Colilert*-18 Test Kit Kit d'analyse Colilert - IDEXX Laboratories

Colilert*-18 Kit para Prueba
Introducción
Colilert-18 detecta de manera simultánea los coliformes totales y E. coli o coliformes fecales en el agua. Se basa en la Defined Substrate Technology*
(Tecnología de substrato definido [DST*]), patentada por IDEXX. Cuando los coliformes totales o los coliformes fecales metabolizan el indicador de nutrientes
de Colilert-18, la muestra se vuelve de color amarillo. Cuando E. coli metaboliza el indicador MUG de nutrientes de Colilert-18, la muestra además fluoresce.
Colilert-18 puede detectar simultáneamente estas bacterias a una concentración de 1 ufc/100 ml dentro de las 18 horas, hasta en presencia de 2 millones de
bacterias heterotróficas por cada 100 ml.
Almacenamiento
Almacenar a temperatura de 2–25°C, alejado de la luz.
Procedimiento de presencia/ausencia (P/A)
1. Añadir el contenido de un paquete a una muestra de 100 ml, en un recipiente estéril transparente, no fluorescente.
2. Tapar y agitar el recipiente.
3. Si la muestra no está ya a temperatura de 33–38°C, colocar el recipiente en un
baño de agua a 35°C durante 20 minutos o, como alternativa, en un baño de agua a 44,5°C durante 7 a 10 minutos.
4. Incubar a 35±0,5°C durante el resto de las 18 horas.
5. Leer los resultados de acuerdo con el cuadro de interpretación de resultados, más abajo.
Procedimiento de enumeración Quanti-Tray*
1. Añadir el contenido de un paquete a una muestra de 100 ml de agua a temperatura ambiente, en un recipiente estéril.
2. Tapar y agitar el recipiente hasta disolver.
3. Verter la mezcla de muestra/reactivo en una Quanti-Tray o una Quanti-Tray/2000 y sellar en un sellador de Quanti-Tray de IDEXX.
4. Colocar la bandeja sellada en una estufa de incubación a 35±0,5°C (o a 44,5±0,2°C para los coliformes totales)
durante 18 horas (no se necesita precalentar a 35ºC).Si se incuba en un baño termostático, sumergir la Quanti-Tray con la
ayuda de un anillo pesado, hasta situarla por debajo del nivel del agua.
5. Leer los resultados de acuerdo con el cuadro de interpretación de resultados, más abajo. Contar el número de pocillos
positivos y referirse al cuadro NPP proporcionado con las bandejas para obtener el número más probable.
Interpretación de resultados
Aspecto
Resultado
Menos amarillo que el comparador 1 cuando se incuba a
35±0,5°C o a 44,5±0,2°C
Amarillo igual o mayor que el del comparador 1 cuando
se incuba a 35±0,5°C
Amarillo igual o mayor que el del comparador 1 cuando
se incuba a 44,5±0,2°C
Amarillo y fluorescencia iguales o mayores que los del
comparador 1 cuando se incuba a 35±0,5°C
Negativo para coliformes totales y E. coli;
negativo para coliformes fecales
Positivo para coliformes totales
Positivo para coliformes fecales
Positivo para E. coli
• Buscar fluorescencia usando una luz UV de 6 vatios, 365 nm a distancia de unos 13 cm de la muestra en un ambiente oscuro. Apuntar el haz de luz en
dirección contraria a los ojos y hacia la muestra.
• Los resultados Colilert-18 son definitivos después de 18-22 horas. Además, los positivos para coliformes totales y para E. coli o coliformes fecales
observados antes de las 18 horas y los negativos observados después de las 22 horas también son válidos.
Notas sobre el procedimiento
• Cuando se agrega Colilert-18 a la muestra es posible que se observe una tinción leve.
• Si el exceso de espuma causa problemas mientras se usa Quanti-Tray, se puede decidir utilizar solución antiespumante IDEXX (Nº de catálogo WAFDB)
o recipientes de 120 ml IDEXX con antiespumante (Nº de catálogo WV120SBAF-200).
• Este prospecto tal vez no refleje sus reglamentaciones locales. Para probar el cumplimiento, asegurarse de seguir los procedimientos reglamentarios apropiados.
Por ejemplo, muestras procesadas en Europa deben ser incubadas a 36±2 °C por 18-22 horas.
• En caso de utilizar el método validado por la AFNOR para el análisis de agua potable, colocar la bandeja sellada en una estufa de incubación a
36±2°C durante 18 horas (no se necesita precalentar a 36°C)
• Colilert-18 puede procesarse en cualquier formato de múltiples tubos. Deben usarse los Métodos estándares 2 para examen del agua y los cuadros NPP de
aguas residuales para encontrar los números más probables (NPP).
• Si la muestra de agua tiene un cierto color de fondo, comparar la muestra inoculada de Colilert-18 con un blanco testigo de la misma muestra de agua.
• Colilert-18 puede usarse para la recuento de E. coli (pero no para coliformes) en aguas marinas. Las muestras deben diluirse al menos diez veces.
Multiplicar el valor NPP por el factor de dilución para obtener el resultado cuantitativo apropiado.
• Usar solamente agua estéril, no tamponada, libre de oxidantes, para efectuar las diluciones.
• Colilert-18 es una prueba primaria del agua. Las características de rendimiento de Colilert-18 no se aplican a muestras alteradas por enriquecimiento o
concentración previos.
• En el caso de muestras con un exceso de cloro, tal vez se observe un destello azul al añadir Colilert-18. Si se observa, considerar que la muestra no es
válida y suspender la prueba.
• Siempre debe utilizarse una técnica aséptica cuando se use Colilert-18. Desechar en cumplimiento con las Buenas Prácticas de Laboratorio.
Procedimientos de control de calidad
Se recomienda el siguiente procedimiento de control de calidad para cada lote de Colilert-18 cuando se use para analizar coliformes totales y E. coli a 35±0,5°C:
1. Llenar tres recipientes estériles con 100 ml de agua estéril e inocular en uno de ellos E. coli, en otro coliformes totales y en otro no coliformes usando uno de
los siguientes productos:
A. Quanti-Cult* 3 E. coli, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa
B. Un asa estéril con cepas ATCC 4 , E. coli ATCC 25922 o 11775, Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 o 27853
2. Seguir el procedimiento P/A o el procedimiento de enumeración Quanti-Tray mencionado anteriormente.
3. Los resultados deben corresponder a los del Cuadro de Interpretación de resultados, más arriba.
Se recomienda el siguiente proced`imiento de control de calidad para cada lote de Colilert-18 cuando se use para analizar coliformes fecales
a 44,5±0,2°C:
1. Llenar dos recipientes estériles con 100 ml de agua estéril e inocular en uno de ellos un coliforme fecal (E. coli) y en el otro un coliforme no fecal
(Pseudomonas aeruginosa) usando los siguientes productos:
•Un asa estéril con cepas ATCC, E. coli ATCC 25922 o 11775 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 o 27853
2. Seguir el procedimiento de enumeración Quanti-Tray mencionado anteriormente.
3. Los resultados deben corresponder a los del cuadro de interpretación de resultados, más arriba.
Colilert*-18 コリラート18 テストキット
はじめに
コリラート18は 水 中 の 大 腸 菌 群 と 大 腸 菌 または 糞 便 性 大 腸 菌 群 を 同 時 に 検 出 します。 検 出 方 法 はIDEXXが 特 許 を 取 得 したDefned
Substrate Technology* (DST*) ( 特 定 酵 素 基 質 法 )に 基 づいています。 大 腸 菌 群 や 糞 便 性 大 腸 菌 群 がコリラート18の 発 色 酵 素 基 質
OPNGを 代 謝 すると、 検 体 は 黄 変 します。 大 腸 菌 が、コリラート18に 含 まれた 栄 養 指 標 であるMUGを 代 謝 し、 検 水 は 蛍 光 も 呈 します。コリ
ラート18は100mlあたり 最 大 200 万 の 従 属 栄 養 菌 が 存 在 したとしても、18 時 間 以 内 に、1cfu/100mlの 感 度 で 大 腸 菌 群 および 大 腸 菌 を 同 時
に 検 出 することができます。
内 容
• WP020I-18 は、 検 体 100ml 用 のスナップパック20 個 入 りです
• WP200I-18 は、 検 体 100ml 用 のスナップパック200 個 入 りです
保 管
直 射 日 光 を 避 け、2~25°Cで 保 管 してください。
定 性 法 (P/A)の 手 順
1. 1パックの 中 身 を、 滅 菌 済 みの 透 明 な 蛍 光 を 発 しない 容 器 の 中 に 入 った100mlの 検 体 に 加 えてください。
2. 容 器 の 蓋 を 締 め、ゆっくり 振 ってください。
3. 検 体 がこの 時 点 で 33~38℃ でない 場 合 、35℃の 恒 温 漕 に20 分 、または、
44.5℃の 恒 温 漕 に7~10 分 間 置 いてください。
4. 36℃で、18 時 間 培 養 してください。
5. 以 下 の 結 果 判 定 表 に 従 って、 結 果 判 定 してください。
Quanti-Tray* QTトレイの 計 算 手 順
1. 1パックの 中 身 を、 滅 菌 容 器 の 中 に 入 った 室 温 の 検 水 100mlに 加 えてください。
2. 容 器 の 蓋 を 締 め 溶 けるまで 静 かに 振 ってください。
3. QTトレイまたはQTトレイ/2000 に 検 水 /コリラート18 混 合 を 注 ぎ、シーラーで 密 封 してください。
4. 密 封 されたトレイを36±0.5℃( 糞 便 性 大 腸 菌 群 の 場 合 は44.5±0.2℃)の 培 養 器 の 中 に18 時 間 置
いてください( 前 もって35℃にする 必 要 はありません)。ウォーターバスで 培 養 する 場 合 、
QTトレイを 重 りリングを 使 って 沈 めてください。
5. 以 下 の 結 果 判 定 表 に 従 って、 結 果 を 判 定 してください。 陽 性 ウェルの 数 を 数 え、 専 用 MPN 表 を 参
照 して、 最 確 数 を 求 めてください。
結 果 判 定
培 養 液 の 状 態
36±0.5℃または44.5±0.2℃で
培 養 した 場 合 、 比 色 管 1
より 薄 い 黄 色
36±0.5℃で 培 養 した 場 合 、 比 色 管 と 同
等 かそれより 濃 い 黄 色
44.5±0.2℃で 培 養 した 場 合 、 比 色 管 と
同 等 かそれより 濃 い 黄 色
36±0.5℃で 培 養 した 場 合 、 比 色 管 と 同
等 かそれより 濃 い 黄 色 および 蛍 光
結 果
大 腸 菌 群 と 大 腸 菌 共 に 陰 性
大 腸 菌 群 陽 性
糞 便 性 大 腸 菌 群 陽 性
大 腸 菌 陽 性
• 暗 所 で、 検 体 の5インチ(12.7cm) 以 内 で6W・365 nmのUVランプを 使 用 して、 判 定 してください。 光 は、 目 に 向 けないようにし、 検 体 に
向 けてください。
• コリラート18の 結 果 は、18~22 時 間 で 判 定 してください。また、 培 養 18 時 間 以 内 で 大 腸 菌 群 および 大 腸 菌 が 共 に 陽 性 となった 場 合 、 陽
性 判 定 が 有 効 となり、 培 養 を22 時 間 以 上 行 った 場 合 に 共 に 陰 性 となった 場 合 は、 陰 性 判 定 が 有 効 です。
操 作 上 の 注 意
• コリラート18を 検 体 に 加 えた 時 、かすかな 色 が 見 られる 場 合 があります。
• QTトレイを 使 用 中 に、 泡 が 問 題 になる 場 合 は、IDEXX 消 泡 液 (カタログ# WAFDB)、または 消 泡 剤 入 りのIDEXX 120 ml 容 器 (カタログ#
WV120SBAF-200)の 使 用 を 選 択 できます。
• 全 ての 国 や 地 方 の 法 律 ・ 条 令 に 適 合 していないこともあります。 法 律 ・ 条 例 に 準 拠 したテストをするために、 適 切 な 規 定 の 手 順 に 必 ず
従 ってください。 例 )ヨーロッパでは、 培 養 は36±2℃で18~22 時 間 と 決 められています。
• AFNORが 確 認 し 2 た 飲 料 水 検 査 方 法 に 従 う 場 合 は、 密 封 されたトレイを 36±2℃ の 培 養 器 の 中 に18 時 間 置 いてください( 前 もって36℃
にする 必 要 はありません)。
• コリラート18は、5 本 法 などの 最 確 数 法 でも 実 施 できます。 MPN 表 は、 最 確 数 (MPN)を 求 めるために 使 用 してください。
• 検 水 に 何 らかの 着 色 がある 場 合 、 同 じ 検 水 を 用 いたブランクと 比 較 してください。 2
• コリラート18は、 海 水 中 の 大 腸 菌 に 使 用 可 能 です( 大 腸 菌 群 を 除 く)。 検 体 を10 倍 以 上 に 希 釈 してください。 MPN 値 に 希 釈 倍 数 を 掛 け
て、 適 切 な 定 量 結 果 を 求 めてください。
• 希 釈 には、 緩 衝 液 や 酸 化 物 質 の 入 っていない、 滅 菌 された 水 だけを 使 用 してください。
• コリラート18は、 水 の 一 次 検 査 です。 コリラート18の 性 能 特 性 として、 増 菌 培 地 で 培 養 または 濃 縮 によって 変 質 した 検 体 に 適 用 できません。
• コリラート18を 加 えるとき、 過 剰 の 塩 素 がある 検 体 で、 青 色 を 呈 する 場 合 があります。 これが 見 られる 場 合 、 検 体 はテストに 適 さないの
で、テストを 中 止 してください。
• コリラート18を 使 用 する 際 は、 常 に 無 菌 操 作 を 行 ってください。GLPに 従 って、 廃 棄 してください。
品 質 管 理 手 順
36±0.5°Cでの 大 腸 菌 群 および 大 腸 菌 の 検 査 に 用 いる 場 合 、 以 下 の 品 質 管 理 は、コリラート18の 各 ロットについて 行 うことをお 薦 めします:
1. 滅 菌 容 器 3 本 にそれぞれ 滅 菌 水 100mLを 入 れ、 下 記 の 製 品 のどれか 一 つを 使 用 して1 本 目 は 大 腸 菌 、2 本 目 は 大 腸 菌 群 、3 本 目 は 非
大 腸 菌 群 で 接 種 してください。
A. Quanti-Cult* 3 大 腸 菌 、 Klebsiella pneumoniae、Pseudomonas aeruginosa
B. ATCC 4 菌 株 の 滅 菌 ループ、 大 腸 菌 ATCC 25922 または 11775、Klebsiella pneumoniae ATCC 31488、Pseudomonas aeruginosa
ATCC 10145 または 27853
2. 上 記 の 定 性 法 (P/A) 手 順 またはQTトレイ 定 量 法 手 順 に 従 ってください。
3. 結 果 は 上 の 結 果 解 釈 表 と 一 致 するはずです。
44.5±0.2°Cでの 糞 便 性 大 腸 菌 の 検 査 に 用 いる 場 合 、 以 下 の 品 質 管 理 は、コリラート18の 各 ロットについて 行 うことをお 薦 めします:
1. 滅 菌 容 器 2 本 にそれぞれ 滅 菌 水 100mLを 入 れ、 下 記 の 菌 株 を 使 用 して1 本 目 は 糞 便 性 大 腸 菌 群 ( 大 腸 菌 )、2 本 目 は 非 糞 便 性 大 腸 菌
群 (Pseudomonas aeruginosa)で 接 種 してください。
•ATCC 菌 株 の 滅 菌 ループ、 大 腸 菌 ATCC25922または11775、Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145または27853
2. 上 記 のQTトレイ 定 量 法 手 順 に 従 ってください。
3. 結 果 は 上 の 結 果 解 釈 表 と 一 致 するはずです。
Colilert * -18
06-02027-18
The AFNOR VALIDATION mark is granted to IDEXX for the following method:
Coliert*-18/Quanti-Tray* for the quantification of E.Coli and coliforms in drinking water.
afnor-validation.org
IDX 33/01 – 11/09
ALTERNATIVE METHOD OF ANALYSIS
Certified by AFNOR Certification
idexx.com/water
IDEXX Laboratories, Inc.
One IDEXX Drive
Westbrook, Maine 04092 USA
Australia: 1 800 655 978
Japan: +81-422-71-5921
China: +86-21-61279528
UK: +44 (0) 1638 676800
Europe: 00800 4339 9111
1
IDEXX, Comparador P/A, Nº de catálogo WP104; Comparador Quanti-Tray Nº WQTC o Quanti-Tray/2000 Comparador Nº WQT2KC
2
Eaton AD, Clesceri LS, Greenberg AE. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association, 1998, Washington, DC.
3
Cultivos Quanti-Cult*- Nº de catálogo IDEXX WKIT-1001
4
American Type Culture Collection 1-800-638-6597
*Colilert, Defined Substrate Technology, DST y Quanti-Tray son marcas comerciales o marcas registradas de IDEXX Laboratories, Inc. o sus filiares en los Estados Unidos y/o en otros países. Quanti-Cult
es una marca comercial de Remel Inc.
© 2011 IDEXX Laboratories, Inc. Todos los derechos reservados.
Fabricado bajo una o más de las patentes siguientes de los E.U. 5,610,029; 5,518,892; 5,620,895; y 5,753,456. Otras patentes norteamericanas y/o extranjeras concedidas o pendientes de concesión.
1
IDEXX P/A 比 色 管 , カタログ # WP104、QTトレイ 比 色 トレイ #WQTC、または QTトレイ/2000 比 色 トレイ#WQT2KC
2
Eaton AD, Clesceri LS, Greenberg AE. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association, 1998, Washington, DC
3
Quanti-Cult* - IDEXX カタログ # WKIT-1001
4
American Type Culture Collection 1-800-638-6597
*Colilert Defined Substrate Technology, DST、 及 びQuanti-Trayは、 米 国 IDEXX 及 び/または 他 国 のIDEXX Laboratories, Inc.の 商 標 または 登 録 商 標 ですまたはその 関 連 会 社 。
Quanti-Cult Remel Inc.の 商 標 です。
© 2011 IDEXX Laboratories, Inc. 全 著 作 権 所 有
以 下 の 米 国 特 許 の1つまたはそれ 以 上 のもとに 製 造 されています: 5,610,029; 5,518,892; 5,620,895および5,753,456。 他 の 米 国 及 び/または 外 国 で 発 行 された 特 許 または、 出
願 中 の 特 許 。
North/South America: 207-556-4496/1-800-321-0207
For IDEXX Technical Support, please call: