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Reinoso y otroslos. Las enfermedades bacterianas de la papa provocangeneralmente pudriciones húmedas y pueden ser originadaspor microorganismos pertenecientes a variados géneros[MINAGRI, 2000]. En Cuba la pudrición blanda, causadapor Pectobacterium carotovorum, Dickeya chrysanthemiy Pectobacterium atrosepticum, es una de las enfermedadesbacterianas que se presenta con mayor incidencia enel campo, y las pérdidas durante el almacenamiento delos tubérculos son considerables [Galán, 2004].El control de estos patógenos se dificulta mucho debidoa que la enfermedad se puede presentar en diferentesetapas del desarrollo de la planta. Estas bacteriasademás pueden sobrevivir en el suelo, el agua de riegoy la maquinaria agrícola. Por el momento el control dela calidad fitosanitaria de los tubérculos-semilla y laaplicación de productos químicos son medidas que contribuyena disminuir los daños [Galán, 2004].Actualmente se aboga por el uso de prácticas agrícolasecológicas como el control biológico mediante el uso demicroorganismos antagonistas, los cuales pueden limitarla iniciación y propagación de las enfermedadescausadas por patógenos vegetales mediante mecanismosde competencia, antibiosis, inducción de resistencia,entre otros [Fernández-Larrea, 2001].Varias especies de los géneros Bacillus, Paenibacillus yBrevibacillus producen sustancias antimicrobianas, delas cuales se han descrito más de de setenta antibióticosde bajo peso molecular y naturaleza polipeptídica, entrelas cuales B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus,B. circulans, B. cereus, Brevibacillus laterosporus yPaenibacillus polymyxa son los mayores productores.Los metabolitos secundarios producidos por algunasde estas especies inhiben el crecimiento de bacterias yhongos, por lo que se ha sugerido su uso como un métodosuplementario para la protección de las plantas contramicroorganismos fitopatógenos [Földes et al., 2000].El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto protectorde diferentes cepas del género Bacillus sobre eldesarrollo de la pudrición blanda de la papa.MATERIALES Y MÉTODOSSe utilizaron como material biológico 23 cepas del géneroBacillus conservadas en agar nutriente (Biocen) yaisladas de suelos procedentes de regiones paperas dediferentes municipios de la provincia de La Habana(Tabla 1). Estas cepas se seleccionaron en consideracióna su actividad antagónica in vitro frente a cepas dePectobacterium carotovorum, Dickeya chrysanthemi yPectobacterium atrosepticum (datos no publicados). Seempleó además la cepa P. carotovorum 2046 conservadaen medio GYCA (glucosa, extracto de levadura, carbonatode calcio, agar).Tabla 1. Procedencia de las cepas del género Bacillus utilizadasCepas Procedencia Cepas ProcedenciaG1 Municipio de Güines G29 Municipio de GüinesG2 Municipio de Güines G30 Municipio de GüinesG10 Municipio de Güines Q6 Municipio de QuivicánG11 Municipio de Güines Q7 Municipio de QuivicánG12 Municipio de Güines Q12 Municipio de QuivicánG14 Municipio de Güines Q13 Municipio de QuivicánG15 Municipio de Güines Q18 Municipio de QuivicánG17 Municipio de Güines S1 Municipio de San JoséG18 Municipio de Güines B1 Municipio de GüinesG29 Municipio de Güines B2 Municipio de GüinesG23 Municipio de Güines B4 Municipio de GüinesG25 Municipio de GüinesPara el crecimiento de las especies del género Bacillus seutilizaron frascos erlenmeyers de 1 L de capacidad con100 mL de medio caldo nutriente (Biocen). Los frascos seinocularon con una suspensión bacteriana correspondientea un valor de 0,5 en la escala de Mac Farland (1 x 10 8 ufc/mL)preparada a partir de cultivos de 24 h de crecimiento enagar nutriente. Los cultivos se colocaron en zaranda orbitaltermostatada durante 24 h a 30 o C y 120 rpm.290/fitosanidad
Estudio del efecto protector...El inóculo de P. carotovorum se obtuvo a partir de cultivosde 24 h de la bacteria fitopatógena en medio GYCA.Con agua destilada estéril se prepararon suspensionesajustadas a un valor de densidad óptica de 0,05 y 0,1respectivamente, a una longitud de onda de 580 nm.Tubérculos-semilla certificados de la variedad Spuntaprocedentes de Holanda se desinfectaron superficialmentecon alcohol 70%, luego se sumergieron enhipoclorito de sodio a 3% durante 3 min, se lavaroncon abundante agua destilada estéril y se colocaron enun flujo laminar durante 1 h. Rodajas de papa de 1 cmde grosor se sumergieron durante 1 min en los cultivosde Bacillus spp. Las rodajas tratadas se colocaron en elflujo laminar durante 30 min para eliminar la humedadsuperficial. Posteriormente se inocularon con 10 µLde las suspensiones preparadas de la cepa Pectobacteriumcarotovorum 2046. Cada rodaja se inoculó en tres puntosdiferentes, y se emplearon como controles rodajassin tratar inoculadas con la bacteria fitopatógena ypreviamente sumergidas en agua destilada estéril yrodajas tratadas con cultivos de Bacillus spp. sin inocular.Se utilizaron seis rodajas por tratamiento y secolocaron en placas Petri con papel de filtro humedecidocon agua destilada estéril y se incubaron a 30 o C durante24 h. Transcurrido este tiempo se determinó laefectividad de los tratamientos mediante inspecciónvisual y observación de la aparición o no de síntomascaracterísticos de la enfermedad.RESULTADOS Y DISCUSIÓNEl control biológico de P. carotovorum mediante especiesde microorganismos antagonistas se ha estudiadopor varios grupos de investigación debido al amplio rangohospedero y a la gran importancia económica queposeen los cultivos que esta bacteria puede afectar. Sehan utilizado como alternativas el empleo de Erwiniaherbicola [Vanneste et al., 1995], Pseudomonas fluorescens[Abdel-Alim et al., 2001] y Trichoderma hamatum[Blom, 2001]; sin embargo, los resultados máspromisorios han sido in vitro e in vivo, con especies delgénero Bacillus productores de sustancias con actividadantibacteriana [Bernal et al., 2002] [Sharga y Lyon,1998] [Abdel-Alim et al., 2001].En el estudio realizado el tratamiento de las rodajas depapa con las cepas B1, G10, Q7 y Q18 previno totalmenteel desarrollo de la pudrición blanda en todas lasvariantes del experimento (Fig. 1).Figura 1. Efecto protector de la cepa G10 en rodajas de papa inoculadas con la mayorconcentración de la cepa P. carotovorum 2046. A la derecha se muestran los controles deP. carotovorum 2046 y G10.En experimentos realizados por otros autores se hanproducido resultados similares. Tal es el caso de Shargay Lyon (1998), quienes emplearon una cepa de Bacillussubtilis productora de antibióticos para tratar rodajasde papa y raíces de la planta, con el objetivo de inhibirel desarrollo de la pudrición blanda ocasionada por P. carotovorumy P. atrosepticum. Estos autores solamenteemplearon en los tratamientos suspensiones de la cepafitosanidad/291
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