Activated Immunobead® Matrix - Irvine Scientific
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Falls hoher Hintergrund ein Problem ist, der folgende Puffer wird statt<br />
1,4 M NaCl – PBS empfohlen: 5M Guanidinhydrochlorid (GuHCl) –<br />
PBS.<br />
478 g GuHCl und 8,77 g NaCl in 700 ml Wasser auflösen. 33,3 ml<br />
0,3 M KH 2 PO 4 hinzufügen und den pH-Wert bis zu 7,2 bringen. Filtern<br />
(falls nötig) und bis zu 1,0 Liter mit Wasser verdünnen.<br />
4. 0,005 M Phosphatpuffer, pH-Wert 7,2 (Puffer die von niedriger<br />
Ionenstärke sind, und die zum Gebrauch in der Lyophilisierung von<br />
Perlen-Reagenzien bestimmt sind).<br />
16,7 ml 0,3 M KH 2 PO 4 mit 800 ml Wasser verdünnen. Den pH-Wert<br />
bis zu 7,2 mit 1 M KOH bringen. Bis zu 1,0 Liter verdünnen.<br />
5. 0,005 M Phosphatpuffer – 1% BSA (Verhindert unspezifische<br />
Aufsaugung mit endgültige Immunobead-Reagenzien). Falls BSA<br />
nicht wünschenswert ist, ein ähnliches Reagenz soll mit einem<br />
anderen Carrierprotein vorbereitet werden. 5 g eines hochwertigen<br />
BSA (I.S. Katalog # 1092) in 500 ml des vorhergehenden Puffers<br />
auflösen.<br />
B. Vorbereitung des Immunobead <strong>Matrix</strong> mit Globulin<br />
Fraction Antibody (Globulinbruchteil Antikörper)<br />
1. Globulinbruchteile der Heilsera sollen in PBS total löslich sein.<br />
Zentrifugieren, um unlöslichen Stoff wegzunehmen.<br />
2. Mit einem Wert für OD196 von 14 für Kaninchenglobulin und 13 für<br />
280<br />
Ziegenglobulin, die Konzentration Ihrer Vorbereitung bestimmen.<br />
Ein Volumen (Proteininhalt: 8-10 mg) Ihrer Vorbereitung gegen den<br />
Kupplungspuffer dialysieren.<br />
Die dialysierte Antikörpervorbereitung zu den Immunobead-<br />
Reagenzen hinzufügen, einschliesslich Stoff, der im Kupplungspuffer<br />
präzipitiert.<br />
Deutsch 2/7