Contenido - Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal

Tejeda Gómezmado por estudios del material genético [Cook et al.,1989].La especie R.solanacearum constituye una unidadtaxonómicamente compleja en la que las cepas muestranuna amplia diversidad a diferentes niveles: fisiológico,serológico, genético y de rango de hospedantes. Elgran número de cepas de R. solanacearum existente entodo el mundo dificulta el establecimiento de criteriospara la diferenciación de cepas, aspecto esencial para eltrabajo de los taxónomos y del personal de cuarentena.Con el objetivo de describir esta variabilidad intraespecíficase han propuesto diversos sistemas de clasificación.Se conocen cinco razas de R. solanacearum cuya separaciónestá basada en el rango de los hospedantes y lahabilidad para sobrevivir bajo diferentes condicionesambientales [Buddenhagen et al., 1962; He et al., 1983;Buddenhagen, 1985; Pegg y Moffett, 1971]. La utilizaciónde tres disacáridos y/u oxidación de tres hexosaalcoholes ha permitido la separación de los aislamientosen seis biovares [Hayward, 1964; He et al., 1983;Hayward et al., 1990]. El sistema de clasificación enrazas y biovares es confuso, pues cada biovar contienecepas con diferentes rangos de hospedantes, y variasrazas contienen una amplia diversidad de cepas pertenecientesa diferentes biovares. Solo existe correspondenciaentre la raza 3 y el biovar 2. El análisis de ácidosgrasos [Janse, 1991] y del perfil de proteínas [Dianeseet al., 1994] no ha logrado esclarecer las relaciones entrelas cepas ni el establecimiento de un criterio de clasificaciónuniforme. Esto hace que los métodos tradicionalesde clasificación no sean lo suficientementeefectivos [Poussier et al., 1999; Sequeira, 1994].Estas dificultades condujeron a la búsqueda de un nuevosistema de clasificación basado en el análisis del materialgenético. Muchas de las técnicas moleculares empleadasen la actualidad tienen como fundamento comúnla separación de fragmentos de ADN de diferentes pesosmoleculares. El resultado electroforético se representapor un patrón de bandas en un gel. Estos patrones suelenser muy complejos y de difícil interpretación.Entre las técnicas utilizadas para el estudio de R. solanacearumse encuentran el polimorfismo de longitud defragmentos de restricción (Restriction Fragment LengthPolymorphism (RFLP)) en sus dos variantes: Southernblotting-RFLP y PCR-RFLP, el ADN polimórficoaleatoriamente amplificado (Random AmplifiedPolymorphic DNA or Arbitrary Primed PCR, RAPD),el Rep-PCR, el polimorfismo de longitud de fragmentosamplificados (Amplified Fragment LengthPolymorphism (AFLP)) y la secuenciación de regionesespecíficas del genoma. El empleo de cada una de ellasha contribuido a una caracterización y diferenciaciónmás acertadas de las cepas. El análisis a nivel genéticode las cepas ofrece la posibilidad de estudiar las relacionesfilogenéticas y evolutivas entre ellas.Contribución de los estudios de diversidad genéticaa la diferenciación intraespecífica de las cepasde Ralstonia solanacearumLos primeros trabajos que constituyeron un hito en elestudio de la diversidad genética del patógeno fueronreportados por Cook et al. (1989) y Cook y Sequeira(1994). Estos investigadores utilizaron el Southernblotting-RFLP con nueve sondas, lo que les permitiódetectar y localizar secuencias específicas en el ADN,las cuales contenían información esencial para la virulenciay la respuesta de hipersensibilidad. Estas secuenciasse sometieron a digestión con enzimas de restricciónespecíficas. La ubicación de los sitios de corte parauna enzima de restricción determinada dentro de unlocus de interés puede variar de una cepa a otra, y traercomo resultado fragmentos que difieren en tamaño encepas diferentes [Olive y Bean, 1999]. El análisis de lospatrones electroforéticos obtenidos por este procedimientoposibilitó establecer la existencia de dos gruposo divisiones con un coeficiente de similitud de 13,5%:la división I, que incluyó los biovares 3, 4 y 5, y la divisiónII, formada por las cepas de biovares 1, 2 y N2.Dentro de cada división los coeficientes de similitudresultaron ser muy elevados, y fueron mayores dentrode la división I. Más del 90% de las cepas de ladivisión I procedían de Asia y Australia (divisiónAsiaticum), mientras que 98% de las cepas de la divisiónII eran originarias de las Américas (divisiónAmericanum).Estas divisiones se han confirmado por análisis de lasecuencia del gen que codifica para el ARN ribosomal16 S [Li et al., 1993; Seal et al., 1993; Taghavi et al.,1996]. El análisis de esta secuencia permitió estudiarlas relaciones filogenéticas y evolutivas entre losmicroorganismos, dado su elevado contenido informacional,su naturaleza conservativa, su distribuciónuniversal y la accesibilidad de las secuencias en bancosde genes [Woese, 1987]. Las secuencias de los genes quecodifican para el ARNr 16S son por lo general específicaspara cada especie y están presentes en múltiples300/fitosanidad