Download - Repositorio Institucional UANL - Universidad Autónoma ...

LCA Catalina Leos RivasTesis Doctoral5.8 Evaluación de la citotoxicidad de los extractos sobre la línea celularnormal Vero mediante la determinación de la Concentración Inhibitoria Media(CI 50 ).5.8.1 Cultivo CelularLa línea celular normal de riñón de mono verde africano Vero fue obtenida de laAmerican Type Culture Collection (ATCC). Las células fueron cultivadas en medioM199 (Gibco/BRL) adicionado con4 % de suero fetal bovino (FBS, Gibco/BRL) ysolución de antibióticos (penicilina 100,000 U/l y estreptomicina 1 mg/l). Las líneascelulares fueron cultivadas en botellas de 25 cm 2 a 37 ºC con 5 % de CO 2 y atmósferahúmeda.5.8.2 Cinética de Crecimiento de la línea celular VeroLa cinética se realizo durante 6 d colocando una concentración inicial 2,000células/ml con el medio M199. A partir del cultivo confluente de células Vero, se retiróel medio de cultivo y se hicieron dos lavados con buffer de fosfatos (PBS), sedespegaron las células con tripsina al 0.25 % (Trypsin X-100, Cellgro Mediatech Inc,Herdon VA) y se colocaron en un tubo cónico de 15 ml, se centrifugo a 1000 rpm/10min, el sedimento celular se re-suspendió en 2 ml de medio; se contó el número decélulas y se preparó una suspensión de 2,000 cel/ml las cuales fueron colocadas en cajasPetri (Corning, New Jersey, USA) se incubaron las cajas Petri a 37°C con 5 % de CO 2 yatmósfera húmeda. Se realizaron 3 ensayos independientes con 2 repeticiones cada uno,cada 24 h durante 6 d, se despegaron las células con tripsina a dos cajas Petri y se contóel número de células, utilizando un hemocitómetro. Se obtuvo su Tiempo de generación61