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LCA Catalina Leos RivasTesis Doctoral5.6 Evaluación de la toxicidad de los extractos mediante el Ensayo de Letalidadsobre Artemia salina.Los huevecillos de A. salina fueron mantenidos en refrigeración antes de su uso. Parasu eclosión se realizó en un dispositivo de vidrio de 25 x 15 cm con tapa y dividido endos secciones por la mitad, con una sección oscura, se colocaron 0.1 g de huevecillos deA. salina en 300 ml de agua de mar simulada (40 g de sal de mar aforando a 1 l de aguadestilada (Instant Ocean) con aireación continua (bomba de acuario ELITE 799 ) y conluz blanca irradiada de una lámpara de 11W a 20 cm del eclosionador, finalmente secerró con la tapa y se incubaron por 48 h. Una vez eclosionados, a las 24 h los naupuliosfueron pasados a otro recipiente con la ayuda de una micropipeta y se mantuvieron encondiciones de oxigenación y temperatura de 22-29 ºC por 24 h más. A una microplacade 96 pozos se agregó un volumen de 100 µl de la suspensión de naupulios a cada pozo(aprox. 10 naupulios) y se les adicionaron 100 µl de las diluciones de los extractosobtenidos, se partió de una concentración de 1 000 µg/ml. Como control positivo detoxicidad se utilizó una solución de 400 ppm de dicromato de potasio y agua de marcomo control negativo. A las 24 h de aplicados los extractos y con la ayuda de unmicroscopio estereoscópico (Lieder MC-720X), se realizó el conteo de naupulios vivosen las diferentes dosis que se evaluaron. La concentración de las muestras que producela muerte del 50% de los nauplios se toma como la DL 50 (Figura 6). Mediante el análisisProbit se determinó la DL 50 de los extractos probados. (Mc Laughlin, 1991)57