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Se trata de detectar una alteración concreta enla secuencia de nucleótidos del gen en estudio.Solo se puede aplicar cuando se conoce conexactitud la secuencia nucleotídica correcta y laalteración de la misma que se pretende identificar.Técnicamente, el procedimiento consiste enamplificar por PCR (Reacción en Cadena de laPolimerasa) el ADN de cada blastómero y tratarlodespués con enzimas de restricción específicas,cuyos sitios de acción se encuentran en el genque está en estudio. El resultado de la acción deestos enzimas es la fragmentación del ADN génicoy, el tamaño de los fragmentos generados,será lo que permita decidir si el gen presenta o nola anomalía buscada.Como alternativa al análisis de fragmentos,en los últimos años el diagnóstico moleculardirecto se lleva a cabo secuenciando directamenteel gen, o porción del gen, que se suponealterado.b) Diagnóstico molecular indirectoheterocigoto. Esto es especialmente relevante enel caso de las enfermedades monogénicas dominantessi el alelo que no se amplifica es el afecto.El motivo que provoca ADO no está del todoclaro aunque parecer tener relación directa conel hecho de trabajar con cantidades muypequeñas de ADN.El tiempo que duran los estudios genéticosen la pareja (y probablemente en los padres deésta) para identificar una mutación o para comprobarla información de los marcadores elegidospuede durar entre 3 y 6 meses. Esta esperaaumenta mucho la ansiedad de la pareja al tiempoque puede restar opciones de gestación si laedad materna está cercana a los 40 años.Otro escollo que presenta el DGP moleculares el elevado coste para el paciente a lo que,además, hay que sumar el precio de la medicacióny el tratamiento de reproducción asistida.ConclusionesEn ocasiones, aunque se conoce qué genestá en relación con una enfermedad, no estáidentificada la alteración concreta que la provoca.En estos casos la única posibilidad para comprobarsi un embrión ha heredado una genopatíamaterna o paterna es hacerlo de forma indirecta,por análisis de ligamiento. Para ello, se ha delocalizar un grupo de marcadores polimórficos(regiones del ADN sin función aparente quevarían de secuencia nucleotídica entre individuos)que flanquean el gen o, mejor aún, intragénicos,de forma que durante las divisiones meióticasno se vean afectados por el sobrecruzamiento delos cromosomas y segreguen junto con la porcióndel gen que está en estudio. La selección de losmarcadores variará fundamentalmente en funcióndel área geográfica y la raza de lapoblación que se está tratando ya que han depresentar un grado de heterocigosidad suficientepara resultar informativos. Una vez seleccionadoslos marcadores, se establecerá su haplotipo paralos progenitores, de los abuelos por parte del progenitorafecto y de cada embrión. Comparandoel haplotipo de los embriones con los de los familiaresde interés, se podrá deducir cuál de estos haheredado la enfermedad.El estudio molecular indirecto también esde utilidad cuando el gen implicado en lagenopatía es muy grande para poder ser secuenciadocon éxito y las mutaciones o alteracionesposibles de su secuencia nucleotídica sonmuchas. La Hemofilia A es uno de estos casos,como lo es la fibrosis quística, con más de 700mutaciones descritas.Dificultades del DGP molecularTécnicamente, el DGP molecular presentaalgunas dificultades que pueden comprometerla fiabilidad del resultado. La más importante deellas es el fenómeno de ADO (“Allele Drop Out”)en el que uno de los alelos no se amplifica, pudiendointerpretar como homocigoto un embriónLa genética se ha incorporado de maneradefinitiva al campo de la reproducción asistidaampliando las indicaciones de los tratamientosde esterilidad a parejas portadoras de algúnriesgo genético para la descendencia.El DGP, que ya es casi una rutina en lamayoría de centros de esterilidad, ofrece resultadosalentadores y son muchas las parejas que sehan beneficiado de ella. No obstante, en el casode determinadas cromosomopatías y la mayoríade las enfermedades monogénicas, aún ha deser considerada una técnica experimental ytodas las gestaciones que han pasado por unDGP deben someterse a diagnóstico prenatal.El DGP puede llevarse a cabo utilizandotécnicas de citogenética y/o de genética molecular.El diagnóstico citogenético presenta menorcomplejidad y es más inmediato en el tiempo queel molecular que, además, es mucho más costoso.Sin embargo, en el caso de la Hemofilia, lacitogenética no permite identificar los embrionesportadores, lo que, salvo en el caso de padrehemofílico y madre sana, es, cuando menos,aconsejable el diagnóstico genético molecular.ReferenciasFiorentino F, Magli MC, Podini D, et al (2003) The minisequencingmethod: An alternative strategy for preimplantation geneticdiagnosis of single gene disorders. Mol Hum Reprod, 9: 399-410.Lavery S (2004) Preimplantation genetic diagnosis: New reproductiveoptions for carriers of haemophilia. 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