[Protein C antigen rocket]. - Agentúra Harmony vos

PROTEIN C-ANTIGEN ROCKET-EID
SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE
BITTE BEACHTEN: Platte aus dem Kühlschrank nehmen, circa 5-20 Minuten auf 15...30°C
aufwärmen lassen und überschüssige Feuchtigkeit vor Gebrauch aufsaugen.
1. Ein Fläschchen S.A.R.P. mit 1,0ml destilliertem oder entionisiertem Wasser rekonstituieren.
Zur Herstellung der Standardkurve Verdünnungen wie folgt herstellen:
Prozent Aktivität Verdünnung Teile S.A.R.P. Teile 0,85 % Kochsalz
100% rekonstituiertes S.A.R.P. unverdünnt verwenden
50% 1:2 1 1
25% 1:4 1 3
12.5% 1:8 1 7
2. Patientenproben und Kontrolle mit 0,85 % Kochsalz verdünnen. Eine 1:2 Verdünnung (1 Teil
Patientenprobe und 1 Teil Kochsalz) und eine 1:4 Verdünnung (1 Teil Patientenplasma und 3 Teile
Kochsalz) vorbereiten. Je nach Patientenanamnese können weitere Verdünnungen erforderlich
sein. Proben mit Verdacht auf abnormale Werte müssen möglicherweise unverdünnt getestet
werden.
3. Vorbereitung:
Bei Verwendung einer Zip Zone Kammer: 200ml Tris-Tricine-Puffer in jede der äußeren
Kammerbereiche gießen (benötigt insgesamt 400ml Puffer) und je einen Schwammstreifen in den
Puffer längs der inneren Kammerwand legen.
Bei Verwendung der TITAN GEL Kammer: 65ml Tris-Tricine-Puffer in jede der inneren
Kammerbereiche gießen.
4. Überschüssigen Puffer aus den Stanzlöchern der Platte entfernen. Bitte beachten: Überschüssige
Flüssigkeit auf der Platte kann zu schlechten Ergebnissen führen.
5. 10µl Patientenproben- oder Kontroll-Verdünnung in die vorgesehenen Stanzlöcher geben.
BITTE BEACHTEN: Auf jeder Platte müssen Proben für die Standardkurve mitlaufen.
Ein Doppelansatz der Patientenproben wird empfohlen. Beim Pipettieren der Proben in die
Stanzlöcher der Platte darauf achten, dass die Pipettenspitze nicht die Wände berührt, da das Gel
dadurch beschädigt werden kann.
6. Die Proben 5 Minuten in die Agarose diffundieren lassen.
7. Elektrophorese:
Bei Verwendung einer Zip Zone Kammer: Die Platte mit der Agarose-Seite nach unten auf die
Schwammstreifen in die Kammer legen. Der Applikationspunkt (Stanzlöcher) zeigt dabei zur
Kathoden-Seite (negativ) der Kammer.
Bei Verwendung der TITAN GEL Kammer: Die Platte mit der Agarose-Seite nach unten durch
sanftes Hineindrücken in den inneren Kammerbereich legen. Das Gel / die Gele so positionieren,
dass die Kanten des Agars im Puffer und die Stanzlöcher zur Kathodeseite (-) der Kammer zeigen.
8. Die Elektrophorese der Platten bei einem Konstantstrom von 16 mA pro Platte 3 Stunden laufen lassen.
9. Die Platten nach Elektrophorese aus der Kammer nehmen. Den Kammerpuffer nach jedem Lauf
verwerfen. BITTE BEACHTEN: Das TITAN GEL Multifärbe-Set (Kat. Nr. 1558) als Färbe- und
Spülkammer verwenden.
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