IgE TOTALI IEMA WELL REF - Radim S.p.A.
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<strong>IgE</strong> <strong>TOTALI</strong><br />
<strong>REF</strong> KP21IW<br />
<strong>IEMA</strong> <strong>WELL</strong><br />
96<br />
Español<br />
M145.es – Rev. 9 – 06/2006
REACTIVOS DEL KIT<br />
Reactivos Cantidad<br />
MTP<br />
CAL<br />
CONJ<br />
DIL CONJ<br />
CTR<br />
WASH<br />
TMB<br />
SUBS<br />
STOP<br />
1 x 96 Listo para usar<br />
1 x 2 mL<br />
6 x 1 mL<br />
Liofilizados<br />
1 x 2.7 mL Concentrado<br />
2 x 12 mL Listo para usar<br />
1 x 1 mL Liofilizado<br />
1 x 50 mL Concentrado<br />
1 x 15 mL<br />
Listo para usar<br />
1 x 15 mL Listo para usar<br />
1 x 14 mL Listo para usar<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
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ENSAYO INMUNOENZIMOMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA<br />
DE LAS <strong>IgE</strong> TOTALES EN SUERO HUMANO.<br />
PARA USO DIAGNÓSTICO “IN VITRO”<br />
1. APLICACIONES CLÍNICAS<br />
Las inmunoglobulinas E (<strong>IgE</strong>) aisladas por primera vez (1968) por Bennich y Johansson<br />
en Uppsala, constituyen la quinta clase de las Inmunoglobulinas. La forma monómera<br />
de las <strong>IgE</strong> está formada por dos cadenas livianas (K, lambda) unidas por puentes de<br />
sulfuro y dos cadenas pesadas (ε) capaces de fijar el complemento. Las <strong>IgE</strong> tienen<br />
peso molecular comprendido entre 188.000 y 196.000, contienen el 12% de<br />
carbohidratos y tienen una constante de sedimentación de 7,925 S.<br />
La actividad reactiva de las <strong>IgE</strong> se debe a la notable afinidad que las cadenas E, tienen<br />
con receptores específicos presentes en la membrana de los mastocitos y de los<br />
polinucleares basófilos. La liberación de mediadores farmacológicos (ejemplo:<br />
Histamina) está determinada por la interacción de las <strong>IgE</strong>, ligadas a los receptores de<br />
membranas, con alérgenos inhalados o absorbidos.<br />
En los sujetos atópicos (alta concentración de <strong>IgE</strong>) los receptores están saturados al<br />
100%. En sujetos no atópicos (bajas concentraciones de <strong>IgE</strong>), la saturación alcanza un<br />
máximo de un 20%. En los sujetos normales la concentración de <strong>IgE</strong> es<br />
extremadamente baja. Sujetos con patologías alérgicas (asma, alergia al polen,<br />
eczemas) presentan elevadas concentraciones de <strong>IgE</strong>. Tal concentración es correlativa<br />
al grado de inmunoestimulación. Cuantos más son los alérgenos a los cuales el<br />
paciente es alérgico y expuesto y cuanto más graves son los síntomas, tanto más<br />
elevado es el nivel de <strong>IgE</strong>. La concentración de las <strong>IgE</strong> puede estar sujeta a variaciones<br />
circadianas además de presentar una notable variación entre un individuo y otro.<br />
Los niveles de <strong>IgE</strong> tienden a aumentar desde el nacimiento hasta los 60-65 años,<br />
después de lo cual pueden sufrir un decrecimiento.<br />
No siempre bajos niveles de <strong>IgE</strong> excluyen una etiología de tipo alérgico. Raras veces,<br />
en efecto, alergias monovalentes (sensibilidad a un solo alérgeno) se caracterizan por<br />
tener bajos niveles de <strong>IgE</strong>. En estos casos el diagnóstico se puede hacer sólo con<br />
ensayos muy sensibles para las <strong>IgE</strong> específicas.<br />
2. PRINCIPIO DEL MÉTODO<br />
El presente kit se basa en el método inmunoenzimométrico (<strong>IEMA</strong>). Se utilizan dos<br />
anticuerpos distintos anti-<strong>IgE</strong>, uno absorbido en los pocillos y el otro conjugado con<br />
peroxidasa de rábano (HRPO). Durante la incubación, las <strong>IgE</strong> presentes en los<br />
calibradores y en las muestras se une al mismo tiempo con ambos anticuerpos,<br />
formando un "sándwich". Al final de la incubación el material que no se haya unido se<br />
elimina mediante aspiración y lavado. La actividad enzimática que quede fijada a la fase<br />
sólida será directamente proporcional a la concentración de <strong>IgE</strong> en los calibradores y en<br />
las muestras, y se manifiesta añadiendo a los pocillos una solución de cromógeno<br />
(tetrametilbencidina, TMB) y un tampón substrato. La intensidad del color desarrollado<br />
se mide mediante un espectrofotómetro a 450 y a 405 nm.<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
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3. REACTIVOS SUMINISTRADOS CON EL KIT: PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD<br />
− Los reactivos son suficientes para 96 pocillos.<br />
− Il kit debe conservarse a 2-8°C.<br />
− La fecha de caducidad de cada reactivo está indicata en su etiqueta.<br />
− Una vez abierto el kit es estable durante 2 meses a 2-8°C.<br />
3.1 Reactivos Específicos<br />
MTP Microplaca Sensibilizada: 1 microplaca con 96 pocillos divisibles<br />
singularmente, sensibilizados con anticuerpo monoclonal anti-<strong>IgE</strong><br />
(ratón). Los pocillos no utilizados deben conservarse a 2-8°C en la<br />
bolsa de plástico transparente suministrada, cerrada cuidadosamente.<br />
CAL Calibradores: 7 viales de <strong>IgE</strong> en matriz sérica, fiofilizados, con las<br />
siguientes concentraciones: 0, 1, 5, 25, 100, 300 e 1000 IU/mL.<br />
Conservante: tiomersal (
TMB Crómogeno: 1 vial (15 mL) de tetrametilbencidina con tampón citratofosfato<br />
y DMSO. Listo para usar.<br />
SUBS Tampón sustrato: 1 vial (15 mL) de tampón citrato-fosfato y H2O2.<br />
Listo para usar.<br />
Nota: Para obtener la solución sustrato, mezclar en partes iguales el<br />
Cromógeno con el Tampón Sustrato utilizando un vial de vidrio<br />
oscuro bien limpio; conservar la solución obtenida al resguardo de la<br />
luz. Dispensar la solución dentro de 1 ora desde el momento de la<br />
preparación.<br />
STOP Reactivo de Parada: 1 vial (14 mL) de H2SO4 1N. Listo para usarse.<br />
CPA Cubreplaca adhesivo.<br />
Bolsa de plástico transparente con cierre minigrip.<br />
4. MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO<br />
4.1 Ensayo manual<br />
− Micropipetas automáticas con puntas desechables de volumen variable.<br />
− Cilindros graduados para la dilución de los reactivos.<br />
− Agitador para microplacas, regulable a 1200 rpm<br />
− Bomba de aspiración o instrumento automático de lavado de microplaca.<br />
− Espectrofotómetro de precisión para microplacas, capaz de medir la absorbancia en<br />
el intervalo 0-3.0 A con una longitud de onda de 450 y 405 nm.<br />
− Papel milimetrado.<br />
− H2O destilada.<br />
− Diluyente de las muestras<br />
4.2 Ensayo automático<br />
− El kit puede utilizarse con instrumentación automática para kits ELISA en<br />
microplaca.<br />
− Se garantiza la aplicabilidad en instrumentación RADIM y/o SEAC.<br />
− En el caso se utilice instrumentación automática de otros fabricantes, es<br />
responsabilidad del usuario asegurarse de que el kit haya sido oportunamente<br />
validado.<br />
5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES<br />
Para conseguir resultados correctos y reproducibles, deberán observarse las<br />
siguientes normas:<br />
− No mezclar los reactivos específicos (vea 3.1) de lotes diferentes.<br />
− Es posible utilizar reactivos comunes (vea 3.2) de lotes diferentes.<br />
− No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad.<br />
− No exponer los reactivos y las muestras al calor intenso ni a fuentes importantes de<br />
contaminación.<br />
− Utilizar material de vidrio perfectamente limpio y libre de contaminación por iones<br />
metálicos o sustancias oxidantes.<br />
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− Utilizar agua destilada o desionizada, conservada en recipientes perfectamente<br />
limpios.<br />
− Evitar cuidadosamente la contaminación entre muestras; para ello es aconsejable<br />
utilizar pipetas con puntas desechables para cada muestra y reactivo.<br />
− No modificar el “Procedimiento Operativo” de ejecución del ensayo. Eventuales<br />
alteraciones de:<br />
• secuencia y cantidades al añadir los reactivos<br />
• tiempos y temperatura de incubación<br />
pueden dar lugar a resultados clínicos erróneos.<br />
− Reconstituir los reactivos liofilizados según la modalidad descrita en la etiqueta; la<br />
utilización de reactivos o volúmenes no adecuados puede provocar la obtención de<br />
datos clínicos incorrectos.<br />
− En el caso de procedimiento manual es importante utilizar pipetas calibradas y tener<br />
una adecuada manualidad técnica. En particular es importante la precisión en la<br />
preparación y dispensación de los reactivos. Es necesario un adecuado<br />
mantenimiento (limpieza y calibración) de tales instrumentos.<br />
− Asegurarse de que la bomba de aspiración o el sistema automático para el lavado<br />
de las microplacas funcione correctamente. El lavado inadecuado de las microplacas<br />
puede causar la clasificación incorrecta de las muestras. Es necesario un<br />
mantenimiento adecuado de tales sistemas.<br />
− Asegurarse de que el espectrofotómetro funcione perfectamente. El uso de un<br />
espectrofotómetro no calibrado o con filtros no limpios puede causar una lectura<br />
errónea de las muestras, con consiguiente error en su clasificación. Es necesario un<br />
adecuado mantenimiento (limpieza y calibración) de tales instrumentos.<br />
− Asegurarse de que el incubador (si es necesario) funcione perfectamente. La<br />
incubación a temperaturas distintas a los 37±2º puede causar una pérdida de<br />
sensibilidad y/o desnaturación biológica de los materiales (muestras y/o reactivos).<br />
Es necesario un adecuado mantenimiento de tales instrumentos y un control<br />
periódico de la temperatura registrada.<br />
− Asegurarse de que el agitador de microplacas (si es necesario) funcione<br />
perfectamente. La agitación incorrecta puede causar la clasificación errónea de las<br />
muestras. Es necesario un adecuado mantenimiento de tales instrumentos.<br />
− Asegurarse de que los sistemas utilizados para la conservación de las muestras y/o<br />
el dispositivo funcione perfectamente. La conservación a temperaturas diferentes de<br />
la indicada puede causar la desnaturación biológica de los materiales (muestras y/o<br />
reactivos). Es necesario un adecuado mantenimiento de tales sistemas y un control<br />
periódico de la temperatura registrada.<br />
− Utilizar un método adecuado para la correcta identificación de las muestras de los<br />
pacientes. Una identificación incorrecta puede provocar pérdida de la especificidad<br />
del sistema y resultados clínicos erróneos.<br />
Para evitar contaminaciones personales y ambientales, deberán observarse las<br />
siguientes normas de seguridad:<br />
− Utilizar guantes desechables durante la manipulación del material potencialmente<br />
infeccioso y durante el ensayo.<br />
− No pipetear los reactivos con la boca.<br />
− No fumar, comer, beber o aplicar cosméticos durante la ejecución del ensayo.<br />
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− Las soluciones de Cromógeno y el Reactivo de Parada deben manipularse con<br />
cuidado. Evitar el contacto con la piel, los ojos y las mucosas. En caso de contaco<br />
lavar con abundante agua.<br />
− Todo el materiale de origen humano utilizado en la preparación del presente kit se<br />
ha sometido a análisis, resultando repetidamente negativos a la presencia de<br />
HBsAg, anti-HIV y anti-HCV. De todos modos ningún test actualmente disponible<br />
garantiza la ausencia de los agentes virales responsables del síndrome de<br />
inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y de la Hepatitis B y C. Por eso todos los<br />
reactivos contenentes material biológico y todas las muestras deben considerarse<br />
potencialmente infecciosos.<br />
− Evitar salpicaduras y formación de aerosoles; en caso de que se presenten, limpiar<br />
cuidadosamente con hipoclorito sódico a una concentración final de 3%. Todo el<br />
material utilizado para la limpieza debe tratarse como residuo potencialmente<br />
infeccioso y desecharse según las oportunas modalidades.<br />
− La azida sódica, contenida como conservante en algunos reactivos, puede<br />
reaccionar con el plomo y el cobre de los desagües formando azidas metálicas<br />
altamente explosivas. Para evitar la formación y la acumulación de dichos<br />
compuestos deje correr abundantemente el agua al eliminar los reactivos.<br />
− Conforme al Decreto Italiano D.L. no. 22, del 05.02.97 y conforme a las directivas de<br />
la CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE), todos los desechos originados por<br />
procesos manuales y/o automáticos se clasifican como material de deshecho<br />
peligroso, código de Clasificación CER 180103: como tales, deben eliminarse<br />
delegando su recolección y desecho a empresas especiales autorizadas para ello.<br />
6. RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS<br />
El ensayo puede realizarse en muestras de sueros. Las muestras altamente lipémicas o<br />
hemolizadas deberán descartarse. Las muestras pueden conservarse a 2-8°C durante<br />
1 semana; para períodos más largos conservar las muestras a -20°C. Se aconseja no<br />
congelar y descongelar repetidamente las muestras.<br />
Las muestras con presuntas concentraciones de <strong>IgE</strong> superiores a 1000 IU/mL deben<br />
diluirse con el Calibrador Cero (Procedimiento A).<br />
En el Procedimiento C diluir las muestras 1:5 con el Diluyente de las Muestras código<br />
KP21IWDC suministrado a petición (es. 10 μl de muestra + 40 μl de Diluyente).<br />
7. PROCEDIMIENTO OPERATIVO *<br />
− Esperar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente.<br />
− Agitar las muestras por inversión antes del uso.<br />
Nota: Con el presente kit pueden utilizarse 3 distintos procedimientos de ensayo que se<br />
diferencian entre ellos por la sensibilidad, tiempo de incubación, Calibradores utilizados<br />
y dilución de las muestras.<br />
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Procedimiento A (menos sensible): Calibrador: 0, 5, 25, 100, 300 e 1000 IU/mL<br />
Incubación 30 minutos.<br />
Muestras no diluidas<br />
Procedimiento B (más sensible): Calibrador: 0, 1, 5, 25, 100 e 300 IU/mL<br />
Incubación 60 minutos.<br />
Muestras no diluidas<br />
Procedimiento C Calibrador: 0, 5, 25, 100, 300 e 1000 IU/mL<br />
Incubación 30 minutos.<br />
Muestras diluidas 1:5<br />
7.1 Preparar los pocillos para: Blanco, Calibradores, Suero de Control y Muestras.<br />
7.2 Dispensar 10 µL de cada Calibrador, del Suero de Control y de las muestras no<br />
diluidas (Procedimiento A y Procedimiento B) o diluidas 1:5 (Procedimiento C)<br />
en los respectivos pocillos.<br />
7.3 Dispensar 200 µL de Conjugado Enzimático en todos los pocillos excepto el<br />
correspondiente al Blanco.<br />
7.4 Cubir la microplaca con la hoja adhesiva y agitar delicamente.<br />
7.5 Incubar durante 30±2 minutos (Procedimiento A y Procedimiento C), o 60±5<br />
minutos (Procedimiento B) a temperatura ambiente (18-25°C) en agitación<br />
obital (1200 r.p.m.).<br />
7.6 Retirar la hoja adhesiva y aspirar cuidadosamente la mezcla de incubación de<br />
todos los pocillos.<br />
7.7 Lavar los pocillos 4 veces con 350 µL (por pocillo) de Solución de Lavado diluida.<br />
Aspirar completamente el líquido de todos los pocillos.<br />
7.8 Dispensar 200 µL de Solución Sustrato-Cromógeno en todos los pocillos (ver<br />
parágrafo reactivos).<br />
7.9 Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente (18-25°C) en agitación<br />
orbital (1200 rpm) al resguardo de la luz.<br />
7.10 Dispensar 100 µL de Reactivo de Parada en todos los pocillos.<br />
7.11 Leer la densidad óptica a 450 nm, preferiblemente en un espectrofotómetro<br />
bicromático con longitud de onda de referencia de 620 nm (haciendo el cero del<br />
instrumento con el blanco). En el caso de lectura fuera del rango (overflow), leer a<br />
405 nm. Leer en los primeros 20 minutos después de terminar el ensayo.<br />
*En caso de que se utilice en el procedimiento un sistema automático RADIM y/o SEAC<br />
para microplacas, ver el manual correspondiente.<br />
8. ESQUEMA DEL ENSAYO: ver p. 14<br />
9. CÁLCULO DE RESULTADOS<br />
Para obtener una mejor sensibilidad, este método utiliza una lectura<br />
espectrofotométrica a dos longitudes de onda (450 y 405 nm). Para las muestras con<br />
concentraciones de <strong>IgE</strong> comprendidas entre 0 y 100 IU/mL, se debe utilizar la lectura a<br />
450 nm; para muestras con niveles de <strong>IgE</strong> superiores 100 IU/mL, leer a 405 nm.<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
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Trazar la curva de calibración sobre papel milimetrado, registrando sobre el eje de las<br />
abscisas las concentraciones de los calibradores y en el eje de las ordenadas, la<br />
absorbancia obtenida para cada uno de los calibradores. Al interpolar sobre la curva de<br />
calibración las absorbancias relativas a cada muestra, se obtienen las concentraciones<br />
correspondientes de <strong>IgE</strong> expresadas en IU/mL, en caso de muestras diluidas multiplicar<br />
por el factor de dilución.<br />
Si para el procedimiento se utiliza un instrumento automático para microplacas RADIM<br />
y/o SEAC, la lectura espectrofotométrica se realiza automáticamente a 3 diferentes<br />
longitudes de onda: 450, 405 y 620 nm, permitiendo así la ampliación del rango de<br />
lectura.<br />
9.1 Ejemplo de cálculo<br />
Los valores que se indican a continuación son simplemente ilustrativos y no deben<br />
emplearse en lugar de los datos obtenidos.<br />
Procedimiento A:<br />
Descripción Absorbancia <strong>IgE</strong> Absorbancia <strong>IgE</strong><br />
450 nm<br />
405 nm<br />
Calibrador 0 IU/mL 0.018 0.006<br />
Calibrador 5 IU/mL 0.147 0.051<br />
Calibrador 25 IU/mL 0.520 0.179<br />
Calibrador 100 IU/mL 1.667 0.574<br />
Calibrador 300 IU/mL >3.000 1.117<br />
Calibrador 1000 IU/mL >3.000 1.623<br />
Muestra 1 0.865 46 IU/mL 0.298<br />
Muestra 2 >3.000 1.252 490 IU/mL<br />
Procedimiento B:<br />
Descripción Absorbancia <strong>IgE</strong> Absorbancia <strong>IgE</strong><br />
450 nm<br />
405 nm<br />
Calibrador 0 IU/mL 0.020 0.007<br />
Calibrador 1 IU/mL 0.070 0.024<br />
Calibrador 5 IU/mL 0.269 0.093<br />
Calibrador 25 IU/mL 1.084 0.373<br />
Calibrador 100 IU/mL 2.800 0.990<br />
Calibrador 300 IU/mL >3.000 1.670<br />
Muestra 1 0.313 6.5 IU/mL 0.108<br />
Muestra 2 >3.000 1.206 165 IU/mL<br />
Procedimiento C:<br />
Para obtener el ejempo de cálculo relativo al señal analítico de la curva de calibración,<br />
referirse a lo descrito en el procedimiento A. Las muestras deben multiplicarse por el<br />
Factor de dilución: 5<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
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9.2 Valores Normales<br />
Los valores indicados a continuación son sólo indicativos. Se recomienda que cada<br />
laboratorio establezca su propio rango de referencia.<br />
− Menor de 20 IU/mL: génesis alérgica no probable<br />
− Entre 20 y 100 IU/mL: génesis alérgica dudosa<br />
− Mayor de 100 IU/mL: génesis alérgica<br />
9.3 Criterios de aceptación<br />
Antes de proceder al cálculo de los resultados, verifique que la concentración del suero<br />
de control esté dentro del rango de aceptación descrito en la hoja de Control de calidad.<br />
10. CARACTERÍSTICAS METODOLÓGICAS<br />
10.1 Especificidad<br />
El presente método analítico no ha evidenciado ninguna reacción cruzada con las<br />
siguientes clases de Inmunoglobulias humanas: IgA, IgM, IgG e IgD.<br />
10.2 Sensibilidad<br />
La sensibilidad ha sido calculada sobre la curva de calibración y expresada como la<br />
mínima dosis distinguible significativamente de la respuesta respecto al calibrador cero<br />
(valor medio + 3 D. E.). Tal dosis es de 1 IU/mL para el procedimiento A y C y para el<br />
procedimiento B es de 0.4 IU/mL.<br />
10.3 Precisión<br />
La precisión ha sido evaluada midiendo la variabilidad intra-ensayo e inter-ensayo<br />
utilizando 3 sueros con diferentes concentraciones de <strong>IgE</strong>.<br />
Repetibilidad (Intra-ensayo)<br />
Procedimiento A Procedimiento B<br />
Suero Media ± D.E. C.V. Media ± D.E. C.V. Replicados<br />
(IU/mL) % (IU/mL) % n.<br />
a 24.2 ± 0.95 3.9 25.8 ± 0.52 2.0 10<br />
b 43.7 ± 1.83 4.2 51.1 ± 0.96 1.9 10<br />
c 77.2 ± 2.93 3.8 87.0 ± 1.94 2.2 10<br />
Reproducibilidad (Inter-ensayo)<br />
Procedimiento A Procedimiento B<br />
Suero Media ± D.E. C.V. Media ± D.E. C.V. Ensayos<br />
(IU/mL) % (IU/mL) % n.<br />
a 21.9 ± 2.96 13.5 25.4 ± 2.33 9.2 10<br />
b 42.9 ± 3.71 8.6 49.0 ± 2.65 5.4 10<br />
c 80.4 ± 6.36 7.9 83.4 ± 2.65 3.2 10<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
M145.es – Rev. 9 – 06/2006 – Pag. 10/14
10.4 Exactitud<br />
La exactitud del método ha sido evaluada mediante el test de recuperación y el test de<br />
paralelismo. Los datos indicados a continuación se obtuvieron mediante el<br />
Procedimiento A.<br />
Test de Recuperación<br />
Cantidades de <strong>IgE</strong> conocidas se añadieron a un pool de sueros normales y fueron<br />
ensayadas.<br />
Añadido Previsto Medido Recuperación<br />
(IU/mL) (IU/mL) (IU/mL) %<br />
P ---- 7.0 ----<br />
P + 200 207.0 206.5 99.7<br />
P + 100 107.0 104.2 97.4<br />
P + 50 57.0 53.0 93.0<br />
P + 25 32.0 30.4 95.0<br />
P + 12.5 19.5 19.1 97.9<br />
P + 6.25 13.2 13.0 98.5<br />
Test de Paralelismo<br />
Un suero con elevado contenido de <strong>IgE</strong> se ha ensayado a varias diluciones efectuadas<br />
con el Calibrador Cero.<br />
Dilución Previsto Medido<br />
(IU/mL) (IU/mL)<br />
S no diluido ---- 120.0<br />
1:2 60.0 61.1<br />
1:4 30.0 31.3<br />
1:8 15.0 15.6<br />
1:16 7.5 8.5<br />
1:32 3.7 3.5<br />
1:64 1.9 1.7<br />
10.5 Efecto Gancho<br />
En cualquier muestra con un contenido de antígeno muy elevado que sea valorada no<br />
diluida por un método “sándwich” de incubación unica como el utilizado en el presente<br />
kit, pueden obtenerse por el “Efecto Gancho” valores aparentes de concentración<br />
inferiores al real. El presente kit no da lugar al “Efecto Gancho” hasta valores de<br />
concentración de 10.000 IU/mL en ambos procedimientos.<br />
11. LÍMITES DEL ENSAYO<br />
Los resultados del ensayo deben interpretarse con cautela y convalidarse mediante<br />
evaluaciones clínicas y ulteriores pruebas diagnósticas.<br />
12. LEYENDA SÍIMBOLOS: ver p. 12<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
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SÍMBOLOS<br />
EN 980 – EDMA<br />
<strong>REF</strong> Código de referencia o número de pedido<br />
LOT Lote<br />
Fecha de caducidad<br />
IVD Para uso diagnóstico in vitro<br />
96<br />
Marcado CE según directiva de IVD 98/79 CE<br />
Conservar a 2-8°C<br />
Producido por<br />
Riesgo biológico<br />
Consultar las instrucciones de uso<br />
Suficiente para 96 determinaciones<br />
RDATE Fecha de referencia<br />
RCNS Reconstituir con<br />
H2O Agua destilada o desionizada<br />
KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
M145.es – Rev. 9 – 06/2006 – Pag. 12/14
BIBLIOGRAFÍA<br />
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KP21IW – <strong>IgE</strong> Totali Iema Well<br />
M145.es – Rev. 9 – 06/2006 – Pag. 13/14
ESQUEMA DEL ENSAYO<br />
Reag.<br />
Pocillos<br />
Blanco<br />
CAL CTR Muestras<br />
CAL ---- 10 µL ---- ----<br />
CTR ---- ---- 10 µL ----<br />
Procedimiento A y B muestra sin diluir<br />
Procedimiento C Predilución de la muestra: 1:5<br />
Muestras ---- ---- ---- 10 µL<br />
CONJ ---- 200 µL 200 µL 200 µL<br />
− Incubar:<br />
− Aspirar y lavar: 4 x 350 µL.<br />
Proc. A: T.A. 30±2 min. (1200 rpm)<br />
Proc. B: T.A. 60±5 min. (1200 rpm)<br />
Proc. C: T.A. 30±2 min. (1200 rpm)<br />
TMB -SUBS 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL<br />
− Incubar: T.A. 15' (1200 rpm)<br />
STOP 100 µL 100 µL 100 µL 100 µL<br />
− Leer: 450-405 nm.<br />
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