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Tejeda Gómeznocido como ribotyping), el PCR-RFLP y el Rep-PCR.Las cepas analizadas correspondían a raza 1 (biovares1, 2, 3 y 4) y raza 3 (biovar 2). Según el esquema declasificación de Cook et al. (1989), las cepas raza 1 debíanpertenecer a la división Asiaticum y las cepas raza 3a la división Americanum. Como resultado del empleode las técnicas mencionadas anteriormente se logróobtener una clara diferenciación entre las cepas de raza1 y raza 3. Con Southern blotting-RFLP el coeficientede similitud entre raza 1 y 3 fue de 15,4%, y dentro dela raza 1 de 75,5%. Los patrones electroforéticos obtenidosa partir de cepas raza 1 (biovares 1, 2, 3 y 4)fueron similares a los patrones de los biovares 3, 4 y 5de la división Asiaticum. Los patrones de las cepas raza3/biovar 2 fueron similares a los de las cepas biovar 1 dela división Americanum, lo que apoya la hipótesis planteadapor Buddenhagen (1985), quien sugirió que la raza3 se originó en la región andina de Sudamérica, de dondees originaria la papa, su principal hospedante, y quela aparición de raza 3 fuera de esta región es resultadodel comercio internacional. La distribución de las cepasjaponesas raza 1 (biovares 1 y 2) no se correspondecon lo reportado por Cook et al. (1989). Las nueve cepasjaponesas raza 1/biovar 2 resultaron ser homogéneasa la cepa atípica perteneciente a la divisiónAsiaticum reportada por Taghavi et al. (1996). Con respectoa las cepas raza 1/biovar 1, fueron semejantes alas cepas japonesas raza 1/biovar 4, y no a los biovares1 americanos. Estas cepas pueden ser mutantes de raza1/biovar 4 que perdieron la capacidad de degradar lastres hexosas alcoholes.Thammakijjawat et al. (2001) realizaron el análisisPCR-RFLP de cepas tailandesas y otras internacionalestuvieron con Cook et al. (1989) resultados consistentes.Las excepciones fueron dos cepas biovar 1atípicas y tres cepas biovar N2 de Japón, que se agruparondentro de la división Asiaticum. Excepciones deeste tipo fueron reportadas por Horita y Tsuchiya(2001).Aunque actualmente existe una mejor comprensión dela diversidad intraespecífica de la bacteria R.solanacearum,las investigaciones en este campo continúancon la búsqueda de nuevas metodologías de mayor sensibilidad.Lee et al. (2001) reportaron el aislamiento deuna secuencia de inserción –IS1405– a partir de unacepa de raza 1. Este tipo de secuencia constituye uncomponente importante de la mayoría de los genomasbacterianos. Las mutaciones y reordenamientos provocadospor las secuencias de inserción es uno de losmecanismos más importantes en la generación de diversidadgenética [Galas et al., 1989]. En algunos casosla localización de secuencias de inserción específicas ensitios definidos del cromosoma es lo suficientementeestable como para permitir su análisis por RFLP[Mahillon y Chandler, 1998]. La caracterizaciónmolecular de cepas con el uso de secuencias de inserciónpuede reflejar mejor la organización del genomabacteriano que la búsqueda de diferencias en las secuencias[Lee et al., 2001]. En este trabajo la IS1405 seempleó como sonda en un análisis por RFLP, lo quepermitió clasificar cepas de raza 1 de Taiwán.El estudio de la diversidad genética entre las cepas deR. solanacearum no solo permitió conocer más claramentelas relaciones filogenéticas y evolutivas entreellas, sino que proporcionaron nuevas herramientaspara el esclarecimiento de numerosas interrogantescomo la posible correlación entre diversidad genética yla virulencia de las cepas [Darrase et al., 1998].CONCLUSIONES• Los métodos de estudio de la diversidad genética deR. solanacearum se han desarrollado vertiginosamentedesde finales del pasado siglo a partir de los estudiospreliminares realizados en este campo, los quelograron suministrar un sistema de clasificación conel empleo del RFLP que fue de gran utilidad paraestudios posteriores.• El sistema de clasificación se ha corroborado por losresultados de otros investigadores, y se ha enriquecidoen el transcurso de los años con la definición denuevas subdivisiones.• Los métodos moleculares para la caracterizacióngenética han probado ser imprescindibles, reflejadoen su amplia adopción por diversos grupos de investigacióny los resultados promisorios de su empleo.REFERENCIASAbdel-Kader, D.; L. Seigner; M. Zellner: «Epidemiological Field Studieson Bacterial Ring Rot (Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus)and Brown Rot (Ralstonia solanacearum) of Potato», GesundePflanzen 52:240-247, 2000.Barry, T.; G. Colleran; M. Glennon; L. K Dunican; F. Gannon: «The 16S/23S Ribosomal Spacer Region As a Target for DNA Probes to IdentifyEubacteria», PCR Methods and Applications 1:51-56, 1991.Buddenhagen, I. W.: «Bacterial Wilt Revisited», Bacterial Wilt Diseasein Asia and the South Pacific. ACIAR no. 13, Canberra, Australia,1985, pp.126-143.Buddenhagen, I. W.; A. Kelman: «Biological and Physiological Aspectsof Bacterial Wilt Caused by Pseudomonas solanacearum», Annu.Rev. Phytopathol. 2:203-230, 1964.302/fitosanidad
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