Dade Innovin

Dade ® Innovin ®
Intended Use
For use in prothrombin time (PT) determinations and prothrombin time-based assays in citrated human
plasma.
Summary and Explanation
Dade ® Innovin ® Reagent is prepared from purified recombinant human tissue factor produced in E. coli,
combined with synthetic phospholipids (thromboplastin) 1 , calcium, buffers and stabilizers. The reagent
initiates clotting via the extrinsic and common pathways in a global screening test, the prothrombin time
(PT). Dade ® Innovin ® Reagent has three major applications based upon the PT 2 :
1. as a rapid screening test to detect single or combined deficiencies of the extrinsic coagulation system
indicative of hereditary and acquired coagulation disorders, liver disease or vitamin K deficiency;
2. as a sensitive monitoring test for oral anticoagulant therapy; and
3. as an assay for specific coagulation factors.
Additionally, various photo-optical coagulation analyzers are able to derive the fibrinogen value from the
determination of the prothrombin time.
Dade ® Innovin ® Reagent is manufactured using recombinant human tissue factor and synthetic phospholipids
which do not contain any other clotting factors such as prothrombin, F VII and F X. Therefore,
it is highly sensitive to factor deficiencies and oral anticoagulant-treated patient plasma samples. The
sensitivity of Dade ® Innovin ® Reagent is very similar to the WHO human brain reference thromboplastin 3 .
Dade ® Innovin ® Reagent is insensitive to therapeutic levels of heparin. The high sensitivity of Dade ®
Innovin ® Reagent to coagulation factors and its insensitivity to therapeutic heparin make it beneficial
in monitoring oral anticoagulant therapy 3 . In addition, its high sensitivity (i.e. the responsiveness of the
reagent to moderately depleted factor activity) allows differentiation of abnormal plasmas, even in the
mildly pathological range.
Principle of the Method
The coagulation cascade is activated by incubating plasma with the optimal amount of thromboplastin
and calcium; the clotting time is then measured.
Reagents
Materials provided
10 x l 4 mL, [REF] B4212-40
10 x l 10 mL, [REF] B4212-50
12 x l 20 mL, [REF] B4212-100
Composition
Dade ® Innovin ® Reagent: Lyophilized reagent consisting of recombinant human tissue factor and synthetic
phospholipids (thromboplastin), calcium ions, a heparin-neutralizing compound, buffers and stabilizers
(bovine serum albumin).
Warnings and Precautions
For in-vitro diagnostic use.
Reagent Preparation
Reconstitute a vial of lyophilized Dade ® Innovin ® Reagent with distilled or deionized water using the
volume stated on the vial label. Store at +2 to +8 °C.
To ensure complete reconstitution, thoroughly mix the contents of the vial immediately after adding
the water. If left to stand, Dade ® Innovin ® Reagent should be re-mixed before use in order to ensure a
homogeneous solution. Continuous mixing is not necessary.
Note: Do not use water that contains preservatives.
Storage and Stability
Store at +2 to +8 °C. At this temperature, the unopened reagent can be used until its expiry date (see
vial label).
Stability after reconstitution: +2 to +8 °C 10 days (closed vial)
+15 to +25 °C 5 days (closed vial)
+37 °C 24 hours (closed vial)
Information about on-board stability is specified in the Reference Guides (Application Sheets) for the
different coagulation analyzers.
Do not freeze!
Signs of expiry: Absence of vacuum when opening the vial; reagent is difficult to reconstitute; results
are not reproducible.
Materials required but not provided
Control Plasma N or Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Control Plasma P, Dade ® Ci-Trol ® Level 2 or Dade ® Ci-Trol ® Level 3
PT-Multi Calibrator* (Refer to the Instructions for Use for details on use.)
Standard Human Plasma or fresh normal plasma 4 for determining the mean normal PT (MNPT)**
Sodium citrate solution (0.11 mol/L or 0.13 mol/L / 3.2 % or 3.8 %) for blood collection
Distilled or deionized water without preservatives
Plastic tubes
Plastic transfer pipettes
Pipettes for precise measurement of 20.0 mL, 10.0 mL, 1.0 mL, 0.50 mL, 0.20 mL and 0.10 mL
Coagulation analyzer
Equipment
Dade ® Innovin ® Reagent can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Healthcare
Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers.
The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay specific handling and performance
information which may differ from that provided in these Instructions for Use. In this case, the information
contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions
for Use. Please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer!
Specimen Collection and Preparation
Mix nine parts of freshly collected patient blood with one part of 0.11 or 0.13 mol/L (3.2 % or 3.8 %)
sodium citrate solution. An evacuated tube system or syringe may be used.
Centrifuge the blood specimen at 1500 x g for no less than 15 minutes at room temperature.
Store in an unopened tube at room temperature. Do not store on ice or at +2 to +8 °C as cold activation
of F VII may alter results. Plasma should be tested within 24 hours of blood collection. Samples should
not stand at +37 °C for more than 5 minutes. If the patient is on both heparin and coumarin-based anticoagulant
therapy, the results may vary with time of storage.
Please refer to CLSI document H21-A5 5 for detailed information on sample preparation and storage.
Procedure
Manual Testing:
Prewarm Dade ® Innovin ® Reagent to +37 °C.
Pipet into coagulation tubes as follows:
Test Sample
Control
Plasma 0.1 mL -
Control - 0.1 mL
Incubate tubes and samples for 1 - 2 minutes
(max. 5 minutes) at +37 °C
Add prewarmed Dade ® Innovin ® Reagent 0.2 mL 0.2 mL
Start stopwatch simultaneously with addition of Dade ® Innovin ® Reagent. Observe time of clot formation.
Internal Quality Control
Normal range:
Dade ® Ci-Trol ® Level 1 or Control Plasma N
Pathological range: Dade ® Ci-Trol ® Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 or Control Plasma P
Two levels of quality control material (normal and pathological range) must be measured at start of the
test run, with each calibration, upon reagent vial changes and at least every eight hours on each day
of testing.
The control material should be prepared and processed in the same manner as the samples.
A range of allowable variation should be established for controls in each laboratory. New control ranges
should be established for each lot of reagent or control material. This range is usually based on ± 2.5
standard deviations (SD) from the control mean.
If the control values are outside of the confidence interval, check the coagulation analyzer, controls and
reagents. Do not release patient results until the cause of deviation has been identified and corrected.
Results
Currently, various methods are used for reporting PT results. ISI (International Sensitivity Index) values
for Dade ® Innovin ® Reagent are provided for the particular reagent/instrument combination; these enable
the results to be reported in INR (International Normalized Ratio) 4 . Computation and use of the INR are
described below. The INR system is the preferred method for reporting results for oral anticoagulated
patient specimens. Alternatively, the patient’s PT (in seconds) together with the reference range (in
seconds) can be used to report results.
Example: patient result of 18 seconds; reference range 9.7 - 12.3 seconds.
Determination of INR (International Normalized Ratio)
Values using Dade ® Innovin ® Reagent
International PT (Prothrombin Time) Standardization for Oral Anticoagulant Therapy Monitoring
1. According to the joint recommendations of the World Health Organization (WHO) 4 and the International
Committee on Thrombosis and Haemostasis, the PT results for patients on oral anticoagulants
should be reported as INR values. Reported INR results are independent of the reagents and methods
used, and are specifically intended for assessing patients stabilized on long-term oral anticoagulant
therapy.
The INR is determined 4 according to the following equation:
Patient PT
INR = R ISI , where R = ——————————
Mean normal PT**
B4212 G40 E0501 (837)
ISI is the International Sensitivity Index of the reagent/instrument combination.
The ISI values for Siemens thromboplastin reagents are determined in accordance with WHO
recommendations.
2. Methods of INR calculation:
a. Calculators with exponential functions:
These instructions refer specifically to the Texas Instruments TI-55 II calculator. Other calculators,
e.g. Hewlett-Packard models, may require different key stroke sequences. Consult the calculator
reference manual and check example problems against the Conversion Table to assure mastery
of conversion procedures.
Enter Patient PT in seconds, press ”÷”, enter MNPT**, press ”=”. The display will now show R, the
Patient Ratio. Now press the ”y x ” key, then enter the specific ISI value of the thromboplastin/instrument
combination used and press ”=”. The result displayed is the patient’s INR value.
Press
Notes
Example: 24
patient PT
÷ divided by
11.0 MNPT**
= patient ratio (display shows 2.1818)
y x
exponential function key
1.1 example ISI value
= result: INR (display shows 2.3588)
Report as INR = 2.4
b. Conversion Table:
First, calculate the patient PT/MNPT** ratio, R. The INR value can then be read from the enclosed
INR Conversion Table by looking in the column under the appropriate ISI value, in the row that
corresponds to the patient’s PT ratio (R).
c. Automatic:
INR values can be computed automatically by various coagulometers. For details, consult the
relevant instruction manual. Specific coagulation analyzer protocols are available from Siemens on
request.
Derived Fibrinogen
Using Dade ® Innovin ® Reagent and the appropriate assay on Siemens photometric coagulation analyzers
or Sysmex ® coagulation analyzers, the fibrinogen concentration may be derived by analyzing the
change in optical signal during prothrombin time determinations, using a derived fibrinogen calibration
curve. This calibration curve (master curve) is provided by Siemens in the lot-dependent Table of Assigned
Values.
Limitations of the Procedure
There are no other clotting factors in recombinant human tissue factor. Factor assay curves using Dade ®
Innovin ® Reagent may therefore give longer clotting times at the lowest levels of the deficient factor than
with other reagents. This may result in clotting times greater than 100 seconds for low factor levels in
factor assay curves.
Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and
meet product specifications. User defined modifications are not supported by Siemens as they may affect
performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modifications to
these instructions or use of the reagents on analyzers other than those included in Siemens Application
Sheets or these instructions for use.
Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history, clinical
presentation and other findings.
Interfering Substances
Many commonly administered drugs may affect the results obtained in prothrombin time testing 4 . This
should be kept in mind especially when unusual or unexpected abnormal results are obtained. Unexpected
abnormal results should be followed by additional coagulation studies to determine the source
of the abnormality.
Turbidity of lipemic samples, e.g. with parenteral feeding, may preclude accuracy in the derived fibrinogen
determination.
Dade ® Innovin ® Reagent is insensitive to concentrations of unfractionated heparin up to approximately
2.0 units per mL. The heparin sensitivity study was conducted using spiked normal pooled plasma and
the sensitivity to heparin was defined by the concentration of heparin in the specimen that prolonged the
PT results exceeding the upper limit of the reference range.
Inhibitors such as lupus anticoagulant may interfere with the prothrombin time and result for example in
INRs that do not reflect the exact degree of anticoagulation 6 . Hirudin or other direct thrombin inhibitors in
therapeutic dose result in prolonged prothrombin times 7,8 .
Expected Values
Values for healthy individuals vary from laboratory to laboratory depending on the technique used.
Therefore, each laboratory should establish its own reference intervals based on the procedure and
coagulation analyzers used.
In a study with ostensibly healthy subjects (n = 138), the following reference interval (5 th to 95 th percentile)
was determined:
Sysmex ® CA-7000 system: Central 90 % reference interval: 10.4 to 12.4 seconds
Derived fibrinogen 9 : 1.8 - 3.5 g/L
Therapeutic Ranges
Therapeutic ranges for INR may vary depending on the indication of oral anticoagulant therapy 10 .
B4212 G40 E0501 (837) 1

Specific Performance Characteristics
Precision
Precision of prothrombin time results is generally limited by the method used. Therefore, within a single lot,
the reagent should yield results which are reproducible within the quality control of the laboratory.
The precision of Dade ® Innovin ® Reagent on the Sysmex ® CA-6000 system was estimated with quality
control material from a total of six (6) separate runs over three (3) testing days (two runs per day) and
four (4) replicates per control level, per run with the following results:
Assay Control Level n Mean
Prothrombin Time 1
2
Derived Fibrinogen 1
2
24
24
24
24
12.4 s
33.0 s
2.37 g/L
3.37 g/L
Coefficient of Variation
Within Run Run to Run Total
1.3 %
0.7 %
4.0 %
4.1 %
2.0 %
3.4 %
2.8 %
3.0 %
2.4 %
3.5 %
4.9 %
5.1 %
Bibliography
1. Spicer EK, Horton R, Bloem L, et al. Isolation of cDNA clones coding for human tissue factor:
Primary structure of the protein and cDNA. Proc Natl Acad Sci USA. 1987; 84:5148-52.
2. Quick AJ. Hemorrhagic diseases and thrombosis. Philadelphia: Lea and Febiger; 1966.
3. Bader R, Mannucci PM, Tripodi A, et al. Multicentric evaluation of a new PT reagent based on recombinant
human tissue factor and synthetic phospholipids. Thromb Haemost. 1994;71:292-9.
4. Poller L. The Prothrombin Time. WHO/LAB/98.3. 1998.
5. CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays. Approved Guideline - Fifth Edition. CLSI document
H21-A5 [ISBN 1-56238-657-3]. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania
19087-1898 USA, 2008.
6. Tripodi A, Chantarangkul V, Clerici M, et al. Laboratory control of oral anticoagulant treatment by
the INR system in patients with the antiphospholipid syndrome and lupus anticoagulant. Results of
a collaborative study involving nine commercial thromoplastins. Br J Haematol. 2001;115:672-8.
7. Tobu M, Iqbal O, Messmore HL, et al. Influence of different anticoagulant agents on fibrinopeptide
A generation. Clin Appl Thromb Hemost. 2003;9:273-92.
8. Fenyvesi T, Joerg I, Harenberg J. Influence of Lepirudin, Argatroban, and Melagatran on prothrombin
time and additional effect of oral anticoagulation. Clin Chem. 2002;48:1791-4.
9. Wagner C, Dati F. Fibrinogen. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-
Books Verlagsgesellschaft, 1998: 609-12.
10. Hirsh J, Dalen JE, Anderson DR, et al. Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness,
and optimal therapeutic range. Chest. 2001;119:8S-21S.
* Not available in the USA
** The mean normal PT is defined as the mean value of the normal range. It must be determined specifically
for each thromboplastin lot using the method used to analyze the patient samples and, where
appropriate, using the coagulometer used for the analysis.
Ci-Trol, Dade and Innovin are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.
Purchase of Dade ® Innovin ® provides the purchaser with a limited license to use the purchased Dade ®
Innovin ® covered by U.S. Patent Nos. 5,625,036; 7,084,251 and 7,049,131 in accordance with the Instructions
for Use set forth herein.
USA Distributor:
Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
Edition May 2008
Dade ® Innovin ®
Anwendungsgebiet
Für die Bestimmung der Thromboplastinzeit (TPZ) und für darauf basierende Tests in humanem Citratplasma.
Diagnostische Bedeutung
Dade ® Innovin ® Reagenz ist ein in E. coli produzierter, gereinigter rekombinanter humaner Gewebefaktor,
kombiniert mit synthetischen Phospholipiden (Thromboplastin) 1 , Calcium, Puffer und Stabilisatoren. Das
Reagenz induziert die Gerinnselbildung über den exogenen Aktivierungsweg und die gemeinsame
Endstrecke in einem globalen Screening-Test, der Bestimmung der Thromboplastinzeit (TPZ). Dade ®
Innovin ® Reagenz wird für drei auf der TPZ 2 basierende Hauptanwendungen genutzt:
1. als rascher Screening-Test zum Nachweis einzelner oder kombinierter Mängel extrinsischer
Gerinnungsmechanismen, durch den angeborene oder erworbene Gerinnungsstörungen,
Lebererkrankungen oder Vitamin K-Mangel erkannt werden können;
2. als empfindlicher Test zum Monitoring von oralen Antikoagulanzientherapien und
3. zur Bestimmung der exogenen Gerinnungsfaktoren.
Verschiedene photo-optische Gerinnungsmessgeräte sind zusätzlich in der Lage, den Fibrinogenwert
während der Bestimmung der Thromboplastinzeit abzuleiten.
Dade ® Innovin ® Reagenz wird aus rekombinantem humanem Gewebefaktor und synthetischen
Phospholipiden hergestellt, die keinerlei andere Gerinnungsfaktoren, wie z. B. Prothrombin, F VII oder F X
enthalten. Daher ist es hochsensibel gegenüber Plasmen mit Mangel an Gerinnungsfaktoren und solchen
von Patienten unter oraler Antikoagulanzientherapie. Die Empfindlichkeit von Dade ® Innovin ® Reagenz
kommt dem WHO-Referenzthromboplastin aus Humanhirn sehr nahe 3 . Hinzu kommt, dass Dade ®
Innovin ® Reagenz gegenüber therapeutischen Heparinkonzentrationen unempfindlich ist. Aufgrund der
hohen Empfindlichkeit gegenüber Gerinnungsfaktoren und der Unempfindlichkeit gegenüber Heparin
im therapeutischen Bereich ist Dade ® Innovin ® Reagenz besonders gut für die Überwachung oraler
Antikoagulanzientherapien geeignet 3 . Durch die hohe Empfindlichkeit (d. h. die Reaktion des Reagenzes
auf mäßig verringerte Gerinnungsfaktorenaktivität) können sogar Plasmaproben erkannt werden, die nur
geringgradig pathologisch sind.
Prinzip der Methode
Durch Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Thromboplastin und Calcium wird der
Gerinnungsvorgang ausgelöst, die Zeit bis zur Bildung des Fibringerinnsels wird gemessen.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackungen
10 x l 4 ml, [REF] B4212-40
10 x l 10 ml, [REF] B4212-50
12 x l 20 ml, [REF] B4212-100
Zusammensetzung
Dade ® Innovin ® Reagenz: Lyophilisat aus rekombinantem humanem Gewebefaktor und synthetischen
Phospholipiden (Thromboplastin), Calciumionen, einer Heparin-neutralisierenden Verbindung, Puffer
und Stabilisatoren (Rinderserumalbumin).
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
Nur zur in-vitro diagnostischen Anwendung.
Vorbereitung der Reagenzien
Ein Fläschchen Dade ® Innovin ® Reagenz Lyophilisat mit destilliertem oder entionisiertem Wasser
entsprechend der Mengenangabe auf dem Fläschchenetikett auflösen. Bei +2 bis +8 °C lagern.
Zur vollständigen Auflösung den Fläschcheninhalt sofort nach der Zugabe des Wassers gut mischen. Wird
das Fläschchen stehengelassen, sollte Dade ® Innovin ® Reagenz vor der Anwendung erneut gemischt
werden, um eine homogene Lösung zu erhalten. Kontinuierliches Mischen ist nicht erforderlich.
Hinweis: Kein Wasser mit Konservierungsstoffen verwenden.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Bei +2 bis +8 °C lagern. Bei dieser Temperatur bleibt das Reagenz ungeöffnet bis zum Verfallsdatum
haltbar (siehe Fläschchenetikett).
Stabilität nach Rekonstitution: +2 bis +8 °C 10 Tage (geschlossene Flasche)
+15 bis +25 °C 5 Tage (geschlossene Flasche)
+37 °C 24 Stunden (geschlossene Flasche)
Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften)
für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt.
Nicht einfrieren!
Hinweis auf Verfall: fehlendes Vakuum beim Öffnen des Fläschchens; Reagenz läßt sich nur schwer
lösen; es lassen sich keine reproduzierbaren Werte erreichen.
Zusätzlich benötigte Materialien
Kontroll-Plasma N oder Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Kontroll-Plasma P, Dade ® Ci-Trol ® Level 2 oder Dade ® Ci-Trol ® Level 3
PT-Multi Calibrator* (Einzelheiten zum Gebrauch entnehmen Sie bitte der Gebrauchsanweisung.)
Standard Human-Plasma oder frisches Normalplasma 4 zur Bestimmung der MNPT**
Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l oder 0,13 mol/l bzw. 3,2 %ig oder 3,8 %ig) für die Blutentnahme
Destilliertes oder entionisiertes Wasser ohne Konservierungsstoffe
Kunststoffröhrchen
Kunststoffpipetten für den Probentransfer
Pipetten für das genaue Abmessen von 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml und 0,10 ml
Gerinnungsmessgerät
Geräte
Dade ® Innovin ® Reagenz kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet werden.
Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher
(Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/ testspezifische Informationen zur
Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen
können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften)
die Informationen in dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers
beachten!
Probenabnahme und -vorbereitung
Neun Teile frisch abgenommenes Patientenblut mit einem Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l oder
0,13 mol/l bzw. 3,2 %ig oder 3,8 %ig) mischen. Es können Blutentnahmesysteme mit evakuierten
Gefäßen oder die Abnahme in der Spritzentechnik angewandt werden.
Die Blutprobe soll bei 1500 x g für nicht weniger als 15 Minuten bei Raumtemperatur zentrifugiert
werden.
Im ungeöffneten Abnahmeröhrchen bei Raumtemperatur lagern. Nicht auf Eis oder bei +2 bis +8 °C
lagern, da eine Kälteaktivierung von F VII die Ergebnisse verändern könnte. Das Patientenplasma
sollte innerhalb von 24 Stunden nach der Blutabnahme analysiert werden. Bei +37 °C dürfen die
Proben nicht länger als 5 Minuten stehen bleiben. Bei Patienten mit Heparin und Coumarin basierter
Antikoagulanzientherapie können die Ergebnisse in Abhängigkeit von der Standzeit variieren.
Genaue Angaben zur Probenentnahme und -lagerung entnehmen Sie bitte dem CLSI-Document H21-A5 5 .
Testdurchführung
Manuelle Durchführung:
Dade ® Innovin ® Reagenz auf +37 °C vorwärmen.
In die Kunststoffröhrchen wie folgt pipettieren:
Testprobe Kontrolle
Plasma 0,1 ml -
Kontrolle - 0,1 ml
Proben in den Röhrchen 1 bis 2 Minuten (max. 5 Minuten)
bei +37 °C inkubieren
Vorgewärmtes Dade ® Innovin ® Reagenz rasch zugeben 0,2 ml 0,2 ml
Bei Zugabe von Dade ® Innovin ® Reagenz ist die Stoppuhr starten, um die Zeit bis zur Gerinnselbildung
zu messen.
Interne Qualitätskontrolle
Normalbereich:
Dade ® Ci-Trol ® Level 1 oder Kontroll-Plasma N
Pathologischer Bereich: Dade ® Ci-Trol ® Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 oder Kontroll-Plasma P
Bei jedem Wechsel der Reagenzflaschen, zu Beginn eines Testlaufes, nach jeder Kalibration und
mindestens alle 8 Stunden an jedem Testtag müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine
im pathologischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte wie zu untersuchende Proben
behandelt werden.
Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich für die Kontrollen ermitteln. Bei jeder neuen Reagenzienoder
Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden. Diese betragen in der Regel
± 2,5 Standardabweichungen (SD) vom mittleren Kontrollwert.
Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Vertrauensbereichs, sollten das Gerinnungsmessgerät, die
Kontrollen und die Reagenzien überprüft werden. Die Ergebnisse der Patientenproben dürfen nicht
freigegeben werden, bevor der Grund der Abweichung eruiert und korrigiert wurde.
Auswertung
Zur Darstellung von TPZ-Werten finden derzeit verschiedene Methoden Anwendung. Für Dade ® Innovin ®
Reagenz gibt es einen chargen- und gerätespezifischen "International Sensitivity Index" -Wert (ISI), der
die Angabe der Patientenwerte als "International Normalized Ratio" (INR) ermöglicht 4 . Berechnung und
Anwendung der INR sind unten beschrieben. Die Angabe in INR wird bevorzugt zur Dokumentation von
Ergebnissen für oral-antikoagulierte Patientenproben eingesetzt. Alternativ kann die Patienten-TPZ (in
Sekunden) zusammen mit dem Referenzbereich (in Sekunden) zur Ergebnismitteilung genutzt werden.
Beispiel: Patientenergebnis 18 Sekunden; Referenzbereich 9,7 - 12,3 Sekunden.
Bestimmung der INR (International Normalized Ratio)
Werte für Dade ® Innovin ® Reagenz
Internationale TPZ (Thromboplastinzeit) Standardisierung für das Monitoring oraler Antikoagulanzientherapien
1. Gemäß den gemeinsamen Empfehlungen der World Health Organization (WHO) 4 und des
International Committee on Thrombosis and Haemostasis sollten TPZ-Werte für Patienten unter oraler
Antikoagulanzientherapie als INR-Werte angegeben werden. INR-Werte sind von den verwendeten
Reagenzien und Methoden unabhängig und speziell für die Befundung von Patienten vorgesehen,
die mit einer langfristigen oralen Antikoagulanzientherapie stabil eingestellt sind.
Die INR wird mit der folgenden Gleichung bestimmt 4 :
Patienten-TPZ
INR = R ISI , wobei R = ——————————
MNPT**
ISI ist der International Sensitivity Index der Reagenzien-/Gerätekombination.
Die ISI-Werte für Siemens Thromboplastin Reagenzien werden entsprechend den WHO-
Empfehlungen ermittelt.
2. Methoden zur Berechnung der INR:
a. Rechner mit Exponentialfunktion:
Diese Hinweise gelten speziell für den Rechner TI-55 II von Texas Instruments. Bei anderen
Rechnern, wie Hewlett-Packard-Modellen, kann die Eingabe abweichen. Hinweise finden Sie
in der Bedienungsanleitung des Rechners. Überprüfen Sie die Rechenbeispiele anhand der
Umrechnungstabelle, um Rechenfehler zu erkennen.
Geben Sie die Patienten-TPZ in Sekunden ein, und drücken Sie ”÷”. Geben Sie nun die MNPT** ein,
und drücken Sie anschließend ”=”. In der Anzeige erscheint R, die Patienten-Ratio. Drücken Sie nun die
Taste „y x “, geben Sie den spezifischen ISI-Wert der verwendeten Thromboplastin-/Gerätekombination
ein und drücken ”=”. Das angezeigte Ergebnis ist der INR-Wert der Patientenprobe.
Eingabe
Erläuterung
Beispiel: 24
Patienten TPZ
÷ geteilt durch
11,0 MNPT**
= Patienten-Ratio (in der Anzeige erscheint 2,1818)
y x
Taste für die Exponentialfunktion
1,1 Beispiel-ISI-Wert
= Ergebnis: INR (in der Anzeige erscheint 2,3588)
als INR 2,4 ausgeben
b. Umrechnungstabelle:
Berechnen Sie zunächst die TPZ-Ratio, R, indem Sie die Patienten-TPZ durch die MNPT**
teilen. Den INR-Wert finden Sie in der beiliegenden Umrechnungstabelle in der Spalte unter dem
entsprechenden ISI-Wert und in der Zeile, die der Patienten-TPZ-Ratio (R) entspricht.
c. Automatisch:
INR-Werte können von verschiedenen Gerinnungsmessgeräten automatisch berechnet werden.
Hinweise hierzu sind in der Bedienungsanleitung zum Gerät enthalten. Spezifische Protokolle für
Gerinnungsmessgeräte sind auf Anfrage von Siemens erhältlich.
B4212 G40 E0501 (837) 2

Abgeleiteter Fibrinogenwert
Bei Verwendung eines geeigneten Tests zusammen mit photo-optisch messenden Siemens
Gerinnungsmessgeräten und Sysmex ® Gerinnungsmessgeräten kann mit diesem Reagenz auch
die Fibrinogenkonzentration durch Analyse der Veränderung im optischen Signal während der
Thromboplastinzeit-Bestimmung abgeleitet werden. Dazu muss die Masterkurve für abgeleitetes
Fibrinogen aus der chargenabhängigen Wertetabelle als Kalibrationskurve eingegeben werden.
Einschränkungen der Testdurchführung
Bei Verwendung von Dade ® Innovin ® Reagenz können sich bei der Bestimmung der exogenen Faktoren
für die niedrigste Aktivität des Mangelfaktors längere Gerinnungszeiten als bei anderen Reagenzien
ergeben, da in rekombinantem humanen Gewebefaktor keine zusätzlichen Gerinnungsfaktoren enthalten
sind. So kann die Gerinnungszeit für eine niedrige Faktoraktivität mehr als 100 Sekunden betragen.
Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale
Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene
Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die
Testergebnisse beeinflussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen
Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften
von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengeräten zu validieren.
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen
Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
Störfaktoren
Die Thromboplastinzeit kann durch eine Vielzahl häufig verschriebener Medikamente beeinflusst
werden 4 , ein Umstand, der insbesondere beim Auftreten von unerwartet abnormalen Werten in Betracht
gezogen werden sollte. Bei unerwartet abnormalen Werten muss gegebenenfalls die Ursache durch
weitere Gerinnungstests gesucht werden.
Durch die Trübung lipämischer Proben, z. B. bei künstlicher Ernährung, kann die Richtigkeit der
abgeleiteten Fibrinogenbestimmung beeinträchtigt werden.
Dade ® Innovin ® Reagenz ist gegen unfraktionierte Heparinkonzentrationen bis zu 2,0 Einheiten/
ml unempfindlich. Die Heparin-Sensitivitätsstudie wurde mit aufgestocktem Normalplasmapool
durchgeführt. Die Heparinsensitivität definiert sich durch die Konzentration an Heparin in der Probe, die
zu einer Verlängerung über den Referenzbereich hinaus führt.
Inhibitoren wie Lupus Antikoagulans können die Thromboplastinzeit beeinflussen und beispielsweise zu
INR Werten führen, die nicht das genaue Maß der Antikoagulation wiedergeben 6 .
Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombin-Inhibitoren führen zu verlängerten
Gerinnungszeiten 7,8 .
Referenzbereiche
Die Werte gesunder Personen variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der angewendeten
Methode. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage des verwendeten Verfahrens und
Gerinnungsmessgerätes eigene Referenzbereiche ermitteln.
In einer Studie mit offensichtlich gesunden Personen (n = 138) wurde der folgende Referenzbereich
(5.- 95. Perzentile) ermittelt:
Sysmex ® CA-7000 System:
Abgeleitetes Fibrinogen 9 :
Zentraler 90 %-Referenzbereich: 10,4 - 12,4 Sekunden.
1,8 - 3,5 g/l
Therapeutische Bereiche
Die therapeutischen Bereiche für die INR können in Abhängigkeit von der jeweiligen Indikation einer
oralen Antikoagulanzientherapie variieren 10 .
Leistungsmerkmale des Tests
Präzision
Die Präzision von Thromboplastinzeit-Werten ist im allgemeinen von der verwendeten Methode
abhängig. Mit Reagenzien einer Charge sollten Ergebnisse erzielt werden, die innerhalb der
Qualitätskontrollgrenzen des Labors reproduzierbar sind.
Die Präzision von Dade ® Innovin ® Reagenz am Sysmex ® CA-6000 System wurde mit
Qualitätskontrollmaterial bei insgesamt 6 Testläufen an 3 Tagen (2 Testungen pro Tag) und 4-fach
Bestimmungen pro Kontrolle bestimmt. Pro Testung wurden die folgenden Ergebnisse erzielt:
Bestimmung Kontrolle n Mittelwert
Thromboplastinzeit 1
2
abgeleitetes
Fibrinogen
1
2
Literatur
Siehe englische Gebrauchsanweisung.
24
24
24
24
12,4 s
33,0 s
2,37 g/l
3,37 g/l
Variationskoeffizient
Intra-Assay Inter-Assay Gesamt
1,3 %
0,7 %
4,0 %
4,1 %
2,0 %
3,4 %
2,8 %
3,0 %
2,4 %
3,5 %
4,9 %
5,1 %
* nicht in den USA erhältlich
** Die mittlere normale TPZ oder MNPT (= Mean Normal Pathrombin Time) ist definiert als Mittelwert
des Normalbereichs. Sie muss speziell für jede Thromboplastincharge mit der für die Analyse
von Patientenproben verwendeten Methode bzw. dem dafür eingesetzten Gerinnungsmessgerät
bestimmt werden.
Ci-Trol, Dade und Innovin sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex ist ein eingetragenes Warenzeichen von SYSMEX CORPORATION.
Mit dem Erwerb des durch die U.S. Patente Nr. 5,625,036, 7,084,251 und 7,049,131 geschützten Dade ®
Innovin ® erhält der Käufer das eingeschränkte Recht, dieses Produkt gemäß dieser Gebrauchsanweisung
zu verwenden.
Dade ® Innovin ®
Ausgabe Mai 2008
Domaine d’utilisation
Pour la mesure du Temps de Quick (TQ - ou Temps de Thromboplastine, TP), ainsi que les autres tests
basés sur cette mesure, dans le plasma citraté humain.
Intérêt diagnostique
Le réactif Dade ® Innovin ® est un facteur tissulaire humain recombinant purifié, préparé à partir d’E. Coli,
et additionné de phospholipides synthétiques (thromboplastine) 1 , de calcium, de tampon et de stabilisateurs.
Le réactif induit la formation d’un caillot par les voies d’activation exogène et commune selon un
test de dépistage global, la mesure du Temps de Quick (TQ). Le réactif Dade ® Innovin ® a trois principales
indications basées sur le TQ 2 :
1. comme test de dépistage rapide, en vue de mettre en évidence un ou plusieurs déficits du système
exogène de la coagulation, témoins de troubles de la coagulation congénitaux ou acquis, de maladies
hépatiques ou d’un déficit en vitamine K;
2. comme test sensible permettant un suivi des traitements aux anticoagulants oraux, et
3. pour le dosage des facteurs exogènes de la coagulation.
Différents appareils de coagulation photo-optiques permettent en plus d’obtenir la valeur du fibrinogène
dérivé pendant la mesure du temps de Quick.
Le réactif Dade ® Innovin ® est préparé à partir de facteur tissulaire humain recombinant et de phospholipides
synthétiques, qui ne contiennent aucun des autres facteurs de la coagulation, comme par ex. la
prothrombine, le F VII ou le F X. Ceci explique sa grande sensibilité aux plasmas exempts de facteurs
de la coagulation ainsi qu’aux plasmas de patients sous anticoagulants oraux. La sensibilité du réactif
Dade ® Innovin ® est très proche de celle de la thromboplastine de référence de l’OMS, obtenue à partir
de cerveau humain 3 . De plus, le réactif Dade ® Innovin ® est insensible aux concentrations thérapeutiques
d’héparine. Du fait de sa grande sensibilité aux facteurs de la coagulation et de son absence de sensibilité
à l’héparine dans le domaine thérapeutique, le réactif Dade ® Innovin ® est particulièrement adapté à
la surveillance des traitements aux anticoagulants oraux 3 . Sa grande sensibilité, c’est-à-dire sa capacité
à réagir à des activités de facteurs de la coagulation faiblement diminuées, permet même de révéler des
plasmas qui ne sont que faiblement pathologiques.
Principe de la méthode
L’incubation d’un plasma avec une quantité optimale de thromboplastine et de calcium déclenche le
processus de coagulation. Le temps qui s’écoule jusqu’à la formation d’un caillot de fibrine est mesuré.
Réactifs
Contenu des conditionnements
10 x l 4 ml, [REF] B4212-40
10 x l 10 ml, [REF] B4212-50
12 x l 20 ml, [REF] B4212-100
Composition
Dade ® Innovin ® Réactif : lyophilisat de facteur tissulaire humain, de phospholipides synthétiques
(thromboplastine), d’ions calcium, d’un neutralisateur d’héparine, de tampon et de stabilisateurs (albumine
sérique bovine).
Mises en garde et précaution d’emploi
Réservé à un usage de diagnostic in vitro.
Préparation du réactif
Reconstituer le contenu d’un flacon de Dade ® Innovin ® Réactif lyophilisé avec de l’eau distillée ou désionisée,
selon le volume indiqué sur l’étiquette du flacon. Conserver à +2/+8 °C.
Bien mélanger immédiatement après l’addition de l’eau pour aider à l’homogénéisation complète. Si on
n’utilise pas la solution immédiatement, agiter de nouveau le flacon juste avant emploi. Il est inutile de
l’agiter en permanence.
Remarque : ne pas utiliser d’eau contenant des conservateurs.
Stabilité et conditions de conversation
Température de conservation : +2/+8 °C. A cette température et conservé dans son flacon non ouvert,
le réactif reste stable jusqu’à la date de péremption (cf. étiquette du flacon).
Stabilité après reconstitution : +2/+8 °C 10 jours (flacon fermé)
+15/+25 °C 5 jours (flacon fermé)
+37 °C 24 heures (flacon fermé)
Les données de stabilité sur les appareils de coagulation sont indiquées dans les manuels de référence
(protocoles d’adaptation) des différents appareils de coagulation.
Ne pas congeler le réactif !
Indices que le réactif est périmé : absence de vide à l’ouverture du flacon ; difficulté à dissoudre le
lyophilisat ; impossibilité à obtenir des valeurs reproductibles.
Autres matériel et réactifs nécessaires
Plasma de contrôle N ou Dade ® Ci-Trol ® Niveau 1
Plasma de contrôle P, Dade ® Ci-Trol ® Niveau 2 ou Dade ® Ci-Trol ® Niveau 3
PT-Multi Calibrator* (Pour obtenir des informations détaillées sur l’utilisation, consulter la notice d’utilisation).
Plasma standard humain ou plasma normal frais 4 pour déterminer le MNPT**
Solution citrate de sodium (0,11 mol/l ou 0,13 mol/l, ou à 3,2 % ou 3,8 %) pour les prélèvements sanguins
Eau distillée ou désionisée sans conservateurs
Tubes en plastique
Pipettes en plastique pour le transfert des échantillons
Pipettes pour la mesure exacte de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml et 0,10 ml
Appareil de coagulation
Appareils
Le réactif Dade ® Innovin ® peut être utilisé manuellement ou sur des appareils automatiques de coagulation.
Siemens Healthcare Diagnostics propose des manuels de référence (protocoles d’adaptation) pour différents
appareils de coagulation. Ces manuels contiennent des informations sur la réalisation des tests et leurs caractéristiques,
spécifiques aux tests et à l’appareil. Ces informations peuvent différer de celles indiquées dans
cette notice d’emploi. Dans ce cas, utiliser les données du manuel de référence (protocoles d’adaptation) et
non celles de cette notice d’emploi. Respecter les instructions d’emploi du fabricant de l’appareil !
Prélèvement et préparation des échantillons à tester
Mélanger neuf parts de sang de patient fraîchement prélevé avec une part de solution de citrate de sodium
à 0,11 ou 0,13 mol/l (3,2 % ou 3,8 %). Il est possible d’utiliser un système de tubes de prélèvement
ou une seringue.
Centrifuger l’échantillon sanguin à 1500 x g pendant au moins 15 minutes à température ambiante.
Conserver à température ambiante dans le tube fermé. Ne pas conserver sur de la glace ni entre + 2
à + 8 °C car l’activation du facteur VII par le froid peut fausser les résultats. Le plasma doit être testé
dans les 24 heures suivant le prélèvement sanguin. Ne pas conserver les échantillons à + 37 °C
pendant plus de 5 minutes. Si le patient suit un traitement anticoagulant par héparine et coumarine,
les résultats peuvent varier en fonction de la durée de conservation.
Consulter le document CLSI H21-A5 5 pour connaître le détail de la préparation et de la conservation
des échantillons.
Réalisation du test
Réalisation manuelle :
Préchauffer le réactif Dade ® Innovin ® à +37 °C.
Distribuer dans des tubes à essai en plastique selon le protocole suivant :
Echantillon à tester Contrôle
Plasma 0,1 ml -
Contrôle - 0,1 ml
Laisser incuber les échantillons dans des tubes pendant 1
à 2 minutes (max. 5 minutes) à +37 °C.
Ajouter rapidement le réactif Dade ® Innovin ® préchauffé 0,2 ml 0,2 ml
Déclencher le chronomètre au moment de l’addition du réactif Dade ® Innovin ® , et mesurer le temps qui
s’écoule jusqu’à la formation du caillot.
Contrôle de qualité interne
Domaine normal : Dade ® Ci-Trol ® Niveau 1 ou Plasma de contrôle N
Domaine thérapeutique : Dade ® Ci-Trol ® Niveau 2, Dade ® Ci-Trol ® Niveau 3 ou Plasma de contrôle P
A chaque changement de flacon de réactif, au début de chaque test, après chaque calibration et au
moins toutes les 8 heures sur une même journée de travail, tester deux contrôles (un dans le domaine
normal et un dans le domaine thérapeutique).
Traiter les contrôles comme des échantillons de patients.
Chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de confiance pour les contrôles. Définir un
nouveau domaine à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle. Le domaine de confiance correspond
généralement à ± 2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur moyenne du contrôle.
Si les valeurs des contrôles sortent du domaine de confiance, vérifier l’appareil de coagulation, les
contrôles ainsi que les réactifs. Ne pas valider les valeurs obtenues pour l'échantillon de patient tant que
l’origine d’une valeur aberrante n’a pas été identifiée et corrigée.
Exploitation des résultats
Le rendu des résultats de TQ se fait selon différentes méthodes. Pour le réactif Dade ® Innovin ® , il est
donné une valeur ISI («International Sensitivity Index»), qui varie selon les lots et les appareils, et qui
permet de rendre les résultats des patients en INR («International Normalized Ratio») 4 . Pour le calcul et
l’utilisation des valeurs INR, cf. ci-dessous. Il est recommandé d’utiliser des INR pour la documentation
des résultats obtenus chez les patients sous anticoagulants oraux. Comme alternative, on peut également
rendre les résultats de patients sous forme de TQ (en secondes), accompagnés du domaine de
référence (en secondes).
Exemple : résultat du patient : 18 secondes ; domaine de référence : 9,7 - 12,3 secondes.
Détermination de l’INR (International Normalized Ratio)
Valeurs pour Dade ® Innovin ® Réactif
Standardisation internationale du TQ (Temps de Quick) pour le suivi des traitements aux anticoagulants oraux
1. Selon les recommandations générales de l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) 4 et du Comité
International pour la Thrombose et l’Hémostase, les valeurs de TQ pour les patients sous anticoagulants
oraux devraient être rendus en INR. Les INR sont indépendants des réactifs et des méthodes
utilisés, et particulièrement adaptés au rendu des résultats de patients stabilisés par un traitement
aux anticoagulants oraux à long terme.
L’INR est calculé selon la formule suivante 4 :
TQ du patient
INR = R ISI , sachant que R = —————————————
MNPT**
B4212 G40 E0501 (837) 3

ISI est l’index de sensibilité international pour la combinaison réactif/appareil.
Les valeurs ISI pour les réactifs de thromboplastine de Siemens sont déterminées selon les recommandations
de l’OMS.
2. Méthodes pour le calcul de l’INR :
a. à l’aide d’une calculatrice avec fonction exponentielle :
Ces indications sont spécialement prévues pour la calculatrice TI-55 II de Texas Instruments.
Avec d’autres calculatrices, comme les Hewlett-Packard, la saisie peut varier. Se reporter aux
instructions de la calculatrice utilisée. Tester les exemples de calcul à l’aide de la table de conversion,
afin de détecter les erreurs de calcul.
Entrer le TQ du patient en secondes et appuyer sur « ÷ ». Entrer ensuite le MNPT**, puis appuyer
sur « = ». L’écran affiche R, le ratio du patient. Appuyer ensuite sur la touche « y x », entrer la
valeur ISI spécifique de la combinaison thromboplastine/appareil utilisée, et appuyer sur « = ». Le
résultat affiché est l’INR de l’échantillon de patient.
Saisie
Signification
Exemple: 24
TQ patient
÷ divisé par
11,0 MNPT**
= ratio du patient (affichage à l’écran : 2,1818)
y x
touche de fonction exponentielle
1,1 exemple de valeur ISI
= résultat : INR (affichage à l’écran : 2,3588)
Rendre un INR de 2,4
b. à l’aide du tableau de conversion :
calculer d’abord le ratio R de TQ, en divisant le TQ du patient par le MNPT**. L’INR correspond à
la valeur qui se trouve dans la table de conversion jointe, à l’intersection de la colonne des valeurs
ISI et de la ligne des ratios des TQ patients (R).
c. par méthode automatique :
Les INR sont calculés automatiquement par différents appareils de coagulation. Se reporter au
manuel d’utilisation de l’automate utilisé. Des protocoles spécifiques sont envoyés sur demande
par Siemens.
Valeurs de fibrinogène dérivé
En utilisant le réactif Dade ® Innovin ® et un test approprié sur un appareil de coagulation photo-optique
Siemens ou Sysmex ® , on peut également obtenir avec ce réactif la concentration de fibrinogène par
analyse de la modification du signal optique pendant la mesure du Temps de Quick. Pour cela, utiliser
comme courbe d’étalonnage la courbe-mère indiquée pour le fibrinogène dérivé dans le tableau des
valeurs spécifiques à chaque lot.
Limites du test
Le facteur tissulaire humain recombinant ne contenant pas d’autres facteurs de la coagulation, on peut,
lors du dosage des facteurs exogènes, obtenir avec le réactif Dade ® Innovin ® des temps de coagulation
plus allongés qu’avec d’autres réactifs à la plus faible activité du facteur déficient. C’est ainsi que le
temps de coagulation pour l’activité la plus faible peut être supérieure à 100 secondes.
Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les performances
du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par l’utilisateur ne sont pas sous
la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système
et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de valider toutes modifications
apportées à ces instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés
dans les protocoles d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.
Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du
patient, les signes cliniques et autres constatations.
Facteurs d’interférence
Le Temps de Quick peut être influencé par un grand nombre de médicaments fréquemment prescrits 4 ,
phénomène dont il faut tenir compte, surtout lorsqu’on obtient des valeurs anormales inattendues. Dans
ce cas-là, en chercher la cause en effectuant d’autres tests de coagulation.
La turbidité des échantillons lipémiques, par ex. en cas d’alimentation artificielle, peut avoir une influence
sur la détermination du fibrinogène dérivé.
Le réactif Dade ® Innovin ® est insensible aux concentrations d’héparine non fractionnée, jusqu’à 2,0 unités/ml.
L’étude de sensibilité à l’héparine a été effectuée sur un pool de plasmas normaux enrichi. La
sensibilité à l’héparine se définit par le concentration d’héparine entraînant un allongement du temps
au-delà du domaine de référence.
Les inhibiteurs tels que les lupus anticoagulants peuvent interférer avec le taux de prothrombine et
donner lieu par exemple à des INR qui ne reflètent pas le niveau exact d'anticoagulant 6 .
Des doses thérapeutiques d’Hirudin ou d’un autre inhibiteur direct de la thrombine entraînent un allongement
des temps de coagulation 7,8 .
Domaines de référence
Les valeurs obtenues sur des sujets sains varient d’un laboratoire à l’autre selon la méthode utilisée.
Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en se basant sur la
technique et l’appareil de coagulation qu’il utilise.
Une étude portant sur des sujets apparemment sains (n = 138) a déterminé les domaines de référence
suivants (5 ème - 95 ème percentiles) :
Système Sysmex ® CA-7000 : domaine de référence central de 90 % : 10,4 - 12,4 secondes
Fibrinogène dérivé 9 : 1,8 - 3,5 g/l
Domaines thérapeutiques
Les domaines thérapeutiques pour l’INR peuvent varier selon l’indication des traitements aux anticoagulants
oraux 10 .
Caractéristiques du test
Précision
La précision des valeurs de Temps de Quick dépend généralement de la méthode utilisée. En utilisant
des réactifs d’un même lot, on doit obtenir des résultats qui sont reproductibles à l’intérieur du domaine
de contrôle de qualité défini par le laboratoire.
La précision du réactif Dade ® Innovin ® sur le système Sysmex ® CA-6000 a été déterminée à l’aide de
préparations de contrôle de qualité, testés en 6 séries au total sur 3 jours (2 tests par jour), chaque
contrôle étant testé 4 fois. Les résultats suivants ont été obtenus :
Dosage Contrôle n Valeur moyenne
Temps de Quick 1
2
Fibrinogène dérivé 1
2
24
24
24
24
12,4 s
33,0 s
2,37 g/l
3,37 g/l
Coefficient de variation
répétabilité reproductibilité total
1,3 %
0,7 %
4,0 %
4,1 %
2,0 %
3,4 %
2,8 %
3,0 %
2,4 %
3,5 %
4,9 %
5,1 %
Littérature
Cf. notice d’emploi en anglais.
* non disponible aux USA
** Le MNPT (= Mean Normal Prothrombin Time) est défini comme la valeur moyenne du domaine
normal. Il doit être spécialement déterminé pour chaque lot de thromboplastine, selon la méthode ou
l’appareil de coagulation utilisé pour l’analyse des échantillons de patients.
Ci-Trol, Dade et Innovin sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex est une marque commerciale de SYSMEX CORPORATION.
Dade ® Innovin ® est protégé par les brevets américains n° 5,625,036, 7,084,251 et 7,049,131. En achetant
Dade ® Innovin ® , l’acquéreur obtient une licence d’utilisation limitée lui donnant le droit d’utiliser le kit
Dade ® Innovin ® acheté conformément à cette notice d’utilisation.
Dade ® Innovin ®
Settore d'impiego
Da utilizzare per le determinazioni del tempo di protrombina (PT) e per i dosaggi basati sul tempo di
protrombina su plasma umano citratato.
Significato diagnostico
Il Reagente Dade ® Innovin ® viene preparato da fattore tissutale umano ricombinante purificato prodotto
in E. coli, con aggiunta di fosfolipidi sintetici (tromboplastina) 1 , calcio, tamponi e stabilizzanti. Il reagente
avvia la coagulazione attraverso le vie intrinseca e comune in un test di screening globale, il tempo di
protrombina (PT). Il Reagente Dade ® Innovin ® ha tre principali applicazioni basate sul PT 2 :
1. come test di screening rapido per rilevare carenze singole o combinate del sistema estrinseco della
coagulazione, indicative di disordini ereditari e acquisiti della coagulazione, patologie epatiche o
carenza di vitamina K;
2. come test di monitoraggio sensibile per la terapia anticoagulante orale; e
3. come dosaggio per specifici fattori della coagulazione.
Inoltre, numerosi analizzatori per coagulazione fotoottici sono in grado di derivare il valore del fibrinogeno
dalla determinazione del tempo di protrombina.
Il Reagente Dade ® Innovin ® viene prodotto utilizzando fattore tissutale umano ricombinante e fosfolipidi
sintetici che non contengono nessun altro fattore della coagulazione come protrombina, F VII e F X. Pertanto,
è altamente sensibile alle carenze di fattori e ai campioni di pazienti trattati con anticoagulanti orali.
La sensibilità del Reagente Dade ® Innovin ® è molto simile alla tromboplastina 3 di riferimento da cervello
umano dell’OMS. Il Reagente Dade ® Innovin ® non è sensibile all’eparina a livelli terapeutici. L’elevata
sensibilità del Reagente Dade ® Innovin ® ai fattori della coagulazione e la sua insensibilità all’eparina a
dosi terapeutiche lo rendono adatto per il monitoraggio della terapia anticoagulante orale 3 . Inoltre, la sua
elevata sensibilità (la reattività del reagente a diminuzione moderata dell’attività dei fattori) consente la
differenziazione dei plasmi anormale, anche nell’intervallo moderatamente patologico.
Principio del Metodo
La cascata coagulativa viene attivata incubando il plasma con la quantità ottimale di tromboplastina e
calcio; viene poi misurato il tempo di coagulazione.
Reagenti
Contenuto della confezione
10 x l 4 mL, [REF] B4212-40
10 x l 10 mL, [REF] B4212-50
12 x l 20 mL, [REF] B4212-100
Composizione
Reagente Dade ® Innovin ® : Reagente liofilizzato composto da fattore tissutale umano ricombinante e
fosfolipidi sintetici (tromboplastina), ioni calcio, un componente neutralizzante l’eparina, tamponi e stabilizzanti
(sieroalbumina bovina).
Avvertenze e precauzioni
Per uso diagnostico in-vitro.
Preparazione dei Reagenti
Ricostituire un flacone di Reagente Dade ® Innovin ® con acqua distillata o deionizzata utilizzando il volume
indicato sull’etichetta del flacone. Conservare da +2 a +8 °C.
Per garantire la completa ricostituzione, mescolare bene il contenuto del flacone immediatamente dopo
aver aggiunto l’acqua. Se lasciato a riposo, il Reagente Dade ® Innovin ® dovrebbe essere rimescolato
prima dell’uso per assicurare l’omogeneità della soluzione. Non occorre la miscelazione continua.
Nota: Non utilizzare acqua contenente conservanti.
Conservazione e Stabilità
Conservare da +2 a +8 °C. A questa temperatura, il reagente non aperto può essere utilizzato fino alla
data di scadenza (vedere etichetta del flacone).
Stabilità dopo ricostituzione: da +2 a +8 °C 10 giorni (flacone chiuso)
da +15 a +25 °C
5 giorni (flacone chiuso)
a +37 °C
24 ore (flacone chiuso)
Le informazioni sulla stabilità on-board per i diversi analizzatori per coagulazione sono indicate nelle
Reference Guides (Protocolli Applicativi).
Non congelare!
Indici di scadenza: Assenza di vuoto all’apertura del flacone; difficoltà di ricostituzione del reagente;
risultati non riproducibili.
Materiali necessario ma non fornito
Control Plasma N oppure Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Control Plasma P, Dade ® Ci-Trol ® Level 2 oppure Dade ® Ci-Trol ® Level 3
PT-Multi Calibrator* (per maggiori informazioni sull’uso, consultare le Istruzioni d'uso)
Standard Human Plasma oppure plasma normale fresco 4 per determinare il PT medio normale
(MNPT)**
Soluzione di sodio citrato (0,11 mol/L oppure 0,13 mol/L / 3,2 % oppure 3,8 %) per il prelievo del sangue
Acqua distillata o deionizzata senza conservanti
Provette di plastica
Pipette di plastica
Pipette di precisione da 20,0 mL, 10,0 mL, 1,0 mL, 0,50 mL, 0,20 mL e 0,10 mL
Analizzatore per coagulazione
Strumentazione
Il Reagente Dade ® Innovin ® può essere utilizzato manualmente oppure su analizzatori automatici per
coagulazione. Siemens Healthcare Diagnostics offre le Reference Guides (Protocolli Applicativi) per
numerosi analizzatori per coagulazione. Le Reference Guides (Protocolli Applicativi) riportano utilizzo
specifico analizzatore/test e informazioni sulle caratteristiche che possono differire da quelli forniti nelle
presenti Istruzioni per l’Uso. In questo caso, l’informazione contenuta nelle Reference Guides (Protocolli
Applicativi) sostituisce le informazioni delle presenti Istruzioni per l’Uso. Consultare il manuale di istruzioni
del produttore dello strumento!
Raccolta e preparazione dei campioni
Mescolare 9 parti di sangue fresco del paziente con 1 parte di soluzione di citrato di sodio da 0,11 o
0,13 mol/L (3,2 % o 3,8 %). È possibile utilizzare un sistema con provetta sottovuoto o una siringa.
Centrifugare il campione di sangue a 1500 x g per almeno 15 minuti a temperatura ambiente.
Conservare in una provetta chiusa a temperatura ambiente. Non conservare in ghiaccio oppure a
temperature tra +2 e +8 °C poiché l'attivazione del fattore VII dovuta al freddo può alterare i risultati.
Testare il plasma entro 24 ore dalla raccolta del campione. I campioni non devono restare a una
temperatura di +37 °C per più di 5 minuti. Se il paziente sta seguendo una terapia sia con eparina che
anticoagulante cumarinico, i risultati potrebbero variare in funzione del tempo di conservazione.
Per maggiori informazioni sulla preparazione e conservazione del campione, consultare il documento
CLSI H21-A5 5 .
Edition Mai 2008
B4212 G40 E0501 (837)
B4212 G40 E0501 (837) 4

Esecuzione del test
Esecuzione Manuale:
Preriscaldare il Reagente Dade ® Innovin ® a +37 °C.
Pipettare in provette da coagulazione come segue:
Campione in esame Controllo
Plasma 0,1 mL -
Controllo - 0,1 mL
Incubare provette e campioni per 1 - 2 minuti (max. 5 minuti)
a +37 °C
Aggiungere Reagente Dade ® Innovin ® preriscaldato 0,2 mL 0,2 mL
Avviare il cronometro simultaneamente all’aggiunta del Reagente Dade ® Innovin ® . Rilevare il tempo di
formazione del coagulo.
Controllo di Qualità Interno
Intervallo normale: Dade ® Ci-Trol ® Level 1 oppure Control Plasma N
Intervallo patologico: Dade ® Ci-Trol ® Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 or Control Plasma P
Due livelli di materiale di controllo di qualità (intervallo normale e patologico) devono essere analizzati
all’avvio di ogni ciclo operativo, con ogni calibrazione, al cambio del flacone di reagente e almeno ogni
otto ore per ogni giorno di lavoro.
Il materiale di controllo deve essere preparato e analizzato allo stesso modo dei campioni.
Ogni laboratorio dovrebbe definire un intervallo di variazione accettabile per i controlli. Nuovi intervalli di
controllo dovrebbero essere definiti per ogni lotto di reagente o di materiale di controllo. Tale intervallo è
generalmente basato su ± 2,5 deviazioni standard (DS) dal valore medio del controllo.
Se i valori di controllo sono al di fuori dell’intervallo di accettabilità, controllare l’analizzatore per coagulazione,
i controlli ed i reagenti. Non refertare i risultati dei pazienti finché non sia stata individuata e
corretta la causa di tale deviazione.
Calcolo dei risultati
Attualmente, vari metodi sono utilizzati per refertare i risultati PT. I valori di ISI (International Sensitivity
Index) per il Reagente Dade ® Innovin ® vengono forniti per la specifica combinazione reagente/strumento;
questo permette di refertare i risultati in INR (International Normalized Ratio) 4 . Calcolo e utilizzo dell’INR
sono descritti di seguito. Il sistema INR è il metodo preferenziale per refertare i risultati dei campioni di
pazienti in terapia anticoagulante orale. In alternativa, è possibile utilizzare il PT dei pazienti (in secondi)
insieme con l’intervallo di riferimento (in secondi) per refertare i risultati.
Esempio: risultato del paziente 18 secondi; intervallo di riferimento 9,7 - 12,3 secondi.
Determinazione dell’INR (International Normalized Ratio)
Valori utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ®
Standardizzazione Internazionale del PT (Tempo di Protrombina) per il Monitoraggio della Terapia Anticoagulante
Orale
1. Secondo le raccomandazioni congiunte dell’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) 4 e dell’International
Committee on Thrombosis and Haemostasis, i risultati del PT per pazienti in terapia
anticoagulante orale dovrebbero essere refertati come valori INR. I risultati refertati in INR sono
indipendenti dai reagenti e dai metodi utilizzati, e sono specificamente destinati a valutare pazienti
stabilizzati in terapia anticoagulante orale a lungo termine.
L’INR viene determinato 4 in base alla seguente formula:
PT Paziente
INR = R ISI , dove R = ———————————
PT medio normale**
ISI è l’International Sensitivity Index della combinazione reagente/strumento.
I valori di ISI per le tromboplastine Siemens vengono determinati secondo le raccomandazioni dell’OMS.
2. Metodi di calcolo dell’INR:
a. Calcolatori con funzioni esponenziali:
Queste istruzioni si riferiscono specificamente al calcolatore Texas Instruments TI-55 II. Altri calcolatori,
es. i modelli Hewlett-Packard, possono richiedere sequenze diverse di impiego dei tasti.
Consultare il manuale del calcolatore e verificare gli esempi rispetto alla Tabella di Conversione
per garantire l’adeguatezza delle procedure di conversione.
Digitare il PT del paziente in secondi, premere ”÷”, digitare lo MNPT**, premere ”=”. Il display
mostra ora R, il Rapporto Paziente. Premere ora il tasto ”y x ”, quindi digitare il valore di ISI specifico
della combinazione tromboplastina/strumento in uso e premere ”=”. Il risultato indicato è il valore
di INR del paziente.
Premere
Note
Esempio: 24
PT paziente
÷ diviso per
11,0 MNPT**
= rapporto paziente (il display mostra 2,1818)
y x
tasto della funzione esponenziale
1,1 esempio valore ISI
= risultato: INR (il display mostra 2,3588)
Refertare come INR = 2,4
b. Tabella di Conversione:
Prima, calcolare il rapporto PT paziente/MNPT**, R. Il valore INR può poi essere letto nell’allegata
Tabella di Conversione INR guardando nella colonna dell’adeguato valore di ISI, alla riga corrispondente
al rapporto del PT paziente (R).
c. Automatico:
I valori INR possono essere calcolati automaticamente da numerosi coagulometri. Per i dettagli,
consultare il relativo manuale di istruzioni. I protocolli per analizzatori per coagulazione specifici
sono disponibili a richiesta presso Siemens.
Fibrinogeno Derivato
Utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ® e l’adeguato test sugli analizzatori fotometrici per coagulazione
Siemens oppure sugli analizzatori per coagulazione Sysmex ® , la concentrazione di fibrinogeno può
essere derivata analizzando la variazione del segnale ottico durante le determinazioni del tempo di
protrombina, utilizzando una curva di calibrazione per il fibrinogeno derivato. Tale curva di calibrazione
(master curve) viene fornita da Siemens nella tabella lotto-dipendente dei valori dichiarati.
Limitazioni della esecuzione del test
Il fattore tissutale umano ricombinante non contiene altri fattori della coagulazione. Le curve di dosaggio
dei fattori utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ® possono pertanto mostrare tempi di coagulazione più
lunghi ai più bassi livelli di carenza fattoriale rispetto ad altri reagenti. Questo potrebbe tradursi in tempi di
coagulazione maggiori di 100 secondi per bassi livelli fattoriali nelle curve di dosaggio dei fattori.
Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare
le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall’utente non sono supportate da Siemens poiché
possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell’utente
validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli
inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens.
I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, della
presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.
Sostanze Interferenti
Molti farmaci comunemente impiegati possono influenzare i risultati ottenuti dall’analisi del tempo di protrombina
4 . Questo fatto deve essere tenuto presente quando si ottengano risultati anormali insoliti o
inattesi. Risultati anormali inattesi dovrebbero essere seguiti da ulteriori studi coagulativi per determinare
la causa dell’anormalità.
La torbidità di campioni lipemici, es. in nutrizione parenterale, può ostacolare l’accuratezza della determinazione
del fibrinogeno derivato.
Il Reagente Dade ® Innovin ® è insensibile all’eparina non frazionata fino a concentrazioni di circa 2,0 unità
per mL. Lo studio di sensibilità all’eparina è stato condotto utilizzando pool di plasmi normali addizionati
e la sensibilità all’eparina è stata definita dalla concentrazione di eparina nel campione che che ha prolungato
i risultati del PT oltre il limite superiore dell’intervallo di riferimento.
Gli inibitori come gli anticoagulanti lupus possono interferire con il tempo di protrombina e produrre ad
esempio risultati dell’INR che non riflettono il grado esatto di anticoagulazione 6 . L’irudina o altri inibitori
direti della trombina a dosi terapeutiche comportano allungamento dei tempi di protrombina 7,8 .
Valori attesi
I valori per soggetti sani variano da laboratorio a laboratorio secondo la tecnica utilizzata. Quindi, ogni
laboratorio dovrebbe definire i propri intervalli di riferimento in base alla procedura e all’analizzatore per
coagulazione utilizzati.
In uno studio su soggetti visibilmente sani (n = 138), è stato determinato il seguente intervallo di riferimento
(dal 5° al 95° percentile):
SIstema Sysmex ® CA-7000: Intervallo di riferimento centrale al 90 %: da 10,4 a 12,4 secondi
Fibrinogeno Derivato 9 : 1,8 - 3,5 g/L
Intervalli Terapeutici
Gli intervalli terapeutici per l’INR possono variare secondo l’indicazione della terapia anticoagulante orale 10 .
Caratteristiche del test
Precisione
La precisione dei risultati del tempo di protrombina è generalmente limitata dal metodo usato. Pertanto,
su un lotto singolo, il reagente dovrebbe dare risultati che siano riproducibili nell’ambito del controllo di
qualità del laboratorio.
La precisione del Reagente Dade ® Innovin ® sul sistema Sysmex ® CA-6000 è stata valutata con materiale
di controllo di qualità su un totale di sei (6) cicli operativi separati nell’arco di tre (3) giorni di lavoro (due
cicli al giorno) e con 4 replicati per ogni livello di controllo per ciclo, con i seguenti risultati:
Test Livello di Controllo n Media
Tempo di Protrombina 1
2
Fibrinogeno Derivato 1
2
24
24
24
24
12,4 s
33,0 s
2,37 g/L
3,37 g/L
Coefficiente di Variazione
Nel Ciclo Tra Cicli Totale
1,3 %
0,7 %
4,0 %
4,1 %
2,0 %
3,4 %
2,8 %
3,0 %
2,4 %
3,5 %
4,9 %
5,1 %
Bibliografia
Vedi testo inglese.
* Non disponibile negli USA
** Il PT normale medio viene definito come il valore medio dell’intervallo normale. Deve essere determinato
specificamente per ogni lotto di tromboplastina utilizzando il metodo impiegato per analizzare i
campioni dei pazienti e, se necessario, con il coagulometro utilizzato per le analisi.
Ci-Trol, Dade e Innovin sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex è un marchio di SYSMEX CORPORATION.
L’acquisto di Dade ® Innovin ® comprende una licenza limitata per l’acquirente per l’uso del prodotto Dade ®
Innovin ® coperto da brevetto statunitense n. 5,625,036, 7,084,251 e 7,049,131 in conformità alle Istruzioni
per l’uso indicate nel presente documento.
Dade ® Innovin ®
Edizione Maggio 2008
Campos de aplicación
Para la determinación, en plasmas humanos citratados, del tiempo de protrombina (TP) y para los test
basados en éste.
Significado diagnóstico
El reactivo Dade ® Innovin ® es un factor tisular humano recombinante producido en E. Coli, purificado,
combinado con fosfolípidos sintéticos (tromboplastina) 1 , calcio, tampón y estabilizadores. El reactivo
induce la formación del coagulo sobre las vías de activaciòn exógenas y el tramo final común en un test
de chequeo global, la determinación del tiempo de protrombina (TP). El reactivo Dade ® Innovin ® se utiliza
en tres de las principales aplicaciones basadas en el TP 2 :
1. como test de chequeo rápido para el reconocimiento de deficiencias aisladas o combinadas en los
mecanismos extrínsecos de la coagulación, mediante los cuales se pueden reconocer alteraciones
de la coagulación heredadas o adquiridas, enfermedades del hígado o deficiencias de vitamina K;
2. como test sensible para monitorizar las terapias con anticoagulantes orales y
3. para la determinación de los factores exógenos de la coagulación.
Adicionalmente, diversos analizadores de coagulación foto-ópticos pueden proporcionar el valor del
Fibrinógeno derivado a partir de la determinación del Tiempo de Protrombina
El reactivo Dade ® Innovin ® se prepara a partir de factor tisular humano recombinante y fosfolípidos sintéticos,
que no contienen ninguno de los otros factores de la coagulación como por ej., protrombina, FVII
y FX. Por esta razón es de gran sensibilidad contra plasmas deficientes en factores de la coagulación
y plasmas de pacientes bajo una terapia con anticoagulantes orales. La sensibilidad del reactivo Dade ®
Innovin ® es muy similar a la de la tromboplastina de referencia de la OMS obtenida de cerebro humano 3 .
Además, el reactivo Dade ® Innovin ® es insensible a las concentraciones terapéuticas de heparina. Debido
a su alta sensibilidad contra los factores de la coagulación y a su insensibilidad contra la heparina
en rangos terapéuticos, el reactivo Dade ® Innovin ® es especialmente apropiado para el control de las
terapias con anticoagulantes orales 3 . Debido a su alta sensibilidad (esto es, la reacción del reactivo a la
actividad moderadamente baja de los factores de la coagulación) se pueden reconocer incluso muestras
de plasmas levemente patológicas.
Principio del método
Mediante la incubación del plasma con las cantidades optimas de tromboplastina y calcio se desencadena
el proceso de coagulación. Se mide el tiempo gastado hasta la formación del coagulo.
Reactivos
Contenido del envase comercial
10 x l 4 ml, [REF] B4212-40
10 x l 10 ml, [REF] B4212-50
12 x l 20 ml, [REF] B4212-100
Composición
Reactivo Dade ® Innovin ® : Liofilizado de factor tisular humano recombinado y fosfolípidos sintéticos
(Tromboplastina), iones de calcio, una unión neutralizante de heparina, tampón y estabilizadores (albúmina
de suero bovino).
Advertencias y medidas de seguridad
Sólo para uso en diagnósticos in-vitro.
Preparación de los reactivos
Disolver un frasco del reactivo Dade ® Innovin ® liofilizado en la cantidad de agua destilada o desionizada
indicada en la etiqueta del frasco. Almacenar entre +2 y +8 °C.
Para una completa disolución del contenido del frasco mezclar bien, inmediatamente después de agregar
el agua. Si se deja el frasco en reposo, el reactivo Dade ® Innovin ® se debe mezclar de nuevo bien
antes de usar, con el fin de obtener una solución homogénea. No es necesario una agitación continua.
Advertencia: No utilizar agua con agentes de conservación.
Estabilidad y almacenaje
Almacenar entre +2 y +8 °C. A esta temperatura y sin abrir, el reactivo permanece estable hasta la fecha
de vencimiento (ver la etiqueta del frasco).
Estabilidad después de reconstituido: entre +2 y +8 °C 10 días (frasco cerrado)
entre +15 y +25 °C 5 días (frasco cerrado)
a +37 °C
24 horas (frasco cerrado)
Los datos sobre la estabilidad en el aparato vienen dados en los manuales de referencia (reglamentos
de aplicaciòn) de cada uno de los aparatos de medida de la coagulación.
No congelar!
Advertencia sobre deterioro: falta de vacío al abrir el frasco; el reactivo no se deja disolver fácilmente;
no se obtienen datos reproducibles.
Materiales adicionales necesarios
Plasma control N, o Dade ® Ci-Trol ® Nivel 1
Plasma control P, Dade ® Ci-Trol ® Nivel 2 o Dade ® Ci-Trol ® Nivel 3
PT-Multi Calibrador* (Para más detalles sobre el uso, consulte las Instrucciones de utilización.)
Plasma humano estándard o plasma normal 4 fresco para la determinación de MNPT**
Solución de citrato de sodio (0,11 mol/l o 0,13 mol/l o bien al 3,2 % o al 3,8 %) para la toma de la
sangre
B4212 G40 E0501 (837) 5

Agua destilada o desionizada sin agentes de conservación
Tubos de plástico
Pipetas de plástico para la trasferencia de las muestras
Pipetas para la medida exacta de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml y 0,10 ml.
Aparato de medida de la coagulación
Aparatos
El Reactivo Dade ® Innovin ® se puede utilizar en aparatos de medida de la coagulación manuales o
automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a disposición manuales de referencia (reglamentos
de aplicación) para diferentes aparatos de medida de la coagulación. Estos contienen información
específica aparato/test para el manejo y el rendimiento, que pueden diferenciarse de la información
dada en estas instrucciones de manejo. En este caso, la información contenida en los manuales de
referencia (reglamentos de aplicación) reemplaza la información de estas instrucciones de manejo. Por
favor consulte el manual de instrucciones del fabricante del aparato!
Extracción y preparación de la muestra
Mezcle nueve partes de sangre recién extraída con una parte de solución de citrato sódico, 0,11 ó
0,13 mol/l (3,2 ó 3,8 %). Puede utilizarse un sistema de tubos con vacío o jeringa.
La muestra de sangre ha de centrifugarse a 1500 x g durante 15 minutos como mínimo a temperatura
ambiente.
Almacenar en un tubo cerrado a temperatura ambiente. No almacene en hielo o refrigerado entre +2 y
+8 °C, puesto que la activación del frío puede alterar los resultados del F VII. El plasma debe analizarse
dentro de las 24 horas siguientes a la extracción. Las muestras no deben permanecer a +37 °C más
de 5 minutos. Si el paciente está siguiendo una terapia con anticoagulantes basada tanto en heparina
como en cumarina, los resultados pueden variar con el tiempo de almacenamiento.
Consulte el documento H21-A5 5 del CLSI para obtener información detallada sobre la preparación y el
almacenamiento de las muestras.
Procedimiento
Desarrollo manual:
Precalentar el reactivo Dade ® Innovin ® a +37 °C.
Pipetear en un tubo de plástico lo siguiente:
Muestra del test Control
Plasma 0,1 ml -
Control - 0,1 ml
Incubar las muestras en los tubos plásticos de 1 a 2 minutos
(máximo 5 minutos), a +37 °C
Agregar rápidamente el reactivo Dade ® Innovin ® precalentado 0,2 ml 0,2 ml
Al agregar el reactivo Dade ® Innovin ® activar inmediatamente el cronómetro. Medir el tiempo necesario
para la formación del coagulo.
Control de calidad interno
Rango normal:
Dade ® Ci-Trol ® Nivel 1 o Plasma control N
Rango patológico: Dade ® Ci-Trol ® Nivel 2, Dade ® Ci-Trol ® Nivel 3 o Plasma control P
Los controles se deben usar al comienzo de cada test, para cada cambio de reactivo y por lo menos
una vez cada 8 horas durante un análisis (uno en el rango normal y uno en el rango patológico). Los
controles deben ser tratados igual que las muestras a investigar.
Cada laboratorio deberá estipular sus propios rangos de confianza para los controles. Para cada nuevo
lote de reactivo o de controles se debe definir un nuevo rango de control. Este rango corresponde por
lo general a ± 2,5 la desviación estándar (DS) del valor promedio de los controles.
Si los valores de los controles se encuentran por fuera de este rango de confianza, se debe controlar el
aparato de medir la coagulación, así como también, los controles y los reactivos. No valide los resultados
del paciente hasta haber identificado y corregido la causa de la desviación.
Valoración
Para la presentación de los resultados del TP existen actualmente diferentes métodos. Para el reactivo
Dade ® Innovin ® existe un valor del „International Sensitivity Index“ (ISI) específico del lote y del aparato,
el cual permite que los resultados de los pacientes se pueden dar como „International Normalized Ratio“
(INR) 4 . El cálculo y el uso del INR están descritos más adelante. Los datos en INR tienen preferencia
para la documentación de los resultados de las muestras de pacientes con anticoagulantes orales.
Como alternativa para la determinación de los resultados, se puede usar el TP del paciente (en segundos)
junto con el rango de referencia (en segundos).
Ejemplo: Resultado del paciente 18 segundos; Rango de referencia 9,7 - 12,3 segundos.
Determinación del INR (International Normalized Radio)
Valores para el reactivo Dade ® Innovin ®
Estandarización internacional del TP (tiempo de protrombina) para el monitoreo de terapias con anticoagulantes
orales
1. De acuerdo a las recomendaciones comunes de la World Heath Organization (WHO) 4 y del International
Commitee on Thrombosis and Haemostasis, los valores de TP de pacientes bajo una terapia
con anticoagulantes orales deben darse en valores INR. Los valores INR son dependientes del
reactivo y del método utilizado y especialmente previstos para los resultados de pacientes que hayan
sido estabilizados con una terapia con anticoagulantes orales a largo plazo.
El INR se va a determinar con la siguiente fórmula 4 :
TP de los pacientes
INR = R ISI , donde R = —————————————
MNPT**
ISI es el Intenational Sensitivity Index de la combinación Reactivo-/aparato.
El valor ISI para el reactivo de protrombina de Siemens se determina de acuerdo a las recomendaciones
de la WHO.
2. Métodos para calcular INR:
a. Calculadora con función exponencial:
Esta información es valida especialmente para la calculadora TI-55 II de Texas Instrument. Para
otras calculadoras como los modelos de Hewlett-Packard, pueden variar las ordenes. Mayor
información se puede encontrar en el manual de operaciones de la calculadora. Compruebe los
ejemplos de cálculos basado en la Tabla de conversión, para poder reconocer los errores del
cálculo.
Dé los valores de TP de los pacientes en segundos y oprima „÷“. Dé ahora los MNPT** y oprima
al final „=“. En la pantalla aparece R, el radio del paciente, oprima a continuación la tecla „y x “,
del valor ISI correspondiente a la combinación protrombina-/aparato usado y oprima „=“. El valor
mostrado es el valor INR de la muestra del paciente.
Orden
Comentario
Ejemplo: 24 TP del paciente
÷ dividido por
11,0 MNPT**
= radio del paciente(en la pantalla aparece 2,1818)
y x
tecla para la función exponencial
1,1 valor de ISI ejemplo
= resultado: INR (en la pantalla aparece 2,3588)
dar el INR como 2,4
b. Tabla de conversión:
Calcule primero el radio TP, R, dividiendo el TP de los pacientes por el MNTP**. El valor del INR
lo encuentra en la Tabla de conversión incluida, en la columna bajo el correspondiente valor de
ISI y en la línea que corresponde al radio TP (R) del paciente.
c. Automático:
Los valores INR pueden ser calculados automáticamente por muchos aparatos de medida de
la coagulación. Más información al respecto se encuentra en los manuales de operación de los
aparatos. Siemens pone a dispocición protocolos específicos para aparatos de medida de la
coagulación.
Valor del fibrinógeno derivado
Usando un test apropiado junto con aparatos foto ópticos de medida de la coagulación de Siemens
o aparatos de medida de la coagulación de Sysmex ® , se puede también, con este reactivo, derivar la
concentración de fibrinógeno, mediante el análisis de los cambios de la señal óptica durante la determinación
del tiempo de tromboplastina. Para esto, se debe usar la curva patrón (Master) para fibrinógeno
derivado, tomada de la Tabla de valores del lote, como curva de calibración.
Limitaciones del procedimiento
Al usar el reactivo Dade ® Innovin ® para la determinación de los factores exógenos, se puede presentar
para la actividad más baja del factor deficiente tiempos de coagulación mucho más largos que con otros
reactivos, ya que en el factor tisular humano recombinante no se encuentra ningún otro factor adicional
de la coagulación. Por eso, puede ser que para una actividad baja del factor, el tiempo de coagulación
sea de más de 100 segundos.
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del
producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el usuario no
están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados
del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o
el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens
o en estas instrucciones de uso.
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del
paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.
Factores alterantes
El tiempo de protrombina puede ser influenciado por un gran número de medicamentos de prescripción
frecuente 4 , hecho que se debe tener en cuenta especialmente cuando aparecen valores anormales
inesperados. Para valores anormales inesperados, se debe buscar la causa, en caso dado, por medio
de otros test de la coagulación.
Debido a la turbidez de las muestras lipémicas la exactitud de la determinación del fibrinógeno derivado
puede estar influenciada.
El reactivo Dade ® Innovin ® es insensible a concentraciones de heparina sin fraccionar hasta de 2,0 unidades/ml.
El estudio de sensibilidad a la heparina se realizo con un pool de plasma normal amplificado.
La sensibilidad a la heparina se define como la concentración de heparina en la muestra, que conduce
a una prolongación más allá del rango de referencia.
Los inhibidores, tales como el anticoagulante lúpico, pueden interferir en el tiempo de protombina y dar
lugar, por ejemplo, a INRs que no reflejen el grado exacto de anticoagulación 6 .
Las dosis terapéuticas de hirudina o de otros inhibidores directos de trombina conducen a tiempos de
coagulación prolongados 7,8 .
Rangos de referencia
Los valores de personas sanas varían de un laboratorio a otro dependiendo del método utilizado. Cada
laboratorio deberá, por lo tanto, determinar su propio rango de referencia basados en la técnica y los
instrumentos utilizados.
En un estudio con personas visiblemente sanas (n = 138) se encontró el siguiente rango de referencia
(5. a 95. percentile):
Sistema Sysmex ® CA-7000:
Fibrinógeno derivado 9 :
central 90 % Rango de referencia: 10,4 - 12,4 segundos.
1,8 - 3,5 g/l
Rangos terapéuticos
Los rangos terapéuticos para el INR pueden variar dependiendo de la indicación utilizada en una terapéutica
con anticoagulantes orales 10 .
Características del test
Precisión
La precisión de los valores de los tiempos de protrombina es, por lo general, dependiente del método
utilizado. Con los reactivos de un lote, se deben obtener resultados que sean reproducibles dentro de
los límites de control de calidad del laboratorio.
La precisión del reactivo Dade ® Innovin ® en el Sysmex ® CA-6000 se determinó con material de control de
calidad, para un total de 6 corridas del test, en 3 días (2 ensayos por día) en determinaciones cuadruples
por control. Por ensayo se encontraron los siguientes resultados:
Determinación Control n Valor promedio
Tiempo de Protrombina 1
2
Fibrinógeno derivado 1
2
24
24
24
24
12,4 s
33,0 s
2,37 g/l
3,37 g/l
Coeficiente de correlación
Inter assay Intra assay Total
1,3 %
0,7 %
4,0 %
4,1 %
2,0 %
3,4 %
2,8 %
3,0 %
2,4 %
3,5 %
4,9 %
5,1 %
Literatura
Ver boletín informativo en inglés.
* No se consigue en USA
** El TP promedio normal o MNPT ( = Mean Normal Pathrombin Time) está definido como el valor promedio
del rango normal. Este se debe determinar para cada lote de protrombina usando el método
empleado para el análisis de las muestras de pacientes o el aparato de medir la coagulación utilizado
para test.
Ci-Trol, Dade y Innovin son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex es una marca comercial de SYSMEX CORPORATION.
La adquisición de Dade ® Innovin ® le otorga al comprador una autorización limitada para utilizar el Dade ®
Innovin ® bajo la Patente EE.UU. N° 5,625,036, 7,084,251 y 7,049,131 de acuerdo con las Instrucciones
de utilización aquí expuestas.
Dade ® Innovin ®
Edición Mayo 2008
Campo de aplicação
Para a determinação do tempo de Tromboplastina (TP) e dos testes de plasma humano citratado nele
baseados.
Significado diagnóstico
O Reagente Dade ® Innovin ® é um factor de tecido humano purificado e recombinante, produzido em
E.coli, combinado com fosfolípidos sintéticos (Tromboplastina) 1 , cálcio, tampões e estabilizadores. O
reagente induz a formação de coágulos através dos pathways exógenos e comuns num teste de Screening
global, a determinação do tempo de Tromboplastina (TP) 2 . O Reagente Dade ® Innovin ® é usado
em três aplicações:
1. Como teste de Screening rápido para detecção das deficiências individuais ou combinadas dos
mecanismos de coagulação extrínsecos, com o qual podem ser detectadas as perturbações de
coagulação congénitas ou adquiridas, as doenças hepáticas ou a carência de vitamina K;
2. Como teste sensível para a monitoração das terapias de anticoagulantes orais e
3. Para a determinação dos factores de coagulação exógenos.
Vários coagulómetros foto-ópticos podem proceder, adicionalmente, à derivação do valor de fibrinogénio
durante a determinação do tempo de tromboplastina.
O Reagente Dade ® Innovin ® é produzido a partir de factor de tecido humano recombinante e fosfolípidos
sintéticos, que não contêm qualquer outro tipo de factores de coagulação, tais como a Protrombina, FVII
e FX. Por isso, é altamente sensível em relação aos plasmas com deficiência de factores de coagulação
e aos plasmas dos pacientes que se encontram sob terapia oral de anticoagulantes. A sensibilidade do
Reagente Dade ® Innovin ® aproxima-se muito da Tromboplastina de referência da WHO, proveniente do
cérebro humano 3 . Acresce que o Reagente Dade ® Innovin ® é insensível às concentrações de heparina
terapêuticas. Graças à sua elevada sensibilidade em relação aos factores de coagulação e à insensibilidade
em relação à heparina no campo terapêutico, o Reagente Dade ® Innovin ® está especialmente
indicado para a monitoração das terapias orais de anticoagulantes 3 . Graças à elevada sensibilidade (ou
seja, a reacção do reagente a uma actividade dos factores de coagulação moderadamente reduzida), é
mesmo possível detectar amostras de plasma com um reduzido grau patológico.
Princípio metodológico
A reacção de coagulação é desencadeada pela incubação do plasma com a quantidade optimizada de
Tromboplastina e cálcio; o tempo que vai até à formação do coágulo de fibrina é medido.
B4212 G40 E0501 (837) 6

Reagentes
Conteúdos da embalagens comerciais
10 x l 4 ml, [REF] B4212-40
10 x l 10 ml, [REF] B4212-50
12 x l 20 ml, [REF] B4212-100
Composição
Reagente Dade ® Innovin ® : Liofilizado de factor de tecido humano recombinante e fosfolípidos sintéticos
(Tromboplastina), iões de cálcio, composto neutralizador de heparina, tampões e estabilizadores
(albumina de soro bovino).
Advertências e medidas de precaução
Só para uso diagnóstico in-vitro.
Preparação dos reagentes
Diluir um frasquinho de liofilizado de Reagente Dade ® Innovin ® com água destilada ou desionizada, de
acordo com a indicação de quantidade do rótulo do frasco. Conservar entre +2 e +8 °C.
Para a diluição total do conteúdo do frasco, misturar bem imediatamente após a adição da água. Se se
deixar o frasquinho em repouso, o Reagente Dade ® Innovin ® deverá ser misturado de novo antes da
utilização, para se obter um solução homogénea. Não é necessário misturar continuadamente.
Nota: Não utilizar água com conservantes.
Estabilidade e condições de conservação
Conservar entre +2 e +8 °C. Não aberto, o reagente mantém-se estável a esta temperatura até à data
de validade (vide o rótulo do frasco).
Estabilidade após reconstituição: 10 dias entre +2 e +8 °C (frasco fechado)
5 dias entre +15 e +25 °C (frasco fechado)
24 horas a +37 °C (frasco fechado)
As indicações sobre a estabilidade no aparelho estão mencionadas nos livros de referência (instruções
de aplicação) para os diferentes coagulómetros.
Não congelar!
Indício de caducidade: Falta de vácuo ao abrir o frasquinho; só se consegue dissolver o reagente com
dificuldade; impossível atingir os valores reprodutíveis.
Outros materiais necessários
Plasma de controlo N ou Dade ® Ci-Trol ® Level 1
Plasma de controlo P ou Dade ® Ci-Trol ® Level 2 ou Dade ® Ci-Trol ® Level 3
PT-Multi Calibrator* (Consulte as instruções para obter mais informações sobre a utilização.)
Plasma humano standard ou plasma normal fresco 4 para a determinação do MNPT**
Solução de citrato de sódio (0,11 mol/l ou 0,13 mol/l, respectivamente a 3,2 % ou 3,8 %) para a colheita de
sangue
Água destilada ou desionizada sem conservantes
Tubinhos de plástico
Pipetas de plástico para a transferência de amostras
Pipetas para a medição exacta de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml e 0,10 ml
Coagulómetro
Equipamento
O reagente Dade ® Innovin ® pode ser usado manualmente ou em coagulómetros automáticos. A Siemens
Healthcare Diagnostics disponibiliza livros de referência (instruções de aplicação) para os diversos coagulómetros.
Estes contêm informações específicas dos aparelhos/testes sobre o processamento e
características de performance que podem divergir das informações deste manual de instruções. Neste
caso, as informações dos livros de referência substituem as informações constantes neste manual de
instruções. Por favor observe o manual de instruções do fabricante do aparelho!
Colheita e preparação de amostras
Misturar nove partes de sangue do doente de uma colheita fresca com uma parte de solução de citrato
de sódio 0,11 ou 0,13 mol/l (3,2 % ou 3,8 % respectivamente). Poderá utilizar-se um sistema de tubo
de vácuo ou seringa.
Centrifugar a amostra de sangue a 1500 x g durante nunca menos de 15 minutos, à temperatura ambiente.
Conservar num tubo não aberto à temperatura ambiente. Não conservar em gelo nem a +2 - +8 °C
porque a activação por frio de F VII pode alterar os resultados. O plasma deve ser testado nas 24 horas
seguintes à colheita de sangue. As amostras não devem ficar a uma temperatura de +37 °C durante
mais de 5 minutos. Se o doente estiver a fazer uma terapêutica com anticoagulantes baseados em
heparina e cumarina, os resultados podem variar com o tempo de conservação.
Consulte o documento CLSI H21-A5 5 para obter mais informações sobre a preparação e conservação
das amostras.
Execução do teste
Execução manual:
Aquecer, previamente, o reagente Dade ® Innovin ® a +37 °C.
Pipetar para os tubinhos de plástico da seguinte maneira:
Amostra de ensaio Controlo
Plasma 0,1 ml -
Controlo - 0,1 ml
Incubar as amostras no tubinho durante 1 a 2 minutos
(5 minutos no máximo) à temperatura de +37 °C .
Adicionar, rapidamente, o reagente Dade ® Innovin ® 0,2 ml 0,2 ml
pré-aquecido
Ao adicionar o reagente Dade ® Innovin ® , pôr o cronómetro em marcha para medir o tempo que decorre
até à formação do coágulo.
Controlo de qualidade interno
Intervalo normal:
Dade ® Ci-Trol ® Level 1 ou Plasma de Controlo N
Intervalo patológico: Dade ® Ci-Trol ® Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 ou Plasma de Controlo P
A cada mudança dos frascos de reagente, no início da execução do teste, após cada calibração e no mínimo
de 8 em 8 horas em cada dia de teste, deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal
e um no intervalo patológico). O material de controlo deverá ser tratado como as amostras a analisar.
Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de confiança próprio para os controlos. Para cada
lote de reagente ou controlo novos, deverão ser definidos intervalos de controlo novos. Normalmente,
estes apresentam desvios standard (ds) de ± 2,5 em relação ao valor de controlo médio.
Se os valores de controlo se situarem fora do intervalo de confiança, é necessário controlar o coagulómetro,
os controlos e os reagentes. Não comunique os resultados do doente até que a causa do desvio
tenha sido identificada e corrigida.
Avaliação dos resultados
Actualmente, utilizam-se vários métodos para a apresentação dos valores do tempo de TP. Para o
Reagente Dade ® Innovin ® existe um valor “International Sensitivity Índex” (ISI), específico para o lote e
o aparelho, que possibilita a indicação dos valores de pacientes sob a forma de um “International Normalized
Ratio” (INR) 4 .O cálculo e a aplicação do INR estão descritos mais abaixo. A indicação do INR é
utilizada, preferencialmente, para documentar os resultados das amostras de pacientes anticoagulados
por via oral. Alternativamente, para a determinação do resultado, o tempo de TP de pacientes (em
segundos) pode ser usado em conjunto com o intervalo de referência (em segundos).
Exemplo: Resultado do paciente 18 segundos; intervalo de referência 9,7 - 12,3 segundos.
Determinação do INR (International Normalized Ratio)
Valores para o Reagente Dade ® Innovin ®
Estandardização internacional do tempo de TP (tempo de Tromboplastina) para monitoração das terapias
orais de anticoagulantes.
1. Em conformidade com as recomendações conjuntas da World Health Organization (WHO) 4 e do
International Committee on Thrombosis and Haemostasis, os valores do tempo de TP de pacientes
que se encontrem sob terapia oral de anticoagulantes deverão ser indicados como valores de INR.
Os valores de INR são independentes dos reagentes e métodos usados e estão previstos, especialmente,
para o diagnóstico de pacientes estabilizados com uma terapia oral de anticoagulantes a
longo prazo.
O INR é determinado de acordo com a seguinte equação 4 :
Tempo de TP do paciente
INR = R ISI , sendo que R = ——————————————
MNPT**
ISI é o International Sensitivity Index da combinação de reagentes/aparelhos.
B4212 G40 E0501 (837) 7
Os valores ISI para os reagentes de Tromboplastina da Siemens são determinados de acordo com
as recomendações da WHO.
2. Métodos para o cálculo do INR:
a. Calculadora com função exponencial:
Estas indicações aplicam-se, especialmente, à calculadora TI-55 II da Texas Instruments. Nas
outras calculadoras tais como os modelos da Hewlett-Packard, a sequência da introdução pode
divergir. As instruções de serviço da calculadora contêm informações. Verifique os exemplos de
cálculo através da tabela de conversão para detectar os erros de conversão.
Introduza o tempo de TP do paciente em segundos e prima ”÷”. Introduza agora o MNPT** e
prima de seguida ”=”. No visor aparece R, o ratio do paciente. Prima agora a tecla „y x “, introduza
o valor específico ISI da combinação utilizada de Tromboplastina/Aparelhos e prima ”=”. O resultado
apresentado é o valor INR da amostra do paciente.
Introdução de dados Explicação
Exemplo: 24
tempo de TP
÷ dividido por
11,0 MNPT**
= ratio do paciente (no visor aparece 2,1818)
Tecla y x
para a função exponencial
1,1 Exemplo de valor ISI
= resultado: INR (no visor aparece 2,3588)
emitido como INR 2,4
b. Tabela de conversão:
Primeiro calcule o ratio R do tempo de TP, dividindo o tempo de TP pelo tempo MNPT**. O valor
de INR encontra-se na coluna da tabela de conversão por baixo do respectivo valor de ISI e na
linha que corresponde ao ratio (R) do tempo de TP do paciente.
c. Automática:
Os valores de INR podem ser calculados automaticamente por diversos coagulómetros. As informações
a este respeito encontram-se no manual de instruções do aparelho. A pedido, a Siemens
disponibiliza protocolos específicos para os coagulómetros.
Valor de fibrinogénio derivado
Se for utilizado um teste adequado juntamente com coagulómetros com medição foto-óptica da Siemens
e coagulómetros Sysmex ® , com este reagente também se pode proceder à derivação da concentração
de fibrinogénio através da análise da alteração do sinal óptico durante a determinação do tempo de
Tromboplastina. Para esse efeito, a curva mestra para o fibrinogénio derivado da tabela de valores em
função dos lotes, tem de ser introduzida como curva de calibração.
Limitações à execução do teste
Ao utilizar o Reagente Dade ® Innovin ® na determinação dos factores exógenos da actividade ínfima do
factor de deficiência, podem produzir-se tempos de coagulação superiores aos dos outros reagentes,
uma vez que o factor de tecido humano recombinante não contém quaisquer outros factores de coagulação.
Assim, o tempo de coagulação para uma actividade de factor baixa pode ser superior a 100
segundos.
A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar o
desempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modificações definidas pelo utilizador
não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho do sistema
e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modificações efectuadas
nestas instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas
folhas de instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de utilização.
Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do
doente, estado clínico e outros dados de interesse.
Factores de interferência
O tempo de Tromboplastina pode ser influenciado por uma multiplicidade de medicamentos prescritos
frequentemente 4 , circunstância essa que deverá ser tomada em consideração, sobretudo quando se obtêm
valores anormais inesperados. No caso de obtenção de valores anormais inesperados, é necessário
procurar a causa, realizando outros testes de coagulação.
Devido à turvação das amostras lipémicas, p. ex., em caso de alimentação artificial, a exactidão da
determinação do fibrinogénio derivado pode ser afectada.
O reagente Dade ® Innovin ® é insensível às concentrações de heparina não fraccionadas até 2,0 unidades/ml.
O estudo da sensibilidade à heparina foi executado com um pool de plasma normal incrementado.
A sensibilidade à heparina é definida pela concentração da mesma na amostra que ultrapassa o
prolongamento do intervalo de referência.
Inibidores como, por exemplo, anticoagulante lúpico podem interferir com o tempo de protrombina e o
resultado, por exemplo, em INRs que não reflecte o grau exacto de anticoagulação 6 .
As doses terapêuticas de hirudina ou outros inibidores directos da Trombina originam tempos de coagulação
prolongados 7,8 .
Intervalos de referência
Os valores de indivíduos saudáveis variam de laboratório para laboratório em função do método usado.
Por isso, cada laboratório deverá determinar intervalos de referência próprios, com base no processo
e no coagulómetro usados.
Num estudo com pessoas saudáveis (n = 138), foi determinado o seguinte intervalo de referência
(5.- 95. percentil):
Sistema Sysmex ® CA-7000: Central 90 % intervalo de referência: 10,4 - 12,4 segundos.
Fibrinogénio derivado 9 : 1,8 - 3,5 g/l
Intervalos terapêuticos
Os intervalos terapêuticos para o INR podem variar em função da respectiva indicação para uma terapia
oral de anticoagulantes 10 .
Características de performance do teste
Precisão
Geralmente, a precisão dos valores do tempo de Tromboplastina depende do método usado. Com os
reagentes de um lote podem ser obtidos resultados reproduzíveis dentro dos limites do controlo de
qualidade do laboratório.
A precisão do Reagente Dade ® Innovin ® no sistema Sysmex ® CA-6000 foi determinada com material
de controlo de qualidade num total de 6 séries de ensaio realizadas durante 3 dias (2 testes por dia) e
determinações quádruplas por controlo. Foram obtidos os seguintes resultados por teste:
Determinação Controlo n Valor médio
Tempo de tromboplastina 1
2
Fibrinogénio derivado 1
2
24
24
24
24
12,4 s
33,0 s
2,37 g/l
3,37 g/l
Coeficiente de variação
Inter-Assay Intra-Assay Total
1,3 %
0,7 %
4,0 %
4,1 %
2,0 %
3,4 %
2,8 %
3,0 %
2,4 %
3,5 %
4,9 %
5,1 %
Bibliografia
Veja o manual de instruções em inglês.
* não está disponível nos EUA
** O tempo médio normal de TP ou MNPT (= Mean Normal Pathrombin Time) é definido como o valor
médio do intervalo normal. Tem de ser determinado, especialmente, para cada lote de Tromboplastina
com o método usado para a análise das amostras do paciente ou o coagulómetro utilizado para esse
fim.
Ci-Trol, Dade e Innovin são marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex é uma marca comercial da SYSMEX CORPORATION.
A compra de Dade ® Innovin ® confere ao comprador uma licença limitada para utilizar a Dade ® Innovin ®
adquirida, abrangida pelas patentes norte-americanas n.ºs 5,625,036, 7,084,251 e 7,049,131 de acordo
com as instruções aqui apresentadas
Edição Maia 2008

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