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12 Producción avícola DIAGNÓSTICO Y SITUACIÓN ACTUAL DE LA ENFERMEDAD DE GUMBORO EN ESPAÑA EN ESTE ARTÍCULO SE REVISAN Y ANALIZAN LOS ASPECTOS MÁS RELEVANTES DE LA ENFERMEDAD DE GUMBORO, LOS DATOS OBTENIDOS DURANTE ESTOS ÚLTIMOS AÑOS SOBRE ESTA ENFERMEDAD EN ESPAÑA Y SE DISCUTE UN POSIBLE ENFOQUE DIAGNÓSTICO PARA MEJORAR EL CONTROL DE ESTE PROCESO INFECCIOSO. Natàlia Majó Masferrer 1,2 y Roser Dolz Pascual 1 1 Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA 2 Departament de Sanitat i Anatomia Animals, Universitat Autònoma de Barcelona Imágenes cedidas por los autores Uno de los procesos infecciosos más importantes, desde el punto de vista sanitario y económico, que afecta a las aves de producción en todos los países con avicultura industrial es la bursitis infecciosa aviar (Infectious Bursal Disease, IBD) o enfermedad de Gumboro. Durante la 63ª Sesión General de la Oficina General de Epizootías (OIE, París, del 15 al 19 de mayo de 1995) se consideró que la IBD era una enfermedad de gran importancia socioeconómica y que se encontraba en más del 95% de los países miembros de la OIE (Eterradossi, 1995). Una década después, la situación mundial no ha cambiado y esta enfermedad, a pesar de intensas campañas de vacunación, continúa siendo una de las infecciones víricas más importantes que afecta a las aves de producción. CABE DESTACAR QUE DENTRO DEL SEROTIPO 1 EXISTEN DIVERSOS SUBTIPOS OVARIANTES QUE PRESENTAN DIFERENCIASTANTO ANTIGÉNICAS COMO PATOGÉNICAS.UNO DE ESTOS SUBTIPOS ESTARÍA FORMADO POR LAS CEPAS MUY VIRULENTAS O VERY VIRULENT (VV) STRAINS. ASPECTOS BÁSICOS DE LA ENFERMEDAD DE GUMBORO O BURSITIS INFECCIOSA AVIAR La IBD es un proceso vírico agudo que afecta básicamente a pollos de engorde de más de tres semanas de edad y se caracteriza por provocar necrosis y posterior atrofia de la bolsa de Fabricio, órgano del sistema linfoide de las aves donde maduran los linfocitos B, que son las células responsables de la producción de anticuerpos. La gravedad de este proceso vírico radica no únicamente en la mortalidad directa asociada a la infección, que puede llegar al 5%, sino también en la inmunosupresión grave que ocasiona en los animales supervivientes. Es común que la mayoría de aves de un lote afectado que no mueren en el brote agudo de enfermedad sufran posteriormente infecciones por diversos patógenos secundarios, con la consiguiente disminución del bienestar Análisis filogenético Virus 1 Virus 2 FIGURA 1. ENFOQUE DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD DE GUMBORO. A B C Virus 3 Virus 4 Virus 5 Virus 6 Virus problema Virus 7 Virus 8 Virus 9 Virus 10 Virus 11 Virus 12 G Virus 13 Virus 14 A) animal que muestra signos clínicos inespecíficos de enfermedad (postración, plumas erizadas); B) lesiones macroscópicas en la bolsa de Fabricio compatibles con enfermedad de Gumboro (edema y hemorragias); C) foto de microscopía electrónica del virus de Gumboro que puede estar presente en la bolsa de Fabricio de este animal; D) extracción del genoma vírico; E) técnica de PCR o de amplificación del genoma vírico; F) visualización del resultado de la PCR en un gel de agarosa: la presencia de las bandas blancas implica presencia de genoma vírico en la muestra estudiada; G) comparación y clasificación, mediante un árbol filogenético, de la secuencia del virus problema, con otras secuencias de varios virus de Gumboro de referencia. animal y las pérdidas económicas que esto representa (Kibenge et al., 1988). Hasta el momento, se conocen dos serotipos de IBDV que presentan variaciones en la estructura de una de sus proteínas más importantes, la VP2 (Becht et al., 1988). Esta proteína forma la parte más externa de la partícula vírica y en ella residen los determinantes antigénicos, es decir, las zonas de unión que reconocen los anticuerpos. El serotipo 1 es el más comúnmente aislado en pollos y el serotipo 2, menos virulento, en pavos. Aunque puede existir infección cruzada, de hecho se han detectado anticuerpos contra el serotipo 2 en pollos, se ha demostrado que no existe inmunidad cruzada entre los dos serotipos. Cabe destacar que dentro del serotipo 1 existen diversos subtipos o variantes que presentan diferencias tanto antigénicas como patogénicas. Uno de estos subtipos estaría formado por las cepas muy virulentas o very virulent (vv) strains, que aparecieron a finales de los años ochenta causando brotes de elevada morbilidad y mortalidad (entre el 15 y el 65%) en varios países europeos, entre ellos España (Van den Berg et al., 1991; Pagès et al., 1991; Majó et al., 2002). Estas nuevas cepas presentaban la particularidad de que podían romper la inmunidad maternal y, por lo tanto, provocar infección en animales con anticuerpos maternales y no podían ser controladas con las vacunas existentes en ese momento. A raíz de este hecho se diseñaron nuevas vacunas, llamadas coloquialmente vacunas “calientes”, que presentaban un menor grado de atenuación que las vacunas clásicas utilizadas hasta el momento y que, en la actualidad, constituyen la forma más eficaz de controlar los brotes de enfermedad de Gumboro causados por cepas vvIBDV. ENFOQUE DIAGNÓSTICO Y ELECCIÓN DE LA VACUNA APROPIADA Durante el curso de un engorde de pollos en una granja, un avicultor detecta que entre los 35 y 40 días de edad la mortalidad se incrementa hasta un 7%. Los pollos se quedan postrados, en un rincón, y acaban muriendo al cabo de pocas F horas. El veterinario visita la granja, realiza la necropsia de unos cuantos animales y le comenta al avicultor que se puede tratar de la enfermedad de Gumboro. El avicultor le comenta, extrañado, que los animales han sido vacunados a la edad y con la vacuna que le había recomendado el mismo veterinario, y que no entiende cómo se pueden haber infectado. El veterinario decide recoger algunas muestras y enviarlas a un laboratorio de diagnóstico para poder saber qué ha pasado y tomar las medidas pertinentes en el siguiente engorde. Al cabo de una semana, el veterinario recibe los resultados de las técnicas diagnósticas. Mediante la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction, PCR) se confirma que los animales están infectados por el virus de Gumboro. Por otro lado, el estudio filogenético determina que se trata de un tipo de virus de alta virulencia, frente al cual las vacunas que habitualmente se utilizan no ofrecen un grado de protección adecuado. Finalmente, el veterinario decide cambiar la vacuna de Gumboro en el siguiente ciclo de engorde de la granja. D E ’115
13 Con la exposición de este caso real pretendíamos evidenciar que, con las nuevas herramientas de diagnóstico, no únicamente se puede determinar el origen del problema (en este caso el virus de Gumboro), sino también obtener información que ayude a los técnicos a tomar las decisiones adecuadas para solucionarlo (en este caso nos permite saber el tipo de virus que estaba causando la enfermedad y escoger la vacuna adecuada). En la actualidad, parece claro que el control eficaz de la enfermedad de Gumboro debe ir precedido por un diagnóstico preciso de la enfermedad que incluya la determinación del subtipo de virus que afecta a una granja, dado que el tipo de vacuna a utilizar debería ser diferente según el subtipo de virus circulante. Creemos, pues, esencial revisar en profundidad el abordaje diagnóstico frente a esta enfermedad. El diagnóstico presuntivo de un caso de IBD se realiza habitualmente en función del cuadro clínico y de las lesiones macroscópicas características del proceso. En la forma aguda de IBD, es decir la causada por vvIBDV, el cuadro clínico se caracteriza porque los animales se encuentran decaídos y presentan anorexia, erizamiento de las plumas y diarrea acuosa. Es frecuente observar que los animales se pican la zona pericloacal. A medida que avanza el curso de la enfermedad, los animales se encuentran cada vez más deprimidos, no se mueven y finalmente mueren. timo y palidez renal. Es importante remarcar que todas estas lesiones son secundarias, inespecíficas, y que no tienen valor como diagnósticas de IBD si no van asociadas a una lesión de la bolsa de Fabricio. Pero el diagnóstico de IBD basado únicamente en los hallazgos clínicos y en las lesiones macroscópicas no es siempre directo y claro. Son muchas las ocasiones en las que en una granja se observan animales que clínicamente parecen inmunosuprimidos y que presentan las bolsas atróficas, sin haberse visto las lesiones agudas típicas de la enfermedad de Gumboro. El poder confirmar o descartar la circulación de virus de Gumboro en estos lotes de animales y saber de qué tipo de virus de Gumboro se trata (cepa clásica o vvIBDV) es una cuestión compleja pero que con las técnicas diagnósticas de que disponemos en la actualidad es, afortunadamente, posible. En estos últimos años se han venido desarrollando técnicas moleculares que facilitan el diagnóstico de la IBD. Estas técnicas permiten, por un lado, detectar cantidades muy pequeñas de virus, incluso en las fases avanzadas de la enfermedad (bolsas atróficas) y por otro lado, una vez detectado, permiten identificar y clasificar de forma rápida y específica el virus de Gumboro que se encuentra circulando en una granja, mediante el estudio y comparación de parte de su secuencia génica. Este método presenta la gran ventaja que también puede detectar, en una fase inicial, la presencia de nuevas cepas víricas circulantes en el campo. Basándose en el uso de estas nuevas técnicas, el enfoque diagnóstico que proponemos ante una caso clínico de sospecha de enfermedad de Gumboro es el que a continuación detallamos (figura 1). La muestra óptima para diagnosticar Gumboro es, como ya hemos mencionado, la bolsa de Fabricio. Son necesarias aproximadamente unas cinco bolsas, que se pueden congelar o mantener en fresco, si el envío se hace inmediatamente. Una vez las bolsas llegan al laboratorio, con ellas realizamos la técnica de la transcriptasa reversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Esta técnica nos permite la detección y amplificación específica de ➔ EN LA ACTUALIDAD,PARECE CLARO QUE EL CONTROL EFICAZ DE LA ENFERMEDAD DE GUMBORO DEBE IR PRECEDIDO POR UN DIAGNÓSTICO PRECISO DE LA ENFERMEDAD QUE INCLUYA LA DETERMINACIÓN DEL SUBTIPO DEVIRUS QUE AFECTA A UNA GRANJA. En cuanto a las lesiones causadas por el IBDV, es importante destacar una vez más que el principal órgano afectado por este virus es la bolsa de Fabricio. Cualquier cepa de IBDV se replica en la bolsa de Fabricio y causa, en mayor o menor medida, lesiones en este órgano. Las lesiones observadas en la bolsa durante la infección se pueden dividir en dos fases claramente diferenciadas. En una primera fase, de las 24 horas a los cuatro días posinfección (p.i.) las lesiones observadas son de carácter inflamatorio, mientras que en una fase posterior, de los cinco a los ocho-diez días p.i. son de carácter degenerativo-atrófico. Macroscópicamente, a los tres días p.i. se empieza a observar un exudado gelatinoso en la serosa de la bolsa y a los cuatro días p.i. aparece edematosa y con un evidente aumento de tamaño, que puede llegar a alcanzar el doble de su tamaño habitual. En esta fase es frecuente observar petequias o equimosis en la mucosa de la bolsa. A los cinco días p.i. la bolsa empieza a disminuir de tamaño y hacia el octavo día p.i. puede llegar a ser hasta una tercera parte de su tamaño normal. Durante la fase aguda de la IBD es frecuente observar hemorragias en los músculos pectorales y del muslo, así como también en la unión entre el proventrículo y la molleja. Además, se puede observar también un cierto aumento de tamaño del bazo, una disminución del tamaño del ’115
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