Contenido - Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal

Aislamiento, identificación y caracterización...aislar Beavuveria y Metarhizium. Estos mismos autoresusaron 15 g de suelo aproximadamente por cadaindividuo de Galleria y pusieron en contacto con el sueloal insecto trampeador hasta 18 días; sin embargo, eneste trabajo se obtuvo una sola muestra de suelo útilpor trampeo con Galleria, lo que representó 7% de éxito.Este comportamiento puede deberse a que la cantidadde suelo por individuo fue de 6-10 g, y el tiempo encontacto con este solo fue de nueve días, además de quela cantidad de propágulos del hongo de interés presenteen el suelo es muy variable y depende de condicionesespecíficas de cada ecosistema (Tabla 1 y Fig. 1).Un método más efectivo para obtener nuevos aisladosde hongos es el aislamiento de colonias fúngicas únicas(ufc) a partir de muestras de suelo por dilucionesseriadas, según procedimiento detallado por Lecuona(1996). No obstante, es ampliamente aceptado que estemétodo es muy caro y se prefiere usar en el aislamientoy selección de especies bacterianas, como por ejemploBacillus thuringiensis [Johnson y Bishop, 1996], de ahíque se decidiera no emplearlo para enriquecer el númerode aislados de la Colección de Hongos Entomopatógenosdel INISAV.El porcentaje de éxito obtenido en este trabajo paralas muestras de insectos sospechosos de micosis o conuna evidente fue de 42%. Jackson et al. (2000) planteanque aunque este método de aislamiento directoconlleva mucho tiempo de muestreo en campo y experiencia,la realidad es que entre los más exitosos agentesde control con microorganismos se encuentranaquellos aislados obtenidos directamente de los insectoshospederos, y no de las colecciones de cultivos o demétodos indirectos a través de medios de cultivo selectivos.La frecuencia alta de aparición de Beauveria bassianase debió al amplio rango de hospedantes de este patógeno,además de que la mayoría de los aislamientos sehicieron a partir de Hypothenemus hampei (broca delcafé), y se conoce que esta especie fúngica regularmentese ha encontrado que atacan las poblaciones del insectode forma natural en los cafetales. De hecho, esesta la razón de que sea uno de los entomopatógenosmás estudiados para el control de esta plaga [Bustilloet al., 1999].Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. así como Metarhiziumanisopliae (Metsch.) Sorok. y Metarhizium flavovirideGams and Rozsypal están entre los hongos entomopatógenosmás usualmente encontrados en la naturaleza.Por ello, colecciones de cultivo internacionalmentereconocidas cuentan con varios cientos de aislados deestas tres especies como la Colección de HongosEntomopatógenos para Investigaciones Agrícolas delDepartamento de Agricultura de Estados Unidos(ARCEF), la ATCC (American Type Culture Collection)y la Colección del IMI (International MycologicalInstitute) en el Reino Unido [Humber, 1992; Batemanet al., 1996]. En Cuba más del 85% de la Colección deHongos Entomopatógenos del INISAV está representadapor aislados de Beauveria y Metarhizium.En relación con el aislamiento de Paecilomyces lilacinusobtenido de Hypothenemus hampei se sabe que estehongo se encuentra comúnmente en las crías de brocaen laboratorio, donde es posible que las condiciones dehacinamiento, la alta humedad relativa y la falta dedesinfección de las cerezas favorezcan la invasión de estaespecie para atacar a la broca, si bien en la planta decafé en el campo no se ha encontrado [Posada et al.,1998]. También es cierto que P. lilacinus está catalogadocomo hongo entomopatógeno oportunista y se hausado exitosamente en el control de nematodosfitopatógenos [López, 1995]. Por esta razón se decidióincorporarlo a la Colección de Hongos Entomopatógenosdel INISAV para futuras investigaciones.Los productos exitosos a base de hongos desarrolladosen el mercado han surgido a partir de un monitoreo deaislados obtenidos de las regiones geográficas yagroecosistemas, donde está el organismo plaga porcontrolar, así como de las colecciones de cultivos.Bateman et al. (1996) reportaron la selección de unasola cepa de M. anisopliae, después de haber ensayado159 aislados de Beauveria y Metarhizium contraSchistocerca gregaria (langosta del desierto). Esto confirmala necesidad de contar con abundante cantidadde aislados de los más diversos orígenes cuando se precisaobtener agentes microbianos efectivos comobiocontroladores de plagas [Bateman et al., 1996;Jenkins y Grzywacz, 2003].Como se puede apreciar, de acuerdo con las característicasmacro y microculturales, para los aislados deBeauveria existió una alta similitud, por lo que unaseparación entre estos por los métodos tradicionalesmorfométricos no es factible (Tabla 1). Para lograr ladistinción entre aislados hay que recurrir a métodos debiología molecular como RFLP y PCR-RAPDS [Bridgeet al., 1993; Bridge y Arora, 1998; Bielikova et al.,2002]. Estos métodos moleculares también se usan comouna forma altamente reproducible de reconocer cadafitosanidad/271