of T. cruzi with different routes of transmission
in Venezuela, showing greater sensitivity on the epimastigote stage with respect to the trypomastigote stage.
Key words: Chagas disease. Trypanosoma cruzi. Oral transmission. IC 50 . Epimastigote. Trypomastigote.
Recibido: 1 de Abril de 2012. Aceptado: 10 de Junio de 2012.
Correspondencia: Muñoz-Calderón A. Sección de Inmunología, Instituto de Medicina Tropical, Facultad de Medicina,
Universidad Central de Venezuela, Los Chaguaramos, Código Postal 1041, Caracas, Venezuela.
E-mail: arturomc35@gmail.com; belkisyole@yahoo.com.mx. Tel.: (0058)212-6053560. Tel.-fax:
(0058)212-6053551.

RESUMEN
Los frecuentes reportes de brotes agudos de enfermedad de Chagas (ECh) por la ingesta de comida
contaminada, ilustran la importancia de este modelo de transmisión. El presente evalúa por primera vez,
la susceptibilidad in vitro de aislados parasitarios obtenidos de pacientes venezolanos con enfermedad de
Chagas, infectados por mecanismos de transmisión oral y vectorial a los fármacos Nifurtimox y Benznidazol.
Para su evaluación, se utilizaron formas epimastigote y tripomastigote de aislados de Trypanosoma cruzi
procedentes de pacientes con ECh. Concentraciones de 1x10 8 P/mL se incubaron por 72 horas con los
fármacos Nifurtimox y Benznidazol en un rango de 0,03 a 4000µM. La viabilidad celular se evaluó con
la técnica colorimétrica del MTT, calculando los valores de CI 50 . Los aislados parasitarios evaluados y sus
estadios evolutivos mostraron ser susceptibles a los fármacos Nifurtimox y Benznidazol con valores de
CI 50 variables entre sí. El análisis estadístico arrojó que el fármaco Nifurtimox resultó más efectivo que el
Benznidazol (p < 0,05) en el estadio tripomastigote y en dos de los aislados en estadio epimastigote. Con
este trabajo se pudo caracterizar la actividad “in vitro” de los fármacos Nifurtimox y Benznidazol contra
aislados venezolanos de T. cruzi, evidenciándose mayor sensibilidad sobre el estadio de epimastigote con
respecto al estadio tripomastigote.
Palabras clave: Enfermedad de Chagas. Trypanosoma cruzi. Transmisión oral. CI 50 . Epimastigote.
Tripomastigote.
INTRODUCCIóN
La enfermedad de Chagas (ECh), incluida por
la Organización Mundial de la Salud entre las “enfermedades
desatendidas u olvidadas”, es endémica
en el continente americano. Se estima que 15 a 16
millones de personas están infectadas y que 75 a
90 millones se encuentran expuestas a la infección
(Coura, 2007). En América Latina, la transmisión
del protozoario Trypanosoma cruzi, agente causal
de la ECh, se ha reducido de manera constante a
través de una serie de iniciativas multinacionales
encaminadas a la eliminación de los vectores domésticos
en amplias zonas, así como la detección
de donantes de sangre infectados con T. cruzi
(Schofield et al., 2006). Sin embargo, existen serios
problemas para obtener una completa erradicación
de la transmisión principalmente por ser una zoonosis.
Adicionalmente se presentan limitaciones
en la disponibilidad de quimioterapias específicas
y deficiencias en la cobertura del tratamiento para
individuos actualmente infectados.
La tendencia a la migración global incrementa
el alcance de expandir la amenaza exponencialmente,
desde las áreas rurales a las urbanas y de regiones
endémicas a no-endémicas (Franco-Paredes
et al., 2007; Rassi et al., 2010). A este escenario
epidemiológico se añade un nuevo elemento en la
transmisión, como es la infección oral. El primer
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA
brote fue descrito en Brasil en 1968 reportándose
varias muertes y causado por la ingesta de jugo del
fruto Açaí proveniente de la palma de la familia
Aracaceae (Nóbrega et al., 2009).
Venezuela no ha escapado a esta tendencia, reportándose
en 2007 el brote más significativo de
ECh urbano por transmisión oral en América Latina,
confirmándose 103 casos positivos (Alarcón de
Noya et al., 2010). En cuanto al tratamiento de la
ECh, no hay vacunas disponibles y la quimioterapia
sigue siendo precaria con sólo dos compuestos
nitro-heterocíclicos disponibles: nifurtimox (NF)
(lanzado por Bayer en 1967, Lampit®) y benznidazol
(BZ) (lanzado por Roche en 1972, Rochagan®
y Radanil®) (Coura y de Castro, 2002). Estos fármacos
presentan severas limitaciones como la alta
frecuencia de efectos secundarios indeseables, largos
protocolos de tratamiento y la limitada actividad
anti-parasítica. Estudios clínicos reportan 80%
de cura parasitológica en la fase aguda (Cançado
1999; Dias Gontijo 1999; Bahia-Oliverira et al.,
2000), mientras que en fase crónica sólo 5-20%
de los pacientes son considerados curados según
la evaluación por 20 o más años de seguimiento
(Urbina y Docampo, 2003; Jannin y Villa, 2007;
Cançado, 2002; Dias, 2006). Las razones para esta
marcada diferencia de actividad anti-parasítica en
las fases aguda y crónica de la ECh no están completamente
dilucidadas (Cançado, 2002). Adicio-
15

A. MUÑOZ et al.
cionalmente, existen diferencias en los resultados
terapéuticos según la zona geográfica evaluada
(Rassi y Luquetti, 1992; Yun et al., 2009), lo que
puede ser explicado por la presencia de diferentes
linajes del parásito en las áreas geográficas, con T.
cruzi I predominando en América Central y norte
de Sur América y T. cruzi II en el resto de Sur
América (Carranza et al., 2009). Las variaciones
en la susceptibilidad a los fármacos entre aislados
de T. cruzi han sido documentadas ampliamente en
estudios in vitro e in vivo (Filardi y Brener, 1987;
Murta et al., 1998; Toledo et al., 2003; Villareal et
al., 2004; Luna et al., 2009; Moreno et al., 2010).
Teniendo en cuenta la variabilidad en la
susceptiblidad a los fármacos NF y BZ por parte
de aislados de T. cruzi ya descrita y en vista de
la evidencia de no curación por parte de un gran
número de pacientes con ECh tratados con BZ y/o
NF, basada en la obtención de hemocultivos posttratamiento,
PCR positivas y porcentajes elevados
de anticuerpos líticos, el presente estudio propone
evaluar si aislados de T. cruzi obtenidos del brote
de ECh urbano por transmisión oral ocurrido
en Caracas-Venezuela en el 2007, presentan
variaciones en la susceptibilidad in vitro a los
fármacos NF y BZ. Adicionalmente, se evaluará
si el mecanismo de transmisión de la enfermedad
influye en la susceptibilidad a los fármacos NF y
BZ, teniendo como referencia aislados de T. cruzi
obtenidos de pacientes con ECh por transmisión
vectorial.
16
MATERIALES Y MÉTODOS
Aislamiento de parásitos y cultivo - Los
aislados parasitarios fueron obtenidos a partir de
sangre de pacientes en fase aguda de ECh cultivada
en medio bifásico agar-sangre. Se tomaron 3 mL de
sangre venosa en tubos con citrato de sodio. Todo
el contenido del tubo fue agregado a un medio
bifásico agar-sangre con medio MEM (modified
Eagle’s médium) suplementado con 5% de Suero
Fetal Bovino (SFB) inactivado y antibióticos. Las
características epidemiológicas de los aislados de
T. cruzi empleados en este estudio se muestran en
la Tabla 1.
Fármacos - Nifurtimox (Lampit®) y Benznidazol
(Rochagan®) fueron obtenidos a partir de
muestras comerciales de laboratorios Bayer (Alemania)
y Roche (Suiza), respectivamente. Se disolvieron
100mg de cada fármaco en dimethyl sulfoxide
(DMSO), manteniendo una concentración
final de DMSO que no excediera el 1% v/v. Las
soluciones de trabajo fueron preparadas en medio
de cultivo LIT o MEM antes de cada ensayo.
Ensayo in vitro con epimastigotes - En una
microplaca estéril de 96 pozos de fondo plano se
agregaron 100 µL de una suspensión de cada aislado
a una concentración de 1x10 6 parásitos/mL a cada
pozo. Se incubó a 37°C durante 96 horas. Una vez
alcanzada la fase logarítmica, se agregó 20 µL del
fármaco en estudio a diversas concentraciones
(0,01 - 0,1 - 1 - 10 - 100 - 1000 µg/mL) y se incubó
durante 72 horas a 37°C. Cumplido el tiempo de
incubación se agregó a cada pozo 20 µL de una
solución de bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-yl]-
2,5-difeniltetrazolio (MTT). Se re incubó la placa
durante 2 horas a 37°C y se procedió a disolver los
cristales de formazán con una solución de Sodium-
Dodecil-Sulfate (SDS) 0,01% en HCl 0,1N. El
producto de formazán solubilizado fue cuantificado
con un lector de microplacas TECAN-sunrise a
570nm. Cada ensayo se realizó por triplicado con
sus respectivos controles, los cuales contaban con
todos los reactivos sin presencia de fármaco.
Tabla 1. Características epidemiológicas de los aislados de Trypanosoma cruzi
Aislado Origen Geográfico Paciente Modo de
transmisión
EP Edo. Carabobo (VE) Infante ♂ ND
PM Valencia (VE) Adulto ♀ Vectorial
1593 Caracas (VE) Infante ♀ Oral
1595
ND: No determinado.
Caracas (VE) Adulto ♀ Oral
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22

Cultivo de línea celular - Se utilizaron células
epiteliales aisladas de riñón de mono verde africano
(células Vero-ATCC) cultivadas en medio MEM
suplementado con 5% de SFB y antibióticos e
incubadas a 37ºC en una atmósfera de 5% de CO 2 .
Infección celular - Se utilizaron formas tripomastigotes
de cada uno de los aislados en estudio,
en una proporción 10 tripomastigotes / 1 célula.
Para ello se utilizaron cultivos de Células Vero-
ATCC en monocapa con un 70-80% de confluencia
y se incubó a 37°C. Una vez iniciada la liberación
de formas tripomastigotes al medio de cultivo, éste
fue colectado y la concentración de tripomastigotes
vivos se determinó en cámara de Neubauer.
Ensayo in vitro con tripomastigotes - En una
microplaca estéril de 96 pozos de fondo plano se
agregaron 100 µL de una suspensión de 1x10 8
parásitos/mL a cada pozo. Inmediatamente se añadió
50 µL del fármaco a diversas concentraciones (0,01
- 0,1 - 1 - 10 - 100 - 1.000 µg/mL). Se incubó a
37ºC durante 72 horas. Cumplido el tiempo de
incubación se agregó a cada pozo 20 µL de una
solución de MTT. Se reincubó la placa durante 3
horas a 37°C y se procedió disolver los cristales
de formazán con una solución de SDS 0,01% en
HCl 0,1N. El producto de formazán solubilizado
fue cuantificado con la ayuda de un lector de
microplacas TECAN-sunrise a 570 nm. Cada
ensayo se realizó por duplicado con sus respectivos
controles mantenidos sin la presencia del fármaco.
Análisis Estadísticos - La actividad de los fármacos
fue expresada como la concentración necesaria
para inhibir el 50% del crecimiento parasitario
(CI 50 ) (Alzamora et al., 2007). Fue calculada
con un intervalo de confianza del 95% mediante
una regresión no lineal, usando para ello el software
GRAPHPAD PRISM (Intuitive Software for
Science, San Diego, CA, USA). Los resultados
son mostrados como la media ± desviación estándar
(DS) de tres experimentos independientes. Las
comparaciones y significancias estadísticas fueron
determinadas por un análisis de t de Student. Adicionalmente,
se realizaran análisis de correlación
lineal de Pearson con la finalidad de evaluar si el
aumento en la concentración de los fármacos tiene
o no relación con la viabilidad celular. Valores de p
< 0,05 fueron considerados significativos.
RESULTADOS
Evaluación de la susceptibilidad de aislados
de T. cruzi en estadio de epimastigote - La actividad
de los fármacos NF y BZ contra epimastigotes de T.
cruzi es mostrada en la Tabla 2. Todos los aislados
evaluados fueron susceptibles a NF (CI 50 de 3,65
± 1,00 a 63,42 ± 7,43 µM) y a BZ (CI 50 de 35,78
± 4,33 a 50,43 ± 9,42 µM). Para el caso específico
del fármaco NF, es posible observar variaciones
los valores de CI 50 dependiendo del aislado. Caso
contrario se obtiene en la evaluación del fármaco
BZ sobre los cuatro aislados parasitarios, donde
los valores de CI 50 no presentan variaciones
estadísticamente significativas (p > 0,05). De los
resultados obtenidos para los aislados parasitarios
en estadio epimastigote, el aislado de trasmisión
oral 1.593 presentó los valores más bajos de CI 50 a
ambos fármacos, con valores de 3,65 ± 1,00 µM y
35,78 ± 4,33 µM para NF y BZ, respectivamente.
Por otra parte, el aislado EP mostró el valor más
alto de CI 50 al fármaco NF (63,42 ± 7,43 µM); caso
similar se obtuvo para el aislado de transmisión
vectorial PM con un valor de CI 50 al fármaco BZ de
50,43 ± 9,42 µM.
Tabla 2. Susceptibilidad in vitro a Nifurtimox y Benznidazol de aislados humanos de Trypanosoma cruzi en
estadio de epimastigote
Aislado Modo de transmisión CI50 (µM) (media ± DS)
NF BZ
EP ND 63,42 ± 7,43 42,36 ± 6,00
PM Vectorial 8,13 ± 2,77 50,43 ± 9,42
1593 Oral 3,65 ± 1,00 35,78 ± 4,33
1595 Oral 26,91 ± 8,60 41,32 ± 7,13
ND: No determinado. Los valores de CI50 fueron calculados a partir de tres ensayos independientes.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA
17

A. MUÑOZ et al.
Evaluación de la susceptibilidad de aislados
de T. cruzi en estadio de tripomastigote - El
rango de actividad de los fármacos NF y BZ
contra tripomastigotes de T. cruzi se muestra en
la Tabla 3. Los resultados reflejan un aumento
en los valores de CI 50 para el fármaco NF (46,54
± 0,56 a 213,96 ± 21,28 µM) y BZ (49,32 ± 3,90
a >3.800 µM) estadísticamente significativo (p
< 0,05), con respecto a los obtenidos para el
estadio de epimastigote. Los valores de CI 50 para
los aislados de transmisión oral al fármaco NF
presentaron variaciones significativas (46,54 ±
0,56 y 213,96 ± 21,28 µM, para el aislado 1.593
y 1.595 respectivamente). Adicionalmente, se pudo
evidenciar que los aislados de transmisión oral
1.593 y 1.595 reflejaron los valores más bajos de
CI 50 a los fármacos NF y BZ respectivamente. En
cuanto al aislado de transmisión vectorial (PM), no
se encontró diferencia estadísticamente significativa
en sus valores de CI 50 en comparación con los
obtenidos para el aislado EP, para ambos fármacos.
Es interesante resaltar que estos dos aislados (PM y
EP) bajo las condiciones experimentales evaluadas
en este trabajo, resultaron ser poco susceptibles al
fármaco BZ con valores de CI 50 mayores a 3800
µM, la cual fue la máxima concentración utilizada
para este fármaco en los ensayos.
Comparación de la susceptibilidad al fármaco
Nz y Bz por parte de los estadios epimastigote
y tripomastigote de los aislados de T. cruzi
- Los análisis comparativos se llevaron a cabo
tomando en cuenta los valores de CI 50 mostrados
en las tablas 3 y 4 y por observación del comportamiento
de la variable porcentaje (%) de viabilidad
celular a diferentes concentraciones de cada
fármaco. Para el caso de NF (Figura 1), es posible
18
observar un comportamiento dosis-dependiente
claramente marcado en ambos estadios parasitarios
y para cada uno de los aislados evaluados, con valores
de correlación de Pearson entre 0,70 y 0,85,
los cuales estadísticamente no son significativos,
pero reflejan que el aumento de la concentración
de los fármacos tiene un efecto relacionado con la
disminución de la viabilidad celular. Es interesante
resaltar que todos los aislados evaluados en este
estudio, cualquiera que fuese su comportamiento
dosis-respuesta alcanzaron el 0% de viabilidad celular
a la máxima concentración evaluada.
Con respecto a las tendencias obtenidas para
el fármaco BZ (Figura 2), es posible observar un
comportamiento por parte de los aislados en estadio
epimastigote y tripomastigote completamente diferente
al descrito anteriormente. Las diferencias observadas
pueden dividir en dos aspectos, el primero
de ellos corresponde al aislado evaluado y el segundo
a la efectividad del fármaco reflejado como
porcentaje (%) de viabilidad celular. Con respecto
al tipo de aislado utilizado, se puede evidenciar que
para el estadio epimastigote los aislados PM y EP
siguen una tendencia dosis-dependiente similar a la
mostrada para el fármaco NF, presentando valores
de correlación de Pearson estadísticamente significativos
(p < 0,05); aunque es evidente una menor
efectividad, ya que para la máxima concentración
evaluada solamente se alcanzó aproximadamente
80% de susceptibilidad o 20% de viabilidad celular
(Figura 2a). Esta misma tendencia se obtiene en el
estadio de tripomastigote, aunque la efectividad del
fármaco fue 4 veces menor en comparación con el
estadio de epimastigote (Figura 2b). Para los aislados
de transmisión oral se evidencian dos comportamientos
diferentes: a) para el caso del estadio
Tabla 3. Susceptibilidad in vitro de aislados humanos y cepas de referencia de T. cruzi en estadio
tripomastigote contra Nifurtimox y Benznidazol
Aislado Hospedador
(fase de la ECh)
CI50 (µM) (media ± DS)
NF BZ
EP ND 61,26 ± 1,25 >3800
PM Vectorial 60,84 ± 1,27 >3800
1593 Oral 46,54 ± 0,56 650,53 ± 6,25
1595 Oral 213,96 ± 21,28 49,32 ± 3,90
ND: No determinado. Los valores de CI50 fueron calculados a partir de tres ensayos independientes.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22

Figura 1. Curvas de viabilidad celular de aislados de T. cruzi frente a concentraciones crecientes del fármaco Nifurtimox.
a) Estadio de epimastigote; b) Estadio de tripomastigote. Cada punto de la curva fue calculado a partir de tres ensayos
independientes, con su respectiva desviación estándar.
Figura 2. Curvas de viabilidad celular de aislados de T. cruzi frente a concentraciones crecientes del fármaco
Benznidazol. A) Estadio de epimastigote; B) Estadio de tripomastigote. Cada punto de la curva fue calculado a partir
de tres ensayos independientes, con su respectiva desviación estándar.
de epimastigote los dos aislados presentan un comportamiento
similar, con valores de correlación de
Pearson entre 0,54 y 0,62 para el aislado 1.593 y
1.595 respectivamente, sugiriendo que los aislados
no se ven afectados directamente al aumentar las
concentraciones de los fármacos, quedando algo
menos del 50% de la población parasitaria sin ser
afectada por el fármaco (Figura. 1a); b) al observar
las tendencias obtenidas para el estadio de tripomastigote
(Figura 2b) el aislado 1.593 presenta un comportamiento
dosis-dependiente con una correlación
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22
SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO T. CRUZI ISOLATES FROM VENEZUELA
de Pearson de 0,99, aunque alcanzando el 50% de
efectividad a una concentración de 650,53 ± 6,25
µM, lo que se traduce en 14 veces más cantidad de
fármaco comparado con la CI 50 para el fármaco NF
(Tabla 3) y 18 veces más concentración de fármaco
BZ con respecto al estadio de epimastigote (Tabla
2). La tendencia del aislado oral 1595 en estadio de
tripomastigote es similar a la mostrada en el estadio
de epimastigote, obteniéndose una correlación de
Pearson de 0,432, comprobándose estadísticamente
que a partir de una concentración de 38,42 µM has-
19

A. MUÑOZ et al.
ta la máxima concentración evaluada (3842 µM) el
aislado parasitario no se ve afectado por el fármaco
BZ.
20
DISCUSIóN
Uno de los aspectos extensamente reflejados en
la bibliografía es la distinta susceptibilidad de las
cepas de T. cruzi al tratamiento con fármacos de
referencia o compuestos químicos de diversa índole
en ensayos experimentales. Se ha comprobado que
según la procedencia geográfica de los aislados,
existen fluctuaciones en la eficacia de los fármacos
que oscilan entre el 0 al 100% (Filardi y Brener,
1984; Brener, 1987). Esta variabilidad ha sido
vinculada a las variaciones en la absorción y el
metabolismo de las drogas, a la fase clínica de la
infección o los estadios que pueden presentar las
poblaciones parasitarias. (De Castro y Meirelles
De 1987, Toledo et al. 1990); en la actualidad
se incluyen dentro de estas fuentes de variación
los grupos genéticos a los cuales pertenezca la
población parasitaria (Luna et al., 2009).
La resistencia natural de poblaciones de T. cruzi
a los nitro derivados ha sido descrita como un factor
importante en las bajas tasas de efectividad de los
fármacos (Filardi y Brener, 1987). Estos autores
describen la existencia de aislados naturalmente
resistentes o sensibles a los fármacos NF y BZ.
Este es el primer estudio que muestra la actividad
in vitro de los fármacos NF y BZ contra aislados
humanos de T. cruzi con diferentes vías de
transmisión (oral y vectorial) en Venezuela. Los
cuatro aislados y los dos estadios parasitarios fueron
susceptibles a los dos fármacos evaluados, evidenciándose
mayor sensibilidad sobre el estadio de
epimastigote con respecto al estadio tripomastigote,
lo que se ve sustentado en la bibliografía, donde
ya es bien conocido que el NF y el BZ tienen acción
tripanocida contra todas las formas del parásito
(Stopani, 1999). Se han informado diferencias de
varios órdenes de magnitud de los valores de CI 50
entre los estadios epimastigote y tripomastigote
(Moreno et al., 2010).
Al realizar comparaciones con valores de CI 50
para las cepas de referencia Esmeraldo, Silvio x10
y cepa Y en estadios epimastigotes a nivel in vitro
(siguiendo metodologías similares a las realizadas
en éste trabajo), se pudo observar que el rango de
CI 50 para el fármaco NF en los aislados descritos se
ubicó entre 1,56 a 3,50 µM (Luna et al., 2009), lo
que se traduce en una diferencia significativa en la
susceptibilidad por parte del aislado de transmisión
vectorial PM y EP (p = 0,03) y en el aislado
de transmisión oral 1.595 (p < 0,05); el aislado
1.593 no presentó una variación estadísticamente
significativa en la susceptibilidad al fármaco NF (p
> 0,05). Moreno et al., en el 2010 describen para
las cepas de referencia ya mencionadas un rango
de CI 50 para el fármaco BZ entre 16,30 a 26,70 µM,
reflejando diferencias significativas para los cuatro
aislados evaluados en el presente trabajo (p < 0,05).
Con los dos estadios parasitarios evaluados,
se observaron diferencias (que en algunos casos
llegaron a ser estadísticamente significativas) entre
el estadio epimastigote y tripomastigote de un
mismo aislado. Este comportamiento ya ha sido
descrito por De Castro et al., (1987, 1990) quien
concluye que en muchas ocasiones “…la propia
forma biológica del parásito de una misma cepa
presenta distinta susceptibilidad, por ejemplo,
los amastigotes parecen más resistentes que los
tripomastigotes en el tratamiento con Nifurtimox y
Benzonidazol…”.
En líneas generales, el fármaco NF resultó más
efectivo que el BZ (p < 0,05) en el estadio tripomastigote
y en los aislados 1.593 y PM en estadio
epimastigote, tal como se evidencia en diversos
estudios in vitro utilizando diferentes aislados de
T. cruzi (Maya et al., 2004; Cabrera et al., 2004).
El fármaco BZ mostró gran variabilidad en la actividad
contra los diferentes aislados venezolanos
tanto de transmisión oral como vectorial. En este
sentido, existen investigaciones experimentales
que demuestran diferencias en la respuesta a NF y
a BZ, por parte de diferentes aislados de T. cruzi
(Urbina y Docampo 2003, Castro et al., 2006). La
explicación a este fenómeno es desconocida, aunque
se ha propuesto que se deba a un incremento
en la concentración de las enzimas de destoxicación
o a través de modificaciones en el contenido
de tioles intracelulares (Morello et al., 1994; Maya
et al., 1997).
En conclusión, tomando en cuenta que los aislados
de transmisión oral 1.593 (infante) y 1.595
(adulto) provienen de pacientes infectados de la
misma fuente (Alarcón de Noya et al., 2010) se esperaría
que el comportamiento en cuanto a la susceptibilidad
a los fármacos NF y BZ fuese similar.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22

Obtener diferencias estadísticamente significativas
en los valores de CI 50 para ambos estadios parasitarios
y para ambos fármacos es un resultado imprevisible.
Por tal motivo, se hace necesario ampliar
el número de aislado orales de este mismo brote y
realizar estudios in vitro a estos dos fármacos con el
fin de aclarar si la explicación de la falla terapéutica
en algunos pacientes venezolanos con ECh pudiese
deberse a diferencias en los aislados parasitarios.
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Exp Parasitol 108: 24-31.
36. YUN O, LIMA MA, ELLMAN T, et al. 2009. Feasibility,
drug safety, and effectiveness of etiological
treatment programs for Chagas disease in Honduras,
Guatemala, and Bolivia: 10-year experience of Médecins
sans Frontières. PLoS Negl Trop Dis 3:e488.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 14-22

Artículo Original
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
Edad del hospedero en la evolución de
la infección experimental con Trypanosoma cruzi
en un modelo murino
ZÚÑIGA C. 1 , BINDER N. 1 , PALáU M.T. 4 , LARENAS J. 2 y VERGARA U. 1,3
1 Departamento de Medicina Preventiva, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Chile. Avenida Santa
Rosa 11735. La Pintana, Santiago - Chile.
2 Departamento de Patología Animal, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Chile. Avenida Santa Rosa
11735. La Pintana, Santiago- Chile.
3 Escuela de Postgrado, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Independencia 1027, Santiago - Chile.
4 Escuela de Nutrición, Universidad Autónoma de Chile.
ABSTRACT
AGE EFFECT IN EVOLUTION OF EXPERIMENTAL TRYPANOSOMA CRUzI INFECTION
IN A MURINE MODEL
Two and eight months old Balb/c mice, were infected with 2000 Dm28c trypomastigotes of Trypanosoma.
cruzi. Two weeks after initial infection the young males showed parasitemia of 5.1 x 10 5 parasites/mL
and 50% of accumulated mortality, which reached 100% at 40 days after infection. Aged males reached
3.2 x 10 5 parasites/mL and 40% survival longer than four months. Histopathology showed differential
distribution and severity of tissue lesions between the mouse groups. Increased damage and pseudocysts
were found in heart of aged mice, which showed a long term tissue repair while lesions seemed to increase
in the striated muscle of young mice, despite of the absence of detectable tissue or blood parasites. The
differences in parasite burden, tissue damage and accumulated mortality observed in our infected mice,
suggest that age may affect the effectiveness of the immune response in controlling parasite-dependent
and/or immune-mediated damage in specific organs. Although there is no evidence for the pathogenic
role of parasite persistence and/or autoimmunity in the evolution of the disease, the 100% of accumulated
mortality observed in the young mice may be explained by neurological disturbances as those associated
to malignant arrhythmias and sudden death observed in humans. These disturbances may not be triggered
in the eight months old mice as a consequence of the decreased effectiveness of the immune system which
comes with age.
Key words: Trypanosoma cruzi, aged mice, parasitemia, histopathology.
Recibido: 5 de Marzo de 2012. Aprobado: 28 de de Mayo de 2012.
Correspondencia: U. Vergara
Email: uvergara@uchile.cl
C. Zuñiga
Email: clzuniga@uchile.cl
23

C. ZÚÑIGA et al.
RESUMEN
Ratones Balb/c, de dos y ocho meses de edad, se infectaron con 2.000 tripomastigotes Dm28c de
Trypanosoma cruzi. A las dos semanas de infección, los machos jóvenes alcanzaron parasitemia de 5.1
x 10 5 parásitos/mL y 50% de mortalidad acumulada, la que llegó al 100% a los 40 días. Los machos de
mayor edad. Alcanzaron parasitemia de 3.2 x 10 5 parásitos/mL y supervivencia del 40% más allá de los
cuatro meses de infección. La histopatología mostró diferencias en la distribución y severidad del daño,
entre ambos grupos de ratones. Los de mayor edad mostraron pseudoquistes y daño cardiaco seguido de
una lenta reparación mientras las lesiones aumentaban en músculo esquelético de los ratones jóvenes, en
ausencia de pseudoquistes y parásitos libres. Las diferencias en parasitemia, daño tisular y mortalidad
observada en los ratones aquí infectados, sugiere que la edad puede afectar la efectividad de la respuesta
inmune para controlar el daño parásito-dependiente y/o inmunológico, en órganos específicos. Aunque
no hay evidencia del rol patogénico del parásito y/o de la respuesta autoinmune en la evolución de la
enfermedad, la mortalidad de los ratones jóvenes puede obedecer a mecanismos adicionales de daño, como
las alteraciones neurológicas asociadas a arritmias malignas y muerte súbita en humanos. Estas alteraciones
no ocurrirían en ratones de mayor edad, como consecuencia del deterioro del sistema inmune que acompaña
al envejecimiento.
Palabras clave: Trypanosoma cruzi, ratones, parasitemia, histopatología, edad.
24
INTRODUCCIóN
La Enfermedad de Chagas o tripanosomosis
americana, que puede presentarse como una infección
aguda a menudo asintomática o, como ocurre
en la mayoría de los casos, en forma de un síndrome
crónico y debilitante, es causada por el protozoo
Trypanosoma cruzi. Debido a su amplia distribución
y alta prevalencia en el hombre y animales,
la infección constituye un importante problema
de salud pública en Centro y Sudamérica (Dias et
al., 2002) causando anualmente la muerte de casi
15.000 personas (Rodríguez y Albajar, 2010).
Existen más de 100 especies de insectos triatominos
que transmiten T. cruzi, el que puede infectar
virtualmente a todos los mamíferos y muchas
especies silvestres parecen actuar como reservorios
naturales del parásito (Guhl, 2007; Costa y Lorenzo,
2009; Rodríguez y Albajar, 2010;). Además de
la forma habitual de infección a través del insecto
hematófago, los humanos pueden infectarse por
transfusión sanguínea, por vía transplacentaria,
transplante de órganos, accidentes de laboratorio
o por la ingestión de alimentos contaminados con
deyecciones de insectos infectados (Moncayo y Yanine,
2006; Clayton, 2010). Después de ingresar en
el hospedero vertebrado, el parásito puede infectar
macrófagos, células de músculo liso y músculo es-
triado, fibroblastos y virtualmente todas las células
nucleadas del hospedero (Andrade et al., 2010).
El modelo murino de infección experimental
con T. cruzi ha resultado muy útil en el estudio de
la Enfermedad de Chagas, puesto que imita muchos
aspectos de la enfermedad humana, incluyendo los
mecanismos de daño tisular (Andrade y Magalhaes,
1996; Andrade et al., 1999; Andrade et al., 2002;
Diaz et al., 2004: Valenzuela et al., 2010;) y los mecanismos
inmunológicos involucrados en el control
del parásito (Zúñiga et al., 2002; Andersson et al.,
2003). Distintas cepas de ratones difieren en la susceptibilidad
o resistencia a la infección con T. cruzi,
existiendo al parecer un complejo control genético
de los niveles de parasitemia y supervivencia de los
animales infectados (Wrightsman et al., 1982; Zúñiga
et al., 1998). Se ha descrito que tanto factores
dependientes del hospedero como factores dependientes
del parásito pueden tener importante efecto
en el desarrollo y evolución de la infección con T.
cruzi. Entre estos factores se encuentran el repertorio
genético, sexo, y edad del hospedero, así como
la dosis del inoculo inicial y la cepa de parásito, aún
cuando la influencia de algunas de estas variables no
ha sido claramente establecida (Urzúa et al., 2004).
En el presente trabajo se analizó la influencia
que la edad del individuo infectado puede tener en
la prepatencia, niveles de parasitemia, mortalidad y
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33

alteraciones histopatológicas a nivel de corazón y
músculo esquelético en ratones jóvenes de 2 meses
de edad y ratones mayores, de 8 meses de edad,
experimentalmente infectados con T. cruzi.
MATERIALES Y MÉTODOS
Parásitos. La infección experimental se realizó
utilizando tripomastigotes sanguíneos del clon
Dm28c de T. cruzi (Contreras et al., 1988). Esta cepa
de parásito es mantenida in vivo en el bioterio de la
Unidad de Inmunología de la Facultad de Ciencias
Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile,
mediante el traspaso semanal de tripomastigotes en
ratones Balb/c.
Ratones. Se utilizaron cuatro grupos de 10 ratones
machos, de la cepa Balb/c. Los dos primeros
grupos corresponden a ratones jóvenes de dos meses
de edad y los dos grupos restantes corresponden
a ratones mayores, de ocho meses de edad. Esta
cepa de ratones Balb/c proviene originalmente del
Jackson Laboratory, Bar Arbor, Maine, U.S.A.
Modelo de infección experimental. Para la obtención
de parásitos, se extrajo 0,6 mL de sangre
mediante punción cardiaca de un ratón Balb/c infectado
con el clon Dm28c de T. cruzi, y sacrificado
cumpliendo con las normas bioéticas establecidas
en el Manual de Normas de Biseguridad de la Comisión
Nacional de Investigación Científica y Tecnológica
(CONICYT), Chile. La sangre así extraída
se colocó en un tubo estéril conteniendo 0,1 mL
de citrato de sodio, como anticoagulante. Luego se
realizó una dilución de 10 uL. de sangre infectada
en 490 uL de suero fisiológico estéril y se hizo un
recuento de parásitos en cámara de Neubauer. Este
procedimiento permitió determinar la cantidad total
de parásitos totales en los 0,6 mL de sangre extraídos
del ratón experimentalmente infectado. Posteriormente
se realizaron las diluciones requeridas
para obtener 2.000 parásitos en 0,2 mL que fue la
cantidad inoculada por vía intraperitoneal en a cada
uno de los ratones de los grupos experimentalmente
infectados. Los 2 grupos control de dos y ocho
meses de edad se inocularon con 0,2 mL de sangre
de ratones Balb/c no infectados y diluida de manera
similar a los grupos infectados.
Estudio de Parasitemia. Los ratones experimentalmente
infectados se sangraron cada dos días,
a partir del tercer día postinfección (p.i) y los nive-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI
les de parasitemia se analizaron hasta la muerte de
los ratones o hasta la negatividad en los niveles de
parasitemia. La sangre fue obtenida de la vena caudal,
en tubos de micro hematocrito heparinizados.
Luego cada muestra fue centrifugada a 700 g por 5
minutos, dejando reposar por 30 minutos en estufa
a 37ºC para luego medir el volumen de sangre en
cada tubo. Finalmente cada muestra se colocó en un
portaobjeto para determinar el número de parásitos
en 50 campos elegidos al azar y utilizando un aumento
de 400x. Los resultados se expresaron como
el promedio de parasitemia del grupo y la desviación
estándar correspondiente, de acuerdo al método
descrito por Arias y Ferro (1988).
Estudio histopatológico. Se sacrificó un ratón
de cada grupo los días 13, 23 y 33 p.i. y se tomaron
muestras de tejido cardiaco y músculo esquelético
para su estudio histopatológico. Los tejidos se
fijaron en Bouin-formalina y se incluyeron en parafina
para finalmente realizar cortes de 5 μm que
se tiñeron con hematoxilina-eosina. La severidad
del daño tisular y la presencia de pseudoquistes
se realizó utilizando un aumento de 100x y se representó
como negativo (-) al tejido preservado y
sin signos aparentes de daño tisular. La intensidad
de las lesiones fue evaluada en conformidad a la
severidad de la infiltración inflamatoria, uytilizando
el siguiente criterio: (+) Lesiones inflamatorias
mínimas con discreto infiltrado leucocitario; (++)
Lesiones moderadas, con infiltrado leucocitario,
hiperemia y edema; (+++) Lesiones severas, infiltrado
leucocitario, hiperemia, edema y necrosis. El
tropismo tisular y número de parásitos intracelulares
se evaluó en 10 campos microscópicos de cada
corte de tejido, examinados con aumento de 600x y
se representó de la siguiente manera: (-) Negativo,
ausencia de células parasitadas (pseudoquistes);
(+) Leve, presencia de 1-5 células infectadas; (++)
Moderado, presencia de 6-10 pseudoquistes; (+++)
Severo, presencia de 11 o más pseudoquistes.
Análisis Estadístico. Los resultados de los niveles
máximos de parasitemia se analizaron mediante
una prueba de t. El análisis de supervivencia
se realizó de acuerdo al método de Kaplan y Meier
(1958).
RESULTADOS Y DISCUSIóN
En la Figura 1 se muestra la evolución de los
25

C. ZÚÑIGA et al.
niveles de parasitemia como una forma de expresión
del desarrollo de la infección en los ratones jóvenes
de dos meses de edad (grupo A) y en los ratones
viejos de ocho meses de edad (grupo B) de la
cepa Balb/c, infectados con 2.000 tripomastigotes
sanguíneos del clon Dm 28c de T. cruzi. El período
de prepatencia sanguínea fue de 5 días en ambos
grupos de ratones; sin embargo, en la etapa inicial
de la infección, los ratones de ocho meses de edad
presentaron niveles significativamente más altos (p
< 0,05) de parásitos en circulación. En relación a los
niveles máximos de parasitemia, éstos se detectaron
al séptimo día post infección en los ratones de ocho
26
Figura 1. Niveles de parasitemia de
dos grupos etarios de ratones Balb/c
A (ratones jóvenes de 2 meses de
edad) y B (ratones de 8 meses de
edad), experimentalmente infectados
con 2.000 tripomastigotes sanguíneos
del clon Dm 28c de T. cruzi.
Figura 2. Porcentaje de mortalidad
acumulada en ratones jóvenes de
dos meses de edad de la cepa Balb/c
(A) y en ratones mayores, de ocho
meses de edad (B), infectados con
2000 tripomastigotes sanguíneos del
clon Dm28c de T. cruzi. La diferencia
entre las curvas de supervivencia
de estos dos grupos de ratones, es
estadísticamente significativas (p <
0,02). A los 40 días post infección se
alcanzo el 100% de mortalidad en los
ratones jóvenes, mientras el 40% de
los ratones de ocho meses de edad sobrevivió
más allá de los cuatro meses
postinfección.
meses de edad (3,2 x 10 5 parásitos/mL), mientras
en el grupo de ratones jóvenes el nivel máximo de
parasitemia se obtuvo al día 14 p.i. alcanzando 5,1
x 10 5 parásitos/mL (p < 0,05). No se observaron
diferencias significativas (p > 0,05) en la duración
de la parasitemia, puesto que ella fue negativa al
día 19 p.i., en los ratones jóvenes de dos meses
de edad y al día 21 p.i. en el grupo de los ratones
envejecidos de ocho meses de edad.
Como todos los ratones fueron infectados con
el mismo número de parásitos, se utilizó la muerte
o supervivencia como criterio para determinar
la susceptibilidad o resistencia de cada grupo de
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33

atones a la infección con 2.000 tripomastigotes
sanguíneos de T. cruzi. La Figura 2 muestra que el
grupo de ratones jóvenes, de dos meses de edad,
presentó un 50% de mortalidad acumulada a los l5
días p.i., mientras el grupo de ratones de 8 meses
de edad, presentó sólo un 10% de mortalidad
en el mismo período. Al día 40 p.i. el grupo de
ratones jóvenes presentó un 100% de mortalidad
acumulada, mientras en el grupo de ocho meses de
edad, el 40% sobrevivió más allá de los cuatro meses
p.i. No se observó mortalidad en los grupos control
de ratones jóvenes de dos meses y de ratones de
ocho meses de edad, inoculados con sangre normal
de ratones Balb/c sanos, no infectados.
Aunque en los primeros diez días de infección
los niveles de parasitemia fueron significativamente
más altos en los ratones de mayor edad (p < 0,05),
los animales jóvenes desarrollaron niveles de
parasitemia de casi el doble de lo alcanzado por los
animales de mayor edad a los 14 días p.i. (Figura
1) lo que coincidió con una también elevada
mortalidad acumulada que alcanzó el 50% al día 15
p.i. en este grupo de ratones, lo que parece apoyar la
sugerencia que la persistencia del parásito es una de
las principales causas de la Enfermedad de Chagas
(Tarleton, 2001). Desde luego, uno de los aspectos
más sorprendentes de la enfermedad es la compleja
red de eventos que parece acompañar, tanto el
desarrollo de una respuesta inmune protectora,
como el desarrollo de una respuesta autoinmune
que conduce a daño tisular, a medida que progresa
el curso de la infección y/o de la enfermedad
(Minoprio et al., 1989; Russo et al., 1989; Zúñiga
et al., 1998: Zúñiga et al., 2002).
Estudio Histopatológico
El año tisular que acompaña el desarrollo de la
infección con T. cruzi se evaluó mediante la comparación
de las lesiones histopatológicas presentes
en corazón y músculo esquelético en los dos grupos
de ratones de dos y ocho meses de edad infectados
con el clon Dm28c (Tabla 1). En los ratones
jóvenes, el mayor daño tisular se observó en el
músculo esquelético, con presencia de numerosos
pseudoquistes, aumento de lesiones inflamatorias
y necrosis del tejido a medida que progresaba la
infección, mientras en los ratones de ocho meses de
edad este gran número de parásitos y enorme daño
inflamatorio e infiltración celular, se observó en el
tejido cardiaco, en el que, con el transcurso de los
días se produjo no sólo una disminución paulatina
de la carga parasitaria y del daño inflamatorio, sino
también una lenta reparación tisular.
Un análisis detallado de los estudios histopatológicos
muestra que, al día 13 post-infección (p.i.)
los ratones de ocho meses de edad presentaron lesiones
inflamatorias y no inflamatorias multifocales
en el tejido cardiaco (1-2 lesiones por campo,
de formas redondeadas y alargadas, distribuidas al
azar) (Figura 3). En los ratones jóvenes se observó,
en cambio, un menor número de lesiones inflamatorias
focales (1 cada 5 campos) (Figura 4).
Tabla 1. Estudio histopatológico de ratones Balb/c infectados con 2.000 tripomastigotos sanguíneos del clon
Dm28c de T. cruzi
Grupo Tejido Lesión 13 días p.i. 23 días p.i. 33 días p.i.
Ratones de ocho
meses de edad
Ratones de dos
meses de edad
Corazón Inflamación
Pseudoquistes
Necrosis
Músculo
esquelético
Inflamación
Pseudoquistes
Necrosis
Corazón Inflamación
Pseudoquistes
Necrosis
Músculo
esquelético
Inflamación
Pseudoquistes
Necrosis
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI
+
+++
-
-
+
-
-
+
-
+
-
-
++
++
-
++
-
-
+
-
-
+++
-
+
+
-
-
+
-
+
+
-
-
+++
-
+++
27

C. ZÚÑIGA et al.
Figura 3. Tejido cardiaco de ratones de ocho meses de
edad al día 13 p.i. Se observan lesiones inflamatorias y no
inflamatorias. Aumento 100x.
Al utilizar un aumento de 1.000x, se observó,
en los ratones de mayor edad, gran cantidad de
pseudoquistes parasitarios e infiltrado inflamatorio
con predominio de macrófagos (Figura 5). En los
ratones jóvenes también se observó inflamación
pero escasa presencia de pseudoquistes (Figura 6).
Al día 23 p.pi, el miocardio de los ratones de
8 meses de edad mostró células infectadas y aumento
de la infiltración celular en las lesiones inflamatorias
focales diseminadas (Figura 7), mientras
los ratones jóvenes mostraron sólo pequeños focos
inflamatorios (Figura 8).
Al día 33 p.i. no se detectaron pseudoquistes
en el miocardio de los ratones de 8 meses de edad,
pero se observaron leves focos inflamatorios y pérdida
de tejido muscular, con reemplazo de tejido
conectivo (Figura 9). En el tejido cardiaco de los
animales jóvenes se observó un leve proceso inflamatorio,
sin mayores lesiones (Figura 10).
En el músculo esquelético, tanto de los ratones
de mayor edad, como en los ratones jóvenes de dos
meses de edad, no se detectaron lesiones inflamatorias
evidentes al día 13 post infección (Figura 11
y Figura 12, respectivamente). Sin embargo, a los
23 días p.i., mientras los ratones de mayor edad
mostraban sólo una moderada inflamación y escaso
infiltrado leucocitario (Figura 13), los ratones jóvenes
presentaron un severo proceso inflamatorio
focal diseminado, con predominio linfocitario y necrosis
de la fibra muscular (Figura 14).
Al día 33 p.i. el músculo esquelético de los
ratones de ocho meses de edad presentó una dis-
28
Figura 4. Tejido cardiaco de ratones de dos meses de edad
al día 13 p.i. Se observan leves lesiones inflamatorias.
Aumento 100x.
Figura 5. Tejido cardiaco de ratones de ocho meses de
edad al día 13 p.i. Se observan 4 pseudoquistes. Aumento
1000x.
minución de los focos inflamatorios, pérdida de la
estriación de la fibra muscular y reemplazo por tejido
conectivo (Figura 15); se encontró además un
granuloma con gran cantidad de células inflamatorias
y parásitos. En los animales jóvenes se observó,
en cambio, una mayor infiltración inflamatoria
del tejido muscular esquelético, con necrosis y depósito
de calcio (Figura 16).
Los resultados de los estudios histopatológicos
de corazón y músculo esquelético de los ratones
aquí infectados con el clon Dm28c de T. cruzi indican
que, a pesar que en ambos grupos se presentaron
lesiones inflamatorias de distinta consideración
en estos tejidos, los ratones de ocho meses de edad
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33

Figura 6. Tejido cardiaco de ratones de ocho meses de
edad al día 13 p.i. Se observa 1 pseudoquiste. Aumento
200x.
Figura 8. Tejido cardiaco en ratones de dos meses de
edad al día 23 p.i. Se observan sólo pequeños focos
inflamatorios. Aumento 100x.
que sobrevivieron a la infección fueron capaces
de recuperarse y reparar el daño tisular, mientras
que todos los ratones jóvenes de dos meses de edad
sucumbieron a la infección (Figura 2), a pesar de
presentar sólo pequeños focos inflamatorios en el
tejido cardiaco, pero un gran proceso inflamatorio,
necrosis y depósito de calcio en el músculo esquelético,
sin posibilidad de poner en marcha mecanismos
de reparación de este daño tisular (Figura 16).
Estos resultados apoyan la hipótesis de la existencia
de una compleja red de eventos que acompañan
tanto el desarrollo de una respuesta inmune protectora
como el desarrollo de una respuesta que induce
daño tisular, a medida que progresa el curso de la
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI
Figura 7. Tejido cardiaco de ratones de ocho meses de
edad, al día 23 p.i. Se observa infiltrado mononuclear en
lesiones inflamatorias diseminadas. Aumento 100.
Figura 9. Tejido cardiaco de ratones de ocho meses de
edad al día 33 p.i.. Se observan focos inflamatorios, pérdida
de tejido muscular y reemplazo con tejido conectivo.
No se observan pseudoquistes. Aumento 200x.
infección y/o de la enfermedad (Dutra et al., 2009).
Mientras algunos individuos desarrollan una forma
severa de la enfermedad y mueren en el curso de
la misma, otros logran sobrevivir a pesar del daño
tisular, como ocurre con el 40% de los ratones de
8 meses de edad aquí infectados con 2.000 tripomastigotes
sanguíneos del clon Dm28c de T. cruzi,
demostrando la compleja interacción parásito/hospedero
que acompaña al desarrollo de la infección
y/o de la enfermedad. La presentación de lesiones
de distinta consideración o gravedad en diferentes
tejidos de ratones jóvenes y de ratones de mayor
edad de la cepa Balbc, infectados con el mismo
clon de T. cruzi, sugiere que la respuesta inmune
29

C. ZÚÑIGA et al.
Figura 10. Tejido cardiaco de ratones de dos meses
de edad al día 33 p.i. Se observa un leve proceso
inflamatorio. Aumento 200x.
Figura 12. Músculo esquelético de ratones jóvenes de
dos meses de edad al día 13 p.i. Tampoco se observan
lesiones inflamatorias. Aumento 100x.
del hospedero es efectivamente un factor crítico en
las consecuencias que se observan en la evolución
de esta infección parasitaria ((Laguens et al., 1981;
Hontebeyrie-Joskowicz et al., 1987; Villela-Ribeiro
et al., 2002, Lages-Silva et al., 2006).
En humanos la transición desde la fase aguda
a la fase crónica de la Enfermedad de Chagas va
acompañada de una disminución en la parasitemia,
como consecuencia del desarrollo de una respuesta
inmune relativamente eficiente, que logra mantener
el número de parásitos por debajo de niveles detectables
en el hospedero, Sin embargo, a pesar de
estos bajos niveles de parasitemia, es precisamente
durante la fase crónica de la enfermedad que los
pacientes desarrollan las formas más severas de
30
Figura 11. Músculo esquelético de ratones de ocho
meses de edad al día 13 p.i. No se observan lesiones
inflamatorias. Aumento 100x.
Figura 13. Músculo esquelético de ratones de ocho meses
de edad al, día 23 p.i. Se observa una moderada inflamación
y escaso infiltrado leucocitario. Aumento 100x.
la misma. Aún cuando se desconoce qué factores
determinan que pacientes infectados con T. cruzi
desarrollen distintas formas clínicas de la enfermedad,
se ha postulado que la cepa de parásito, su
tropismo tisular, el número de parásitos en la infección
inicial, la naturaleza de la respuesta inmune
del hospedero y el repertorio genético del mismo,
juegan un rol importante en las consecuencias de
la infección (Bonney y Engman, 2008; Dutra y Gollob,
2008). Sin embargo, la efectividad de la respuesta
inmune inicial del hospedero, para controlar
al parásito en un tejido específico, parece desempeñar
un rol tal vez más importante (Marin-Neto et
al., 2007; Dutra y Gollob, 2008); de esta manera la
presentación clínica variará de acuerdo a la dura-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33

Figura 14. Músculo esquelético de ratones jóvenes de
dos meses de edad al día 23 p.i. Se observa un gran
proceso inflamatorio con infiltrado linfocitario y necrosis
de la fibra muscular. Aumento 100x.
Figura 16. Músculo esquelético de ratones jóvenes de
dos meses de edad al día 33 p.i. Se observa infiltración
del tejido muscular, necrosis y depósito de calcio. Aumento
100x.
ción de la enfermedad y la extensión y localización
de las lesiones cardiacas (Rassi Jr et al., 2000). En
conformidad con esta hipótesis, cuando el control
inmunológico resulta insuficiente, el número de parásitos
y el daño inflamatorio en los tejidos tenderá
a aumentar, mientras el desarrollo de un respuesta
inmune efectiva. capaz de reducir el número de parásitos
y de limitar sus consecuencias inflamatorias,
resultará en un menor daño tisular.
Así, el deterioro del sistema inmune, que viene
con la edad o el envejecimiento, podría explicar la
incapacidad para desarrollar una efectiva respuesta
inmune innata que permita, en la fase aguda de la
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 23-33
EDAD DEL HOSPEDERO EN LA INFECCIÓN CON TRYPANOSOMA CRUZI
Figura 15. Músculo esquelético de ratones de ocho meses
de edad al día 33 p.i . Se observan focos inflamatorios,
pérdida de las estriaciones y reemplazo por tejido
conectivo. Aumento 100x.
infección, controlar los niveles de parasitemia sanguínea
(Figura 1) y la persistencia tisular del parásito
(Figura 5) que conduciría finalmente al daño
inflamatorio que se observa en el tejido cardiaco
de los ratones de ocho meses de edad (Figura 7).
Sin embargo, a pesar del extenso daño tisular, estos
ratones de mayor edad logran, paradójicamente,
controlar el número de parásitos sanguíneos y tisulares
y reparar finalmente el daño cardiaco, alcanzando
un 40% de supervivencia más allá de los
cuatro meses post-infección (Figura 2), sugiriendo
que la interacción parásito/hospedero es claramente
más compleja de lo que conocemos. Esta sugerencia
se ve reforzada por los resultados obtenidos en
los ratones jóvenes de dos meses de edad en los
cuales el desarrollo de una respuesta innata que
parece controlar el nivel de parásitos sanguíneos
en la primera semana post-infección, resulta finalmente
inefectiva, puesto que la carga parasitaria
alcanza niveles que duplican aquella observada en
los ratones de mayor edad, a las dos semanas postinfección
(Figura 1), lo que coincide además con
un 50% de mortalidad acumulada, en este grupo de
ratones (Figura 2), a pesar de la escasa evidencia de
parásitos y de daño inflamatorio en el tejido cardiaco
(Figura 8), que sí se observa en tejido muscular
esquelético (Figuras 14 y 16).
La única señal clínica evidente observada en
este grupo de ratones jóvenes experimentalmente
infectados con T. cruzi, fue la presentación de
una paresia del tren posterior poco días antes de su
31

C. ZÚÑIGA et al.
muerte súbita, lo que sugiere la participación de
un mecanismo de daño neuronal en la patogénesis
de la enfermedad y en las complicaciones y estado
clínico del hospedero (Rassi Jr. et al., 2000; Marin-
Neto et al., 2007). En humanos la muerte súbita de
los pacientes con enfermedad de Chagas, en ausencia
de cualquier síntoma clínico significativo previo,
obedece generalmente a fibrilación ventricular
que es la causa más frecuente de muerte y afecta al
55-65% de los pacientes (Rassi Jr. et al., 2001).
Por lo tanto, las diferencias en parasitemia,
daño tisular y mortalidad observada en los ratones
aquí infectados, sugiere que la edad puede afectar
la efectividad de la respuesta inmune para controlar
el daño parásito-dependiente o inmuno-mediado,
en órganos específicos. Aunque no hay evidencia
concluyente del rol patogénico del parásito y/o
de la respuesta autoinmune en la evolución de la
enfermedad, el 100% de mortalidad acumulada
obtenida en los ratones jóvenes de dos meses de
edad, puede obedecer a la inducción de mecanismos
adicionales de daño, como aquéllos relacionados
con las alteraciones neurológicas asociadas a
las arritmias malignas y muerte súbita observada
en humanos. Estas alteraciones no ocurrirían en
los ratones de mayor edad, como consecuencia
de la menor efectividad del sistema inmune que
acompaña al envejecimiento.
32
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33

Artículo Original
34
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
Parasitosis en Gran Canaria (España).
Estudio prospectivo multicéntrico durante un año
NOVO-VELEIRO I. 1 , MARTÍN-SáNCHEZ A. M. 2,3 , ELCUAZ-ROMANO R 4 , MURO A 5 , AFONSO-RODRÍGUEZ
O 3 , GARCÍA-BARDECI D 4 , BORDES-BENÍTEZ A. 4 , CARRANZA-RODRÍGUEZ C 6,7 , HERNáNDEZ-CABRERA
M 6,7 , ALVELA-SUáREZ L 1 y PÉREZ-ARELLANO J. L 6,7 .
1 Servicio de Medicina Interna. Hospital Clínico. Complejo Hospitalario Universitario de Salamanca. Salamanca.
2 Servicio de Microbiología y Parasitología. Hospital Insular. Las Palmas.
3 Departamento de Ciencias Clínicas. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Las Palmas.
4 Servicio de Microbiología y Parasitología. Hospital Dr Negrín. Las Palmas.
5 Laboratorio de Inmunología y Parasitología Molecular, CIETUS, Facultad de Farmacia, Universidad de Salamanca.
Salamanca.
6 Departamento de Ciencias Médicas y Quirúrgicas. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. Las Palmas.
7 Unidad de Enfermedades Infecciosas y Medicina Tropical. Hospital Insular de Las Palmas. Las Palmas.
ABSTRACT
HUMAN PARASITIC INFECTIONS IN GRAN CANARIA (SPAIN). A ONE-YEAR
MULTICENTRIC PROSPECTIVE STUDY
Introduction: Parasitic diseases are the most prevalent diseases in the world. The objective of this
study was to evaluate the prevalence and clinical and epidemiological characteristics of parasitic diseases
diagnosed in Gran Canaria during a year. Methods: We included all diagnosed cases of parasitosis in
public health centers of Gran Canaria during a year. Then, we conducted a descriptive study, analyzing
socio-demographic characteristics, presentation and associated factors. Results: A total of 957 cases were
diagnosed (55% men). 58.4% were due to protozoa, the most frequent was Giardia intestinalis (84%),
followed by Trichomonas vaginalis (13.4%), Plasmodium sp (3.9%) and Cryptosporidium sp (2.3%). In
relation to helminthiasis (40.7% of total), 76.4% corresponded to Enterobius vermicularis, 6.1% were due
to hookworm, 3.6% for Trichuris trichiura and 3% to different filariasis. The largest age group was between
1 and 10 years. 21.2% of the cases were imported, most of them from sub-Saharan countries. Conclusions:
The real prevalence of different parasitic diseases on the island of Gran Canaria is greater than that declared
by formal systems. Parasites that more frequently affect the native population of Gran Canaria who has not
traveled to tropical areas are Giardia intestinalis and Enterobius vermicularis.
Key words: Parasitic diseases, Protozoa, Helminths, Gran Canaria.
Recibido: 1 de Marzo de 2012. Aprobado: 11 de Abril de 2012.
Correspondencia: Prof. J. L. Pérez Arellano. Unidad de Enfermedades Infecciosas y Medicina Tropical. Hospital
Universitario Insular de Gran Canaria. Departamento de Ciencias Médicas y Quirúrgicas.
Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. 35080 Las Palmas de Gran Canaria. Tno 928451455
- Fax 928451413

RESUMEN
Introducción: Las parasitosis son las enfermedades infecciosas más prevalentes en el mundo.
El objetivo de este estudio fue evaluar la prevalencia y características clínico-epidemiológicas de
las parasitosis diagnosticadas en Gran Canaria en un año. Métodos: Se incluyeron todos los casos de
parasitosis diagnosticados en todos los centros públicos de Gran Canaria durante un año. Se llevó a cabo un
estudio descriptivo, analizando características sociodemográficas de los pacientes, formas de presentación
y factores asociados. Resultados: Se diagnosticaron un total de 957 casos (55% varones). El 58,4% se
debían a protozoos, siendo el más frecuente Giardia intestinalis (84%), seguido de Trichomonas vaginalis
(13,4%), Plasmodium sp (3,9%) y Cryptosporidium sp (2,3%). En cuanto al diagnóstico etiológico de las
helmintosis (40,7% del total), el 76,4% correspondían a Enterobius vermicularis, un 6,1% a uncinarias, el
3,6% a Trichuris trichiura y el 3% a diferentes filariosis. El grupo de edad más numeroso fue el comprendido
entre 1 y 10 años. El 21,2% de los casos fueron importados, siendo el origen más frecuente de los pacientes
los países subsaharianos. Conclusiones: La prevalencia real de las diferentes parasitosis en la isla de Gran
Canaria es muy superior a la declarada mediante los sistemas oficiales. Los parásitos que afectan de forma
más frecuente a la población autóctona de Gran Canaria que no ha viajado a zonas tropicales son Giardia
intestinalis y Enterobius vermicularis.
Palabras clave: Parasitosis, Protozoos, Helmintos, Gran Canaria.
INTRODUCCIóN
Las parasitosis (clínicas o subclínicas) son, sin
lugar a dudas, las enfermedades infecciosas más
prevalentes en el mundo (Watkins, 2003; Muñoz y
Pérez, 2006) aunque sus consecuencias patológicas
son muy variables dependiendo del agente causal
concreto. Desde un punto de vista epidemiológico,
su prevalencia es máxima en zonas tropicales
y subtropicales (Watkins, 2003) fenómeno ligado
a las malas condiciones higiénicas y socio-sanitarias.
Sin embargo, estas enfermedades también se
describen en países desarrollados existiendo dos
patrones diferentes: i) parasitosis cosmopolitas,
de distribución universal. A modo de ejemplo, en
U.S.A. se diagnostican anualmente 7,4 millones de
infecciones por Trichomonas vaginalis, siendo la
parasitosis más frecuente en dicho país (Parasitic
Disease Report) y ii) parasitosis importadas, relacionadas
con los viajes a áreas endémicas ( Ryan
et al., 2002; Espinosa et al., 2011) o con la inmigración
desde esas zonas mundiales (Pardo et al.,
2006). En este sentido, tiene interés recordar el aumento
exponencial del número de inmigrantes en
España en la pasada década Sanz y Pérez, 2007).
La información disponible acerca de las infecciones
parasitarias en España es escasa y fragmentaria.
Además de los casos aislados (o pequeños
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO
grupos), las principales series presentan algunos
sesgos en relación con los grupos etarios considerados
(principalmente series pediátricas) (Jarabo et
al., 1995; Pérez et al., 1997; Belda et al., 2008),
el tipo específico de parasitosis (p. ej. intestinales,
ETS, hidatidosis o fasciolosis) (Orduña et al., 1001;
Cosme et al., 2001; Díaz et al., 2002; Roca et al.,
2002, 2003; Martín et al., 2004; Pardo et al., 2005;
Belda et al., 2008; Monge et al., 2009, González et
al., 2011) o el origen de los pacientes (parasitosis
importadas o autóctonas) (Orduña et al., 1001; Jarabo
et al., 1995; Pérez et al., 1997; Cosme et al.,
2001; Díaz et al., 2002; Roca et al., 2002, 2003;
Martín et al., 2004; Pardo et al., 2005; Belda et al.,
2008; Monge et al., 2009, González et al., 2011).
Por ello, el objetivo principal de este estudio fue
evaluar tanto la prevalencia como las características
clínicas y epidemiológicas básicas de las diferentes
parasitosis diagnosticadas en la isla de Gran
Canaria durante un año natural.
MÉTODOS
Criterios de inclusión. Se incluyeron todos
los casos de parasitosis diagnosticados en todos
los centros públicos de las dos áreas sanitarias de
la isla de Gran Canaria. El área Norte incluye la
35

I. NOVO-VELEIRO et al.
zona norte de la ciudad de Las Palmas (Hospital
Universitario Dr. Negrín) y los Centros de Atención
Especializada (CAEs) relaciona-dos. El área Sur
incluye la zona sur de la ciudad de Las Palmas
(Complejo Hospitalario Universitario Materno-
Insular) y los CAEs relacionados. El período de
estudio fue del 1 de junio de 2000 al 31 de mayo de
2001.
Criterios de exclusión. Se excluyeron los casos
en los que se detectaron parásitos no patógenos,
específicamente amebas.
Métodos diagnósticos. El diagnóstico se
efectuó empleando las técnicas directas habituales
de cada centro de trabajo: técnicas de Ritchie
y Kato-Katz para la detección de parasitosis
intestinales; detección antigénica de Gs65 en
heces para el diagnóstico de giardiosis (Giardia
II, Techlab/Wampole Inc., Blacksburg, VA, USA);
test de Graham para el diagnóstico de enterobiosis,
detección de adhesina (Gal/GalNAc lectin) para
la identificación de Entamoeba histolytica (E.
histolytica II, TechLab/Wampole Inc., Blacksburg,
VA, USA); examen del exudado vaginal en
fresco para la detección de T. vaginalis así como
estudio del sedimento urinario para la evaluación
de Schistosoma haematobium y T. vaginalis en
varones (Shore, 2009). En la detección de algunas
helmintosis se emplearon técnicas serológicas ya
descritas por nuestro grupo (Pardo et al., 2006).
Los parásitos identificados se incluyeron en
tres grupos: protozoos, helmintos y artrópodos.
36
Debemos señalar que los casos de Blastocystis
hominis se incluyeron, en el grupo de protozoos,
aunque la taxonomía de este género/especie es
controvertida (reino Chromista) (Tan et al., 2002).
Se utilizó la terminología recomendada por Bush et
al., en su trabajo Parasitology meets ecology on its
own terms. Margolis et al., revisited para referirse
a la epidemiología de las diferentes enfermedades
parasitarias descritas (Bush et al., 1997).
Variables clínicas. Se evaluaron las siguientes
magnitudes: edad, sexo, mes del año y origen de
los pacientes (autóctono o importado). En los casos
de pacientes atendidos en el medio hospitalario
se recogió además la existencia o no de inmunodepresión,
la sintomatología que presentaban en el
momento del diagnóstico, así como la presencia de
anemia y/o eosinofilia en determinadas parasitosis.
Estudio estadístico. Se llevó a cabo un estudio
descriptivo de cada una de las parasitosis diagnosticadas,
analizando las características sociodemográficas
de los pacientes, las formas de presentación y
los factores asociados. Se utilizó para ello el programa
estadístico SPSS versión 17.
RESULTADOS
Se recogieron los datos de un total de 957 pacientes
con parasitosis (55% varones). La edad media
fue de 16 años (DE=25). El 66% de los pacientes
tenían una edad inferior a 18 años y el grupo
> 100
51 - 100
31 - 50
11 -30
1 - 10
Sin casos
Figura 1. Distribución de los casos
según el municipio de origen.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41

etario más numeroso fue el comprendido entre 0
y 9 años, con 460 individuos. Del total de casos,
555 fueron diagnosticados en el área Norte y 402
en el área Sur de Gran Canaria. En la Figura 1
se observa la distribución de los casos autóctonos
diagnosticados en función del municipio de procedencia,
observándose una relación directa entre el
número de parasitosis y la tasa de población. No
se encontró una relación significativa para ninguna
parasitosis con la época del año en la que se realizó
el estudio.
El número de casos importados fue de 203
(21,2%), de los cuales un 69,6% procedían de países
subsaharianos, un 23,2% de países del norte de
áfrica y un 7,2% de Centroamérica o Sudamérica.
En cuanto al parásito identificado en cada caso,
en 559 pacientes (58,4%) se trató de protozoos,
394 pacientes (41,2%) se encontraban parasitados
por helmintos y tan sólo en 4 casos (0,4%) la
parasitación se debía a artrópodos.
En 409 (84%) de los pacientes parasitados por
protozoos (Tabla 1) se detectó como microorganismo
responsable Giardia intestinalis, siendo estos
fundamentalmente niños, con una mediana de edad
de 6 años. Un 13,2% de los casos (54 pacientes)
eran inmigrantes, fundamentalmente de origen subsahariano.
T. vaginalis fue el segundo protozoo más
frecuentemente detectado, con un total de 75 casos
con una media de edad de 33 años, correspondiendo
todos los casos a población autóctona. La
detección en las mujeres se realizó en muestras de
exudado vaginal, encontrándose embarazadas en el
momento del diagnóstico el 23,3% de las mismas.
El diagnóstico de malaria se efectuó en 22 pacientes
siendo el diagnóstico de la especie de Plasmodium
el siguiente: 17 P. falciparum, 2 P. vivax, 2 P.
ovale y 1 P. malariae. Todos los casos fueron importados
y la mayor parte de ellos (90%) provenían
de países del áfrica subsahariana. La edad media
fue de 32 años y un 81% de ellos eran varones. La
parasitación por Cryptosporidium sp se diagnosticó
en un total de 13 pacientes, 10 de ellos menores de
18 años. Todos los casos fueron autóctonos y presentaban
manifestaciones clínicas (diarrea en todos
ellos). Los tres pacientes adultos diagnosticados
presentaban infección por VIH. Nueve pacientes
fueron diagnosticados de amebosis (por Entamoeba
hystolitica/dispar), tan sólo dos de ellos fueron
casos autóctonos. Cuatro de los pacientes se encontraban
asintomáticos y los demás presentaban colitis
amebiana (dos casos), angioedema (dos casos) y
absceso amebiano (un caso).
En nuestra serie se diagnosticaron un total de
31 casos de infección por B. hominis. La media de
edad de dichos pacientes fue de 33 años, la mayor
parte de ellos eran varones (74,2%) y el 20% inmigrantes.
Las manifestaciones clínicas más frecuentes
fueron el dolor abdominal y la diarrea, aunque
en ocho de los casos diagnosticados los pacientes
se encontraban asintomáticos, tres de los cuales
fueron estudiados por la presencia de eosinofilia.
Tan sólo tres de los pacientes se encontraban inmunodeprimidos
en el momento del diagnóstico.
En lo que respecta a las helmintosis, la mayor
Tabla 1. Protozoosis. Características clínico-epidemiológicas según el agente causal. Las variables se
expresan como valores absolutos y tantos por ciento
Protozoo
Giardia intestinalis
Trichomonas
vaginalis
Casos Sexo
Mujeres/
Hombres
Origen
Autóctonos/
Importados
Inmunosupresión
Síntomas
409 184/225 355/54 4 (1%) -
75 73/2 75/0 0 -
Plasmodium sp 22 4/18 0/22 0 22 (100%)
Cryptosporidium
sp
13 3/10 13/0 3 (23%) 13 (100%)
Entamoeba sp 9 4/5 2/7 0 5 (55,5%)
Blastocystis
hominis
31 8/23 25/6 3 (9,6%) 23 (74%)
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO
37

I. NOVO-VELEIRO et al.
parte de los casos correspondían a Enterobius vermicularis,
con un total de 301 casos (76,4% del total
de helmintos) (Tabla 2). Todos los pacientes eran
menores de 18 años, siendo la mediana de edad de
7 años. Un 9% de los pacientes eran inmigrantes,
la mayor parte de ellos provenientes de países del
norte de áfrica. En orden de frecuencia, el segundo
grupo de helmintos más prevalente fueron las uncinarias
(Necator americanus, Ancylostoma duodenale),
diagnosticadas en 24 pacientes, todos ellos
inmigrantes procedentes de Nigeria. Se trataba
principalmente de varones (83%) con una media de
edad de 24 años. Todos se encontraban asintomáticos
en el momento del diagnóstico. En este grupo
se detectó eosinofilia en 14 casos (54%) y anemia
en 5 (21%). La parasitación por Trichuris trichiura
fue objetivada en 14 pacientes, todos inmigrantes
y procedentes de países del áfrica subsahariana.
Siete de ellos presentaban eosinofilia y cinco ane-
38
mia. En 15 pacientes se diagnosticó por métodos
directos o indirectos algún tipo de filariosis. En la
mayoría de casos (13/15), se trataba de inmigrantes
subsaharianos procediendo los dos restantes de
América Latina (Trinidad y Tobago y Brasil). Todos
ellos presentaban eosinofilia y la mayor parte
se encontraban asintomáticos. Debe indicarse que
el 73% presentaban una inmunodepresión, la mayor
parte por infección por VIH. Ascaris lumbricoides
fue detectado en 11 casos (10 importados/1 autóctono),
la mayor parte procedentes de Nigeria. En
cuanto a las alteraciones analíticas, dos de los pacientes
presentaban eosinofilia y otros dos anemia.
Tan sólo cuatro pacientes referían alguna sintomatología
al diagnóstico. El diagnóstico de infección
por Fasciola hepatica se realizó en 7 pacientes por
métodos serológicos, todos ellos eran inmigrantes,
en su mayoría originarios de Nigeria. En todos ellos
se observó eosinofilia y solamente uno refería algu-
Tabla 2. Helmintosis. Características clínico-epidemiológicas según el agente causal. Las variables se
expresan como valores absolutos y tantos por ciento
Helminto Casos Sexo
Mujeres/
Varones
Origen
Autóctonos/Importados
Eosinofilia Anemia Inmunosupresión
Síntomas
Enterobius
vermicularis
301 135/166 274/27 - - 0 -
Uncinarias 24 4/20 0/24 14 (58%) 5 (21%) 0 0
Filarias* 15 2/13 0/15 15 (100%) 0 12 (80%) 2 (13%)
Ascaris
lumbricoides
11 3/8 1/10 2 (18%) 2 (18%) 0 4 (36%)
Fasciola
hepática
7 1/6 0/7 7 (100%) 0 0 1 (14%)
Schistosoma
spp
7 1/6 0/7 7 (100%) 0 0 2 (28,5%)
Trichinella
spiralis
5 2/3 0/5 5 (100%) 0 0 2 (40%)
Hymenolepis
nana
3 1/2 0/3 - - 0 -
Larva cutánea
migrans
2 1/1 0/2 2 (100%) 0 0 2 (100%)
Strongyloides
sp
2 0/2 0/2 2 (100%) 0 0 1 (50%)
* Incluye Mansonella perstans, Loa loa, Onchocerca volvulus, Wuchereria bancrofti.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41

na manifestación clínica. Los siete casos de esquistosomosis
se diagnosticaron mediante serología en
inmigrantes procedentes de áfrica subsahariana.
Todos ellos presentaban eosinofilia y la mayoría se
encontraban asintomáticos.
Otras parasitosis importadas producidas por
helmintos fueron: Trichinella spiralis (cinco casos),
Hymenolepis nana (tres casos), larva cutánea
migrans (2 casos diagnosticados por manifestaciones
clínicas características), Strongyloides sp (dos
casos), Taenia sp (un caso), Trychostrongylus sp
(un caso) y Echinococcus granulosus (un caso).
Se diagnosticaron también cuatro casos de
parasitosis por artrópodos, tres de ellos por Sarcoptes
scabiei y uno por Cordylobia anthropophaga.
DISCUSIóN
El análisis de los resultados del estudio indica,
en primer lugar, que la prevalencia de infección parasitaria
en nuestro medio es mucho más elevada
que la declarada. Así, el número de casos diagnosticados
en la isla de Gran Canaria en un período de
un año (957) es aproximadamente la mitad del declarado
al Sistema de Información Microbiológica
en toda España en las mismas fechas (2.032 casos
en el año 2001 ó 1.812 en el 2000) (Microorganismos
notificados al sistema de Información microbiológica
SIM). Por otro lado, el número de casos
de parasitosis declarado en la Comunidad Canaria
en el periodo de estudio fue mucho menor (SIM
2008-2010). De hecho, la tasa real de parasitación
en la isla de Gran Canaria, basándonos en los datos
expuestos, se situaría en los 129 casos por 100.000
habitantes/año, teniendo en cuenta la población de
la isla en el periodo de estudio. Existen dos consideraciones
adicionales que sugieren que la prevalencia
de parasitosis en Gran Canaria es superior
a la señalada. Así, el diseño del estudio se basa en
los resultados microbiológicos positivos y no en
un protocolo clínico de sospecha de parasitosis.
Por otro lado, únicamente se incluyeron los casos
diagnosticados en los centros públicos de la isla,
pudiendo existir un número importante de casos
diagnosticados en centros privados que no se incluyeron
en el estudio. Creemos que los datos aportados
en este estudio, aunque recogidos en la década
pasada, siguen siendo de utilidad por tres razones:
i) se obtuvieron en el período de máxima inmigra-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 34-41
PARASITOSIS EN GRAN CANARIA. ESTUDIO PROSPECTIVO
ción en Gran Canaria, ii) no se han modificado las
características higiénicas que podrían hacer variar
la prevalencia de parasitosis autóctonas y iii) no
hemos encontrado series similares en la población
española. Por tanto, es probable que la prevalencia
de las diferentes parasitosis descritas no haya
variado demasiado en la última década, aunque el
descenso significativo del número de inmigrantes
que han llegado a la región en los últimos años posiblemente
haya hecho disminuir algunas de ellas.
En cuanto a los datos socio-epidemiológicos,
cabe destacar que en pacientes menores de 10
años es especialmente prevalente la infección por
E. vermicularis y G. intestinalis. Ambos parásitos
son los más frecuentes en nuestra serie, suponiendo
en conjunto el 84,3% de los casos autóctonos (G.
intestinalis: 47,6% y E. vermicularis: 36,7%), datos
similares a los encontrados en otras Comunidades
Autónomas, aunque con un porcentaje superior de
enterobiosis (Jarabo et al., 1995; Pérez et al., 1997;
Belda et al., 2008).
Además de las giardiosis y enterobiosis, nuestro
estudio permite señalar algunas características
de otras parasitosis autóctonas en España. Así, T.
vaginalis es el segundo protozoo más frecuente en
nuestra serie y en otros estudios españoles, constituyendo
hasta un 23% de las enfermedades de
transmisión sexual en mujeres, con especial relevancia
durante el embarazo por su potencial gravedad
(Orduña et al., 1991; Johnston y Mabey, 2008).
La infección por B. hominis supone un 12,5% de
los casos diagnosticados en adultos autóctonos en
nuestra serie, prevalencia menor que en otras series
españolas (González et al., 2011), aunque su
virulencia es mayor, ya que el 74% presentaban
sintomatología digestiva (Cuadros et al., 2007). Un
pequeño tanto por ciento de parasitosis autóctonas
en nuestra serie correspondían a infecciones por
Cryptosporidium sp. En España se declaran aproximadamente
100 casos anuales, tanto en forma de
brotes (asociados a depósitos de agua contaminados)
como de casos esporádicos (Vigilancia epidemiológica
de Cryptosporidium en España). Además,
en nuestra serie se diagnosticaron dos casos
de amebosis autóctona. Aunque este hecho es excepcional,
en la población española se han descrito
algunos casos de cuadros diarreicos y abscesos
amebianos en pacientes autóctonos que no habían
viajado al extranjero (Díaz et al., 2005; Gutiérrez
et al., 2008). Finalmente, tiene interés señalar que
39

I. NOVO-VELEIRO et al.
otras helmintosis, relativamente frecuentes en pacientes
autóctonos de otras regiones de nuestro país
como Echinococcus granulosus o Fasciola hepatica,
no se habían descrito en la Comunidad Canaria.
(Cosme et al., 2001; Pardo et al., 2005.
Un número importante de los pacientes adultos
eran inmigrantes. La malaria era la protozoosis
más frecuente, mientras que las geohelmintosis y
filariosis constituían las helmintosis principales. La
mayor parte de los pacientes inmigrantes de nuestra
serie provenían de países del áfrica subsahariana
con alta incidencia de malaria (Martín et al., 2004).
Las geohelmintosis intestinales (Uncinarias, A.
lumbricoides y T. trichiura), son las parasitosis más
frecuentes dentro del colectivo de pacientes inmigrantes,
aunque con variaciones en los porcentajes
Roca et al., 2002; Díaz et al., 2002; Martín et al.,
2004). En los pacientes con helmintosis, menos del
10% presentaban síntomas clínicos, hecho habitual
en estas infecciones (Bethony, et al., 2006). Sin embargo,
es frecuente la presencia de eosinofilia (un
tercio de los casos) y anemia (en los pacientes con
geohelmintosis). Este último dato ya ha sido descrito
previamente y se debe al daño que provocan
en la mucosa intestinal a través de sus mecanismos
de adherencia a la misma (Bethony, et al., 2006). El
tanto por ciento de pacientes inmunodeprimidos de
nuestra serie fue escaso (2,4%). Las dos parasitosis
más frecuentes en inmunodeprimidos fueron las filariosis
y la criptosporidiosis. Aunque la asociación
entre filariosis e infección por VIH no ha sido demostrada,
existen indicios de una interacción entre
los microorganismos que podría facilitar la progresión
de ambas enfermedades (Ramos et al., 2008).
En resumen, en este trabajo se demuestra que
la prevalencia real de las diferentes parasitosis en
la isla de Gran Canaria es muy superior a la declarada
mediante los sistemas oficiales, especialmente
entre la población infantil. En segundo lugar, los
parásitos que afectan de forma más frecuente a la
población autóctona de Gran Canaria que no ha
viajado a zonas tropicales son G. intestinalis y E.
vermicularis. En tercer lugar, el nivel de sospecha
clínica en pacientes procedentes de áreas endémicas
o en colectivos en los que las enfermedades parasitarias
son muy frecuentes, como la población
infantil, debe ser alto, aunque los pacientes se encuentren
asintomáticos. Algunos datos analíticos
como la eosinofilia o anemia pueden alertar sobre
la posible existencia de una helmintosis.
40
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Agradecimientos: Los autores agradecen la aportación
de casos por los doctores J Tabares (CAE Vecindario) y H
López Orge (CAE Telde).
41

Artículo Original
42
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
Evaluación de la actividad biológica de los extractos
hexanólico (Eh) y metanólico (Em) de Pera
distichophylla sobre un aislado de Acanthamoeba spp.
proveniente de una úlcera corneal
DORLA A. 1 , WAGNER C. M. 1 , PÉREZ DE G. M. V. 1 , BLANCO DE M. J. 2 , GALINDO M. V. 1 , NESSI A. 1 ,
VETHENCOURT M. A., BANDES A. 1 y GUZMáN DE R. C. T. 1
1 Laboratorio de Amibiasis, Cátedra de Parasitología, Escuela de Bioanálisis, Universidad Central de Venezuela.
E-mail: bioparas@ucv.ve, angelyseb@gmail.com
2 Grupo de Productos Naturales, Escuela de Química. Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela.
ABSTRACT
BIOLOGICAL ACTIVITY OF HEXANOLIC (EH) AND METHANOLIC (EM) EXTRACTS
FROM PERA DISTICHOPHYLLA AGAINST AN ACANTHAMOEBA SPP. ISOLATE
OBTAINED FROM A CORNEAL ULCER
Recently, infections due to Acanthamoeba genus have increased, specially ocular affections and
pharmacological treatment for them has some limitations. Searching for effective alternatives against
this protozoan, we decided to evaluate natural products obtained from plants, having previous reports of
amoebicidal activity of some extracts against different species of Acanthamoeba. We evaluated in vitro
biological activity of hexanolic (Eh) and methanolic (Em) extract, obtained from Pera distichophylla, an
amazonic plant, against an Acanthamoeba spp. (A27) strain, isolated from a patient suffering a corneal
ulcer. Trophozoites of isolate A27 exposed to different Eh concentrations presented morphological changes,
probably caused by the effect of DMSO as solvent extract, while morphological changes observed after
contact with Em seemed to be caused by 0.75 mg/ml Em concentration and not by the DMSO; no changes
were observed in the cysts. The 0.75 mg/ml Eh concentration apparently decreased the proliferation
of Acanthamoeba spp. and Em produced lysis. Viability tests not yielded important changes. Finally,
we recommend evaluating these extracts on other Acanthamoeba spp. isolates, to determine whether
these effects are isolate-dependent; performing cytotoxicity tests on corneal cells and in vivo studies in
experimental animals, which would provide more information about its activity and prophylactic potential
or therapeutic use.
Key words: Acanthamoeba spp., corneal ulcer, natural extracts, Pera distichophylla.
Recibido: 15 de Junio de 2011. Aceptado: 15 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Carolina M. Wagner. Laboratorio de Amibiasis, Cátedra de Parasitología, Escuela de Bioanálisis,
Universidad Central de Venezuela.
E-mail: bioparas@ucv.ve, angelyseb@gmail.com

RESUMEN
En los últimos años, las infecciones por Acanthamoeba spp. se han incrementado, especialmente las
oculares y el tratamiento farmacológico utilizado tiene ciertas limitaciones. En la búsqueda de alternativas
para un tratamiento efectivo contra este protozoario, surgió la inquietud de evaluar productos naturales
provenientes de plantas, ya que se ha reportado la existencia de actividad amebicida de algunos extractos
sobre diferentes especies de Acanthamoeba. Se planteó una evaluación in vitro de la actividad biológica
de los extractos hexanólico (Eh) y metanólico (Em) obtenidos de Pera distichophylla, una planta del
Amazonas, sobre un aislado de Acanthamoeba spp. (A27), proveniente de una paciente con úlcera corneal.
Los trofozoítos del aislado A27 expuestos a las diferentes concentraciones del Eh presentaron modificaciones
morfológicas, probablemente originadas por el efecto del DMSO como solvente del extracto, mientras
que los cambios morfológicos observados después del contacto con el Em sí parecen ser ocasionados por
la concentración de 0,75 mg/ml y no por el DMSO; en los quistes no se observó ninguna modificación.
El Eh a la concentración de 0,75 mg/ml, aparentemente disminuyó la proliferación de Acanthamoeba
spp. y el Em, produjo lisis. Los ensayos de viabilidad no arrojaron cambios importantes. Finalmente, se
recomienda evaluar estos extractos sobre otros aislados de Acanthamoeba spp., para determinar si estos
efectos son aislado-dependientes, realizar ensayos de citotoxicidad sobre células corneales y ensayos in
vivo en animales de experimentación, lo cual permitiría obtener mayor información sobre su actividad y
posible uso profiláctico y/o terapéutico.
Palabras clave: Acanthamoeba spp., úlcera corneal, extractos naturales, Pera distichophylla.
INTRODUCCIóN
Las amibas de vida libre (AVL) son protozoarios
descritos como parásitos facultativos y
patógenos oportunistas (Page,1974; Shuster y Wisvesvara,
2004). Entre las AVL que pueden afectar al
hombre se encuentran las del género Acanthamoeba
spp., que son las más ampliamente distribuidas
en la naturaleza (Page, 1988). En el ojo, pueden
ocasionar queratitis y úlceras corneales, afectando
la visión en distintos grados y aunque la queratitis
por Acanthamoeba spp. es poco común, se considera
una infección de la córnea potencialmente grave.
Desde 1980 hasta el año 2000, se han reportado
un aproximado de 3.000 casos de queratitis por
Acanthamoeba (Shuster y Wisvesvara, 2004 Jersic,
2007) afectando a individuos de cualquier edad,
pero es mas común en adultos jóvenes, usualmente
con buen estado de salud e inmunocompetentes
(Shuster y Wisvesvara, 2004; Ishibashi, 1997). Estudios
recientes sugieren un estimado de 1,2 adultos
por millón por año para infecciones severas por
este género (Mathers, 2004), relacionados en su
mayoría con el uso de lentes de contacto (Pérez de
Galindo, 1995; Oddó, 2006; Jersic, 2007), con una
incidencia entre 0,2 y 0,3 por cada 10.000 usuarios
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL
de lentes de contacto por año (Seal, 2003; Mathers,
2004). En Venezuela, no se conoce bien la frecuencia
de las infecciones oftalmológicas ocasionadas
por Acanthamoeba spp., existiendo sólo algunos
reportes (Pérez de Galindo, 2005).
A pesar de los avances en el tratamiento de las
queratitis producidas por Acanthamoeba spp., continúan
ocurriendo fallas terapéuticas, necesitando
intensificar y prolongar la terapia médica, realizar
intervenciones quirúrgicas y enfrentarse a la posible
pérdida permanente de la visión o la enucleación
del ojo (Seal, 2003; Van der Vijl, et al., 2004).
El uso de plantas para el tratamiento de diferentes
especies de Acanthamoeba spp. ha sido objeto de
varias investigaciones (Chu et al., 1998, Rodríguez
et al., 1999, Vural et al., 2007; Polat et al., 2007
ayb, 2008). Venezuela posee en el Amazonas, una
gran diversidad de especies vegetales, muchas de
ellas con propiedades curativas; Pera spp. es un
género botánico perteneciente a la familia Euphorbiaceae
(Luna, 2003), dentro del cual, muchas especies
han sido utilizadas en la medicina tradicional
para la cura de enfermedades. Las quinonas han
sido los compuestos aislados de este género con
mayor actividad biológica (Rodríguez et al., 2006).
Pera distichophylla se ubica en bosques de tierra
43

A. DORLA et al.
firme bajos y bosques inundables de arenas blancas
entre 50 y 250 mts sobre el nivel del mar. En
Venezuela se encuentra limitada sólo a los estados
Bolívar y Amazonas (Luna, 2003, Morales y Castillo,
2005). Utilizando hojas de la planta P. distichophylla,
para su análisis fitoquímico y biológico,
se demostró que el extracto crudo alcohólico (Ec)
posee actividad antiparasitaria sobre Trypanosoma
cruzi y antiviral sobre el virus del dengue (Luna,
2003). Estos ensayos fueron ampliados por Rodríguez-Ortega
et al., (2006), al evaluar los extractos
acuosos (Ea) y alcohólicos (Ec) de P. glabrata y de
P. distichophylla para su actividad anti-parasitaria
sobre T. cruzi y antiviral sobre los virus del dengue
y de la fiebre amarilla. El Ec de P. distichophylla
también fue evaluado in vitro sobre un aislado de
Acanthamoeba spp., causante de patología ocular,
observándose inhibición del crecimiento del aislado
a una concentración de 10 mg/ml, probablemente
debido a inhibición del desenquistamiento y/o
lisis de los quistes y/o trofozoítos, además de producir
redondeamiento y vacuolización de los trofozoítos
como señal de daño celular (Salazar, 2004).
Es por ello que, al disponer de extractos obtenidos
de P. distichophylla, y conociendo los antecedentes
de su actividad contra Acanthamoeba spp. y otros
protozoarios como la familia Trypanosomatidae
(Rodríguez et al., 2006), se justificó la evaluación
de los efectos de los extractos hexanólico (Eh) y
metanólico (Em) obtenidos de P. distichophylla
sobre un aislado de Acanthamoeba spp. proveniente
de una úlcera corneal humana para así conocer
posibles alternativas terapéuticas que permitan
alcanzar la mejoría y/o curación de las enfermedades
producidas por este protozoario.
44
MATERIAL Y MÉTODOS
Extractos naturales: Los extractos fueron
obtenidos a partir de la planta P. distichophylla, en
el estado Amazonas, Venezuela. El procesamiento
y obtención de Eh y Em, fue realizado en el
Laboratorio de Productos Naturales de la Escuela
de Química de la Facultad de Ciencias de la
Universidad Central de Venezuela (UCV) (Luna,
2003).
Se prepararon dos (2) soluciones de trabajo
de Eh para ser evaluadas: 0,75 mg/ml y 3,8 mg/
ml, a partir de una solución madre de 23 mg/ml en
dimetilsulfóxido (DMSO) al 16% como solvente.
Al realizar las diluciones, cada solución de trabajo
quedó con una concentración de DMSO al 0,7% y
3,5% respectivamente. Para el Em, se prepararon
igualmente dos (2) soluciones de trabajo: 0,75 mg/
ml y 3,8 mg/ml, a partir de una solución madre de
40,3 mg/ml en DMSO al 16% como solvente. Al
realizar las diluciones, cada solución de trabajo
quedó con una concentración de DMSO al 0,3% y
1,5% respectivamente. Se consideró los porcentajes
de DMSO en los cuales quedó cada solución de
trabajo, a los efectos de establecer los controles del
solvente respectivo en cada ensayo.
Aislado de Acanthamoeba spp. mantenido en
medio de Page modificado): El aislado de Acanthamoeba
spp. fue obtenido por raspado de una úlcera
corneal en una paciente de 27 años de edad, usuaria
de lentes de contacto. El aislado, denominado como
A27 según nomenclatura propia del Laboratorio de
Amibiasis de la Cátedra de Parasitología, Escuela
de Bioanálisis, Facultad de Medicina-U.C.V, ha
sido mantenido en el medio de cultivo bifásico de
Page modificado por Chinchilla et al., (1979), en
placas de petri y adaptado al crecimiento en placas
de poliestireno de 24 pozos con el mismo medio
para realizar los bioensayos. Se preparó una suspensión
de trofozoítos y quistes de concentración
conocida, para ser utilizada en los diferentes bioensayos.
Ensayos para la evaluación del efecto de Eh
y Em de P. distichophylla sobre el aislado A27
de Acanthamoeba spp: El efecto de las distintas
concentraciones de Eh y Em sobre los trofozoítos
y quistes del aislado A27 de Acanthamoeba spp.
fue evaluado en cultivos en placas de poliestireno
de 24 pozos (Nunc®). Se agregó 0,5 ml de las
soluciones madres de cada extracto a estudiar o el
DMSO respectivo, como control. A todos los pozos
se agregó, aproximadamente 0,1 ml de suspensión
de Escherichia coli y 0,5 ml de la suspensión de
amibas (65,5 x 10 3 amibas/ml) y se completó hasta
un volumen final de 2 ml con medio líquido. Al
diluir las respectivas soluciones madres de Eh y
Em con la suspensión de amibas y la suspensión
de E. coli, las concentraciones de ambos extractos
quedaron a 0,75% y 3.8% mg/ml.
Los controles empleados fueron: a.- Control
de amibas más bacterias; b.-Control de DMSO
al 0,7% y 3,5% para Eh y al 0,3% y 1,5% para el
extracto Em. Para ambos extractos los experimentos
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

se realizaron por duplicado. Los trofozoítos y
quistes se incubaron con los extractos a 37ºC,
evaluando el efecto de cada concentración y de los
controles sobre las amibas a diferentes tiempos de
exposición: 2, 24, 48, 72 y 96 horas. Al concluir
cada tiempo, se recolectó el contenido de cada pozo,
midió el volumen obtenido, realizó el recuento
final de las amibas y se observó la morfología.
Posteriormente, se realizó un lavado con medio de
cultivo líquido, posterior centrifugación a 150 g y
descarte del sobrenadante, para detener el efecto
de los extractos y del DMSO en el caso de los
controles respectivos. El sedimento obtenido fue
resuspendido en medio líquido y se evaluó el efecto
de los extractos en los quistes y trofozoítos sobre
su viabilidad y el crecimiento en cultivo en medio
de Page modificado por Chinchilla y col. (1979)
en placas de petri. Los bioensayos realizados se
describen a continuación:
1.- Evaluación del efecto de Eh y Em de P.
distichophylla sobre la morfología del aislado A27
de Acanthamoeba spp.
La morfometría del aislado A27 de Acanthamoeba
spp. fue evaluada antes y después del contacto
con los extractos, mediante examen al fresco
con objetivo de 40x. Para determinar el posible
efecto sobre el aislado, se tomaron en consideración
los siguientes parámetros: a) Para los trofozoítos,
redondeamiento, variaciones del tamaño, vacuolización
del citoplasma y variaciones del tamaño de
la vacuola contráctil, b) para los quistes, igualmente
se consideró cambios de forma y/o tamaño de los
mismos.
2.- Evaluación del efecto de Eh y Em de
P.distichophylla sobre el número de trofozoítos y
quistes del aislado A27 de Acanthamoeba spp. Determinación
de la capacidad lítica.
La evaluación de la capacidad lítica se realizó
mediante el recuento de amibas antes y después del
contacto con los extractos. Al concluir cada tiempo
de incubación, se recogió el volumen de cada pozo
por separado y se colocó una gota de la suspensión
en cámara de Neubauer para realizar el recuento
final de las amibas por duplicado. El porcentaje de
lisis se calculó utilizando la siguiente fórmula:
Para comparar los resultados del porcentaje (%)
de lisis obtenido al emplear esta metodología, con
los reportes de lisis celular producidos por extractos
naturales sobre células (epitelio corneal) descrito
por otros autores (Polat et al., 2007ª), se hizo una
transformación de los mismos a la siguiente escala
numérica: 0= lisis no detectable (0%); 1 = menos
de 20% de lisis; 2 = 20-40% de lisis; 3 = > 40 a <
60% de lisis; 4 = > 60 a < 80% de lisis; 5 > de 80%
de lisis.
3.- Evaluación del efecto de Eh y Em de P. distichophylla
sobre la viabilidad del aislado A27 de Acanthamoeba
spp. mediante el método de exclusión de
colorantes: azul de tripano.
Al concluir los tiempos de incubación de las
amibas con los extractos, se recolectó el contenido
de cada pozo, se lavó y se obtuvo el sedimento después
de centrifugar. Se colocó una gota del mismo
con una gota del colorante supravital azul de tripano,
se observó al microscopio y determinó el porcentaje
de amibas vivas y muertas. Como controles
de la prueba, se examinó amibas sin tratamiento y
amibas muertas por calor o con lugol, con el azul
de tripano. Se contaron las amibas en cada preparación,
por duplicado. Se consideraron como amibas
vivas, los trofozoítos y quistes que no tomaron el
colorante, y lo contrario en el caso de las amibas
muertas. Se estimó el % de viabilidad según la fórmula
siguiente:
% viabilidad: Nº de amibas vivas x 100
Total de amibas contadas
4.- Crecimiento del aislado A27 de Acanthamoeba
spp. en el medio de Page modificado por Chinchilla
y col. (1979), luego de diferentes tiempos de exposición
a Eh y Em de P. distichophylla.
Una alícuota (no cuantificada) de las amibas
expuestas a los extractos y al DMSO fue sembrada
en el medio de Page modificado por Chinchilla
et al., (1979), en placas de petri, e incubadas a
37ºC. La placa de cultivo fue examinada mediante
microscopio invertido con objetivo de 25x,
a las 2 horas y a los 7 días y se estimó semicuantitativamente
la cantidad de amibas presentes
% de lisis= Nº de amibas (T y Q) iniciales - Nº de amibas (T y Q) finales x 100
Nº de amibas (T y Q) iniciales
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL
45

A. DORLA et al.
en los campos observados. El inóculo sembrado en
cada placa fue variable, ya que estuvo constituido
por las amibas recolectadas después de la acción
de cada extracto y control de DMSO respectivo.
Se determinó si hubo crecimiento al comparar la
observación realizada a las 2 horas respecto a la
observación de los 7 días.
Análisis estadístico: Los datos obtenidos de
los experimentos para evaluar el efecto de ambos
extractos sobre el número de amibas, se agruparon
en tablas de contingencia, para ser analizados posteriormente
mediante la prueba de chi-cuadrado,
usando el programa GraphPad Instad 3.02 (software
GraphPad, San Diego, c.a). Los valores de
los resultados se consideraron significativos, si p <
0,05, para 1 grado de libertad.
46
RESULTADOS
1.- Morfología del aislado A 27 de Acantthomoeba
spp.: El aislado A27 de Acanthamoeba spp.,
antes de ser expuesto a las diferentes concentraciones
de los extractos, presentó las siguientes características
al microscopio óptico: a) Trofozoítos:
forma irregular, con una medida promedio de 26 m
de diámetro mayor; emisión de filopodios (acanto-
podios). Endoplasma granular, 1 ó 2 vacuolas contráctiles
con un diámetro promedio de 4 m y algunas
vacuolas digestivas (Figura 1-A). b) Quistes: con
doble pared quística, exoquiste ligeramente ondulado
y endoquiste irregular o poliédrico con varias
puntas; diámetro promedio de 14 m. El citoplasma
se observó finamente granuloso y el núcleo no fue
evidenciado en el examen al fresco (Figura 1-B).
En los trofozoítos, la exposición al Eh y sus
controles de DMSO a diferentes tiempos, sólo
produjo cambios en la forma, observándose redondeamiento
celular, con un diámetro promedio de
20 µ, vacuolas degenerativas de aproximadamente
12,5 µ y numerosos gránulos intracitoplasmáticos
(Figura 2). Estas modificaciones fueron evidentes
a partir de las 48 horas, presentándose en los controles
de DMSO, mientras que a las 72 horas, los
cambios mencionados se observaron tanto en los
controles de DMSO como en las concentraciones
del Eh. Cabe destacar que, a las 96 horas no hubo
modificaciones de la morfología de los trofozoítos,
en ninguno de los controles ni de las concentraciones
del extracto Eh.
Luego de la exposición del aislado A27 a las
concentraciones de DMSO y del extracto Em,
tampoco se evidenciaron cambios morfológicos en
los quistes, sólo en la forma vegetativa, los cuales
Figura 1. A: Trofozoíto de Acanthamoeba spp., aislado A27, antes de la exposición a los extractos Eh y Em de Pera
distichophylla. Examen directo en medio liquido de Page modificado, 1.000 aumentos. Se observa el ectoplasma (a)
con escasos acantopodios (b) y endoplasma (c) Vacuola contráctil (d) y digestivas (e) Núcleo con cariosoma evidente
(f). B: Quistes de Acanthamoeba spp., aislado A27, antes de la exposición a los extractos Eh y Em de Pera distichophylla.
Examen directo en medio líquido de Page modificado. 1.000 aumentos. arriba: quiste con 4 puntas; abajo: quiste
con 6 puntas. Se observan dos quistes de Acanthamoeba spp., donde se evidencia ecto (a) y endoquiste (b), con poro
u ostiolo (c).
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

Figura 2. Trofozoítos de Acanthamoeba spp., aislado A27, luego de la exposición al extracto Eh Pera distichophylla.
(Examen directo en medio líquido de Page modif. 1.000 aumentos). A: trofozoíto en DMSO 3,5% a las 48 horas de
incubación, con vacuola degenerativa (a), ectoplasma hialino (b) con numerosos acantopodios (c) y endoplasma granuloso
y vacuolado (d), B: trofozoíto en DMSO 3,5% a las 48 horas de incubación, redondeado sin acantopodios, con
gránulos (e), C: se observan 3 trofozoítos vivos redondeados, vacuolados y con gránulos, expuestos al Eh 3,8 mg/ml a
las 72 horas (Examen directo con colorante supravital Azul de Tripano, 1.000 aumentos).
Figura 3. Trofozoítos de Acanthamoeba spp., aislado A27, luego de la exposición al extracto Em Pera distichophylla.
A: trofozoíto en Em 3,8% a las 48 horas de incubación (Examen directo en medio líquido de Page modificado. 1.000 aumentos),
redondeado y vacuolado, con gránulos en endoplasma (a), B: trofozoíto vivo redondeado, con gránulos finos
(a). C: trofozoíto muerto, redondeado y vacuolado, con gránulos endoplásmicos (a). B y C: trofozoítos expuestos al Em
3,8 mg/ml a las 96 horas (Examen directo con colorante supravital Azul de Tripano, 1.000 aumentos). Los trofozoítos
en A, B y C se observan rodeados de material granuloso (b), proveniente del extracto Em.
fueron semejantes a los descritos para el Eh (Figura
3). Estos cambios se presentaron a las 24 horas para
el DMSO 1,5% y Em 0,75 mg/ml. A las 48 y 72
horas, las modificaciones también fueron evidentes
en el aislado expuesto al Em 3,8%, manteniéndose
las mismas hasta las 96 horas de exposición, a
diferencia de lo que ocurre al aislado expuesto al
Em 0,75 mg/ml, que no presenta alteraciones en su
morfología.
2.- Efecto del Eh y Em de P. distichophylla sobre
el número de amibas (trofozoítos y quistes) del
Aislado A27 de Acanthamoeba spp. Evaluación
de la capacidad lítica: Antes de la evaluación
de los extractos a las diferentes concentraciones
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL
se realizo una curva de crecimiento del parásito
en cultivos en placas de poliestireno 24 pozos. Al
realizar los recuentos del número de amibas durante
las distintas horas de duración del experimento,
se obtuvo que, a las 2 horas de haber colocado
el inóculo inicial, ocurrió una disminución en el
número de amibas, que se prolongó hasta la 24
horas. A partir de este tiempo, y hasta las 72 horas,
hubo un aumento en el número de amibas, el cual
decreció a las 96 horas de observación, por lo cual,
se consideró las 24 horas como el tiempo inicial y
por ende, el recuento basal de cada ensayo.
2.1.- Efecto del Eh y Em P. distichophylla sobre el
número de trofozoítos y quistes. Evaluación de la
capacidad lítica.
47

A. DORLA et al.
En la Figura 4, se observa el crecimiento de
Acanthamoeba spp., aislado A27 a diferentes tiempos
de exposición con el Eh de P. distichophylla
y los respectivos controles. Al comparar con el recuento
basal de amibas, se observa que en presencia
de DMSO 0,7%, hay un aumento en el número
de amibas a las 48, 72 y 96 horas, con diferencia
significativa en todos los tiempos (p < 0,05). En
contacto con el Eh 0,75 mg/ml, hay un aumento a
las 48 horas y una disminución para las 72 y 96 horas,
con diferencia significativa en ambos casos (p
< 0,05). Tanto el control de amibas como las que estuvieron
en contacto con el DMSO 0,7%, alcanzaron
un pico máximo de crecimiento a las 72 horas.
Sin embargo, las amibas en DMSO 0,7% crecieron
48
Figura 4. Efecto del extracto Eh de
Pera distichophylla 0,75 mg/ml y
del control de DMSO 0,7% sobre los
trofozoítos y quistes de Acanthamoeba
spp., aislado A27. (*: p < 0,05).
Figura 5. Efecto del extracto Eh de
Pera distichophylla 3,8 mg/ml y del
control de DMSO 3,5% sobre los
trofozoítos y quistes de Acanthamoeba
spp., aislado A27. (*: p < 0,05).
más lentamente que el control de amibas antes de
llegar al pico máximo de crecimiento. En presencia
del extracto Eh 0,75% mg/ml, el pico máximo ocurrió
a las 48 horas, es decir, antes que el control de
amibas y el aislado en presencia del DMSO 0,7%,
decreciendo rápidamente en las siguientes horas.
La evaluación del crecimiento de las amibas
expuestas al DMSO 3,5%, reflejó un aumento del
número de trofozoítos y quistes a las 48, 72 y 96
horas de exposición, al compararse con el recuento
base, con diferencias significativas en todos los
tiempos observados (Figura 5). En relación con el
aislado A27 expuesto al Eh 3,8 mg/ml, el parásito
mostró un aumento discreto en su número, con
significancia estadística en todas las horas de
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

Tabla 1. Capacidad lítica del extracto Eh de Pera distichophylla y de los controles de DMSO, sobre los
trofozoítos y quistes de Acanthamoeba spp., aislado A27
Tiempo de exposición/
Concentración
48 horas 72 horas 96 horas
Control DMSO 0,7% 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Control DMSO 3,5% 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
Eh 0,75 mg/ml 0 (0%) 1 (16,60%) 4 (76,47%)
Eh 3,8 mg/ml 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
0= lisis no detectable (0%); 1= menos de 20% de lisis; 2=20-40% de lisis; 3= >40 a 60 a 40 a 60 a

A. DORLA et al.
número de amibas
número de amibas
extracto Em y de los controles de DMSO. Las concentraciones
ensayadas de los controles de DMSO
(0,3 y 1,5%) presentaron efecto lítico sobre el aislado
a las 48 y 72 horas del ensayo, siendo mayor éste
a la concentración de 1,5%. En cuanto al extracto
metanólico, tiene capacidad lítica en ambas concentraciones
a las 48 horas de incubación, pero el
efecto se prolonga hasta las 96 horas para el extracto
a mayor concentración (3,8 mg/ml). Al comparar
ambas concentraciones del Em con sus respectivos
controles de DMSO, estos mostraron menor capacidad
lítica en todas las horas de observación, excepto
el Em 3,8 mg/ml a las 96 horas.
3.- Evaluación del efecto del Eh y Em sobre la
viabilidad del aislado A27 de Acanthamoeba spp.
Al evaluar la viabilidad del aislado A27 en
50
horas de exposición
horas de exposición
Control amibas
Control DMSO
0,3%
Em 0,75 mg/ml
Control amibas
Control DMSO
1,5%
Em 3,8 mg/ml
Figura 6. Efecto del extracto Em
de Pera distichophylla 0,75 mg/ml
y del control de DMSO 0,3% sobre
los trofozoítos y quistes de Acanthamoeba
spp., aislado A27. (*: p <
0,05).
Figura 7. Efecto del extracto Em
de Pera distichophylla 3,8 mg/ml
y del control de DMSO 1,5% sobre
los trofozoítos y quistes de Acanthamoeba
spp., aislado A27 (*: p <
0,05).
presencia de Eh y Em, se observó que el porcentaje
de viabilidad de los trofozoítos y quistes oscila
entre 80 y 100% en todas las concentraciones de
DMSO y de los extractos a lo largo de los ensayos,
excepto a las 24 horas para el extracto Em 3,8 mg/
ml, con un 72,7% de viabilidad.
4.- Comprobación del efecto sobre el crecimiento
del aislado A 27 de Acanthamoeba spp. en
medio de Page modificado en placas de Petri, a
los 7 días después de ser expuesto a diferentes
concentraciones del Eh y Em de P.distichophylla
y de los controles de DMSO en distintos tiempos.
La presencia de trofozoítos y el incremento en
su número, al comparar la observación efectuada
a las 2 horas respecto a la observación a los 7 días,
demostró crecimiento.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

DISCUSIóN
Se ha señalado que el diagnóstico temprano de
una lesión corneal por Acanthamoeba spp. podría
resultar en curación (Kilvigton et al., 2002). Sin
embargo, recientes trabajos demuestran que la amiba
puede permanecer en la cornea de un paciente
curado clínicamente. Los quistes presentes en el
estroma, resistentes a la terapia son considerados
“quistes durmientes” (Shuste y Visvesvara, 2004).
En estos casos, los tratamientos alternativos adquieren
mayor importancia.
El uso de productos naturales y/o sus derivados
en el tratamiento de pacientes con queratitis
acantamibiana y úlceras corneales ha sido evaluado
tanto in vitro (Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;
Polat et al., 2007a, 2008) como in vivo (Vural et
al., 2007). De estos reportes, se deriva la necesidad
de evaluar la susceptibilidad de cada especie de
Acanthamoeba a los diferentes extractos de una
misma planta, ya que estudios previos con plantas
de la familia Apocynaceae muestran que in vitro no
poseen la misma actividad contra microorganismos
similares. Adicionalmente, un número de extractos
de plantas relativamente importante se ha reportado
con efecto tumoricida y microbicida, sin embargo,
no mostraron actividad contra Acanthamoeba (Chu
et al., 1998).
La evaluación del efecto del Eh y Em obtenidos
de P. distichophylla sobre el aislado A27 de Acanthamoeba
spp. in vitro, se realizó determinando la
actividad de dos concentraciones diferentes de cada
extracto. La selección de estas concentraciones se
estableció con base en los resultados obtenidos por
Salazar (2004), quien utilizó y evaluó un extracto
crudo alcohólico (Ec) de esta planta sobre el mismo
aislado de Acanthamoeba spp., a concentraciones
de 1 mg/ml y 10 mg/ml (Salazar ,2004).
La acción de varios extractos de plantas como
Thymus sipyleus subsp. sipyleus var. sipyleus, especies
de Allium y plantas del sureste asiático, entre
otras, sobre especies de Acanthamoeba ha sido
evaluada empleando concentraciones que variaron
entre 0,1 hasta 32 mg/ml (Chu et al., 1998; Polat
et al., 2007 a y b). En este estudio, con P. distichophylla,
la evaluación de concentraciones de Eh y
Em a 0,75 y 3,8 mg/ml en vez de 1 y 10 mg/ml, se
debió a que, por ser estos extractos particularmente
pigmentados, no se pudieron emplear las concentraciones
superiores a 5 mg/ml, ya que dificultaron
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL
las observaciones al microscopio.
Al exponer los trofozoítos del aislado A27 de
Acanthamoeba spp. a las diferentes concentraciones
del Eh, las modificaciones morfológicas observadas
a partir de las 72 horas, detectadas también en los
controles de DMSO respectivos, parecen ser efecto
de la acción de este solvente. Resultados similares
fueron obtenidos por Salazar (2004), en los que el
mismo aislado expuesto al Ec a la concentración de
1 mg/ml, presentó modificaciones en la morfología
de los trofozoítos ocasionados por el DMSO. Este
mismo efecto parece ocurrir para el extracto Em
sólo a la concentración de 3,8 mg/ml y su control
de DMSO 1,5%, a diferencia del control de DMSO
0,3% donde no se observó variaciones morfológicas
significativas, pero sí a la concentración del Em 0,75
mg/ml, indicando un posible efecto del extracto a
esta concentración sin influencia del DMSO.
Cabe resaltar que a las 96 horas de exposición
a ambas concentraciones del extracto Eh, no se observó
ninguna alteración en los trofozoítos. Con el
Em, se observó este mismo efecto para la concentración
de 0,75 mg/ml. Estos hallazgos sugieren
que los cambios pudieran ser reversibles o que los
extractos afectaron a algunos de los trofozoítos y a
otros no, permaneciendo sin alteraciones morfológicas
los no afectados a las 96 horas. Sin embargo,
a la concentración de 3,8 mg/ml del Em, sí se presentaron
alteraciones morfológicas en el aislado a
las 96 horas, pero a diferencia del efecto de la concentración
de 0,75 mg/ml, que se evidencia desde
las 2 horas hasta las 72 horas de exposición, el efecto
del Em 3,8 mg/ml se manifiesta a partir de las 48
horas, extendiéndose hasta el final del experimento,
indicando un posible retraso en la aparición de las
variaciones morfológicas y por ende, una prolongación
del efecto.
Por otra parte, no se observó ninguna modificación
de las formas quísticas del aislado A27 al
microscopio óptico, durante el tiempo de exposición
a los extractos Eh y Em. Dado que la pared
quística de este protozoario es de naturaleza quitinosa,
conformada por dos capas, el exo y el endoquiste,
esta característica pareciera conferir cierta
resistencia a la penetración tanto de los extractos
como del DMSO. Estas observaciones difieren de
lo reportado por algunos autores para el DMSO y
su efecto en el aumento de la penetración de ciertas
drogas sobre las formas quísticas de Acanthamoeba
spp. resistentes a la propamidina, proponiendo que
51

A. DORLA et al.
el DMSO actúa como un trasportador para algunas
drogas (Neal et al., 1974; Saunders et al., 1992).
Debido a que en este trabajo no se observó ningún
efecto sobre las formas quísticas y para descartar
modificaciones no perceptibles, tanto bioquímicas
como estructurales, sería recomendable realizar
otra técnica, como la microscopía electrónica, que
permita detectar si se producen tales cambios.
La evaluación del Eh y Em de P. distichophylla
sobre el número de amibas se realizó a las 24
horas. Algunos investigadores recomiendan para el
estudio de extractos naturales y sus efectos sobre
Acanthamoeba spp., incubar a partir de 24 horas
y extenderlas en el tiempo, para poder observar
efectos tales como la capacidad lítica (Chu et al.,
1998).
Para el extracto Eh a la concentración de 0,75
mg/ml y su respectivo control de DMSO 0,7%, se
observó que la tendencia de crecimiento del aislado
A27 en presencia de DMSO 0,7% alcanzó el pico
máximo de crecimiento a las 72 horas y disminuyó
progresivamente hasta las 96 horas de incubación,
sin intervención de actividad lítica alguna por parte
del DMSO, a diferencia del crecimiento del aislado
con el Eh 0,75 mg/ml, el cual alcanzó el pico
máximo de crecimiento a las 48 horas y disminuyó
rápidamente hasta las 96 horas. Esto parece indicar
que la concentración de Eh 0,75 mg/ml afecta al
aislado A27 acelerando su crecimiento máximo
en estos cultivos al inicio del experimento, pero
a su vez propiciando una disminución marcada
del número de amibas luego de alcanzar el pico
máximo, relacionada a su vez con la capacidad
lítica del extracto Eh 0,75 mg/ml, manifiesta a
partir de las 72 horas.
Para la concentración de Eh 3,8 mg/ml y su respectivo
control DMSO 3,5%, el aislado A27 exhibió
un comportamiento diferente: en ambos casos
no se observó un número máximo de amibas durante
el experimento, sino un crecimiento discreto
y continuo para el DMSO y poca variación en
el recuento de amibas para el extracto, semejando
una fase estacionaria, relacionado ambos con la ausencia
de capacidad lítica por parte del DMSO y el
extracto. Estas observaciones parecen indicar una
posible adaptación del aislado al Eh 3,8 mg/ml y su
solvente o una disminución en la tasa de proliferación
celular del protozoario, lo que podría demostrarse
al extenderse el tiempo de incubación hasta
obtener un cambio en la tendencia de crecimiento
52
del aislado en presencia de este extracto.
El efecto de disminución de la división celular
evidenciado a medida que aumenta la concentración
del extracto Eh sobre el aislado A27 de
Acanthamoeba spp., puede ser comparado con lo
obtenido por Salazar (2004) con el mismo aislado
de Acanthamoeba y el extracto crudo alcohólico
(Ec) de P. distichophylla Chu et al., 1998; Derda
et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al.,
1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008
Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al.,
2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;
Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda
et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008 Chu et al.,
1998; Derda et al., 2004; Polat et al., 2007a, 2008
Chu et al., 1998; Derda et al., 2004; Polat et al.,
2007a, 2008 Chu et al., 1998; Derda et al., 2004;
Polat et al., 2007a, 2008; por Rodríguez-Ortega y
col. (2006) usando el mismo extracto Ec de P. distichophylla
sobre epimastigotes de T. cruzi 19 y por
otros trabajos que evaluaron actividad amebicida
de extractos naturales de plantas como Allium spp.,
Thymus spp., Ipomoea sp, Kaempferia galanga
y Cananga odorata 12,26,15-17 . Sería entonces recomendable
probar concentraciones mayores de este
extracto, tomando en cuenta que la toxicidad del
DMSO como solvente no exceda de 10%.
Durante la evaluación del efecto del Em
sobre el número de amibas del aislado A27 de
Acanthamoeba spp., la obtención de un pico
máximo de crecimiento a las 96 horas en presencia
de Em 0,75 mg/ml y de DMSO 0,3%, en vez de
a las 72 horas como el control de amibas, sugiere
un discreto retardo en la tasa de multiplicación
relacionado con el efecto de lisis del extracto y su
solvente al inicio del experimento y la ausencia
del mismo a las 96 horas de incubación. En cuanto
al efecto del DMSO 1,5% sobre el aislado A27,
éste produjo un posible retraso en la adaptación
del parásito hasta las 48 horas y por ende, una
aparición tardía del pico máximo de crecimiento a
las 96 horas, mientras que el Em 3,8 mg/ml generó
una disminución constante del número de parásitos
hasta el final del experimento, relacionándose la
misma con la presencia de lisis durante todos los
tiempos de incubación. Por lo tanto, pareciera
que a mayor concentración de Em se prolonga la
capacidad lítica del extracto.
En este ensayo, según los resultados obtenidos,
aparentemente podría haber una interacción entre el
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

extracto Em y su solvente que modificaría la capacidad
lítica observada para el DMSO, disminuyéndola
o inclusive, anulándola, excepto para el caso
del Em 3,8 mg/ml y DMSO 1,5% a las 96 horas de
incubación. Este hallazgo no fue observado para el
Eh. Se ha reportado que las propiedades terapéuticas
y/o tóxicas de algunos agentes probablemente
aumenten al combinarse con el DMSO, por ejemplo,
para la actividad del diacetato de clorhexidina,
pero también hay estudios que refieren poca o ninguna
modificación de la actividad de compuestos
como la polihexametilen biguanida (Brayton 1986;
Larkin et al., 1992; Khunkitti 1996). Esto podría
estar ocurriendo en el caso del extracto Em 0,75
mg/ml.
La viabilidad del aislado sometido a la actividad
de los extractos no mostró cambios importantes, por
lo cual, pareciera no haber daños en la membrana
plasmática de los trofozoítos ni de la pared quística,
lo cual debería ser comprobado con la evaluación a
nivel ultraestructural. Sin embargo, sí se observó
una posible acción de los extractos a nivel intracelular,
ya que las amibas que no fueron afectadas
por la acción lítica de los extractos, mostraron cambios
morfológicos, en los que se observan modificaciones
a nivel citoplasmático como la aparición
de vacuolas, con o sin gránulos, pero sin provocar
la muerte celular, al menos en el tiempo de experimentación.
Estudios anteriores con el Género Pera
y amibas del Género Acanthamoeba reportan para
ensayos de viabilidad los mismos resultados de este
trabajo, demostrándose que estos extractos actúan
principalmente sobre la morfología y proliferación
celular de estos parásitos (Salazar, 2004).
La evaluación cualitativa del crecimiento a
los 7 días en cultivos en placas de petri, permitió
evidenciar que, aparte de conservar su viabilidad
y aun con modificaciones en su morfología en
algunos casos, el aislado es capaz de crecer en estos
cultivos. Sería recomendable, por lo tanto, realizar
este ensayo de manera cuantitativa, ajustando los
inóculos iníciales luego de la recolecta de cada
pozo, para evaluar la proliferación del aislado en
cada caso a los 7 días de incubación y estimar así
el efecto de los extractos sobre su crecimiento en
cultivos a largo plazo.
En conclusión, de los extractos de P. distichophylla
ensayados, sólo el Em 0,75 mg/ml afectó la
morfología de los trofozoítos del aislado A27 de
Acanthamoeba spp., mientras que la morfología
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54
PERA DISTICHOPHYLLA SOBRE ACANTHAMOEBA DE ÚLCERA CORNEAL
de los quistes no se alteró en presencia ninguno de
los extractos. Eh a la concentración de 0,75 mg/ml,
aparentemente disminuyó la proliferación celular,
no así el Em. Ambos extractos a la concentración
de 3,8 mg/ml permiten la proliferación celular. En
relación a la lisis celular, solo Em demostró tener
capacidad lítica sobre el aislado A27 de Acanthamoeba
spp. Estos extractos actúan principalmente
sobre la morfología y proliferación celular de estos
parásitos sin afectar su viabilidad, demostrado al
evidenciarse crecimiento del aislado en cultivos de
Page modificado en placas de petri, luego de haber
sido expuesto a la acción de los extractos.
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Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 42-54

Artículo Original
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
Ensayos preliminares con extracto crudo alcohólico
(Ec) de Pera distichophylla sobre un aislado de
Acanthamoeba spp productor de úlcera corneal
WAGNER C. M. 1 , SALAZAR L. S. 1 , DORLA A. 1, PÉREZ DE G. M. V. 1 , BLANCO DE M J. 2 , GALINDO M. V. 1 ,
NESSI A. 1 , VETHENCOURT M. A. 1 , BANDES A. 1 , GUZMáN DE R. C. T 1 .
1 Laboratorio de Amibiasis, Cátedra de Parasitología, Escuela de Bioanálisis, Universidad Central de Venezuela.
2 Grupo de Productos Naturales, Escuela de Química. Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela.
ABSTRACT
PRELIMINARY IN VITRO SCREENING USING A PERA DISTICHOPHYLLA ALCOHOLIC
EXTRACT (EC) AGAINST AN ACANTHAMOEBA SPP ISOLATE RESPONSIBLE OF
CORNEAL ULCER
Actually, infections due to Acanthamoeba spp have increased, specially at cornea and its treatment has
limitations. New options for treatment have been proved, including a large number of therapeutic agents and
natural products, which have been tested in vitro to evaluate the amoebicidal activities against this pathogen
organism. In this sense, we proposed to evaluate in vitro biological activities of crude alcoholic extract (Ec)
from Pera distichophylla, an amazonic plant, against an Acanthamoeba spp isolate (A27), obtained from
a patient who suffered a corneal ulcer. We evaluated the effects of 1 and 10 mg/ml concentrations of Ec
against Acanthamoeba spp trophozoites and cysts in 24-wells polystyrene microplates. Growth amoeba
inhibition was observed, at both Ec concentrations exposure, being greater at 10 mg/ml; morphologic
changes were also detected in vegetative forms, as rounding and vacuolization, signs of cell degeneration
or death. No morphologic variations at light microscopy were seen in cystic forms after exposure to both
Ec concentrations. These results suggest that Ec could produce trophozoites lysis and have amoebostatic,
lytic and amoebicidal effects at 1 and 10 mg/ml concentrations. We recommend to complement this study
evaluating other concentrations of Ec and possible ultrastructural cell changes by other techniques like
electronic microscopy.
Key words: Acanthamoeba spp, Pera distichophylla, corneal ulcer, treatment.
RESUMEN
Las infecciones causadas por Acanthamoeba spp se han incrementado, especialmente en la cornea y
Recibido: 15 de Junio de 2011. Aceptado 15 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Carolina M. Wagner A.
E-mail: bioparas@ucv.ve, cwagnera@gmail.com
55

C. M. WAGNER et al.
el tratamiento de las mismas tiene limitaciones. En la constante búsqueda de nuevos medicamentos para el
tratamiento de estas afecciones, un gran número de agentes terapéuticos y de extractos de plantas han sido
analizados in vitro para evaluar su actividad amebicida contra este patógeno. En este sentido, se planteó evaluar
in vitro la actividad biológica del extracto crudo alcohólico (Ec), obtenido de Pera distichophylla, una
planta del Amazonas, sobre un aislado de Acanthamoeba spp (A27), proveniente de un paciente con úlcera
corneal. Se evaluó el efecto del extracto Ec a concentraciones de 1 mg/ml y 10 mg/ml sobre trofozoitos
y quistes de Acanthamoeba spp, en placas de poliestireno de 24 pozos. Se observó inhibición en el
crecimiento amibiano, a ambas concentraciones evaluadas, siendo mayor el efecto a 10 mg/ml; también
se observaron cambios morfológicos en los trofozoitos, como redondeamiento y vacuolización, como
signos de degeneración y muerte celular. En los quistes, no se observaron cambios morfológicos visibles
al microscopio de luz, ni variaciones en el tamaño, al ser enfrentados a las concentraciones estudiadas. Los
resultados sugieren que el extracto pareciera producir lisis en los trofozoítos y actividades amebostática,
lítica y amebicida a las concentraciones de 1 y 10 mg/ml. Se sugiere evaluar otras concentraciones para
complementar los resultados obtenidos en este trabajo y realizar estudios ultraestructurales para la detección
de modificaciones en la célula.
Palabras claves: Acanthamoeba spp, Pera distichophylla, úlcera corneal, tratamiento.
56
INTRODUCCIóN
Las plantas y sus derivados han representado,
desde la antigüedad, una buena opción terapéutica
para algunas enfermedades. Venezuela posee en el
Amazonas, gran diversidad de especies vegetales
algunas con propiedades curativas, y se ubica como
uno de los países con mayores fuentes naturales
para el desarrollo de la industria farmacéutica en el
tratamiento de enfermedades. En los últimos años,
las infecciones por Acanthamoeba spp se han incrementado,
especialmente las afecciones oculares por
Acanthamoeba spp (Díaz et al., 1993; Bermúdez
et al., 1997;) y el tratamiento farmacológico utilizado
tiene ciertas limitaciones (Dribe et al.,1988;
Kilvington et al., 1990). En la búsqueda de nuevas
opciones terapéuticas para un tratamiento efectivo
contra este protozoario, surge la inquietud de evaluar
productos naturales provenientes de plantas,
ya que se ha reportado la existencia de actividad
amebicida de algunos extractos sobre diferentes
especies de Acanthamoeba (My Chu et al., 1998;
Vural et al., 2007; Polat et al., 2007a,b; 2008). Con
el análisis fitoquímico y biológico de una planta del
Amazonas, Pera distichophylla, se demostró que
el extracto crudo alcohólico (Ec) de hojas y ramas
posee actividad antiparasitaria sobre Trypanosoma
cruzi (Luna, 2003). Estos ensayos fueron ampliados
por Rodríguez-Ortega y colaboradores, al
evaluar la actividad anti- parasitaria para T. cruzi
de los extractos acuosos (Ea) y alcohólicos (Ec) de
Pera glabrata y de Pera distichophylla, así como
su actividad antiviral sobre los virus de dengue y
fiebre amarilla, obteniéndose inhibición de la replicación
de epimastigotes de T. cruzi por los Ea de
ambas plantas y en especial, del Ea de P. glabrata
sobre la replicación de las formas amastigotas del
parásito. En relación con el virus del dengue y de la
fiebre amarilla, los Ec fueron más efectivos que los
Ea (Rodríguez et al., 2006). En las infecciones por
Acanthamoeba spp, el uso de extractos naturales
sería una excelente alternativa ante las limitaciones
actuales para el tratamiento de las mismas. Basado
en estas investigaciones, se planteó evaluar in vitro
la actividad biológica del Ec obtenido de Pera
distichophylla, sobre un aislado de Acanthamoeba
spp, A27, proveniente de un paciente con úlcera
corneal.
MATERIAL Y MÉTODO
Material vegetal: Pera distichophylla (Euphorbiaceae),
fue identificada y recolectada por el Prof.
Anibal Castillo (Universidad Central de Venezuela,
Instituto de Biología Experimental), cerca del Río
Sipapo, Municipio Autana, Estado Amazonas. En
el Laboratorio de Productos Naturales de la Escuela
de Química de la Facultad de Ciencias de la Universidad
Central de Venezuela fueron obtenidos 3
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61

extractos (crudo alcohólico, hexanólico y metanólico)
(Luna, 2003). En este trabajo se evaluó el extracto
crudo alcohólico (Ec).
Se prepararon dos soluciones madres del Ec: 3
mg/ml y 30 mg/ml, solubilizadas en dimetilsulfóxido
(DMSO) al 100 % y se completó con agua destilada
estéril hasta un volumen final de 15 ml. El
porcentaje final de DMSO de cada solución fue de
10%. Previamente, se realizaron ensayos de toxicidad
de este compuesto sobre el aislado de Acanthamoeba
spp, empleando concentraciones desde 1%
hasta 12,5%.
Material biológico: El aislado de Acanthamoeba
spp, designado como A27 según nomenclatura
propia del Laboratorio de Amibiasis de la Escuela
de Bioanálisis de la Universidad Central de Venezuela
(UCV), fue obtenido en este laboratorio
a partir de una muestra de raspado de úlcera corneal,
tomada a una paciente de 27 años de edad,
quien presentó una lesión ocular, la cual ameritó la
toma de esta muestra para el diagnóstico etiológico;
como antecedente epidemiológico, la paciente
informó ser usuaria de lentes de contacto blandos
por 9 años. Este aislado ha sido mantenido en el
medio de cultivo bifásico de Page modificado por
Chinchilla et al., (1979) en placas de petri y fue
adaptado al crecimiento en placas de poliestireno
de 24 pozos para realizar los bioensayos.
Bioensayos: El efecto del Ec sobre la morfología
y viabilidad del aislado A27 de Acanthamoeba spp,
así como la capacidad lítica del Ec sobre el mismo,
fueron evaluados al exponer una suspensión de 1 x
10 4 amibas/ml de cultivo (trofozoítos y quistes) a las
concentraciones de 1 mg/ml y 10 mg/ml a las 24,
48, 72 y 96 horas. Estos bioensayos se realizaron en
el medio de cultivo bifásico de Page modificado por
Chinchilla et al., (1979), en placas de poliestireno de
24 pozos Nunc®, y una suspensión de Escherichia
coli (patrón 0,5 Mac Farland) en la fase líquida de
este medio (Pérez de Galindo, 1975; Chinchilla
et al., 1979). Para todos los ensayos, se estableció
un control de amibas con el medio de cultivo y un
control de DMSO al 3%, siendo ésta la concentración
del solvente que se obtuvo al realizar las diluciones
de las soluciones madres en los pozos.
Los bioensayos se realizaron por duplicado,
incubando los trofozoítos y/o quistes con las dos
concentraciones del Ec a 37ºC; al concluir cada
tiempo, se recolectó el contenido de cada pozo,
colocando en tubos de centrífuga graduados y
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
ExTRACTO CRUDO DE PERA DISTICHOPHYLLA CONTRA ACANTHAMOEBA CORNEAL
estériles y se midió el volumen obtenido. Se tomó
una alícuota para observar la morfología y se
realizó el recuento de las amibas. Posteriormente,
se realizó un lavado con medio de cultivo líquido,
se centrifugó a 150 g y se eliminó el sobrenadante,
para detener el efecto de los extractos y del DMSO.
Estos bioensayos se detallan a continuación:
1.- Evaluación del efecto del Ec sobre la
morfología de Acanthamoeba spp
La morfología del aislado fue estudiada cualitativa
y morfométricamente. Los criterios que definen
el efecto sobre la morfología descrita al microscopio
de luz con 400 aumentos son: modificaciones
en el tamaño y forma de los trofozoítos y quistes,
cambios en el aspecto del citoplasma respecto a
vacuolas digestivas y/o contráctiles, al compararlo
con la morfología característica del aislado antes de
ser expuesto al Ec.
2.- Evaluación del efecto del Ec sobre la
viabilidad de los trofozoítos y quistes de
Acanthamoeba spp
La viabilidad del aislado se evaluó posterior
al contacto con el Ec, utilizando el método de
exclusión de dos colorantes supravitales: Azul de
Tripano 0,4% y Rojo Congo 0,4 % y fue reportada
en porcentaje (%) de células vivas (Jiménez, 2003).
Las observaciones se realizaron en un microscopio
óptico (Olympus), con objetivo de 10x y 40x,
considerando el número de células vivas entre 100
células totales contadas. El % de viabilidad celular
se calculó, según la siguiente fórmula:
% Viabilidad celular = N° células vivas x 100
Total de células
3.- Evaluación de la capacidad lítica del Ec sobre
los trofozoítos y quistes de Acanthamoeba spp
La evaluación de la capacidad lítica del Ec sobre
el aislado se realizó mediante el recuento de
amibas antes y después del contacto de las mismas
con el extracto. Se colocó un inóculo inicial y posteriormente,
al concluir cada tiempo de incubación
de las amibas con las concentraciones del Ec, se
recogió el volumen de cada uno de los pozos por
separado y se colocó una gota de la suspensión en
cámara de Neubauer para realizar el recuento final
de las amibas. El porcentaje de lisis se calculó utilizando
la siguiente fórmula:
57

C. M. WAGNER et al.
Porcentaje (%) de lisis= Nº de amibas (T y Q) iniciales - Nº de amibas (T y Q) finales x 100
Nº de amibas (T y Q) iniciales
T: trofozoítos
Q: quistes
58
RESULTADOS Y DISCUSIóN
El uso de productos naturales y/o sus derivados
en el tratamiento de pacientes con queratitis
acantamibiana y ulceras corneales ha sido evaluado
tanto in vitro (Polat et al., 2007a,b; 2008; My Chu,
1998; Derda et al., 2004) como in vivo (Vural et
al., 2007). De estos reportes, se deriva la necesidad
de evaluar la susceptibilidad de cada especie de
Acanthamoeba a los diferentes extractos de una
misma planta, ya que estudios previos con plantas
de la familia Apocynaceae muestran que in vitro no
poseen la misma actividad contra microorganismos
similares. La disponibilidad de algunos extractos de
la planta Pera distichophylla y sus antecedentes de
actividad antiparasitaria ofrecieron la posibilidad
de evaluar sus efectos in vitro sobre un aislado
de Acanthamoeba spp, A27, productor de úlcera
corneal (Luna, 2003; Rodríguez et al., 2006).
La morfología de los trofozoítos y quistes del
aislado A27 se observó al microscopio óptico
a 400 aumentos, antes de ser expuesto al Ec. En
los quistes se apreció una doble pared quística,
conformada por un exoquiste, moderadamente
ondulado y un endoquiste poliédrico o estrellado.
Se destacó un citoplasma granular y vacuolar, pero
sin distinguirse el núcleo. Cuando se realizaron las
medidas de los mismos, presentaron un diámetro
entre 12,5 y 20 µm, con un tamaño promedio de 16
µm (Figura 1).
Los trofozoítos mostraron una movilización
lenta, a través de la emisión de uno o dos pseudópodos
hialinos, con abundantes acantopodios a lo largo de
toda la célula. El endoplasma se observó granular,
con una o dos vacuolas contráctiles. Las medidas
oscilaron entre 17,5 y 37,7 µm, teniendo un valor
medio de 27 µm (Figura 2), concordando estas
descripciones de trofozoítos y quistes del género
Acanthamoeba con las hechas por otros autores
(Rondanelli y Scala, 1987).
Después de haber sido expuestos al efecto del
Ec a concentraciones de 1 y 10 mg/ml, se realizó la
observación microscópica y micrometría para los
quistes y trofozoítos. Los parámetros morfométri-
Figura 1. Quistes de Acanthamoeba spp, aislado A27,
antes de la exposición al extracto Ec de Pera distichophylla.
Examen directo en medio líquido de Page modificado.
1.000 aumentos. Quiste con 4 puntas, donde se evidencia
ecto (a) y endoquiste (b), con poro u ostiolo (c) .
cos de los trofozoítos y quistes se resumen en la
Tabla 1. La morfología de los quistes no varió a
ninguna de las dos concentraciones del Ec evaluadas:
ni en el control con el DMSO 3%. El tamaño
y las características morfológicas de la pared y del
interior de los quistes variaron poco comparados
con los quistes control y los expuestos al DMSO,
debido probablemente a la naturaleza quitinosa de
la pared quística, lo cual le confiere resistencia a la
penetración del Ec. Para complementar estas observaciones
y al no determinarse cambios morfológicos
visibles en los quistes al microscopio óptico,
se sugiere realizar estudios ultraestructurales, para
detectar si hay modificaciones en alguno de los organelos
celulares.
Respecto a la morfometría de los trofozoítos,
para todos los casos, se observó una disminución
en el tamaño, al ser comparados con el control sin
exponer al tratamiento con Ec y DMSO. Además,
se observó redondeamiento de los mismos, lo cual
se mantuvo a lo largo del experimento, para la con-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61

Figura 2. Trofozoíto de Acanthamoeba spp, aislado A27,
antes de la exposición al extracto Ec de Pera distichophylla.
Examen directo en medio liquido de Page modificado,
1.000 aumentos. Se observa el ectoplasma (a)
con escasos acantopodios (b) y endoplasma (c) Vacuola
contráctil (d).
centración de 1 mg/ml y para el control de DMSO
3%, por lo tanto, se puede considerar que el cambio
de forma del trofozoíto no es debido al Ec evaluado
a esa concentración, sino al efecto del DMSO
3%. Para la concentración de 10 mg/ml, los trofo-
zoítos presentaron señales de degeneración celular
como múltiples vacuolas. Además, se observó que
a esta concentración pareciera se inhibió la capacidad
del aislado A27 para enquistarse, ya que en el
grupo control sin extracto, se observaron quistes a
las 48 horas, mientras que las amibas expuestas al
extracto no presentaron quistes para ese tiempo de
estudio (Figura 3).
Luego de la exposición del aislado A27 de
Acanthamoeba spp a las dos concentraciones del
Ec en todos los tiempos de exposición, se obtuvo
quistes y trofozoítos 100% viables. Sin embargo,
se destaca que para el recuento a la concentración
de 10 mg/ml, el número de amibas fue inferior a
100, por lo que se infiere que probablemente hubo
lisis de los quistes y trofozoítos, comparados con
el control de DMSO 3% y con el recuento para la
concentración de Ec 1 mg/ml.
La determinación de la capacidad lítica del Ec
presentó algunos inconvenientes relacionados con
la pigmentación intensa del mismo, lo cual dificultó
el recuento de las formas evolutivas, especialmente
a la concentración de 10 mg/ml.
La capacidad lítica del Ec a la concentración de
1 mg/ml a las 2 horas de exposición, fue de 37,5%,
incrementando a medida que aumenta el tiempo de
exposición al extracto, ya que a las 24 y 48 horas
fue superior a 80% y para las 96 horas de exposición
fue de 89,5%, indicando estos resultados que
la capacidad lítica del Ec a la menor concentración
Tabla 1. Medidas de los quistes y trofozoítos del Aislado A27 de Acanthamoeba spp.
después de haber sido enfrentados al extracto crudo alcohólico (Ec) deP. distichophylla
Ec 1 mg/ml Ec 10 mg/ml Control DMSO 3%
Quistes Trofozoítos Quistes Trofozoítos Quistes Trofozoítos
15,0 30,0 15,0 15,0 15,0 10,0
15,0 25,0 12,5 30,0 20,0 20,0
17,5 15,0 15,0 12,5 20,0 25,0
12,5 17,5 17,5 17,5 15,0 15,0
15,0 15,0 15,0 10,0 12,5 15,0
17,5 30,0 15,0 10,0 17,5 30,0
15,0 25,0 17,5 12,5 15,0 37,5
17,5 10,0 20,0 15,0 17,5 15,0
15,0 15,0 12,5 15,0 15,0 15,0
20,0 15,0 12,5 17,5 20,0 27,5
x= 16 x= 20 x= 15,3 x= 15,5 x= 17 x= 18
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 55-61
ExTRACTO CRUDO DE PERA DISTICHOPHYLLA CONTRA ACANTHAMOEBA CORNEAL
59

C. M. WAGNER et al.
estudiada es tiempo dependiente. Para la concentración
de 10 mg/ml solo se calculó la capacidad lítica
para las 24 horas de exposición, por las dificultades
de observación ya mencionadas, la cual fue de
89,5%. Se pudiera inferir que la acción es dosis
dependiente para esta concentración. Para determinar
el posible uso terapéutico del Ec, se requiere
ampliar este diseño experimental probando otras
concentraciones del Ec y relacionando la capacidad
lítica del Ec y del DMSO, previa solución de los
problemas presentados en el recuento de las amibas
por la pigmentación del extracto Ec, empleando
técnicas más específicas como el marcaje celular.
Los ensayos preliminares del extracto crudo
alcohólico (Ec) de Pera distichophylla sobre el
aislado A27 de Acanthamoeba spp permitieron
demostrar que a una concentración de 10 mg/ml,
el Ec produce redondeamiento y vacuolización
del citoplasma de los trofozoítos de la amiba, sin
modificaciones en los quistes. El Ec inhibió el
crecimiento del aislado A27 de Acanthamoeba spp,
a la concentración de 10 mg/ml y en menor grado a
1 mg/ml, debido probablemente a una inhibición en
el desenquistamiento y/o a una lisis sobre los quistes
y trofozoítos respectivamente. Debido a que el Ec de
P.distichophylla, mostró tener actividad sobre este
aislado, se sugiere evaluar otras concentraciones del
Ec y otros extractos de esta planta sobre el mismo.
60
Figura 3. Trofozoítos de Acanthamoeba spp , aislado A27 (A y B), después de
la exposición al extracto Ec de Pera distichophylla, 10 mg/ml. Examen directo
en medio líquido de Page modificado, 1.000 aumentos. Se observa redondeamiento,
vacuolización e inclusiones citoplasmáticas.
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61

Artículo Original
62
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
Comparación del efecto de moxidectina e
ivermectina sobre nematodos y la ganancia
de peso en bovinos en Jalisco, México
QUIROZ R. H. 1 , MATEOS R. A. 2 , GÓMEZ F. L. E. 2 , CRUZ M. I. 1 , ULLOA-ARVIZUR. 1
1 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México, Av. Universidad 3000,
México, D. F. 04510.
2 Fort Dodge Animal Health, Sevilla 821, México, D.F.
ABSTRACTS
COMPARISON OF EFFECT OF MOXIDECTIN AND IVERMECTIN 0N NEMATODES AND
THE WEIGHT GAIN IN BOVINES IN JALISCO, MEXICO
With the aim to compare the effect of moxidectin and ivermectin,and levamisol on the reduction of
gastrointestinal nematode eggs elimination and the weight gain in calves in a warm climate. The field study
was done in Jalisco, Mexico. Brahman naturally infected with gastrointestinal nematodes (GIN) was used.
Three groups of 30 bovines each, with homogeneous weight, without statistical difference between groups
(P < 0.05) were integrated, individual fecal samples were collected on days 1, 75 and 150, and examined
by McMaster technique, the individual weight was registered the same days, on day 1 the anthelmintic
treatment was applied. Group 1 was treated with long-action moxidectin at 10 % (100 mg/1mL) in dose of
1 mg/kg (1 mL/100kg) of weight by injection given subcutaneously. Group 2 was treated with ivermectin
at 3.15 % (10 mg/1ml) at a dose of 0.2 mg/kg of weight by sc. via. The Group 3 or control was treated
with levamisol at 12 % (120 mg/ml) at a dose of 6 mg/kg, by intramuscular via. In Group 1 the effect of
moxidectin was 100 % at 75 and 150 days. In group 2, ivermectin fluctuated from 97.5 to 94.1 % on days
75 to 150, respectively. In the Group 3 the effect of levamisol was 100 and 82.1% for the same days. In
relation to the difference in weight gain between day 1 and 150, in Group 1 (moxidectin) it was 30.7 ±
3.9 kg. Group 2 (ivermectin), 23.5 ± 4.0 kg. Group 3 (levamisol) or control, 25.8 ± 4.0 kg; there were no
statistical difference between the three groups (P < 0.05). Numerically moxidectin was the best in efficacy
and weight gain; nevertheless, it was not significantly different with the other groups at 150 days.
Key words: Moxidectin, ivermectin, levamisol nematodes, weigth gain, bovines.
Recibido: 21 de Febrero de 2012. Aceptado: 23 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Héctor Quiroz Romero. Departamento de Parasitología, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México, Av. Universidad 3000, cp 04510, México,
D.F.

RESUMEN
Con el objetivo de comparar el efecto de moxidectina, ivermectina, y levamisol en la reducción de
eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales (NGI) y la diferencia en la ganancia de peso en
bovinos localizados en Jalisco, México; se emplearon bovinos Brahma, infectados de manera natural con
NGI. Se integraron tres grupos de 30 bovinos cada uno, homogéneos en el peso, sin que hubiera diferencia
estadística entre los grupos (P < 0,05); se practicaron muestreos individuales de heces los días 1,75 y 150
y se examinaron por la técnica de McMaster, el registro de peso individual los mismos días, el día 1 fue el
tratamiento antihelmíntico. El Grupo 1 fue tratado con moxidectina al 10% (100 mg/1 ml) en dosificaciones
de 1 mg/kg de peso, vía subcutánea. El Grupo 2 fue desparasitado con ivermectina al 3,15% (10 mg/1 mL)
en dosificaciones de 0,2 mg /kg de peso, por vía subcutánea. El Grupo 3 o testigo fue tratado con levamisol al
12% (120 mg/ml) en dosificaciones de 6 mg/kg vía intramuscular. En el Grupo1 el porcentaje de reducción
de huevos fue del 100% los dias 75 y 150. En el Grupo 2 fue 97,5 y 94,1%. En el Grupo 3, (testigo) fue
de 100% y 82% respectivamente. En relación a la diferencia en la ganancia de peso entre el día 1 y 150,
el Grupo 1 fue de 30,7 ± 3,9 kg, en el Grupo 2 de 23,5 ± 4,0 kg, y en el Grupo 3 o testigo de 25,8 ± 4,0,
sin diferencia estadística significativa entre los tres grupos P < 0,05). Los géneros de NGI en los diferentes
grupos fueron: Haemonchus Cooperia, Trichostrongylus, Chabertia, Bunostomum, Oesophagostomum, y
Ostertagia. El porcentaje de reducción de huevos a los 150 días en el Grupo 1 (moxidectina) fue mejor que
el Grupo 2 ivermectina y G3 testigo, sin embargo, en la ganancia de peso, no fue significativa entre los tres
grupos.
Palabras clave: Moxidectina, Ivermectina, Levamisol, Ganancia de peso, Bovinos.
INTRODUCCIóN
Las nematodosis gastrointestinales (NGI) en el
ganado bovino, especialmente en animales jóvenes,
representan un problema de gran importancia económica,
ya que, reducen la ingesta de nutrientes,
afectan la digestión y absorción de proteínas que
ocasionan deficiente conversión alimenticia, retardo
en el crecimiento y enfermedades en becerros
(Gibbs 1985).
Las infecciones por NGI son particularmente
importantes en becerros post-destete, ya que ocasionan
que en las hembras lleguen a la pubertad en
más tiempo y en los machos afectan su crecimiento,
alcanzando el peso para el mercado en más tiempo
y con menor calidad de la carne obtenida.
El efecto persistente de las lactonas macrocíclicas
para mantener reducida la eliminación fecal de
huevos de NGI es de interés en el control y ha sido
señalada por varios autores en ganado bovino, en
clima templado (Williams et al., 1995; Williams
et al., 1997) además otros autores reportan en
clima cálido en ganado cebú (Meeus et al., 1997;
Quiroz et al., 2003). Se informa que hay reducción
de huevos de nematodos gastrointestinales por
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO
persistencia del antihelmíntico hasta el día 42
(Barger 2004). En el caso de moxidectina se tiene
una nueva formulación de mayor concentración al
10% y perfil farmacocinético diferente al de otras
lactonas macrocíclicas, que provoca que se tenga
efecto persistente contra NGI de hasta 150 días y
pulmonares hasta por 120 días (Delay et al., 2003).
El objetivo fue comparar el efecto persistente de
moxidectina al 10%, contra ivermectina al 1%, en
el porcentaje de reducción de huevos, los géneros
de NGI involucrados y la diferencia en la ganancia
de peso en becerros destetados localizados en un
clima cálido en un periodo de 150 días.
MATERIAL Y MÉTODOS
zona de estudio: El estudio de campo se
realizó en el rancho Tempizque, en el municipio
de Etzatlán, Jalisco, México; está situado 1.390
msnm; la precipitación pluvial anual es de 1.169
mm; el mes con mayor lluvia es julio con 307,2
mm, y de menor intensidad es febrero con 1,3 mm;
la temperatura media anual es de 21,6 ºC, en enero
con 17,2º C y junio con 25,6º C (García 2004).
63

R. H. QUIROZ et al.
Productos experimentales: Se emplearon presentaciones
comerciales de moxidectina 10%*,
ivermectina al 3,15%** y levamisol al 12%.***
Animales: Se emplearon 90 becerros destetados,
de cruzas comerciales de cebú (Bos indicus),
con pesos de 210 a 446 kg, infectados de manera
natural con NGI con cuentas de huevos mínima
de 50 hpg, sometidos a pastoreo en pastos nativos
(Paspalum spp y Axonopus spp) y pasto estrella de
áfrica (Cynodon plectostachyus). El estudio se realizó
en invierno-primavera, (diciembre a mayo) en
un período de 150 días. El registro del peso de los
becerros se hizo en una báscula mecánica el día 1,
75 y 150 días postratamiento.
Diseño experimental: Los grupos experimentales
se conformaron al ordenar los pesos de los 90
animales de menor a mayor, distribuyéndolos en
cada grupo y siguiendo un esquema en forma de
S, de tal manera que los grupos tuvieran un promedio
y rango de pesos similares. Se integraron tres
grupos de 30 bovinos cada uno, homogéneos en el
peso en pie, sin que hubiera diferencia estadística
(P < 0,05), se practicaron muestreos individuales
de heces los días 1, 75 y 150, el día 1 fue el tratamiento
antihelmíntico y el registro de peso individual
los días 1, 75 y 150.
El Grupo 1 fue tratado con moxidectina al 10%
(100 mg/1 ml) en dosis de 1 mg/kg de peso (1
ml/100 kg de peso), por vía subcutánea en el primer
tercio de la cara externa de la oreja.
El Grupo 2 fue desparasitado con ivermectina
al 1% (10 mg/1 ml) a una dosis de 0,2 mg/kg de
peso (1 ml/50 kg de peso), por vía subcutánea en la
región escapular.
El Grupo 3 fue el testigo y fue tratado con
levamisol al 12% (120 mg/ml) en dosis de 6
mg/kg, igual a 1 ml por 20 kg de peso, por vía
intramuscular en la región de la grupa. Dicho grupo
fue considerado el testigo, de acuerdo con Wood
et al., (1995), y Vercruysse et al., (2001) quienes
señalan que el grupo testigo puede o no ser tratado
con un antihelmíntico comercial, en este caso, el
levamisol era el antihelmíntico empleado de rutina
en el rancho.
Procedimientos parasicológicos: Se hizo colecta
individual de heces de los becerros en dos
64
ocasiones, las muestras fueron examinadas mediante
la técnica modificada de McMaster (Hendrix
1999). De las muestras de heces de los días
1 y 150, se prepararon coprocultivos por grupos y
por muestreo, con homogeneizados de cada grupo,
aproximadamente 20 g, c/u, se incubaron a 27-30°
C durante 12 días, una vez desarrollada la larva 3,
se concentraron mediante la técnica de Baermann
(Hendrix, 1999), se identificaron por género (Niec
1968; Hulinka, 1969) aproximadamente 100 larvas
de cada cultivo y se obtuvo el porcentaje de cada
uno de los géneros de los NGI presentes.
Análisis estadístico: Para el análisis de la cantidad
de huevos.
Antes del análisis estadístico, el conteo de huevos,
se transformó a logaritmo (conteo +1) para estabilizar
la varianza y normalizar los datos.
Para precisar las diferencias del promedio de
hpg entre grupos del mismo muestreo se hizo un
análisis de varianza (ANOVA) y para comparar
medias entre grupos se realizó la prueba de diferencia
mínima significativa (Daniel, 2010; Gill
1981).
Para evaluar estadísticamente el porcentaje
de muestras positivas se empleó la prueba de c 2 .
Para conocer cuales tratamientos eran diferentes se
realizó la prueba exacta de Fisher (Cleale, 2008).
Cálculo de la actividad persistente de los
antihelmínticos a través del porcentaje de reducción.
Para calcular el porcentaje de reducción de hpg
por efecto de los tratamientos antihelmínticos se
empleó la siguiente fórmula, considerando la media
geométrica de hpg (Wood et al., 1995).
Porcentaje de reducción de huevos = [Te - Tx] x 100
Te
Donde: Te = Media geométrica de huevos por
gramo de heces del grupo testigo.
Tx = media geométrica de huevos por gramo de
heces del grupo tratado.
Para evaluar la ganancia de peso.
Se realizó un análisis de covarianza para ajustar
por peso inicial de la prueba (Daniel, 2010).
* Cydectin Onyx, marca registrada, Fort Dodge Animal Health, México.
** Ivomec Gold, marca registrada por Merial, México.
*** Parasitol, marca registrada por Confederación Nacional Ganadera, maquilado por Laboratorio Andoci, México.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69

Para precisar las diferencias del promedio de
peso entre grupos del mismo muestreo se hizo un
análisis de varianza (ANOVA) y para comparar
medias entre grupos se realizó la prueba de diferencia
mínima significativa (Daniel, 2010; Gill, 1981).
En los análisis estadísticos descritos anteriormente
se empleó el programa SPSS, a un nivel significativo
del 95%.
RESULTADOS
El número de animales con heces rectales en el
Grupo 1 (moxidectina) varió durante el experimento
de 30 a 29. La media geométrica de hpg el día 1 fue
de 134,9 posteriormente fue de 0,0 a los 150 días,
mientras que el rango de hpg el día 1 varió de 50
a 850 Tabla 1. El porcentaje de reducción por el
efecto persistente de moxidectina fue del 100% el
día 75 y 150.
En el Grupo 2 (ivermectina) el número de
animales con heces rectales fue de 28, la media
geométrica de hpg fue de 56,0 el día 1, posteriormente
osciló de 1,4 a 3,3 el día 150, el rango cambió
de 0 a 850, Tabla 1, mientras que el porcentaje
de reducción de hpg fue de 94,1% día 150
En el Grupo 3, (testigo levamisol) el número
de animales con heces rectales fue de 28, la media
geométrica el día 1 fue de 21,9, mientras que el día
150 fue d 3,9, el rango de hpg fue de 50 a 700,
Tabla 2, mientras el porcentaje de reducción de hpg
fue de 100 y 82,1% igualmente para los día 75 y
150.
El día 150 el porcentaje de reducción de hpg
en el Grupo 1 fue de 100%, en el Grupo 2 fue de
31,1% con diferencia estadística entre éstos dos y el
Grupo 1 (P < 0,05), Tabla 3.
En relación a la diferencia en la ganancia de
Tabla 1. Media aritmética, error estándar, rango y media geométrica de huevos de nematodos
gastrointestinales, tratados con moxidectina, ivermectina y levamisol
Grupos Parámetros hpg día 1 hpg día 75 hpg día 150
Grupo 1
Media aritmética
283,3
0,0
0,0
n = 30
± e.e.
± 46,32
Moxidectina Rango
850 - 0
0.0
0.0
Media geométrica
134,9
0,0
0,0
Grupo 2
Media aritmética
98,2
30,3
35,7
n = 28
± error estándar
±15,5
±14,1
± 13,0
ivermectina Rango
850 - 0
0 - 250
0 - 250
Media geométrica
56,0
1,4
3,3
Grupo 3
Media aritmética
135,7
0,0
37,5
n = 28
± e.e.
± 32,7
0,0
± 13,2
Levamisol
Rango
0 - 700
0 - 0
0 - 250
(testigo)
Media geométrica
21,9
0,0
3.9
Tabla 2. Porcentaje de reducción de huevos de nematodos gastrointestinales en bovinos tratados con
moxidectina 10% e ivermectina 3,15%, calculada con la media aritmética y la geométrica de huevos por
gramo de heces
Grupos Día 1 Día 1 Día 75 Día 75 Día 150 Día 150
MA MG MA MG MA MG
G1
Moxidectina
0,0 0,0 100 100 100 100
G 2
Ivermectina
0 0 69,1 97,5 63,6 94,1
G3 (Testigo)
Levamisol
0 0 100 100 72,3 82,1
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO
65

R. H. QUIROZ et al.
peso el Grupo 1 (moxidectina) entre el día 1 y 75
fue de 17,9 ± 2,9 kg, mientras que en el período
de 75 a 150 días, fue únicamente de 12,8 ± 3,8 kg,
el total de la ganancia de peso del día 1 al 150 fue
de 30,7 ± 3,9 kg. En el Grupo 2 (ivermectina) la
ganancia de peso del día 1 al 75 fue de 17,0 ± 3,0,
no obstante entre el día 75 y 150 la mencionada
diferencia fue de 10,1 ± 3,8, mientras en el período
1 a 150 días fue de 23,5 ± 4,0 kg. En el Grupo 3
(levamisol) o testigo, la ganancia entre el día 1 y
Tabla 3. Porcentaje de muestras positivas a huevos de nematodos gastrointestinales en bovinos tratados con
moxidectina 10%, ivermectina 3,15% y levamisol los días 1, 75 y 150
Tratamiento Día 1 Día 75 Día 150
Grupo1
moxidectina
90,0 a 0,0 b 0,0 b
Grupo 2
ivermectina
89,3 a 17,9 a 32,1 a
Grupo 3
Levamisol (testigo)
60,7 a 0,0 b 35,7 a
Letras distintas indican diferencia estadística (P < 0,05).
66
75 fue de 17,3 ± 3,0, mientras que en el período de
75 a 150 días fue de 8,8 ± 3,8 y en el total del día
1 al 150 fue de 25,8 ± 4,0 kg, no hubo diferencia
significativa entre los tres grupos, Tabla 4.
El porcentaje de géneros de nematodos gastrointestinales
osciló en los diferentes grupos: Haemonchus
de 35 a 42%, Cooperia de 38 a 28%, Trichostrongylus
de 7 a 33%, Chabertia de 0 a 19%,
Bunostomum de 0 a 4%, Oesophagostomum de 0 a
3%, y Ostertagia de 0 a 2%, Tabla 5.
Tabla 4. Pesos promedios de la diferencia de ganancia de peso por períodos,
en bovinos tratados con tres antihelmínticos
Tratamiento 1 - 75
Período en días
75 - 150 1 - 150
Grupo 1 (moxidectina) 17,9 ± 2,9 12,8 ± 3,7 30,7 ± 3,9
Grupo 2 (ivermectina) 13,4 ± 3,0 10,1 ± 3,8 23,5 ± 4,0
Grupo 3 testigo (levamisol)
No hubo diferencia estadística.
17,0 ± 3,0 8,8 ± 3,8 25,8 ± 4,0
Tabla 5. Porcentajes de géneros de nematodos gastrointestinales obtenidos en coprocultivos de larva
infectante (L3) en los tres grupos de bovinos
Grupos G1 moxidectina G2 ivermectina G3 levamisol
Porcentaje de géneros
de nematodos
% día 1 % día 150 % día 1 % día 150 % día 1 % día 150
Haemonchus 35 40 42 38 40 35
Trichostrongylus 7 8 12 33 8 21
Chabertia 9 19 0 0 2 0
Bunostomum 3 0 0 0 0 4
Cooperia 36 30 38 29 38 36
Oesophagostomum 10 3 0 12 2
Ostertagia 0 0 0 0 0 2
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DISCUSIóN
El número de animales por grupo en el estudio
varió de 28 a 30, aunque se inició con 30 hubo dos
muertes y en algunos casos no había heces rectales,
sin embargo, se consideró el promedio. Algunos
autores recomiendan en estos estudios un mínimo
de seis animales por grupo (Cleale et al., 2004),
debido a que el presente estudio fue de campo con
infección natural con grandes variaciones en el peso
y la cantidad de hpg de NGI al inicio del estudio,
se consideró conveniente incrementar el número de
animales.
Se consideró necesario incluir en los cuadros de
resultados de hpg la media geométrica y la aritmética,
ya que algunos autores Geuden et al., (2004),
recomiendan el empleo de la media geométrica, sin
embargo, otros Entrocasso et al., (1996) presentan
ambas medias, haciendo más comprensible el problema.
Se señalan en estudios realizados en Argentina,
Brasil y Colombia Soutello et al., 2003), para
comparar la actividad persistente de ivermectina y
moxidectina, contra nematodos gastrointestinales
en ganado bovino, al inicio en dichos experimentos
la media geométrica de hpg era de 230 a 400,
situación que difiere de nuestro estudio en que las
medias geométricas al inicio del estudio oscilaron
de 21,9 a 134,0, estas diferencias sugieren que
se debe a que son distintas regiones geográficas
y estaciones del año, que determinan entre otros
factores las cargas parasitarias. En este estudio
(diciembre mayo) la precipitación pluvial osciló
de 1,3 mm en febrero a 23,3 mm en mayo (García,
2004), situación que se interpreta que se reduce el
desarrollo de las larvas en el pasto y por lo tanto, la
re-infección es baja, sin embargo, en los tres grupos
hubo reinfección el Grupo 2 (ivermectina) y al Grupo
3 (levamisol) hubo re-infección de NGI con medias
aritméticas de hpg de 35,7 y 37,5 respectivamente,
así como porcentajes de muestras positivas a hpg
de 32,1 y 35,7 que se pueden considerar bajas, no
obstante, se interpreta que en el Grupo 1 debido al
efecto persistente de la moxidectina, la reinfección
medida a través de la eliminación fecal de huevos
ningún animal eliminó 50 hpg, dada la sensibilidad
de la técnica de McMaster, no obstante, en los
coprocultivos realizados con más de 20 g de heces,
hubo desarrollo y recuperación de larvas 3 de NGI.
Cleale, et al., (2004) señalan el efecto persis-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 62-69
MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO
tente de la moxidectina al 10%, larga duración, en
inyección subcutánea en becerros en pastoreo en
Arkansas, Idaho, Illinois y Wisconsin, EE.UU., la
media geométrica de hpg al inicio de los experimento
fue respectivamente de 82,5, 57,5, 25,6 y
10,1, mientras que en nuestro estudio para el Grupo
1 (moxidectina) la media geométrica fue de 134,9,
situación que se interpreta que se debe a diferente
condición geográfica y época del año, no obstante,
el porcentaje de reducción en parte por el efecto
persistente de la moxidectina citada por esos autores
fue de 99,7% a 94,1% a los 55-56 días, contra
100% observada en nuestro estudio, esta diferencia
se interpreta, que en parte se debe a la diferente región
geográfica y manejo zootécnico de los animales.
En EE.UU., Williams et al., (1999) realizaron
varios estudios con moxidectina al 10% de larga acción
en ganado bovino, ellos señalan que protege al
ganado contra la re-infección en un período de 150
días, situación que coincide parcialmente con nuestro
estudio, dado el comportamiento del porcentaje
de reducción de hpg del 100% por la moxidectina
en el Grupo 1, sin embargo, en los coprocultivos
del mencionado Grupo 1 (moxidectina) hubo crecimiento
de varios géneros de nematodos, como se ve
en el cuadro 5, situación que sugiere que la cantidad
de hpg determinada en el día 150 por la técnica
modificada de McMaster que tiene una sensibilidad
para detectar menos de 50 hpg.
Por otra parte, el presente estudio se realizó entre
diciembre y mayo, temporada de “sequía” en
Etzatlán, Jalisco, con precipitación pluvial en esos
meses de 1,3 (enero) a 23 mm en mayo, en el Grupo
3 (testigo) y tratado con levamisol que no tiene
efecto persistente, la media geométrica de hpg al
final del estudio fue de 3,9 con 35,7 de muestras
positivas a hpg, lo que demuestra que hay re-infección,
mientras que en el Grupo 1 (moxidectina) no
fue perceptible la cantidad de hpg, con la técnica de
McMaster interpretándose que el efecto persistente
bajo esas condiciones es bueno, no obstante, en los
coprocultivos hubo desarrollo de larvas, interpretándose
que fue debido a que había menos de 50
hpg.
En áfrica Meeus et al., (1997) reportan en ganado
de 1 a 2 años de razas cebuinas que el 90% de
las larvas de NGI identificadas después del tratamiento
con ivermectina y moxidectina fue Cooperia,
mientras que Haemonchus fue del 7% y otros
67

R. H. QUIROZ et al.
géneros el resto. Nuestro estudio difiere ya que el
porcentaje de Cooperia en los tres grupos fue de
35 a 42%, situación que probablemente se debe a
diferencia epidemiológica de estas nematodosis entre
Zambia y México. En ese estudio Meeus et al.,
(1997), no encontraron diferencia significativa entre
los grupos tratados con moxidectina e ivermectina,
sin embargo, en nuestro estudio, interpretado
a través del porcentaje de muestras positivas a hpg
de NGI si hubo diferencia a los 75 y 150 días.
La eficacia profiláctica de moxidectina al 10%,
fórmula de larga acción fue probada en Europa
Geuden et al., (2004), encontraron 100% de de reducción
de hpg contra NGI hasta el día 56, permaneciendo
arriba del 90% durante los 168 días del
experimento, situación que coincide parcialmente
con nuestro estudio. Los mismos autores Geuden
et al., (2004) señalan como los principales géneros
identificados a Ostertagia, Cooperia y Trichostrongylus,
no obstante, en nuestro estudio los géneros
con mayor porcentaje fueron Haemonchus, Cooperia
y Trichostrongylus, aunque estuvieron presentes
en bajo porcentaje Chabertia, Bunostomum
Oesophagostomum y Ostertagia, diferencia que se
interpreta es debido a las condiciones epidemiológicas
de un clima cálido en Etzatlán, Jalisco, México,
con uno templado húmedo en Bélgica.
En relación a la diferencia en la ganancia de peso
en un estudio realizado en Zambia, áfrica, Meeus
et al., (1997) notifican que no hubo diferencia
estadística en la ganancia de peso en becerros, entre
los grupos tratados con moxidectina e ivermectina,
el estudio se inició en febrero, principio de la
temporada de lluvia, no obstante nuestro estudio se
realizó en la temporada de sequía y tampoco hubo
diferencia estadística.
En conclusión se encontró que el porcentaje
de reducción de hpg el día 75, del Grupo 1
(moxidectina) fue mayor al G2 (ivermectina)
(P < 0,5), no así en el G3 (levamisol), mientras
que el día 150 el porcentaje de reducción de
hpg del G1 (moxidectina) fue mayor contra el
Grupo 2 (ivermectina) y Grupo 3 (levamisol)
(P < 0,05). En relación a la diferencia de peso
se encontró diferencia numérica de 5 kg contra
el testigo tratado con levamisol y 7 ks contra el
grupo 2 tratado con ivermectina, no obstante
no fue significativa. Los géneros de NGI más
frecuentes fueron Haemonchus, Cooperia y
Trichostrongylus.
68
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MOxIDECTINA E IVERMECTINA SOBRE NEMATODOS Y GANANCIA DE PESO
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69

Artículo Original
70
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
Aspectos epidemiológicos da Theileriose equina e sua
relação com o carrapato Rhipicephalus (Boophilus)
microplus em duas propriedades na região da
campanha do Rio Grande do Sul - Brasil
TORRES Al. J. 1 , FINGER I. S. 2 , FARIAS N. A. R. 3 , NIZOLI L. Q. 3 , SILVA S. S. 4 , e NOGUEIRA C. E. W. 3
1 Mestre, Médico Veterinário autônomo, UFPel.
2 Acadêmica, Medicina Veterinária, UFPel.
3 Doutor. Professor. UFPel.
4 Mestre. Professor. UFPel.
ABSTRACT
EPIDEMIOLOGICAL ASPECTS OF EQUINE THEILERIOSIS AND YOUR RELATIONSHIP
WITH THE TICK RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS IN THE TWO FARMS
LOCATED IN THE SOUTHERN RIO GRANDE DO SUL STATE
The equine theileriosis is considered one of the major parasitic diseases in horses. It`s caused by
infection with Theileria equi, naturally transmitted by ticks. The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus
is the only found in horses in the region and also cattle parasite. The objective of this study was to compare
the incidence of the disease with the coexistence of cattle and horses with infestation of R. B. microplus.
Used (n = 47) horses located in two different farms. In on this farm, 25 animals without contact with
the cattle and the other farm, 22 animals, also created with direct contact with cattle. During one year,
information was obtained as clinical signs of animals, serology equine. Theileriosis, tick infestation in
these horses and climatic characteristics of the region. The positive sorology for equine theileriosis was
40%, for horses do not contact with cattle and the positive serology was 90.9%, for horses that are in direct
contact. Only found Rhipicephalus (Boophilus) microplus in horses that are in direct contact with cattle.
The importance of ticks in disease transmission its suggested that the horse represents an alternative for the
tick R. B. microplus infestation occurs only when there is direct contact between horses and cattle, but also
evidenced the potential of Rhipicephalus B. microplus in the transmission of T equi in horses.
Key words: Theileria equi, Direct Contact, prevalence.
Recibido: 18 de Octubre de 2011. Aceptado 18 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Dr. Anibal Torres
Universidade Federal de Pelotas (UFPel) - Campus Universitário, Caixa Postal 354 CEP 96010 900
Pelotas, RS, Brasil.
E-mail: anibaltorres@ig.com.br; ilusca-finger@hotmail.com

RESUMO
A theileriose equina é considerada uma das principais doenças parasitárias em cavalos. É causada pela
infecção de Theileria equi, transmitida naturalmente por carrapatos. O carrapato Rhipicephalus (Boophilus)
microplus é o único encontrado em cavalos na região e que também parasita bovinos. O objetivo deste
trabalho foi relacionar a incidência da doença com a convivência dos equinos com bovinos e a infestação
de carrapatos R. B. microplus nestes cavalos. Os equinos utilizados (n = 47) se localizavam em duas
propriedades distintas. Em uma propriedade, 25 animais criados a campo sem contato com bovinos e em
outra propriedade, 22 animais, também criados a campo com contato direto com bovinos. Durante um ano,
foram obtidas informações como sinais clínicos dos animais, sorologia para theileriose equina, infestação
por carrapatos nestes equinos e características climáticas da região. Os equinos que não convivem com
bovinos apresentaram sorologia positiva para theileriose equina de 40%. Já para os equinos que estão em
contato direto, a sorologia positiva foi de 90,9%. Somente foram encontrados carrapatos Rhipicephalus
B. microplus nos equinos que são criados em conjunto com bovinos. Dessa forma, pode-se perceber a
importância deste carrapato na transmissão da doença. Sugere-se que o equino represente um hospedeiro
alternativo para o carrapato Rhipicephalus B. microplus e que esta infestação ocorra apenas quando existe
convívio direto entre equinos e bovinos, como também fica evidenciado o potencial do R. B. microplus na
transmissão de T. equi em equinos.
Palabras clave: Theileria equi, contacto directo, prevalencia.
INTRODUÇÃO
A piroplasmose equina, atualmente reconhecida
como theileriose e babesiose é considerada uma das
principais doenças parasitárias em cavalos, com
grande impacto econômico na indústria equina. As
perdas associadas a infecções por Theileria equi e
Babesia caballi estão relacionadas tanto aos fatores
clínicos como a restrição ao trânsito internacional
de animais soropositivos. Os parasitas causam, em
grandes parasitemias, crises hemolíticas e anemia.
Equinos cronicamente infectados são passíveis
de reagudizações com queda no desempenho
(Knowles et al., 1980; Friedhoff, 1990).
Esta hemoparasitose pode ser causada por dois
protozoários distintos, T. equi e B. caballi que são
transmitidas naturalmente por carrapatos. Os equídeos
podem ser parasitados por uma ou ambas as
espécies. Os dois agentes são bastante distintos e
determinam manifestações diferentes da doença.
B. caballi induz sintomatologia clínica muito mais
branda em relação a T. equi (Ambawat,1992).
Durante a fase crônica não há alteração significativa
entre o hematócrito de equinos não infectados
e de portadores de T. equi. Equinos com a
doença crônica são considerados reservatório para
a transmissão de T. equi. Uma vez infectados, os
equinos se mantêm com a doença crônica por toda
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL
a vida (Schein, 1988). Altas prevalências de T. equi
têm sido associadas com a criação conjunta de
equinos e bovinos (Kerber et al., 1999; Heuchert
et al., 1999). Esta relação sugere que, pelo menos
no Brasil, o Rhipicephalus (Boophilus) microplus,
principal carrapato de bovinos e em muitas áreas
o único encontrado também em equinos, desempenha
um papel importante na transmissão de T. Equi
(Friedhoff 1988; Knowles et al., 1992).
Os ácaros transmissores de Babesia e Theileria
são parasitos para o homem e animais domésticos.
Pertencem a sub-ordem Ixodides, a família Ixodidae
aos gêneros Anocentor, Rhipicephalus, Hyaloma
e Rhipicephalus Boophilus e são vulgarmente
chamados de carrapatos (Amstrong, et al., 1998).
Estudos sobre o comportamento de R. B. microplus
em outros animais demonstram que o equino
pode ser hospedeiro deste carrapato, porém, não
com a mesma eficiência que em bovinos. Após infestações
artificiais de larvas deste carrapato em
equinos, não se obteve fêmeas ingurgitadas. Através
de infestação natural do vetor em equinos, foi
possível observar que o equino é um hospedeiro alternativo
para R. B. microplus e que desenvolve até
uma geração neste, podendo posteriormente terminar
seu ciclo nos bovinos ( Bittencourt et al., 1990).
Mason & Norval (1981) demonstraram que a
larva e o macho adulto de R. B. microplus são ca-
71

A. J. TORRES et al.
pazes de trocar de um hospedeiro a outro em condições
adversas. A alta motilidade dos machos e a sua
considerável longevidade sugerem a possibilidade
destes se transferirem de animais infectados a não
infectados, um aspecto significante na epidemiologia
da doença.
O desenvolvimento do esporozoíto de T. equi
na glândula salivar de fêmeas adultas de R. B.
microplus, foi observado e a taxa de infecção nos
carrapatos com T. equi foi de aproximadamente
80%. Percebe-se que a transmissão da doença pelo
hospedeiro ocorre ocasionalmente (Guimaraes et
al., 1998a).
Também foi demonstrado que o esporozoíto de
T. equi é capaz de completar seu desenvolvimento
em R. B. microplus, o qual é capaz de transmitir o
parasita de um hospedeiro a outro (Guimaraes et
al., 1998b). O autor sugere, assim como Massaro
(2005), que o R. B. microplus seja um vetor natural
de T. Equi . .
Este trabalho teve por objetivo avaliar a prevalência
sorológica e sinais clínicos de Theileriose
equina nos cavalos das raças, Crioula e PSI em
duas propriedades na região da Campanha do Rio
Grande do Sul, com manejo de pastagem diferentes,
relacionando-se a incidência com a infestação
de carrapato R. B. microplus em equinos que convivem
com bovinos diretamente e os que não tem
esse convívio.
72
MATERIAIS E MÉTODOS
O trabalho consistiu em um estudo transversal
realizado em duas propriedades distintas na região
da Campanha, sul do estado do Rio Grande do
Sul (municípios de Bagé e Dom Pedrito) de
outubro de 2007 a Setembro de 2008. A população
alvo do projeto foi constituída de 47 equinos, na
propriedade 1 foram avaliados 25 cavalos da raça
PSI criados em um haras, em sistema de criação
sem a presença de bovinos, localizada a latitude
30° 58’ 42’’ sul, longitude 54° 06’ 20’’ oeste. Na
propriedade 2, foram avaliados 22 cavalos da raça
Crioula, em sistema de criação concomitante com
bovinos, criados em fazenda, localizada a latitude
de 30° 58’ 42’’ sul, longitude de 54° 40’ 18’’ oeste.
As duas propriedades estão distantes 70 Km uma
da outra em linha reta.
Foram observados, no período do experimento,
os índices pluviométricos, umidade relativa do ar
e temperatura média durante o período na região.
Os índices pluviométricos e de umidade relativa
do ar no período foram comparados com as médias
normais na região nos últimos dez anos.
Os animais da propriedade 1 foram mantidos
em pastagem cultivada, rodízio de piquetes e roçadas
frequentes. Os animais da propriedade 2 foram
mantidos em pastagens nativas, campos sujos
com presença de vegetação arbustivas e invasoras,
e pastagens cultivadas com manejo de rodízio conforme
a disponibilidade de forrageiras.
Estes animais foram identificados pela resenha,
marca, pelagem, nome e foto. Os animais da
propriedade 1 tinham um escore corporal entre 8-9
(escala de 1 a 10), enquanto os da propriedade 2, o
escore corporal entre 6-7 (escala de 1 a 10, segundo
escala de Speirs, 1998). Os animais do experimento
apresentaram média de 8 anos (idade mínima =
3; idade máxima = 15; desvio padrão = 8,48) na
propriedade 1, e média de 12 anos (idade mínima
= 5; idade máxima = 22; desvio padrão = 12,0) na
propriedade 2.
Foram realizados exame clínico geral, uma vez
ao mês em todos os animais, durante os doze meses
do experimento, para detecção dos sinais vitais e
possíveis alterações clínicas. O exame clínico geral
consistiu em coletar dados de frequência cardíaca
(FC), frequência respiratória (FR), coloração de
mucosa oral e ocular, tempo de perfusão capilar,
temperatura retal e movimentos intestinais.
Trimestralmente foram obtidas amostras de
sangue através de punção venosa em tubos de 10
mL sem anticoagulante, centrifugadas a 5.000 rpm
para separação do soro, adicionadas em tubos específicos
e estocados a -20 graus Celsius para a realização
do exame sorológico de imunofluorescência
indireta para diagnóstico de theileriose equina. Estes
exames sorológicos foram realizados pelo Laboratório
de Doenças Parasitárias da Universidade
Federal de Pelotas (UFPel) segundo a técnica descrita
por Cunha et al., (1998). O hematócrito de todos
os animais foram determinados quando realizada
a colheita de sangue. Nas duas propriedades não
foram realizados banhos carrapaticidas, o controle
parasitário com anti-helmínticos foram realizados a
cada entrada de estação do ano, com alternância de
princípios ativos, sendo a ivermectina (0,2 mg/Kg)
utilizada duas vezes ao ano.
Foram avaliados a presença de carrapatos, utili-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77

zando-se a anamnese com as pessoas que manejavam
os equinos e inspeção e coleta dos carrapatos
com um pente fino. Estas coletas foram realizadas
uma vez ao mês durante os doze meses do experimento.
Inicialmente foi realizado um exame visual
para avaliar a possível infestação. Os equinos
foram penteados na região maxilar, pescoço, peito,
antebraços, região lombar, região corpórea lateral,
ventre, flanco, garupa, períneo e entre as pernas. A
região nasal, meato nasal, e orelhas foram inspecionadas
visualmente para avaliar a presença destes
vetores. Todos os carrapatos encontrados foram
coletados diretamente a um pote de fundo branco,
armazenados com a identificação do equino e a respectiva
região corporal do animal em que foram
encontrados.
Os parasitos encontrados foram encaminhados
ao Laboratório de Parasitologia Veterinária da
UFPel para identificação e classificação. Os instares
foram separados por fase e por equino infestado.
Nos carrapatos adultos foi coletada hemolinfa para
análise direta de T. equi.
Os dados foram avaliados estatisticamente
adotando o nível de significância de 5%, utilizando
o software Statistix 8.0 (2003).
RESULTADOS
No exame clínico, nenhum animal demonstrou
mucosas amareladas, febre, apatia, emagrecimento,
que pudesse caracterizar sinal de theileriose aguda.
Os animais das duas propriedades apresentaram a
coloração de mucosas rósea pálida; tempo de perfusão
capilar entre 1 e 3 segundos; sons e movimentos
intestinais dentro dos padrões fisiológicos e
temperatura retal entre 37,5°C e 38,3°C.
Foi observada diferença entre as médias obtidas
para frequência respiratória entre os animais da
diferentes propriedade, demonstrando maior média
nos animais da propriedade 2. Os resultados obtidos
para frequência cardíaca, frequência respiratória,
hematócrito e número de hemácias esta apresentada
na Tabela 1
Na propriedade em que os equinos não convivem
diretamente com bovinos foi constatada a sorologia
positiva para theileriose equina em 10 animais
(40%). Na propriedade em que há convívio
direto com bovinos se observou sorologia positiva
em 20 animais (90,9%). Não houveram alterações
nos resultados durante as quatro coletas trimestrais,
ou seja, os equinos que eram soropositivos se mantiveram
positivos e os soronegativos se mantiveram
negativos.
Na propriedade 1 não foram encontrados carrapatos
nos animais em nenhum momento do experimento.
Na propriedade 2, sete animais (31,8%)
estiveram infestação por carrapatos. Todos os carrapatos
eram do gênero R. B.s microplus, e foram
colhidos da região do peito (90%) e axilas (10%)
dos equinos. O estágio de vida e a quantidade de
carrapatos R. B. microplus na propriedade 2, estão
demonstrados na Figura 1. Dos carrapatos coletados,
235 (93,25%) eram formas jovens como metalarvas,
ninfas, metaninfas, neandros e neóginas, e
apenas 17 (6,75%) eram formas adultas como gonandros
e partenóginas.
Os meses em que foram observados carrapatos
foram os meses de dezembro de 2007, janeiro, março,
abril, maio, junho e julho de 2008. Apenas em
outubro e novembro, de 2007, e agosto e setembro
de 2008 não foram observadas infestações nos
equinos, conforme a Figura 2.
Dos equinos da propriedade 2, que tinham car-
Tabela 1. Média ± desvio padrão, valores mínimos e máximos para frequência cardíaca, frequência
respiratória, hematócrito e número de hemácias dos grupos.
Propriedade 1 Propriedade 2
Média Mín-Máx Média Mín-Máx
FC (bpm) 44,76 ± 3,19ª 40,00 - 54,18 49,98 ± 4,58ª 42,00 - 60,00
FR (mpm) 20,48 ± 2,97b 16,00 - 31,67 25,82 ± 5,70a 19,00 - 44,00
Hematócrito (%) 45,62 ± 3.86ª 38,00 - 52,50 37,11 ± 5.48ª 28,50 - 52,67
Hemácias (x10) 10,79 ± 1,37ª 7,48 - 12,77 8,02 ± 1,62a 6,05 - 12,9
*Letras diferentes (a,b) na mesma linha significam (P < 0,05).
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL
73

A. J. TORRES et al.
74
Figura 1. Estágios de vida e quantidade de carrapatos Rhipicephalus Boophilus microplus encontrados
nos animais da propriedade 2 (com a presença de bovinos) durante o período de
experimento.
Figura 2. Relação do número de animais com carrapatos e o número de carrapatos encontrados
durante o período de experimento.
Figura 3. Chuvas e umidade relativa do ar no período de experimento.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77

apatos, 100% apresentaram sorologia positiva
para theileriose equina e os que não apresentaram
carrapatos, 15 (66,67%) também eram soropositivos.
A quantidade de éguas parasitadas e a quantidade
de carrapatos colhidos durante os meses de
experimento estão na Figura 2.
As chuvas no período foram relacionadas com
a temperatura média durante o mesmo período,
segundo dados do INMET (Instituto Nacional de
Meteorologia). Foram observados altos índices
pluviométricos em Outubro 2007 (170 mm), Junho
2008 (180 mm) e Agosto 2008 (180 mm). As
médias da temperatura se mantiveram elevadas nos
meses de Dezembro 2007, Janeiro 2008, Fevereiro
2008 e Março 2008.
As chuvas nos meses de experimento e a
umidade relativa do ar nos dias de coleta durante
o período foram relacionadas, segundo dados do
INMET e estão na Figura 3.
DISCUSSÃO
Neste estudo foram avaliados os resultados
sorológicos de theileriose equina, através do método
de Imunofluorescência Indireta, em 47 equinos,
sendo que 21 animais demonstraram positividade
para T. equi. Os resultados sorológicos positivos
para os equinos da raça PSI foram de 40%, este
resultado assemelha-se ao obtido por Nizoli et
al., (2008), que observaram incidência de 15,05%
para esta enfermidade em equinos desta mesma
raça e mesma região do estudo. Para os animais
da raça Crioula, obteve-se incidência de 90,9%,
este resultado está diretamente relacionado com a
presença dos carrapatos vetores na propriedade, já
que em 2008, foi obtido em animais da raça Crioula
incidência de 55%.
As variações de prevalência, relacionados de
acordo com os sistemas de criação, já foram descritos
por em diferentes regiões do Brasil, caracterizando
que os equinos que trabalham e convivem
com bovinos apresentaram as maiores prevalências
(Cunha et al., 1996). Isto pode ser explicado pelas
altas prevalências encontradas em equinos utilizados
no manejo de bovinos e manutenção em campos
considerados sujos e carrapateados (Kerber et
al., 1999).
Os animais positivos para theileriose equina
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 70-77
EPIDEMIOLÓGA DA THEILERIOSE EQUINA DO RIO GRANDE DO SUL
não demonstraram alterações no exame clínico,
fato também observado em animais utilizados para
o trabalho de campo, cronicamente positivos, os
quais não apresentaram alterações significativas
nos parâmetros clínicos (Torres et al., 2008). Isto
pode ser explicado pois durante a fase crônica
não há alteração significativa entre hematócrito
de equinos não infectados e portadores de T. equi
(Hailat et al., 1997).
Na comparação entre animais positivos e
negativos não se obteve diferença significativa na
avaliação de hematócrito e número de hemácias (P
< 0,05). O valor para o hematócrito dos animais
positivos para a doença é inferior 12,2% em relação
ao valor obtido para os animais negativos. Assim,
a queda do hematócrito é um sensível indicador
do inicio das alterações patológicas induzidas pelo
parasito e que a ocorrência da parasitemia está
diretamente relacionada com a queda nos valores
do hematócrito. Porém, neste estudo não foram
observados casos agudos, não havendo, portanto,
oscilação nestes valores De Waal et al., 1988;
Kutler et al., 1988).
Os resultados do exame clínico realizado nos
animais deste estudo não tiveram relação com a
infestação de carrapatos, com a determinação do
hematócrito nem com a sorologia positiva para a
doença nos meses em que foram realizados exames
de alguns parâmetros do hemograma. Isto pode
ser atribuído a continua estimulação do sistema
imune pelos parasitos que persistem no organismo
durante a fase crônica da enfermidade. Dessa
forma, estes valores podem estar relacionados a
capacidade de adaptação do organismo frente as
taxas de hematopoiese, hematócrito e hemoglobina
circulante.
A presença de carrapatos nos equinos da propriedade
2 (31,8% das éguas), está relacionada a
convivência dos equinos diretamente com os bovinos,
hospedeiros preferenciais do R. B. microplus.
Pode-se relacionar a presença de carrapatos
nesta propriedade, com os campos de pastagem
naturais, os quais não são roçados com frequência,
favorecendo a presença do vetor. A vegetação é
fundamental no ciclo de vida do R. B. microplus,
garantindo abrigo a teleóginas, ovos e larvas, protegendo-os
da incidência solar direta e mantendo
a temperatura e umidade relativa favoráveis, desta
forma, os campos sujos, com invasoras e arbustos,
são excelentes para o carrapato e ocasionam altas
75

A. J. TORRES et al.
infestações. Estes fatores justificam a elevada incidência
da doença (81,8%) nos equinos da propriedade
que convivem diretamente com bovinos
(Cardoso y Franchi, 1994).
Somente a transmissão através de carrapatos é
capaz de manter uma área endêmica. A taxa de prevalência
de infecção por Theileria equi está diretamente
relacionada com a epidemiologia dos carrapatos
vetores na região (Knowles y Unisss-Floyd,
1983). Estudos epidemiológicos realizados em vários
estados brasileiros, demonstraram prevalências
superiores as obtidas neste estudo, variando desde
49,2% até 100% sob diferentes condições epidemiológicas,
sobretudo expostos a altas infestações
por carrapatos ( Heuchert et al., 1999; Cunha et al.,
1998).
Neste estudo apenas sete animais (31,8%) da
propriedade com criação conjunta com bovinos
estavam infestados com carrapatos, caracterizando
uma incidência baixa durante o ano de experimento
(Figura 2), assim é possível reafirmar que o carrapato
R. B. microplus seja um parasito alternativo para os
equinos nestes locais da região da Campanha, assim
como concluído no Rio de Janeiro e em São Paulo
(Bittencourt et al., 1990; Labruna et al., 2001).
O período seco, de temperaturas e umidade
mais baixas, entre os meses de abril e setembro,
prejudica o desenvolvimento da fase de vida livre,
fazendo com que o ciclo se alongue (Furlong,
1993). No presente estudo foram observadas chuvas
acima da média na região, nos meses de junho/2008
e agosto/2008, o que parece ter influenciado na
reduzida infestação de carrapatos nos equinos
pela quantidade de água que encharcou os campos
e prejudicou o desenvolvimento da fase de vida
livre (González, 1975). Também foram observadas
maiores infestações de carrapatos na Região Sul do
país no intervalo entre os meses de janeiro a junho
(Brumt, et al., 1987).
Não foram encontradas teleóginas nos equinos
deste experimento, as formas adultas encontradas
foram gonandros e partenóginas. Foi demonstrada
a transmissão de T. equi via glândulas salivares
de formas adultas de R. B. microplus, acreditase
que partenóginas possam estar envolvidas na
infecção. Assim como, equinos portadores crônicos
transmitem T. equi para as ninfas (formas jovens).
No presente estudo foram observados que 93,25%
dos carrapatos encontrados eram formas jovens, o
que pode indicar uma alta transmissão de T. equi
76
para estes carrapatos, mesmo que poucas formas
adultas cheguem a parasitar os equinos e com
isso possam transmitir a doença. Porém ainda são
necessários maiores informações a este respeito
(Massaro, 2005).
Sugere-se que o equino represente um hospedeiro
alternativo para o carrapato R. B. microplus
e que esta infestação ocorra apenas quando existe
convívio direto entre equinos e bovinos, como também
fica evidenciado o potencial do Rhipicephalus
Boophilus microplus na transmissão de T. equi em
equinos.
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77

Artículo Original
78
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82
Estudio comparativo de la eficacia terapéutica de
oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno, utilizados
en el tratamiento de hemoparasitosis en equinos pura
sangre de carrera
MORALES A.¹ , ², VILLORIA D.², ROMERO N.³, MORALES G.³, KASSAR M.³, ARRIETA D.¹,
y COMERMA S.¹
¹ Departamento de Patología Veterinaria, Cátedra de Farmacología y Toxicología, Cátedra de Fisiología Facultad de
Ciencias Veterinarias Universidad Central de Venezuela.
² División de Sanidad Animal Instituto Nacional de Hipódromos “La Rinconada” Caracas, Venezuela.
³ Facultad de Farmacia Universidad Santa María .
ABSTRACT
COMPARATIVE STUDY OF THE THERAPEUTIC EFFICIENCY OF OXITETRACICLINE,
IMIDOCARB AND DIMINAzENE, USED IN THE TREATMENT OF EQUINE
THOROUGBREED HEMOPARASITES
It presents a comparative study of the therapeutic efficacy of oxytetracycline, imidocarb and diminazene,
used in the treatment of equine hemoparasitosis Thoroughbreds. We studied a total of 105 horses, Thoroughbreds,
all under 2 years old, during the quarantine period November to December 2011. They practice
a clinical examination, blood samples were taken for a complete blood count and blood smear for disposal
of taxon. They were then medicated with single dose intramuscular (IM) as follows diminazene 28 (3.5 mg/
kg), Oxytetracycline 46 (10 mg/kg) and Imidocard 30 (2.4 mg/kg). At 07 days blood samples were taken
for hematology and blood smears for the presence of taxon. A study was conducted Competitive ELISA
for detecting antibodies against Babesia caballi, Theileria equi and Trypanosoma evansi. The results were
analyzed statistically. In conclusion, we observed a high prevalence of hemoparasitosis studied in horses.
The diminazene, imidocarb oxytetracycline and are drugs of choice for treating infestations haematozoa
and in all cases were effective. The best evidence diminazene clinical therapeutic response and less toxicity
compared to other treatments oxytetracycline and imidocarb in horses studied.
Key words: Diminazene, oxytetracycline, imidocarb, hemoparasites, equine.
RESUMEN
Se plantea un estudio comparativo de la eficacia terapéutica de oxitetraciclina, imidocarb y diminazeno,
Recibido: 3 de Marzo de 2012. Aceptado: 22 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Abelardo Morales
Email: aamorales13@gmail.com

utilizados en el tratamiento de hemoparasitosis en equinos Pura Sangre de Carrera. Se estudiaron un total de
105 equinos, Pura Sangre de Carrera, todos de 2 años de edad, durante el periodo de cuarentena noviembrediciembre
2011. Se practico un examen clínico, fueron tomadas muestras de sangre para un estudio
hematológico y frotis sanguíneo para el descarte de hematozoarios. Posteriormente fueron medicados con
dosis única intramuscular (IM) de la siguiente manera Diminaceno 28 (3,5 mg/kg), Oxitetraciclina 46 (10
mg/kg) e Imidocard 30 (2,4 mg/kg). A los 07 días fueron tomadas muestras de sangre para hematología
completa y frotis sanguíneo para determinar la presencia de hematozoarios. Se realizo un estudio de ELISA
Competitivo para la detección de anticuerpos contra Babesia caballi, Theileria equi y Trypanosoma evansi.
Los resultados fueron analizados estadísticamente. En conclusión se observo una alta prevalencia de
hemoparasitosis en los equinos estudiados. El diminaceno, la oxitetraciclina y el imidocarb son fármacos
de elección para el tratamiento de las infestaciones por hematozoarios y en todos los casos fueron efectivos.
El diminaceno evidencia mejor respuesta terapéutica y clínica con menor grado de toxicidad con respecto
a los otros tratamientos oxitetraciclina e imidocarb en los equinos estudiados.
Palabras clave: Diminaceno, imidocarb, oxitetraciclina, hemoparasitos, equinos.
INTRODUCCIóN
El incremento global de la industria del caballo
representa una fuente potencial para la diseminación
de infectocontagiosas. Las enfermedades
asociadas hematozoarios afectan drásticamente a
los equinos. Los agentes etiológicos son Erlichia
risticci, Erlichia equi, Theileria equi, Babesia caballi,
Trypanosoma evansi, Trypanosoma equi. La
piroplasmosis o babesiosis es una enfermedad producida
por protozoos Theileria equi y B. caballi,
que afecta a los équidos ya que parasita a los glóbulos
rojos en el tejidos sanguíneo y es transmitido
por garrapatas del genero Ixodes. La distribución
es mundial. La presentación clínica varía desde un
cuadro hiperagudo, agudo y crónico (Jubb et al.,,
1984; Donald 1996). La signología está caracterizada
por fiebre, anorexia, congestión/hemorragia
petequial e ictericia, hematuria, pelo hirsuto, emaciación,
trombocitopenia, anemia, leucopenia, hemolisis
e intolerancia al ejercicio (Jubb et al., 1984;
Donald 1996). Las rickettsias E. risticci (Neorickettsia
risttici), E. equi (Anaplasma phagocytophila)
afectan específicamente a los monocitos y macrófagos
del tejido sanguíneo. Los signos clínicos
fiebre, depresión, anorexia, hemorragia petequial,
ictericia, trombocitopenia, anemia y leucopenia así
como cuerpos de inclusión en algunos casos puede
conllevar a la muerte (Jubb et al., 1984; Donald
1996). El T. evansi es un protozoario hemoflagelado
asociado a vectores, de distribución mundial, la
signologia clínica se caracteriza por fiebre recurrente,
linfadenomegalia, edema, anemia, emaciación
y mieloencefalomalacia, con consecuente muerte
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82
EFICACIA DE TRES TRATAMIENTOS DE HEMOPARASITOSIS EQUINAS
(Jubb et al., 1984; Donald 1996). La terapéutica
para el tratamiento de las hemoparasitosis se basa
en el uso de oxitetraciclina, diminaceno y sulfato
de imidocard. La Oxitetraciclina es una tetraciclinas
capaz de inhibir la síntesis de proteínas de las
bacterias al ligarse al ribosoma bacteriano 30S e
impedir la llegada del ARNt aminoaacíclico receptor
(A) en el complejo ARNm - ribosoma (Botana
et al., 2002). El Diminaceno una amina aromática,
actúa sobre las membranas citoplasmáticas y nucleares
del hemoparásito (Botana et al., 2002). El
Imidocarb directamente sobre el parásito causando
una alteración en el número y el tamaño del núcleo
y en la morfología del citoplasma (vacuolización,
degeneración del espacio en el protoplasma de la
célula, al cual se le atribuyen funciones digestivas y
excretorias) (Botana et al., 2002). Además previene
la entrada de inositol en el eritrocito que contiene
el parásito intracelular. En virtud de esta importante
área se plantea un estudio comparativo de la eficacia
terapéutica de oxitetraciclina, imidocarb y
diminazeno, utilizados en el tratamiento de hemoparasitosis
en equinos Pura Sangre de Carrera.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se estudiaron un total de 105 equinos (Eqqus
caballus), raza Pura Sangre de Carrera, todos de
2 años de edad, durante el período de cuarentena
noviembre-diciembre 2011. Todos los ejemplares
fueron evaluados mediante un examen clínico
exhaustivo. Se tomaron muestras de sangre para
un estudio hematológico y frotis sanguíneo para
79

A. MORALES et al.
el descarte de hematozoarios (Banks 1996; Alujas
y Constantino, 2002). Los equinos positivos a
la presencia de hematozoarios fueron medicados
con dosis única intramuscular (IM) de la siguiente
manera Diminaceno 28 (3,5 mg/kg) (Pyroject 100
ml); Oxitetraciclina 46 (10 mg/kg) (Oxitetraciclina
Calox 50 mg/ml) e Imidocard 30 (2,4 mg/kg)
(Imizol), y se mantuvo a un ejemplar negativo sin
tratamiento. A los 07 días fueron tomadas muestras
de sangre para hematología completa y frotis
sanguíneo para determinar la presencia de hematozoarios
(Banks 1996; Alujas y Constantino, 2002).
En los casos positivos post tratamiento se le aplico
la misma terapéutica y se reevaluó a los 7 días. Se
realizo un estudio de ELISA Competitivo para la
detección de anticuerpos contra B. caballi, Theileria
equi y T. evansi (Katz et al., 2000). Se considero
Positivo (+) en los casos en los cuales los niveles de
anticuerpos fueron superiores > 40%. Los resultados
fueron analizados estadísticamente mediante la
Prueba de McNemar y de manera porcentual.
80
RESULTADOS
Clínica: Los hallazgos clínicos evidenciaron
ictericia, fiebre, anorexia, depresión, pelo hirsuto
en todos los casos estudiados. Sólo en 12/105 casos
se observaron ectoparásitos (vectores), del género
Ixodes.
Laboratorio: Los resultados hematológicos
evidenciaron en promedio: hematíes: 9,16 mm³,
hemoglobina: 11,2 g/dL, plaquetas: 230 mm³. Los
leucocitos en promedio 6,05 mm³, neutrofilos 2,4
mm³, linfocitos 2,0 mm³, eosinofilos 7 mm³, monocitos
0,3 mm³. Los frotis sanguíneos permitieron la
detección de B. caballi 49 y T. equi 28/105 y Erlichia
sp 11/105.
Serología: Los resultados serológicos por ELI-
SA competitivo permitieron la detección de anticuerpos
contra B. caballi y T. equi. y T. evansi en
los equinos medicados con diminaceno promedio
56%, oxitetraciclina promedio 64% y promedio
71% imidocarb post-tratamiento. Todos los medicamentos
fueron superiores al 40%.
Estadística: Los resultados del análisis estadístico
se presentan en la Tabla 1.
Los tratamientos fueron efectivos contra los
hematozoarios detectados en los equinos.
DISCUSIóN
Los resultados clínicos, hematológicos, frotis
sanguíneo y de ELISA, confirmaron la presencia
de hematozoarios específicamente: B. caballi
51%, T. equi 29,80% y Erlichia sp 11,54%, en los
equinos estudiados. Reportes previos señalan una
prevalencia de 13,1%, 7,8% en el Hipódromo “La
Rinconada”, Caracas-Venezuela y en el Hipódromo
De Valencia 18,5% (De Vera et al., 2006). Existen
reportes en Venezuela en el estado Lara en la cual
se considera una zona enzootica a piroplasmosis,
(Mujica et al., 2011), a pesar de que este estudio fue
realizado en Caracas-Venezuela, de manera similar
se evidencio una alta prevalencia en los caballos
Tabla 1. Análisis estadístico prueba de McNemar de los equinos medicados con diminaceno,
oxitetraciclina e imidocarb
Después del Tratamiento Total
Antes del Tratamiento
- +
- 94 4 98
+ 6 1 7
Total 100 5 105
c 2 = ((94 - 1) - 1) 2 = 8464 = 86,37 calculado vs tabulado
94 + 4 98
gdl = 1
p < 0,001 altamente significativo
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82

estudiados. En líneas generales todos equinos respondieron
a la terapéutica sin embargo se observaron
variaciones por tratamiento y no se observaron
estadísticamente diferencias significativas por tratamiento.
Con respecto a la medicación es necesario
considerar que los efectos secundarios fueron
observados en los caballos tratados con Imidocarb,
los mismos presentaron gastrotoxicidad, dolor abdominal
e taquicardia, taquipnea, intranquilidad.
El tratamiento con oxitetraciclina por el volumen
del medicamento evidencio miositis cervical. El
diminaceno no mostro sintomatología clínica secundaria.
Existen varios medicamentos disponibles
para el tratamiento de la piroplasmosis equina. El
diminazeno diaceturate es eficaz en el quimioesterilizacion
de B. caballi y en la eliminación de los
sígnos clínicos en las infecciones por B. equi (Brüning,
1996). Fármacos tales como Antitheilericida
buparvaquone han demostrado ser eficaces en la lucha
contra la enfermedad debida a B. equi y puede
en combinación con imidocarb eliminar el parásito
(Brüning, 1996). El control de la piroplasmosis
equina debe incluir el control de garrapatas eficaz,
seromonitoring de los animales y la aplicación de
la quimioterapia. El control de las infecciones con
estos protozoos se ve obstaculizada por la falta de
un fármaco adecuado antiprotozoario y una prueba
serológica fiable (Friedhoff et al., 1990). No hay
vacuna disponible. E. risticii (el agente causal de la
fiebre del caballo Potomac) y E. equi rickettsias son
parásitos que son difíciles de controlar (Friedhoff et
al., 1990). El diagnóstico precoz se requiere para la
terapia de tetraciclina para ser eficaz y hay una necesidad
de una prueba rápida para proporcionar un
diagnóstico precoz (Friedhoff et al., 1990). El imidocarb
puede no ser capaz de eliminar las infecciones
por B. caballi y T. equi a partir de portadores sanos
(Butler et al., 2008). En un estudio se examinaron
en 6 caballos sanos tras 4 dosis intramusculares
de 4 mg/kg administrada dipropionato imidocarb
cada 72 horas. Este régimen de tratamiento ha sido
reportado para esterilizar experimentales de B. equi
en caballos de infecciones y puede tener un valor en
la prevención de la propagación de esta enfermedad
en la exportación de caballos de transporte posibles
para países no endémicos, se concluyó que este régimen
de tratamiento no tuvo ningún efecto deletéreo
clínicamente detectable en la función hepática
en caballos sanos. Los cambios en la orina GGT:
ratios de creatinina en orina observados en este es-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82
EFICACIA DE TRES TRATAMIENTOS DE HEMOPARASITOSIS EQUINAS
tudio también aporta datos sobre el valor de este
ratio para la detección precoz de la toxicidad renal,
tras la exposición a agentes nefrotóxicos (Meyer et
al., 2005). En un estudio para demostrar la el efecto
del ejercicio intenso y la babesiosis evidencio
en el examen post-mortem ictericia, hepatomegalia
y la vejiga llena con la orina de color rojo oscuro
(Friedhoff et al., 1990). El examen histopatológico
del hígado evidencio degeneración y necrosis
centrolobulillar masiva. Los canalículos biliares y
los conductos biliares eran prominentes y de color
marrón oscuro con pigmentos biliares de color
amarillo (Friedhoff et al., 1990). Los pulmones tenían
congestión, edema y trombosis de las venas
pulmonares (Friedhoff et al., 1990). Los resultados
sugieren que los caballos presentaron las mismas
manifestaciones clínicas después del ejercicio Los
hallazgos clínicos, hematológicos y patológicos indican
que los animales sufren de anemia hemolítica
y que respondieron a la terapia imidocarb (Friedhoff
et al., 1990). La vigilancia emergente radica
en el hecho de que la enfermedad persiste en su patogénesis.
La persistencia del patógeno es la habilidad
de un organismo infeccioso de permanecer por
largo tiempo en el hospedero, incluso de por vida,
en la ausencia de signos clínicos pero bajo condiciones
de estrés e inmunosupresión se exacerba y
produce sintomatología clínica. Actualmente las
normas aprobadas para las autoridades federales y
estatales de los Estados Unidos, para equinos diagnosticados
como reactores positivos a la PE en el
territorio de la Unión Americana son la cuarentena
perpetua o el sacrificio mediante eutanasia (USDA
2009).
En conclusión se observo una alta prevalencia
de hemoparasitosis en los equinos estudiados. El
diminaceno, la oxitetraciclina y el imidocarb son
fármacos de elección para el tratamiento de las
infestaciones por hematozoarios y en todos los
casos fueron efectivos. El diminaceno evidencia
mejor respuesta terapéutica y clínica con menor
grado de toxicidad con respecto a los otros
tratamientos oxitetraciclina e imidocarb en los
equinos estudiados.
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Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 78-82

Artículo Original
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
Detección de ooquistes de Cryptosporidium spp.
en la planta de tratamiento de aguas residuales
“Taiguaiguay” del Estado Aragua,
Venezuela año 2011
MEDINA C. 1 , MONCADA E. 1 , GONZALEZ A. 1 , RUEDA M. 2 , y ROJAS G. 1
1 Universidad de Carabobo, Facultad de ciencias de la Salud, Escuela de Bioanálisis.
2 Universidad Central de Venezuela, Facultad de ciencias Veterinarias, Escuela de Veterinaria.
ABSTRACT
DETECTION OF CRYPTOSPORIDIUM OOCYSTS IN THE WATER TREATMENT RESIDUAL
PLANT OF TAIGUAIGUAY, ESTADO ARAGUA, VENEzUELA
Cryptosporidiosis is a gastrointestinal parasitic disease of man and animals caused by a opportunistic
protozoan called Cryptosporidium. It is a zoonosis that can be acquired through human and animal feces. The
infective stage is the oocyst, which is resistant to adverse conditions in the environment. In Latin America
there is an increase of mortality due to high prevalence in patients infected with Human Immunodeficiency
Virus (HIV). In the present investigation was assessed by The presence of Cryptosporidium in the water
treatment plant residual Taiguaiguay Venezuelan Aragua State was assessed by direct immunofluorescence
(DIF). We analyzed 14 samples of water (7 at the entrance and 7 in the output of the water treatment plant)
resulting 57% of the samples collected at the entrance of the plant contaminated with Cryptosporidium
oocysts and 43% at the start, with an overall average of 50% of contaminated water with oocysts (maximum
and minimum values found in the input were 16 Ooq / L and 4 Ooq / L at the output of 6Ooq / L and 3 Ooq
/ L), representing a risk level for human consumption.
Key words: Wastewater, Cryptosporidium spp, direct immunofluorescence (DIF).
RESUMEN
La criptosporidiosis es una enfermedad parasitaria gastrointestinal del hombre y de los animales causada
por un protozoario patógeno denominado Cryptosporidium. Es una zoonosis que puede adquirirse a través
de heces de animales y humanos, El ooquiste es el estadio infectivo, resistente a condiciones adversas en el
medio ambiente. En Latinoamérica existe un incremento de morbimortalidad debido a una alta prevalencia
en pacientes infectados por el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH). En la presente trabajo se evaluó
Recibido: 18 de Febrero de 2012. Aceptado: 30 de Mayo de 2012.
Correspondencia: Claudio Medina
E-mail: set504@hotmail.com / set504@yahoo.com 0412-8310593.
83

C. MEDINA et al.
la presencia de Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de agua residual Taiguaiguay del estado
Aragua Venezuela, por la técnicade inmunoflurescencia directa. Se analizaron 14 muestras de aguas (7 en
la entrada y 7 en la salida de la planta de tratamiento de agua) resultando 57% de las muestras recolectadas
en la entrada de la planta contaminadas con ooquistes de Cryptosporidium spp y 43% en la salida, con un
promedio general de 50% de aguas contaminados con ooquistes (valores máximos y mínimos encontrados
en la entrada fueron de 16 Ooq/L y 4 Ooq/L en la salida de 6 Ooq/L y 3 Ooq/L).
Palabras clave: Aguas residuales, Cryptosporidium spp, Inmunofluorescencia directa (IFA).
84
INTRODUCCIóN
La criptosporidiosis es una enfermedad gastrointestinal
que afecta a humanos y animales, producida
por un coccidio del género Cryptosporidium
perteneciente al Phylum Apicomplexa, clase Coccidia,
orden Eucoccidiorida, familia Cryptosporidiidae,
la cual se adquiere por consumo de agua y
alimentos contaminados con heces de individuos
infectados y es de distribución cosmopolita provocada
por falta de saneamiento ambiental. (Zanaro y
Garbossa, 2008).
Esta parasitosis es actualmente considerada
una enfermedad emergente y representa uno de los
principales problemas parasitarios en ambientes
acuáticos a nivel mundial (Centro Panamericano
de Ingeniería Sanitaria y Ciencias del ambiente,
CEPIS, 1995; Del Coco et al, 2009).
El género Cryptosporidium es uno de los protozoarios
que están asociados con la reutilización
del agua residual, siendo Cryptosporidium parvum,
el que se presenta con mayor frecuencia en
este tipo de sistema (Luján y Garbossa 2008), la
concentracion de 1-10 ooquistes/L representa un
nivel de riesgo para el consumo humano (Del Coco
et al,. 2009). En la criptosporidiosis el ooquiste de
Cryptosporidium spp constituye la forma parasitaria
infectante, la cual es eliminada a través de las
heces. La transmisión se lleva a cabo principalmente
por dos vías: una directa que es la vía oral-fecal
y otra indirecta que es por consumo de alimentos
principalmente hortalizas y legumbres contaminadas
a través del riego con aguas residuales, luego
el hospedador ingiere estos ooquistes por vía oral,
lo que indica que la principal vía de transmisión de
este parásito es por contaminación hídrica (Hurst y
Murphy, 1996).
Existen evidencias biológicas que soportan la
hipótesis de que hay múltiples especies en el género
Cryptosporidium; hasta el presente se han descrito
20 especies. Se reconocen a las especies C. parvum
y C. hominis, como las más frecuentes que afectan
a los humanos, aunque se han descrito infecciones
por otros genotipos con menor relevancia,
tales como: C. felis, C. muris, C. meleagridis, C.
canis, C. suis, C. ubiquitum, C. cuniculus y Cryptosporidium
genotipo de mono. C. meleagridis es la
tercera especie en importancia, ya que se describen
tanto en individuos inmunocompetentes como inmunosuprimidos
(Navarro et al., 2011).
La intensidad de las manifestaciones clínicas, la
patogenicidad, el grado de excreción de ooquistes
y la incidencia varía entre las distintas especies
que afectan a humanos. Por tanto, para conocer el
riesgo en la salud pública de la criptosporidiosis es
importante la correcta identificación de especies
y genotipos, tanto en muestras humanas, como de
otros animales o ambientales (Navarro et al, 2011).
Existen varios factores que contribuyen al
desencadenamiento de brotes de Criptosporidiosis:
la elevada contaminación de aguas superficiales y
subterráneas con ooquistes de Cryptosporidium,
la notable resistencia de estos ooquistes frente al
tratamiento con cloro y derivados y la ineficacia
de filtros utilizados en las plantas potabilizadoras
(Navarro et al, 2011).
A nivel mundial se han registrado epidemias
causadas por Cryptosporidium parvum como
consecuencia del consumo de aguas provenientes
de plantas de tratamiento con una incidencia de 28%
en países como Estados Unidos, Brasil, Argentina,
Costa Rica, Ecuador, Guatemala, Haití, y Colombia,
obteniendo una alta tasa de mortalidad afectando
en su mayoría a niños, el brote de criptosporidiosis
ocurrido en 1993 en Milwaukee, Estados Unidos,
ha sido uno de los brotes más importantes
relacionados con el consumo de agua contaminada.
Este afectó a 400.000 personas, entre las cuales se
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89

encontraban hospedadores inmunocomprometidos
que desencadenaron formas graves de la infección
(Rose, 1988; Vergara et al, 2000; Cabral et al,
2002).
En Venezuela, Cryptosporidium sp. es endémico
y ha sido reportado en heces de individuos que
padecen infecciones gastrointestinales, con cifras
de prevalencia que oscilan entre 5,35 y 7,4%
(Millar et al, 2003).
En personas inmunocompetentes, la enfermedad
es asintomática o autolimitada y puede persistir
entre 7-10 días y algunas semanas (Chen
et al., 2002). Sin embargo, en los individuos con
deficiencias inmunitarias relacionadas con malnutrición,
infecciones virales como el sarampión y el
virus de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y
en pacientes con inmunoterapia exógena para el
cáncer u otras enfermedades, pueden causar hasta
la muerte (Fayer, 2004). La criptosporidiosis puede
convertirse en una enfermedad crónica que se prolonga
meses y hasta años. En casos extremos, como
en los pacientes con SIDA, la enfermedad puede
ser extremadamente severa, y la mortalidad puede
llegar al 50% (Bogitsh y Cheng, 1998).
Bukhari y Smith (1995), señala que Cryptosporidium
spp es introducido en las aguas por medio de
las excretas contaminadas de animales, como aves
y reptiles, que se encuentran en las plantas de tratamiento.
Esta es otra posible fuente de infección que
podrían tener los efluentes de salida que explicaría
las concentraciones de ooquistes encontrados a este
nivel, junto con un tratamiento poco eficiente para
su remoción.
El tratamiento de las aguas residuales da como
resultado la eliminación de microorganismos patógenos,
evitando así que estos microorganismos
lleguen a ríos o a otras fuentes de abastecimiento.
Específicamente el tratamiento biológico de estas
aguas es considerado un tratamiento secundario ya
que está ligado íntimamente a dos procesos microbiológicos,
los cuales pueden ser aerobios y anaerobios
(León, 1995).
Este coccidio es uno de los más resistente en
este tipo de aguas en comparación con otros protozoarios
que suelen ser más lábiles, sumado a esto
es considerado un parásito emergente puesto que es
una causa potencial de diarrea prolongada y deshidratante,
la cual desencadena visitas a emergencias
e incluso la muerte en personas inmunocomprometidas
(Hurst y Murphy, 1996).
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
CRYPTOSPORIDIUM EN AGUAS RESIDUALES DE ARAGUA, VENEZUELA
La presente investigación tiene como finalidad
determinar la presencia de Cryptosporidium spp en
aguas residuales tratadas en el embalse de Taiguaiguay,
identificar los ooquistes de Cryptosporidium
spp por la técnica de Inmunoflorescencia directa
en la entrada y salida de la planta de aguas residuales
Taiguaiguay, determinar la concentración de
ooquistes/L de Cryptosporidium spp en las muestras
de aguas residuales analizadas, determinar la
concentración de ooquistes Cryptosporidium spp
según las diferentes épocas del año (verano e invierno).
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio: La planta de tratamiento en
estudio es Taiguaiguay, ubicada en el estado Aragua,
Municipio José ángel Lamas, específicamente en
la ciudad de Santa Cruz de Aragua a 10°08’52.98’’
N 67°28’47.35’’ O, limitando al Noreste con la
Ciudad de Cagua, al Noroeste con la población de
Palo Negro, y al sur con el embalse del Taiguaiguay
(Machado y Colina, 2002), en la Figura 1 se muestra
un mapa georeferencial.
La planta recibe las aguas servidas de los
siguientes efluentes: área metropolitana de Maracay,
Palo Negro, Santa Cruz, Turmero, Cagua, Bella
Vista, y San Mateo, a través de los ríos Turmero y
Aragua, mediante dos obras de captación y un canal
aductor, cubre una población de más de 1 millón de
habitantes (Herrera, 2003).
Muestra: Estuvo constituida por 7 muestras de
aguas residuales en la entrada y 7 muestras en la
salida de la planta de tratamiento para un total de
14 muestras ambientales procedentes de la planta
de tratamiento Taiguaiguay.
Obtención de la muestra: Las muestras fueron recolectadas
en recipientes de polietileno con capacidad
de 5 L cada uno previamente lavados con agua
destilada, se utilizó un muestreador metálico de 3 m
de longitud, unido a un recipiente de polietileno en
uno de sus extremos con capacidad aproximada de
500 mL, ya obtenidas fueron transportadas al laboratorio
del instituto de investigaciones biomédicas
(BIOMED) y refrigeradas a 4°C hasta el momento
de su procesamiento.
Recuperación de ooquistes de Cryptosporidium
spp. mediante la técnica de floculación con
carbonato de calcio: Para ello se procedió según
85

C. MEDINA et al.
la metodología descrita por Vesey et al., (1993). A
cada muestra de 5 L se le realizó el siguiente tratamiento:
se hizo un filtrado grueso a través de un
colador de plástico cubierto con una gasa, pasando
así la muestras a recipientes de polietileno con capacidad
de 6L. Utilizando un cilindro graduado se
agregó una de solución de cloruro de calcio (CaCl 2 )
1 M (10 mL/L de muestra). Se sometió a una agitación
con movimiento circular, luego se agregó
bicarbonato de sodio (NaHCO 3 ) 1M (10 mL/L de
muestra) nuevamente se sometió a una agitación
con movimiento circular, posteriormente se midió
el pH inicial y luego se fue agregando una solución
hidróxido de sodio (NaOH) 3 N hasta que la muestra
llegara a un pH de 10, en este punto la muestra
así tratada, se dejó tapada en reposo por 4 horas a
temperatura ambiente. Al cabo del período se sedimentación,
se eliminó cuidadosamente el sobrenadante,
mediante la presión de succión ejercida por
una bomba portátil (sin perturbar el sedimento),
seguidamente se lavó el envase con búffer fosfato
salino estéril (PBS) más TWEEN 20 y se recuperó
este volumen junto con el resto del sedimento. El
sedimento se trató con solución de Acido Sulfámico
(H 2 NSO 3 H) al 10% hasta observar la disolución
del floculo, la mezcla resultante se llevó a tubos de
50 mL.
Concentración de ooquistes de Cryptosporidium
spp: La mezcla resultante ya en los tubos de
50 mL, se centrifugaron a 3.314 g por 15 minutos
a 4°C de temperatura luego cada tubo se añadió
búffer fosfato salino estéril (PBS) más TWEEN 20
para lavar, nuevamente se centrifugó 3.314 G por
15 minutos a 4°C de temperatura, para concentrar
86
Figura 1. Mapa georeferencial de
los sitios de muestreo en la planta de
tratamiento Taiguaiguay, Maracay Estado
Aragua Venezuela. Fuente: Claudio
Medina 2011.
aun más la muestra. Una vez finalizado este proceso
se agregan todos los sedimentos a un único tubo
de 50 mL pasando a ser la muestra concentrada.
Purificación de ooquistes de Cryptosporidium
spp. mediante la técnica de Flotación por sacarosa:
Se trabajo seguen la metodología de Vesey
et al., (1993), se agregó en un tubo de 50 mL, 15
mL de sacarosa al 2,5 M y 5 mL de la muestra concentrada
muy lentamente por las paredes del recipiente,
se llevo a centrifugar por 10 minutos a 994
g a 4°C de temperatura. Trascurrido ese tiempo con
una pipeta pasteur se tomo del sobrenadante de la
capa más superficial y se coloco en un tubo de 50
mL, se completo con (PBS) a 45 mL para realizar el
lavado, luego se llevo a centrifugar por 10 minutos
a 3.314 G a 4°C y posteriormente se descartó el
sobrenadante y el sedimento generado se coloco
en un tubo de ensayo representado esta la muestra
final purificada.
Identificación de ooquistes de Cryptosporidium
spp. mediante la técnica de Microscopia
de inmunofluorescencia directa (IFD): Se agregó
50 µL de la muestra purificada a la lamina SuperSticK
(Waterborne, Inc.) se dejó secar a temperatura
ambiente, después que secó se colocó 1 gota de
metanol y se dejo secar nuevamente, se agrego 50
µL de buffer por 1 minuto y se escurrió al culminar
el tiempo, luego se añadió una 1 gota de Cryt-agloTM
y se incubó en cámara húmeda por 25 minutos
a 37°C de temperatura, pasado este tiempo se
agregó 50 µL de buffer por 1 minuto y se escurrió
al culminar este tiempo, posteriormente se colocó
1 gota de BlockOut para dejar incubar por 1 min
a temperatura ambiente, para después agregar 50
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89

µL de buffer por 1 minuto y escurrir al culminar el
tiempo, por último se colocó una gota del líquido
de montaje y se cubrió con una laminilla. Las láminas
se mantuvieron refrigerada a 4°C de temperatura
y protegida de la luz hasta el momento de su
observación.
Las láminas se observaron en un microscopio
de Epifluorescencia de marca Axios xop 2 plus
(Zeiss) con filtro de 430-480 nm, en objetivos de
40x y 100x.
Lectura del recuento de ooquistes de Cryptosporidium
spp. Una vez hecho el recuento de
ooquistes se aplico la fórmula que se describe
a continuación para obtener el número total de
ooquistes/L (Herrera 2003).
Ooq/L = Nº Ooq. contados x Vol. purificado (mL)
Vol. estudiado (mL) x Vol. Muestra (L)
Ooq/L= representa la forma de reportar la concentración
de ooquiste.
N° Ooq. Contados = El número de ooquistes contados
en las laminas por IFD.
Vol. Purificado (mL) = Volumen obtenido de la purificación
de la muestra.
Vol. Estudiado (mL) = Volumen utilizados para rea-
lizar la coloración con IFD.
Vol. Muestra (L) = Volumen original de cada muestras
antes del tratamiento.
RESULTADOS Y DISCUSIóN
Con la finalidad de identificar la presencia de
Cryptosporidium spp. en la planta de tratamiento
Taiguaiguay, se procesaron 14 muestras de aguas
residuales, organizadas en dos grupos según el sitio
de muestreo, siete en la entrada y siete en la salida
de la planta. En la Tabla 1, se presenta el recuento
de ooquistes de Cryptosporidium spp en relación
a los volúmenes de muestras de aguas residuales
procesados. Se detectó la presencia de ooquistes de
Cryptosporidium spp tanto en la entrada como la
salida de la planta, observándose variaciones en el
numero de ooquistes detectados en cada muestra
analizada.
Estos resultados son comparados con los reportados
por Alarcon et al., (2005), donde reportan
concentraciones variables de Cryptosporidium spp
en las muestras analizadas en la cuenca alta del
rio Bogotá, Colombia demostraron la presencia de
Cryptosporidium spp en cinco muestreos realiza-
Tabla 1. Recuento de ooquistes de Cryptosporidium spp en las muestras de aguas residuales recolectadas en
la planta de tratamiento “Taiguaiguay” del Estado Aragua año 2011
Sitio de
muestreo
Muestras Vol. de la
muestra (L)
Vol. purificado
(mL)
Vol. Estudiado
(µL)
Numero de
Ooq.
M-1 5 2 50 4
M-2 5 1 100 ND
M-3 5 1 100 ND
Entrada
M-4 5 2 100 ND
M-5 5 1 100 1
M-6 5 2 100 2
M-7 5 2 100 2
M-8 5 3 50 ND
M-9 5 2 100 ND
M-10 5 1,5 100 1
Salida
M-11 5 1,5 100 2
M-12 5 1,5 100 ND
M-13 5 1 100 ND
M-14 5 2 100 1
M: muestra, ND: no detectado, Ooq: Ooquiste, Vol: volumen.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89
CRYPTOSPORIDIUM EN AGUAS RESIDUALES DE ARAGUA, VENEZUELA
87

C. MEDINA et al.
Tabla 2. Valor máximo y mínimo promedio y coeficiente de variación para el recuento de ooquistes/L de
Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de agua residual
“Taiguaiguay” del estado Aragua año 2011
Mínimo (Ooq/L) Máximo (Ooq/L) Promedio
(Ooq/L)
CV (%)
Entrada 4 16 4,57 ≠ 5 14
Salida 3 6 1,85 ≠ 2 14
CV: Coeficiente de variación, Ooq: Ooquiste.
dos sólo en dos se obtuvieron ooquistes de Cryptosporidium
spp lo que lleva a pensar que no en
todos los muestreos se pueden encontrar ooquistes.
Mediante la técnica de microscopia de inmunofluorescencia,
se detectaron un promedio de 5
Ooq/L en la entrada de agua de la planta de tratamiento
y 2 Ooq/L en la salida de la planta, el coeficiente
de variación se mantuvo tanto en la entrada
como en la salida en 14%. Los valores máximos
y mínimos encontrados en la entrada fueron de 16
Ooq/L y 4 Ooq/L, se reportaron valor máximo y
mínimo en la salida de 6 Ooq/L y 3 Ooq/L como se
puede observar en la Tabla 2.
Los resultados obtenidos en esta investigación
demostraron la presencia de Cryptosporidium spp
en 57% de las muestras procesadas recolectadas
a nivel de la entada de la planta y en 43% de las
muestras recolectadas en la salida; como promedio
general se puede señalar que 50% de las muestras
de agua analizadas están contaminadas con este
coccidio. Los valores obtenidos en la presente investigación,
se relacionan con la presencia de Cryptosporidium
spp en aguas residuales tratadas en el
estado Bolívar, como lo describieron Cermeño y
Arenas en el año 2008, donde encontraron 71,4%
en la salida y un 85,7% en la entrada, lo que evidencia
que hay mayor cantidad de parásitos que entran
a la planta que los que salen por todo el tratamiento
que se le realiza a este tipo de aguas.
Luna et al., en Costa Rica en el año 2002,
al estudiar una planta de tratamiento de aguas
residuales encontraron un porcentaje de 85,7%
en la entrada y 57% en la salida de ooquistes
de Cryptosporidium spp. Existen antecedentes
similares de un trabajo realizado en Hermosillo,
México por (Díaz et al., 1999), en el que se
encontraron ooquistes en 37% de las muestras de
aguas analizadas.
Los muestreos se realizaron en diferentes pe-
88
ríodos del año permitiendo abarcar el período de
verano y el período de lluvia esto causó diferencia
en cuanto a la concentración de las muestras analizadas,
más no así en la detección de ooquistes/L,
resultados similares al estudio de Luna y colaboradores
en el año 2002, cuando en sus muestra había
la presencia de Cryptosporidium spp independientemente
de las estaciones del año.
Las concentraciones de ooquistes encontrados
en las muestras analizadas en la salida de la planta
de tratamiento, posiblemente sea por lo comentado
por Bukhari en 1995 en donde las concentraciones
de ooquiste en la entrada de la planta se deban a que
Cryptosporidium spp es endémico en nuestro país
como lo describe Millar y colaboradores en el 2003
y a las características particulares que mencionan
por Dillingham en el 2002 que presenta el ooquiste.
La concentración de ooquistes de Cryptosporidium
spp encontrados en las muestras analizadas en
la entrada y salida de la planta de tratamiento se
encuentra dentro rango de (1-10 ooquistes) lo que
se conoce como nivel riesgo para infectar animales
y seres humanos causando patologías gastrointestinales,
trayendo como consecuencia un riesgo para
la salud pública debido al uso de estas aguas para
fines agrícolas y/o de consumo humano.
A la luz de los resultados obtenidos recomendamos
aplicar la técnica de colorantes vitales DAPI
(4`,6-diamidino-2-phenylindole) e IP (yoduro de
propidio) para las muestras que presenten ooquistes
con IFD. Además estimamos que se debe incluir
en el estudio de las plantas de tratamiento de agua
el monitoreo e identificación de este coccidio con
evaluaciones periódicas.
Estos resultados deben ser tomados en cuenta
por los organismos competentes para el reusó
responsable de estas aguas con fines agrícolas y de
consumo humano.
Con base en los resultados, se requiere de un
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 83-89

programa de educación y promoción a la salud
ambiental que permita implementar los criterios
de la OMS sobre el reusó responsable de las aguas
residuales.
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Agradecimientos: Agradecemos la colaboración y ayuda
prestada al Consejo de Desarollo Científico y Humanístico
(CDCH), al Prof. Edgar Palacios del departamento de
toxicología (UC-FCS), a Walter Betancourt. PhD. del
Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC),
Dra. Carmen Bracho (IVIC), al Dr. Alexis Marques en el
Laboratorio de biotecnología animal. (INIA), al Dr. José
Fernández. Laboratorio biología de vectores y reservorios.
(IAE), a los Prof. Ledia Triana, Licda. Daria Camacho en
el Instituto de investigaciones biomédicas (BIOMED-
Lab 8-5), a la Prof. Zuleyma Medina en el Laboratorio de
análisis de alimentos (UCV-FCV), al Ing. Giovanni Arriechi,
y Licdo. Juan Romero en el ministerio del poder popular
para el ambiente (MPPA), al Sr. Eddy Ramos en la Planta
de tratamiento Taiguaiguay, a la Prof. Mary Marques del
Departamento de parasitología (UCV-FCS) y por ultimo
al personal del Laboratorio de Parasitologia Witremundo
Torrealba (UC-FCS).
89

Artículo Original
90
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
Comparative study of parasitological techniques
and ELISA for analysis of environmental
samples, RJ, Brazil
DA SILVA BARBOSA A. 1 , ANTUNES UCHÔA C. M. 1 , LAURENTINO DA SILVA V. 2 ,
NASCIMENTO DUARTE A. 2 , BANDEIRA VIANNA M. 1 , MONTEIRO FONSECA A. B. 3
and PEREIRA BASTOS O. M. 1
1 Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Universidade Federal Fluminense. Rua Prof. Hernani Pires de
Melo, 101, Niterói, Rio de Janeiro, Brasil, 24210 -130.
2 Departamento de Ciências Biológicas, Fundação Oswaldo Cruz. Avenida Brasil, 4.365, Manguinhos, Rio de
Janeiro, Brasil, 21040-900.
3 Departamento de Estatística, Universidade Federal Fluminense. Rua Mário Santos Braga, s/n, Niterói - RJ, Brasil,
24020-140.
ABSTRACT
The aim of this study was to compare the degree of agreement between Ritchie’s technique modified
by Young, Sheather’s technique modified by Huber and the enzyme immunoassay technique for survey of
Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in water and soil samples. Overall, 48
water samples were collected from the supply system and 64 of the soil on the surroundings of constructions
in Guarani Indian Villages of the State of Rio de Janeiro. The microscopic techniques for the survey of
amoeboid cysts and Giardia sp. cysts in water samples and eggs of Ascaris sp. in soil samples could
be associated. The ELISA, when compared to the microscopic techniques, presented a higher number of
positive samples protozoa investigated, both in water and soil. These results suggest the use of enzyme
immunoassay to monitor water quality parasites or to investigate environmental contamination.
Key words: Environmental samples. Parasitological techniques. Enzyme Immunoassay.
RESUMEN
El objetivo de este estudio fue comparar el grado de acuerdo entre la técnica de Ritchie modificada por
Young et al., la técnica de Sheather modificada por Huber et al., y la técnica de inmunoensayo enzimático
para la encuesta de Giardia lamblia, Entamoeba histolytica y Cryptosporidium sp. en muestras de agua y
el suelo. En total, 48 muestras de agua fueron recolectadas en el sistema de abastecimiento y 64 del suelo
en los alrededores de las construcciones en guaraníes pueblos de la India del Estado de Río de Janeiro. Las
Recibed: 5 May 2012. Accepted: 5 June 2012.
Correspondence: Alynne. Da Silva Barbosa. Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Universidade Federal
Fluminense. Rua Prof. Hernani Pires de Melo, 101, Niterói, Rio de Janeiro, Brasil, 24210 -130.
E-mail: alynnedsb@vm.uff.br; alynne.barbosa@ioc.fiocruz.br

técnicas de microscopía para el estudio de los quistes ameboides y Giardia sp. quistes en muestras de agua
y los huevos de Ascaris sp. en muestras de suelo podría estar asociada. El ELISA, cuando se compara con
las técnicas microscópicas, presenta un mayor número de muestras positivas protozoos investigado, tanto
en agua y suelo. Estos resultados sugieren el uso de inmunoensayo enzimático para controlar los parásitos
de calidad del agua o para investigar la contaminación ambiental.
Palabras clave: Muestras ambientales, Técnicas parasitológicas, Inmunoensayo enzimático.
INTRODUCTION
Many parasites, including protozoa and helminths,
may be water and soil-borne, transmitting
diseases to the population. It is worth to mention
that the presence of intestinal parasites in soil, water
or food, in addition to its importance specifically
related to the development of pathogenies, is a significant
biological indicator of fecal contamination,
pointing to the possible transmission of pathogenic
agents (Silva et al., 1991). Investigations on soil
and water contamination by parasites constitute an
important part of public health studies because of
the possibility transmission (Silva et al., 2009).
The detection of evolutionary forms of protozoa
and helminths in water is performed by few laboratories
of supply companies, which attribute this
fact to the lack of standardization, technical complexity
and high cost (Lima and Stamford, 2009).
Until 2007, at least 325 water-associated outbreaks
of parasitic protozoan disease have been reported in
the world (Karanis, 2007).
According to the OPAS report, it is estimated
that two billion people in the world are infected by
some form of parasite acquired through the contact
with the soil, 800 million of which are infected
children (40%), with about 20-30% occurring in
Latin America populations (Ehrenberg, 2002). In
soil, the detection of these evolutionary forms is
typically performed in epidemiological researches,
chiefly in samples collected in gardens, amusement
parks, public squares and beaches (Santos et al.,
2006; Rocha et al., 2011).
Different diagnostic techniques have been employed
for the detection of parasites in environmental
samples, usually the same ones used in clinical
fecal samples. Each technique has its own advantages
and disadvantages, but there is no one universally
accepted as the gold standard in the survey
of evolutionary forms of protozoa and helminths in
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES
water and soil samples (Smith, 1998).
Owing to the diversity of existing laboratory
techniques and the importance of the water and soil
in the transmission of intestinal parasites, it becomes
relevant for the performance of studies which aim
to compare the efficiency of the parasitological
techniques and the enzyme immunoassay in
environmental samples.
The aim of this study was to compare the degree
of agreement in the detection of evolutionary forms
of parasites in water samples and soil collected in
Guarani Indian Villages using the Ritchie et al.,
parasitological technique (1948) modified by Young
et al., (1979), Sheather’s parasitological technique
(1923) modified by Huber et al., (2003) and the
enzyme immunoassay for the survey of Giardia
lamblia, Cryptosporidium sp. and Entamoeba
histolytica.
MATERIAL AND METHODS
Collection of the samples: The survey was
performed in four Guarani Indian Villages in the
cities of Angra dos Reis (Sapukai Village) Paraty
(Araponga, Rio Pequeno and Paraty Mirim
Villages) in the State of Rio de Janeiro.
Quadruplicate samples were collected over the
period from February to November, 2010. In the
end, there were 48 samples of water of the supply
systems of the Guarani Indian Villages, divided in
24 raw water samples and 24 treated water samples
from six different systems, thus distributed: three
systems in Sapukai Village, the single system of
Araponga Village, one in Rio Pequeno Village and
one in Paraty Mirim Village, totaling eight samples
of water for each system. For the soil, a total of
64 samples were collected in four different points
of the places allowed by the caciques, using the
greatest concentration of human and/or domestic
91

A. da S. BARBOSA et al.
animals as the parameter of choice, totaling 16 soil
samples collected for each collection point.
The water from surface sources (raw water)
was collected by means of the discharge of 2000
liters in commercial Aqualimp® filters, having
blanket cartridges and coiled wire with 1 µm
porosity of Cuno® DPPPY-1 Micro Wind II model.
After filtration, the cartridges were packaged in
properly marked plastic bags. Around two liters of
reservoir-bottom sediments were collected from
two polyethylene reservoirs (treated water) with
the aid of a 1’ plastic hose through siphoning.
This sediment was stored in 2 liter plastic bottles,
previously cleaned and identified.
In the soil, the collections were standardized
in pool system, which represents the points
surrounding each place previously determined as
reference. Each collection point is 150 cm distant
from the reference, and the collection points are
250 cm equidistant from each other. All the soil
collected from the chosen point was stored in the
same plastic bag, forming one sample. The material
collected was obtained by surface scraping of the
soil with a stainless steel paddle inside a square
of 25 cm 2 , and a template was used. After the
collection, soil samples were packaged in properly
marked plastic bags.
The water and soil samples were stored in refrigerated
isothermal container and sent to the Parasitology
Laboratory of the Biomedical Institute, at
Federal Fluminense University (UFF) and then sent
to the Immunodiagnostic Laboratory of the Department
of Biological Sciences (DCB), at the National
School of Public Health (ENSP)/FIOCRUZ.
Preprocessing:The filter cartridges were eluted
by washing with one liter of neutral detergent solution
at 0.001% (q.s.p.), gauze filtered and placed for
sedimentation. The samples stored in 2-liter plastic
bottles were filtered and placed for sedimentation.
In the soil, 100 g of each sample were used by deposit
in conical bottom cups with 1-liter detergent
solution at 0.001% (q.s.p.), and the material was
homogenized and filtered with a gauze and placed
for sedimentation.
Surveys of protozoa cysts and helminth eggs
using microscopic techniques: The sediment was
aliquoted and all samples were subject to survey
of evolutionary forms of protozoa and helminths.
One mililiter of the sediment was used for each
microscopic concentration technique. Three glass
92
slides per sample were read in Ritchie’s technique
modified by Young et al, whereas one glass slide per
sample was read in Sheather’s technique modified
by Huber et al.
All slides were covered with a 24 x 32 mm
coverslip, and viewing and photomicrography were
made on a Olympus® Bx 41 binocular optical
microscope with an increase of approximately
100 times and confirmation in 400 times, coupled
to a Samsung® SDC415 digital camera, complete
with Honestech® PVR capture software. For
morphometry, we used an Olympus® CH30
monocular optical microscope with 400 times
magnification, and an ocular micrometer.
Survey of surface antigens via Immunodiagnosis:
The Enzyme-linked Immunosorbent Assay,
ELISA, was conducted in all samples for survey
of G. lamblia, Cryptosporidium sp., and E. histolytica.
The kits were purchased commercially:
Techlab ® Wampole Cryptosporidium II test, which
surveys the antigens of the oocyst wall of Crypstosporidium
sp.; Entamoeba Ridascreen ® , which
surveys adhesins specific of E. histolytica (N-acetyl-D-galactosamine
lectin inhibitor), present on
the parasite membrane; and Giardia Ridascreen ® ,
which surveys antigens specific of the cyst wall of
G. lamblia.
Before the performance of ELISA, a predilution
of 60 μL of the sample and 60 μL of the
diluent provided by manufacturer was performed,
and 100 μL of this solution was transferred to the
duplicate test plate. Then, we followed the protocol
recommended by the manufacturer. The reading
was made in ELISA reader (Testline® ELx 800)
with wavelength according to the manufacturer’s
technical standards.
Statistical treatment of results: The McNemar’s
statistical test with a significance level of 5% was
used with comparison degree of agreement between
the laboratory techniques, using SPSS® (Statistical
Package for Social Sciences, Chicago), of version
17.0.
RESULTS
In the 48 water samples examined, was observed
agreement applying Sheather’s modified
and Ritchie’s modified techniques to detect the
amoeboid cyst with more than four nuclei, four-
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96

nucleus amoeboid cyst and cyst of Giardia sp. in
the same samples. It was not possible to compare
the degree of agreement between these techniques
in the survey of the oocyst of Cystoisospora sp.,
nematode larvae and eggs, coccidia oocysts and
eggs of Trichuris sp., as these evolutionary forms
were detected only in one of the techniques and, for
comparison using McNemar’s test, it must be positive
at least once in the two of them (Table 1).
In water, ELISA detected more positive samples
for the protozoa G. lamblia, E. histolytica e
Cryptosporidium sp. than the microscopic Ritchie’s
and Sheather’s modified techniques. Despite the
greater positivity in ELISA, it was still possible to
find the degree of agreement with the microscopic
techniques. This agreement happened in the detection
of four-nucleus amoeboid cysts in two samples
with sizes compatible with E. histolytica/E. dispar
complex, confirmed for E. histolytica in ELISA,
cysts of Giardia sp. in four samples with dimensions
compatible with G. lamblia, confirmed with
ELISA. Comparing the degree of agreement in the
survey of Cryptosporidium sp. was not possible, as
the result was possible only in ELISA (Table 2).
In the 64 soil samples collected, there was
agreement between the microscopic techniques
Table 1. Comparison between the results obtained with Sheather’s modified and Ritchie’s modified
techniques for detection protozoa and helminths in 48 water samples
Protozoa and helminthes Ritchie’s mod. technique Sheather’s mod. technique MN
No+ No - No+ No - SxR
Amoeboid cyst with more
than 4 nuclei
2 46 4 44 0.5
Four-nucleus amoeboid
cyst
2 46 2 46 1
Cyst of Giardia sp. 4 44 4 44 1
Cyst of Cystoisospora sp. 0 48 1 47 NF
Nematode larvae 4 44 0 48 NF
Nematode egg 0 48 3 45 NF
Coccidia oocyst 0 48 1 47 NF
Egg of Trichuris sp. 0 48 1 47 NF
No+: Number of positive samples; No-: Number of negative samples; R: Ritchie’s technique modified by Young et
al.; S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar Test.
Table 2. Comparison between the results obtained with Ritchie’s modified technique, Sheather’s modified
technique and ELISA for detection of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and
Cryptosporidium sp. in 48 water samples
Protozoa ELISA Ritchie’s mod.
technique
Sheather’s mod.
technique
No.+ No.- No.+ No.- No.+ No.- ExR ExS
Cyst of Entamoeba histolytica 6 42 2 46 2 46 0.08 0.08
Oocyst of Cryptosporidium sp. 10 38 0 48 0 48 NF NF
Cyst of Giardia lamblia 9 39 4 44 4 44 0.06 0.06
No.+: Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified
by Young et al.; S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar
Test.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES
MN
93

A. da S. BARBOSA et al.
Table 3. Comparison between Ritchie’s modified technique and Sheather’s modified technique for detection
of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in 64 soil samples
Protozoa and helminthes
Ritchie’s mod. technique Sheather’s mod. technique MN
No.+ No.- No.+ No.- RxS
Coccidia oocyst 0 64 2 62 NF
Egg of Ascaris sp. 1 63 1 63 1
Nematode egg 1 63 0 64 NF
Egg of Trichuris sp. 0 64 2 62 NF
No.+ Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified
by Young et al., S: Sheather’s technique modified by Huber et al.; NF: Comparison was not possible; MN: McNemar
Test.
Table 4. Comparison between Ritchie’s modified technique, Sheather’s modified technique and ELISA for
detection of the protozoa Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. in 64 soil samples
Protozoa ELISA Sheather’s mod. technique/
Ritichie’s mod. Technique
MN
N+ N- N+ N- ExR / ExS
Giardia lamblia 4 60 0 64 NF
Cryptosporidium sp. 5 59 0 64 NF
Entamoeba histolytica 9 55 0 64 NF
No.+ Number of positive samples; No.-: Number of negative samples; E: ELISA; R: Ritchie’s technique modified
by Young et al., S: Sheather’s technique modified by Huber et al., NF: Comparison was not possible; MN: McNema
Test.
only in the detection of Ascaris sp. eggs, which
were detected in the same samples. The comparison
with other parasites was not possible, because
the evolutionary forms were only found using a
laboratorial technique (Table 3).
In the survey of protozoa G. lamblia and
Cryptosporidium sp. in soil samples, the degree
of agreement was not calculed, as only ELISA
managed to identify the positive samples (Table 4).
94
DISCUSSION
Despite the microscopic techniques used in this
study presented different principles, an agreement
in the detection of cysts of some protozoa could
be observed. The Ritchie’s technique modified by
Young et al., is based on the centrifugal sedimentation
using ethyl acetate, and Sheather’s technique
modified by Huber et al., is based on the centrifugal
flotation with sucrose solution.
These microscopic techniques are widely used
in clinical fecal analyses, and, hence, have been
evaluated by different authors in fecal examinations.
Ritchie’s technique modified by Young et al.,
presented satisfactory results in children’s feces in
the city of Araraquara, State of São Paulo (García et
al., 2006) and in feces of patients who lived in slums
in the city of Belo Horizonte, State of Minas Gerais
(Mello et al., 1989). Sheather’s technique modified
by Huber et al., (Huber et al, 2003) has been shown
to be highly efficient for the diagnosis of cysts of
Giardia sp. and oocysts of Cryptosporidium sp. in
calves’ feces.
In the soil, the microscopic techniques presented
agreement only in the detection of eggs of
Ascaris sp., given that most of the positive results
were found with Sheather’s modified technique. It
should be underscored that, even with gauze filtration
with sedimentation, the reading of the slabs for
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96

microscopy applying the Ritchie’s modified technique
was difficult, as the sediment had become
very thick, while in Sheather’s modified technique,
owing to the sugar solution with high concentration,
the sediment on the microscope slide was
clear and easily readable. As an alternative to improve
the reading of the slabs in the Ritchie’s modified
technique, Carvalho et al., (2002) suggest the
dilution of the material obtained with a drop of salt
solution for obtainment of clearer fields of reading.
Thus, we suggest that Ritchie’s modified technique
is not used in the processing of soil samples, as it
may lead to false negative results, owing to excess
residues in the fields of reading.
ELISA showed a larger number of positive
samples compared to the microscopic techniques in
the survey of G. lamblia, E. histolytica and Cryptosporidium
sp. These results are in keeping with the
studies performed with fecal samples in the city of
Belém, State of Pará, for which ELISA was considered
the most sensitive technique for detecting
G. lamblia in children’s feces by Machado et al.,
(2001) and for detecting E. histolytica in feces of
dwellers of the Metropolitan Region by Silva et al.,
(2005).
In this study, the agreement between microscopic
and ELISA techniques allowed to confirm species
of protozoa which could not be identified by
microscopy. This fact was substantiated by cysts
of Giardia sp. confirmed for G. lamblia and
four-nucleus amoeboid cysts confirmed for E.
histolytica. The confirmation of species of protozoa
through the enzyme immunoassay was possible
due to the use of species-specific kits.
The degree of agreement between the microscopic
techniques and ELISA in soil samples was
not ascertained, as protozoa G. lamblia, E. histolytica
and Cryptosporidium sp. were detected only
in the enzyme immunoassay, and the microscopy
did not find any compatible structure.
The high sensitivity of the enzyme immunoassay
in water and soil samples may be explained by the
fact that this technique is capable of capturing
surface antigens, given that the integrity of the cyst
and oocyst is not necessary. On the other hand, in
microscopic techniques, the integrity of the cysts
and oocysts of protozoa is essential for the diagnosis.
The high efficiency of the enzyme immunoassay is
also the result of its ability to detect small amounts
of antigens, which stand as low parasite load. This
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96
COMPARISON OF TECHNIQUES IN ENVIRONMENTAL SAMPLES
may facilitate the detection of antigens in water,
since these antigens are usually at low loads, owing
to high dilution.
Vidal and Catapani (2005) reported that the
main disadvantages of enzyme immunoassays are
related to the high cost compared to the traditional
microscopic techniques. In this study, for each
sample, ELISA cost BRL 25.00 in average, while
Sheather’s technique modified by Huber et al.,
cost BRL 0.37, and Ritchie’s technique modified
by Young et al., cost BRL 0.55. In addition to this,
the enzyme immunoassay, as a specific kit, does
not detect other parasites, and the identification of
parasite in ELISA does not ensure its feasibility.
Comparing the results of ELISA with other immunological
techniques is necessary; these techniques
include the direct immunofluorescence,
which uses monoclonal antibodies with high sensitivity,
and is capable of detecting undivided cysts
and oocysts. Still, ELISA has the advantage of being
less costly than immunofluorescence, is swifter,
facilitating concomitant analysis of a number of
samples, and is easy to handle. Nonetheless, it has
been subject to few tests in environmental samples.
Other relevant factors to be considered would be
the need for less technology infrastructure, as some
kits may be processed by visual reading and do not
require a trained operator to identify the evolutionary
parasitic forms.
The consensus is that the identification of a given
parasite must be confirmed by a parasitological
laboratory technique. It is recommended, however,
the combination of techniques with different
principles to increase the probability of detection
of evolutionary forms of protozoa and helminths,
taking into account the morphological variability
they present. However, based on the results
found, we suggest the use of immunoenzymatic
technique for monitoring the water quality or for
investigating environmental contamination, as
the mere detection of antigens may indicate risk
of infection and, chiefly, the occurrence of fecal
source contamination, with the possible presence
of other pathogens.
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Acknowledgments: The Guarani Indians of the cities of
Angra dos Reis and Paraty, State of Rio de Janeiro, for
cooperating with this study, and the Sanitation Department
of the National Health Foundation (FUNASA) for their
logistic support in the collection of samples. FINANCIAL
SUPPORT: The study received financial support from the
Coordination for the Improvement of Higher Education
Personnel (CAPES), Department of Microbiology and
Parasitology, at the Biomedical Institute (CMB - UFF) and
of the National School of Public Health (ENSP - FIOCRUZ).
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 90-96

Artículo Original
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
Tratamiento de la enfermedad de Chagas crónica
en Chile. Efectos adversos de nifurtimox
VALENCIA C. N. 1 , MANCILLA M. 2 , RAMOS D. 3 , ZULANTAY I. 2 , MOLINA M. 4 , TORRES A. 4 ,
CORRAL G. 5 y APT W. 2
1 Hospital de Salamanca, Servicio de Salud Coquimbo, IV Región, Chile.
2 Laboratorio de Parasitología Básico-Clínico, Programa de Biología Celular y Molecular, Instituto de Ciencias
Biomédicas. Facultad de Medicina. Universidad de Chile.
3 Interno Carrera de Medicina. Facultad de Medicina. Universidad de Chile.
4 Hospital de Combarbalá, Servicio de Salud Coquimbo, IV Región, Chile.
5 Hospital de Illapel, Servicio de Salud Coquimbo, IV Región, Chile.
ABSTRACT
CHEMOTHERAPY OF CHRONIC CHAGAS DISEASE IN CHILE.
ADVERSE EFFECTS OF NIFURTIMOX
Today the only drugs approved for treatment of Chagas disease are nifurtimox (NFx) and benzinazole
(BNZ). To know the adverse effects of NFx a study was conducted in 60 patients with chronic Chagas
disease who were administered the drug at doses of 10 mg/kg/day (but not more than 700 mg/day) during
60 days. 4 cases discontinued treatment, 49 (88.1%) had side effects (21 urban and 28 rural) and 7 (11.6%)
had not clinical manifestations by the therapy. The most frequent adverse effects were: nauseas, epigastric
pain, skin rash, anorexia, asthenia and paresthesia. A high percentages of cases (80.6%) presented low
weight. No modification of the test scores of CBC liver profile due to NFx administration was observed.
It is necessary to perform a strict clinical and laboratory control when the NFx is administrated, always
considering co-morbility and inclusion-exclusion criteria.
Key words: Chronic Chagas disease, treatment, nifurtimox, adverse effects.
RESUMEN
Hoy en día, los únicos fármacos aceptados para el tratamiento de la enfermedad de Chagas, son nifurtimox
Recibido: 5 de Febrero de 2012. Aceptado: 05 de Junio de 2012.
Correspondencia: Dr. Werner Apt B.
E-mail: wapt@med.uchile.cl
Dra. Inés Zulantay A.
E-mail: izulanta@med.uchile.cl
Laboratorio de Parasitología Básico-Clínico. Programa de Biología Celular y Molecular. Instituto
de Ciencias Biomédicas. Facultad de Medicina. Universidad de Chile. Casilla 427. Santiago 3.
Santiago Chile.
Fono-Fax: 56-2-9786122
97

C. N. VALENCIA et al.
(NFx) y benznidazol (BNZ). Con el fin de conocer los efectos adversos de NFx, se realizó un estudio en
60 pacientes con enfermedad de Chagas crónica a quienes se administró el fármaco a dosis de 10mg/kg./día
(sin sobrepasar los 700mg/día) por 60 días. 4 casos abandonaron la terapia, 49 (88,1%) presentaron efectos
secundarios (21 pacientes urbanos y 28 rurales) y 7 (11,6%) no presentaron manifestaciones clínicas por
la terapia. Los efectos adversos más frecuentes fueron: náuseas, epigastralgias, rash cutáneos, anorexia,
astenia y parestesias. Un alto porcentaje de los casos presentó baja de peso. No hubo modificación de los
resultados en los exámenes de hemograma y perfil hepático por la administración del NFx. Se concluye
que se debe efectuar un estricto control clínico y de laboratorio (monitoreo) al administrar el fármaco,
considerando siempre co-morbilidad y criterios de inclusión-exclusión.
Palabras clave: Enfermedad de Chagas crónica, tratamiento, nifurtimox, efectos adversos.
98
INTRODUCCIóN
Después de la malaria y la esquitosomiasis, la
enfermedad de Chagas constituye una de las enfermedades
parasitarias más importantes a nivel
global (Morillo, 2012). En las Américas, existen
actualmente 8 millones de individuos que cursan la
fase crónica (WHO, 2006), mientras que en Chile
se estima que existen 142.000 infectados en el área
comprendida entre el límite norte de la provincia
de Parinacota (latitud sur 18” 30’) y las provincias
centrales de O’Higgins y Colchagua (latitud
sur 34” 36’) (Rozas et al., 2005). El propósito del
tratamiento etiológico de la enfermedad de Chagas
en los individuos infectados, es eliminar el parásito,
disminuir la posibilidad de desarrollo de las
formas clínicas de la enfermedad y romper la cadena
del ciclo de transmisión (Sosa-Estani et al.,
2006). Al respecto, existe consenso que la enfermedad
de Chagas debe ser tratada siempre en niños y
eventualmente en adultos hasta los 50 años de edad
(Sosa-Estani et al., 2009; Sosa-Estani et al., 2012).
Sólo dos fármacos recomendados por la OMS, están
disponibles para el tratamiento de la enfermedad
de Chagas: benznidazol (BNZ) y nifurtimox
(NFx), los que pueden originar efectos adversos
que limitan su utilización, sobre todo en adultos,
tales como rash alérgicos, paresias, parestesias,
baja de peso, anemia y alteraciones de las enzimas
hepáticas (Apt 2010; Apt & Zulantay 2011; Matta-
Guedes et al., 2012).
Actualmente, NFx está disponible en Chile a
través de los servicios de salud, para el tratamiento
de casos congénitos, niños menores de 15 años,
mujeres en edad fértil y adultos que cursan la fase
crónica inicial e intermedia (hasta los 50 años)
(MINSAL, 2011). Nos parece relevante reportar
la tolerancia y efectos adversos observados en pacientes
con enfermedad de Chagas crónica tratados
con NFx, procedentes de una zona endémica de
Chile.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se realizó un estudio retrospectivo no experimental
de tipo descriptivo longitudinal no randomizado.
Se analizaron fichas clínicas, fichas ad
hoc y registros de laboratorio, de 75 individuos
con enfermedad de Chagas crónica procedentes
de zonas urbanas y rurales de la Comuna de Salamanca,
Provincia de Choapa, IV Región, tratados
entre los años 2009 y 2011. Las dosis de NFx fueron
las recomendadas según normativas internacionales
y protocolos nacionales de atención del
individuo con enfermedad de Chagas (MINSAL,
2011), es decir, cada paciente recibió entre 8 y 10
mg/Kg/peso de NFx durante 60 días, el que fue
administrado y controlado por médicos generales
de los centros de salud urbanos y rurales de la red
de servicios de salud. En esta instancia, se invitó a
un grupo de personas con infección por Trypanosoma
cruzi confirmada mediante las técnicas serológicas
de ELISA e IFI IgG (Zulantay et al., 1998)
a participar, bajo Consentimiento Informado (CI)
aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de
Medicina, Universidad de Chile, a un estudio de
evaluación de eficacia de NFx (investigaciones en
curso). En 15/75 (20%) pacientes tratados bajo CI
procedentes de esta comuna, la información clínica
y de laboratorio relacionada con el tratamiento de
NFx fue incompleta y no se incluye en este reporte.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108

La presentación de la información recopilada en el
80% restante, que corresponde a 60 pacientes tratados,
se organizó como sigue:
1. Características de la población en estudio:
procedencia (urbana o rural), género, edad y enfermedades
pre-existentes con fármacos prescritos
no constituyentes de exclusión en las normativas
vigentes, tales como cardiopatías, hepatopatías y
nefropatías severas, inmunodepresión, edad avanzada,
embarazo y lactancia (MINSAL, 2011; Apt &
Zulantay 2011; Matta-Guedes et al., 2012).
2. Tolerancia: clasificada según se establece en Apt
1999 (Tabla 1), que considera signos, síntomas y
exámenes de laboratorio, como hemograma y perfil
hepático.
3. Descripción de efectos secundarios: clasificadas
en manifestaciones digestivas, reacciones cutáneas,
alteraciones neurológicas, alteraciones del aparato
locomotor y otros signos y síntomas inespecíficos.
Además, se incluye registro de peso antes y después
de la terapia.
4. Descripción de causas de suspensión de tera-
pia: patologías y condiciones fisiológicas incompatibles
con la terapia.
RESULTADOS
1. Características de la población en estudio:
del universo de personas tratadas (n=60), 54 (90%)
son mujeres y 6 (10%) hombres. En la Tabla 2 se
observan las variables etarias, cuya media es de
41,42 y 48,33 para mujeres y hombres, respectivamente.
Veintíseis (43,3%) pacientes tratados (23
mujeres y 3 hombres), proceden de zonas urbanas
y 34 (56,7%) (31 mujeres y 3 hombres) viven en
diferentes localidades rurales de la comuna, tales
como Chillepín, Tranquilla, Llimpo y El Tambo.
En relación a enfermedades pre-existentes en el
grupo de estudio, se consideraron sólo aquellos que
tenían registro en la ficha clínica y que corresponden
a 26/60 casos (43,33%), 2 hombres y 24 mujeres.
El promedio de edad es 46 años (intervalo:
23-59 años). En la Tabla 3, se observan los antecedentes
de co-morbilidad que no constituyeron,
según criterio médico y de inclusión/exclusión en
las normativas vigentes, motivo de exclusión para
el tratamiento de la enfermedad de Chagas crónica.
Tabla 1. Tratamiento de la enfermedad de Chagas crónica con nifurtimox en individuos con enfermedad de
Chagas crónica procedentes de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile, 2009-2011.
Criterios de tolerancia
Tolerancia Signos o síntomas Hemograma Perfil hepático
Mala Severos Anemia, trombocitopenia,
y leucopenias severas
Regular Leves, moderados Anemia, trombocitopenia
y leucopenia leves
Buena Ausentes Normal Normal
Enzimas hepáticas aumentadas
sobre 2,5 veces
Enzimas hepáticas aumentadas
hasta 2,5 veces
Tabla 2. Variables etarias de 60 individuos con enfermedad de Chagas crónica tratados con nifurtimox
procedentes de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011)
Variable Mujeres
n = 54
Hombres
n = 6
Edad
Media 41,42 48,33 42,11
Mediana 43,00 52,00 43,00
DS 11,57 9,91 11,53
Mínima 18,00 34,00 18,00
Máxima 60,00 58,00 60,00
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA
99

C. N. VALENCIA et al.
Tabla 3. Antecedentes de co-morbilidad registrados en fichas clínicas de 60 pacientes tratados con nifurtimox
entre los años 2009 y 2011 procedentes de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile, que no constituyeron
criterios de exclusión
100
Caso Sexo Edad Patología y/o manifestación clínica
1 H 58 hipertensión, depresión, asma
2 M 41 migrañas, colon irritable
3 M 43 hipotiroidismo, diabetes
4 M 47 hipertensión
5 M 45 hipotiroidismo
6 M 31 migrañas
7 M 39 depresión
8 M 44 depresión
9 M 43 depresión
10 M 54 hipertensión, diabetes
11 M 47 depresión, colon irritable, gastritis
12* M 59 colopatía
13 M 34 hipertensión
14* M 58 hipertensión
15 M 23 hipertensión
16 M 39 migrañas
17 M 49 reflujo gastroesofágico, dispepsia, miomatosis
18 M 41 hipertensión y soplo cardíaco
19* M 54 artritis
20 M 45 intolerancia a la glucosa y obesidad
21 M 57 hipotiroidismo, hipertensión, diabetes
22 M 52 hipotiroidismo, hipertensión, diabetes
23 H 52 depresión
24 M 52 hipertensión, depresión
25 M 37 obesidad
26 M 52 depresión
*suspensión de terapia.
La depresión e hipertensión arterial, sola o acompañada
de otras patologías, son las principales enfermedades
pre-existentes que presentaba al inicio del
tratamiento con NFx parte del grupo de estudio. En
3/26 casos (11,53%) de este grupo de pacientes se
suspendió la terapia.
2. Tolerancia: de acuerdo a los criterios establecidos
en la Tabla 1 para evaluar tolerancia de NFx, fue
posible determinar que sólo en 7 (11,66%) pacientes
del grupo de estudio (n = 60) no se observó signos o
síntomas asociados a la administración del fármaco
durante el período de tratamiento, mientras que en
49 (88,14%) (Tablas 4 y 5) se presentó al menos una
manifestación clínica que alteró su normal estado
de salud. En 9 de ellos, fue necesario suspender la
terapia (18,36%) (Tabla 7). Las manifestaciones
clínicas observadas permitieron determinar que la
tolerancia fue Mala en 9 casos (16,07%), Regular
en 40 (71,43%) y Buena en 7 (12,5%).
En cuanto a las pruebas de laboratorio recomendadas
(hemograma y función hepática), en 37/60
casos (61,66%) del grupo de estudio existe registro
completo o parcial de resultados. Sólo en 13 de
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108

Tabla 4. Registro de efectos adversos a nifurtimox en 21 individuos con enfermedad de Chagas crónica
procedentes de sectores urbanos de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011) 1
Caso Género
(edad)
Manifestaciones
digestivas a
Reacción
cutánea b
Alteraciones
neurológicas c
1 H (58) N C, PA, SÑ, PTM,
AL
Alteracioneslocomotorasd
A, M AS
Otros signos y
síntomas e
2 M (25) N, EL C, D, PTM, PA AS, F, PO,
3 M (45) EL D, PTM, TC T, Ax
4 M (45) EM P C M, A Ax, PO, AS
5 M (54) N, V, EM, DI P, U, R C, PA, TC T, PO, AS,
6 M (24) N, DI C, D, PA, PTM AS, PP, DT
7 M (47) C, DF, EM C, PA, PTM,TC M, A T, AS, Ax, PO, F, DP
8 M (42) EL, DI C
9 M (49) N C, FB, D, PTM AS,TC, MM
10 M (57) EM, DI, T P C, D, PTM M, A AS
11 M (52) N, EM, DI D, PA, C,TC A T, PP, DT, Ax, AS
12 H (52) EL, DI C, D, PTM,TC M, A AS, T
13 M (42) EL MM
14 M (52) N, V, DI C, PA, SÑ, PTM,TC M, A, EDM AS, T, PO, Ax,PP, SS
15* H (56) ES
16** M (60) ES rabdomiolisis
17* M (59) ES, N C
18* M (58) M Ax, AS
19* M (53) R
20* M (58) C,TC AS, F, PO, T, PP
21* M (54) EP, V M
a N: náuseas, V: vómitos, EL, EM, ES: epigastralgia leve, moderada y severa, DI: diarrea, C: constipación, DF:
disfagia, OF: odinofagia, T: tenesmo.
b R: rash, P: prurito, U: urticaria.
c C: cefalea, PTM: pérdida temporal de memoria; PA: parestesia, SÑ: alteración sueño, AL: alucinaciones, D: desconcentración,
FB: fotofobia.
d A: artralgia, M: mialgia, EDM: edema de miembros.
e Ax: anorexia, PO: polidipsia, AS: astenia, F: fiebre, TC: temblores corporales, DT: dolor torácico, SS: sudoración,
TT: tinnitus, PP: palpitaciones, DP: depresión, MM: mareos, TQ: taquicardia.
* Suspensión de terapia con NFx.
** Caso fatal asociado a NFx. Otros efectos adversos en Tabla 7.
1 Se excluyen 3 casos que no presentaron reacciones adversas y 2 casos que abandonaron tratamiento.
ellos (21,66%), se registran resultados de ambas
pruebas antes, durante y después de la terapia, 2
(3,33%) de procedencia rural. Aun cuando los 37
pacientes debían registrar resultados de al menos 6
determinaciones durante los períodos mencionados
(3 hemogramas y 3 funciones hepáticas), 78 de las
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA
222 determinaciones esperadas (35,13%), no cuentan
con registro (SR). Con resultados parciales de
hemograma, fue posible determinar que solo uno y
dos casos podrían ser indicadores de mala y regular
tolerancia, respectivamente. Lo mismo ocurrió con
los resultados de perfil hepático, en que sólo uno de
101

C. N. VALENCIA et al.
Tabla 5. Registro de efectos adversos a nifurtimox en 28 individuos con enfermedad de Chagas crónica
procedentes de sectores rurales de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011) 1
Caso Género
(edad)
102
Manifestaciones
digestivas a
Reacción
cutánea b
Alteraciones
neurológicas c
Alteraciones
locomotoras d
Otros signos y
síntomas e
1 M (38) N,V, ES P C,TC M, A AS, PO, F, MM
2 H (52) P C, D, PA, TC M, A AS, PO, SS
3 M (41) N, V, EM, DI C AS, Ax, PO
4 M (43) C, DI C, PA, D PO, TQ, F, Ax
5 M (47) N, EM, OF C, D,TC M, A AS, PO
6 M (31) C, D, PTM, PA M, A AS, PO
7 M (39) N, DI D, PA M, A AS
8 M (44) N, EM, DI P C, D, PTM, TC M, A AS, PO
9 M (43) N, V, DI C, D, SÑ, FB, TC M, A AS, DP, PO, Ax, MM
10 M (32) N Ax, PO
11 M (31) N AS, PO
12 M (24) N, V, DI C, D M, A PO, F, AS
13 M (34) D, N, V, EM C M, A AS, Ax
14 M (23) N, V, EM U, R C, D, TC M, A A, PO, Ax, F
15 M (39) N, V, EM P C, TC M, A A, TQ, Ax, PO
16 H (34) P PO, SS
17 M (41) N, EM U, P C, PA, D M, A F, AS, PO, MM
18 M (23) N, V, DI, EM R C, D, TC M, A AS, PO, F, MM
19 M (25) N PA AS, TC, PO, DT
20 M (45) N, EM C, D, PA, PTM AS
21 M (52) N, D, EM C, D, PTM, SÑ M F
22 M (23) N, V, EM Ax, PO
23 M (37) N C PO, MM
24 M (34) N, V, EM C, D, TC M, A AS, PO
25 M (36) N AS, PO
26* M (54) ES, N, V R, P C, TC M, A F, AS, PO, MM
27* M (52) ES, N, V C, D, PA M, A AS, PO, F, DT
28 H (38) N TC
a N: náuseas, V: vómitos, EL, EM, ES: epigastralgia leve, moderada y severa, DI: diarrea, C: constipación, OF:
odinofagia.
b R: rash, P: prurito, U: urticaria.
c C: cefalea, PTM: pérdida temporal de memoria; PA: parestesia, SÑ: alteración sueño, D: desconcentración, FB:
fotofobia.
d A: artralgia, M: mialgia.
e Ax: anorexia, PO: polidipsia, AS: astenia, F: fiebre, TC: temblores corporales, DT: dolor torácico, SS: sudoración,
DP: depresión, MM: mareos, TQ: taquicardia
* Suspensión de terapia con NFx.
1 Se excluyen 4 casos que no presentaron reacciones adversas y 2 casos que abandonaron tratamiento.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108

Tabla 6. Diferencia (DIF) entre el peso corporal de inicio de tratamiento (PCIT) y término de tratamiento
(PCTT) con nifurtimox en 46 individuos con enfermedad de Chagas crónica procedentes de sectores rurales
de la comuna de Salamanca, IV Región, Chile (2009-2011)
Caso Sexo Edad PCIT PCTT DIF Caso Sexo Edad PCIT PCTT DIF
1 M 38 68 62 -6 24 M 23 53 49 -4
2 H 58 71 67 -4 25 M 39 79 74 -5
3 H 52 71 66 -5 26 H 34 74 66 -8
4 M 25 60 57 -3 27 M 49 55 55 0
5 M 41 70 65 -5 28 M 41 72 65 -7
6 M 45 67 64 -3 29 M 23 45 45 0
7 M 43 73 67 -6 30 M 33 90 86 -4
8 M 43 80 76 -4 31 M 25 60 57 -3
9 M 47 62 58 -4 32 M 45 85 80 -5
10 M 45 76 76 0 33 M 57 62 56 -6
11 M 31 70 72 +2 34 M 28 66 66 0
12 M 39 50 46 -4 35 M 52 62 56 -6
13 M 44 58 54 -4 36 M 52 68 68 0
14 M 43 74 58 -16 37 M 45 65 65 0
15 M 32 60 52 -8 38 H 52 83 75 -8
16 M 54 93 87 -6 39 M 23 60 55 -5
17 M 50 53 51 -2 40 M 37 74 68 -6
18 M 24 70 67 -3 41 H 60 81 74 -7
19 M 47 80 72 -8 42 M 34 70 65 -5
20 M 42 70 69 -1 43 M 36 60 55 -5
21 M 31 75 72 -3 44 M 42 84 79 -5
22 M 24 58 53 -5 45 H 38 75 80 +5
23 M 34 62 56 -6 46 M 52 49 43 -6
los resultados disponibles podría ser indicador de
mala tolerancia a NFx.
Finalmente, 4/60 casos del grupo de estudio
(6,66%) abandonaron el tratamiento. Si bien no
existe registro adecuado de las causas, entrevistas
personales con los pacientes permitieron detectar
mala tolerancia y/o adherencia al fármaco.
3. Descripción de efectos secundarios: en las Tablas
4 y 5, se describe en detalle los efectos adversos
asociados a NFx en individuos con enfermedad
de Chagas crónica procedentes de áreas urbanas
o rurales, respectivamente. Las manifestaciones
digestivas, presentes en 43 pacientes (72,88%),
fueron náuseas, vómitos, epigastralgias, diarrea,
constipación, disfagia y tenesmo. Las reacciones
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA
cutáneas observadas en 13 casos (22,03%), correspondieron
a prurito, rash cutáneo, urticaria y
cambios de color de la piel. Los problemas de origen
neurológico fueron observados en 37 pacientes
(62,71%) y abarcaron desde cuadros leves de
desconcentración hasta problemas más serios como
parestesia y pérdida de memoria. Veintíseis casos
(44,06%), manifestaron algún tipo de alteración
del aparato locomotor, como mialgias, artralgias,
dolor y calambres con dificultad para caminar. En
44 pacientes (74,57%), se presentaron, de acuerdo
con los registros observados y consultas realizadas,
manifestaciones clínicas inespecíficas.
En relación a la variación de peso corporal al
inicio y al finalizar la administración de NFx, de un
total de 46 pacientes con registros de peso corporal
103

C. N. VALENCIA et al.
en los dos períodos, 38 (82,60%) tuvieron una
disminución de peso corporal. La mayor diferencia
entre el peso inicial y de término, se observó en un
paciente de 43 años, sexo femenino, que perdió 16
kg durante los dos meses de terapia (Tabla 6).
4. Causas de suspensión de terapia: en la Tabla 7,
se describen las causas de suspensión de NFx registradas
en 9 casos del estudio. Entre las manifestaciones
clínicas destacan alteraciones del aparato
digestivo, sistema nervioso central y periférico, reacciones
cutáneas adversas y problemas del aparato
locomotor. Un caso fatal, cuya muerte se ha asociado
a la administración de NFx, corresponde a una
mujer de 60 años tratada bajo CI, que presentó entre
otras alteraciones, eritrodermia y rabdomiolisis
masiva con falla renal (caso 2, Tabla 7). Los antecedentes
clínicos, farmacológicos y co-morbilidad
entre otros, se encuentran bajo revisión.
104
DISCUSIóN
La base de todo tratamiento médico en el que se
utilizan fármacos con potenciales efectos adversos,
es la calidad del proceso terapéutico en todos sus
aspectos. El uso del NFx en el tratamiento de la
enfermedad de Chagas requiere del establecimiento
de estrictos criterios de inclusión y exclusión,
análisis de co-morbilidad y fármacos prescritos,
correcta dosificación del medicamento, control
de la administración, adecuada farmacovigilancia
de reacciones adversas a medicamentos (RAM),
consejería al paciente y entrenamiento del equipo
de salud a cargo, entre otros factores relevantes del
proceso.
En cuanto a la definición de los criterios de selección
para el tratamiento con NFx, está contraindicado
en embarazo, lactancia, alcoholismo crónico,
hepatopatías, nefropatías y hemopatías graves
(Rodrigues & De Castro, 2002; Apt & Zulantay,
2011). En este reporte, un 43,33% de los pacientes
tratados registran antecedentes de co-morbilidad
pre-existente, no obstante, no se evidenció la presencia
de patologías o estado fisiológico que contraindicara
la utilización de NFx. Respecto al límite
etario de los adultos con enfermedad de Chagas
crónica que reciben tratamiento con medicamentos
tripanocidas, las normativas nacionales e internacionales
recomiendan el tratamiento etiológico a
infectados no mayores a 50 años, informando adecuadamente
sobre los beneficios y efectos adversos
potenciales de las drogas utilizadas (Bern et al.,
2007; Viotti et al., 2012). Otros estudios con NFx
Tabla 7. Descripción de las causas de suspensión de terapia con nifurtimox registradas en 9 individuos con
enfermedad de Chagas crónica procedentes de sectores urbanos y rurales de la comuna de Salamanca, IV
Región, Chile (2009-2011)
Caso Sexo Edad Procedencia Causas de suspensión
1 H 56 Urbano epigastralgia severa
2 M 60 Urbano eritrodermia, rabdomiolisis masiva, falla renal,
neumonia, shock séptico, muerte
3 M 59 Urbano epigastralgia severa, náuseas, cefalea
4 M 58 Urbano anorexia, astenia, mialgias
5 M 53 Urbano rash cutáneo generalizado
6 M 54 Urbano epigastralgia severa, náuseas, vómitos, polidipsia,
cefalea, mialgias, artralgias, fiebre, mareos, astenia,
rash cutáneo
7 M 52 Rural epigastralgia severa, náuseas, vómitos, cefalea,
desconcentración, paresias, astenia, polidipsia, fiebre,
dolor torácico
8 M 58 Urbano cefalea, astenia, fiebre, polidipsia, temblores, palpitaciones
9 M 54 Urbano epigastralgia severa, vómitos, mialgias
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108

y BNZ, han incluido pacientes entre 50 y 60 años
(Lauria-Pires et al, 2000; Fabbro De Suasnabar et
al., 2000). Otros ensayos clínicos con BNZ y placebo,
incorporan individuos entre 18 y 75 años de
edad (Matta-Guedes et al., 2012). En el presente
estudio, 19/60 pacientes (31,66%) y cuyas edades
fluctuaban entre 51 y 60 años de edad, recibieron
NFx bajo los criterios médicos y de inclusión/exclusión
establecidos. Nueve de ellos (47,3%) registran
suspensión de terapia (Tabla 7), concordante
con la literatura que describe mejor tolerancia de
NFx en lactantes y niños pequeños (Freilij & Altcheh,
1995; Guhl, 2000; Apt, 2010; Altcheh et al.,
2011; Apt & Zulantay, 2011). La diferencia de tolerancia
al NFx según edad, no ha sido explicada
adecuadamente y la posibilidad de que la producción
de metabolitos tóxicos juegue un rol importante
en este aspecto, no ha sido evaluada (Altcheh et
al., 2012).
En pacientes con co-morbilidad registrada al
inicio de la terapia con NFx (n = 26), el 96,15%
presentó efectos adversos durante el tratamiento.
La administración de fármacos específica para estas
patologías paralelo al uso de tripanocidas puede
resultar contraproducente, por tanto, no sólo se
debería excluir en el tratamiento de la enfermedad
de Chagas crónica a pacientes con los criterios de
exclusión establecidos hasta ahora, sino además, a
aquellos pacientes que requieran recibir fármacos
durante el tratamiento que afectasen el metabolismo
del tripanocida (Rodríguez-Guardado et al., 2012)
y por consiguiente el resultado de la terapia. La
diabetes se registró en el 26% de las enfermedades
preexistentes observadas en el presente estudio,
siendo la mayoría de los casos mujeres. En esto
hay una clara concordancia, ya que la diabetes
es una co-morbilidad muy frecuente en la mujer
con enfermedad de Chagas, complicando muchas
veces la evolución de la cardiopatía, acelerando
su evolución desfavorable (Gimenez & Mitelman,
2009). Entre 1999 y 2010, se realizó un estudio
para evaluar la acción del BNZ en pacientes adultos
con enfermedad de Chagas crónica y se consideró
a la hipertensión como uno de los criterios para
excluir a los pacientes del tratamiento tripanocida
(Riarte et al., 2012). Toda co-morbilidad requiere
de medicación y se debe considerar que las
interacciones medicamentosas son causantes de
4,4% de todas las hospitalizaciones atribuidas
a fármacos representando el 4,6% de todas las
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108
TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA
RAM en pacientes hospitalizados (Gac, 2012). Si
comparamos las edades medias de los pacientes
que presentaron co-morbilidades vs los que no
las presentaron al inicio de la terapia con NFx, la
diferencia es importante, la media de los pacientes
que presentaron co-morbilidad fue de 46 años,
superando levemente el promedio de edad del
grupo de estudio (42 años) y la media de 39 años
de pacientes sin comorbilidad. El número de
medicamentos recibidos y la edad avanzada, es un
factor clave en la frecuencia de aparición de efectos
adversos a medicamentos (Gac, 2012).
En relación a las pruebas de laboratorio recomendadas
antes de iniciar tratamiento con NFx, las
pruebas de función hepática y hemograma deben
ser normales. Se considera motivo de exclusión de
la terapia con tripanocidas, pacientes que presenten
aspartato aminotransferasa (AST) o alanina aminotransferasa
(ALT) > 2,5 veces el límite superior
normal en el momento del tamizaje y la creatinina
sérica no debe ser > 2,5 mg/dl (Montoya, 2000;
Morillo, 2012). Apt (1999) describe que para detectar
efectos secundarios en el uso de tripanocidas
se deben realizan tests de bilirrubinemia, colesterol
total, AST, ALT y fosfatasas alcalinas, no sólo antes
de la terapia, sino que una vez al mes de iniciada
ésta y hasta 30 días después al término del tratamiento.
Asimismo, otras fuentes coinciden en realizar
controles al inicio, a los 15/20 días y al terminar
la terapia, incluyendo entre las pruebas de laboratorio,
hemograma, creatinina o urea y transaminasas,
además, de prueba de embarazo en púberes y
adultas. En el presente estudio 37/60 pacientes del
grupo de estudio presentaron registros completos o
parciales de hemograma y función hepática. En los
23 restantes no se obtuvo registro de su realización.
Si bien más del 80% de las pruebas de laboratorio
disponibles pre-tratamiento con NFx fueron normales,
no es posible concluir su utilidad debido a
registros insuficientes durante y al término de la
terapia, sugiriendo la adecuada solicitud y registro
de pruebas de laboratorio en el control de tolerancia
por NFx.
BNZ y NFx son en la actualidad los únicos
medicamentos disponibles para la infección por T.
cruzi (Morel & Lazdins, 2003; Sosa-Estani et al.,
2009; MINSAL, 2011; Morillo, 2012). El NFx tiene
acción tripanocida contra las formas tripomastigote
y amastigote del T. cruzi, se absorbe bien por
vía oral, difunde con rapidez a los tejidos y se meta-
105

C. N. VALENCIA et al.
boliza abundantemente, eliminándose los metabolitos
por riñón. Sus niveles séricos son bajos (llegando
su pico en 3,5 h), por lo que puede suponerse
un volumen de distribución amplio (Flores, 1997;
Vives et al., 2004). Las tasas de respuesta terapéutica
del NFx dependen de la fase de la enfermedad,
en los casos de infección crónica el grado de evidencia
se reduce considerablemente, llegándose a
conseguir unas tasas de curación entre el 15 y el
40% (Bern, 2011).
El tratamiento de la enfermedad de Chagas
en pacientes adultos en fase crónica aún es
una interrogante en el control de esta zoonosis
endémica. Si a las cifras de curación insuficientes
mencionadas, se agrega la elevada tasa de efectos
adversos, que en aproximadamente un 20% de los
casos obliga a suspender la medicación, se reduce
considerablemente la tasa de éxito del medicamento
(Urbina & Docampo, 2003; Molina et al., 2012).
Del total de 60 pacientes en estudio, 9 (15%)
suspendieron su terapia, 4 (6,66%) abandonaron
por mala tolerancia o adherencia, en 49 (81,66%)
existe registro de más de un efecto adverso, 1 caso
falleció por causas eventualmente asociadas a la
administración con NFx y sólo en 7 (11,66%) no se
presentaron efectos adversos. En este estudio, los
problemas de salud que presentaron los pacientes
durante el tratamiento fueron diversos, concordante
con las investigaciones que se han realizado desde
1969 en casos agudos y crónicos de la enfermedad
de Chagas administrando NFx (Rodrigues &
De Castro, 2002). Otros estudios con altas tasas de
efectos adversos y suspensión temprana del tratamiento
también avalan las observaciones realizadas
en el presente estudio (Morel & Lazdins, 2003;
Sosa-Estani et al., 2004; Molina et al., 2012).
Los efectos colaterales de NFx más frecuentes
son anorexia, pérdida de peso, alteraciones psíquicas,
excitabilidad o la somnolencia, polineuropatía
periférica, dermatitis alérgica, mialgias, artralgias y
manifestaciones digestivas, como náusea, diarrea,
vómito y cólico intestinal (Stoppani, 1999; Faúndez
et al., 2005; Sosa-Estani et al., 2009). La actividad
anti-T. cruzi de BZN y NFx, así como su
toxicidad, es consecuencia de la reducción de su
grupo nitro por el sistema citocromo P450 lo que
podría dar lugar a toxicidad aditiva (Pérez-Molina
et al., 2012). En este estudio, las alteraciones cutáneas
tuvieron una frecuencia aproximada de 26%
durante el tratamiento, mientras que Apt (1999)
106
reporta la observación en el 30% de los casos, de
dermatitis atópica leve o severa, por lo general después
del noveno día de tratamiento. Pérez-Molina
et al., (2012), describe un 83,3% de pacientes con
reacciones adversas asociadas a NFx, de los cuales,
el 27,8% suspendió el fármaco, principalmente
por intolerancia gastrointestinal y/o alteraciones
del sistema nervioso periférico. Los resultados obtenidos
en nuestro estudio son concordantes con lo
descrito, ya que más del 85% de los 60 casos tratados
con NFx presentaron efectos adversos.
En relación a los antecedentes registrados en
los pacientes tratados con NF, sin duda, la pérdida
de peso corporal es un elemento de especial interés
médico. En este sentido, Vives et al., (2004), señalan
que posterior a un tratamiento prolongado, la
anorexia puede ser tan severa como para ocasionar
pérdida de peso que obligue a la suspensión del
tratamiento. Del mismo modo, terapias sin una
supervisión adecuada del peso corporal y el ajuste
de las dosis de NFx podrían eventualmente inducir
al abandono temprano de la terapia.
Recientemente, Pérez-Molina et al., (2012),
determinan tolerancia a NFx, basados en la graduación
de los efectos adversos según criterios del
National Cancer Institute (CTCAE; Versión 3.0,
2006). Sus resultados de tolerancia son Buena:
16,6%, Regular: 55,6% y Mala: 27,8%. En nuestro
estudio se mantiene la tendencia de presentación
de tolerancia en el orden de regular > mala > buena,
según los criterios para determinar la tolerancia
descritos en la Tabla 1. En el presente estudio,
muchos pacientes con tolerancia regular al NFx,
cumplieron con la terapia por decisión personal y/o
apoyo familiar, a pesar de haber referido síntomas
severos durante todo el tratamiento.
El presente estudio permite concluir que las
RAM atribuibles o no, al uso de NFx, pueden aparecer
en cualquier momento de la terapia; los pacientes
presentan, al mismo tiempo, más de un tipo
de reacción adversa, limitando de sobremanera su
calidad de vida y/o desempeño laboral; la incidencia
de efectos adversos por NFx en pacientes con
enfermedad de Chagas crónica, podría estar relacionada
con la presencia de co-morbilidades; el tratamiento
de la hipertensión, diabetes y el hipotiroidismo
junto al uso de NFx forman una interacción
medicamentosa que desde el punto de vista farmacológico,
requiere evaluación, así mismo, trastornos
depresivos o antecedentes de depresión ante-

ior, podrían exacerbar los efectos secundarios de
NFx. Por otra parte, la edad de los pacientes influiría
en la presentación de las RAM, sin embargo, un
promedio de edad bajo los 50 años, no presenta diferencia
significativa en la aparición de efectos adversos
asociados al NFx. La disminución del peso
corporal podría aumentar la incidencia de efectos
secundarios y/o agravar otros, sino se ajusta la dosis
de NFx al nuevo peso durante los 60 días que dura
la administración del fármaco; según lo observado,
no existe una relación sexo-presentación de RAM
atribuibles al NFx, lo mismo ocurre con la procedencia
de los pacientes; las pruebas de laboratorio
deben constituir un parámetro tangible que requiere
de una solicitud adecuada y mejores registros; la
tolerancia de NFx es regular; se requiere adecuada
farmacovigilancia y acompañamiento del paciente
por parte del equipo de salud; educación continua
de los equipos de salud incluido los procedimientos
de notificación por RAM que aparezcan durante o
después de la terapia con NFx a fin de suspender la
administración del fármaco cuando sea necesario.
Este trabajo, se enmarca en el estudio de evaluación
de eficacia parasitológica de NFx para el
tratamiento de la enfermedad de Chagas crónica
(Proyecto Fondecyt 1100768, Zulantay I., Apt W.
et al., 2010-2013). Consideramos de relevancia informar
a la comunidad científica de los hallazgos
observados en este estudio, con el fin de contribuir
a la discusión en relación a los efectos adversos y
al costo-beneficio de NFx en el tratamiento de la
enfermedad de Chagas crónica.
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de la enfermedad de Chagas con benznidazol y
ácido tióctico. Medicina 64: 1-6.
29. SOSA-ESTANI, SEGURA E. 2006. Etiological treatment
in patients infected by Trypanosoma cruzi:
experiences in Argentina. Curr Opin Infect Dis 19: 583-
587.
30. SOSA-ESTANI S, VIOTTI R, SEGURA L. 2009. Therapy,
diagnosis and prognosis of chronic Chagas disease:
insight gained in Argentina. Mem Inst Oswaldo
Cruz 104: 167-180.
108
31. SOSA-ESTANI, COLANTONIO L, SEGURA L. 2012.
Therapy of Chagas disease: implications for levels of
prevention. J Trop Med 2012: Epub Mar 5.
32. STOPPANI A. 1999. Quimioterapia de la enfermedad
de Chagas. Medicina 59: 147-165.
33. URBINA JA, DOCAMPO R. 2003. Specific chemotherapy
of Chagas disease: controversies and advances.
Trends Parasitol 19: 495-501.
34. VIOTTI R, VIGLIANO C, LOCOCO B, PETTI M,
BERTOCCHI G, ALVEREZ MG. 2012. Nuevas evidencias
de efectividad del tratamiento antiparasitario
en la enfermedad de Chagas crónica. In: VIII Taller sobre
la enfermedad de Chagas importada: avances en el
tratamiento antiparasitario. Barcelona, España. Pág.11-
16.
35. VIVES E, VENTRIGLIA M, MEDVEDOVSKY D,
ROTHLIN R. Farmacología II: nitroimidazoles y nitrofuranos
2004; http://farmacomedia.files.wordpress.
com/2010/05/nitroimidazoles-y nitrofuranos.pdf [Consulta
11- 10 - 2011].
36. World Health Organization (WHO). 2006. Estimación
cuantitativa de la enfermedad de Chagas en las Américas.
OPS/HDM/CD/425-06, Pan American Health
Organization (PAHO), Washington, DC, USA.
37. ZULANTAY I, APT W, RODRÍGUEZ J, VENEGAS J,
SáNCHEZ G. 1998. Serologic evaluation of treatment
of chronic Chagas disease with allopurinol and itraconazole.
Rev Med Chile 126: 265-270.
Agradecimientos: Este estudio fue financiado por los Proyectos
FONDECYT 1100768 (Inés Zulantay A.) y 1120382
(Werner Apt B.). Los autores agradecen en forma especial a
todo el personal de salud de los centros hospitalarios urbanos
y rurales de la provincia de Choapa por su disposición
en la atención de los pacientes con enfermedad de Chagas
crónica.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 97-108

Crónica
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 109
NUEVO DIRECTORIO DE LA SOCIEDAD ESPAÑOLA DE PARASITOLOGÍA
(SOCEPA) (www.socepa.es)
Durante la realización de la Asamblea de la Sociedad Española de Parasitología celebrada durante el xII
Congreso Ibérico de Parasitología realizado en Zaragoza, se realizó una sesión especial para elegir su nuevo
Directorio:
El nuevo Directorio quedó constituido por las siguientes personas:
Presidente: Prof. Dr. Antonio Osuna Carrillo de Albornoz.
Instituto de Biotecnología, Universidad de Granada.
Vicepresidente: Profa. Dra. Cristina Arias Fernández. Facultad de Ciencias, Universidad de Vigo.
Secretario: Prof. Dr. Enrique Martínez Carretero.
Parasitología y Enfermedades Parasitarias. Facultad de Farmacia. Universidad de la
Laguna.
Vocales: Prof. Dr. álvaro Martínez Moreno.
Facultad de Veterinaria, Córdoba
Prof. Dr. Antonio Muro álvarez.
Facultad de Farmacia, Salamanca.
Prof. Dr. Jorge Martínez Quesada.
Facultad de Farmacia, Vitoria.
Prof. Dr. Antonio Clavel Parrilla.
Facultad de Medicina, Zaragoza.
Prof. Dr. Carlos Feliu.
Facultad de Farmacia, Barcelona.
Prof. Dra. Natividad Díez Baños.
Facultad de Veterinaria, León.
Prof. Dr. Rafael Toledo Navarro.
Facultad de Farmacia, Valencia.
Prof. Dra. Carmen Cuellar del Hoyo.
Facultad de Farmacia, Madrid.
Prof. Dr. José Manuel González Molina.
Facultad de Veterinaria, Las Palmas
Editor alterno: Dr. Antonio Osuna Carrillo de Albornoz.
Secretaria de edición: Prof. Dra. Susana Vílchez Tornero.
Instituto de Biotecnología, Universidad de Granada. www.ibtugr.es.
109

NORMAS DE PUBLICACIóN
1. Los trabajos serán remitidos a:
1.1 Secretaria de Edición, Prof. Dra. Susana Vilchez
Tornero, Instituto de Biotecnología Universidad de
Granada, Campus Universitario de Fuentenueva,
18071 Granada España. E-mail: svt@ugr.es
1.2 Editor Prof. Héctor Alcaíno, Casilla 9183, Santiago
1, Chile. E-mail: hectoralcaino@gmail.com
2. Los autores deberán remitir el manuscrito del
trabajo, que será original y aceptado por todos los
autores, mediante un soporte informático, a ser posible
en formato RTF, Microsoft Word (DOC) u Openoffice
(ODT).
3. La Revista Ibero-Latinoamericana de Parasitología
no dispone limitación en el número de páginas
de los trabajos, siempre que la información aportada
lo justifique.
4. ESTILO:
- Los trabajos podrán ser escritos en español, portugués
o inglés (la Comisión Editorial aconseja este
último idioma), deben remitirse usando una fuente
Times New Roman tamaño 12 y con márgenes derecho
e izquierdo de 3 cm, normas que deben guardar
también las cabeceras de tablas y pies de figuras. Todas
las páginas deberán ser numeradas consecutivamente,
tablas y figuras incluidas.
- Las letras en cursiva se utilizarán para los nombres
científicos de géneros y especies, así como para
palabras en idioma distinto al que se escribe.
- Cuando se cite una especie por primera vez en el
texto, se hará con su nombre científico completo.
- Para nombrar las enfermedades se seguirán las
normas publicadas por Kassai T., Cordero M.,
Euzeby J., Gaafar, S., Hiepe Th. and Himonas,
C.A. 1988. Standardized Nomenclature of Animal
Parasitic Diseases (SNOAPAD). Vet Parasitol 29:
299-326, las cuales están aceptadas por la SEP.
- Los números del uno al diez, se escribirán con
letras (nueve), salvo si preceden a una unidad de
medida (4 m) o se utilizan como marcadores (día
3). Los números mayores de diez se escribirán con
letras únicamente cuando vayan al principio de un
párrafo. Los números que sobrepasen las unidades
de millar se anotarán, uniformemente en ambas
lenguas, sin signos de puntuación, ejemplo “10000
y no 10.000 o 10,000”. Por su parte los números
decimales se anotarán siguiendo la forma “xx’xx
(xx.xx), según se trate de textos en español o inglés”.
Igualmente, deben evitarse números muy largos,
como “(250000000), escribiendo 250 millones o 2,5
x 10 8 ”.
- Las horas del día se nombrarán de “0 a 24 (18 h y
no 6 p.m.)”.
110
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112
- Los años se expresarán de forma completa (por
ejemplo “1999-2000 y no 1999-00”).
- Las abreviaturas podrán usarse, siempre claras y
carentes de ambigüedad. Las abreviaturas de uso
muy frecuente, no necesitarán deletrearse previamente:
“ADP, AMP, ATP, bp, kDa, cpm, D.F., ADN,
Fig., g, h, i.m., i.p., mAb, min, NAD, NADH, no.,
pH, p.i., %, ARN, sec, sp., spp., s.c., s.d., s.e., OMS,
etc.”
- Los artículos constarán de los siguientes apartados,
a menos que la naturaleza del trabajo requiera otra
estructura:
A) Página de título: Constará de:
- Título.
- Título abreviado ( A running title)
- Nombre(s) de autor(es) y su centro de trabajo,
subrayando el autor para correspondencia:
REINA D., SERRANO F.J. y NAVARRETE I.
Parasitología. Facultad de Veterinaria. 10071 Cáceres.
España.
- Autor para correspondencia: Nombre, dirección
completa, teléfono, fax y dirección electrónica.
B) Resumen y Abstract (siempre en español e
inglés), no excediendo de 200 palabras; Palabras
Clave y Key words (en número máximo de seis en
cada idioma),
C) Introducción, Material y Métodos, Resultados
- Discusión.
D) Referencias:
Se relacionarán únicamente los artículos citados
en el texto.
Las referencias de las publicaciones deberán ir
numeradas y se hará de la manera siguiente:
1. ALLENDE A, SELMA MV, LÓPEZ-GáLVEZ F,
VILLAESCUSA R, GIL MI. 2008. Impact of wash
water quality on sensory and microbial quality,
including Escherichia coli cross-contamination, of
fresh-cut escarole. J Food Prot 71: 2514-2518.
Cuando varios artículos del mismo o de los
mismos autores hayan sido publicados el mismo año
serán citados como “Brown (1980 a, b). Las referencias
a observaciones no publicadas, resúmenes
o publicaciones en preparación, deberán ser
excepcionales, apareciendo sólo en el texto como
“com. pers.”. La relación bibliográfica deberá ser
ordenada alfabéticamente por autores, incluyendo
el título completo del trabajo y según los modelos
siguientes:
Artículos en revistas:
SERRANO F., PÉREZ-MARTÍN J.E., REINA D.,
NAVARRETE I., KAPEL C.M.O. 2000. Influence

of infection intensity on predilection sites in swine
trichinellosis. J Helminthol 73: 251-254.
Libros y publicaciones no periódicas:
NAVARRETE I., CALERO R., REINA D., SERRA-
NO F. 1989. Programa de Acciones contra la Trichinellosis.
Servicio de Publicaciones Universidad de
Extremadura. Cáceres/Badajoz.
Artículos en libros:
ARROWOOD M.J. 1997. Diagnosis. In: Cryptosporidium
and Cryptosporidiosis (Ronald Fayer,
Ed.). CRC Press. Boca Ratón. USA., 43-64.
Tesis Doctorales:
FRONTERA E. 2000. Repercusiones orgánicas de
la infección experimental por Ascaris suum en el
cerdo ibérico. Tesis Doctoral, Universidad de Extremadura.
España.
Trabajos no publicados: (Se citarán únicamente si
han sido aceptados para su publicación).
SERRANO F.J., REINA D., FRONTERA E.,
NAVARRETE I., ROEPSTORFF A. Resistance
against migrating Ascaris suum larvae in pigs
immunized with adult worm antigens. Parasitology
(en prensa).
Las abreviaturas de los nombres de las revistas
estarán de acuerdo con las indicaciones de los
Journal Citation Reports (JCR); en caso de no estar
incluidas en esa relación, se citará con el nombre
completo.
E) Tablas y Figuras:
Se presentarán en página aparte, perfectamente
numeradas y con referencia, en el reverso, al primer
autor y al título del trabajo. Deberán tener suficiente
calidad para que cuando se reduzcan a los formatos
de una o dos columnas (8 ó 16 cm, respectivamente)
conserven suficiente nitidez. En el manuscrito
deberá aparecer una llamada destacada (ejemplo:
AQUÍ TABLA 2), para la colocación de cada tabla o
figura en su lugar en el texto.
5. El autor, una vez aceptado para su publicación el
trabajo, recibirá una prueba de imprenta para que sea
corregida, y deberá devolverla antes de diez días. En
caso de que el autor introduzca modificaciones sustanciales
en el texto aceptado por el comité editorial,
los gastos correrían a su cargo.
6. El autor podrá recibir separatas de su trabajo, previo
pago de su importe. Así mismo, las reproducciones
de figuras en color, serán por cuenta de los autores.
7. El Comité de Redacción se reserva el derecho
de hacer algunas correcciones de forma cuando lo
estime necesario
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112
NORMAS DE PUBLICACIÓN
8. Los autores deberán pagar la suma de 10 US
por cada página impresa que ocupe el trabajo
en la revista. Esta cantidad se pagará cuando se
comunique a los autores que el trabajo está aceptado
para su publicación.
INSTRUCTION TO AUTHORS
1. Papers should be sent to:
1.1 Edition Secretary, Prof. Dra. Susana Vilchez
Tornero, Instituto de Biotecnología Universidad de
Granada, Campus Universitario de Fuentenueva,
18071 Granada España. E-mail: svt@ugr.es
1.2 Editor Prof. Héctor Alcaíno, Casilla 9183, Santiago
1, Chile. E-mail: hectoralcaino@gmail.com
2. Authors should be submitted the manuscript,
which will be original and accepted by all the
named authors, in an electronic copy. The format is
MS Word (DOC), Openoffice (ODT) or Ritch Text
Format (RTF).
3. Ibero-Latin American Journal of Parasitology
haven’t lower limit on manuscript size, provided
that sufficient essential information is given. Unnecessarily
long papers will be returned to the authors
for revision.
4. STYLE:
- Manuscripts should be in Spanish, Portuguese or
English, typewritten using Times New Roman 12,
with 3 cm left and right margin, including figure
and table headings. All pages should be numbered
consecutively, figures and tables included.
- The italic typeface should be reserved for scientific
names of genera and species, and also for words
typewritten in a different to the mean paper language.
- Species names should be given in full on first
appearance in the text.
- Parasitic disease will be named according to: Kassai
T., Cordero M., Euzeby J., Gaafar S., Hiepe Th.
and Himonas C.A. 1988. Standardized Nomenclature
of Animal Parasitic Diseases (SNOAPAD). Vet
Parasitol 29: 299-326.
- Numbers one to ten should be written as words
unless they precede a measurement unit (e.g. 4 m) or
serve as markers (e.g. day 3). Numbers larger than
ten should only be written as words at the beginning
of a sentence.
- Large numbers should be set out without commas,
uniformly and in both languages (e.g. 10000 not
10,000 or 10.000). On the other hand, decimal
number will appear following the type xx.xx.
Equally, very large numbers should be avoided, e.g.
250 million or 2.5 x 10 8 and not 250 000 000.
- Times should be expressed according to a 24-h
111

NORMAS DE PUBLICACIÓN
clock (e.g. authors should write 18.00 rather than 6
p.m.).
- Years should not be abridged to the last two figures
(e.g. 1999-2000 rather than 1999-00 should be used).
- Abbreviations should be used sparingly and
unambiguously. The following abbreviations are
commonly used and need not be spelled out: ADP,
AMP, ATP, bp, kDa, cpm, D.F., DNA, Fig., g, h
(hour), i.m., i.p., mAb, min, NAD, NADH, no., pH,
p.i., %, RNA, sec, sp., spp., s.c., s.d., s.e., WHO.
- Articles will consist of the following sections,
unless its structure makes any of them redundant:
A) Title-page:
- A concise but informative full title.
- A running title
- Name(s) of author(s) and working Centre. Corresponding
author’s name should be underlined.
REINA D., SERRANO F.J. and NAVARRETE I.
Parasitología. Facultad de Veterinaria. 10071
Cáceres. España.
- Corresponding author: Name, complete address,
phone, fax and e-mail address.
B) Abstract and Resumen.
Always in English and Spanish, no more than 200
words; Key words and Palabras Clave (a maximum
of six key words for each language).
C) Introduction, Material and Methods, Results,
Discussion.
D) References:
The list of references will be composed only by
articles cited in the text.
References should be numbered and will be cited as
follow:
1. ALLENDE A, SELMA MV, LÓPEZ-GáLVEZ F,
VILLAESCUSA R, GIL MI. 2008. Impact of wash
water quality on sensory and microbial quality,
including Escherichia coli cross-contamination, of
fresh-cut escarole. J Food Prot 71: 2514-2518.
When several papers by the same author(s) have
been published in the same year, they should be cited
as “Brown (1980 a, b). References to unpublished
observations, abstracts or papers in preparation
should only be cited in exceptional circumstances,
and should be cited only as “pers. com.” (personal
communication). References must be listed in
alphabetical order of the author’s name and the title
of the paper should be given in full.
Articles should conform to the following formats:
Journal articles:
SERRANO F., PÉREZ-MARTÍN J.E., REINA D.,
NAVARRETE I.,KAPEL C.M.O. 2000. Influence
112
of infection intensity on predilection sites in swine
trichinellosis. J Helminthol 73: 251-254.
Books and other non-periodical publications:
NAVARRETE I., CALERO R., REINA D., SE-
RRANO F. 1989. Programa de Acciones contra la
Trichinellosis. Servicio de Publicaciones Universidad
de Extremadura. Cáceres/ Badajoz.
Chapter in edited books:
ARROWOOD M.J. 1997. Diagnosis. In: Cryptosporidium
and Cryptosporidiosis (Ronald Fayer,
Ed.). CRC Press. Boca Ratón. USA., 43-64.
Doctoral Theses:
FRONTERA E. 2000. Repercusiones orgánicas
de la infección experimental por Ascaris suum en
el cerdo ibérico. Tesis Doctoral, Universidad de
Extremadura.
Unpublished works: (This should only be cited if it
has been accepted for publication and be styled as
follows).
SERRANO F.J., REINA D., FRONTERA E.,
NAVARRETE I., ROEPSTORFF A. Resistance
against migrating Ascaris suum larvae in pigs
immunized with adult worm antigens. Parasitology
(In press).
Abbreviations of Journal titles should conform
to those of the Journal Citation Reports (JCR); if
Journal is not indexed full name of Journal should
be noted.
E) Figure and Table headings:
In a separate page, perfectly numbered and with a
reference in the reverse to both the first author and
the title of the paper. Their approximate intended
location in the text should be marked clearly in the
manuscript (eg. HERE FIG. 2). Figures and tables
may be accepted provided that they are of a high
quality such us to fit neatly into one column (80 mm)
or two columns (166 mm) maintaining its quality.
5. The gallery proofs of each paper will be sent in due
course to the author(s) for correction and should be
returned within ten days of receipt. Expenses incurred
as results of substantial modifications to the original
text at this stage will be charged to the author(s).
6. Authors could be supplied with offprints of their
paper, charging its full value.
7. The Redaction Committee reserves its right to
make some form corrections when necessary.
8. Authors must pay the equivalent sum of 10 USD
per each printed page in the Journal. This amount
must be paid when the paper is accepted.
Rev. Ibero-Latinoam. Parasitol. (2012); 71 (1): 110-112