0123 CITOMEGALOVIRUS IgG EIA WELL REF K3CG ... - Radim S.p.A.

7.3 Dispensar 100 µL de Diluyente de las Muestras diluido en el pocillo del blanco.
7.4 Incubar durante 60±5 minutos a 37±2°C cubriendo la microplaca con la hoja adhesiva
suministrada con el kit.
7.5 Lavar los pocillos 4 veces con 350 µL (por pocillo) de solución de lavado diluida.
Aspirar completamente el líquido de todos los pocillos.
7.6 Dispensar 100 µL de Conjugado Enzimático en todos los pocillos.
7.7 Incubar durante 30±2 minutos a 37±2°C cubriendo la microplaca con la hoja
adhesiva suministrada con el kit.
7.8 Lavar los pocillos como en el punto 7.5.
7.9 Dispensar 100 µL de Cromogeno en todos los pocillos.
7.10 Incubar durante 10 minutos a 37±2°C o 15 minutos a temperatura ambiente (18-
25°C) al resguardo de la luz.
7.11 Dispensar 100 µL de Reactivo de Parada en todos los pocillos.
7.12 Leer la densidad óptica a 450 nm, preferiblemente en un espectrofotómetro
bicromático con longitud de onda de referencia de 620 nm (haciendo el cero del
instrumento con el blanco). En el caso de lectura fuera del rango (overflow), leer a 405
nm. Leer en los primeros 15 minutos después de terminar el ensayo.
*En caso de que se utilice en el procedimiento un sistema automático RADIM y/o SEAC para
microplacas, ver el manual correspondiente.
8. ESQUEMA DEL ENSAYO: Ver pág.12.
9. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS *
9.1 Ensayo cualitativo
Considerar la densidad óptica de cada control negativo y calibrador Cut-off (10 UR/mL: Valor
umbral). Comparando la densidad óptica de las muestras con la densidad óptica del
calibrador Cut-off se determina la reactividad o no reactividad ante los anticuerpos IgG anti-
CMV.
Las muestras con valores de densidad óptica inferiores al valor del calibrador 10 UR/mL
(calibrador Cut-off) deben considerarse no reactivas para los anticuerpos IgG anti-CMV. Las
muestras con valores de densidad óptica superiores al valor del calibrador Cut-off deben
considerarse reactivas para los anticuerpos IgG anti-CMV. Las muestras con valores de
densidad óptica comprendidos en el intervalo de ± 10% del calibrador Cut-off, deben
considerarse de interpretación dudosas y deben volverse a ensayar.
9.2 Ensayo cuantitativo
El control negativo debe considerase como el primer punto de la curva de calibración con un
valor de 0 UR/ml de IgG anti-CMV y por lo tanto hace parte de la misma curva. Dibuje la
curva estándar en un papel milimetrado, poniendo en el eje de las abscisas las
concentraciones de los calibradores y en el de las ordenadas la absorbancia obtenida para
cada calibrador. Interpolando sobre la curva de calibración las absorbancias relativas a cada
muestra se obtienen las correspondientes concentraciones de IgG anti-CMV en UR/mL.
- Muestras con valores de IgG inferiores a 10 UR/mL deben considerarse no reactivas ante
los anticuerpos IgG anti-CMV.
- Muestras con valores de IgG comprendidos entre 1 UR/mL y 30 UR/ml deben
considerarse débilmente reactivas.
- Muestras con valores de IgG superiores a 30 UR/mL deben considerarse reactivas ante
los anticuerpos IgG anti-CMV.
K3CG/K3CGB –CITOMEGALOVIRUS IgG EIA WELL
M44.es – Rev.13 – 07/2008 – Pag. 7/12