Reinoso y otroslos. Las enfermeda<strong>de</strong>s bacterianas <strong>de</strong> la papa provocangeneralmente pudriciones húmedas y pue<strong>de</strong>n ser originadaspor microorganismos pertenecientes a variados géneros[MINAGRI, 2000]. En Cuba la pudrición blanda, causadapor Pectobacterium carotovorum, Dickeya chrysanthemiy Pectobacterium atrosepticum, es una <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>sbacterianas que se presenta con mayor inci<strong>de</strong>ncia enel campo, y las pérdidas durante el almacenamiento <strong>de</strong>los tubérculos son consi<strong>de</strong>rables [Galán, 2004].El control <strong>de</strong> estos patógenos se dificulta mucho <strong>de</strong>bidoa que la enfermedad se pue<strong>de</strong> presentar en diferentesetapas <strong>de</strong>l <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la planta. Estas bacteriasa<strong>de</strong>más pue<strong>de</strong>n sobrevivir en el suelo, el agua <strong>de</strong> riegoy la maquinaria agrícola. Por el momento el control <strong>de</strong>la calidad fitosanitaria <strong>de</strong> los tubérculos-semilla y laaplicación <strong>de</strong> productos químicos son medidas que contribuyena disminuir los daños [Galán, 2004].Actualmente se aboga por el uso <strong>de</strong> prácticas agrícolasecológicas como el control biológico mediante el uso <strong>de</strong>microorganismos antagonistas, los cuales pue<strong>de</strong>n limitarla iniciación y propagación <strong>de</strong> las enfermeda<strong>de</strong>scausadas por patógenos vegetales mediante mecanismos<strong>de</strong> competencia, antibiosis, inducción <strong>de</strong> resistencia,entre otros [Fernán<strong>de</strong>z-Larrea, 2001].Varias especies <strong>de</strong> los géneros Bacillus, Paenibacillus yBrevibacillus producen sustancias antimicrobianas, <strong>de</strong>las cuales se han <strong>de</strong>scrito más <strong>de</strong> <strong>de</strong> setenta antibióticos<strong>de</strong> bajo peso molecular y naturaleza polipeptídica, entrelas cuales B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus,B. circulans, B. cereus, Brevibacillus laterosporus yPaenibacillus polymyxa son los mayores productores.Los metabolitos secundarios producidos por algunas<strong>de</strong> estas especies inhiben el crecimiento <strong>de</strong> bacterias yhongos, por lo que se ha sugerido su uso como un métodosuplementario para la protección <strong>de</strong> las plantas contramicroorganismos fitopatógenos [Föl<strong>de</strong>s et al., 2000].El objetivo <strong>de</strong> este trabajo fue <strong>de</strong>terminar el efecto protector<strong>de</strong> diferentes cepas <strong>de</strong>l género Bacillus sobre el<strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la pudrición blanda <strong>de</strong> la papa.MATERIALES Y MÉTODOSSe utilizaron como material biológico 23 cepas <strong>de</strong>l géneroBacillus conservadas en agar nutriente (Biocen) yaisladas <strong>de</strong> suelos proce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> regiones paperas <strong>de</strong>diferentes municipios <strong>de</strong> la provincia <strong>de</strong> La Habana(Tabla 1). Estas cepas se seleccionaron en consi<strong>de</strong>racióna su actividad antagónica in vitro frente a cepas <strong>de</strong>Pectobacterium carotovorum, Dickeya chrysanthemi yPectobacterium atrosepticum (datos no publicados). Seempleó a<strong>de</strong>más la cepa P. carotovorum 2046 conservadaen medio GYCA (glucosa, extracto <strong>de</strong> levadura, carbonato<strong>de</strong> calcio, agar).Tabla 1. Proce<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> las cepas <strong>de</strong>l género Bacillus utilizadasCepas Proce<strong>de</strong>ncia Cepas Proce<strong>de</strong>nciaG1 Municipio <strong>de</strong> Güines G29 Municipio <strong>de</strong> GüinesG2 Municipio <strong>de</strong> Güines G30 Municipio <strong>de</strong> GüinesG10 Municipio <strong>de</strong> Güines Q6 Municipio <strong>de</strong> QuivicánG11 Municipio <strong>de</strong> Güines Q7 Municipio <strong>de</strong> QuivicánG12 Municipio <strong>de</strong> Güines Q12 Municipio <strong>de</strong> QuivicánG14 Municipio <strong>de</strong> Güines Q13 Municipio <strong>de</strong> QuivicánG15 Municipio <strong>de</strong> Güines Q18 Municipio <strong>de</strong> QuivicánG17 Municipio <strong>de</strong> Güines S1 Municipio <strong>de</strong> San JoséG18 Municipio <strong>de</strong> Güines B1 Municipio <strong>de</strong> GüinesG29 Municipio <strong>de</strong> Güines B2 Municipio <strong>de</strong> GüinesG23 Municipio <strong>de</strong> Güines B4 Municipio <strong>de</strong> GüinesG25 Municipio <strong>de</strong> GüinesPara el crecimiento <strong>de</strong> las especies <strong>de</strong>l género Bacillus seutilizaron frascos erlenmeyers <strong>de</strong> 1 L <strong>de</strong> capacidad con100 mL <strong>de</strong> medio caldo nutriente (Biocen). Los frascos seinocularon con una suspensión bacteriana correspondientea un valor <strong>de</strong> 0,5 en la escala <strong>de</strong> Mac Farland (1 x 10 8 ufc/mL)preparada a partir <strong>de</strong> cultivos <strong>de</strong> 24 h <strong>de</strong> crecimiento enagar nutriente. Los cultivos se colocaron en zaranda orbitaltermostatada durante 24 h a 30 o C y 120 rpm.290/fitosanidad
Estudio <strong>de</strong>l efecto protector...El inóculo <strong>de</strong> P. carotovorum se obtuvo a partir <strong>de</strong> cultivos<strong>de</strong> 24 h <strong>de</strong> la bacteria fitopatógena en medio GYCA.Con agua <strong>de</strong>stilada estéril se prepararon suspensionesajustadas a un valor <strong>de</strong> <strong>de</strong>nsidad óptica <strong>de</strong> 0,05 y 0,1respectivamente, a una longitud <strong>de</strong> onda <strong>de</strong> 580 nm.Tubérculos-semilla certificados <strong>de</strong> la variedad Spuntaproce<strong>de</strong>ntes <strong>de</strong> Holanda se <strong>de</strong>sinfectaron superficialmentecon alcohol 70%, luego se sumergieron enhipoclorito <strong>de</strong> sodio a 3% durante 3 min, se lavaroncon abundante agua <strong>de</strong>stilada estéril y se colocaron enun flujo laminar durante 1 h. Rodajas <strong>de</strong> papa <strong>de</strong> 1 cm<strong>de</strong> grosor se sumergieron durante 1 min en los cultivos<strong>de</strong> Bacillus spp. Las rodajas tratadas se colocaron en elflujo laminar durante 30 min para eliminar la humedadsuperficial. Posteriormente se inocularon con 10 µL<strong>de</strong> las suspensiones preparadas <strong>de</strong> la cepa Pectobacteriumcarotovorum 2046. Cada rodaja se inoculó en tres puntosdiferentes, y se emplearon como controles rodajassin tratar inoculadas con la bacteria fitopatógena ypreviamente sumergidas en agua <strong>de</strong>stilada estéril yrodajas tratadas con cultivos <strong>de</strong> Bacillus spp. sin inocular.Se utilizaron seis rodajas por tratamiento y secolocaron en placas Petri con papel <strong>de</strong> filtro hume<strong>de</strong>cidocon agua <strong>de</strong>stilada estéril y se incubaron a 30 o C durante24 h. Transcurrido este tiempo se <strong>de</strong>terminó laefectividad <strong>de</strong> los tratamientos mediante inspecciónvisual y observación <strong>de</strong> la aparición o no <strong>de</strong> síntomascaracterísticos <strong>de</strong> la enfermedad.RESULTADOS Y DISCUSIÓNEl control biológico <strong>de</strong> P. carotovorum mediante especies<strong>de</strong> microorganismos antagonistas se ha estudiadopor varios grupos <strong>de</strong> investigación <strong>de</strong>bido al amplio rangohospe<strong>de</strong>ro y a la gran importancia económica queposeen los cultivos que esta bacteria pue<strong>de</strong> afectar. Sehan utilizado como alternativas el empleo <strong>de</strong> Erwiniaherbicola [Vanneste et al., 1995], Pseudomonas fluorescens[Ab<strong>de</strong>l-Alim et al., 2001] y Tricho<strong>de</strong>rma hamatum[Blom, 2001]; sin embargo, los resultados máspromisorios han sido in vitro e in vivo, con especies <strong>de</strong>lgénero Bacillus productores <strong>de</strong> sustancias con actividadantibacteriana [Bernal et al., 2002] [Sharga y Lyon,1998] [Ab<strong>de</strong>l-Alim et al., 2001].En el estudio realizado el tratamiento <strong>de</strong> las rodajas <strong>de</strong>papa con las cepas B1, G10, Q7 y Q18 previno totalmenteel <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la pudrición blanda en todas lasvariantes <strong>de</strong>l experimento (Fig. 1).Figura 1. Efecto protector <strong>de</strong> la cepa G10 en rodajas <strong>de</strong> papa inoculadas con la mayorconcentración <strong>de</strong> la cepa P. carotovorum 2046. A la <strong>de</strong>recha se muestran los controles <strong>de</strong>P. carotovorum 2046 y G10.En experimentos realizados por otros autores se hanproducido resultados similares. Tal es el caso <strong>de</strong> Shargay Lyon (1998), quienes emplearon una cepa <strong>de</strong> Bacillussubtilis productora <strong>de</strong> antibióticos para tratar rodajas<strong>de</strong> papa y raíces <strong>de</strong> la planta, con el objetivo <strong>de</strong> inhibirel <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> la pudrición blanda ocasionada por P. carotovorumy P. atrosepticum. Estos autores solamenteemplearon en los tratamientos suspensiones <strong>de</strong> la cepafitosanidad/291
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