1 - Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal

Contenido
Diagnóstico fitosanitario
Etiología de la mancha foliar del chile dulce (Capsicum annuum L.) y su control in vitro en Yucatán, México
José María Tun Suárez, Marcia Elvis Castillo Peraza, Jairo Cristóbal Alejo y Luis Latournerie Moreno
Fitonematodos asociados a las Arecáceas en las antiguas provincias habaneras
Mei Li Hung, Hortensia Gandarilla Basterrechea y Lamberto Reyes Laffita
Incidencia y caracterización molecular del Potato Leafroll Virus (PLRV) en las principales regiones productoras
de papa de Colombia
José F. Gil Ramírez, José M. Cotes Torres y Mauricio Marín Montoya
5
11
17
Ecología
Composición y riqueza de insectos y arañas asociados a plantas florecidas en sistemas agrícolas urbanos
Yaril Matienzo Brito, Marlene M. Veitía Rubio y Giraldo Alayón García
25
Control químico
Efecto in vitro de siete fungicidas químicos sobre Beauveria bassiana (Bals.) Vuil.
Leónides Castellanos González, Berta Lina Muiño García, María E. Lorenzo Nicao, Ana Rodríguez Fernández
y Medardo Gómez Albernal
31
Control biológico
Identificación y caracterización de seis aislados pertenecientes al género Bacillus promisorios para el control de
Rhizoctonia solani Künh y Sclerotium rolfsii Sacc.
Acenet I. Sosa López, Victoria Pazos Álvarez-Rivera, Dania Torres Campos y Luis Casadesús Romero
Evaluación del método de conservación en papel de filtro en dos cepas de Bacillus subtilis Cohn mediante la
actividad antagónica frente a Rhizoctonia solani Kühn
Acenet I. Sosa López, Victoria Pazos Álvarez-Rivera, Giovanni Borges Marín, Marleny González García y Enrique
Ponce Grijuela
Susceptibilidad de Chrysopa exterior Navás a Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin cepa LBB-1 en condiciones
de laboratorio
Orisel Estévez Leyva, Elina Massó Villalón, Rafael Abreu Ávila y Dilaila Baró Bulet
39
45
51
Comunicación corta
Un nuevo hospedante de la guagua de pústula (Asterolecanium pustulans Cockerell) en Tagetes lucida Cav.
(anisillo)
María Magdalena Rivera Amita e Isabel Echeverría Sosa
Phytophthora nicotianae Brenda de Haan en la especie ornamental helecho mano de mono (Microsorium
scolopendrium (Burm.) Copel)
Daymara I. Vaillant Flores y María Ofelia López Mesa
59
61

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 5-9
Diagnóstico fitosanitario
ETIOLOGÍA DE LA MANCHA FOLIAR DEL CHILE DULCE
(CAPSICUM ANNUUM L.) Y SU CONTROL IN VITRO
EN YUCATÁN, MÉXICO
José María Tun Suárez, Marcia Elvis Castillo Peraza, Jairo Cristóbal Alejo y Luis Latournerie Moreno
División de Estudios de Posgrado e Investigación, Instituto Tecnológico de Conkal. Km 16.3, antigua
carretera Mérida-Motul, Conkal, Yucatán, México, C.P. 97345, tun@colpos.mx
RESUMEN
En hojas de chile dulce con síntomas de mancha foliar se aisló e
identificó al hongo Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei, el cual,
a los tres días de inoculado en hojas de chile dulce (Capsicum annuum
L.), chile habanero (C. chinense Jacq.) y chile xcat´ik (C. annuum
L.) contenidas en cámaras húmedas, indujo manchas cafés
rodeadas por un halo amarillo que con el tiempo aumentaron de
tamaño; pero en las hojas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.)
se manifestaron al quinto día, en relación con las hojas control sin
inocular que no presentaron síntomas. En ensayos de sensibilidad
los fungicidas que indujeron los mayores porcentajes de inhibición
del crecimiento micelial in vitro de C. cassiicola fueron mancozeb,
oxicloruro de cobre y benomilo a una dosis de 0,1 mg • L –1 y complejo
multibacterial a 100 mg • L –1 con porcentajes superiores al 76%.
Palabras claves: tizón, chile dulce, Corynespora, sensibilidad, fungicidas
ABSTRACT
The fungus Corynespora cassiicola (Berk &Curt) was isolated and
identified in bell pepper leaves with symptoms of brown leaf spot, it
was used three days later to inoculate bell pepper, hot habanero
pepper (Capsicum chinense Jacq.) and local xcat’ik pepper (Capsicum
annuum L.) contained in moist atmosphere; brown spots surrounded
by a yellow ring, which grew in size in time, was induced then, however
in tomato leaves (Lycopersicon esculentum Mill.) these spots appeared
until day five, in relation to the control leaves without inoculation which
did not show signs of spotting. In sensibility assays fungicides that
most inhibited in vitro the presence of C. cassiicola micelliums were
mancozeb, cuper oxicloride, and benomile at a ratio of 0.1 mg • L –1
and a multibacterial complex at 100 mg • L –1 with percentages higher
than 76%.
Key words: wilt, bell pepper, Corynespora, sensibility, fungicides
INTRODUCCIÓN
En la península de Yucatán, México, el chile dulce criollo
(Capsicum annuum L.) es uno de los tres cultivares
de mayor importancia por su uso como condimento en la
elaboración de platillos regionales y salsas [Pech, 2006].
La superficie sembrada de tipo chiles verdes es de 419,1 ha
y cosechada de 419,1 ha, con un volumen de 1603,5 t
para el estado de Yucatán [INEGI, 2007]; sin embargo,
la producción se ve limitada por la presencia de enfermedades
foliares y de frutos por Cercospora capsici,
Alternaria solani y Corynespora cassiicola, entre otros,
lo cual genera disminución en la producción de
fotoasimilados importantes en la formación y desarrollo
del fruto. Además, inducen la abscisión, lo que deja
expuestos los frutos a la luz solar que les provocan quemaduras
y reducen su calidad y rendimiento con pérdidas
que oscilan entre 10 y 100% [Zaletas, 2003].
Entre los inductores de manchas foliares se encuentra
C. cassiicola (Hyphomycetes: Dematiceae). Este hongo
presenta conidióforos erectos, simples u ocasionalmente
ramificados, solitarios o en grupos rectos o ligeramente
flexuosos, pálidos a café y lisos, septados,
conidios solitarios o en cadenas de dos a seis muy variables
en forma de clavados a cilíndricos, rectos o
curvados, subhialinos o café y lisos [Mendoza, 1999].
Puede atacar diversos cultivos de importancia agrícola
como tomate (Lycopersicon esculentum Mill.), pepino
Recibido: 29/11/10
Aceptado: 13/1/11
fitosanidad/5

Tun y otros
(Cucumis sativus L.), calabaza (Curcubita pepo L.),
papaya (Carica papaya L.), chícharo (Vigna unguiculata L.),
soya (Glycines max L.), jamaica (Hibiscus safdariffa L.),
okra (Abelmoschus esculentus L.), cereza de Barbados
(Malpighia glabra L.), salvia roja (Salvia splendens
Sellow ex J. A. Shultes), chile (Capsicum annuum L.),
entre otros [Cutrim y Silva, 2003; Kurt, 2005; Furukawa
et al., 2008].
En hojas, tallos y frutos de chile, C. cassiicola induce
manchas café oscuras de 1 a 2 mm de diámetro, que
incrementan de tamaño y coalescen hasta formar grandes
lesiones irregulares rodeadas por un halo amarillo
[Shimomoto et al., 2008].
El control químico de C. cassiicola con mancozeb,
captafol y chlorothalonil resulta efectivo en pepino
(Cucumis sativus L.) [Mendoza, 1999]. La aplicación
individual o en mezcla de mancozeb y benomilo inhibe
el crecimiento de micelial in vitro, y el control de la enfermedad
en campo es eficaz también en C. sativus
[Ferrer, 2005]. Asimismo, estos productos inhiben la
colonización del hongo en semilla en Sesamum indicum L.
[Navas y Subero, 1995] y en Physalis ixocarpa Brot. Se
recomiendan para el control preventivo de Podosphaera
(Sphaerotheca) xanthii y Cercospora sp. en condiciones
de campo [Félix et al., 2007].
La presente investigación se realizó con el propósito de
identificar el agente causal de la mancha foliar en chile
dulce en Yucatán (C. annuum L.) y evaluar la efectividad
in vitro de fungicidas órgano-sintéticos (sistémicos
y de contacto) y orgánicos para su control.
MATERIALES Y MÉTODOS
Diez muestras de hojas de chile dulce (Capsicum
annuum L.) cv. criolla con síntomas de necrosis foliar
se colectaron en cada uno de los dos campos de cultivo
de los municipios de Muxupip y Conkal, Yucatán, y
trasladaron al Laboratorio de Fitopatología del Instituto
Tecnológico de Conkal, donde se cortaron en fragmentos
de 1 cm 2 que incluyeron parte enferma y aparentemente
sana, se desinfectaron con hipoclorito de
sodio al 2% durante 1 min y se enjuagaron dos veces
con agua destilada estéril para eliminar residuos de cloro.
Posteriormente se llevaron a la campana de flujo laminar,
donde las muestras se colocaron sobre papel absorbente
previamente esterilizado para eliminar excesos
de agua. Una vez secas las muestras se sembraron
en medio de cultivo papa-dextrosa-agar (PDA) contenidas
en placas Petri de 10 cm de diámetro y se incubaron
a temperatura ambiente. Cuando se detectó crecimiento
de micelio se reaisló en medio PDA y se obtuvieron
doce aislamientos de cultivos puros, los cuales
se utilizaron para su identificación y pruebas de sensibilidad
in vitro de acuerdo con la metodología de French
y Hebert (1982). La identificación del hongo se realizó
con base a claves dicotómicas de Barnett y Hunter
(1999).
La patogenicidad se evaluó en hojas de chile dulce (C. annuum
L.), chile xcat´ic (C. annuum), chile habanero
(C. chinense) y plantas de tomate (L. esculentum) desinfectadas
superficialmente con hipoclorito de sodio al
2% durante 1 min, sobre las cuales se realizaron heridas
y depositaron micelio del hongo, y se dejaron hojas
testigo sin inocular. Las hojas inoculadas se introdujeron
a cámaras húmedas elaboradas con placas Petri de
10 cm de diámetro provistas de papel absorbente humedecido
con agua destilada esterilizada y se incubaron
a temperatura ambiente.
Los ensayos de sensibilidad in vitro se realizaron también
en medio (PDA), al cual se adicionaron los
fungicidas de contacto de acuerdo con las dosis mínimas
de ingrediente activo recomendadas por la casa
comercial; oxicloruro de cobre 0,2 mg • L –1 , captan
0,2 mg • L –1 , mancozeb 0,15 mg • L –1 y sulfato tribásico
de cobre 0,2 mg • L –1 , más un testigo sin fungicida. Para
el caso de los fungicidas sistémicos se emplearon
clorhidrato de propamocarb 2,5 mL • L –1 , triforine
1 mL • L –1 , axozystrobin 0,02 mg • L –1 y benomilo a
0,1 mg • L –1 de ingrediente activo de producto comercial,
más un testigo sin fungicida. Los ensayos se realizaron
bajo un diseño experimental completamente al
azar con cinco repeticiones.
Paralelamente, y de manera complementaria, se evaluaron
las concentraciones de ingrediente activo de
mancozeb a 0,1; 0,15; 0,2; 0,25 mg • L –1 , oxicloruro de
cobre a 0,1, 0.2; 0,3; 0,4 mg • L –1 , benomilo 0,025; 0,05;
0,1; 0,15 mg • L –1 , axozystrobin 0,02; 0,03; 0,04;
0,05 mg • L –1 y los fungicidas biológicos en dosis de
producto comercial (complejo multifactorial) a base de
Bacillus spp., Trichoderma spp., lixiviados de humus
de lombriz, Rhizobium, Azotobacter, Quitosan, saponinas
naturales, extractos de Yucca shidigera, extracto de
algas marinas, ácidos fúlvicos y húmicos a 1; 1,5; 2; 2,5
y 5 mL • L –1 y n-Alkyl (C14, 60%, C16, 30%, C12,5%,
C18,5%), Dimethyl Benzyl, ingredientes inertes) a 1;
1,5; 2; 2,5 y 5 mL • L –1 , más un testigo sin fungicida. Se
6/fitosanidad

Etiología de la mancha foliar del chile dulce...
usó un análisis factorial AxB, donde el factor A correspondió
al fungicida o producto y el B a las concentraciones
respectivas.
Para inocular los medios de cultivo adicionados con
fungicidas y los productos orgánicos; se depositó en
la parte central de la placa Petri un disco de 1 cm de
diámetro de la cepa pura del hongo, se sellaron con
parafilm e incubaron a la temperatura ambiente del
laboratorio.
La efectividad de los fungicidas sobre la inhibición del
crecimiento micelial del hongo se evaluó con la medición
en centímetros del diámetro de crecimiento radial
del hongo cada 24 h, hasta que los testigos (sin fungicida)
llenaron las placas Petri. Posteriormente se les hizo un
análisis estadístico, previa transformación de los datos
a porcentaje de inhibición del crecimiento micelial
mediante arcoseno√x, de forma similar a lo realizado
por Herrera (2004).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La colonia del hongo que se aisló consistentemente de
las lesiones en chile dulce (C. annuum) cv. criolla presentó
un aspecto liso y algodonoso de color verde oscuro
a negro. Micelio septado con conidióforos cilíndricos cortos
y conidios terminales individuales o en cadenas cortas
con formación acropetala, color café, multicelulares de
tres a cinco con exospora gruesa incolora y una prominente
cicatriz oscura, características que coincidieron con
Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei [Barnett y
Hunter, 1999; Kwon et al., 2001; Kwon et al., 2005; Cutrim
y Silva, 2003; Shimomoto et al., 2008].
Los hospedantes inoculados chile dulce (C. annuum L.),
chile xcat´ic (C. annuum), chile habanero (C. chinense)
y tomate (L. esculentum) mostraron susceptibilidad
a los asilamientos de C. cassiicola obtenidos en la
presente investigación. En todos los casos aparecieron
los síntomas característicos de la enfermedad a
partir del tercer día, con manchas café, rodeadas con
un halo amarillo, que con el tiempo aumentaron de
tamaño y adquirieron una apariencia irregular. Este
síntoma es común en diferentes cultivares de C. annuum
y otras especies como L. esculentum, C. sativus,
Perilla frutescens, Codiaeum variegatum (L.) A. Juss.
var. bravo y Momordica charantia, inoculadas con una
suspensión conidial de entre 10 4 a 2 x 10 5 conidios • mL –1 o
en Glycine max y Salvia splendens con micelio, más
esporas de C. cassiicola e incubadas bajo condiciones
de alta humedad relativa y temperaturas de 20 a 30°C
por un tiempo de 24 h a siete días. Se conoce que para
C. cassicola la expresión de los síntomas varía de dos
a siete días en dependencia del hospedante, período
de incubación, concentración conidial y tipo de
inóculo [Cabrera et al., 2006; Jayasuriya y Thennakoon,
2007; Furukawa et al., 2008; Shimomoto et
al., 2008].
El fungicida de contacto mancozeb mostró mayor eficacia,
ya que inhibió el crecimiento micelial in vitro de
C. cassiicola en un 82% y resultó estadísticamente diferente
(p = 0,01). Entre las diferentes concentraciones de
ingrediente activo (0,1; 0,15; 0,2; 0,25 mg • L –1 ) de mancozeb
y oxicloruro de cobre (0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg • L –1 ) no manifestaron
diferencias estadísticas significativas en su efectividad
inhibitoria que osciló entre un 86 y 88%, y un 72
y 76%, respectivamente (Fig. 1).
Figura 1. Efecto de fungicidas órgano-sintéticos de contacto sobre el porcentaje de
inhibición en el crecimiento micelial de Corynespora cassiicola. Valores con la misma
letra son estadísticamente iguales para p = 0,05.
fitosanidad/7

Tun y otros
En relación con los fungicidas sistémicos, benomilo resultó
el más eficiente al inhibir el crecimiento micelial
in vitro de C. cassiicola en un 88%, y fue estadísticamente
diferente (p = 0,01) al triforine, azoxystrobin
y clorhidrato de propamocarb, con porcentajes de inhibición
de un 37, 24 y 14%, respectivamente. La efectividad
inhibitoria de las concentraciones de ingrediente
activo de benomilo (0,025; 0,05; 0,1; 0,15 mg • L –1 ) y del
azoxystrobin (0,02; 0,03; 0,04; 0,05 mg • L –1 ) no manifestaron
diferencias estadísticas significativas en su
efectividad inhibitoria, que fueron del 88% y menores
al 40%, respectivamente (Fig. 2).
Figura 2. Efecto de fungicidas sistémicos sobre el porcentaje de inhibición en el
crecimiento micelial de Corynespora cassiicola. Valores con la misma letra son
estadísticamente iguales para p = 0,05.
La efectividad del mancozeb y benomilo sobre C. cassiicola
aplicados en forma individual o en mezcla se ha
demostrado en ensayos de sensibilidad in vitro al inhibir
el crecimiento de micelio a dosis de 5 mg • L –1 , y el
control de la enfermedad en campo a 2,0 kg • ha –1 de
ingrediente activo en Cucumis sativus [Ferrer, 2005];
en Sesamum indicum benomilo a una dosis de 100 g por
100 kg de semilla inhibió el 100% de la colonización
sobre la semilla y la transmisión de la enfermedad [Navas
y Subero, 1995], y en Physalis ixocarpa Brot la
aplicación preventiva de la mezcla de benomilo más
mancozeb (500 g • ha –1 + 2,0 kg • ha –1 ) ejercieron un
control del 88,3% para Podosphaera (Sphaerotheca)
xanthii, y del 92,5% en Cercospora sp. bajo condiciones
de campo [Félix et al., 2007].
El fungicida biológico complejo multifactorial a diferentes
concentraciones de producto comercial (1; 1,5; 2; 2,5
y 5 mL • L –1 ) no manifestó diferencias estadísticas significativas
en su efectividad inhibitoria del crecimiento
micelial in vitro de C. cassiicola, que osciló entre el 74 y
el 76%, pero superior en relación con la del n-Alkyl a
diferentes concentraciones de producto comercial (1; 1,5;
2; 2,5 y 5 mL • L –1 ), que fue del 43 al 61%.
La efectividad de complejo multifactorial en el control
de enfermedades foliares inducidas por Botrytis cinerea,
Collletotrichum gloeosporioides, Alternaria spp. ha
sido demostrada en diferentes hortalizas a dosis de
500-700 mL • ha –1 . También especies de Trichoderma (componente
del complejo multifactorial), como el T. harzianum
R. (cepa A-34) a dosis de 10,0 kg • ha –1 en tratamientos
foliares, dio eficaz control hasta del 42%
[Ferrer, 2005]. Asimismo los extractos de Lantana
camara L. (filigrana o verbena morada) y Gliricidia
sepium L. (piñon amoroso) tuvieron una actividad
inhibitoria en el crecimiento micelial in vitro de C. cassiicola
[Pérez et al., 2000].
CONCLUSIONES
• Corynespora cassiicola es el agente causal que induce
la mancha foliar en chile dulce (Capsicum annuum L.).
• Los fungicidas de contacto mancozeb y sistémico
benomilo a dosis de 0,1 mg • L –1 fueron los más eficientes
en inhibir en el crecimiento micelial in vitro
de Corynespora cassiicola, con porcentajes superiores
al 82%.
• El complejo multifactorial a una concentración de
100 mg • L –1 resultó un producto orgánico alternativo
a los fungicidas órgano-sintéticos al manifestar
una eficiencia inhibitoria del 74% sobre el crecimiento
micelial in vitro de Corynespora cassiicola.
8/fitosanidad

Etiología de la mancha foliar del chile dulce...
REFERENCIAS
Barnett, H. L.; B. B. Hunter: Illustrated General of Imperfect Fungi,
Burguess Publishing, Minnesota, EE. UU.,1999.
Cabrera, M. G.; M. A. Cúndom; S. A. Gutiérrez; R. E. Álvarez: «Situación
de la mancha anillada (Corynespora casiicola) de la soja en provincias
del NE de Argentina», Comunicaciones Científicas y Tecnológicas,
Resumen A-022, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad
Nacional del Nordeste, Argentina,. 2006.
Cutrim, F. A.; G. S. Silva: «Patogenicidad de Corynespora cassiicola a
diferentes especies de plantas», Fitopatologia Brasileira 28:193-
194, Brasil, 2003.
Félix, G. R.; J. A. Ávila; B. O. Valenzuela; J. A. Trigueros; R. M. Longoria:
«Identificación y control químico de los agentes causales de la mancha
foliar y la cenicilla del tomatillo (Physalis ixocarpa Brot.) en el
norte de Sinaloa, México», Revista Mexicana de Fitopatología
25(1):1-10, México, 2007.
Ferrer, G. C. A.: «Comportamiento y control de la enfermedad tizón de fuego
causada por el hongo Corynespora cassiicola (Berk & Curt) Wei. en el
cultivo del pepino (Cucumis sativus L.) en sistemas de organopónicos en
la provincia de Camagüey y su relación con otros patógenos fúngicos
presentes en el cultivo», Fitosanidad 9(4):67, Cuba, 2005.
French, E. R.; T. T. Hebert: «Métodos de investigación fitopatológica»,
Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura (IICA),
San José, Costa Rica, 1982.
Furukawa, T.; K. Ushiyama; K. Kishi: «Corynespora Leaf Spot of Scarlet
Sage Caused by Corynespora cassiicola», J. Gen. Plant Pathol.
74:117-119, Japón, 2008.
Herrera, P. E.: «Sensibilidad in vitro de Fusarium oxysporum Schletch
y Alternaria solani Jones & Grout a fungicidas de contacto y
sistémicos», Tesis de Licenciatura, Instituto Tecnológico Agropecuario
no. 2, Conkal, Yucatán, México, 2004.
INEGI: «Anuario estadístico de Yucatán», Instituto Nacional de Estadística
Geográfica e Informática, t. II. gobierno del estado de Yucatán,
México, 2007.
Jayasuriya, K. E.; B. I. Thennakoon: «First Report of Corynespora
cassiicola on Codiaeum variegatum (croton) in Sri Lanka», Cey. J.
Sci. (Bio. Sci.) 36(2):138-141, Sri Lanka, 2007.
Kurt, S.: «Genetic Variation in Corynespora cassiicola, the Target Leaf
Spot Pathogen», Pakistan Journal of Biological Sciences 8(4):618-
621, 2005.
Kwon, J. H.; S. W. Kang; J. S. Kim; C. S. Park: «First Report of
Corynespora Leaf Spot in Pepper Caused by Corynespora cassicola
in Korea», Plant Pathol. J. 17(3):180-183, Corea, 2001.
Kwon, J. H.; H. J. Jee; C. S. Park: «Corynespora Leaf Spot of Balsam
Pear Caused by Corynespora cassiicola in Korea», Plant Pathol. J.
21(2):164-166, Corea, 2005.
Mendoza, Z. C.: «Diagnóstico de enfermedades fungosas de las hortalizas»,
Departamento de Parasitología Agrícola, Ed. Universidad
Autónoma de Chapingo, estado de México, 1999.
Navas, M.; L. J. Subero: «Efecto de cinco fungicidas sobre Corynespora
cassiicola (Berk & Curt.) Wei en semilla de ajonjolí (Sesamum
indicum L.)», Rev. Fac. Agron. 21:119-127, Maracay, 1995.
Pech, M. A. M.: «Aptitud combinatoria y heterosis en germoplasma de
chile dulce (Capsicum annuum L.)», Tesis de Maestría, Instituto Tecnológico
Agropecuario no. 2, Conkal, Yucatán, México, 2006.
Pérez, W.; B. Bernal; A. Martín; C. Romeu: «Estudio preliminar de dos
extractos vegetales para el control in vitro del hongo Corynespora
cassiicola (Berk and Curt) Wei», Fitosanidad 4(1-2):43-46, Cuba,
2000.
Shimomoto, Y.; R. Adachi; Y. Morita; K. Yano; A. Kiba; Y. Hikichi; S.
Takeuchi: «Corynespora Blight of Sweet Pepper (Capsicum annuum)
Caused by Corynespora cassiicola (Berk. & Curt.) Wei», J. Gen.
Plant Pathol. 74:335-337, Japón, 2008.
Zaletas, M. E.: «Control químico y epidemiología de la mancha foliar del
chile habanero (Capsicum chinense Jacq.) en Yucatán, México»,
Tesis de Maestría en Horticultura Tropical, Instituto Tecnológico
Agropecuario no. 2, Conkal, Yucatán, México, 2003.
fitosanidad/9

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 11-15
FITONEMATODOS ASOCIADOS A LAS ARECACEAS
EN LAS ANTIGUAS PROVINCIAS HABANERAS
Mei Li Hung, 1 Hortensia Gandarilla Basterrechea 2 y Lamberto Reyes Laffita 2
1
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Ave. 25 no. 23011 e/ 230 y 234, La Coronela, La Lisa,
La Habana, C.P. 13600
2
Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento 231 e/ San Pedro y Lombillo, Plaza de la Revolución ,
La Habana
RESUMEN
Las arecáceas constituyen plantas con gran valor ornamental y utilitario
en Cuba, donde la escasez de referencias respecto a los
nematodos parásitos asociados con este grupo motivó la realización
de este trabajo. Se tomaron 150 muestras en las antiguas provincias
habaneras correspondientes a 19 especies de plantas de la familia
Arecaceae, donde se encontraron asociados 28 especies de
fitonematodos pertenecientes a 16 géneros. Se realizaron 41 nuevos
registros. Fue muy significativa la presencia de Radopholus similis en
Chrysalidocarpus lutescens y Cocos nucifera. Fue detectada por primera
vez Meloidogyne incognita en C. nucifera, Ptychosperma elegans
y Veitchia merrillii. En esta última también se observó M. arenaria.
Otros nematodos que se registraron por primera vez en una especie
de Arecaceae fueron Helicotylenchus dihystera, H. exallus, Quinisulcius
curvus, Rotylenchulus reniformis, Tylenchorhynchus annulatus y
Xiphinema basiri.
Palabras claves: Palmae, nematodos de plantas, plantas ornamentales
ABSTRACT
Arecaceae have important value in Cuba as ornamentals plants and
other uses. National references about the incidence of parasite
nematodes associated with this group of plants are poor. This situation
forced to carry out this research. In that way 150 samples corresponding
to 19 plant species of Arecaceae family were collected in ancient
Havana provinces, where 28 associated phytonematodes species
belonging to 16 genera, included 41 new host records, were identified.
The most significant were Radopholus similis in Chrysalidocarpus
lutescens and Cocos nucifera. Meloidogyne incognita was detected for
the first time in C. nucifera, Ptychosperma elegans and Veitchia merrillii,
M. arenaria was also detected in the last one. Helicotylenchus dihystera,
H. exallus, Quinisulcius curvus, Rotylenchulus reniformis, Tylenchorhynchus
annulatus and Xiphinema basiri were other nematodes
first found in association with some Arecaceae plants.
Key words: Palmae, plant nematodes, ornamental plants
INTRODUCCIÓN
Las palmas constituyen un grupo de especies de plantas
pertenecientes a la familia Arecaceae, orden Arecales.
Por la belleza de este grupo, en Cuba se utilizan mucho
en jardinería, donde pueden ser sembradas en macetas,
en pequeños jardines o en parques, características por
las cuales se comercializan notablemente en el mercado
nacional e internacional. También son útiles como fuente
de alimentación y para uso industrial y doméstico.
Según Leiva (2001), las palmas son el sello más característico
del paisaje en países que, como Cuba, están
ubicados entre los trópicos. Algunas de sus especies se
encuentran en peligro de extinción por la excesiva explotación
y otros factores ambientales. El efecto de las
plagas también tiene su función en el deterioro de ellas.
Un ejemplo de ello es el producido en cocotero por
Bursaphelenchus cocophilus (Cobb) Baujard, especie
cuarentenaria en Cuba. Esta especie es capaz de provocar
la muerte de las plantas una vez infestadas [CABI, 2007].
En la isla no existen muchos antecedentes acerca de los
fitonematodos en arecáceas. En la lista de fitonematodos
compilada por Fernández y Ortega (1986) solamente aparecen
las especies asociadas a Cocos nucifera L., mientras
que Gandarilla (2004), en un estudio de fitonematodos
en ornamentales, da a conocer algunas de
estas plantas.
Ante la importancia de este grupo de plantas y el
escaso conocimiento de las plagas asociadas a ellas,
se realizó este trabajo para identificar las especies
Recibido: 1/2/11
Aceptado: 4/4/11
fitosanidad/11

Li y otros
de fitonematodos en palmas de las entonces provincias
habaneras.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para determinar las especies de fitonematodos asociadas
a plantas de la familia Arecaceae se realizaron
muestreos en jardines, parques, parterres y otras áreas
urbanas en las antiguas provincias habaneras, el Jardín
Botánico Nacional y unidades de la empresa
Tropiflora.
Se tomaron 150 muestras de 19 especies de arecáceas
listadas en la Tabla 1, que se procesaron en el Laboratorio
Provincial de Sanidad Vegetal de La Habana y en
el Centro Nacional de Sanidad Vegetal.
Para la extracción de los fitonematodos las muestras
de suelo se dividieron en dos porciones. Una de ellas se
procesó por el método de Fenwick modificado para la
detección de nematodos cistógenos [García, 1979] y la
otra para la extracción de vermiformes por el método
de decantación-tamizado, y se depositaron los recobrados
en filtros con papel facial en embudos Baermann
[Barker, 1985].
Las muestras de raíces se lavaron con cuidado y se observaron
directamente al microscopio estereoscópico
para detectar la presencia de nematodos formadores
de agallas, cistógenos o semiendoparásitos. Posteriormente
se fraccionaron en segmentos de 1 cm aproximadamente,
que fueron licuados y tamizados. El recobrado,
al igual que el suelo, se depositó en los embudos
Baermann según las modificaciones propuestas por
Barker (1985). La identificación de las especies de
fitonematodos se realizó mediante métodos morfológicos
y morfométricos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se encontraron 28 especies de fitonematodos pertenecientes
a 16 géneros asociados a las plantas estudiadas
de la familia Arecaceae, que se listan a continuación:
Aphelenchoides asterocaudatus Das
Aphelenchoides bicaudatus Filip.& Stek
Aphelenchoides sp.
Aphelenchoides subtenuis (Cobb) Steiner & Buhrer
Aphelenchus avenae Bastian
Boleodorus sp.
Helicotylenchus dihystera (Cobb) Sher
Helicotylenchus elegans Roman
Helicotylenchus exallus Sher
Helicotylenchus goodi Tikyani, Kera & Bhatnagar
Helicotylenchus multicinctus (Cobb) Golden
Helicotylenchus sp.
Hemicycliophora sp.
Meloidogyne arenaria (Neal) Ch.
Meloidogyne javanica (Treub) Ch.
Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Ch.
Nothotylenchus sp.
Pratylenchus hexincisus Taylor & Jenkins
Pratylenchus sp.
Psilenchus sp.
Quinisulcius curvus (Williams) Siddiqi
Radopholus similis (Cobb) Thorne
Rotylenchulus reniformis Lindford & Oliveira
Rotylenchulus sp.
Scutellonema sp.
Tylenchorhynchus annulatus (Cass.) Golden
Tylenchus sp.
Xiphinema basiri Siddiqi
En todas las especies de plantas de la familia Arecaceae
estudiadas se encontraron asociadas una o varias especies
de fitonematodos (Tabla). Se muestran 114 registros, de
los cuales 41 constituyen nuevos informes para Cuba.
Entre los nuevos registros se destaca, por su importancia,
Radopholus similis en Chrysalidocarpus lutescens
y Cocos nucifera. Es la primera vez que este nematodo
se detecta en palmaceas en Cuba.
12/fitosanidad

Fitonematodos asociados a las arecaceas en...
Fitonematodos asociados a las arecáceas en las antiguas provincias habaneras
Especie de arecacea
Aiphanes caryotaefolia Wendl. (palma cariota)
Attalea cohume Mart. (corozo)
Chamadorea elegans Mart. (palma de salón)
Chrysalidocarpus lutescens (Bory) H. Wendl. (areca)
Cocos nucifera L. (cocotero)
Copernicia sp. (yarey)
Dictyosperma album (Bor.) W. Et Dr. Ex Sch. (areca blanca)
Latania rubra Jacq. (palma ornamental)
Licuala grandis H. A. Wendl.
Livistona sp.
Fitonematodos
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus sp.
Rotylenchulus reniformis
Tylenchus sp.
Aphelenchoides sp.
Tylenchus sp.
Helicotylenchus elegans
Aphelenchoides bicaudatus
Aphelenchoides sp.
Aphelenchoides subtenuis
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus dihystera
Helicotylenchus sp.
Hemicycliophora sp.
Meloidogyne arenaria
Meloidogyne incognita
Meloidogyne javanica
Nothotylenchus sp.
Pratylenchus hexincisus
Pratylenchus sp.
Psilenchus sp.
Radopholus similis*
Tylenchus sp.
Aphelenchoides bicaudatus
Aphelenchoides subtenuis
Aphelenchoides sp.
Aphelenchus avenae*
Boleodorus sp.*
Helicotylenchus dihystera
Helicotylenchus exallus*
Helicotylenchus multicinctus
Meloidogyne incognita*
Nothotylenchus sp.*
Pratylenchus sp.
Radopholus similis*
Rotylenchulus reniformis
Rotylenchulus sp.
Tylenchorhynchus annulatus*
Tylenchus sp.
Apelenchus avenae
Helicotylenchus elegans
Tylenchorhynchus annulatus
Aphelenchoides bicaudatus*
Aphelenchus avenae*
Nothotylenchus sp.*
Tylenchus sp.*
Helicotylenchus multicinctus
Aphelenchoides sp.
Aphelenchus avenae
Aphelenchoides bicaudatus
Aphelenchoides sp.
Helicotylenchus sp.
Meloidogyne incognita
Nothotylenchus sp.
Aphelenchoides subtenuis*
Aphelenchus avenae
Meloidogyne incognita
fitosanidad/13

Li y otros
Mascarena sp.
Phoenix roebelenii O´Brien (fénix)
Ptychosperma elegans Blume (palma de Alejandría)
Roystonia regia (Kunth) O. F. Cook (palma real)
Sabal parviflora Becc. (palma cana)
Syagrus romanzoffiana (Cham.) Glassman (coco plumoso)
Thrinax radiata Lodd. Ex. Sch. (miraguano)
Veitchia merrillii (Becc.) H. E. Moore (adonidia)
Washingtonia robusta H. A. Wendl. (washintonia)
*: Nuevo hospedante.
Helicotylenchus sp.
Meloidogyne incognita
Rotylenchulus reniformis
Scutellonema sp.
Aphelenchoides sp.
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus goodi
Helicotylenchus sp.
Hemicycliophora sp.
Meloidogyne incognita
Nothotylenchus sp.
Pratylenchus hexincisus
Rotylenchulus reniformis
Tylenchus sp.
Aphelenchoides asterocaudatus
Aphelenchoides subtenuis*
Aphelenchoides sp.
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus multicinctus
Meloidogyne incognita*
Nothotylenchus sp.*
Pratylenchus sp.*
Tylenchus sp.*
Aphelenchoides sp.
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus sp.
Nothotylenchus sp.
Xiphinema basiri
Aphelenchus avenae
Helicotylenchus elegans
Rotylenchulus reniformis
Aphelenchus avenae*
Aphelenchoides subtenuis*
Pratylenchus sp.*
Psilenchus sp.*
Nothotylenchus sp.*
Tylenchus sp.*
Xiphinema basiri*
Aphelenchus avenae
Aphelenchoides asterocaudatus*
Aphelenchoides bicaudatus*
Aphelenchoides subtenuis*
Aphelenchus avenae*
Meloidogyne arenaria*
Meloidogyne incognita*
Helicotylenchus dihystera*
Helicotylenchus exallus*
Nothotylenchus sp.*
Pratylenchus sp.*
Quinisulcius curvus*
Rotylenchulus reniformis*
Rotylenchulus sp.*
Tylenchus sp.*
Tylenchorhynchus annulatus*
Xiphinema basiri*
Aphelenchoides bicaudatus
Meloidogyne incognita
14/fitosanidad

Fitonematodos asociados a las arecaceas en...
R. similis es una de las dos únicas especies de nematodos
que causan daños en el cocotero y el único nematodo
parásito de importancia conocido en la areca [Griffith
et al., 2005]. No obstante, en las observaciones realizadas
no se encontraron síntomas en las partes aéreas de
las plantas analizadas.
Dentro del género Meloidogyne Goeldi fue detectada
por primera vez Meloidogyne incognita en C. nucifera,
Ptychosperma elegans y Veitchia merrillii. En esta última
también se observó M. arenaria. En ninguno de los
casos se observó asociación patogénica.
Otros nematodos que se registran en una especie de
Arecaceae por primera vez son Helicotylenchus dihystera,
H. exallus, Quinisulcius curvus, Rotylenchulus reniformis,
Tylenchorhynchus annulatus y Xiphinema basiri.
De ellos no se encontraron informes de patogenicidad,
solo de parasitismo de Helicotylenchus en Roystonea en
Brasil [Dias-Arieira et al., 2007]; X. basiri en Roystonea
regia, R. reniformis en Aiphanes, Mascarena y Sabal y
T. annulatus en Copernicia en Cuba [Gandarilla, 2004].
En Pakistán Tylenchorhynchus qasimii se presenta como
parásito de Cocos nucifera. Es una especie muy parecida
a T. annulatus [Ramzan et al., 2008].
Los restantes nematodos no tienen un efecto parasítico
reconocido. Comúnmente se encuentran en la rizosfera
de las plantas. A este grupo pertenecen Boleodorus,
Tylenchus y Nothotylenchus [Yeates, 1999], Aphelenchus
–que se alimenta de hifas de hongos– [Baldwind et al.,
2004] y Aphelenchoides, aunque algunas especies son
parásitos importantes de plantas.
No obstante constituir estos resultados un aporte al conocimiento
de la biodiversidad, la riqueza de palmas
autóctonas de Cuba, con 83 especies [Leiva, 2001], amerita
continuar los estudios para identificar cualquier amenaza
a la integridad de esta familia de plantas.
CONCLUSIONES
• Se encontraron 28 especies de fitonematodos pertenecientes
a 16 géneros asociados a las plantas de la
familia Arecaceae.
• De los 114 registros encontrados, 41 constituyen
nuevos informes para Cuba.
• La presencia de Radopholus similis en Chrysalidocarpus
lutescens y Cocos nucifera fue muy significativa.
• Fue detectada por primera vez Meloidogyne incognita
en C. nucifera, Ptychosperma elegans y Veitchia
merrillii. En esta última también se observó M. arenaria.
• Se registraron por primera vez en una especie de
Arecaceae Helicotylenchus dihystera, H. exallus,
Quinisulcius curvus, Rotylenchulus reniformis,
Tylenchorhynchus annulatus y Xiphinema
basiri.
REFERENCIAS
Baldwin, J. G; S. A. Nadler; B. J. Adams: «Evolution of Plant Parasitism
Among Nematodes», Annu. Rev. Phytopathol 42:83-105, EE. UU.,
2004.
Barker, K.: Nematode Extraction and Bioassays. An Advanced Treatise
on Meloidogyne, vol. II: Methodology, Dept. Plant Pathology and United
State Agency for International Development North Carolina State
University, EE. UU.,1985, pp. 19-35.
CABI: Crop Protection Compendium, CAB International, Wallingford,
Inglaterra, 2007.
Dias-Arieira, C. R.; D. A. S. Morita; M. H. Machado: «Nematodes
Associated to Ornamental Plants in Greenhouse from Paraná State,
Brazil», Nematol. Brasileira 31(1):46-53, Brasil, 2007.
Fernández, M.; J. Ortega: Lista de nematodos fitoparasíticos de Cuba,
Ed. Científico-Técnica, La Habana, 1986.
Gandarilla, Hortensia: «Fitonematodos de las plantas ornamentales.
Nocividad y antagonistas», tesis en opción al grado científico de
Doctora en Ciencias Agrícolas, Inisav, La Habana, 2004.
García, O.: «Métodos de extracción de nematodos del suelo y tejido
vegetal», Información Técnica, no. 4. IISV-CID, Cuba, 1979.
Griffith, R.; R. M. Giblin-Davis; P. K. Koshy; V. K. Sosamma: Nematode
Parasites of Coconut and Other Palms. Plant Parasitic Nematodes in
Subtropical and Tropical Agriculture, 2 nd edition. Chapter 13, CABI
Publishing, Inglaterra, 2005, pp. 493-527.
Leiva, A.: Cuba y sus palmas, Ed. Gente Nueva, La Habana, 2001.
Ramzan, M.; Z. A. Handoo; S. Fallas: «Description of Tylenchorhynchus
qasimii sp. n. with a New Report of T. kegasawai Minagawa, 1995
from Pakistan», J. of Nematology 40(1):20-25, EE. UU., 2008.
Yeates, G. W.: «Effects of Plants on Nematode Community Structure»,
Annu. Rev. Phytopathol. 37:127-49, EE. UU., 1999.
fitosanidad/15

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 17-24
INCIDENCIA Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DEL POTATO
LEAFROLL VIRUS (PLRV) EN LAS PRINCIPALES REGIONES
PRODUCTORAS DE PAPA DE COLOMBIA
José F. Gil Ramírez, 1 José M. Cotes Torres 2 y Mauricio Marín Montoya 1
1
Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia,
Sede Medellín, josefergil@gmail.com; mamarinm@unal.edu.co
2
Departamento de Ciencias Agronómicas, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional
de Colombia, Sede Medellín, jmcotes@unal.edu.co
RESUMEN
El cultivo de la papa representa uno de los renglones agrícolas de
mayor importancia en Colombia. Alcanza cerca de 162 000 ha y una
producción que supera los 2 721 396 t. Este cultivo es afectado por
diversas plagas y enfermedades, entre las que se destacan las polillas
de los tubérculos, el tizón tardío y los problemas virales. Los
virus reducen los rendimientos y la calidad del tubérculo en cultivos
de papa de todo el mundo, y el PLRV es uno de los más limitantes en
diferentes latitudes, incluida la región andina. Esta investigación se
planteó con el fin de evaluar la incidencia y características genotípicas
del PLRV en los cultivos de papa de los departamentos colombianos
de Antioquia, Boyacá, Cundinamarca y Nariño. Los resultados indicaron
la ocurrencia de PLRV en los cuatro departamentos evaluados,
con una incidencia promedio del 20%. Los análisis moleculares generados
a partir de secuencias del gen de la cápside viral (CP)
indicaron muy bajo nivel de variación entre los aislamientos colombianos
de este virus, y entre estos y las secuencias de cepas de
referencia de otros lugares del mundo obtenidas de las bases de
datos moleculares. Estos resultados enfatizan en la necesidad de
reforzar las medidas fitosanitarias en los cultivos de papa del país.
Palabras claves: ELISA, luteovirus del enrollado de patata, secuencia
nucleotídica, Solanum tuberosum
ABSTRACT
Potato is one of the most important crops in Colombia, reaching
about 162.000 ha and a production of more than 2.721.396 t. This crop
is affected by various pests and diseases, including the tuber moths,
late blight and different viruses. Virus diseases reduce yields and
tuber quality of potato worldwide. PLRV is one of the most limiting
viruses of potato in different latitudes, including the Andean region.
This research evaluated the incidence and genotypic characteristics
of PLRV in potato crops from the Colombian provinces of Antioquia,
Boyacá, Cundinamarca and Nariño. Results indicated the occurrence
of PLRV in the four provinces studied, with an average incidence of
20%. Molecular analysis of sequences generated from the viral capsid
gene (CP) indicated a very low level of variation among isolates of this
virus, and between them and the sequences of PLRV strains from
different countries obtained from molecular databases. These results
emphasize the need to strengthen phytosanitary measures in potato
crops of Colombia.
Key words: ELISA, nucleotide sequence, Potato leaf roll luteovirus,
Solanum tuberosum
INTRODUCCIÓN
El cultivo de la papa (Solanum tuberosum L.) en Colombia
genera una producción de 2 721 396 t en aproximadamente
162 000 ha cosechadas. El rendimiento
promedio del cultivo es de 16,8 t/ha, valor similar al
promedio de rendimiento mundial. La producción nacional
está distribuida en su orden en los departamentos
de Cundinamarca, Boyacá, Nariño y Antioquia
con 398 926, 297 492, 266 112 y 119 854 t, respectivamente
[Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural,
2006].
Uno de los principales limitantes de la producción de este
cultivo en Colombia son los problemas virales. En el mundo
se reportan al menos 25 virus y viroides [Salazar, 1995,
2006], entre los que se destacan por su importancia económica
PVX (Potato virus X, Potexvirus), PVY (Potato
virus Y, Potyvirus), PVS (Potato virus S, Carlavirus),
PLRV (Potato leafroll virus, Polerovirus) y el viroide
PSTVd (Potato spindle tuber viroid, Pospiviroid).
Adicionalmente, en Colombia es muy limitante el PYVV
Recibido: 10/2/11
Aceptado: 10/3/11
fitosanidad/17

Gil y otros
(Potato yellow vein virus, Crinivirus) [Guzmán et al.,
2004].
Los problemas virales en el cultivo de la papa afectan
la producción de tubérculos al reducir el área
fotosintética, la movilización de nutrientes y por tanto
la acumulación de carbohidratos para la formación adecuada
de los tubérculos, lo cual está asociado directamente
a reducciones del rendimiento, y además imposibilita
al agricultor para obtener tubérculo semilla a
partir de su propio cultivo [Salazar, 1995]. En sistemas
agrícolas tradicionales, como los que predominan en las
zonas alto-andinas de Suramérica, esta situación es frecuente
y conduce a la pérdida de vigor de la semilla, y a
un efecto acumulativo de diferentes virus que termina
por reducir dramáticamente los rendimientos al cabo
de varios ciclos de siembra-cosecha.
El PLRV es uno de los virus que generan mayores pérdidas
en el rendimiento de los cultivos de papa a nivel
mundial, con reportes que varían del 20 al 90%
[Rahman y Akanda, 2010], y es aún más limitante
cuando su infección ocurre en forma simultánea con
otros virus; así, por ejemplo, en evaluaciones en Colombia
sobre la variedad ICA-Puracé se encontró que
el efecto individual del PLRV ocasionó pérdidas del
47% con respecto al testigo libre de virus, mientras
que su asociación con PVY redujo la producción en un
55% [Guerrero y Martínez, 1980]. Es la especie tipo
del género Polerovirus (Luteoviridae). Se caracteriza por
presentar una cápside desnuda con simetría icosahédrica
con diámetro de 24 nm y un genoma de ARN de cadena
sencilla positiva de alrededor de 5900 nt, cuyo extremo
5’ se encuentra asociado a VPg [Taliansky et al., 2003].
Tiene dividido su genoma en ocho marcos de lectura
abiertos (ORF) densamente empaquetados, con el ORF 1
que solapa el ORF 0 y el ORF 3 traslapado con el ORF 4
[Pooramini et al., 2010]. El virus emplea diferentes estrategias
para la modulación de su ARN; así, los tres
ORF proximales al 5’ (0 al 2) se expresan a partir del
ARNg, y los ORF cercanos al extremo 3’ (3 al 7), se
expresan a partir de ARNsg [Taliansky et al., 2003].
El ORF 0 está involucrado en el desarrollo de la
sintomatología, y se cree que es un supresor del
silenciamiento de genes en sus hospedantes. P1 tiene
funciones de proteinasas y contiene la secuencia que
codifica para VPg y posiblemente para una helicasa.
El ORF 2 codifica para RdRP, mientras que el ORF 3
lo hace para la CP de 23 kDa. El ORF 4 codifica para
una proteína de movimiento, y la fusión de los ORF 3
y 5 genera una proteína estructural menor de 80 kDa,
que se cree participa en la transmisión del virus por
áfidos. Los ORF 6 y 7 han sido descritos recientemente,
y aunque sus funciones no se conocen, se especula
que P7 tiene propiedades de unión a ácidos nucleicos
[Taliansky et al., 2003; Pooramini et al., 2010].
Los áfidos transmiten el PLRV de manera persistente
no propagativa, que se multiplica en el floema del huésped.
Los insectos más eficientes para su transmisión son
Myzus persicae y Macrosiphum euphorbiae. Los síntomas
principales que ocasiona este virus en papa corresponden
a enanismos y enrollamiento de hojas, acompañados
de una grave reducción en el rendimiento. En
plantas indicadoras como Datura stramonium se pueden
observar amarillamientos sistémicos entre venas, y en
Physalis floridiana se presenta clorosis sistémica entre
venas y enrollamiento de hojas [Büchen-Osmond, 2010].
A pesar de la importancia económica que representan
los virus en los cultivos de papa de Colombia, las investigaciones
sobre sus niveles de incidencia y niveles de
variación genética son muy pocos [Guerrero y Martínez,
1980; Sánchez de Luque et al., 1991; Guzmán et al.,
2004]. Ya que en la actualidad se desconocen los niveles
de incidencia de los principales virus en los cultivos de
papa de Colombia, esta investigación se planteó con el
objetivo de evaluar la presencia del PLRV, uno de los
más limitantes en el país, en cuatro de los principales
departamentos cultivadores de este tubérculo, mediante
la utilización de pruebas de ELISA. Adicionalmente se
realizó una caracterización molecular de aislamientos
de las diferentes regiones a partir de la secuenciación
del gen de la cápside viral (CP), y se realizaron comparaciones
con cepas de diferentes países, cuyas secuencias
se encuentran reportadas en las bases de datos
moleculares.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para la determinación de los niveles de incidencia de
PLRV en cultivos de papa de Colombia se realizaron
muestreos aleatorios en ocho cultivos de diferentes variedades
ubicados en tres zonas productoras del departamento
de Antioquia (zona 1: Oriente [La Unión,
Sonsón]; zona 2: Oriente cercano [Santuario, Marinilla,
Carmen de Víboral]; zona 3: norte Antioqueño [Santa
Rosa de Osos, Don Matías]); tres zonas en Cundinamarca
(zona 4: Zipaquirá; zona 5: Villa Pinzón; zona 6:
Occidente [Madrid, Cota]); dos zonas en Boyacá (zona 7:
18/fitosanidad

Incidencia y caracterización molecular del...
Turmeque, Ventaquemada; zona 8: Tunja, Siachoque)
y dos zonas en Nariño (zona 9: Pasto, zona 10: Ipiales).
En cada cultivo se realizó una colección aleatoria de
cuatro muestras conformadas por dos foliolos jóvenes
para generar una muestra compuesta (bulk). Una vez
en el laboratorio, las 320 muestras (cuatro muestras
por ocho cultivos por diez zonas) se evaluaron para la
detección de PLRV mediante pruebas de DAS-ELISA
con anticuerpos policlonales. Los resultados colorimétricos
fueron cuantificados en un equipo de espectrofotometría,
y se incluyó en cada prueba un control positivo
(suministrado en forma liofilizada) y uno negativo.
Los pozos fueron considerados con reacción positiva
cuando la lectura de absorbancia a 405 nm presentó un
valor mínimo del doble de la lectura obtenida en el control
negativo, según el criterio de Matthews (1993).
Los resultados de niveles de incidencia se analizaron a
través de un modelo lineal generalizado aleatorio donde
se consideró una distribución binomial para la variable
incidencia, y se utilizó una función de ligamiento
logit. Los efectos aleatorios fueron departamentos, zonas
y cultivos dentro de zonas. Para el análisis estadístico
se utilizó el procedimiento GLIMMIX del programa
estadístico SAS versión 9.1.3.
Para el análisis de variabilidad genética de aislamientos
colombianos de PLRV se utilizaron secuencias parciales
de la región del genoma que codifica para CP. El
ARN molde se obtuvo mediante extracciones de ARN
total con un kit para tejido de plantas, a partir de al
menos una muestra de cada región bajo estudio que
resultara positiva para PLRV en las pruebas de ELISA.
Las reacciones de RT-PCR se realizaron en dos pasos,
con los cebadores PLRV-F (5' CGC GCT AAC AGA
GTT CAG CC 3') y PLRV-R (5' GCA ATG GGG GTC
CAA CTC CAA CTC AT 3') [Singh et al., 1995], en un
volumen de 20 µL, incluidos 1,9 µL de agua, 4 µL de
buffer RT 5X, 4 µL de MgCl 2
25 mM, 2 µL de dNTPs
10 mM, 1 µL de cebador reverso (PLRV-R) 10 µM,
0,1 µL de inhibidor de RNasa (40U/µL), 2 µL de enzima
M-MuLV Transcriptasa Reversa (20 U/µL) y 5 µL
de ARN. El programa consistió de 37°C por 60 min y
75°C por 15 min. Las reacciones de PCR se realizaron
en un volumen de 25 µL con 16,2 µL de agua, 2,5 de
buffer de enzima 10X, 1,8 µL de MgCl2 (25 mM), 0,5 µL
de dNTPs (10 mM), 0,5 µL de cada cebador (10 µM),
0,2 µ: de Taq ADN polimerasa (5 U/µL) y 2,5 µL de ADNc,
aunque en algunas ocasiones fue necesario preparar diluciones
de 1:5 y 1:10 de ADNc. El programa de PCR
consistió de 95°C por 30 s, seguido de 40 ciclos de 95°C
por 30 s, 52°C por 45 s, 72°C por 1 min y una extensión
final a 72°C por 5 min.
Los productos amplificados se separaron por electroforesis
en gel de agarosa al 1,5% suplementado con 4 µL
de bromuro de etidio (10 mg/mL), visualizados con un
transiluminador UV y su tamaño verificado por comparación
con el marcador de peso molecular Generuler
100 pb DNA. Los amplicones del tamaño esperado se
purificaron directamente del gel mediante un kit de separación
de agarosa para proceder a su secuenciación
en ambos sentidos.
Las secuencias obtenidas con cada cebador fueron editadas
mediante los programas BioEdit 6.0.6 y Chromas
1.45. Se construyeron secuencias consenso y se confirmó
su identidad mediante el programa BLASTn. Las
secuencias generadas se compararon con aquellas de
referencia obtenidas del banco de genes, se alinearon
mediante el programa Clustal W y la matriz de similitud
generada fue utilizada para obtener un árbol
filogenético basado en máxima parsimonia con la utilización
del programa PAUP 4.0b [Swofford, 1998]. El
soporte de la topología interna de los dendrogramas
fue determinado por análisis de bootstrap con 1000
remuestreos [Felsenstein, 1985].
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados de la detección serológica del PLRV indican
su presencia generalizada en las zonas productoras
de papa de Colombia, con un promedio de incidencia
del 20% (Fig. 1A). No se encontraron diferencias
significativas para la incidencia entre departamentos,
ni entre las regiones evaluadas dentro de cada departamento,
aunque zonas como Zipaquirá, Tunja y el Oriente
Antioqueño presentaron niveles inferiores al 17% de
incidencia, mientras que en los cultivos de Turmeque-
Ventaquemada y Villapinzón la incidencia superó el
25% (Fig. 1B).
En Colombia son muy pocos los trabajos que han evaluado
la incidencia de virus en cultivos de papa. Uno de
ellos fue el realizado por Guzmán et al. (2004), donde se
estimó la incidencia de virus mediante inmuno-impresión
en 800 muestras de Solanum phureja de municipios
de Nariño y Cundinamarca, y encontraron valores
de incidencia del 86, 72, 39 y 91% para los virus PVS,
PVY, PVX y PLRV, respectivamente. Esta misma evaluación
se realizó al material del banco de germoplasma
fitosanidad/19

Gil y otros
de la Colección Central Colombiana (CCC) de S. phureja,
y en este caso los valores de incidencia fueron del
20, 19, 5,7 y 6,6%, para esos mismos virus [Guzmán
et al., 2004]. Más recientemente, Guzmán et al. (2010),
al evaluar la CCC de papa en campo en un grupo de
581 accesiones de Solanum sect. Petota mediante pruebas
de ELISA, encontraron que el 98,8% de todas las
muestras analizadas arrojó resultados positivos para
al menos uno de los cuatro virus evaluados (PVS,
PVY, PVX y PLRV), y se detectó el PVS en el 85%
de las accesiones, seguido de PLRV (77,4%), PVY
(58,6%) y PVX (13,9%). Estos resultados enfatizan
en la importancia de reforzar los programas de manejo
integrado de enfermedades virales en Colombia, más
aún cuando el programa de certificación de semilla de
papa en este país permite solo hasta el 5% de presencia
de virus (PLRV, PVY, PVX, PVS) en semilla certificada,
el 2% para registrada y el 1% para semilla
básica [Zapata, 2004].
De esta forma resulta evidente que los programas de
manejo integrado de enfermedades virales de papa en
Colombia requieren ser reforzados con un control más
estricto del tubérculo semilla desde la propia categoría
de élite y de semilla básica, la implementación de
prácticas culturales que eviten la presencia de
hospedantes alternos y disminuyan la dispersión del
virus dentro de lotes de siembra y entre fincas, y para
el caso particular del PLRV que garanticen el mantenimiento
por debajo de los umbrales de daño de las
poblaciones de áfidos vectores del virus, tales como
M. persicae y M. euphorbiae. Lógicamente estas medidas
requieren de programas agresivos de extensión
rural, del fortalecimiento técnico de las organizaciones
gremiales de cultivadores de papa y de la
implementación de nuevas herramientas de diagnóstico
y seguimiento de la sanidad de lotes de semilla y
cultivos en campo por parte de los organismos de sanidad
vegetal estatales.
Figura 1 A. Niveles de incidencia evaluados a partir de pruebas de ELISA
para el PLRV en cultivos de papa de diez regiones productoras.
20/fitosanidad

Incidencia y caracterización molecular del...
Figura 1B. Niveles de incidencia evaluados a partir de pruebas de ELISA para el
PLRV en cultivos de papa de cuatro departamentos de Colombia.
Por otra parte, las pruebas de RT-PCR con los
cebadores PLRV-F y PLRV-R generaron los amplicones
del tamaño esperado de ~330 pb (Fig. 2). El análisis de
18 secuencias de este virus y 14 secuencias de referencia
obtenidas del banco de genes de cepas de PLRV de
diferentes orígenes geográficos indicó niveles de identidad
para la región estudiada superiores al 97%. Estos
valores se presentaron tanto entre cepas obtenidas de
cultivos de papa de los cuatro departamentos colombianos
evaluados como con respecto a las cepas de referencia
utilizadas. El Cereal yelow dwarf virus (CYDV),
un polerovirus utilizado como grupo externo en el análisis,
presentó niveles de identidad cercanos al 77% con
respecto a las cepas de PLRV incluidas en el estudio.
Figura 2. Amplicones obtenidos con los cebadores PLRV-F
y PLRV-R a partir de tejido foliar de plantas de papa de cuatro
departamentos de Colombia. 1: Marcador 100 pb, 2-7: muestras
positivas para PLRV; 8: Control negativo.
fitosanidad/21

Gil y otros
El análisis filogenético utilizó 328 posiciones, 241 de
las cuales resultaron constantes, 72 variables pero no
informativas y 15 informativas para el método de
máxima parsimonia. El dendrograma presentó un índice
de consistencia (CI) de 0,87, índice de retención
(RI) de 0,83 y un índice de homoplasia (HI) de 0,12, y
agrupó en un solo clado (100% bootstrap) todas las
cepas de PLRV, incluidas las obtenidas en este estudio
y aquellas de referencia, sin que se presentara ningún
subgrupo interno soportado con altos valores de
bootstrap (Fig. 3). Las secuencias de los aislamientos
colombianos de PLRV fueron depositadas en el banco
de genes bajo los números de accesión HQ396176 a
HQ396193.
Figura 3. Árbol filogenético basado en secuencias parciales de la cápside viral para aislamientos
de PLRV obtenidos de cultivos de papa de Colombia y el resto del mundo. Los cambios se
indican en la parte superior, y los valores de bootstrap (> 50%) en la parte inferior de las ramas.
El PLRV ha sido uno de los virus más estudiados y
prevalentes en el cultivo de la papa a nivel mundial, así
como uno de los que probablemente causan mayores daños
en el cultivo [Taliansky et al., 2003; Plchova et al.,
2009]; sin embargo, reiteradamente no se ha encontrado
una notable diferencia entre las secuencias de sus aisla-
22/fitosanidad

Incidencia y caracterización molecular del...
mientos alrededor del mundo [Plchova et al., 2009], hecho
que se repitió en este trabajo al analizar las secuencias
obtenidas de la región que codifica para CP. El análisis
filogenético mostró diferencias máximas del 3%
con respecto a las secuencias de referencia, y agrupó a
todas las cepas en un solo clado. Aunque estos bajos
niveles de variación entre aislamientos de PLRV se han
encontrado en diversos trabajos, tal información no podría
ser asumida a priori para la región andina de Colombia,
por cuanto esta zona hace parte del centro de
origen de la papa, lo cual supondría una mayor probabilidad
de que se presenten mayores niveles de variación
en los hospedantes y sus virus fitopatógenos como
resultado de su coevolución por largos períodos [Salazar,
1995, 2006].
Se ha planteado que los bajos niveles de variación encontrados
en este virus son posiblemente resultado de
su reciente divergencia a partir de otro virus que se
especializó en su infección a papa, o a las fuertes presiones
de selección que ejerce la estrecha base genética
de las variedades de S. tuberosum cultivadas en el mundo
[Guyader y Ducray, 2002].
Trabajos recientes indican que los mayores niveles de
variación en el PLRV se encuentran principalmente
en la región codificante para P0. Esa región permite
la discriminación entre diferentes aislamientos del
virus y la distinción en tres grupos de aislamientos,
con valores de identidad que fluctúan entre el 94,7 y
el 98,5% [Plchova et al., 2009]. Es por esto que, con el
fin de complementar este estudio, será necesario analizar
las secuencias del ORF P0 en las cepas colombianas,
de manera que sea posible confirmar o no la
alta uniformidad genética encontrada en esta investigación.
Se espera que los resultados de esta investigación
sean utilizados para el diseño de herramientas de
diagnóstico viral ajustadas a las realidades genotípicas
del PLRV en los cultivos de papa del país, metodologías
necesarias para el apoyo de los programas de
certificación de tubérculo semilla y para la formulación
de programas de manejo integrado de las enfermedades
virales.
CONCLUSIONES
• Se determinó una incidencia promedio del 20% del
PLRV en los cultivos de cuatro de los principales
departamentos productores de papa de Colombia.
• Los análisis de secuencias de la región de la cápside
del PLRV permitieron inferir muy bajos niveles de
variación entre las cepas colombianas de este virus y
aquellas reportadas de diferentes países del mundo.
AGRADECIMIENTOS
Se agradece el soporte económico del Ministerio de Agricultura
y Desarrollo Rural de Colombia (proyecto 090-
2007S4527-87-08) de la Universidad Nacional de Colombia,
Sede Medellín, Fedepapa y Fritolay para la
realización de esta investigación, así como el apoyo en
la colección de muestras en el departamento de Nariño
de la profesora Luz Estela Lagos, de la Universidad de
Nariño.
REFERENCIAS
Büchen-Osmond, C.: «The Universal Virus Database of the International
Committee on Taxonomy of Viruses», www.ictvdb.org (consultado
en julio de 2010).
Felsenstein, J.: «Confidence Limits on Phylogenies: An Approach Using
the Bootstrap», Evolution 39:783-791, EE. UU., 1985.
Guerrero, O.; G. Martínez: «Evaluación de pérdidas ocasionadas en la
variedad de papa Puracé por los virus Potato virus X, Potato virus Y
y Potato leafroll virus», Fitopatol. Colomb. 9:3-40, Colombia, 1980.
Guyader, S.; D. G. Ducray: «Sequence Analysis of Potato leafroll virus
Isolates Reveals Genetic Stability, Major Evolutionary Events and
Differential Selection Pressure Between Overlapping Reading Frame
Products», J. of Gen. Virology 83:1799-1807, Inglaterra, 2002.
Guzmán, M.; M. Caro; Y. García: «Validación de la técnica serológica
de inmunoimpresión para detección de diferentes virus que afectan
el cultivo de papa», I Taller Nacional sobre Patógenos del Suelo,
Virus e Insectos Plaga Diferentes a Tecia solanivora, Bogotá, Colombia,
2004, p. 41.
Guzmán, M.; V. Román; L. Franco; P. Rodríguez: «Presencia de cuatro
virus en algunas accesiones de la Colección Central Colombiana de
papa mantenida en campo», Agron. Col. 28:225-233, Colombia, 2010.
Matthews, R. E. F: Diagnosis of Plant Virus Diseases. CRC Press,
Canadá, 1993.
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural: «Observatorio Agrocadenas.
Cuarto informe de coyuntura 2006», http://www.agrocadenas
.gov.co/documentos/coyuntura/Inf_Coyuntura_papa_4.pdf (consultado
en: marzo de 2009).
Plchova, H.; N. Cerovska; T. Moravec; P. Dedic: «Molecular Analysis of
Potato leafroll virus Isolates from the Czech Republic», Virus Genes
39:153-155, Springer-Verlay; Nueva York; Heidelberg, Berlín, 2009.
Pooramini, N.; J. Heydarnejad; H. Massumi: «Incidence and Molecular
Analysis of Potato leafroll virus in Iran», J. Phytopathol. 158:182-
185, Alemania, 2010.
Rahman, M. S.; A. M. Akanda: «Effect of PLRV Infected Seed Tuber on
Disease Incidence, Plant Growth and Yield Parameters of Potato»,
Bangladesh J. Agril. Res. 35:359-366, Bangladesh, 2010.
Salazar, L. F.: Los virus de la papa y su control, CIP, Lima, 1995.
Salazar, L. F.: «Emerging and Re-Emerging Potato Diseases in the Andes»,
Potato Res. 49:43-47, EE. UU., 2006.
Sánchez de Luque, C.; P. Corzo; O. Pérez: «Incidencia de virus en
papa y su efecto sobre rendimientos en tres zonas agroecológicas
de Colombia», Rev. Lat. Papa 4:36-51, Perú, 1991.
fitosanidad/23

Gil y otros
Singh, R. P.; J. Kurz; G. Boiteau; G. Bernard: «Detection of Potato
leafroll virus in Single Aphids by the Reverse Transcription Polymerase
Chain Reaction and Its Potential Epidemiological Application», J. of
Virol. Methods 55:133-143, EE. UU., 1995.
Swofford, D. L.: PAUP: Phylogenetic Analysis Using Parsimony (*and
Other Methods), Version: 4, Sinauer Associates, Sunderland,
EE. UU., 1998.
Taliansky, M.; M. A. Mayo; H. Barker: «Potato leafroll virus: a Classic
Pathogen Shows New Tricks», Mol. Plant Pathol. 4:81-89, Inglaterra,
2003.
Zapata, J. L.: «Algunos aspectos sobre los virus de la papa en
Colombia», I Taller Nacional sobre Patógenos del Suelo, Virus e
Insectos Plaga Diferentes a Tecia solanivora, Colombia, 2004,
pp. 24-40.
24/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 25-29
Ecología
COMPOSICIÓN Y RIQUEZA DE INSECTOS Y ARAÑAS
ASOCIADOS A PLANTAS FLORECIDAS EN SISTEMAS
AGRÍCOLAS URBANOS
Yaril Matienzo Brito, 1 Marlene M. Veitía Rubio 1 y Giraldo Alayón García 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana
C.P. 11600, ymatienzo@inisav.cu
2
Museo Nacional de Historia Natural. Obispo 61 e/ Oficios y Baratillo, Plaza de Armas, La Habana Vieja,
C.P. 10100
RESUMEN
El conocimiento de la fauna de artrópodos asociados a las flores de
las plantas en sistemas agrícolas resulta un elemento básico para la
conservación de las especies que constituyen enemigos naturales
de insectos fitófagos. En este trabajo se determinaron las especies
que visitan con mayor frecuencia las flores de diferentes especies
botánicas en sistemas agrícolas urbanos. Se realizaron muestreos
simples aleatorios con frecuencia semanal en diferentes sistemas
de producción de la provincia de La Habana durante el período 2007-
2009. Los insectos y arañas colectados se clasificaron e identificaron
mediante claves taxonómicas y se compararon con colecciones
biológicas. Se obtuvo que los grupos funcionales que presentaron
una mayor riqueza de especies asociadas a las flores fueron
Coleoptera > Araneae > Hymenoptera. En este sentido Cycloneda
sanguinea limbifer Casey y Apis mellifera L. visitaron un mayor número
de especies botánicas florecidas. Así también, las especies botánicas
que presentaron una mayor riqueza taxonómica de artrópodos
fueron el maíz (Zea mays L.) (12), la flor de muerto (Tagetes spp.) (10),
el noni (Morinda citrifolia L.) (7) y el girasol (Helianthus annuus L.) (6).
Palabras claves: floración, control biológico, Insecta, Araneae, protección
de plantas, agricultura urbana
ABSTRACT
The knowledge of arthropod fauna associated with flowers of plants in
agricultural systems is a basic element for natural enemies species
of phytophagous insects conservation. Species that most frequently
visit flowers of different plant species in urban agricultural systems
were determined in this study. Simple random sampling was done
weekly in different production systems of Havana province during the
period 2007-2009. Insects and spiders were collected, classified and
identified using taxonomic keys and comparison with biological
collections. Functional groups with higher species richness associated
with the flowers were Coleoptera > Araneae > Hymenoptera. In this
way Cycloneda sanguinea limbifer Casey and Apis mellifera L. were
arthropods that visited a greater number of flowering plant species.
Plant species that presented greater taxonomic richness of arthropods
were Zea mays L. (12), Tagetes spp. (10), Morinda citrifolia L. (7) and
Helianthus annuus L. (6).
Keys words: blooming, biological control, Insecta, Araneae, plant
protection, urban agriculture
INTRODUCCIÓN
Los artrópodos constituyen uno de los grupos más dominantes
en los ecosistemas terrestres, en los que sin
duda alguna la diversidad de plantas ejerce una marcada
influencia sobre la dinámica y estructura de sus poblaciones.
Así, las modificaciones en el hábitat y las
prácticas de manejo que alteren la comunidad de plantas
pueden tener un gran impacto en los procesos
ecológicos que en ellos ocurren [Nicholls, 2008].
En los sistemas agrícolas la simplificación de la diversidad
de plantas restringe los sitios de oviposición y las
fuentes alternativas de alimento para numerosos organismos
que desempeñan importantes funciones
[Vázquez et al., 2008; Landis, 2000]. De manera que el
aumento de la diversidad florística podría favorecer el
incremento de los niveles tróficos superiores, al proveer
de recursos florales a especies que se manifiestan como
parasitoides, depredadores y polinizadores.
Bajo estas condiciones los insectos y arañas que regulan
poblaciones de enemigos naturales de insectos fitófagos
constituyen un componente esencial de la diversidad funcional,
los que requieren del consumo de presas, hospedantes
y otros recursos nutricionales como proteínas,
Recibido: 19/11/10
Aceptado: 15/12/10
fitosanidad/25

Matienzo y otros
azúcares, vitaminas y minerales que obtienen a través
de las flores de las plantas [Fernández et al., 2001; Altieri
y Nicholls, 2007; Matienzo, 2010; Vázquez, 2010].
Asimismo, diversas experiencias muestran que las plantas
con una alta disponibilidad de flores atraen a los
biorreguladores de las plagas agrícolas [Altieri y
Nicholls, 2007; Mexzón y Chinchilla, 2006; Montero,
2008]; sin embargo, en Cuba y a nivel de los sistemas
agrícolas urbanos se dispone de poca información sobre
las flores que resultan atractivas a la fauna de artrópodos
benéficos.
En este trabajo se determinó la composición sistemática
y la riqueza de los insectos y arañas asociados a las
flores de diferentes especies botánicas, con el propósito
de contribuir al conocimiento de la flora promisoria para
la conservación de enemigos naturales de insectos
fitófagos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se visitaron siete sistemas de producción agrícolas urbanos
ubicados en los municipios de Cerro, Plaza de la
Revolución, Playa y La Habana del Este, de la provincia
de La Habana, en el período 2007-2009.
Se realizaron cinco evaluaciones con una frecuencia semanal
en diferentes especies botánicas. La colecta de
los insectos y arañas se realizó con el auxilio de viales y
aspiradores durante 1 min de observación en Morinda
citrifolia L. (noni), Helianthus annuus L. (girasol),
Coriandrum sativus L. (coriandro), Foeniculum vulgare
Miller (hinojo), Zea mays L. (maíz), Bidens pilosa L.
(romerillo), Psidium guajava L. (guayaba), Tagetes spp.
(flor de muerto), Ocimum bacillicum L. (albahaca blanca)
y Espinacia oleracea L. (espinaca).
Los individuos con síntomas de parasitoidismo se colocaron
en frascos de vidrio transparente, provistos de
papel de filtro embebido en agua con el objetivo de favorecer
la emergencia del adulto, los que se conservaron
en alcohol al 70% y se clasificaron a nivel de
morfoespecies. La determinación taxonómica se realizó
mediante las claves taxonómicas de Alayo (1968,
1976), De Zayas (1981), Gordon (1985), Alayo y Garcés
(1989), así también por comparación con colecciones
biológicas. La identificación de las arañas la realizó el
doctor Giraldo Alayón, aracnólogo del Museo Nacional
de Historia Natural.
Se determinó la composición taxonómica a nivel de clase,
orden, familia, género y especie. Para la evaluación
26/fitosanidad
de la riqueza se consideró el número de especies observadas,
y la frecuencia de aparición fue clasificada en las
clases Constantes (50-100%), Accesorias (25-49%) y
Accidentales (0-24%), según Dennis (2006).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se registraron dos clases, seis órdenes, 16 familias, 23
géneros y 24 morfoespecies, de las cuales se identificaron
15 (Tabla 1). Los artrópodos se agruparon según
sus hábitos en tres grupos funcionales (depredadores,
parasitoides y polinizadores). La mayor riqueza de familias
se encontró en Araneae, Hymenoptera y
Hemiptera, en tanto la mayor riqueza de géneros y especies
asociadas a las flores en Coleoptera y Araneae.
C. sanguinea limbifer presentó la mayor frecuencia de
aparición en las flores, la que se caracteriza por una
amplia distribución en sistemas agrícolas a nivel regional
y en Cuba [González, 2006; Milán et al., 2008;
Matienzo et al., 2008]. Similar tendencia presentó A. mellifera
al registrarse en el 50% de las plantas, lo que
indica que el mantenimiento de plantas florecidas en
estos sistemas de producción no solo posibilita la conservación
de depredadores y parasitoides de insectos
fitófagos, sino también de las abejas, que constituyen
eficientes polinizadores.
En relación con la riqueza taxonómica se constató que
el maíz (Poaceae), la flor de muerto (Compositae), el
noni (Rubiaceae) y el girasol (Compositae) fueron visitadas
por un mayor número de taxas (Fig. 1), resultados
que coinciden con Altieri y Nicholls (2007) y
Nicholls (2008), al documentar numerosas experiencias
sobre la utilización de plantas en floración atractivas
para los enemigos naturales de insectos fitófagos.
Figura 1. Riqueza de artrópodos benéficos en las flores de las
especies evaluadas.

Composición y riqueza de insectos y...
Tabla 1. Composición sistemática de los insectos y arañas que visitaron las flores
Clase Orden Familia Género/especie
Cycloneda sanguinea limbifer Casey*
Psyllobora nana Mulsant*
Coleoptera Coccinellidae
Coleomegilla cubensis Casey*
Hippodamia convergens Guerin*
Scymnus sp.*
Stethorus sp.*
Vespidae Polistes cubensis Lep.*
Braconidae Lysiphlebus testaceipes Cress.**
Hymenoptera
Apis mellifera L.***
Insecta
Apidae
Xylocopa cubaecola Lucas***
Reduviidae Zelus longipes L.*
Hemiptera Anthocoridae Orius insidiosus Say.*
Miridae Nesidiocorus tenuis Reuter*
Diptera
Dolichopodidae Condylostylus sp.*
Tachinidae Morfoespecie 1**
Neuroptera Chrysopidae
Chrysopa poeyi Navás*
Chrysopa sp.*
Thomisidae Misumenops bellulus (Banks) *
Tetragnathidae Leucauge regni Simon *
Chrysso pulcherrima (Mello-Leitão)*
Theridiidae
Arachnida Araneae
Theridula sp.*
Anyphaenidae Morfoespecie 2*
Salticidae Morfoespecie 3*
Araneidae Morfoespecie 4*
*Depredador **Parasitoide ***Polinizador
Tabla 2. Frecuencia de aparición de los insectos y arañas en las plantas evaluadas
Categoría taxonómica
Noni
Girasol
Coriandro
Hinojo
Maíz
Romerillo
Guayaba
Flor de muerto
Albahaca blanca
Espinaca
Frecuencia
de aparición
(%)
Clasificación
Coleoptera
C. sanguinea limbifer + + + + + + + + + + 100 Constante
H. convergens + + 20
C. cubensis + + 20
Scymnus sp. + + 20 Accidental
P. nana + 10
Stethorus sp. + 10
Hymenoptera
P. cubensis + + 20
X. cubaecola + 10
Accidental
A. mellifera + + + + + 50 Constante
L. testaceipes + + 20 Accidental
fitosanidad/27

Matienzo y otros
Diptera
Condylostylus sp. + 10
Tachinidae + 10
Accidental
Hemiptera
Z. longipes + + 20 Accidental
O. insidiosus + + + + 40 Accesoria
N. tenuis + 10 Accidental
Neuroptera
C. poeyi + 10
Chrysopa sp. + 10
Accidental
Araneae
M. bellulus + 10
L. regni + 10
C. pulcherrima + 10
Theridula sp. + 10 Accidental
Anyphaenidae + 10
Salticidae + 10
Araneidae + 10
En particular se destacan los resultados en Tagetes spp.
debido a que en sus inflorescencias se registraron los
depredadores O. insidiosus y arañas de diversas familias
asociados a trips. En este sentido la mayor riqueza
de familias de Araneae se encontró en T. erecta, representadas
por Theridiidae, Thomisidae, Anyphaenidae,
Araneidae y Salticidae.
Sobre las arañas se conoce que en ecosistemas terrestres
constituyen uno de los grupos más abundantes y
diversos debido a su facilidad para dispersarse y colonizar
nuevos hábitats [Halaj et al.,1998; Flórez, 1999],
como sucede en numerosos ecosistemas naturales de la
región neotropical [Rico et al., 2005] y en Cuba en particular
[Alayón, 2000, 2004].
Por sus hábitos depredadores influyen en la densidad y
actividad de numerosos organismos que componen las
cadenas tróficas [Wise, 2002; Ávalos et al., 2009]. Por
tal razón, a nivel de los sistemas agrícolas constituyen
un importante componente de la biodiversidad funcional,
de ahí que el conocimiento de las especies que comúnmente
habitan en organopónicos, huertos intensivos
y otros sistemas de cultivos resulte cada vez de
mayor relevancia.
En general, sobre las relaciones tróficas que se establecen
entre las plantas y los organismos asociados se conoce
que las interacciones entre las flores y sus visitantes
van a estar influenciadas por sus características
morfológicas y la recompensa que estas les ofrece
[Loayza y Ríos, 1999], así también por otros indicadores
como el aroma, la facilidad de acceso a la flor y el ritmo
de disponibilidad [Valdés, 2004].
Así, algunas experiencias refieren que el tamaño y la
forma de las flores determinan en gran medida el enemigo
natural que puede acceder a su polen y néctar,
resultando más atractivas las que son generalmente
pequeñas y relativamente abiertas [Altieri y Nicholls,
2007].
De acuerdo con las características y particularidades
del manejo de los sistemas agrícolas en las ciudades,
los resultados sugieren que las especies botánicas evaluadas
constituyen una importante fuente de recursos
para la alimentación de los enemigos naturales de diversos
organismos nocivos y polinizadores, lo que contribuye
sin duda a la conservación y al aumento de sus
poblaciones en la agricultura urbana.
CONCLUSIONES
• Se determinaron dos clases, seis órdenes, 16 familias,
23 géneros y 15 especies, las que se agruparon
según sus hábitos en tres grupos funcionales
(depredadores, parasitoides y polinizadores).
28/fitosanidad

Composición y riqueza de insectos y...
• Los taxas que presentaron una mayor riqueza de especies
asociadas a las flores fueron Coleoptera > Araneae
> Hymenoptera.
• Cycloneda sanguinea limbifer Casey y Apis mellifera L.
visitaron un mayor número de especies botánicas florecidas.
• Las especies botánicas que presentaron una mayor
riqueza taxonómica de artrópodos fueron Z. mays,
Tagetes spp., M. citrifolia y H. annuus.
REFERENCIAS
Alayo, P. D.: «Los neurópteros de Cuba», Poeyana, Serie B (2):1-127,
Instituto de Ecología y Sistemática, Cuba, 1968.
Alayo, P. D.: «Introducción al estudio de los himenópteros de Cuba.
Superfamilia Vespoidea», Serie Biológica no. 62:17-18, Academia de
Ciencias de Cuba, 1976.
Alayo, P. D.; G. Garcés: Introducción al estudio del orden Diptera en
Cuba, Ed. Oriente, Santiago de Cuba, 1989, pp. 59-61.
Alayón, G.: «Las arañas endémicas de Cuba (Arachnida: Araneae)»,
Rev. Ibérica de Aracnología 2:1-48, España, 2000.
Altieri, M. A.; C. I. Nicholls; M. Fritz: Manage Insects on Your Farm. A
Guide to Ecological Strategies, Sosteinable Agriculture Network,
Handbook Series, Book 7, Beltsville, Md., EE. UU., 2005.
Altieri, M. A.; C. I. Nicholls: Biodiversidad y manejo de plagas en
agroecosistemas. Perspectivas agroecológicas no. 2, Ed. Icaria,
Barcelona, 2007.
Ávalos, G.; M. P. Damborsky; M. E. Bar; E. B. Oscherov; E. Porcel:
«Composición de la fauna de Araneae (Arachnida) de la reserva
provincial Iberá, Corrientes, Argentina», Rev. Biol. Trop. 57 (1-2):339-
351, San José, Costa Rica, 2009.
Dennis, D.: «Ecología de comunidades», curso de posgrado Ecología
de Comunidades, Facultad de Biología, Universidad de La Habana,
2006.
De Zayas, F.: Entomofauna cubana. Sección Oligoneoptera (Ordenes
Hymenoptera y Strepsiptera), t. VIII, Ed. Científico-Técnica, La
Habana, 1981.
Fernández, J. L; G. Garcés; E. Portuondo; P. Valdés; I. Expósito: «Insectos
asociados con flores de malezas del Jardín Botánico de
Santiago de Cuba, con énfasis en Hymenoptera», Rev. Biol. Trop. 49
(3-4):1013-1026, San José, Costa Rica, 2001.
Flórez, E.: «Estructura y composición de una comunidad de arañas
(Araneae) en un bosque muy seco tropical de Colombia», Bol.
Entomol. Venez. 14(1):37-51, julio 1999, http://avepagro.org.ve/
entomol/v14-1/141b0004.html.
González, G.: «Los Coccinellidae de Chile», http://www.coccinellidae.cl
(consultado el 6 de mayo de 2006).
Gordon, R. D.: «Coccinellidae (Coleoptera) of America North of México»,
Journal of the New York Entomological Society 93(1):660-662,
EE. UU., 1985.
Halaj, J.; D.W. Ross; A. R. Moldenke: «Habitat Structure and Prey
Availability As Predictors of the Abundance and Community
Organization of Spiders in Western Oregon Forest Canopies», The
Journal of Arachnology 26:203-220, EE. UU., 1998.
Landis, D. A.; S. D. Wratten; G. A. Gurr: «Habitat Management to Conserve
Natural Enemies of Arthropod Pests in Agriculture», Annual
Review of Entomology 45:175-201, EE. UU., 2000.
Loayza, A.; R. Ríos: «Características del néctar y visitas de insectos a
flores de Nicotiana glauca L. (Solanaceae): ¿Asociadas a cambios
de la temperatura y humedad del ambiente?», Ecología en Bolivia
33:51-61, 1999.
Matienzo, Y.; Ana I. Elizondo; M. Veitía; E. Botta; Y. Grana; H. Carmenate;
M. Ramos; O. Milán; M. Matamoros: «Percepción de los agricultores
sobre las prácticas que contribuyen a la conservación de artrópodos
biorreguladores de plagas en la agricultura urbana de Ciudad de
La Habana», Agricultura Orgánica 14(2):37-39, Actaf, Cuba, 2008.
Matienzo, Y.: «Prácticas agroecológicas para la conservación de enemigos
naturales de las plagas agrícolas en la finca», memorias del
curso-taller Prácticas para el Manejo Agroecológico de Plagas en
Fincas de la Agricultura Suburbana, Programa de Agricultura Suburbana,
Subprograma Manejo Agroecológico de Plagas, Instituto de
Investigaciones de Sanidad Vegetal, La Habana, 2010.
Mexzón, R. G.; C. M. Chinchilla: «Especies vegetales atrayentes de la
entomofauna benéfica en plantaciones de palma aceitera (Elaeis
guineensis Jacq.) en Costa Rica», http://www.asd-cr.com/ASD-Pub/
Bol19/B19Esp.htm (consultado el 2 de mayo de 2006).
Milán, O.; N. Cueto; N. Hernández; T. Ramos; M. Pineda; R. Granda; M.
Peñas; J. Díaz; S. Caballero; I. Essen; T. Corona; L. A. Rodríguez; J.
L. de Armas; J. M. Montalvo; E. Delís: «Prospección de los coccinélidos
benéficos asociados a plagas y cultivos en Cuba», Fitosanidad 12
(2):71-78, La Habana, 2008.
Montero, G. A.: «Comunidades de artrópodos en vegetación de áreas
no cultivadas del sudeste de Santa Fe», Tesis de Maestría en Manejo
y Conservación de Recursos Naturales, Facultad de Ciencias Agrarias,
Universidad Nacional de Rosario, Argentina, 2008.
Nicholls, C. I.: Control biológico de insectos: Un enfoque agroecológico,
Ciencia y Tecnología, Ed. Universidad de Antioquia, Colombia, 2008.
Rico, A.; J. P. Beltrán; A. Álvarez; E. Pérez: «Diversidad de arañas
(Arachnida: Araneae) en el Parque Nacional Natural Isla Gorgona,
Pacífico colombiano», Biota Neotrop. 5(1a):1-12, Brasil, 2005, http:/
/www.scielo.br/pdf/bn/v5n1a/v5n1aa08.pdf (consultado en febrero
del 2010).
Valdés, G.: El polen. Características y explotación. Apicultura, Asociación
Cubana de Técnicos Agrícolas y Forestales, La Habana,
2004, pp. 83-100.
Vázquez, L. L.; Y. Matienzo; M. Veitía; J. Alfonso: Conservación y
manejo de enemigos naturales de insectos fitófagos en los sistemas
agrícolas de Cuba, Inisav, La Habana, 2008.
Vázquez, L. L.: «Manejo de plagas en la agricultura ecológica», Boletín
Fitosanitario, no. 1, Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal,
La Habana, 2010.
Wise, D.: «Efectos directos e indirectos de las arañas en la red trófica
del mantillo del bosque», V Congreso Argentino de Entomología, Buenos
Aires, 18-22 de marzo de 2002, pp. 53-55.
fitosanidad/29

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 31-38
Control químico
EFECTO IN VITRO DE SIETE FUNGICIDAS QUÍMICOS
SOBRE BEAUVERIA BASSIANA (BALS.) VUIL.
Leónides Castellanos González, 1 Berta Lina Muiño García, 2 María E. Lorenzo Nicao, 3 Ana Rodríguez
Fernández 3 y Medardo Gómez albernal 3
1
Centro de Estudio para la Transformación Agraria Sostenible, Universidad de Cienfuegos. Carretera
a Rodas Km 3, Cuatro Caminos, Cienfuegos, Cuba, lcastellanos@ucf.edu.cu
2
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana,
C.P. 11600
3
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera a Palmira Km 4, Cienfuegos, Cuba
RESUMEN
Se estudió el efecto in vitro de siete fungicidas sobre el hongo entomopatógeno
Beauveria bassiana cepa LBb-1. (Bals) Vuil. a concentraciones
de los fungicidas de 10, 100, 200, 500, 1000 y 2000 mg • L –1 .
Se evaluó la inhibición del crecimiento de la colonia del hongo, el
efecto sobre la capacidad esporulativa y la germinación de los
conidios. La DL-50 y la DL-95 del fungicida tebuconazol se estimaron
por debajo de 10 mg • L –1 . La DL-50 para difenoconazol se estimó
en 30,45 mg • L –1 , para mancozeb en 161,49 mg • L –1 , para azoxystrobin
en 1463,11 mg • L –1 y para folpet en 398,92 mg • L –1 . Para óxido cuproso
y zineb la DL-50 fue > 2000 mg • L –1 .La DL-95 para difeconazol se
estimó en 1019,04 mg • L –1 , mientras que para el resto de los fungicidas
se estimaron por encima de 2000 mg • L –1 . Tebuconazol se clasificó
como tóxico para Beauveria bassiana por la escala de la OILB, mientras
que el resto se clasificaron como ligeramente tóxicos. Los siete
fungicidas estudiados se clasificaron como muy tóxicos para el hongo
entomopatógeno de acuerdo con su valor T, y no fueron compatibles
con este. No se observó germinación de los conidios de Beauveria
bassiana a ninguna de las concentraciones ensayadas de
tebuconazol, difenoconazol, mancozeb, azoxystrobin y folpet, pero
sí frente a zineb y óxido cuproso hasta 1000 mg • L –1 y 2000 mg • L –1 ,
respectivamente.
Palabras claves: fungicidas, hongos entomopatógenos, toxicidad,
Beauveria bassiana
ABSTRACT
The effect of seven fungicides on the entomopathogen fungus Beauveria
bassiana strain LBb-1. (Bals) Vuil.) was studied in vitro with fungicides
concentrations of 10, 100, 200, 500, 1000 and 2000 mg • L –1 . The
inhibition of fungus colony growth, the effect on spore production
capacity and conidia germination were evaluated. DL-50 and the DL-
95 of fungicide tebuconazol were considered below 10 mg • L –1 . DL-50
for difenoconazol was considered in 30.45 mg • L –1 , for mancozeb it was
161.49 mg • L –1 , for folpet it was 398.92 mg • L –1 and for azoxystrobin it was
1463.11 mg • L –1 . DL-50 for copper oxide and zineb were > 2000 mg • L –1 .
DL-95 for difeconazol was considered as 1019.04 mg • L –1 , while for the
rest of the fungicides it was considered above 2000 mg • L –1 .
Tebuconazol was classified as toxic for Beauveria bassiana by the
OILB scale, while the rest were classified as lightly toxic. The seven
studied fungicides were classified as very toxic for the fungus
according to their T value, and they were not compatible with this.
Conidia germination of Beauveria bassiana were not observed in none
of tebuconazol, difenoconazol, mancozeb, azoxystrobin and folpet
concentrations assayed, while in front of zineb and copper oxide they
germinated up to 1000 mg • L –1 and 2000 mg • L –1 , respectively.
Key words: fungicides, entomopathogen fungi, toxicity, Beauveria
bassiana
INTRODUCCIÓN
Los bioplaguicidas constituyen un importante medio
de control biológico de plagas en la agricultura, con
probada efectividad en muchos países [Batista, 1997].
El grupo más importante de hongos entomopatógenos
son los deuteromicetos u hongos imperfectos, en los
cuales se desconoce la fase sexual. Los géneros más
importantes son Beauveria, Verticillium, Metarhizium,
Hirsuthella y Paecilomyces [Fernandez-Larrea, 2001].
El hongo Beauveria bassiana (Bals.) Vuil. se ha estudiado
como agente de control de insectos plaga pertenecientes
a diferentes órdenes. En cultivos de la agricultura
urbana [Minag, 2007] lo recomendaron para el
control de varias especies de crisomélidos que afectan a
muchos cultivos hortícolas.
Por otra parte, numerosas enfermedades afectan los
cultivos sembrados en canteros en organopónicos y
Recibido: 23/2/11
Aceptado: 28/3/11
fitosanidad/31

Castellanos y otros
huertos intensivos [Castellanos et al., 2005], las cuales
requieren del empleo de fungicidas químicos para su
control, que pueden afectar los hongos entomopatógenos
que se aplican para el control de insectos plaga.
Entre los fungicidas que se recomiendan para el control
de enfermedades fúngicas en la agricultura urbana
se encuentran difenoconazol, oxicloruro de cobre,
mancozeb, zineb, azoxystrobin, matalaxyl y azufre
[Minag, 2007]. Estos están autorizados en muchos cultivos
en Cuba donde se realizan tratamientos con hongos
entomopatógenos, entre ellos con B. bassiana
[CNSV, 2005].
El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de
siete fungicidas que se recomiendan para el control de
enfermedades en diferentes cultivos en Cuba sobre el
hongo entomopatógeno Beauveria bassiana.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se seleccionaron siete fungicidas de diferente grupo
químico, los cuales se emplean con frecuencia para el
control de enfermedades fúngicas en cultivos hortícolas
tanto en la agricultura urbana como en áreas rurales,
según recomendaciones del Centro Nacional de Sanidad
Vegetal [CNSV, 2005].
Fungicida Grupo químico Dosis de campo
(mg ⋅ L –1 ia)
Difenoconazol Triazol 100 mg ⋅ L –1
Tebuconazol Triazol 200 mg ⋅ L –1
Folpet Ftalimida 1000-1200 mg ⋅ L –1
Zineb Ditiocarbamato 2000 mg ⋅ L –1
Mancozeb Ditiocarbamato 2000 mg ⋅ L –1
Azoxystrobin Estrobirulina 500 mg ⋅ L –1
Óxido cuproso Compuesto orgánico (cúprico) 2000 mg ⋅ L –1
Se empleó para los ensayos al hongo entomopatógeno
Beauveria bassiana cepa LBb-1, obtenido de la colección
del Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal de
Cienfuegos. Esta cepa se conservó a 9°C en tubos sobre
el medio de cultivo agar-Sabouraud-dextrosa.
Las soluciones de los fungicidas se prepararon en agua
previamente esterilizada a partir de una solución madre
de 5000 mg • L –1 i.a. de cada producto, de la cual
derivaron las diluciones de menor concentración.
Los medios se envasaron en erlermeyers y se esterilizaron
en una autoclave por 15 min a 121°C, luego se
dejaron enfriar hasta 45°C y se añadieron las cantidades
correspondientes de las soluciones de cada
fungicida, hasta obtener el rango de concentraciones
de estudio de 10, 100, 200, 500, 1000 y 2000 mg • L –1 .
Posteriormente se extendieron en placas de Petri de
9 cm de diámetro, sobre las que se ubicaron discos de
0,5 cm de diámetro de los cultivos del hongo de cinco
días de edad. Se incluyó una variante con medio de
cultivo sin adicionar fungicida como testigo, y cada
variante se replicó cinco veces. Las placas se incubaron
a 27°C en la oscuridad, y la evaluación se realizó a
los diez días, la cual consistió en medir el diámetro de
la colonia del hongo en milímetros. Con los datos obtenidos
se calculó el porcentaje de inhibición del crecimiento
mediante la fórmula de Abbot [Ciba Geygi,
1981].
Porciento de inhibición =
Crecimiento colonia testigo – crecimiento colonia
Crecimiento colonia testigo
concentración
x
100
Se determinaron los valores de DL-50 y DL-95 según la
curva dosis del fungicida-porcentaje de inhibición del
crecimiento del hongo a los diez días de iniciado el ensayo,
para lo cual se trabajó con un nivel de probabilidad
de error del 5%.
Se clasificó la toxicidad del fungicida por los valores de inhibición
del crecimiento de la colonia a los diez días a la dosis de
campo de cada producto [CNSV, 2005], en una solución final
de 400 L • ha –1 , con la escala de la Organización Internacional
de Lucha Biológica (OILB) [Viñuela et al., 1993].
32/fitosanidad

Efecto in vitro de siete fungicidas químicos sobre...
Inhibición
del crecimiento (%)
Clasificación
< 30% Inofensivo
30-75% Ligeramente tóxico
75-90% Moderadamente tóxico
> 90% Tóxico
Para medir el efecto de cada fungicida sobre la capacidad
esporulativa (conidiogénesis) se prepararon los
medios de forma similar a como se describió anteriormente.
La evaluación se inició a partir de los tres días
y finalizó a los diez, y se enfatizó en la última evaluación
para hacer las comparaciones. El parámetro medido
como indicador del efecto fungicida fue la intensidad
de esporulación, para lo cual se tomó un disco de
0,5 cm de diámetro del hongo por placa por día y se
colocó en 2 mL de agua destilada estéril con tween al
0,01%. Se agitó reiteradamente la suspensión y más
tarde se realizaron los conteos (conidios por centímetro
cuadrado) en la cámara de Neubauver.
La compatibilidad de cada fungicida con el hongo
entomopatógeno se calculó según el valor T propuesto
por Alves et al. (1998), y se emplearon los dos
indicadores evaluados anteriormente: porcentaje de
inhibición del crecimiento y el efecto sobre la capacidad
esporulativa a través de la fórmula
T = 20 [CV] + 80 [ESP] / 100
donde:
T: Valor corregido para la clasificación del producto
CV: Porcentaje de crecimiento vegetativo con relación
al testigo
ESP: Porcentaje de esporulación con relación al testigo.
Los valores de T se clasificaron según la escala establecida
como:
0 a 30 Muy tóxico
31a45 Tóxico
46 a 60 Moderadamente tóxico
> 60 Compatible
Se determinó el efecto de cada fungicida sobre la
germinación del hongo entomopatógeno, para lo cual
se emplearon portaobjetos, sobre los que se colocaron
0,5 mL del medio de cultivo envenenado con las diferentes
concentraciones de cada fungicida; luego se le
añadió 0,1 mL de una suspensión conidial de 10 8 conidios/mL
del hongo y se incubaron a 27°C en la oscuridad.
Se utilizaron cinco portaobjetos (réplicas) por variante,
los cuales se mantuvieron en cámaras húmedas
dentro de placas de Petri. El porcentaje de germinación
se determinó a las 16 y 24 h por medio de un microscopio
óptico. Se contaron 100 conidios por cada réplica.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tebuconazol presentó el 100% de inhibición del crecimiento
micelial de Beauveria bassiana a todas las
concentraciones del fungicida en estudio, con diferencia
estadística siempre con el resto, excepto a la
concentración de 2000 mg • L –1 , en que difenoconazol
también manifestó el 100% de inhibición (Tabla 1).
Le siguió en segundo orden difenoconazol, que presentó
siempre diferencia estadística con el resto de
los fungicotas, excepto con mancozeb a 10 mg • L –1 ,
concentración a la que ambos fungicidas presentaron
similares niveles de inhibición del crecimiento del
hongo.
Zineb resultó ser el fungicida de menor efecto inhibitorio
sobre el crecimiento micelial de Beauveria bassiana,
y manifestó siempre diferencia estadística con el resto
de los fungicidas. Mancozeb y folpet resultaron intermedios,
seguidos de azoxystrobin y óxido cuproso, al
manifestar niveles de inhibición del crecimiento micelial
que a veces diferían estadísticamente y otras no.
La DL-50 y la DL-95 del fungicida tebuconazol se ubicaron
fuera del rango de concentraciones ensayadas,
por ser muy inferiores a 10 mg • L –1 . La DL-50 para
difenoconazol se estimó en 30,45 mg • L –1 , para
mancozeb en 161,49 mg • L –1 , para azoxystrobin en
1463,11 mg • L –1 y para folpet en 398,92 mg • L –1 . Para
óxido cuproso y zineb la DL-50 fue > 2000 mg • L –1.
La DL-95 para difeconazol se estimó en 1019,04 mg • L -1 ,
mientras que para el resto con excepción, del
tebuconazol, al cual se había hecho referencia ya, se
estimaron por encima de 2000 mg • L –1. , lo que evidencia
que estos fungicidas triazólicos afectan mucho más
que el resto el crecimiento micelial de B. bassiana (Tabla
2).
fitosanidad/33

Castellanos y otros
Tabla 1. Porcentaje de inhibición del crecimiento in vitro de Beauveria bassiana frente los siete fungicidas en estudio
Fungicidas
Concentraciones (mg ⋅ L –1 )
10 mg ⋅ L –1 100 mg ⋅ L –1 200 mg ⋅ L –1 500 mg ⋅ L –1 1000 mg ⋅ L –1 2000 mg ⋅ L –1
Difenoconazol 42,4 b 63,6 b 69,7 b 78,8 b 98,8 b 100 a
Tebuconazol 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
Azoxystrobin 27,5 d 28,5 e 40,0 c 48,5 c 45,7 e 54,2 d
Óxido cuproso 33,9 c 36,2 d 36,2 d 44,5 d 44,6 e 47,5 e
Folpet 21,4 e 40,5 c 40,0 c 44,2 d 47,6 d 57,1 c
Zineb 18,8 f 25,8 f 26,7 e 33,3 e 35,3 f 36,9 f
Mancozeb 40,9 b 41,1 c 41,1 c 48,15 c 64,7 c 73,5 b
E. típico* 0,036 0,04 0,09 0,05 0,039 0,03
CV (%) 1,39 2,05 3,29 1,91 1,91 0,92
Letras desiguales difieren según el test de rangos múltiples de Duncan para p ≤ ? 0,05.
Tabla 2. Valores de DL-50 y DL-95 de los fungicidas para el hongo entomopatógeno según valores
de inhibición del crecimiento micelial a los diez días
Fungicidas
Ecuación
de regresión
Coeficiente
de determinación
DL-50
(mg ⋅ L –1 )
DL-95
(mg ⋅ L –1 )
Difenoconazol Y = 1,0789X + 3,3992 0,80 30,45 1019,04
Tebuconazol – – > 2000
Folpet Y = 0,4221X + 3,9022 0,7515 398,92 >> 2000
Zineb Y = 0,2507X + 3,8526 0,9777 > 2000 >> 2000
Mancozeb Y = 0,3695X + 4,1841 0,7053 161,49 > 2000
Óxido cuproso Y = 0,1635X + 4,3673 0,8321 > 2000 >> 2000
Todos los fungicidas químicos estudiados manifestaron
algún nivel de toxicidad con respecto a la inhibición
del crecimiento micelial sobre Beauveria bassiana
cepa LBb-1, aunque tebuconazol fue el más destacado
en este sentido, por lo que se clasificó como tóxico por
la escala de la OILB, mientras que el resto se ubicó en
la clasificación de ligeramente tóxico. De acuerdo con
esta clasificación, aunque seis fungicidas se ubicaron
en la categoría como ligeramente tóxicos, el de menor
toxicidad, entre ellos, sería zineb, que solo manifestó el
36,9% de inhibición del crecimiento micelial a la dosis
de campo (2000 mg • L –1 ), y cuya DL-50 estuvo por
encima de ese valor, lo cual ocurrió también para el óxido
cuproso (Tabla 3).
Tabla 3. Clasificación de la toxicidad de los fungicida
sobre Beauveria bassiana cepa LBb-1 a las dosis de campo
Toxicidad (OILB)
Fungicidas
Inhibición
del crecimiento (%)
Clasificación
Difenoconazol 63,6 Ligeramente tóxico
Tebuconazol 100,0 Tóxico
Azoxystrobin 48,5 Ligeramente tóxico
Folpet 47,6 Ligeramente tóxico
Zineb 36,9 Ligeramente tóxico
Mancozeb 73.5 Ligeramente tóxico
Óxido cuproso 47,5 Ligeramente tóxico
34/fitosanidad

Efecto in vitro de siete fungicidas químicos sobre...
Los fungicidas triazólicos difenoconazol y tebuconazol
inhibieron totalmente la producción de las conidios de
Beauveria bassiana a todas las concentraciones en estudio,
lo que ocurrió de forma similar para mancozeb,
excepto a 10 mg • L –1 , donde ocurrió la conidiogénesis,
pero con una disminución sensible en la producción de
esporas con respecto al testigo (Tabla 4). El hongo
entomopatógeno esporuló a todas las concentraciones
ensayadas de óxido cuproso y de azoxystrobin; sin
embargo, la conidiogénesis no se produjo en el medio
envenenado con folpet a 500, 1000 y 2000 mg • L –1 , y
con zineb a 2000 mg • L –1 .
Tabla 4. Esporulación de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de los fungicidas en estudio a los diez días
Fungicidas
Concentraciones (mg ⋅ L –1 )
Testigo 10 mg ⋅ L –1 100 mg ⋅ L –1 200 mg ⋅ L –1 500 mg ⋅ L –1 1000 mg ⋅ L -1 2000 mg ⋅ L –1
Difenoconazol 2,2 x 10 6 0 0 0 0 0 0
Tebuconazol 2,2 x 10 6 0 0 0 0 0 0
Azoxystrobin 9,0 x 10 7 1,0 x 10 8 2,7 x 10 7 2,6 x 10 7 2,1 x 10 7 6,3 x 10 6 3,1 x 10 6
Óxido cuproso 1,7 x 10 8 1,9 x 10 8 1,0 x 10 8 6,2 x 10 7 3,4 x 10 7 2,8 x 10 7 3,8 x 10 7
Folpet 1,6 x 10 8 4,2 x 10 7 1,6 x 10 7 1,3 x 10 7 0 0 0
Zineb 1,78 x 10 8 5,7 x 10 7 3,2 x 10 7 8,0 x 10 7 3,0 x 10 6 2,0 x 10 6 0
Mancozeb 9,7 x 10 7 1,8 x 10 6 0 0 0 0 0
Es de señalar que en los medios de cultivos envenenados
con azoxystrobin y óxido cuproso se produjo una
estimulación de la conidiogénesis de Beauveria bassiana,
y aunque el hongo siempre esporuló frente a estos
fungicidas a partir de 100 mg • L –1 , se observó una disminución
de la producción de conidios en la medida en
que aumentó la concentración del producto con respecto
a testigo sin envenenar (Tabla 5). Para los fungicidas
folpet, mancozeb y zineb, en todos los casos en que se
produjo la conidiogénesis se manifestó una reducción
notable de la producción de conidios con respecto al
testigo.
Es importante señalar que zineb, que manifestó menor
efecto sobre el crecimiento micelial del hongo y la DL-50
más alta, no permitió su esporulación a la dosis de campo,
mientras que azoxystrobin sí consintió que
Beauveria bassiana esporulara a una concentración cuatro
veces por encima de su dosis de empleo en campo
(500 mg • L –1 ), lo cual sería interesante comprobar bajo
estas condiciones. Para el caso de óxido cuproso se produjo
la conidiogénesis del hongo a la dosis de campo,
aunque solo con una de la producción de conidios que
representó el 22% de la que se observó en el testigo sin
envenenar.
Tabla 5. Pocentajes de la esporulación de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones
de los fungicidas con respecto al testigo a los diez días
Concentraciones (mg ⋅ L –1 )
Fungicidas
10 mg ⋅ L –1 100 mg ⋅ L –1 200 mg ⋅ L –1 500 mg ⋅ L –1 1000 mg ⋅ L –1 2000 mg ⋅ L –1
Difenoconazol 0 0 0 0 0 0
Tebuconazol 0 0 0 0 0 0
Azoxystrobin 122,2 30,0 28,88 23,33 7,0 3,44
Óxido cuproso 111 58,8 36,4 20,0 16,47 22,3
Folpet 26,25 10,0 8,12 0 0 0
Zineb 32,02 17,9 44,9 1,68 1,12 0
Mancozeb 1,85 0 0 0 0 0
fitosanidad/35

Castellanos y otros
Los siete fungicidas estudiados se clasificaron como
muy tóxicos para Beauveria bassiana cepa LBb-1, de
acuerdo con su valor T. Óxido cuproso y azoxystrobin
reportaron los valores T más altos, pero no sobrepasaron
el valor de 30, por lo se que consideran muy tóxicos
(Tabla 6).
Tabla 6. Clasificación de la toxicidad y la compatibilidad
de los fungicidas con Beauveria bassiana cepa LBb-1
a las dosis de campo
Compatibilidad
Fungicidas
[Alves et al.,1998]
Valor T Clasificación
Difenoconazol 7,28 Muy tóxico
Tebuconazol 0 Muy tóxico
Azoxystrobin 28,90 Muy tóxico
Folpet 8,58 Muy tóxico
Zineb 12,62 Muy tóxico
Mancozeb 5,3 Muy tóxico
Óxido cuproso 28,38 Muy tóxico
No se observó germinación de los conidios de Beauveria
bassiana a ninguna de las concentraciones ensayadas
de tebuconazol, difenoconazol, mancozeb,
azoxystrobin y folpet. Los conidios del hongo solo
germinaron frente a zineb hasta 1000 mg • L –1 (valor
inferior a la dosis de campo) y frente a óxido
cuproso a todas las concentraciones. Es importante
destacar que a la dosis de empleo en el campo del
óxido cuproso se observó el 99% de germinación (Tabla
7).
Tabla 7. Porcentaje de germinación de los conidios de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones
de los fungicidas en estudio a las veinticuatro horas
Concentraciones (mg ⋅ L –1 )
Fungicidas Testigo
10 mg ⋅ L –1 100 mg ⋅ L –1 200 mg ⋅ L –1 500 mg ⋅ L –1 1000 mg ⋅ L –1 2000 mg ⋅ L –1
Difenoconazol 97,0 0 0 0 0 0 0
Tebuconazol 97,0 0 0 0 0 0 0
Azoxystrobin 100 7,0 0 0 0 0 0
Óxido cuproso 99,2 98,8 97,8 97,8 91,2 99,0 99,0
Folpet 100 7 0 0 0 0 0
Zineb 99,2 100 99,6 98,4 24,8 30,0 0
Mancozeb 100 0 0 0 0 0 0
Los presentes resultados indican que debe tenerse extremo
cuidado al aplicar estos fungicidas en áreas sometidas
a tratamientos con Beauveria bassiana, ya que
todos afectaron el creciendo micelial del hongo, la
conidiogénesis (aunque azoxystrobin y óxido cuproso
lo hicieron en menor medida) y la germinación de los
conidios (con excepción del óxido cuproso). Tebuconazol
se clasificó como tóxico, y difenoconazol, mancozeb,
azoxystrobin, óxido cuproso, zineb y folpet como ligeramente
tóxicos, según la escala de la OILB [Viñuela et
al., 1993], mientras que según el valor T [Alves et al.,
1998], todos los fungicidas se clasificaron muy tóxicos,
y por lo tanto incompatibles con B. bassiana. Resultó
de interés la baja afectación de óxido cuproso sobre la
germinación de los conidios del hongo, lo cual pudiera
dar la posibilidad de aplicar el entomopatógeno después
de tratamientos con el fungicida con un riesgo
mínimo de afectar la germinación de los conidios, pero
36/fitosanidad

Efecto in vitro de siete fungicidas químicos sobre...
con un riesgo grande de que se afecten las colonizaciones
anteriores del entomopatógeno.
No se han encontrado trabajos del efecto de fungicidas
sobre B. bassiana en Cuba, pero sí en Lecanicillium
lecanii [Muiño y Larrinaga, 1998] y Trichoderma spp.
[Muiño et al., 2001]. Sobre este último los fungicidas
menos tóxicos resultaron oxicloruro de cobre y zineb,
tendencia observada también en la presente investigación
con zineb y óxido cuproso. Por otra parte, el herbicida
Quizolofop-p etilo resultó ligeramente tóxico
sobre Beauveria bassiana cepa LBb-1 y Lecanicillium
lecanii cepa Y-57, dos hongos entomopatógenos que se
emplean en el cultivo de la papa en Cuba, según la escala
de la OILB, mientras que según el valor T, este herbicida
se clasificó como compatible para Lecanicillium
lecanii y muy tóxico para Beauveria bassiana, lo que
da una medida de la alta sensibilidad de este último
hongo entomopatógeno a los químicos [Castellanos et
al., 2008]. Siete fungicidas evaluados frente a Beauveria
bassiana resultaron muy tóxicos a este hongo
entomopatógeno, mientras que de ellos solo cinco alcanzaron
esta categoría frente a Metarhizium anisopliae
(Metsch.) Sorok., lo cual también evidenció mayor efecto
de los fungicidas sobre el primero [Loureiro et al., 2002].
Loureiro et al. (2002) clasificaron a tebuconazol y
mancozeb como muy tóxicos sobre Beauveria bassiana
por obtenerse con ellos valores de T = 0, lo que discrepa
de los presentes resultados para el último fungicida
por el valor alcanzado, pero no por la clasificación obtenida.
Óxido cuproso y folpet fueron clasificados también
por los mismos autores como muy tóxicos al alcanzar
valores T de 10,30 y 27,32, respectivamente, con
lo cual coincide la clasificación obtenida en el presente
estudio.
Siete fungicidas evaluados por Loureiro et al. (2002)
frente a Beauveria bassiana resultaron muy tóxicos a
este hongo entomopatógeno, mientras que de ellos solo
cinco alcanzaron esta categoría frente a Metarhizium
anisopliae (Metsch.) Sorok., lo que evidenció mayor
efecto de los fungicidas sobre el primero.
Ante la necesidad que se presenta en ocasiones de hacer
tratamientos foliares con fungicidas químicos contra
las enfermedades en organopónicos y huertos intensivos
[Minag, 2002, 2007] y también en muchos
cultivos hortícolas en áreas donde se realizan tratamientos
con Beauveria bassiana, deben tenerse en cuenta los
presentes resultados, y evitar los tratamientos con
difenoconazol y tebuconazol, que aunque son más efectivos
contra los hongos fitopatógenos, tienen mayor
nivel de toxicidad sobre este entomopatógeno, a pesar
de ser sistémicos, selectivos y aplicarse a bajas dosis, y
se debe utilizar azoxystrobin, que fue el de menor efecto
negativo, o priorizar los fungicidas de contacto. Entre
estos últimos debe priorizarse el empleo de óxido
cuproso, sobre todo si es de origen mineral y está autorizado
para la producción orgánica, y en segunda instancia
a zineb, que evidenció menor inhibición sobre el
crecimiento micelial del hongo, la conidiogénesis y la
germinación de los conidios que mancozeb y folpet.
CONCLUSIONES
• Tebuconazol se clasificó como tóxico para Beauveria
bassiana cepa LBb-1 por la escala de la OILB, mientras
que difenoconazol, mancozeb, azoxystrobin,
folpet, óxido cuproso y zineb se clasificaron como
ligeramente tóxicos.
• Los siete fungicidas estudiados se clasificaron como
muy tóxicos para Beauveria bassiana cepa LBb-1 de
acuerdo con su valor T, y no son compatibles con el
hongo entomopatógeno.
• No se observó germinación de los conidios de
Beauveria bassiana a ninguna de las concentraciones
ensayadas de tebuconazol, difenoconazol, mancozeb,
azoxystrobin y folpet, pero sí frente a zineb y óxido
cuproso hasta 1000 mg • L –1 y 2000 mg • L –1 , respectivamente.
REFERENCIAS
Alves, S. B.; A. Moino; J. E. M. Almeida: «Produtos fitossanitários e
entomopatógenos», Controle microbiano de insetos, FEALQ,
Piracicaba, Brasil, 1998, pp. 217-238.
Batista, S.: «Seguridad de los agentes de control microbianos», O.
Biológico 59(2):79-86, São Paulo, Brasil, 1997.
Castellanos, L.; R. Mur; J. L. Ayala; C. Ferrer: «Principales enfermedades
fúngicas observadas en canteros de organopónicos y huertos
intensivos y su manejo en Venezuela», memorias del XIX Congreso
Venezolano de Fitopatología, Barquisimeto, 2005.
Castellanos, L.; M. E. Lorenzo; B. L. Muiño; A. Rodríguez: «Efecto de
quizalofop-p etilo sobre Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. y
Lecanicillium (Verticillium) lecanii (Zimm.) Zare & Gams) in vitro»,
Fitosanidad 12(1):45-50, La Habana, 2008.
Ciba Geigy: Manual de ensayos de campo en producción vegetal, 2. a
ed., Basilea, Suiza, 1981.
CNSV: Lista Oficial de Plaguicidas Autorizados, Departamento Registro
de Plaguicidas, CNSV, Minag, La Habana, 2005.
Fernández-Larrea, O.: Temas interesantes acerca del control microbiológico
de plagas, Ed. Cidisav, Inisav, La Habana, 2001.
Loureiro, E. de S.; A. Moino; A. Arnosti; G. C. Souza: «Efeito de produtos
fitossanitários químicos utilizados em alface e crisântemo sobre
fungos entomopatogênicos», Neotropical Entomology 31 (2): 263-
269, Brasil, 2002.
fitosanidad/37

Castellanos y otros
Minag: Manual técnico de organopónicos y huertos intensivos, Minag,
La Habana, 2000.
Minag: Manual técnico para organopónicos, huertos intensivos y
organoponía semiprotegida, Minag, La Habana, 2007.
Muiño, B. L.; L. Larrinaga: «Efecto de los plaguicidas sobre Verticillium
lecanii», Fitosanidad 2(1-2):33-35, La Habana, 1998.
Muiño, B. L.; M. Sáenz; M. Stefanova; A. Porras; I. Díaz: «Compatibilidad
de Trichoderma spp. con algunos plaguicidas y fertilizantes en el
cultivo del tabaco», Fitosanidad 5(2):3-9, La Habana, 2001.
Viñuela, E.; J. A. Jacas; V. Marco; A. Adrón; F. Badia: «Los efectos de
los plaguicidas sobre los organismos beneficiosos en la agricultura
y el grupo de trabajo de la OILB. Plaguicidas y organismos beneficiosos
I. Insecticidas y acaricidas», Phytoma 45:18-25, España, 1993.
38/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 39-43
Control biológico
IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE SEIS AISLADOS
PERTENECIENTES AL GÉNERO BACILLUS PROMISORIOS PARA
EL CONTROL DE RHIZOCTONIA SOLANI KÜNH Y
SCLEROTIUM ROLFSII SACC.
Acenet I. Sosa López, 1 Victoria Pazos Álvarez-Rivera, 2 Dania Torres Campos 2 y Luis Casadesús Romero 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana,
C.P. 11600, asosa@inisav.cu
2
Facultad de Biología, Universidad de La Habana. Calle 25 no. 455 e/ J e I, La Habana, C.P. 10400
RESUMEN
En la actualidad la identificación de los microorganismos se realiza
por varios métodos. Existen métodos clásicos que utilizan como
criterios de diferenciación los caracteres fenotípicos morfológicos y
fisiológicos. Los kits miniaturizados, como los API 50CHB para Bacillus
ayudan a caracterizar la fisiología de las bacterias pertenecientes a
este grupo, de manera fácil y rápida; además, resultan muy útiles
para la identificación hasta el nivel de especie por su elevada precisión.
La observación de la morfología y esporulación, la respuesta a
la tinción de Gram y algunas pruebas bioquímicas permiten, en el
caso de Bacillus spp., ubicarlos dentro de su género. El objetivo de
esta investigación fue caracterizar morfológica, bioquímica y
fisiológicamente seis aislados de suelo y rizosfera pertenecientes al
género Bacillus con capacidad antagónica frente a Rhizoctonia solani
y Sclerotium rolfsii (Sr.), con la utilización del API 50 CHB. Tres de los
aislados resultaron pertenecer a la especie de Bacillus subtilis y otro
a B. megaterium con más del 95% de confiabilidad, además un aislado
de B. licheniformis y otro de B. circulans, ambos con el 82,7%.
Palabras claves: Bacillus, identificación, antagonismo, Rhizoctonia
solani, Sclerotium rolfsii
ABSTRACT
Microorganism identification is realized by several methods, currently.
Classical methods utilize phenotypic, morphologic and physiological
characters as differentiation criteria. Commercial miniaturized kits
as API 50CHB for Bacillus, helps to characterize physiology of this
kind of bacteria in an easy and fast way; furthermore they are useful
for identification until species level due to their high precision.
Observation of morphology and sporulation, the answer to Gram
tinction and some biochemical tests permit, in the case of Bacillus
spp., put them within they genera. The objective of this investigation
was to characterize morphologic, biochemical and physiologically
six isolated of genera Bacillus from soil and rhizosphere with
antagonistic capability in front of Rhizoctonia solani and Sclerotium
rolfsii (Sr.), with the utilization of the API 50 CHB. Three of the isolated
proved to belong to species Bacillus subtilis and another one to B.
megaterium with over than 95% of reliability, also one isolated of B.
licheniformis and another one of B. circulans, both with 82.7%.
Key words: Bacillus, identification, antagonism, Rhizoctonia solani,
Sclerotium rolfsii
INTRODUCCIÓN
Una nueva etapa para la taxonomía bacteriana tuvo
lugar en 1980, cuando varios expertos de todo el mundo
se reunieron para confeccionar la Lista de Nombres
Bacterianos Aprobados [Skerman et al., 1980], donde
se concibieron 38 especies de bacterias aerobias
formadoras de endosporas, de las cuales 31 fueron agrupadas
dentro del género Bacillus y siete dentro de otros
géneros de bacterias formadoras de endosporas. Esta
clasificación no se ha mantenido. La introducción de
nuevas técnicas moleculares como los análisis de secuencias
ha contribuido a la separación de especies del género
y la creación de nuevos taxas donde ubicarlos, siendo
la comparación de secuencias del gen que codifica
para la subunidad 16S la base de la sistemática moderna
[Stackebryt y Swidersky, 2002].
En la actualidad la identificación de los microorganismos
se realiza por varios métodos. Existen métodos
clásicos que utilizan como criterios de diferencia-
Recibido: 28/1/11
Aceptado: 24/2/11
fitosanidad/39

Sosa y otros
ción caracteres fenotípicos como los morfológicos y fisiológicos
que se describen en el Manual de Clasificación
de Bergey [Claus y Berkeley, 1986].
En el caso de los Bacillus spp., la observación del fenotipo
permite ubicarlo dentro del género Bacillus, pero muchas
veces no resulta suficiente para una completa identificación.
Por esa razón muchos investigadores acuden
a técnicas más sofisticadas, como los ensayos moleculares
basados en el análisis del genotipo de los microorganismos.
La determinación de la composición de bases
del ácido desoxirribonucleico (ADN), el estudio de
la hibridación de ácidos nucleicos y la secuenciación de
ácidos nucleicos son tipos de análisis que se pueden realizar
sobre ácidos nucleicos aislados y que proporcionan
información acerca del genotipo [Reinoso et al.,
2006; Fritze, 2004].
Los kits de API 50CHB para Bacillus, introducidos en
el mercado mundial en los últimos tiempos, se utilizan
mucho porque ayudan a caracterizar la fisiología de
estos microorganismos de una manera fácil y rápida,
además de permitir caracterizar el catabolismo de los
aislados, y en la mayoría de los casos la identificación
hasta especie con precisiones del orden del 76-97% [Entis
et al., 2001].
El objetivo de esta investigación fue caracterizar
morfológica, bioquímica y fisiológicamente los aislados
de suelo y rizosfera B-4, B-10, B-14, B-15, B-21 y B-42
pertenecientes al género Bacillus con capacidad antagónica
frente a Rhizoctonia solani (Rs-10) y Sclerotium
rolfsii (Sr.).
MATERIALES Y MÉTODOS
Se empleó la cepa de Bacillus licheniformis (Weigmann)
Chester (RI-75) perteneciente al Centro de Estudios Aplicados
al Desarrollo de la Energía Nuclear (CEADEN) como
cepa de referencia, y los aislados de suelos y rizosfera B-4,
B-10, B-14, B-15, B-21 y B-42 del género Bacillus y con
capacidad antagónica frente a Rhizoctonia solani (Rs-10)
y Sclerotium rolfsii (Sr).
Los seis aislados se caracterizaron morfológica y
fisiológicamente según las pruebas descritas en el Manual
de Clasificación de Bergey [Claus y Berkeley, 1986].
La identificación se complementó por medio de la utilización
del sistema API 50 CHB para el género Bacillus.
Para la identificación de Bacillus spp. se emplearon cultivos
bacterianos de 18 h y se realizaron las siguientes
pruebas bioquímicas (con dos réplicas en cada caso):
Tinción de Gram. Producción de la enzima catalasa.
Posición de la espora (terminal, central o subterminal).
Medio I (producción de ácido a partir de glucosa). Medio
II (producción de gas a partir de glucosa). Medio
III (producción de acetoína a partir de glucosa)
(Voges-Proskauer). Hidrólisis de la gelatina. Hidrólisis
del almidón. Utilización de citrato. Crecimiento en agar
anaerobio. Crecimiento en NaCl al 7%. Reducción de
nitratos a nitritos. Prueba de la lecitinasa. Crecimiento
a 45°C y finalmente crecimiento a 55°C.
Se empleó el sistema de API 50 CHB concebido para
caracterizar el metabolismo de los carbohidratos de
Bacillus. La identificación de los aislados se realizó
mediante la utilización de la base de datos APILAB,
empleada en estos ensayos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Identificación de los aislamientos
De acuerdo con las pruebas bioquímicas realizadas, los
aislamientos de Bacillus B-4, B-10, B-14, B-15, B-21 y
B-42 presentaron tinción de Gram positiva, endospora
de posición central y forma elipsoidal, crecimiento
anaerobio facultativo, utilización de citratos, hidrólisis
del almidón positiva, Voges Proskauer positivo, crecimiento
en NaCl al 7% y a 45°C (Tabla 1).
Los análisis de perfil bioquímico aportados por la base
de datos APILAB del test API 50 CHB para Bacillus
permitieron identificar, de una manera rápida y sencilla,
los aislados seleccionados hasta especie. Tres de los
aislados (B-4, B-21 y B-42) fueron identificados como
Bacillus subtilis Cohn, y los aislados B-10, B-14 y B-15
como B. megaterium 2 de Bary, B. licheniformis
Weigmann y B. circulans 1 Jordan, respectivamente
(Tabla 2).
Guinebretiere et al. (2001) realizaron un estudio en el
que identificaron 119 aislados de Bacillus mediante el
sistema API 50 CHB/20 E y técnicas moleculares, basadas
en la amplificación y secuenciación de su material
genético, lo que les permitió comparar los resultados en
ambos casos. Estos autores concluyeron que para el caso
de las especies pertenecientes al grupo B. subtilis el grado
de discriminación entre B. subtilis, B. licheniformis
y B. amyloquefaciens puede ser bajo si se usa el sistema
API 50 CHB/20 E. De igual forma, cepas pertenecientes
al género Paenibacillus fueron identificadas como B. circulans
grupo 2, y otras pertenecientes a este ultimo taxón
se ubicaron dentro del grupo 1.
40/fitosanidad

Identificación y caracterización de seis aislados...
Tabla1. Resultados de la caracterización bioquímica de los aislados antagonistas
Pruebas bioquímicas
Aislados bacterianos
B-4 B-10 B-14 B-15 B-21 B-42 RI-75 Control
Tinción de Gram + + + + + + + –
Catalasa + + + + + + + –
Posición de la espora (terminal) – – – – – – –
(Central) + + + + + + +
(Subterminal) – – – – – – –
Medio I + + + + + + + –
Medio II – – – – – – – –
Medio III + + + + + + + –
Hidrólisis de la gelatina + + + + + + + –
Hidrólisis del almidón + + + + + + + –
Utilización de citrato de sodio + + + + + + + –
Crecimiento en NaCl (7%) + + + + + + + –
Reducción de nitrato + + + + + + + –
Prueba de la lecitinasa – – – + - – – –
Crecimiento a 45°C + + + + + + + –
Crecimiento a 55°C – + – – + – + –
Tabla 2. Resultados de la identificación de los aislados antagonistas mediante
el sistema API 50 CHB
Aislados Especie Procedencia
Tipo de
muestra
Confiabilidad
(%)
B-4 B. subtilis Santiago de Cuba Rizosfera 95,7
B-10 B. megaterium 2 Santiago de Cuba Rizosfera 99,2
B-14 B. licheniformis Sancti Spíritus Suelo 82,7
B-15 B. circulans 1 Sancti Spíritus Suelo 82,7
B-21 B. subtilis Santiago de Cuba Suelo 95,3
B-42 B. subtilis La Habana Suelo 97,8
RI-75 B. licheniformis Cepario Ceaden – 99,5
Al analizar los aislados identificados como B. subtilis
se observó que crecieron en condiciones de anaerobiosis,
lo cual puede deberse a que los miembros de esta especie
pueden crecer en medios que contengan nitrato
[Garrity et al., 2003; Todar, 2005; Calvo y Zúñiga, 2010],
y en este caso el medio para la realización de esa prueba
fue agar nutriente, el cual contiene peptona bacteriológica.
En el aislado B-21, identificado también como B. subtilis,
se detectó crecimiento a 55°C. Esto puede ser un
dato importante al seleccionar las cepas más promisorias,
ya que parece ser que es una variedad diferente
dentro de las especies determinadas como B. subtilis
que no crecieron a esta temperatura. Claus y Berkeley
(1986) plantean que la capacidad de crecimiento a 50 o C
es variable entre cepas de la misma especie; los rangos
de temperatura de crecimiento altos son muy sensibles,
tanto que a una variación de un grado puede influenciar
en el crecimiento vegetativo de la bacteria. El
hecho de que esta cepa haya crecido a este valor de temperatura
puede ser consecuencia de la selección natural
y además de la presencia de endosporas, que le han permitido
a este género bacteriano una mejor adaptación
a las condiciones adversas del medioambiente, tales
como temperatura, pH, calor, humedad, desecación,
radiaciones y sustancias químicas, condiciones a las que
fitosanidad/41

Sosa y otros
están expuestos con frecuencia estos microorganismos
[Sosa et al., 2006]. Esta ventaja adaptativa puede estar
relacionada además con las altas temperaturas que comúnmente
se registran en la región oriental del país,
específicamente en la provincia de Santiago de Cuba,
de donde proviene esa cepa.
B. subtilis es la especie tipo del género Bacillus, y sus
esporas están ampliamente distribuidas en ambientes
naturales. Puede degradar pectina y polisacáridos en
los tejidos vegetales. Produce una gran gama de
antibióticos pertenecientes a la familia de las Iturinas
[Wulff et al., 2002]. Se ha reportado como un eficiente
antagonista de fitopátogenos. Esta especie se encuentra
entre los microorganismos promotores del crecimiento
vegetal debido a que produce sustancias semejantes
a las fitohormonas, y además contribuye al mejoramiento
de la absorción de agua y nutrientes en la raíz.
Se le atribuye también la inducción de resistencia mediante
la activación de genes defensivos de la planta
[Guillén et al., 2006].
El aislado B-14, identificado como B. licheniformis,
presentó resultados similares a los de la cepa RI-75,
utilizada como cepa patrón, excepto que la primera
no creció a 55°C; pero de acuerdo con lo planteado por
el Manual de bacteriología y sistemática [Claus y
Berkeley, 1986], en el caso en que los resultados sean
positivos, debe tenerse en cuenta que más del 90% de
las cepas son positivas y da margen a un porcentaje
de variación, lo cual se corrobora al complementar la
pruebas bioquímicas efectuadas y el API 50CH/B, con
una confiabilidad del 82,7%. B. licheniformis produce
el antibiótico bacitracina de acción frente a bacterias
Gram + y de gran uso en el campo de la medicina
a escala industrial con fines clínicos [Todar, 2005]; sin
embargo, no se encontraron reportes de los posibles
efectos antifúngicos de esta sustancia. Se utiliza además
como productor de proteasas y amilasas. Esta
especie fue reportada por Lee et al. (2006) como
biofungicida contra el moho gris del tomate causado
por Botrytis cinerea. Se encuentra clasificada dentro
del grupo ecofisiológico de las bacterias desnitrificantes,
por lo que muchas veces su presencia en
los cultivos causa pérdidas económicas, pues volatiliza
(NH 3
, N 2
O y N 2
) el nitrato propio del suelo, o adicionado
por medio de los fertilizantes puede o no producir
pigmentos rojos [Todar, 2005]. Es por ello que se
recomienda la caracterización genotípica de estos aislados.
El aislado B-15, identificado como B. circulans 1, es
una de las especies de Bacillus productoras de
antibióticos, entre los que se encuentra la circulina, y
algunas cepas presentan actividad celulolítica. Se ha
aislado de infecciones humanas, por lo que se recomienda
probar su patogenicidad frente a animales antes de
considerarlo como posible biocontrolador [Todar, 2005].
A pesar de que el 90% o más de las especies responden
de forma negativa a la prueba de la lecitinasa según
Claus y Berkeley (1986), esta cepa respondió positivamente,
lo que demuestra que es un biovar diferente.
Esta prueba mide la capacidad de producir la enzima
que degrada la lecitina presente en la yema de huevo.
Las cuatro especies principales de lecitinasa positiva
son Bacillus anthracis, Bacillus mycoides, Bacillus cereus
y Bacillus thuringiensis Berliner. Las tres primeras especies
se caracterizan por ser patógenas humanas, lo
cual es importante al seleccionar una cepa con fines de
aplicación, ya que se puede correr el riesgo de que sean
patogénicas [Claus y Berkeley, 1986; Calvo y Zúñiga,
2010].
El aislado B-10, identificado como B. megaterium 2,
presenta esporas de gran tamaño y se ubica dentro de
las especies psicrófilas del género. Puede causar perjuicio
a animales y humanos. Sus esporas son frecuentes
en el suelo [Todar, 2005].
CONCLUSIONES
• Los aislados B-4, B-21 y B-42 fueron identificados y
caracterizados bioquímica y fisiológicamente como
Bacillus subtilis, y ahora se nombran Bs-4, Bs-21 y
Bs-42; el aislado B-10 como B. megaterium 2 (Bm-
10); el aislado 14 como B. licheniformis (Bl-14) y el
15 como B. circulans 1 (Bc-15), todos con un porcentaje
de confiabilidad superior al 80%.
REFERENCIAS
Calvo, P.; D. Zúñiga: «Caracterización fisiológica de cepas de Bacillus
spp., aisladas de la rizosfera de papa (Solanum tuberosum)», Departamento
Académico de Biología, Universidad Nacional Agraria La
Molina, Lima, Perú, Ecología Aplicada 9(1):31-39, 2010, http://
redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=34115156004
(consultado en enero de 2010).
Claus, D.; R. C. Berkeley: «Genus Bacillus Cohn 1872», Bergey’s Manual
of Systematic Bacteriology, Williams y Wilkins Edit., Baltimore,
EE. UU., 1986, pp. 1105-1139.
Entis, P.; D. Y. Fung; M. W. Griffiths; L. McIntre; S. Russell; A. N. Sharpe;
M. L. Tortorello: «Rapid Methods for Detection, Identification and
Enumeration», Compendium of Methods for the Microbial
Examination of Foods, 4.ª ed., Ed. American Public Health
Association, Washington, 2001, pp. 89-126.
42/fitosanidad

Identificación y caracterización de seis aislados...
Fritze, D.: «Taxonomy of the Genus Bacillus and Related Genera: The
Aerobic Endospore Forming Bacteria», Phytopathology, vol. 94, 2004,
pp. 1245-1248.
Garrity, G. M.; J. A. Bell; T. G. Lilburn: «Taxonomic Outline of the
Prokaryotes», Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Springer-
Verlag, Nueva York, 2003, http://dx.doi.org/10.1007/bergeysoutline.
Guillén, R.; F. Hernández; G. Gallegos; R. Rodríguez; C. Aguilar; E.
Padrón; M. Reyes: «Bacillus spp. como biocontrol en un suelo infestado
con Fusarium spp., Rhizoctonia solani Kûhn y Phytophthora
capsici Leonian y su efecto en el desarrollo y rendimiento del cultivo
de Chile», Revista Mexicana de Fitopatología 24(2):105-114, México,
2006, http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/612/61224204.pdf
Guinebretiere, M. E.; O. Berge; P. Normand; C. Morris; F. Carlin; C.
Nguyen-The: «Identification of Bacteria in Pasteurized Zucchini Purees
Stored at Different Temperatures and Comparison with Those Found
in Other Pasteurized Vegetable Purées», Appl. Enviromental
Microbiology 67(10):4520-4530, EE. UU., 2001.
Lee, J. P.; S. W. Lee; C. Kim; J. H. Son; J. H. Song; K. Y. Lee; H. J. Kim;
S. J. Jung; B. J. Moon: «Evaluation of Formulations of Bacillus
licheniformis for the Biological Control of Tomato Gray Mold Caused
by Botrytis cinerea», Biological Control 37(3):329-337, Holanda,
2006.
Reinoso, Y.; V. Pazos; L. Casadesús: «Aislamiento, selección e identificación
de bacterias de los géneros Bacillus, Brevibacillus y
Paenibacillus con potencialidades para el control biológico de bacterias
y hongos fitopatógenos del cultivo de la papa», tesis de Maestría
en Microbiología General, Universidad de La Habana, 2006.
Skerman, V. B. D.; V. McGowan; P. H. A. Sneath: Approved Lists of
Bacterial Names, American Society for Microbiology, Washington,
1980.
Sosa, A.; V. Pazos; M. González: «Nuevos aislados de Bacillus spp.
antagonistas a Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani y Pythium
aphanidermatum», Fitosanidad 10(1):73-74, La Habana, 2006.
Stackebryt, E.; J. Swidersky: From phylogeny to systematics.
Applications and Systematics of Bacillus and Relatives, Blackwell
Publishing, Oxford, 2002, pp. 8-22.
Todar, K.: «Todar’s Online Textbook of Bacteriology», University of
Wisconsin-Madison Departament of Bacteriology, EE. UU., 2005, http:/
/www.textbookofbacteriology.net/.
Wulff, E.; C. Mguni; K. Mansfeld-Giese; J. Fels; M. Lübeck; H. Hockenhull:
«Biochemical and Molecular Characterization of Bacillus
amyloliquefaciens, B. subtilis and B. pumilis Isolates with Distinct
Antagonistic Potencial Against Xanthomonas campestris pv.
Campestris», European Journal of Plant Pathology 51:574-584,
Holanda, 2002.
fitosanidad/43

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 39-43
EVALUACIÓN DEL MÉTODO DE CONSERVACIÓN EN PAPEL
DE FILTRO EN DOS CEPAS DE BACILLUS SUBTILIS COHN,
MEDIANTE LA ACTIVIDAD ANTAGÓNICA FRENTE
A RHIZOCTONIA SOLANI KÜHN
Acenet I. Sosa López, 1 Victoria Pazos Álvarez-Rivera, 2 Giovanni Borges Marín, 1 Marleny González
Garcia 1 y Enrique Ponce Grijuela 1
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana,
C.P. 11600, asosa@inisav.cu.
2
Facultad de Biología, Universidad de La Habana. Calle 25 no. 455 e/ J e I, La Habana, C.P. 10400
RESUMEN
Se evaluó la actividad antagónica de dos cepas de Bacillus subtilis
conservadas en discos de papel de filtro a 4°C por un período de tres
años. Se escogieron las cepas del género B. subtilis: Bs-21 y Bs-42,
aisladas del suelo, autóctonas de Cuba, y antagónicas de la cepa
Rs-10 de Rhizoctonia solani. Se determinó la viabilidad, pureza y
actividad antagónica de cinco colonias de Bs-42 y una de Bs-21,
escogidas al azar y cultivadas en agar nutriente. Las colonias seleccionadas
se evaluaron por el método de enfrentamiento dual en papa
dextrosa agar, después de 96 h de incubación a 30°C. Ambas cepas
presentaron una viabilidad de 10 8 UFC/mL. Los cultivos mantuvieron
la pureza, las características morfológicas y respuesta positiva a la
tinción de Gram, comparadas con la cepa de B. subtilis ATCC 6633.
Todas las colonias seleccionadas inhibieron el crecimiento micelial
de la cepa Rs-10 de R. solani, no así la de referencia. El análisis de
varianza realizado mostró diferencias significativas en el porcentaje
de inhibición de las colonias ensayadas. La cepa Bs-21 resultó ser la
de menor inhibición con el 78%, y Bs-42 1
y Bs-42 2
las de mayor
porcentaje con el 98%.
Palabras claves: Bacillus subtilis, conservación biológica, antagonismo,
Rhizoctonia solani
ABSTRACT
Antagonistic activity of two Bacillus subtilis strains preserved in filter
paper disks at 4°C for a period of three years was evaluated. Strains
Bs-21 and Bs-42, isolated from Cuban soil and antagonists to
Rhizoctonia solani Rs-10 were choiced. Five colonies from Bs-42 and
one from Bs-21, randomly selected were growth in nutrient agar. The
antagonism was compared by dual culture method in PDA after 96 h at
30°C. Viability of both strains was 10 8 CFU/mL. Selected colonies
kept purity, morphological characteristics and positive response to
Gram stain compared with B. subtilis ATCC 6633. All selected colonies
inhibited mycelial growth of R. solani Rs-10, but not the reference
strain. Strain Bs-21 had the lower inhibition (78%) while Bs-42 1
and
Bs-42 2
had the higher percent (98%). Variance analysis showed
significant differences in the percentage of inhibition exhibited by
tested colonies.
Key word: Bacillus subtilis, biological conservation, antagonism,
Rhizoctonia solani
INTRODUCCIÓN
La preservación de cepas microbianas no es tarea fácil,
y debe garantizar la viabilidad, pureza y estabilidad
genética de los cultivos, características que coinciden
con los objetivos de un buen método de conservación
[Castro et al., 2000]. Para ello se han establecido varios
procedimientos, con los cuales se trata de mantener el
cultivo lo más cercano posible al aislamiento original
[García y Uruburu, 2001].
Todos los métodos de preservación tienen ventajas y
desventajas; por tanto, es necesario hacer una selección
del método a utilizar a partir de un análisis de las
características de cada técnica, factibilidad de su uso y
las necesidades del usuario. Generalmente la elección
depende de la disponibilidad del equipamiento y de la
competencia del personal. Es recomendable utilizar más
de un método de preservación y trabajar con réplicas
Recibido: 23/2/11
Aceptado: 21/3/11
fitosanidad/45

Sosa y otros
del microorganismo que se desea conservar como medida
de seguridad [Uzunova-Doneva y Donev, 2004-2005].
En el Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal
se utilizan diferentes métodos de conservación para las
bacterias pertenecientes al género Bacillus, como
liofilización, subcultivos, cuñas de agar nutriente con
parafina líquida y el método de papel de filtro, entre
otros. Este último se utiliza como una alternativa a la
disponibilidad de recursos.
En el presente trabajo se evalúa el método de conservación
de los discos de papel de filtro con las cepas Bs-21
y Bs-42 de B. subtilis, aisladas de suelo, autóctonas de Cuba
y eficaces en el control del hongo fitopatógeno R. solani
(Rs-10).
MATERIALES Y MÉTODOS
Se emplearon las cepas de Bacillus subtilis (Bs-21 y Bs-42)
conservadas durante tres años en papel de filtro y mantenidas
a 4°C, y la ATCC 6633 de B. subtilis liofilizada.
Para los experimentos in vitro se empleó la cepa Rs-10
de R. solani, cultivada y mantenida en plano inclinado
con medio PDA.
La conservación en discos de papel de filtro se realizó
según la metodología descrita por García y Uruburu
(2001) y modificada por Carreras (2007), basada en la
paralización del crecimiento celular por la eliminación
del agua disponible para las células. Para ello se utilizó
un papel de filtro absorbente y estéril que se impregnó
en una suspensión bacteriana de células (10 8 esp/mL),
se dejó secar al aire en condiciones estériles y una vez
secos los discos se colocaron en tubos Eppendorf estériles
a 4°C hasta su nuevo uso.
La viabilidad de las tres cepas bacterianas se determinó
a partir de su reactivación en medio caldo nutriente
(CN). Se tomó una pequeña cantidad de la cepa
liofilizada y se inoculó en ese medio; posteriormente se
tomó un disco de papel de filtro de las cepas Bs-21 y
Bs-42 y se colocaron por separado en dos tubos de ensayo
que contenían 5 mL del medio citado. Las tres
cepas se incubaron durante 72 h (entre 28 y 30°C),
momento en el cual se les realizó una tinción simple con
violeta cristal (VC) al 0,05%, con la finalidad de observar
en el microscopio óptico (lente de inmersión 100X),
el estadio fisiológico en que se encontraban estas bacterias
con relación a la fase de esporulación. El próximo
paso fue la siembra por agotamiento en placas con
AN, con el objetivo de obtener colonias aisladas, comprobar
la pureza macroscópica de los cultivos por observación
al microscopio estereoscopio y describir las
características morfoculturales de las colonias seleccionadas,
según lo descrito por Claus y Berkeley (1986),
de acuerdo con forma, tamaño de las colonias, bordes,
elevación, color y textura comparada con la cepa de
referencia ATCC 6633.
Se seleccionó una colonia de cada cepa, se pasaron a
tubos con cuñas de AN y se incubaron durante 72 h a
30°C; se realizó la tinción de Gram al cabo de 18 h para
observar parámetros como la pureza microscópica de
los cultivos y forma de las células. Se hicieron evaluaciones
periódicas mediante una tinción simple con VC
para determinar presencia, forma, ubicación y tipo de
espora.
La concentración (esporas por mililitro) de cada una
de las suspensiones bacterianas se determinó por el
conteo de las esporas presentes en cada uno de los cuadrantes
a evaluar de la cámara de Neubauer (5 x 5)
mediante la observación en el microscopio óptico con
contraste de fase 400x.
A partir de los cultivos (cepas Bs-21, Bs-42 y ATCC 6633)
sembrados en AN plano inclinado, se realizaron diluciones
decimales seriadas con solución salina (NaCl
0,85%) hasta llegar a 10 –8 . La viabilidad se cuantificó
por la producción de colonias. Para ello se tomó 1 mL
de las tres últimas diluciones de cada cepa empleada,
se añadieron en placas de Petri estériles, luego se realizó
la siembra por adición de 15 mL de medio de cultivo
AN a una temperatura de 45°C aproximadamente. Cada
placa se agitó suavemente con el fin de lograr una mezcla
homogénea de la suspensión bacteriana con el medio
de cultivo y obtener colonias aisladas. Se hicieron
tres réplicas de las tres últimas diluciones. Las placas
se incubaron a 30°C y posteriormente se contaron las
unidades formadoras de colonias a las 24, 48 y 72 h.
La concentración se determinó por la siguiente ecuación:
C = XD 100 (UFC/mL) [Pérez, 2000, citado por
Ramírez et al., 2005]
donde:
X: Media del conteo de las colonias en las placas
D: Factor de dilución = 1/dilución
100: Para convertir de µL a mL
Para la determinación de la actividad antagónica de
las cepas de Bacillus subtilis frente a R. solani (Rs-10)
46/fitosanidad

Evaluación del método de conservación en...
se tomaron 100 µL de la cuarta dilución seriada correspondiente
a las cepas Bs-21 y Bs-42, se añadieron en el
centro de una placa de Petri con medio AN, luego se
diseminó por toda la placa con la espátula de Drigalskiy
y se incubó durante 72 h a 30°C. Después de este tiempo
se examinaron las colonias crecidas y se seleccionaron
cinco de Bs-42, y una en el caso de las cepas Bs-21
y ATCC, según las características culturales descritas
para B. subtilis [Claus y Berkeley, 1986]. Cada colonia
se nombró con un número, de ahí se pasaron a tubos
con AN en plano inclinado, los que se incubaron a 30°C
hasta obtener un cultivo esporulado y homogéneo. Luego
se sembró una estría de cada colonia antagonista y
se incubaron 96 h a 30°C. Con posterioridad se realizó
el enfrentamiento por cultivo dual de cada colonia frente
al patógeno R. solani de siete días de crecido en placas
con PDA y se incubaron durante siete días a 30°C.
Se realizaron observaciones y mediciones diarias. El porcentaje
de inhibición se calculó por la fórmula de
Abbott (1965) [citado por Marín y Fernández, 2003].
P orcentaje de inhibición =
DT – DC
DT
x 100
donde:
DT: Diámetro de la colonia en el testigo
DC: Diámetro de la colonia en el enfrentamiento
Los datos de los experimentos se procesaron mediante
un análisis de varianza (ANOVA) de clasificación simple
y test de significación LSD de mínima diferenciación
de Fischer con un nivel de significación del 5%
(a = 0,05). Se utilizó el programa Statgraphics Plus 5.1
Inc. 2001.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las cepas Bs-21 y Bs-42 presentaron una viabilidad de
10 8 UFC/mL que se considera como adecuada para su
empleo en experimentos de laboratorio, de igual forma
para el caso de la ATCC 6633. La tinción de Gram
corroboró que las cepas eran Gram positivas. El método
de conservación utilizado se agrupa en la categoría
de mediano plazo, pues en este grupo se encuentran las
células conservadas que permanecen viables de dos a
cinco años. Las características morfológicas y culturales
de las colonias no mostraron variaciones respecto a
la cepa patrón utilizada (Fig. 1a), ni en comparación
con descripciones hechas en estudios anteriores [Sosa
et al., 2006]. Estos autores plantearon que los aislados
presentaron esporas elipsoidales y centrales que no
distienden el esporangio, células vegetativas en forma
de bastón, colonias rugosas con bordes irregulares,
lobulados, entre pequeñas y mediano tamaño, de coloración
blanco grisáceo (Fig. 1b). La observación microscópica
evidenció abundantes células vegetativas en forma
de bastón a las 24 h, presencia de endosporas a las
48 h con esporas elipsoidales, y en posición central a las
72 h. En ninguno de los casos se evidenció contaminación,
ni colonias con una morfología diferente a la descrita
hasta ahora. Por estas razones puede decirse que
cada una de las cepas mostró una pureza del 100%.
Figura 1. Características morfológicas y culturales de B. subtilis: a) cepa de referencia ATCC 6633, b) cepa Bs-21.
fitosanidad/47

Sosa y otros
La identidad del cultivo puede conocerse basado en sus
características de crecimiento en uno o más medios específicos,
en consideración a las propiedades macro y
microscópicas exhibidas, o en una evaluación más
exhaustiva con la utilización de muchos ensayos bioquímicos,
biológicos, inmunológicos y genéticos
[Uzunova-Doneva y Donev, 2004-2005].
Los enfrentamientos in vitro de cada una de las cepas
en estudio y a partir de las colonias seleccionadas (Fig. 2a)
manifestaron que ambas aún mantienen su capacidad
antagónica frente al patógeno empleado (Fig. 2b), a
pesar de que existen diferencias significativas entre las
colonias seleccionadas y entre las cepas de B. subtilis
(Bs-21 y Bs-42).
Figura 2. a) Colonias de la cepa Bacillus subtilis (Bs-42), b) enfrentamiento dual de cada colonia seleccionada.
Las colonias de la cepa Bs-42 (Bs-42 1
y Bs-42 2
) mostraron
los valores más altos de inhibición del crecimiento –el 98%
aproximadamente en ambos casos– cuando se enfrentaron
con la cepa Rs-10 de R. solani y al ser comparadas con
el testigo, quien al tercer día de iniciado el experimento
había cubierto la placa completa. Bs-42 5
manifestó el 95%
de inhibición, el 78% de inhibición causó Bs-21 y la cepa
patrón utilizada no inhibió el crecimiento micelial del
fitopatógeno en estudio (Fig. 3). Existen diferencias significativas
entre las colonias seleccionadas (diferentes poblaciones
de células) de una misma cepa y entre cepas de
una misma especie (Bs-21 y Bs-42) (Fig. 3), lo cual demuestra,
una vez más, la alta variabilidad intra e
interespecífica que existe en las especies de este género.
Sosa et al. (2006) también lograron resultados satisfactorios
cuando enfrentaron por cultivo dual las cepas de
B. subtilis (Bs-21 y Bs-42) con la cepa Rs-10 de R. solani
de forma simultánea, y demostraron que no habían
diferencias significativas entre ambas con un porcentaje
de inhibición del 59 y el 57%, respectivamente. Si
se comparan estos resultados con los obtenidos en este
trabajo –que son superiores al 75% en todos los casos–,
esto puede deberse a que en este método los mecanismos
biocontroladores se restringen en el mejor de los
casos a la secreción de antibióticos volátiles o difusibles
en el medio y a la competencia por espacio [Basurto-
Cadena et al., 2010]. En el caso de estas cepas la producción
de metabolitos es mayor en la fase de
esporulación que en la de crecimiento activo cuando
fueron enfrentadas al mismo tiempo.
En ninguno de los casos se refleja la pérdida de la actividad
antagónica, pues las colonias seleccionadas al azar
de las cepas Bs-21 y Bs-42 mostraron elevados porcentajes
de inhibición frente al patógeno Rs-10 después de
conservadas tres años en papel de filtro, y además que
sus células son viables aún (Fig 3), lo que indica que el
método de conservación utilizado fue adecuado para
estos microorganismos.
Los microorganismos tienen una tendencia inherente a
mutar en cultivos de laboratorio, por lo que es muy
importante el uso de procedimientos adecuados para
mantenerlos viables y genéticamente estables [García
y Uruburu, 2001], resultados que se hicieron notorios
en este estudio con las cepas de B. subtilis empleadas y
con la metodología desarrollada.
En la literatura consultada no se muestran estudios
semejantes al descrito en este trabajo que permitan
comparar estos resultados; sin embargo, en esta investigación
se evidencia que el uso correcto de los
microorganismos conlleva al éxito del mantenimiento
de las cepas de interés por períodos considerablemente
largos. Aunque no siempre se cumpla, se corren menos
riesgos de perder las características de las cepas.
48/fitosanidad

Evaluación del método de conservación en...
Figura 3. Porcentaje de inhibición de las colonias seleccionadas a partir de tres cepas de B. subtilis
(Bs-21, Bs-42 1
, Bs-42 2
, Bs42 3
, Bs-42 , Bs-42 y ATCC 6633) frente a Rhizoctonia solani (Rs-10).
4 5
CONCLUSIONES
• Las cepas de Bacillus subtilis (Bs-21 y Bs-42) se mantuvieron
viables por tres años en papel de filtro a
4°C , y además mantuvieron su capacidad antagónica
frente a la cepa Rs-10 de Rhizoctonia solani.
• Las cepas Bs-21 y Bs-42 inhibieron el crecimiento
micelial de R. solani por encima del 75%.
REFERENCIAS
Basurto, M. G.; M. I. Font; J. García; M. Vásquez: «Cambios en la
estructura celular durante la actividad antagónica de Bacillus subtilis
contra Rhizoctonia solani y Fusarium verticillioides», Acta Microscópica
19(2):138-144, España, 2010.
Carreras, B.: «Aislamiento y determinación de las características
morfológicas, moleculares y patogénicas de cepas nativas de la
Bacteria Bacillus thuringiensis Berliner con potencial para el control
de plagas», tesis en opción al grado científico de Doctora en Ciencias
Biológicas, Inisav, La Habana, 2007.
Castro, G.; J. T. Hernández; C. Aquino: «Manual sobre conservación de
microorganismos», Instituto Politécnico Nacional, Escuela Nacional
de Ciencias Biológicas, México, 2000.
Claus, D.; R. C. Berkeley: «Genus Bacillus Cohn 1872», Bergey’s Manual
of Systematic Bacteriology, Williams y Wilkins Edit., Baltimore,
EE. UU., 1986, pp. 1105-1139.
García, M. D.; F. Uruburu: «La conservación de cepas microbianas»,
Colección Microbiana de Cultivos Tipo (CECT) Universidad de
Valencia, España, Temas de la actualidad, 2001, http://
www.cect.org/docs/instrseguridad.pdf (consultado el 20 de diciembre
de 2008).
Marín, D.; A. Fernández: «Elementos para el manejo de patógenos
fúngicos en semilleros de tabaco en la tecnología de bandejas flotantes»,
tesis de Maestría en Microbiología, Universidad de La Habana,
Inisav, La Habana, 2003.
Ramírez, Y.; V. Pazos; I. Sánchez: «Selección de rizobacterias antagonistas
con potencial para el control biológico de las enfermedades
producidas por Acidovorax avenae subsp. Citrulli, Xanthomonas
cucurbitae y Fusarium oxysporum», tesis de Maestría en Microbiología
General, Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de
Camagüey, Cuba, 2005.
Sosa, A., V. Pazos; M. González: «Nuevos aislados de Bacillus spp.
antagonistas a Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani y Pythium
aphanidermatum», Fitosanidad 10(1):73-74, La Habana, 2006.
Uzunova-Doneva, T.; T. Donev: «Anabiosis and Conservation of
Microorganisms», Journal of Culture Collections 4:17-28, Bulgaria,
2004-2005, http://hdl.handle.net/1807/5199 (consultado en enero
de 2011).
fitosanidad/49

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 51-57
SUSCEPTIBILIDAD DE CHRYSOPA EXTERIOR NAVÁS
A BEAUVERIA BASSIANA (BALSAMO) VUILLEMIN CEPA LBB-1
EN CONDICIONES DE LABORATORIO
Orisel Estévez Leyva, 1 Elina Massó Villalón, 1 Rafael Abreu Ávila 1 y Dilaila Baró Bulet 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana,
C.P. 11600, oestevez@inisav.cu; emasso@inisav.cu; rabreu@inisav.cu
2
Organopónico del Centro Internacional de Restauración Neurológica. Calle 200 e/ 15 y 17, Playa,
La Habana, dilaila1969@yahoo.com
RESUMEN
El uso de la lucha biológica para el control de plagas que afectan a
los cultivos se ha generalizado en todo el país debido a sus múltiples
ventajas en el ámbito económico, ecológico y social. Dentro de las
estrategias de control biológico se emplean diversos medios como
el hongo entomopatógeno Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, y
el depredador Chrysopa exterior Navás. Para su utilización conjunta
se debe pasar por una etapa previa, imprescindible para establecer
los posibles efectos negativos de su interacción mediante bioensayos
ecotoxicológicos. En este trabajo se evaluó la susceptibilidad de las
distintas fases de desarrollo del depredador C. exterior al hongo
entomopatógeno B. bassiana en condiciones de laboratorio. Se utilizaron
insectos obtenidos de una cría de laboratorio de C. exterior y
suspensiones a base de la cepa LBb-1 a las concentraciones de
1 x 10 7 y 1 x 10 8 esporas • mL –1 . Los bioensayos se realizaron bajo
condiciones de temperatura de 25 ± 1°C y humedad relativa del 80 ±
2%. Los estados preimaginales del entomófago fueron sumergidos
en las suspensiones, y los adultos se asperjaron. El parámetro evaluado
en los huevos fue su eclosión. En las larvas y los adultos la
mortalidad, y para los cocones la emersión de los adultos. Las suspensiones
conidiales del hongo no afectaron ninguna de las fases de
desarrollo del insecto, por lo que ambos controles biológicos pueden
utilizarse conjuntamente para el control de plagas agrícolas en
los sistemas de producción.
Palabras claves: Chrysopa exterior, Beauveria bassiana, susceptibilidad,
bioensayos ecotoxicológicos
ABSTRACT
The use of biological control for reducing plagues of crops has extended
in the whole country, due to the numerous advantages that it
brings in economic, ecological and social aspects. Diverse means
as entomopathogenic fungus Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin
and the predator Chrysopa exterior Navás are used inside biological
control strategies. For the combined use it should pass through an
indispensable previous stage in order to establish the possible
negative effects of their interaction by means ecotoxicological studies.
In this way this work was realized to evaluate the different development
phases susceptibility of predator C. exterior to the entomopathogenic
fungus B. bassiana in ecotoxicological bioassays under laboratory
conditions. Insects obtained from a laboratory breeding of C. exterior
and suspensions of strain LBb-1 at concentrations of 1 x 10 7 and 1 x
10 8 spores • mL –1 were used. Assays were made at temperature of 25
± 1°C and 80 ± 2% of relative humidity. Immature states of natural
enemies were submerged in suspensions and the adults were sprayed.
The parameter evaluated in eggs was its appearance, mortality was
evaluated in larvae, and adults emergency were evaluated in pupae.
LBb-1 strain suspensions did not affect any development phases of
insect, so both biological controls can be used together for agricultural
pest control in production systems.
Key words: Chrysopa exterior, Beauveria bassiana, susceptibility,
ecotoxicological bioassays
INTRODUCCIÓN
La agricultura del nuevo milenio debe establecer nuevas
alternativas de control que produzcan menor impacto
y riesgo ambiental, y que permitan reducir
significativamente el uso de plaguicidas sintéticos
[Hansen y Johnson, 1999; Iannacone y Alvariño, 2002].
El final del siglo XX, y lo que va del XXI, se han caracterizado
por un fuerte apoyo a los esfuerzos de la protección
del ambiente por varios sectores de todas las
sociedades, por lo que el control biológico tiene gran
importancia en la reducción de organismos indeseables
en el necesario equilibrio ambiental [Speciale, 2007].
El control biológico es, sin duda, una de las herramientas
principales que el hombre tiene para reducir las
poblaciones de artrópodos plaga en los cultivos agríco-
Recibido: 2/3/11
Aceptado: 11/4/11
fitosanidad/51

Estévez y otros
las. Esto se realiza mediante el uso de entomófagos y
entomopatógenos, y está considerado como una de las
estrategias fitosanitarias de mayor importancia en la
agricultura de Cuba [Massó y Gómez, 2008].
La mayor parte de los insectos depredadores utilizados
en programas de control biológico pertenecen a las familias
Chrysopidae y Coccinellidae. La familia
Chrysopidae es la más importante de todos los
depredadores del orden Neuroptera. Actualmente se
consideran agentes biológicos decisivos para el control
de plagas insectiles, y se ha difundido su utilización en
cultivos comerciales, invernaderos y jardines [Núñez,
1988]. Este neuróptero –llamado comúnmente alas de
encaje, mosca de ojos dorados o león de áfidos– es un
controlador biológico promisorio en el manejo ecológico
e integrado de plagas. Las larvas son depredadores muy
voraces que se alimentan de cuerpos blandos de insectos
y arácnidos [Fonseca et al., 2000].
El hongo B. bassiana se ha utilizado exitosamente para
controlar plagas en muchas regiones del mundo, como
parte de las estrategias de manejo integrado de plagas.
Por sus características patogénicas para controlar insectos,
su factibilidad de reproducción en forma artesanal
y la rentabilidad de su uso, este hongo representa
una alternativa viable al utilizarse sin perjuicios al
medioambiente y sin efectos tóxicos [Bateman, 1997].
Se ha demostrado que hay bioplaguicidas que presentan
efectos sobre biorreguladores de plagas. El estudio
de este aspecto es importante en cuanto a la conservación
de la fauna benéfica [Vázquez, 2003]. El conocimiento
del efecto de los bioplaguicidas sobre la fauna
benéfica, y en especial sobre sus diferentes estados en
desarrollo, permitirá evitar el uso de aquellos con
consecuencias negativas y fomentar el uso de los que
causen un menor impacto ecotoxicológico [Iannacone y
Lamas, 2003]. Por estas razones se evaluó la susceptibilidad
del depredador C. exterior, en todas sus fases de
desarrollo, al hongo entomopatógeno B. bassiana en
condiciones de laboratorio, y se valoró la posibilidad
del uso conjunto de ambos en los sistemas de producción
agrícola.
MATERIALES Y MÉTODOS
Los bioensayos fueron realizados en el Laboratorio de
Cría de Artrópodos Benéficos, del Grupo de Trabajo
de Tecnologías de Reproducción de Medios Biológicos
y Artrópodos Benéficos, perteneciente al Instituto de
Investigaciones de Sanidad Vegetal.
Se evaluó el efecto del hongo entomopatógeno B. bassiana
cepa LBb-1 sobre huevos, larvas y pupas del depredador
C. exterior por el método de inmersión durante
5 s, y el efecto sobre adultos se evaluó por el método de
aspersión [FAO, 1969], para lo cual se utilizaron suspensiones
del hongo preparadas con agua destilada y
Tween 80 a las concentraciones de 1 x 10 7 esporas • mL –1 y
1 x 10 8 esporas • mL –1 , y agua destilada solamente
para el caso del testigo (Tabla 1). Los bioensayos se
realizaron bajo condiciones controladas a una temperatura
de 25 ± 1°C y el 80 ± 2% de humedad relativa.
Tabla 1. Variantes utilizadas
Testigo
Tratamiento 1
Tratamiento 2
Aspersión o inmersión en agua destilada
Aspersión o inmersión en suspensión a base de la cepa LBb-1 a
una concentración de 1 x 10 7 esporas ⋅ mL –1
Aspersión o inmersión en suspensión a base de la cepa LBb-1 a
una concentración de 1 x 10 8 esporas ⋅ mL –1
Para medir el efecto que ejerce el hongo entomopatógeno
B. bassiana sobre el desarrollo embrionario de C. exterior
se utilizaron huevos desfilamentados de 24 h de
puestos, los que se seleccionaron bajo un estereoscopio
para asegurar su buen estado. Las larvas utilizadas para
los bioensayos fueron de primer instar; se escogieron
cocones de 48 h de edad, y en los experimentos con adultos
se seleccionaron imagos con una semana de
emergidos.
Para todos los estados de desarrollo las evaluaciones se
realizaron diariamente hasta que se observó el nacimiento
de la larva, en el caso de los huevos, para determinar
el porcentaje de eclosión y el tiempo en que
eclosionaron. Para las larvas y los adultos se registró la
mortalidad y el tiempo al cual murieron, y en ambos
casos los muertos se colocaron en cámara húmeda. Para
el caso de los cocones se observaron hasta la emergencia
de los adultos para medir el porcentaje de emer-
52/fitosanidad

Susceptibilidad de Chrysopa exterior Navás a..
sión. En todas las fases de desarrollo evaluadas se continuó
la observación del ciclo de vida de los insectos
hasta que fue completado.
Se realizó análisis de varianza simple (ANOVA) y prueba
de significación de Tukey para un nivel de significación
del 5% (α = 0,05) por el programa Statistica versión 6.
Se utilizó la escala de toxicidad a enemigos naturales
aplicada por la Organización Internacional para el Control
Biológico e Integrado de los Animales y Plantas
perjudiciales para los cultivos (OILB) [Viñuela et al.,
1993] en ensayos residuales de laboratorio para la comparación
con los resultados.
Escala de toxicidad a enemigos naturales:
Categoría 1 Inocuo (< 30%)
Categoría 2 Ligeramente tóxico (30-79%)
Categoría 3 Moderadamente tóxico (80-99%)
Categoría 4 Tóxico (> 99%)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los porcentajes de eclosión de los huevos de C. exterior con
las concentraciones del hongo entomopatógeno B. bassiana
cepa LBb-1 de 1 x 10 7 esporas • mL –1 y 1 x 10 8 esporas • mL –1
fueron altos, con el 90 y el 85%, respectivamente, y no
mostraron diferencias estadísticamente significativas en
comparación con el testigo, que fue del 90%.
El desarrollo embrionario de los huevos de C. exterior
con las dos concentraciones utilizadas no se vio afectado.
El tiempo de eclosión de los huevos osciló entre cuatro
y seis días. A los cuatro días se inició el nacimiento
de las larvas, y a los cinco se produjo la mayor eclosión
que continuó hasta los seis días (Fig. 1).
Figura 1. Porcentaje de eclosión de huevos de C. exterior tratados con B. bassiana a
los diferentes días de evaluados.
Al evaluar el efecto de suspensiones de B. bassiana a concentraciones
entre 1 x 10 4 hasta 1 x 10 8 conidios • mL –1
sobre huevos de Chrysoperla externa con 24 h de edad,
Amorim et al. (2005) determinaron que no hubo efecto
sobre la viabilidad en ninguna de las concentraciones
utilizadas, resultado que coincide con el obtenido en
esta investigación.
En estudios de Iannacone y Lamas (2002) para evaluar
el efecto de dos extractos botánicos (rotenona y
azadiractina) y un insecticida carbámico sobre huevos
del depredador C. externa en bioensayos ecotoxicológicos,
determinaron que ninguno de los tres productos
a las dosis máximas utilizadas causaron efectos
negativos en el porcentaje de eclosión de huevos, lo que
fitosanidad/53

Estévez y otros
pudiera sugerir que la eclosión de huevos no es muy
afectada por productos biológicos, extractos botánicos
e insecticidas químicos.
En los bioensayos del hongo entomopatógeno B. bassiana
cepa LBb-1 realizados sobre larvas de primer instar
de C. exterior, las concentraciones utilizadas provocaron
mortalidades del 12 y 20%, y se observaron
diferencias estadísticas significativas con respecto al
testigo, que no presentó mortalidad. A las 72 h de la
aplicación, el tratamiento 1 presentó una mortalidad
baja, no diferente del testigo, no así con el tratamiento 2,
que con el 16% sí difirió de ambos. A las 96 h se observaron
mortalidades del 12% para el tratamiento 1 y
del 20% para el 2, diferentes estadísticamente entre sí
y respecto al testigo (Fig. 2).
Porcentaje
de mortalidad
Figura 2. Porcentaje de mortalidad de larvas de C. exterior de primer instar tratadas con
B. bassiana a las 72 y 96 h de exposición.
En bioensayos realizados en el laboratorio con B. bassiana
y Paecilomyces fumosoroseus, Generoso (2002) verificó
que esos hongos eran selectivos a larvas de primer
y tercer instar de C. externa, ya que provocaron bajas
mortalidades en esos estadios de desarrollo. Por otra
parte, al evaluar un bionematicida constituido por la
cepa IMI SD 187 de Pochonia chlamydosporia var.
catenulata sobre larvas de C. exterior en bioensayos
ecotoxicológicos realizados en laboratorio, García (2005)
reportó bajos porcentajes de mortalidad, entre el 10 y
el 30%, con lo que confirmó la ausencia de patogenicidad
del hongo sobre este depredador.
Thungrabeab y Tongma (2007) realizaron experimentos
para conocer el efecto de los hongos entomopatógenos
B. bassiana y Metarhizium anisopliae sobre los enemigos
naturales Coccinella septempunctata L., Chrysoperla
carnea (Stephens) y Dicyphus tamaninii Wagner, así
como también el insecto beneficioso de la tierra
Heteromurus nitidus Templeton. Se obtuvo que B. bassiana
no resultó patogénico para los insectos evaluados,
ya que no presentaron mortalidad. Para el caso de
M. anisopliae solamente se registró mortalidad para
C. carnea y D. tamaninii con el 4 y el 10%, respectivamente.
En este estudio los autores señalaron a B. bassiana
y M. anisopliae como agentes de control biológico
relativamente seguros sobre insectos no diana, como
los enemigos naturales y los insectos benéficos de la
tierra.
En los bioensayos realizados en el laboratorio con
cocones de C. exterior se observó un alto porcentaje de
emersión de adultos entre el 80 y el 90% en los tratamientos
después de los quince días de la aplicación, y
no se observaron diferencias estadísticas significativas
con respecto al testigo, que fue del 90% (Fig. 3).
54/fitosanidad

Susceptibilidad de Chrysopa exterior Navás a..
Figura 3. Efecto que provoca el tratamiento de cocones de C. exterior
con B. bassiana en la emersión de los adultos a los quince días de tratados.
Iannacone y Lamas (2003) también evaluaron el efecto
toxicológico de extractos de dos plantas: molle (Schinus
molle) y lantana (Lantana camara) sobre pupas de C. externa
en bioensayos realizados bajo condiciones de laboratorio.
Los extractos acuosos del molle y la lantana a
las concentraciones aplicadas no causaron efectos significativos
en la emergencia de pupas de C. externa en
ensayos de inmersión después de lecturas de ocho y veintiún
días. Lo alcanzado por ellos es similar al obtenido
en esta investigación con B. bassiana, y pudiera sugerir
que la fase de pupa es poco susceptible tanto a productos
botánicos como biológicos.
En los bioensayos con adultos de C. exterior, las concentraciones
utilizadas provocaron mortalidades bajas
en ambos casos de un 10%, y no se observaron diferencias
estadísticas significativas a las 48, 72 y 96 h después
de la aplicación, en comparación con el testigo que
no registró mortalidad (Fig. 4). En la búsqueda, la información
encontrada referida al efecto de los productos
biológicos sobre adultos del depredador fue escasa.
Figura 4. Mortalidad de adultos de C. exterior tratados con B. bassiana a las 48, 72 y 96 h
de exposición.
fitosanidad/55

Estévez y otros
Castillo et al. (2009) realizaron bioensayos de laboratorio
con el objetivo de determinar si B. bassiana afectaba
al parasitoide de la broca del café (Phymastichus
coffea LaSalle). El principal efecto del hongo se observó
en la disminución de la longevidad de los adultos y
en la mortalidad del 100% de los inmaduros del
parasitoide, cuando el hongo fue aplicado a sus hospederos
parasitados.
Otro estudio similar fue realizado por Vázquez (2002)
para determinar el efecto bioplaguicida de los hongos
Lecanicillium lecanii y B. bassiana sobre adultos de
Cotesia americanus (Lepeletier) (Hymenoptera:
Braconidae), parasitoide de la primavera de la yuca
(Erinnyis ello L.), que reportó mortalidades del 95,1 y
el 84,5%, respectivamente, entre los tres y cinco días
posteriores al contacto con las superficies asperjadas
con los biopreparados. Esto demuestra que los hongos
entomopatógenos pueden ser patogénicos para
himenópteros parasitoides y además mostrar diferentes
niveles de patogenicidad sobre los insectos benéficos,
y ser más dañinos para unos que para otros.
De acuerdo con los resultados en los parámetros evaluados
en cada una de las fases de desarrollo del depredador,
se procedió a su comparación con la escala de
toxicidad a enemigos naturales, aplicada por la OILB
[Viñuela et al., 1993] para ensayos residuales de laboratorio.
Estos resultados manifestaron que la mortalidad para la
fase de huevo estuvo entre el 10 y el 15%; para las larvas el
12 y el 20%, por lo que este estado de desarrollo inmaduro
resultó más sensible al hongo entomopatógeno, mostrando
los más altos porcentajes. Los cocones presentaron mortalidades
entre el 10 y el 20%, y en el caso de los adultos fue
del 10% con las dos concentraciones utilizadas.
Por lo anterior se pueden clasificar estos resultados en la
categoría 1 (inocuo) debido a que en los parámetros evaluados
los porcentajes de mortalidad se mantuvieron dentro
de lo establecido para esta categoría (< 30%) (Tabla 2).
Tabla 2. Toxicidad de B. bassiana sobre los estados
de desarrollo de C. exterior, de acuerdo con la escala
aplicada por la (OILB) [Viñuela et al., 1993]
Estados de
desarrollo
Porcentaje
de mortalidad
Tratamiento 1
Porcentaje
de mortalidad
Tratamiento 2
Toxicidad
Huevo 10 15 Inocuo
Larva 12 20 Inocuo
Cocón 10 20 Inocuo
Adulto 10 10 Inocuo
Los resultados en el laboratorio sugieren que es posible la
utilización conjunta del hongo entomopatógeno B. bassiana
y el depredador C. exterior en los sistemas de producción
agrícola para el control de plagas, ya que, si en el
laboratorio se registraron bajos niveles de mortalidad, en
el campo los efectos negativos del hongo sobre el insecto
deben ser menores, ya que, según Alves (1998), la mortalidad
observada en condiciones de laboratorio no siempre
es equivalente a la obtenida en condiciones de campo, donde
la cantidad de inóculo que alcanza el insecto es menor.
Lo anterior coincide con lo planteado por la OILB, que
aconseja como primer paso trabajar en condiciones de
laboratorio. Si el plaguicida resulta ser inocuo en condiciones
de laboratorio, no es necesario conocer su efecto
en condiciones de semicampo o campo, ya que si no
ha afectado al organismo en estas estrictas condiciones,
difícilmente lo pueda hacer en campo; sin embargo,
por lo general si un plaguicida tiene algún efecto
negativo en laboratorio, tendrá que ser objeto de ensayos
de semicampo y campo para determinar su actividad,
de acuerdo con Viñuela et al. (1993).
CONCLUSIONES
• El hongo entomopatógeno B. bassiana (cepa LBb-1)
no afectó en ensayos de laboratorio el desarrollo embrionario
de los huevos, el de las larvas, ni la emersión
y la supervivencia de los adultos del depredador
C. exterior.
• Es posible la utilización conjunta de B. bassiana (cepa
LBb-1) y C. exterior para el control biológico de plagas
en los sistemas de producción agrícola debido a
la baja susceptibilidad de este depredador al entomopatógeno.
56/fitosanidad

Susceptibilidad de Chrysopa exterior Navás a..
REFERENCIAS
Alves, S.: «Fungos entomopatogênicos», Controle microbiano de
insetos, Fundação Estudos Agráios Luiz de Queiroz, Brasil, 1998,
pp. 289-381.
Amorim, L. G.; R. Sousa; A. Moino; B. Souza: «Compatibility Between
Beauveria bassiana and the Predator Chrysoperla externa in
Laboratory» Pesquisa Agropecuária Brasileira 40(6), 2005.
Bateman, R.: «The Development of a Mycoinsecticide for the Control of
Locust and Grasshoppers», Outlook on Agriculture 26:13-18, 1997.
Castillo, A.; J. Gómez; F. Infante; F. E. Vega: «Susceptibilidad del
parasitoide Phymastichus coffea a Beauveria bassiana en condiciones
de laboratorio», Neotropical Entomology 38(5):665-670, 2009.
FAO: «Métodos recomendados para la detección y la medición de la
resistencia de plagas agrícolas a los plaguicidas», Boletín FAO
17(4)76-82, Italia, 1969.
Fonseca, A. R.; C. Carvalho; B. Souza; C. Ecole: «Functional Response
of Chrysoperla externa fed on Schizaphis graminum», International
Congress of Entomology, Brasil, Abstract Book I, 2000.
García, L.: «Evaluación toxicológica y ecotoxicológica de un
bionematicida constituido por la cepa imi sd 187 de Pochonia
chlamydosporia var. catenulata», tesis de doctorado, UNAH, Censa,
La Habana, 2005.
Generoso, A.: «Compatibilidad de Beauveria bassiana e Paecilomyces
fumosoroseus com Chrysoperla externa e metodologia para avaliação
da seletividade», Dissertação, Universidade Estadual Paulista,
Jaboticabal, 2002.
Hansen, L. J.; M. L. Johnson: «Conservation and Toxicology: Integrating
the Disciplines», Conservation Biology 13(5):1225-1227, EE. UU.,
1999.
Iannacone, J.; L. Alvariño: «Evaluación del riesgo ambiental del insecticida
cartap en bioensayos con tres invertebrados», Agricultura
Técnica 62(3):366-374, Chile, 2002.
Iannacone, J.; G. Lamas: «Efecto de dos extractos botánicos y un insecticida
convencional sobre el depredador Chrysoperla externa», Manejo
Integrado de Plagas y Agroecología 65:92-101, Costa Rica, 2002.
Iannacone, J.; G. Lamas: «Efectos toxicológicos de extractos de molle
(Schinus molle) y lantana (Lantana camara) sobre Chrysoperla
externa (Neuroptera: Chrysopidae) en Perú», Agricultura Técnica
63(4):347-360, Chile, 2003.
Massó, E.; R. Gómez: «Producción y uso de entomófagos en Cuba»,
Fitosanidad 12(4):253, La Habana, 2008.
Núñez, E.: «Chrysopidae (Neuroptera) del Perú y sus especies más
comunes», Revista Peruana de Entomología 31:69-75, 1988.
Speciale, F.: «Alternativas ante el uso de químicos», Control Biológico
de Insectos, FCV-UNA, 2007, http://www.abc.com.py/suplementos/
rural/articulos.php?pid=481138 (consultado el 21 de marzo de 2009).
Thungrabeab, M.; S. Tongma: «Effect of Entomopathogenic Fungi,
Beauveria bassiana (Balsam) and Metarhizium anisopliae (Metsch)
on non Target Insects», Kmitl Science Technology Journal 7(1):8-
12, Tailandia, 2007.
Vázquez, L.: «Efecto de Verticillium lecanii y Beauveria bassiana
sobre Cotesia americanus (Hymenoptera: Braconidae), parasitoide
de larvas de la primavera de la yuca (Erinnyis ello L.)», Fitosanidad
6(1):25-27, La Habana, 2002.
Vázquez, L.: Manejo integrado de plagas. Preguntas y respuestas
para agricultores y extensionistas, Ed. Cidisav, La Habana, 2003.
Viñuela, E.; J. A. Jacas; V. Marco; A. Adan; F. Budia: «Los efectos de
los plaguicidas sobre los organismos beneficiosos en agricultura.
Grupo de trabajo de OILB plaguicidas y organismos beneficiosos.
I. Insecticidas y acaricidas», Phytoma 45:18-25, España, 1993.
fitosanidad/57

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 59-60
Comunicación corta
UN NUEVO HOSPEDANTE DE LA GUAGUA DE PÚSTULA
(ASTEROLECANIUM PUSTULANS COCKERELL) EN TAGETES
LUCIDA CAV. (ANISILLO).
María Magdalena Rivera Amita e Isabel Echeverría Sosa
Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Estación Experimental de Plantas Medicinales
Dr. Juan Tomas Roig, cidemeepm@infomed.sld.cu
En la Estación Experimental de Plantas Medicinales
Dr. Juan Tomas Roig se realizan investigaciones con
especies de plantas con propiedades medicinales. Una
de ellas es Tagetes lucida Cav., perteneciente a las
Asteraceae (Compositae), y conocida comúnmente por
anisillo.
Es una hierba perenne, fuertemente aromática, con alto
contenido de aceites esenciales. Se le reportan propiedades
antiespasmódicas, digestivas y para evitar las
náuseas, entre otras [Martínez y Cáceres, 2000].
Las investigaciones están encaminadas a la introducción
a fase de cultivo de la especie T. lucida, ya que
existen directrices y regulaciones de las buenas prácticas
agrícolas, las cuales deben cumplimentarse en la
investigación y producción de plantas con fines medicinales.
Los estudios se realizan por un colectivo de investigadores
desde la introducción a cultivo hasta comprobar
su actividad sedante, que popularmente le atribuye la
población en Cuba, según encuesta realizada por Fuentes
y Expósito (1995).
En monitoreos realizados al cultivo se detectó la presencia
del insecto Asterolecanium pustulans, conocido
como guagua de pústula (Homóptero: Asterolecanidae),
el que coincidió con la descripción del insecto realizada
por Borges et al. (1988).
Bruner et al. (1975) detectaron este insecto fitófago en
la especie medicinal Orthosiphon aristatus (Blume) Miq.
(té de riñón), además en 35 especies de plantas de importancia
económica.
Acosta y Rodríguez (2006) hacen referencia a esta plaga
en varias especies medicinales pertenecientes a las
Lameaceaes y Umbelliferae, las cuales se han visto afectadas
por la guagua de pústula, entre las que se encuentran
Orthosiphon aristatus (Blume) Mig. (té de riñón),
Mentha x piperita L. (toronjil de menta) y Ocimun
basilicum L. (albahaca blanca), entre las Lameaceaes,
y Foeniculum vulgare Mill. (hinojo), de la familia
Umbelliferae.
En las especies Lameaceaes se han observado deformaciones
en las plantas, entre nudos cortos, abultamientos
en el tallo, donde se adhieren los insectos, con hojas
pequeñas, que provocan un atrofiamiento en los brotes
nuevos, mientras la sintomatología observada con la
presencia del insecto guagua de pústula en T. lucida es
el abultamiento del tallo donde se adhiere el patógeno,
sin que se apreciaran otros daños al material vegetal;
no obstante, es importante señalar la presencia de este
organismo nocivo que pudiera en un futuro llegar a constituir
plaga de este cultivo medicinal.
Los daños que ocasionan la guagua de pústula son de
gran magnitud, afectan la calidad, rendimiento y el buen
funcionamiento de los procesos fisiológicos de las plantas.
Por eso es que para T. lucida, cuyo cultivo comienza
ahora, es importante tener una vigilancia fitopatológica,
porque podría ser en un futuro una plaga que
Recibido: 6/11/10
Aceptado: 13/11/10
fitosanidad/59

Rivera y Echeverría
cause grandes pérdidas en la producción con el incremento
de las áreas de cultivo.
REFERENCIAS
Acosta L.; C. Rodríguez: Plantas medicinales: bases para su producción
sostenible, Ed. Agroinfor, Cuba, 2006.
Borges, M.; D. Pla; L. Vázquez: «El té de riñón (Orthosiphon aristatus
Benth.), nueva planta hospedante de guagua de pústula Asterolecanium
pustulans Lackerell. (Homóptera: Asterolecanidae)», Rev.
Centro Agrícola 15(1):91-92, Cuba, 1988.
Bruner, S. C.; L. C. Scaramuza; A. R. Otero: Catálogo de los insectos
que atacan a las plantas económicas de Cuba, 2. a ed. revisada,
Academia de Ciencias de Cuba, La Habana, 1975.
Fuentes, V.; A. Expósito: «Las encuestas etnobotánicas sobre plantas
medicinales en Cuba», Rev. Jard. Bat. Nat. 26:77-144, Cuba, 1995.
Martínez, J. V.; A. Cáceres: «Agrotecnología para el cultivo del pericón
o hierva de San Juan (Tagetes lucida Cav.)», Fundamentos de la
agrotecnología de cultivos de plantas medicinales iberoamericanas,
Santafé de Bogotá, Colombia, 2000, pp. 450-462.
60/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 15, no. 1, marzo 2011, pp. 61-62
PHYTOPHTHORA NICOTIANAE BRENDA DE HAAN
EN LA ESPECIE ORNAMENTAL HELECHO MANO DE MONO
(MICROSORIUM SCOLOPENDRIUM (BURM.) COPEL)
Daymara I. Vaillant Flores y Maria Ofelia López Mesa
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, La Habana,
C.P. 11600, dvaillant@inisav.cu
A través de los años Phytophthora nicotianae Brenda
Hann ha representado un problema fitosanitario grave
para la agricultura cubana al provocar cuantiosos
daños en cultivos agrícolas y en plantas ornamentales,
dadas sus características etiológicas y biológicas que le
han permitido infectar un mayor número de hospedantes
en diferentes géneros de plantas [García et al, 2002; CPC
Data Sheet, 2002].
Sus principales hospedantes en Cuba son Nicotiana
tabacum L., Lycopersicon esculentum Mill., Ananas
comosus (L.) Merrill, Capsicum annuum L., Cucumis
melo L., Citrus spp., Cocos nucifera L., entre otros
[Minter et al., 2001]. En los últimos años ha incidido
notablemente en el cultivo de papa [Bruna y Tobar, 2004].
En plantas ornamentales se ha reportado en Dianthus
barbatus L., Dianthus chinense L., Vinca rosea L. y
Epidendrum cochleatum L. [Sandoval et al., 1998, 1999].
Durante el 2007, en viveros de plantas ornamentales
de 9 a. y 70, en el municipio de Playa, La Habana, se
colectaron muestras de plantas con sintomatología similares
a las causadas por patógenos fúngicos, entre
las cuales se encontraba helecho mano de mono
(Microsorium scolapemdrium Ham., Don), cuyos síntomas
consistían en manchas foliares regulares en forma
de tizón (Fig. 1).
Las muestras se desinfectaron con hipoclorito de sodio
al 1% durante 3 min, se lavaron dos veces con agua
destilada estéril, se colocaron en cámara húmeda
[Gilchrist et al., 2005] y se sembraron en medio empobrecido
(agar-agua) durante 48 h con el objetivo de aislar
el patógeno. Posteriormente se sembraron en agar-papadextrosa
(PDA) y se incubaron durante 72 h a 25 ± 1°C.
Para inducir a la formación de esporangios se realizó la
técnica del cebo, consistente en mezclar a partes iguales,
en un portaobjeto cóncavo estéril, agua corriente y agua
de lluvia, ambas previamente esterilizadas, y se colocó en
el centro una porción de hierba de Don Carlos (Sorghum
helepense (L.) Pers.) estéril, en donde se introdujo un fragmento
de agar con el micelio del hongo, y se mantuvo
dentro de una placa durante 72 h a temperatura ambiente
con alternancia de luz y oscuridad.
Transcurrido el tiempo estimado se realizaron observaciones
de las características culturales en el microscopio
estereoscopio, y en el óptico se observaron las estructuras
formadas a 40 y 100x. La colonia en PDA
era de color blanco, algodonosa y con bordes regulares.
Al microscopio óptico se observó un micelio cenocítico
hialino, con un ancho de las hifas comprendido de 3 a 5 µm.
Se formaron abundantes esporangios papilados de forma
ovoide, no caducos, que se encontraban en un rango
de 23-25 µm x 15-20 µm (Fig. 2). Estas dimensiones se
encuentran en el rango planteado por Hall (1993) [citado
por Edwin y Ribero, 1996], quienes sustentan que
los esporangios de P. nicotiane pueden oscilar de 11 a 60
µm de largo por 20 a 45 µm de ancho, y las clamidosporas
de 13 a 60 µm de diámetro. De acuerdo con estas características
culturales definitorias para la especie y a la
sintomatología que presentaban las plantas de helecho,
se determinó que el agente causal era P. nicotianae, primera
vez detectado en Cuba en Microsorium scolapemdrium.
Recibido: 16/6/9
Aceptado: 12/8/9
fitosanidad/61

Vaillant y López
Figura 1. Síntomas en plantas
de helecho.
Figura 2. Esporangios formados
por P. nicotiane.
REFERENCIAS
Bruna, A.; G. Tobar: «Determinación de Phytophthora nicotianae causante
del cancro del tomate en Chile», Agricultura Técnica 64(3):314-
318, Chile, 2004.
CPC Data Sheet: «PhytID-Identification of Plant Pathogenic Phytophthora
Species by ITS Fingerprinting», Inglaterra, 2002, http://www.phytid.
org (consultado en enero de 2009).
Erwin, D. C.; O. K. Ribero: Phytophthora diseases worldwide, St. Paul,
Minnesota, APS Press, EE. UU., 1996.
García, A.; M. Aranguren; R. Luzbet; M. Ríos; L. Herrera: «Relación de
los niveles de inóculo de Phytophthora sp. en plantaciones de pomelo
con suelo desnudo y con césped en la calle», Centro Agrícola
3(29):59-61, Cuba, 2002.
Gilchrist Saavedra, L.; G. Fuentes Dávila; C. Martínez Cano; R. M. López
Atilano; E. Duveiller; R. P. Singh; M. Henry; I. García: Guía práctica
para la identificación de algunas enfermedades de trigo y cebada,
2. a ed., CIMMYT, México, 2005.
Minter, D. W.; M. Rodríguez; J. Mena: Fungi of the Caribbean an annotated
checklist, PDMS Publishing 1 Ridgeway Road, Isleworth, Middlesex,
Tw 75LB, Inglaterra, 2001.
Sandoval, I; T. Bonilla; M. O. López; Y. Tomas: «Hongos de suelo que
atacan el clavel y antagonismo in vitro con Trichoderma spp.»,
Fitosanidad 2(3-4):41-44, La Habana.
Sandoval, I; T. Bonilla; M. O. López; Y. Tomas: «Captura y cuantificación
de Phytophthora parasitica en muestras de flores y ornamentales»,
Fitosanidad 3(2):3-5, La Habana, 1999.
62/fitosanidad